Набор реагентов для количественного иммуноферментного определения ферритина в сыворотке крови человека («ИФА-ферритин») по ТУ 9398-223-98539446-2010 — инструкция и характеристики

РУ: ФСР 2011/11314 от 13.07.2011 · класс риска 1

Производитель: ООО "Компания Алкор Био" (Россия)

Вид изделия: Ферритин ИВД, набор, иммуноферментный анализ (ИФА)

В госконтрактах 44-ФЗ: 171 контракт, медианная цена за единицу 10 222 ₽.

Автоматически отфильтрованный фрагмент инструкции по применению (страницы, где похоже, что есть таблица технических характеристик) — не полный документ. Карточка РУ на портале Росздравнадзора →

Текст инструкции: технические характеристики

--- стр. 2 ---
Концентрация ферритина в сыворотке крови возрастает при инфекционных, 
воспалительных процессах (остеомиелит, ревматоидный артрит), острых и хронических 
заболеваниях печени, лейкемии, болезни Ходжкина, раке молочной железы и некоторых 
других онкологических заболеваниях.
1,3. Набор «ИФА - ферритин» рассчитан на проведение анализа в дубликатах 
40 неизвестных, 6 калибровочных проб, одной пробы контрольной сыворотки и одной 
пробы для определения оптической плотности раствора ТМБ при использовании всех 
стрипов одновременно (всего 96 определений).
П р и м е ч а н и е : в случае дробного npimenejim набор может быть использован только в  
течение месяца после вскрытия компонентов набора.
2. Х А Р А К Т Е Р И С Т И К А  Н А Б О Р А
2.1. П р и н ц и п  действия
В наборе «ИФА-ферритин» использован «сэндвич» - вариант твердофазного 
иммуноферментного анализа. Для реализации этого варианта использованы два 
моноклональных антитела с различной эпитопной специфичностью к ферритину. Одно из 
них иммобилизовано на твердой фазе (внутренняя поверхность лунок), второе 
конъюгировано с пероксидазой хрена. В лунках, при добавлении исследуемого образца и 
конъюгата анти-ферритин-пероксидаза во время инкубации одновременно происходит 
иммобилизация ферритина, содержащегося в исследуемом образце, и связывание 
образовавшегося комплекса с конъюгатом.
Несвязавшиеся компоненты удаляются промывкой. Количество связавшегося 
конъюгата прямо пропорционально количеству ферритина в исследуемом образце 
(Рисунок 1).
<о>
ферритин анти-ферритин-пероксидаза 
Планшет 
с антителами к ферритину
Р и суно к 1. С хем а анализа
Во время инкубации с раствором ТМБ происходит окрашивание раствора в лунках. 
Степень окраски прямо пропорциональна концентрации ферритина в анализируемых 
пробах. После измерения оптической плотности раствора в лунках на основании 
калибровочного графика рассчитывается концентрация ферритина в исследуемых 
образцах.
2.2. С о ста в  набора
• комплект из двенадцати восьмилуночных стрипов в рамке с 
иммобилизованными на внутренней поверхности лунок моноклональными антителами к 
ферритину, маркирован «Стрипы с моноклональными антителами к ферритину» -
1  упаковка;
Стр. 2 из 10


--- стр. 3 ---
• калибровочные пробы (КП), аттестованные по Второму международному 
стандарту на ферритин WHO 80/578, содержащие известные количества ферритина. 
Флаконы маркированы «Калибровочная проба №1», «Калибровочная проба №2», 
«Калибровочная проба №3», «Калибровочная проба №4», «Калибровочная проба №5», 
«Калибровочная проба № 6»; точные значения концентраций ферритина в калибровочных 
пробах указаны на этикетках флаконов, ориентировочные -  0; 10; 30; 100; 300 и 1000 
нг/мл -  6 флаконов (лиофилизованные препараты или жидкости по 0,5 мл);
• конъюгат анти-ферритин-пероксидаза, маркирован «Конъюгат Е» — 1  флакон 
(14 мл);
• концентрированный водно-солевой раствор для промывки лунок, маркирован 
«Буфер Р» — 1  флакон (14 мл);
• раствор тетраметилбензидина, маркирован «Раствор ТМБ» — 1  флакон (14 мл);
• стоп-реагент (1 Н соляная кислота), маркирован «Стоп-реагент» — 1  флакон (14 мл);
• контрольная сыворотка с известным содержанием ферритина, маркирована 
«Контрольная сыворотка» — 1  флакон (лиофилизованный препарат или жидкость 0,5 мл);
• прозрачный пластиковый пакет с замком (при упаковке стрипов в пакет из 2- 
слойного полиэтилена).
3. А Н А Л И Т И Ч Е С К И Е  И  Д И А Г Н О С Т И Ч Е С К И Е  Х А Р А К Т Е Р И С Т И К И
3.1. Специфичность, Не обнаружено перекрестной реакции обоих 
моноклональных антител с сывороточным альбумином, гемоглобином, трансферрином, 
альфа-фетопротеином и хлоридом железа.
3.2. Коэффициент вариации результатов определения ферритина в одном и том же 
образце сыворотки крови человека с использованием набора «ИФА-ферритин» не 
превышает 8%.
3.3. Линейность. Зависимость концентрации ферритина в образцах сьшоротки крови 
при разведении их калибровочной пробой № 1 имеет линейный характер в диапазоне 
концентраций калибровочных проб №2 - № 6 и составляет 90-110%.
3.4. Точность. Данный аналитический параметр проверяется тестом на 
«открытие» ферритина — проверка соответствия значения определяемой концентрации 
ферритина расчетной величине, полученной путем смешивания равных объемов 
контрольной сыворотки и калибровочной пробы №3. Процент открытия составляет 90- 
110 %.
3.5. Чувствительность. Минимальная достоверно определяемая набором 
концентрация ферритина в сыворотке крови человека не превышает 5  нг/мл.
3.6. Хук-эффект высоких концентраций. В наборах реагентов, основанных на 
«сэндвич»-принципе анализа, при высоких концентрациях аналита зависимость величины 
оптической плотности от концентрации становится обратно пропорциональной (так 
называемый хук-эффект высоких концентраций). При использовании набора «ИФА- 
ферритин» хук-эффект не обнаружен вплоть до концентрации ферритина 10 О О О  нг/мл.
3.7. Диапазон ожидаемых значений. Содержание ферритина измеряли в 
сыворотке крови, взятой у 184 здоровых мужчин в возрасте 21-45 лет, у 140 здоровых 
женщин в возрасте 19— 43 лет и у 52 женщин в возрасте 20-34 лет на разных сроках 
беременности. Средняя концентрация ферритина у мужчин составила 158 нг/мл ( 2 2-  
346 нг/мл), у женщин -  73 нг/мл (10-147 нг/мл). В первом триместре беременности
Стр. 3 из 10


--- стр. 4 ---
средняя концентрация ферритина в сыворотке составила 61 нг/мл (55-90 нг/мл), во втором 
триместре -  32 нг/мл (25-74 нг/мл), в третьем -  12 нг/мл (10-16 нг/мл).
Диапазон ожидаемых значений зависит от многих факторов: специфичности 
метода, особенностей исследуемой популяции, точности метода в конкретной 
лаборатории. По этой причине каждой лаборатории рекомендуется использовать 
предоставленные изготовителем значения только до тех пор, пока специалистами 
лаборатории не будут определены диапазоны ожидаемых значений, характерных для 
конкретной популяции в месте расположения лаборатории.
4. М Е Р Ы  П Р Е Д О С Т О Р О Ж Н О С Т И
4Л. Потенциальный риск применения набора — класс 1 .
4.2. Все компоненты набора в используемьк концентрациях являются нетоксичными.
4.3. При работе с набором следует соблюдать требования ГОСТ Р 52905-2007 
«Лаборатории медицинские. Требования безопасности».
4.4. Стоп-реагент представляет собой 1  Н раствор соляной кислоты. Избегать 
разбрызгивания и попадания на кожу и слизистые. В случае попадания стоп-реагента на 
кожу и слизистые необходимо промыть пораженный участок большим количеством 
проточной воды.
4.5. При работе с набором следует надевать одноразовые резиновые или 
пластиковые перчатки, т.к. производные крови, входящие в состав набора, и исследуемые 
образцы являются потенциально инфицированным материалом, способным длительное 
время сохранять и передавать возбудителей различных вирусных инфекций.
4.6. Химическая посуда и оборудование, которые используются в работе с 
набором, должны быть соответствующим образом маркированы и храниться отдельно.
4.7. Запрещается прием пищи, использование косметических средств и курение в 
помещениях, предназначенных для работы с наборами.
5. О БО РУ Д О В А Н И Е И  М А Т Е Р И А Л Ы
• Спектрофотометр вертикального сканирования, позволяющий измерять оптическую 
плотность раствора в лунках при длине волны 450 нм;
• прибор для встряхивания рамки со стрипами (термостатируемый шейкер), 
позволяющий производить встряхивание со скоростью 400-800 об/мин при температуре +37°С;
• пипетки полуавтоматические одноканальные со сменными наконечниками с 
изменяемым объемом отбора жидкостей: на 5-50 мкл; на 40-200 мкл; на 200-1000 мкл; на 
1000-5000 мкл;
• пипетка полуавтоматическая восьмиканальная со сменными наконечниками, 
позволяющая отбирать объемы жидкости до 300 мкл;
цилиндр мерный, позволяющий отмерять 50-500 мл;
• стакан стеклянный подходящего объема;
• вода дистиллированная;
• бумага фильтровальная;
• перчатки резиновые или пластиковые;
• 1% раствор гипохлорита натрия или 6% раствор перекиси водорода;
• контейнер для дезинфекции;
• ванночки для внесения реагентов восьмиканальной пипеткой.
Стр. 4 из 10


--- стр. 5 ---
6. А Н А Л И З И Р У Е М Ы Е  О Б Р А З Ц Ы
6Л. Забор крови из вены осуществляют с соблюдением правил асептики. После 
формирования сгустка сыворотку отделяют путем центрифугирования. После 
центрифугирования сыворотку переносят в отдельную пробирку.
6.2. Для проведения анализа не следует использовать плазму крови, 
гемолизированную или мутную сыворотку, а также образцы сыворотки, содержащие азид 
натрия.
6.3, Образцы сыворотки крови разрешается хранить при температуре +2...8°С не 
более 2-х суток; при необходимости более длительного хранения рекомендуется 
аликвотировать образец и хранить в замороженном виде при температуре -20°С и ниже. Не 
допускается повторное замораживание образца.
7. П Р О В Е Д Е Н И Е  А Н А Л И З А
7.1. П о д гото вка реагентов
7.1.1. Стрипы. Перед вскрытием пакет со стрипами необходимо выдержать при 
комнатной температуре (+18...25°С) не менее 30 минут. Вскрыть пакет и переставить на 
свободную рамку необходимое количество стрипов.
7.1.2. Жидкие калибровочные пробы и контрольная сыворотка готовы к 
использованию.
Для восстановления лиофилизованных калибровочных проб и контрольной 
сыворотки перед вскрытием флаконов легким постукиванием стряхнуть частицы, 
прилипшие к стенкам флаконов или к крышкам. Открыть флаконы и положить крышки 
перевернутыми на сухую поверхность. В каждый флакон с калибровочной пробой и 
контрольной сывороткой внести по 0,5 мл дистиллированной воды и закрыть крышками. 
Выдержать флаконы в течение 10 минут при комнатной температуре (+18...25°С) без 
перемешивания. Затем, аккуратно наклоняя и вращая флаконы, перемешать их 
содержимое до полного растворения, избегая ценообразования. В течение следующих 
1 0 минут выдержать флаконы при комнатной температуре, периодически перемешивая.
7.1.3. Конъюгат Е готов к использованию. Расход конъюгата Е на один стрип 
составляет 1,15 мл.
7.1.4. Промывочный раствор. Необходимое количество Буфера? развести 
дистиллированной водой в 2 0 раз.
Например;
5  мл Буфера Р+95 мл дистиллированной воды.
Тщательно переметать, избегая ценообразования.
7.1.5. Раствор тетраметилбензидина (ТМБ) готов к использованию. Расход ТМБ на 
один стрип составляет 1,15 мл.
7.1.6. Стоп-реагент готов к использованию. Расход стоп-реагента на один стрип 
составляет 1,15 мл.
7.1.7. Все реагенты перед проведением анализа должны быть тщательно 
перемешаны и доведены до комнатной температуры (+18...25°С).
В Приложении 1  приведена схема проведения анализа.
Стр. 5 из 10


--- стр. 6 ---
7.2. П о ста н о в к а  анализа
7.2.1. Составить протокол маркировки лунок. Лунки промаркировать следующим 
образом:
А1,А2“ №1 -  для измерения величины оптической плотности раствора ТМБ;
В1, В2 -  №2 -  для измерения величины оптической плотности КП № 1 ;
С1, С2 -  №3 -  для измерения величины оптической плотности КП №2;
D1 , D2 -  №4 -  для измерения величины оптической плотности КП №3;
Е1, Е2 -  Х о5 -  для измерения величины оптической плотности КП №4;
F1, F2 -  № 6 -  для измерения величины оптической плотности КП №5;
G1,G2- №7 -  для измерения величшы оптической плотности КП №6;
Н1,Н2- № 8 -  дня измерения величины оптической плотности контрольной 
сыворотки.
7.2.2. Внести в соответствующие лунки по 20 мкл калибровочных проб и 
контрольной сыворотки, в оставшиеся лунки по 2 0 мкл исследуемой сыворотки крови в 
дубликатах.
П р и м е ч а н и е : общее время внесения калибровочных проб, контрольной сыворотки  
и исследуемых сывороток крови не должно превышать 15 минут, иначе время инкубации  
различных образцов будет значительно отличаться, что приведет к неправильным  
результатам.
7.2.3. Во все лунки, кроме лунок А1 и А2, внести по 100 мкл конъюгата Е.
7.2.4. Инкубировать стрипы в течение 30 минут при встряхивании в 
термостатируемом ш ейкере при тем пературе +37*^С со ско р о стью  500-800 об/мин.
7.2.5. По окончании инкубации удалить содержимое лунок в контейнер с дезинфи­
цирующим раствором ( 1% раствором гипохлорита натрия или 6% раствором перекиси 
водорода) и промыть лунки 5 раз. При каждой промывке во все лунки добавить по 
300 мкл промывочного раствора, приготовленного по п. 7Л .4 , встряхнуть рамку на 
шейкере в течение 5-10 секунд с последующим декантированием. После последнего 
декантирования тщательно удалить остатки жидкости из лунок постукиванием рамки со 
Стрипами в перевернутом положении по фильтровальной бумаге.
Допускается промьшка лунок при помощи автоматического промывочного 
устройства.
7.2.6. Немедленно внести во все лунки по 100 мкл раствора ТМБ, Инкубировать 
стрипы в темноте при комнатной температуре (+18...25°С) в течение 15-30 минут в 
зависимости от степени развития окраски.
П р и м е ч а н и е : максимальная оптическая плотность не должна превышать пределов  
линейного измерения спектрофотометра. Рабочий диапазон спектрофотометра  
необходимо уточнять в паспорте прибора. Рекомендуемая максимальная оптическая  
плотность не более 2,5 ед. ОП.
1 Л Л . Добавить во все лунки с той же скоростью и в той же последовательности, 
как и раствор ТМБ, по 100 мкл стоп-реагента для остановки ферментной реакции, 
перемешать на шейкере в течение 1-2 минут при комнатной температуре (+18...25°С).
7.2.8. Если невозможно измерить оптическую плотность в лунках планшета 
непосредственно после выполнения п. 7.2.7., то следует иметь в виду, что окраска в лунках 
планшета стабильна не более 20 минут при температуре +18.. .25‘ ^С .
Стр. 6 из 10


--- стр. 7 ---
Измерить на фотометре вертикального сканирования оптическую плотность в 
лунках при длине волны 450 нм.
При регистрации результатов необходимо в ы ч и т а т ь  величину оптической 
плотности в лунках Л1 и А2 из значений оптических плотностей всех остальных лунок.
П р и м е ч а н и е : среднее арифметическое значение оптической плотности в лунках  
А1 и А2 не должно превышать 0,09 ед.ОП.
8. РЕГИСТРАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ
9. У Ч Е Т  Р Е З У Л Ь Т А Т О В
9.1. Построить калибровочный график зависимости оптических плотностей от 
концентрации ферритина (нг/мл) в калибровочных пробах (Рисунок 2). Внешний вид 
графика зависит от способа преобразования осей.
П р и м е ч а н и е  1: для построения калибровочных графиков рекомендуется
использовать Программное обеспечение «ИФА Мастер».
П р и м е ч а н и е  2 : для построения калибровочного графика на масштабной бумаге  
необходимо использовать данные оптических плотностей после вычитания из них средней  
величины оптической плотности лунок с ТМБ.
Если программа фотометра не позволяет вычитать величину оптической плотности  
лунок А} и А2, то необходимо пользоваться формулой:
B— Bj,
где В -  среднее арифметическое значение оптической плотности в лунках, содержащих  
калибровочные или исследуемые пробы,
Вт—  среднее арифметическое значение оптической плотности лунок А 1  и А2.
9.2. Определить содержание ферритина в пробах по калибровочному графику.
9.3. Экстраполяция калибровочного графика для значений концентрации 
ферритина, превышающих номинал КП № 6, не допускается. При наличии таких случаев 
принимать значение концентрации исследуемого образца «выше концентрации КП № 6 » .
г
S
о
S
а
с
К
О
К онц ентрац ия ф ерритина, н г/м л
Р и сун о к 2. Т и п и ч н ы й  ка л и б р о в о чн ы й  гр а ф и к
Запрещается использовать для оценки реальных  
экспериментальных данных!
Стр. 7 из 10