Набор реагентов для иммуноферментного определения прогестерона в сыворотке крови (ИммуноФА-ПГ) по ТУ 9398-322-11361534-2003 — инструкция и характеристики
Открытые закупки, где изделие проходит ТЗ
Сейчас открытых закупок, где изделие полностью проходит ТЗ, нет; список обновляется каждый день.
Построчная сверка ТЗ с характеристиками этого изделия и все закупки под ваши товары — в кабинете, 7 дней бесплатно.
Попробовать бесплатно
Текст инструкции: технические характеристики
‘УТВЕРЖДАЮ” Р^^ководитель Департамента государ- 5оля лекарственных ^^дицинской техники М3 Акимочкин 2002 г. ИНСТРУКЦИЯ по ПРИМЕНЕНИЮ НАБОРА РЕАГЕНТОВ ДЛЯ ИММУНОФЕРМЕНТНОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ ПРОГЕСТЕРОНА В СЫВОРОТКЕ КРОВИ (ИммуноФА-ПГ) Рекомендована Комиссией по наборам реагентов для иммуноферментного (неинфекционные), радиоиммунологического и других видов иммунохимического анализа Комитета по новой медицинской технике Минздрава РФ (протокол № 6 от 17 июня 2002 г.). 1. НАЗНАЧЕНИЕ Набор ИммуноФА-ПГ предназначен для количественного определения содержания прогестерона (ПГ) в сыворотке крови человека методом твердофазного иммуноферментного анализа. Количественное определение содержания прогестерона в сыворотке крови может быть использовано для оценки функционального состояния репродуктивной системы человека и функции плаценты в течение беременности. Набор рассчитан на проведение анализа в дубликатах 40 неизвестных образцов, 7 ка либровочных проб и 1 пробы контрольной сыворотки, всего 96 определений. Составлена: заместителем генерального директора, к.б.н. Е.М. Гавриловой и научным со трудником, к.х.н. Ж.В. Самсоновой - сотрудниками ЗАО “НВО Иммунотех”; консультантом МОНИИАГ, проф. И.П. Ларичевой. Д.М.Н., 2. ПРИНЦИП РАБОТЫ НАБОРА Принцип метода основан на конкуренции прогестерона из измеряемой пробы и про гестерона, меченного пероксидазой, за центры связывания специфичных к прогестерону ан тител, иммобилизованных на поверхности лунок полистиролового планшета. Количество связавшегося конъюгата выявляют с помошью субстрата 3,3',3,5'-тетраметилбензидина (ТМБ). Интенсивность окраски продуктов ферментативной реакции окисления субстрата об ратно пропорциональна концентрации прогестерона, содержащегося в анализируемом об разце. Концентрацию прогестерона в анализируемых пробах определяют по калибровочному графику зависимости оптической плотности от содержания прогестерона в калибровочных пробах. 3. СОСТАВ НАБОРА В состав набора входят следующие компоненты: - планшет 96-луночный полистироловый, покрытый поликлональными антителами к прогестерону - 1 шт.; - калибровочные пробы на основе сыворотки крови теленка, содержащие известные количества прогестерона: 0; 1,0; 3,0; 10; 20; 50 и 100 нмоль/л; концентрации ПГ в калибро вочных пробах могут незначительно изменяться от серии к серии, точные значения концен траций указаны на этикетках флаконов, готовые для использования - 7 фл. (по 0,5 мл); - контрольная сыворотка на основе сыворотки крови человека с известным содержа нием прогестерона, лиофилизованная - 1 фл.; - конъюгат прогестерона с пероксидазой, концентрированный - 1 фл. (0,5 мл); - фосфатно-солевой буферный раствор с добавлением твин-20, pH 7,0+0,5, концентри рованный - 1 фл. (10 мл); - реакционный буферный раствор, pH 7,0+0,5, готовый для использования - 1 фл. (12,5 мл); - раствор субстрата на основе 3,3',5,5'-тетраметилбензидина (ТМБ) с добавлением пе рекиси водорода, готовый для использования - 1 фл. (11 мл); - серная кислота (стоп-реагент), 0,2 М, готовая для использования - 1 фл. (15 мл). 4. АНАЛИТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ НАБОРА Специфичность. Перекрестная реакция антител к прогестерону с другими стероидами приведена в таблице. Таблица. Стероид Перекрестная реакция, % Деоксикортикостерон 0,07 Кортикостерон 0,03 Кортизол 0,01 Эстриол <0,01 Преднизолон <0,01 Р-Эстрадиол <0,01 11 -Деокси-17-гидроксикортикостерон <0,01 Тестостерон <0,01 Чувствительность. Минимальная концентрация прогестерона, определяемая с помо щью набора, составляет не более 0,4 нмоль/л. Воспроизводимость результатов. Коэффициент вариации результатов определения содержания прогестерона в одном и том же образце сыворотки крови не превышает 8%. Точность. Данный аналитический параметр проверяется тестом на "открытие" прогес терона - соответствие измеренной концентрации прогестерона предписанной в пробе, полу ченной путем смешивания равных объемов контрольной сыворотки и калибровочной пробы 3,0 нмоль/л. Процент "открытия" составляет 90 - 110%. Линейность. Зависимость концентрации прогестерона в образцах сыворотки крови при разведении их сывороткой крови, не содержащей прогестерон, имеет линейный характер в диапазоне концентраций 1,0-100 нмоль/л и составляет 90 - 110%. Клиническая проверка набора. Концентрация прогестерона, исследованная с помо щью набора ИммуноФА-ПГ, в сыворотке крови женщин с нормальным менструальным цик лом в фолликулиновой фазе составила менее 5,0 нмоль/л, в лютеиновой - 6,0-40 нмоль/л, у беременных - 100-700 нмоль/л; в сыворотке крови мужчин - 0,4-3,5 нмоль/л. Рекомендуется в каждой лаборатории при использовании набора ИммуноФА-ПГ уточнить значения концентраций прогестерона, соответствующие нормальным для обсле дуемого контингента. 5. МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ Потенциальный риск применения набора - класс 2а. Все компоненты набора, за исключением серной кислоты, в используемых концен трациях являются нетоксичными. Серная кислота действует на кожу и слизистые прижигающим образом, вызывая раз дражение и ожоги, поэтому в случае попадания на кожные или слизистые покровы следует ее немедленно тщательно смыть больщим количеством проточной воды. При работе с набором следует соблюдать "Правила устройства, техники безопасности, производственной санитарии, противоэпидемического режима и личной гигиены при работе в лабораториях (отделениях, отделах) санитарно-эпидемиологических учреждений системы Министерства здравоохранения СССР (Москва, 1981 г.). При работе с набором следует надевать одноразовые резиновые или пластиковые пер чатки, так как образцы крови человека следует рассматривать как потенциально инфициро ванные, способные длительное время сохранять и передавать ВИЧ, вирус гепатита и другие возбудители вирусных инфекций. 6. ОБОРУДОВАНИЕ И РЕАГЕНТЫ: - Фотометр вертикального сканирования, позволяющий измерять оптическую плотность раствора в лунках планщета при длине волны 450 нм; - термостат суховоздушный, поддерживающий температуру +37+1°С, - секундомер; - щейкер; - пипетки полуавтоматические одноканальные с переменным объемом со сменными на конечниками, позволяющие отбирать объемы жидкости 2-20 мкл, 200-1000 мкл; - пипетка полуавтоматическая многоканальная с переменным объемом со сменными на конечниками, позволяющая отбирать объем жидкости 50-250 мкл; - стаканы химические или колбы мерные вместимостью 25 и 200 мл; - цилиндры мерные вместимостью 200 мл; - бумага фильтровальная; - вода дистиллированная; - перчатки резиновые или пластиковые. 7. ПРИГОТОВЛЕНИЕ РЕАГЕНТОВ 7.1. Приготовление рабочего раствора фосфатно-солевого буферного раствора (ФСБР). Содержимое флакона с концентратом фосфатно-солевого буферного раствора (ФСБР) перенести в мерный стакан вместимостью 200 мл, дважды ополоснуть флакон дистиллиро ванной водой, все промывные воды объединить с разведенным ФСБР и довести общий объ ем раствора до 200 мл дистиллированной водой. Полученный рабочий раствор ФСБР можно хранить в закрытой емкости при темпера туре +(2-8)°С не более 7 дней. Примечание. При хранении ФСБР могут образовываться кристаллы, поэтому перед отбором аликвоты ФСБР необходимо слабо подогреть флакон с буферным раствором, по местив его в водяную баню или термостат при температуре +37°С до полного растворения кристаллов. 7.2. Приготовление контрольной сыворотки. Во флакон, содержащий контрольную сыворотку, внести 0,5 мл дистиллированной воды и тщательно перемешать, избегая образования пены. Контрольную сыворотку, подготовленную к работе, можно хранить при температуре +(2-8)°С не более 3 суток либо при температуре минус 20°С не более 2 месяцев. • 7.3. Приготовление рабочего раствора конъюгата. Рабочий раствор конъюгата готовится непосредственно перед использованием! В мерный стакан вместимостью 25 мл перенести содержимое флакона с реакционным буферным раствором. В полученном растворе развести содержимое флакона с конъюгатом прогестерон-пероксидаза, каждый раз ополаскивая флакон этим раствором. Довести объем раствора дистиллированной водой до 25 мл, тщательно и осторожно перемешать, избегая образования пены. Рабочий раствор конъюгата можно хранить при температуре +(2-8)°С не более 1 ме сяца. 8. ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА Внесение реагентов следует проводить согласно схеме на рис. 1. 10 11 12 А КП1 КП1 ИС ИС ИС ИС ИС ИС ИС ИС ИС ИС В КП2 КП2 ИС ИС ИС ИС ИС ИС ИС ИС ИС ИС С КПЗ КПЗ ИС ИС ИС ИС ИС ИС ИС ИС ИС ИС D КП4 КП4 ИС ИС ИС ИС ИС ИС ИС ИС ИС ИС Е КП5 КП5 ИС ИС ИС ИС ИС ИС ИС ИС ИС ИС F КП6 КП6 ИС ИС ИС ИС ИС ИС ИС ИС ИС ИС G КП7 КП7 ИС ИС ИС ИС ИС ИС ИС ИС ИС ИС Н КС КС ИС ИС ИС ИС ИС ИС ИС ИС ИС ИС Рис. 1. Схема заполнения лунок планшета. 8.1. В два ряда лунок планшета внести в дубликатах по 20 мкл калибровочных проб (КП), начиная с минимальной концентрации. 8.2. Внести в две лунки планшета по 20 мкл контрольной сыворотки (КС), приготов ленной согласно п. 7.2. 8.3. В оставшиеся лунки внести в дубликатах по 20 мкл исследуемых образцов сыво роток крови (ИС). Процедуру внесения образцов следует выполнять как можно быстрее. Вся операция не должна превышать 15 минут. 8.4. Во все лунки планшета внести по 100 мкл рабочего раствора конъюгата, приго товленного согласно п. 7.3. Конъюгат вносить в лунки планшета в той же последовательно сти, что и калибровочные пробы, контрольную сыворотку и исследуемые образцы. 8.5. Тщательно перемешать содержимое лунок, поместив планшет на шейкер, при комнатной температуре (+18-25°С) в течение 2-3 минут. 8.6. Закрыть планшет крышкой и выдержать в термостате при температуре +37°С в течение 1 часа. 8.7. По окончании инкубации удалить содержимое лунок планшета декантированием и затем отмыть планшет. Для этого в каждую лунку планшета внести по 150 мкл рабочего раствора ФСБР (см п. 7.1), оставить планшет на 1-2 минуты, после чего удалить его содер-