Набор реагентов для иммуноферментного определения IgM антител к антигенам Herpes simplex virus 1 и 2 типа (HSV 1,2) в сыворотке (плазме) крови "HSV 1,2 IgM-ИФА" по ТУ 9398-1041-18619450-2009 — инструкция и характеристики
Открытые закупки, где изделие проходит ТЗ
Сейчас открытых закупок, где изделие полностью проходит ТЗ, нет; список обновляется каждый день.
Построчная сверка ТЗ с характеристиками этого изделия и все закупки под ваши товары — в кабинете, 7 дней бесплатно.
Попробовать бесплатно
Текст инструкции: технические характеристики
УТВЕРЖДЕНА «УТВЕРЖДАЮ»
Приказом Росздравнадзора Генераль^ш директор ООО «ХЕМА»
от 2009 г. С. Лебедин
_____''Л^О 2009г.
ИНСТРУКЦИЯ
по применению Набора реагентов для иммуноферментного определения
IgM антител к антигенам Herpes simplex virus 1 и 2 типа (HSV 1,2) в сыворотке (плазме)
крови «HSV 1,2 IgM-ИФА»
1. НАЗНАЧЕНИЕ.
1.1. Набор реагентов «HSV 1,2 IgM-ИФА» предназначен для определения
специфических IgM антител к антигенам Herpes simplex virus 1 и 2 типа (далее - HSV 1,2) в
сыворотке (плазме) крови человека методом твердофазного иммуноферментного анализа.
1.2. Инфекции, вызываемые вирусом простого герпеса 1 и 2 типа {Herpes simplex virus,
HSV 1,2, ВПГ,) относятся к числу наиболее частых заболеваний человека. Проведенные
сероэпидемиологические исследования показали, что около 90% всего населения к 4-й декаде
жизни имеют антитела к HSV 1,2. Передача через инфицированные секреты является основным
путем передачи инфекции. Латенция и реактивация очень часто встречаются при ВПГ-
инфекции. Антитела к HSV 1,2 играют защитную роль в предотвращении развития заболевания и
ограничении латенции, хотя и не обеспечивают полной защиты. Исследование специфических
IgM антител к HSV 1,2 выполняется на ранних сроках беременности для оценки предыдущей
экспозиции к вирусу. В случае серонегативности беременной показано ограничение контактов.
1.3. Диагностическая значимость определения.
Определение IgM антител к HSV 1,2 ъ клинической практике используется обычно для
следующих целей:
- диагностика ВПГ-инфекции;
- дифференциальная диагностика ВПГ-инфекции у беременных;
- мониторинг эффективности проводимого лечения ВПГ-инфекции.
2. ХАРАКТЕРИСТИКА НАБОРА.
2.1. Принцип работы Набора. Определение IgM антител к антигенам HSV 1,2 основано
на использовании твердофазного варианта иммуноферментного анализа. На внутренней
поверхности лунок иммобилизован высокоочищенный рекомбинантный антиген HSV 1,2 В
лунках планшета, при добавлении исследуемого образца сыворотки (плазмы) крови, во время
инкубации, происходит специфическое связывание IgM антител, содержащихся в исследуемом
образце, и антигена на твердой фазе.
Отмывка лунок планшета позволяет удалить избыток непрореагировавших компонентов.
Во время инкубации с конъюгатом происходит образование иммунного комплекса
«антиген HSV 1,2 твердой фазы - специфические IgM антитела (исследуемый образец) -
мышиные моноклональные анти-IgM антитела, конъюгированные с пероксидазой хрена
(конъюгат)».
Отмывка лунок планшета позволяет удалить избыток непрореагировавших компонентов.
Во время инкубации с раствором субстрата тетраметилбензидина (ТМБ) происходит
специфическое связывание пероксидазы (конъюгат) с раствором субстрата тетраметилбензидина
(ТМБ), сопровождающееся изменением окраски растворов в лунках. Интенсивность окраски
прямо пропорциональна концентрации специфических IgM антител к антигенам HSV 1,2 в
исследуемом образце.
Регистрация результатов реакции производится измерением оптической плотности
содержимого лунок планшета на спектрофотометре при длине волны 450 нм.
Обработка результатов реакции производится с помощью коэффициентного метода.
2.2. Состав Набора:
- планшет 96-луночный стрипированный с сорбированным на внутренней поверхности
лунок рекомбинантным антигеном HSV 1,2, готов к использованию - 1 шт.;
- положительная контрольная сыворотка А на основе инактивированного пула
сывороток крови человека с высоким содержанием IgM антител к антигенам HSV 1,2, готова к
использованию - 1 пробирка или флакон (1,0 мл);
- положительная контрольная сыворотка В на основе инактивированного пула
сывороток крови человека с низким содержанием IgM антител к антигенам HSV 1,2, готова к
использованию - 1 пробирка или флакон (1,0 мл);
- отрицательная контрольная сыворотка на основе инактивированного пула
сывороток крови человека, не содержащих IgM антител к антигенам HSV 1,2, готова к
использованию - 1 пробирка или флакон (1,0 мл);
- конъюгат (мышиные моноклональные антитела к IgM человека, конъюгированные с
пероксидазой хрена), готов к использованию - 1 флакон (11 мл);
- ИФА-Буфер (pH 7,0 - 7,2), готов к использованию - 1 флакон (22 мл);
- раствор субстрата тетраметилбензидина (ТМБ), готов к использованию -1 флакон
(11 мл);
- концентрат отмывочного раствора, 21-кратный концентрат - 1 флакон (22 мл);
- стоп-реагент, готов к использованию - 1 флакон (11 мл);
- липкая лента с бумажной подложкой для заклеивания планшета, готова к
использованию - 2 шт.
Общество с ограньченьо.
OIBETCTBcH ПИаО
«1 I >>
ГЕНЕРАЛЬРЫЛ M'iPEHO
ДЕБЕД1^Н СТЕПАНОЕ'-
3. АНАЛИТИЧЕСКИЕ И ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ.
3.1. Специфичность. При проверке на стандартной панели предприятия (СИП №
1041SP «Сыворотки крови человека, не содержащие IgM антитела к антигенам HSV 1,2
для проверки специфичности», утвержденной генеральным директором ООО «ХЕМА»
10.02.2008 г.) специфичность составляет 100%.
3.2. Чувствительность. При проверке на стандартной панели предприятия (СПИ №
1041SS «Сыворотки крови человека, содержащие IgM антитела к антигенам HSV 1,2 для
проверки чувствительности», утвержденной генеральным директором ООО «ХЕМА»
10.02.2008 г.) чувствительность составляет 100%.
3.3. Воспроизводимость. Коэффициент вариации результатов определения содержания
IgM антител к антигенам HSV 1,2 в одном и том же образце сыворотки (плазмы) крови с
использованием Набора реагентов «HSV 1,2 IgM-ИФА» не превышает 8,0%.
3.4. Сравнение Набора с аналогами.
При разработке и апробации Набора реагентов «HSV 1,2 IgM-ИФА» в качестве
референсного изделия медицинского назначения использовался Набор реагентов для
иммуноферментного выявленш иммуноглобулинов класса М к вирусу простого герпеса 1 и 2
типов «ВектоВПГ-IgM» производства ЗАО «Вектор-Бест», Россия (зарегистрирован в РФ, РУ
№ФСР 2008/00613.
При проведении сравнения результатов на массиве образцов сывороток (плазм) крови
здоровых доноров и пациентов с подтвержденными диагнозами показана высокая корреляция
(кг >0,95) между Наборами реагентов «HSV 1,2 IgM-ИФА» и «ВектоВПГ-IgM».
4. МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ.
4.1. Потенциальный риск применения Набора - класс 26 (ГОСТ Р 51609-2000).
4.2. Меры предосторожности-соблюдение «Правил устройства, техники безопасности,
производственной санитарии, противоэпидемического режима и личной гигиены при работе в
лабораториях (отделениях, отделах) санитарно-эпидемиологических учреждений системы
Министерства здравоохранения СССР» (Ыосквв, 1981 г).
5. ОБОРУДОВАНИЕ И МАТЕРИАЛЫ, НЕОБХОДИМЫЕ ПРИ РАБОТЕ С НАБОРОМ:
- фотометр вертикального сканирования, позволяющий измерять оптическую
плотность раствора в лунках при длине волны 450 нм;
- дозаторы со сменными наконечниками, позволяющие отбирать объемы жидкости
в диапазоне 5,0-250 мкл;
- цилиндр мерный вместимостью 500 мл;
- вода дистиллированная;
- перчатки резиновые или пластиковые;^
- бумага фильтровальная.
Общество с ограниченной
ОТЕЕТСТВЕННООТЬЮ
«X о ill / >>
ГЕНЕРАЛЕРЬШ Д"(РЕКГ
Л EtfiwH СТЕПАНОВИЧ;
6. АНАЛИЗИРУЕМЫЕ ОБРАЗЦЫ. ПОДГОТОВКА РЕАГЕНТОВ ДЛЯ
АНАЛИЗА.
6.1. Перед проведением анализа компоненты Набора и исследуемые образцы сыворотки
(плазмы) крови следует выдержать при комнатной температуре (+18-25 °С) не менее 30 мин.
6.2. Образцы сыворотки (плазмы) крови, используемые для анализа, допускается
хранить при температуре +2-8 *^0 не более 24 ч или при температуре минус 20 не более 2
недель.
6.3. Для проведения анализа не следует использовать гемолизированную, мутную
сыворотку (плазму) крови, а также сыворотку (плазму) крови, содержащую азид натрия.
6.4. Приготовление планшета.
Вскрыть пакет с планшетом и установить на рамку необходимое количество стрипов.
Вскрытые стрипы следует использовать в течение 1 ч, длительному хранению не подлежат.
Оставшиеся неиспользованными стрипы, чтобы предотвратить воздействие на них влаги,
необходимо тщательно заклеить липкой лентой для заклеивания планшета и хранить в
упаковке при температуре +2-8 в течение всего срока годности Набора.
6.5. Приготовление отмывочного раствора.
Содержимое флакона с концентратом отмывочного раствора перенести в мерный
цилиндр вместимостью 500 мл, добавить 440 мл дистиллированной воды и тщательно
перемешать.
В случае дробного использования Набора следует отобрать необходимое количество
концентрата отмывочного раствора и развести дистиллированной водой в 20 раз (1 объем
концентрата + 19 объемов дистиллированной воды).
Приготовленный отмывочный раствор допускается хранить при комнатной температуре
(+18-25 °С) не более 2 сут. или при температуре +2-8 °С не более 10 сут.
7. ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА.
7.1. Развести исследуемые образцы сыворотки (плазмы) крови в 21 раз ИФА-Буфером
{например, 10,0 мкл образца сыворотки (плазмы) крови + 200 мкл ИФА-Буфера}.
Тщательно перемешать разведенный образец, избегая вспенивания.
Разведенные образцы сывороток (плазм) крови длительному хранению не подлежат.
7.2. Внести в соответствующие лунки в дубликатах по 100 мкл положительной
контрольной сыворотки А, положительной контрольной сыворотки В и отрицательной
контрольной сыворотки.
в остальные лунки внести в дубликатах по 100 мкл разведенных (см. п. 7.1.)
исследуемых образцов сыворотки (плазмы) крови.
Внесение образцов в лунки планшета необходимо произвести в течение 5-10 мин.
7.3. Аккуратно перемешать содержимо^;с?йланшета круговыми движениями по
горизонтальной поверхности, заклеить планщ^^йпкс^-шентрй для заклеивания планшета и
^ ОБЩЕСТВО С.ОГРАНИЧЕННОЙ / W П ^ \
инкубировать его дтеч^у^^|1,мщ ком^ЙОи тем|1е|)а1|уре (^18-25 С).
S/r.
Г.
ГЕНЕРАЛ! Гb/il fl’iPEKT^
ЛЕБЕДА,Н СТЕПАНОВИЧ'
7.4. По окончании инкубации удалить содержимое лунок аспирацией (например, с
помощью водоструйного насоса) или декантированием и промыть лунки планшета трижды
путем добавления во все лунки по 250 мкл отмывочного раствора. Перемешать содержимое
планшета круговыми движениями по горизонтальной поверхности с последующей аспирацией
или декантированием. При каждом декантировании необходимо тщательно удалять остатки
жидкости из лунок постукиванием планшета в перевернутом положении по фильтровальной
бумаге.
7.5. Внести во все лунки планшета по 100 мкл конъюгата.
Внесение конъюгата в лунки планшета необходимо произвести в течение 5-10 мин.
7.6. Аккуратно перемешать содержимое планшета круговыми движениями по
горизонтальной поверхности, заклеить планшет липкой лентой для заклеивания планшета и
инкубировать его в течение 30 мин при комнатной температуре (+18-25 °С).
7.7. По окончании инкубации удалить содержимое лунок аспирацией (например, с
помощью водоструйного насоса) или декантированием и промыть лунки 5 раз (см. п.7.4.).
7.8. Внести во все лунки планшета по 100 мкл раствора субстрата тетраметилбензидина
(ТМБ).
Внесение раствора субстрата тетраметилбензидина (ТМБ) в лунки планшета
необходимо произвести в течение 1 -2 мин.
Инкубировать планшет в темноте при комнатной температуре (+18-25 '’С) в течение 15-
25 мин в зависимости от степени развития синего окрашивания.
7.9. Внести во все лунки планшета с той же скоростью и в той же последовательности,
как и раствор субстрата тетраметилбензидина (ТМБ), по 100 мкл стоп-реагента; при этом
содержимое лунок окрашивается в ярко-желтый цвет.
Внесение стоп-реагента в лунки планшета необходимо произвести в течение 1 -2 мин.
8. РЕГИСТРАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ.
8.1. Измерить величину оптической плотности (ОП) в лунках планшета на фотометре
вертикального сканирования при длине волны 450 нм. Измерение ОП растворов в лунках
планшета необходимо произвести не позднее 5 мин после внесения стоп-реагента.
В случае невозможности своевременного измерения ОП растворов в лунках на
фотометре, планшет допускается хранить при температуре +2-8 не более 4 ч.
9. УЧЕТ РЕЗУЛЬТАТОВ РЕАКЦИИ.
9.1. Рассчитать среднее значение оптической плотности лунок с положительной
контрольной сывороткой В.
9.2. Умножить полученное значение на Коэффициент Q (0,51), значение которого
также приведено в аналитическом паспорте и на этикетке флакона.
ПРИМЕЧАНИЕ:
Коэффициент Q (0,51) является ■танкой, для дсех серий Набора «HSV 1,2 IgM-
Общество с ограниченной
ИФА».
оиЕтствеинзстью
I ■.
>'Ш й
■ - //
ГЕНЕГА/|1РЫг/ДЧРЕКТО
. ■ //
Л Б' ДиН к;гйй СТЕПАНОВИЧ