УТВЕРЖДЕНА «УТВЕРЖДАЮ»
Приказом Роздравнадзора Директор региональной общественной
oprasiHiajjgH «Санкт-Петербургское об-
от 200 г. № ,<^^^ТОТ^^^оиспытателей»
А.П.Стрелков
ИНСТРУКЦИЯ
по применению набора реагентов для определения содержания общего холестерина
в сыворотке и плазме крови
(«КлиниТест-Холестерин»)
1. Назначение.
Набор предназначен для количественного определения общего холестерина в сыворотке
и плазме крови человека в клинико-диагностических и биохимических лабораториях и в на
учно-исследовательской практике.
Набор рассчитан на проведение 100, или 200, или 400 определений при суммарном рас
ходе 1 мл реагентов на один анализ.
2. Характеристика набора.
2Л. Принцип действия.
Холестеринэстераза гидролизует эфиры холестерина до жирных кислот и свободного
холестерина, который окисляется холестериноксидазой с выделением эквимолярного количе
ства перекиси водорода. Перекись водорода в присутствии пероксидазы реагирует с 4-
аминоантипирином и 4-гидроксибензолсульфоновой кислотой с образованием окрашенного
соединения, интенсивность окраски которого пропорциональна содержанию холестерина в
исследуемой пробе и определяется фотометрически при длине волны 500 (490-540) нм.
2.2. Состав набора;
- реагент 1: трис-буфер, pH 7,5, 100 ммоль/л; магния аснартат, 50 ммоль/л; п-
фенолсульфокислота, натриевая соль, 20 ммоль/л; натрия холат, 10 ммоль/л; натрия азид,
0,05%; Тритон Х-100, 3 г/л - 2 флакона по 50 мл, 3 флакона по 66 мл или 4 флакона по 100 мл;
- реагент 2: холестеринестераза, 400 ед/л; холестериноксидаза, 400 ед/л, пероксидаза,
2500 ед/л; 4-аминоантипирин, 1 ммоль/л - 1 флакон (2мл, 3 мл или 4 мл);
- калибратор: раствор холестерина 5,17 ммоль/л в 10 % растворе Тритон Х-100 - 1 фла
кон (2 мл или 3 мл);
3. Аналитические и диагностические характеристики набора.
Чувствительность - не более 0,5 ммоль/л.
Линейность. Набор обеспечивает линейность при определении содержания холестерина
в диапазоне от 1 до 18 ммоль/л с отклонением от линейности не более 5%.
Коэффициент вариации - не более 5%.
Инструкция составлена ст, научи, сотр. РОО СПбОЕ Э.А Карандашовьгм. и зав. каф.
клинической лабораторной диагностики СПбГМУ, д.м.н. проф. В.Л Эмануэлем
Качество набора может проверяться по отечественным или зарубежным контрольным
сывороткам, аттестованным данным методом.
Содержание холестерина в сыворотке и плазме крови в норме составляет от 3,3 до 5,5
ммоль/л.
4. Меры предосторожности при работе с набором.
Меры предосторожности при работе с набором - соблюдение «Правил устройства, тех
ники безопасности, производственной санитарии, противоэпидемического режима и личной
гигиены при работе в лабораториях (отделениях, отделах) санитарно- эпидемиологических
учреждений системы Министерства здравоохранения СССР» (Москва, 1981 г.).
При работе с набором следует надевать одноразовые резиновые или пластиковые пер
чатки, так как образцы крови человека следует рассматривать как потенциально инфициро
ванные, способные длительное время сохранять и передавать ВИЧ, вирус гепатита или любой
другой возбудитель вирусной инфекции.
5. Оборудование, материалы и реагенты:
- спектрофотометр, длина волны 500 нм, или фотоэлектроколориметр, длина волны 490-
540 нм, или биохимический анализатор открытого типа, кювета с длиной оптического пути 10
мм;
- пипетки, позволяющие отбирать объёмы жидкостей 0,01 мл и 1,0 мл;
- секундомер;
- водяная баня на 37°С;
- пробирки вместимостью 5-10 мл;
- вода дистиллированная;
- перчатки резиновые или пластиковые.
6. Анализируемые пробы.
Негемолизированная сыворотка крови, гепаринизированная или ЭДТА плазма крови.
7. Проведение анализа.
7.1. Приготовление рабочего реагента.
Во флакон с Реагентом 1 внести 1 мл Реагента 2 и тщательно перемешать, избегая пено-
образования. Полученный рабочий реагент стабилен в течение 4 месяцев при хранении во
флаконе предприятия-изготовителя (или во флаконе из тёмного стекла) при температуре 2-
8°С.
7.2. Проведение анализа.
7.2.1. Определение содержания холестерина в сыворотке (плазме) крови.
Внести в пробирки по 1,0 мл рабочего реагента, добавить в пробирки для опытных проб
по 0,01 мл анализируемых образцов сыворотки (плазмы), в пробирку для калибровочной про
бы ~ 0,01 мл калибратора, в пробирку для контрольной (холостой) пробы ~ 0,01 мя дистилли
рованной воды. Пробы тщательно перемешать, инкубировать в течение 10 минут при темпе
ратуре +37°С или в течение 30 минут при +18-25Х.
8. Регистрация результатов.
После инкубации измерить оптическую плотность опытной пробы (Еоп) и калибровоч
ной пробы (Екал) относительно контрольной (холостой) пробы при днине волны 500 (490-540)
нм в кювете с длиной оптического пути 10 мм.
9. Учет результатов реакции.
Концентрацию холестерина в анализируемом образце рассчитать по формуле:
С = — х5,17,
Екал
где: Еоп - оптическая плотность опытной пробы, ед. опт. плотн.;
Екап “ оптическая плотность калибровочной пробы, ед. опт. плотн.;
5,17 - концентрация холестерина в калибраторе, ммоль/л.
10. Условия хранения и эксплуатации набора.
Набор должен храниться в упаковке предприятия изготовителя при температуре +2-8°С
в течение всего срока годности (12 мес). Допускается хранение набора при температуре
+25°С не более 5 дней.
Рабочий реагент можно хранить при температуре +2-8°С в плотно укупоренном флаконе
предприятия-изготовителя (или во флаконе из тёмного стекла) не менее 4 месяцев.
Калибратор после вскрытия флакона можно хранить при температуре -ь2-8°С в тёмном
месте не более 1 месяца.
Для получения надёжных результатов необходимо строгое соблюдение инструкции по
применению набора.
По вопросам, касающимся качества набора КлиниТест-Холестерин следует обращаться
по адресу: 199034, г. Санкт-Петербург, Университетская набережная, 7/9, тел.: (812) 3289663,
4506779.
Старший научный сотрудник
РОО СПбОЕ, к.б.н. Э.А.Карандашов
Заведующий кафедрой клинической
лабораторной диагностики СПбГМУ,
д.м.н. профессор В.Л.Эмануэль