Набор реагентов для выявления РНК вируса гепатита G (HGV) в клиническом материале методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) с гибридизационно-флуоресцентной детекцией "АмплиСенс® HGV-FL" по ТУ 9398-186-01897593-2012 — инструкция и характеристики

РУ: ФСР 2011/12673 от 22.12.2011 · класс риска 3

Производитель: ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии Роспотребнадзора (Россия)

Вид изделия: Вирус гепатита G нуклеиновая кислота ИВД, набор, анализ нуклеиновых кислот

В госконтрактах 44-ФЗ: 18 контрактов, медианная цена за единицу 14 365 ₽.

Автоматически отфильтрованный фрагмент инструкции по применению (страницы, где похоже, что есть таблица технических характеристик) — не полный документ. Карточка РУ на портале Росздравнадзора →

Текст инструкции: технические характеристики

--- стр. 3 ---
с п и с о к  С О КР А Щ Е Н И Й
В настоящей инструкции применяются следующие сокращения и обозначения;
В КО -  внутренний контрольный образец
К+ -  положительный контроль ПЦР
К- -  отрицательный контроль ПЦР
ОКО -  отрицательный контрольный образец
ОК -  отрицательный контроль экстракции
ОТ -  обратная транскрипция
ПКО -  положительный контрольный образец
ПК -  положительный контроль экстракции
ПЦР -  полимеразная цепная реакция
ФБУН ЦНИИ
Эпидемиологии
Роспотребнадзора
-  Федеральное бюджетное учреждение науки «Центральный  
научно-исследовательский институт эпидемиологии»  
Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав  
потребителей и благополучия человека ______________________
FEP -  флуоресцентная детекция по «конечной точке»
FRT -  флуоресцентная детекция в режиме «реального времени»
HBV -  вирус гепатита В
HCV -  вирус гепатита С
HDV -  вирус гепатита D («Дельта»)
HGV -  вирус гепатита G
НАЗНАЧЕНИЕ
Набор реагентов «АмплиСенс® HGV-FLn  предназначен для выявления РНК  
вируса гепатита G (HGV) в клиническом материале методом полимеразной цепной  
реакции (ПЦР) с гибридизационно-флуоресцентной детекцией продуктов  
амплификации.
ВНИМАНИЕ! Результаты ПЦР-исследования учитываются в комплексной  
диагностике заболевания.^
ПРИНЦИП МЕТОДА
Принцип тестирования основывается на экстракции РНК из плазмы крови  
совместно с ВКО, проведении реакции обратной транскрипции РНК и амплификации  
кДНК с гибридизационно-флуоресцентной детекцией «по конечной точке» (формат  
FEP) или в режиме «реального времени» (формат FRT). По каналу,  
соответствующему флуорофору FAM, детектируется продукт амплификации ВКО.  
По каналу, соответствующему флуорофору JOE, детектируется продукт  
амплификации кДНК HGV. Положительный контрольный образец этапа экстракции  
ПКО HGV-FL-rec детектируется по каналам, соответствующим флуорофорам FAM  
(ВКО) и JOE {HGV). Контрольный образец амплификации - ПКО кДНК HGV-FL - 
является комплексным для HGV и ВКО и аналогично детектируется по каналам,  
соответствующим флуорофорам FAM (ВКО) и JOE (HGV).
В  соответствии с Директивой Европейского Союза 98/79/ЕС.


--- стр. 4 ---
ФОРМАТЫ  И Ф О Р М Ы  В Ы П УС КА  НА Б О РА  Р Е А ГЕН ТО В 
Набор реагентов в ы пускается в 2 ф орм атах:
Ф ормат FEP
Набор реагентов выпускается в 5 формах комплектации:
Форма 1  включает комплекты реагентов «РИБО-преп» вариант 50-2  штуки, «ПЦР-  
комплект» вариант FE P -100 F.
Форма 2 включает комплекты реагентов «РИБО-преп» вариант 50 и «ПЦР-  
комплект» вариант FE P -50 F.
Форма 3 включает комплект реагентов «ПЦР-комплект» вариант FEP-100 F.
Форма 4 включает комплект реагентов «ПЦР-комплект» вариант FEP-50 F.
Форма 5 включает наборы реагентов оптом, расфасованные по отдельным  
реагентам, с маркировкой реагентов на их оптовой фасовке.
Формы комплектации 1  и 2 предназначены для проведения полного ПЦР-  
исследования, включая экстракцию РНК из клинического материала методом  
преципитации, проведение реакции обратной транскрипции РНК и амплификации кДНК с  
гибридизационно-флуоресцентной детекцией по «конечной точке».
Формы комплектации 3 и 4 предназначены для проведения реакции обратной  
транскрипции РНК и амплификации кДНК с гибридизационно-флуоресцентной  
детекцией по «конечной точке». Для проведения полного ПЦР-исследования  
необходимо использовать комплекты реагентов для экстракции РНК/ДНК,  
рекомендованные ФБУН ЦН ИИ Эпидемиологии Роспотребнадзора.
Форма комплектации 5 предназначена для производственных целей для  
последующей маркировки на языке заказчика и комплектации по наборам.  
ВНИМАНИЕ! Форма комплектации 5 используется только в соответствии с  
регламентом, утвержденным ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии Роспотребнадзора.
Ф ормат FRT
Набор реагентов выпускается в 5 формах комплектации:
Форма 1  включает комплекты реагентов «РИБО-преп» вариант 50-2  штуки и «ПЦР-  
комплект» вариант FR T-100 F.
Форма 2 включает комплекты реагентов «РИБО-преп» вариант 50 и «ПЦР-  
комплект» вариант FR T-50 F.
Форма 3 включает комплект реагентов «ПЦР-комплект» вариант FRT-100 F.
Форма 4 включает комплект реагентов «ПЦР-комплект» вариант FRT-50 F.
Форма 5 включает наборы реагентов оптом, расфасованные по отдельным  
реагентам, с маркировкой реагентов на их оптовой фасовке.


--- стр. 5 ---
Формы комплектации 1  и 2 предназначены для проведения полного ПЦР-  
исследования, включая экстракцию РНК из клинического материала методом  
преципитации, проведение реакции обратной транскрипции РНК и амплификации кДНК с  
гибридизационно-флуоресцентной детекцией в режиме «реального времени».
Формы комплектации 3 и 4 предназначены для проведения реакции обратной  
транскрипции РНК и амплификации кДНК с гибридизационно-флуоресцентной  
детекцией в режиме «реального времени». Для проведения полного ПЦР-  
исследования необходимо использовать комплекты реагентов для экстракции  
РНК/ДНК, рекомендованные ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии Роспотребнадзора.
Форма комплектации 5 предназначена для производственных целей для  
последующей маркировки на языке заказчика и комплектации по наборам.  
ВНИМАНИЕ! Форма комплектации 5 используется только в соответствии с  
регламентом, утвержденным ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии Роспотребнадзора.
АНАЛИТИЧЕСКИЕ ХАРАКТИСТИКИ  
Аналитическая чувствительность
Формат
Объём
экстракции,
мкл
Комплект для  
экстракции  
РНК/ДНК
Аналитическая
чувствительность,
копий/мл
Формат FE P/  
Формат FR T 100
«РИБО-преп»,
NucliSENS
easyMAG
500
Формат FE P/  
Формат FR T 1000 NucliSENS
easyMAG 50
Аналитическая специфичность
Оценка аналитической специфичности набора реагентов проведена  
посредством добавления в реакцию геномной Д Н К/Р Н К следующих организмов и  
вирусов; вирус гепатита А, вирус гепатита В, вирус гепатита С, вирус гепатита D,  
вирус гепатита Е, вирус иммунодефицита человека, цитомегаловирус, вирус  
Эпштейна-Барр, вирус простого герпеса типы 1, 2, энтеровирус (Coxsakie 81, 82, 83,  
84, В5, В6, Polio I, II, III), ротавирус человека W A, астровирус, вирус герпеса  
человека типы 6, 8, аденовирус типы 2, 3, 7, Homo sapiens.
Перекрестные реакции для указанных организмов и вирусов зарегистрированы  
не были.


--- стр. 6 ---
МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ
Работа должна проводиться в лаборатории, выполняющей молекулярно­
биологические (П Ц Р ) исследования клинического материала на наличие  
возбудителей инфекционных болезней, с соблюдением санитарно-эпидемических  
правил СП 1.3.2322-08 «Безопасность работы с микроорганизмами III-IV  групп  
патогенности (опасности) и возбудителями паразитарных болезней», СанПиН  
2.1.7.2790-10 «Санитарно-эпидемиологические требования к обращению с  
медицинскими отходами» и методических указаний М У 1.3.2569-09 «Организация  
работы лабораторий, использующих методы амплификации нуклеиновых кислот при  
работе с материалом, содержащим микроорганизмы I-1V групп патогенности».
При работе всегда следует выполнять следующие требования:
- Следует рассматривать исследуемые образцы как инфекционно-опасные,  
организовывать работу и хранение в соответствии с СП 1.3.2322-08  
«Безопасность работы с микроорганизмами III-IV  групп патогенности (опасности)  
и возбудителями паразитарных болезней».
- Убирать и дезинфицировать разлитые образцы или реактивы, используя  
дезинфицирующие средства в соответствии с СП 1.3.2322-08 «Безопасность  
работы с микроорганизмами III-IV  групп патогенности (опасности) и  
возбудителями паразитарных болезней».
- Лабораторный процесс должен быть однонаправленным. Анализ проводится в  
отдельных помещениях (зонах). Работу следует начинать в Зоне Выделения,  
продолжать в Зоне Амплификации и Детекции. Не возвращать образцы,  
оборудование и реактивы в зону, в которой была проведена предыдущая стадия  
процесса.
- Удалять неиспользованные реактивы в соответствии с СанПиН 2.1.7.2790-10  
«Санитарно-эпидемиологические требования к обращению с медицинскими  
отходами».
ВНИМАНИЕ! При удалении отходов после амплификации (пробирок, содержащих  
продукты ПЦР) недопустимо открывание пробирок и разбрызгивание содержимого,  
поскольку это может привести к контаминации продуктами ПЦР лабораторной зоны,  
оборудования и реагентов.
- Применять набор строго по назначению, согласно данной инструкции.
- Допускать к работе с набором только специально обученный персонал.
- Не использовать набор по истечении срока годности.
- Использовать одноразовые перчатки, лабораторные халаты, защищать глаза во  
время работы с образцами и реактивами. Тщательно вымыть руки по окончании
6


--- стр. 11 ---
Ф О Р М А Т  F E P
амплификации, включая контроли.
Входит в состав форм комплею-ации 1  и 3.
К комплекту реагентов прилагаются контрольные образцы этапа экстракции:
Реактив
-  '- - if!, ■ ’ -V'-T..'. " J T  ..... ........'
■  -  Описание Объём, мл Кол-во
ОКО Прозрачная бесцветная 
жидкость 1.2 2 пробирки
ПКО HGV-FL-rec Прозрачная бесцветная 
жидкость 0,1 2 пробирки
ВКО ICZ-rec Прозрачная бесцветная 
жидкость 0,28 4 пробирки
Комплект реагентов «ПЦР-комплект» вариант FEP-50 F -  комплект реагентов для  
проведения реакции обратной транскрипции РНК и амплификации кДНК вируса  
гепатита G {HGV) с гибридизационно-флуоресцентной детекцией по «конечной  
точке» -  включает:
Реактив Описание Объем, мл Кол-во
RT-G-mix-2 Прозрачная бесцветная 
жидкость 0,015 1  пробирка
ОТ-ПЦР-смесь-1-FL HGV Прозрачная бесцветная 
жидкость 0.6 1  пробирка
ОТ-ПЦР-смесь-2-FEP/FRT Прозрачная бесцветная 
жидкость 0.3 1  пробирка
Минеральное масло для ПЦР Бесцветная вязкая 
жидкость 4,0 1  флакон
Полимераза (TaqF) Прозрачная бесцветная 
жидкость 0,03 1  пробирка
ТМ-Ревертаза (MMIv) Прозрачная бесцветная 
жидкость 0,015 1  пробирка
ПКО кДНК HGV-FL Прозрачная бесцветная 
жидкость 0,1 1  пробирка
Буфер для элюции Прозрачная бесцветная 
жидкость 1.2 1  пробирка
Комплект реагентов рассчитан на проведение 55 реакций обратной транскрипции и  
амплификации, включая контроли.
Входит в состав форм комплектации 2 и 4.
К комплекту реагентов прилагаются контрольные образцы этапа экстракции:
Реактив Описание Объем, мл Кол-во
ОКО Прозрачная
жидкость
бесцветная 1.2 1  пробирка
ПКО HGV-FL-rec Прозрачная
жидкость
бесцветная 0,1 1  пробирка
ВКО ICZ-rec Прозрачная
жидкость
бесцветная 0,28 2 пробирки
II


--- стр. 12 ---
Ф О Р М А Т  F E P
ПРО ВЕДЕНИЕ П Ц Р -И С С Л Е Д О В А Н И Я
ПЦР-исследование состоит из следующих этапов;
-  Экстракция РН К из исследуемых образцов.
-  Проведение реакции обратной транскрипции и амплификации.
-  Флуоресцентная детекция продуктов амплификации по «конечной точке».
-  Интерпретация результатов.
ЭКСТРАКЦИЯ Р Н К ИЗ И С С Л Е Д УЕ М Ы Х  О Б Р А ЗЦ О В
ВНИМАНИЕ! Для работы с РНК необходимо использовать только одноразовые  
стерильные пластиковые расходные материалы, имеющие специальную маркировку  
RNase-free, DNase-free.
Для экстракции РН К используются комплекты реагентов, рекомендованные ФБУН  
ЦНИИ Эпидемиологии Роспотребнадзора:
-  при использовании комплекта реагентов «Р И Б О -преп» порядок работы см. в  
приложении 1  («Экстракция РНК с использованием комплекта реагентов «РИБО-  
преп»).
При использовании автоматической станции для экстракции нуклеиновых кислот  
компании BioMerieux совместно с набором реагентов необходимо использовать  
протоколы и реагенты, позволяющие проводить экстракцию РНК из образцов  
плазмы и сыворотки крови объемом от 0,1 мл до 1  мл.
Процедура экстракции проводится в соответствии с инструкцией к автоматической  
станции, а также с учетом следующих условий;
а) Обязательным условием является внесение ВКО в образцы или лизирующий  
раствор в объёме 10 мкл на одну пробу до начала экстракции.
б) При экстракции образца для проведения нескольких различных исследований  
(допустима одновременная экстракция нуклеиновых кислот для обнаружения  
РНК HGV, РН К HDV, РНК HCV, РИК HGV, Д Н К HBV, РНК ВИЧ и HCV- 
генотипирования) внести все требуемые препараты ВКО (аналогично).
в) Программируемый объем элюции -  50-60 мкл (допускается увеличение объёма  
элюции до 100 мкл).
г) При использовании автоматической станции NucliSENS easyMAG (BioMerieux,  
Франция) обязательно использование дополнительного комплекта реагентов  
«ЕМ-плюс» (производства ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии Роспотребнадзора).  
Допускается использование режимов лизиса в приборе (On-board) и вне  
прибора {Off-board).
12


--- стр. 13 ---
Ф О Р М А Т  F E P
д) После окончания экстракции РНК, извлечь пробирки из прибора и провести  
реакцию О Т-П Ц Р . Очищенная РНК может храниться до 4 ч при температуре от  
2 до 8 °С. Для длительного хранения препарат необходимо хранить при  
температуре не выше минус 16 °С в течение 1  мес или не выше минус 68 °С в  
течение года.
Также см, методические рекомендации ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии  
Роспотребнадзора по применению наборов реагентов для выявления РНК вируса  
гепатита С {HCV) «АмплиСенс® HCV-FL», РН К вируса гепатита D {HDV) 
«АмплиСенс® HDV-FL», РН К вируса гепатита G {HGV) «АмплиСенс® HGV-fb>, ДНК  
вируса гепатита В (HBV) «АмплиСенс® HBV-FL».
ПРО ВЕДЕНИЕ Р Е А КЦ И И  О Б Р А ТН О Й  ТР А Н С КР И П Ц И И  И АМ ПЛИФ ИКА ЦИИ 
Общий объем р еакционно й см еси -  25 мкл, вклю чая объем пробы РНК -  
10 мкл.
ВНИМАНИЕ! При работе с РНК необходимо использовать только одноразовые  
стерильные пластиковые расходные материалы, имеющие специальную маркировку  
RNase-free, DNase-free.
А. Подготовка п р о б и р о к для ам плиф икации
Выбор пробирок для ам плиф икации зав и си т от используемого  
амплиф икатора.
Для внесения в пробирки реагентов, проб РН К и контрольны х образцов  
использую тся о д н о р азо в ы е наконечники с ф ильтрам и.
ВНИМАНИЕ! Компоненты реакционной смеси следует смешивать непосредственно  
перед проведением ПЦР-исследования. Смешивать реагенты из расчета на  
необходимое число реакций, включающее тестирование исследуемых и  
контрольных образцов, необходимо согласно расчетной таб л и ц е (см. табл. 1).
1. До начала работы разморозить, тщательно перемешать на вортексе все реагенты  
набора и осадить капли с крышек пробирок.
2. Отобрать необходимое количество пробирок для амплификации на 0,2 мл или на
0,5 мл с учетом количества исследуемых контрольных образцов (два контроля  
этапа экстракции, два контроля этапа амплификации) и двух пробирок «Фон». Тип  
пробирок выбрать в зависимости от используемого прибора.
3. Для приготовл ения реакционной смеси в случае необходим ости подготовки  
пробирок «Ф он» необходимо в отдельной стерильной пробирке смешать
1 3


--- стр. 14 ---
Ф О Р М А Т  F E P
реагенты из расчета на 1  реакцию: 10 мкл О Т-П Ц Р -см еси -1-FL HGV, 5 мкл ОТ-  
П Ц Р-см еси-2-F E P /F R T  и 0,25 мкл R T-G -m ix-2 (см. такж е табл. 1, пункт А).
Тщательно перемешать смесь на вортексе и осадить капли с крышки пробирки.
4. Добавить в две пробирки «Ф он» по 15 мкл приготовленной смеси (без  
полимеразы (TaqF) и ТМ-Ревертазы (MMIv)) и по 10 мкл буф ера для элюции,  
перемешать пипетированием. Сверху раскапать по 1  капле минерального масла  
для ПЦР.
ВНИМАНИЕ! После проведения амплификации образцы «Ф он» можно хранить в  
течение 1  мес при температуре от 2 до 20 °С и использовать многократно.  
Многократное использование пробирок «Ф он» допускается при условии их  
использования с набором реагентов той же серии, того же типа выделительных  
реагентов и того же типа ПЦР-пробирок.
5. В оставшуюся часть реакционной смеси добавить из расчета на 1  пробу 0,5 мкл  
полимеразы  (TaqF) и 0,25 мкл ТМ -Р евертазы  (M M Iv) (см. такж е табл. 1, пункт
А). Тщательно перемешать смесь на вортексе и осадить капли с крышки  
пробирки.
Количество добавляемых в реакционную смесь ферментов полимеразы (TaqF) и  
ТМ-Ревертазы (MMIv), указанное в табл. 1, приведено с учетом уже отобранных  
30 мкл реакционной смеси для двух пробирок «Фон».
6 В случае п о в то р н о го  использования образцов «Ф он» необходимо в  
отдельной стерильной пробирке смешать из расчета на 1  реакцию: 10 мкл ОТ-  
П Ц Р-см еси-1-FL HGV, 5 мкл О Т-П Ц Р -см еси-2-FEP /FR T, 0,25 мкл RT-G-mix-2,
0.5 мкл пол им еразы  (TaqF) и 0,25 мкл ТМ -Р евертазы  (M M Iv) (см. также табл.
1, пункт Б). Тщ ательно перемешать смесь на вортексе и осадить капли с крышки  
пробирки.
7. Внести в пробирки по 15 мкл готовой реакционной смеси. Сверху раскапать по
1  капле м и нер ал ь но го  м асла для ПЦР.
8. В готовые пробирки внести по 10 мкл РН К-проб, выделенных из клинических  
образцов.
ВНИМАНИЕ! При добавлении РНК-проб, выделенных с помощью автоматической  
станции для выделения нуклеиновых кислот NucliSENS easyMAG, необходимо  
избегать попадания сорбента в реакционную смесь.
9. Поставить контрол ь ны е реакции;
а) полож ительны й контрол ь экстракции (ПК) -  внести в пробирку 10 мкл РНК-
14


--- стр. 20 ---
Ф О Р М А Т  F R T
К комплекту реагентов прилагаются контрольные образцы этапа экстракции;
[Описание ‘ Объём, мл Кол-во
ОКО Прозрачная бесцветная
жидкость 1,2 2 пробирки
ПКО HGV-FL-rec Прозрачная бесцветная  
жидкость 0,1 2 пробирки
В КО ICZ-rec Прозрачная бесцветная  
жидкость 0,28 4 пробирки
Комплект реагентов «П Ц Р-Ком плект» вариант FR T-50 F -  комплект реагентов для  
проведения реакции обратной транскрипции РНК и амплификации кДНК вируса  
гепатита G [HGV) с гибридизационно-флуоресцентной детекцией в режиме  
«реального времени» -  вклю чает:
.......Описание ■ ; ■ '■ ■ ■Объёмj мл Кол-во
RT-G-mix-2 Прозрачная
жидкость
бесцветная 0,015 1  пробирка
ОТ-ПЦР-смесь-1-FL HGV Прозрачная
жидкость
бесцветная 0,6 1  пробирка
ОТ-ПЦР-смесь-2-FEP/FRT Прозрачная
жидкость
бесцветная 0.3 1  пробирка
Полимераза (TaqF) Прозрачная
жидкость
бесцветная 0,03 1  пробирка
ТМ-Ревертаза (MMIv) Прозрачная
жидкость
бесцветная 0,015 1  пробирка
ПКО кДНК HGV-FL Прозрачная
жидкость
бесцветная 0,1 1  пробирка
Буфер для элюции Прозрачная
жидкость
бесцветная 1,2 1  пробирка
Комплект реагентов рассчитан на проведение 55 реакций обратной транскрипции и  
амплификации, включая контроли.
Входит в состав форм комплектации 2 и 4.
К комплекту реагентов прилагаю тся контрольны е образцы  этапа экстракции;
"  Реактив Описание "г Объём, мл Кол-во
ОКО Прозрачная бесцветная  
жидкость 1,2 1  пробирка
ПКО HGV-FL-rec Прозрачная бесцветная  
жидкость 0,1 1  пробирка
ВКО ICZ-rec Прозрачная бесцветная  
жидкость 0,28 2 пробирки
20


--- стр. 21 ---
Ф О Р М А Т  F R T
ПРО ВЕДЕН ИЕ П Ц Р -И С С Л Е Д О В А Н И Я
ПЦР-исследование состоит из следующих этапов:
-  Экстракция РН К из исследуемых образцов.
-  Проведение реакции обратной транскрипции и амплификации с  
гибридизационно-флуоресцентной детекцией в режиме «реального времени».
-  Анализ и интерпретация результатов.
ЭКСТРАКЦИЯ Р Н К ИЗ И С С Л Е Д УЕ М Ы Х  О Б Р А ЗЦ О В
ВНИМАНИЕ! Для работы с РНК необходимо использовать только одноразовые  
стерильные пластиковые расходные материалы, имеющие специальную маркировку  
RNase-free, DNase-free.
Для экстракции РН К используются комплекты реагентов, рекомендованные ФБУН  
ЦНИИ Эпидемиологии Роспотребнадзора, в соответствии с инструкцией к  
используемому набору:
-  при использовании комплекта реагентов «Р И Б О -преп» порядок работы см. в  
приложении 1  «Экстракция РНК с использованием комплекта реагентов «РИБО-  
преп».
При использовании автоматической станции для экстракции нуклеиновых кислот  
компании BioMerieux совместно с набором реагентов необходимо использовать  
протоколы и реагенты, позволяющие проводить экстракцию РНК из образцов плазмы  
и сыворотки крови объемом от 0,1 мл до 1,0 мл.
Процедура экстракции проводится в соответствии с инструкцией к автоматическим  
станциям, а также с учетом следующих условий:
а) Обязательным условием является внесение ВКО в образцы или лизирующий  
раствор в объёме 10 мкл на одну пробу до начала экстракции.
б) При экстракции образца для проведения нескольких различных исследований  
(допустима одновременная экстракция нуклеиновых кислот для обнаружения  
РНК HGV, РНК HDV, РНК HCV, ДН К HBV, РНК ВИЧ и НС\/-генотипирования)  
внести все требуемые препараты ВКО (аналогично).
в) Программируемый объем элюции -  50-60 мкл (допускается увеличение объёма  
элюции до 100 мкл).
г) При использовании автоматической станции NucliSENS easyMAG (BioMerieux,  
Франция) обязательно использование дополнительного комплекта реагентов  
«ЕМ-плюс» (производства ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии Роспотребнадзора).
Допускается использование режимов лизиса в приборе {On-board) и вне
2 1


--- стр. 22 ---
Ф О Р М А Т  F R T
прибора {Off-board).
д) После окончания экстракции РНК, извлечь пробирки из прибора и провести  
реакцию О Т-П Ц Р . Очищенная РНК может храниться до 4 ч при температуре от
2 до 8 “С. Для длительного хранения препарат необходимо хранить при  
температуре не выше минус 16 °С в течение 1  мес или не выше минус 68 °С в  
течение года.
Также см. методические рекомендации ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии  
Роспотребнадзора по применению наборов реагентов для выявления РНК вируса  
гепатита С (HCV) «АмплиСенс® HCV-FL», РНК вируса гепатита D {HDV) 
«АмплиСенс® HDV-FL», РН К вируса гепатита G {HGV) «АмплиСенс® HGV-FL», ДНК  
вируса гепатита В {HBV) «АмплиСенс® HBV-FL».
ПРО ВЕДЕН ИЕ РЕ А КЦ И И  О Б Р А ТН О Й  ТР А Н С КР И П Ц И И  И АМ ПЛИФ ИКАЦИИ С 
ДЕТЕКЦИЕЙ В Р Е Ж И М Е  «Р Е А Л Ь Н О ГО  В РЕМ ЕН И»
Общий объем р еакционно й см еси -  25 мкл, вклю чая объем пробы РНК -  
10 мкл.
ВНИМАНИЕ! При работе с РНК необходимо использовать только одноразовые  
стерильные пластиковые расходные материалы, имеющие специальную маркировку  
RNase-free, DNase-free.
А. Подготовка пр о б и р о к для ам плиф икации
Выбор п роб ирок для ам плиф икации зав и си т от используемого  
амплиф икатора.
Для внесения в пробирки реагентов, проб РН К и контрольны х образцов  
использую тся о д н о р азо в ы е наконечники с ф ильтрам и.
ВНИМАНИЕ! Компоненты реакционной смеси следует смешивать непосредственно  
перед проведением ПЦР-исследования. Смешивать реагенты из расчета на  
необходимое число реакций, включающее тестирование исследуемых и  
контрольных образцов, необходимо согласно расчетной таб л ице (см. табл. 4).
1. До начала работы разморозить, тщательно перемешать на вортексе все реагенты  
набора и осадить капли с крышек пробирок.
2. Отобрать необходимое количество пробирок для амплификации с учетом  
количества исследуемых контрольных образцов (два контроля экстракции, два  
контроля амплификации). Тип пробирок, стрипов или плашек выбрать в  
зависимости от используемого прибора.
22


--- стр. 23 ---
Ф О Р М А Т  F R T
3. Для приготовл ения реакционной смеси необходимо в отдельной стерильной  
пробирке смешать реагенты из расчета на 1  реакцию: 10 мкл ОТ-ПЦР-смеси-1-  
FL HGV, 5 мкл О Т -П Ц Р -см еси -2-FEP/FR T, 0,25 мкл RT-G-m ix-2 0,5 мкл  
полимеразы  (TaqF) и 0,25 мкл ТМ -Р евертазы  (M M Iv). Тщательно перемешать  
смесь на вортексе и осадить капли с крышки пробирки.
4. Внести в пробирки по 15 мкл готовой реакционной смеси.
5. В готовые пробирки внести по 10 мкл РН К-проб, выделенных из клинических  
образцов.
ВНИМАНИЕ! При добавлении РНК-проб, выделенных с помощью автоматической  
станции для экстракции нуклеиновых кислот NucliSENS easyMAG, необходимо  
избегать попадания сорбента в реакционную смесь.
6. Поставить контрол ь ны е реакции:
а) полож ительны й контроль экстракции (ПК) -  внести в пробирку 10 мкл РНК-  
пробы, выделенной из образца ПКО HGU-FL-rec.
б) отрицательны й контроль экстракции (О К) -  внести в пробирку 10 мкл РНК-  
пробы, выделенной из образца ОКО.
в) отрицательны й контроль ПЦР ( К -)  -  внести в пробирку 10 мкл буфера для  
элюции.
г) полож ительны й контроль ПЦР (К+) -  внести в пробирку 10 мкл ПКО кДНК  
HGV-FL
23


--- стр. 32 ---
С )
Главный врач ФГБУ
1  л,1)Л» Управления 
оссийской
«У ТВ Е Р Ж Д А Ю »;
конов
2012 г.
Отзыв на изменения в технических условиях (ТУ 9398-186-01897593-  
2012) и инструкции по применению набора реагентов
для выявления РНК вируса гепатита G {HGV)  в клиническом материале 
методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) с гибридизационно-
флуоресцентной детекцией 
«АмплиСенс® НСУ-¥Ъ у>
В ходе экспертного изучения внесенных изменений в ТУ 9398-186- 
01897593-2012 и инструкцию по применению ранее зарегистрированного 
набора реагентов «АмплиСенс® HGV-VL»  (РУ Ф СР № 2011/12673 от 22 
декабря 2011 г.) было установлено следующее:
Внесенные изменения носят формальный характер и обусловлены 
изменением названия института с ФГУН ЦНИИЭ Роспотребнадзора на 
ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии Роспотребнадзора, вследствие чего:
-  переоформлены титульные страницы ТУ и инструкции:
-  по тексту ТУ и инструкции изменено название института;
-  в инструкции по применению на титульной странице добавлены 
зарегистрированный товарный знак, символы производителя и символ 
изделия для «in vitro диагностики» (1VD);
Кроме того, в инструкцию по применению внесены некоторые 
формальные изменения, которые носят уточняющий характер:
-  согласно Регистрационному удостоверению (РУ) и техническим 
условиям (ТУ) в инструкцию добавлена оптовая форма комплектации;


--- стр. 33 ---
-  добавлен номер ТУ для комплекта реагентов «РИБО-преп» (ТУ 
9398-071-01897593-2008)
-  в разделе «Меры предосторожности» старые санитарные правила 
1999 года заменены на санитарные правила 2010 года;
-  в разделе «Срок годности, условия транспортирования и хранения» 
с целью уточнения добавлены фразы «Срок годности вскрытых реагентов 
соответствует сроку годности, указанному на этикетках для невскрытых 
реагентов, если в инструкции не указано иное» и уточнены условия хранения 
комплекта реагентов «РИБО-преп»;
-  на последней странице инструкции добавлен раздел «Символы, 
используемые в печатной продукции» с целью облегчения работы с 
инструкцией;
-  уточнен адрес для направления рекламаций.
В остальном инструкция не изменилась: в полном объеме
представлены сведения о назначении, принципе метода, составе набора, 
мерах предосторожности, взятии, транспортировке и хранении 
исследуемого материала для проведения исследований, оборудовании и  
материалах, используемых в подготовке и проведении анализа. Подробно 
и четко без изменений изложена процедура проведения анализа, 
регистрации и учета результатов. С незначительными уточнениями 
указаны условия хранения набора. В конце также осталось одно 
приложение, в котором указаны разные виды экстракции ДНК/РНК 
выделительными комплектами, которые тоже не потерпели никаких 
изменений по сравнению с ранее зарегистрированной инструкцией.
ТУ 9398-186-01897593-2012 полностью аналогичны ТУ 9398-186- 
01897593-2011, за исключением названия института.
Аналитические и диагностические характеристики набора, 
отражающие его чувствительность и специфичность, остались прежние, 
также как приборная база, для которой был разработан этот набор.


--- стр. 34 ---
Заключение. Внесенные изменения в ТУ и инструкцию по 
применению набора носят формальный, уточняющий характер и не 
требуют проведения технических и медицинских испытаний.
Заведующий КДЛ 
ФГБУ «Поликлиника № 1» Управления делами 
Президента Российской Федерации 
к.м.н.,профессор
Кудрявцева Л.В.