Набор реагентов для контроля специфичности определения поверхностного антигена вируса гепатита В (HBsAg) на основе метода иммуноферментной ингибиции (подтверждающий тест) «HBsAg ПОДТВЕРЖДАЮЩИЙ-ИФА» по ТУ 9398-0091-18619450-2012 — инструкция и характеристики

РУ: РЗН 2013/12 от 28.01.2013 · класс риска 3

Производитель: ООО "ХЕМА" (Россия)

Вид изделия: Вирус гепатита В поверхностный антиген ИВД, набор, иммуноферментный анализ (ИФА)

В госконтрактах 44-ФЗ: 33 контракта, медианная цена за единицу 3 450 ₽.

Автоматически отфильтрованный фрагмент инструкции по применению (страницы, где похоже, что есть таблица технических характеристик) — не полный документ. Карточка РУ на портале Росздравнадзора →

Текст инструкции: технические характеристики

УТВЕРЖДЕНА «УТВЕРЖДАЮ»
Приказом Росздравнадзора ектор ООО «ХЕМА»
от_______________ 2012 г. Ю. С. Лебедин
№ » января 2012 г.
М.П.
ИНСТРУКЦИЯ
по применению Набора реагентов для контроля специфичности определения
поверхностного антигена вируса гепатита В (HBsAg) на основе метода
иммуноферментной ингибиции (подтверяздающий тест)
«HBsAg ПОДТВЕРЖДАЮЩИЙ-ИФА»
1. НАЗНАЧЕНИЕ.
1.1. Набор реагентов «HBsAg-ПОДТВЕРЖДАЮЩИЙ-ИФА» предназначен для
подтверждения специфичности результатов выявления HBsAg в иммуноферментном
анализе.
1.2. Область применения - клиническая лабораторная диагностика.
2. ХАРАКТЕРИСТИКА НАБОРА.
2.1. Набор рассчитан на проведение 200 (комплект 1) или 24 (комплект 2)
определений, включая контрольные.
2.2. Принцип работы. Принцип действия: подтверждающий тест - метод
подтверждения специфичности полученного позитивного результата, Свидетельствующий о
наличии в образце исследуемого антигена. Подтверждающий тест применяется при
выявлении HBsAg в иммуноферментном анализе. Тест основан на специфическом
торможении реакции между HBsAg и моноклональными анти-HBs, иммобилизованными на
планшете, свободными гетерологичными (козьими) антителами к HBsAg (нейтрализующий
реагент) дополнительно введенными в инкубационную смесь. В качестве контроля
используются глобулины козы, не содержащие анти-HBs (контрольный реагент).
Добавление нейтрализующего реагента - AHTИ-HBsAg-ПЛЮC в лунку с
контрольным положительным образцом (из тест-систем для определения HBsAg) и
образцами, содержащими HBsAg приводит к специфической нейтрализации HBsAg, что
выражается в снижении оптической плотности (ОН) в 2 и более раз по сравнению с ОН
образца после добавления реагента AHTH-HBsAg-MHHVC.
Регистрация результатов реакции производится измерением оптической плотности
содержимого лунок планшета на спектрофотометре с использованием комбинации: рефенс-
фильтр 450 нм и дифференциальный фильтр 620-680 нм.
2.3. Состав Набора:
2.3.1. Комплект 1:
AHTИ-HBsAg-ПЛЮC (Сухая пористая аморфная масса розового цвета) - козьи
антитела к HBsAg, внесенные в сыворотку крови человека, не содержащую HBsAg и
антитела к HBsAg, ВИЧ 1,2 и вирусу гепатита С, инактивированную, лиофильно
высушенную - 5 флаконов (1,0 мл);
AHTH-HBsAg-MHHYC (Сухая пористая аморфная масса голубого цвета) - козьи
антитела, не содержащие антитела к HBsAg, внесенные в сыворотку крови человека, не
содержащую HBsAg и антитела к HBsAg, ВИЧ 1,2 и вирусу гепатита С, инактивированную,
лиофильно высушенную - 5 флаконов (1,0 мл);
аналитический паспорт;
инструкция по применению Набора
2.3.2. Комплект 2:
AHTH-HBsAg-HJiroC - козьи антитела к HBsAg, внесенные в сыворотку крови
человека, не содержащую HBsAg и антитела к HBsAg, ВИЧ 1,2 и вирусу гепатита С,
инактивированную, или кроличья гипериммунная сыворотка (прозрачная бесцветная или
красная жидкость); готов к использованию - 1 пробирка или флакон (0,6 мл);
AHTH-HBsAg-MHHYC - отрицательная сыворотка или пул сывороток, не
содержащие антитела к HBsAg, внесенные в сыворотку крови человека, не содержащую
HBsAg и антитела к HBsAg, ВИЧ 1,2 и вирусу гепатита С, инактивированную, (Прозрачная
бесцветная жидкость); готов к использованию -1 флакон (0,6 мл);
аналитический паспорт;
инструкция по применению Набора
3. АНАЛИТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ.
3.1. Аналитическая чувствительность к HBsAg - минимальная концентрация HBsAg
(МЕ/мл) которая достоверно подтверждается тестом «HBsAgПOДTBEPЖДAЮЩИЙ-
ИФА» (показатель нейтрализации >50%) - 0,01 МЕ/мл.
3.2. Чувствительность при тестировании сывороток контрольной панели,
содержащих и не содержащих различные субтипы HBsAg «H-Ar(+/-)HBs» -100%.
3.3. Специфичность при тестировании сывороток контрольной панели, содержащих
и не содержащих различные субтипы HBsAg «H-Ar(+/-)HBs» - 100%.
4. ПОКАЗАТЕЛИ ПРАВИЛЬНОСТИ ОПРЕДЕЛЕНИЯ. КОНТРОЛЬ
КАЧЕСТВА.
4.1. Показатели правильности определения для проведения контроля качества
анализа приведены в аналитическом паспорте (паспорте контроля качества) для каждой
серии Набора реагентов «HBsAg-ПОДТВЕРЖДАЮЩИЙ-ИФА» который являетея
неотъемлемой частью комплекта поставки Набора.
4.2. В случае если в комплекте поетавки Набора отсутствует аналитический паспорт,
проведение анализа не допускается. Необходимо обратиться к поставщику
(производителю) Набора.
4.3. Следует оценивать показатели правильности определения при каждом
независимом анализе. Необходимо проводить расчет (оценку) каждого параметра контроля
качества анализа при каждом независимом анализе.
4.4. При неудовлетворительном результате оценки правильности определения хотя
бы по одному параметру результаты анализа исследуемых образцов сыворотки (плазмы)
пациентов считаются недостоверными.
5. МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ.
5.1. Потенциальный риск применения Набора - класс 3 (ГОСТ Р 51609-2000).
5.2. Для использования в диагностики in vitro.
5.3. Все компоненты Набора в используемых концентрациях являются
нетоксичными.
5.4. Положительная контрольная сыворотка К+, и отрицательная контрольная
сыворотка К. инактивированы прогревом при + 50°С в течение 3,5 ч.
5.5. Все компоненты Набора протестированы на отсутствие антител к вирусу
гепатита С, антител к вирусу иммунодефицита человека I (0), II типов {ВИЧ 1(0), II} и
антигена р24 ВИЧ I.
5.6. При работе с Набором следует использовать средства индивидуальной защиты
(халат, шапочку или косынку, одноразовые резиновые или пластиковые перчатки), так как в
состав набора входят компоненты крови человека, которые следует рассматривать как
потенциально инфицированный материал, способный длительное время сохранять и
передавать ВИЧ, вирус гепатита или любой другой возбудитель вирусных инфекций.
5.7. Твердые отходы, промывные растворы необходимо собирать в специальном
контейнере, затем обработать соответствующими дезинфицирующими средствами,
разрешенными для применения на территории РФ.
5.8. Инструменты и оборудование, а также поверхности, на которых проводился
б 9
анализ, обработать соответствующими дезинфицирующими средствами, разрещенными для
применения на территории РФ.
5.9. Запрещается прием пищи, использование косметических средств и курение в
помещениях, предназначенных для работы с Наборами.
5.10. Меры предосторожности - соблюдение «Правил устройства, техники
безопасности, производственной санитарии, противоэпидемического режима и личной
гигиены при работе в лабораториях (отделениях, отделах) санитарно-эпидемиологических
учреждений системы Министерства здравоохранения СССР» (Москва, 1981 г) и ГОСТ Р
53079.2-2008. Национальный стандарт Российской Федерации. Технологии лабораторные
клинические. Обеспечение качества клинических лабораторных исследований.
6. ОБОРУДОВАНИЕ И МАТЕРИАЛЫ, НЕОБХОДИМЫЕ ПРИ РАБОТЕ С
НАБОРОМ:
- фотометр вертикального сканирования, позволяющий измерять оптическую
плотность раствора в лунках при длине волны (фильтр) 450 нм или с использованием
комбинации: рефенс-фильтр 450 нм и дифференциальный фильтр 620-680 нм;
- термостатируемый прибор для встряхивания планшет (термошейкер), скорость 600-
800 об/мин или термостат, поддерживающий температуру + 42 ± 0,1 °С;
устройство для промывки микропланшетов или восьмиканальная
полуавтоматическая пипетка со сменными наконечниками, позволяющая отбирать объемы
жидкостей до 400 мкл;
- пипетка полуавтоматическая одноканальная с переменным или фиксированным
объемом со сменными наконечниками, позволяющая отбирать объемы жидкостей от 5 до
250 мкл, аттестованная по значению средней дозы и сходимости результатов
пипетирования с погрешностью измерения не более 3 %;
- холодильник бытовой, поддерживающий температуру от 2 °С до 8 °С;
- цилиндр мерный второго класса точности вместимостью 1000 или 2000 мл;
- вода дистиллированная;
- перчатки резиновые или пластиковые;
- бумага фильтровальная.
7. АНАЛИЗИРУЕМЫЕ ОБРАЗЦЫ.
7.1. Забор всех исследуемых образцов крови необходимо проводить с соблюдением
стандартных мер предосторожности для венопункции.
7.2. Перед проведением анализа исследуемые образцы сыворотки (плазмы) крови
следует вьщержать при комнатной температуре + 18-25”С не менее 30 мин.
7.3. Образцы сыворотки (плазмы) крови, используемые для анализа, допускается
хранить при температуре + 2-8®С не более 24 ч или при температуре минус 20 °С не более 2
недель.
7.4. Для проведения анализа не следует использовать гемолизированную, мутную
сыворотку (плазму) крови, а также сыворотку (плазму) крови, содержащую азид натрия.
7.5. Избегать повторных циклов замораживания-оттаивания образцов.
7.6. Перед цроведением анализа каждый исследуемый образец тщательно
перемешать.
8. ПОДГОТОВКА РЕАГЕНТОВ ДЛЯ АНАЛИЗА.
Перед проведением анализа реагенты Набора следует выдержать при комнатной
температуре + 18-25'^С не менее 30 мин.
8.1. Приготовление раствора AHTИ-HBsAg-ПЛЮC.
Содержимое флакона с лиофилизированным AHTИ-HBsAg-ПЛЮC растворить в 1
мл дистиллированной воды.
Приготовленный раствор допускается хранить при температуре (+ 2-8®С) не более 1
месяца. При -дробном использовании Набора приготовленный раствор разделить на части и
неиспользованные аликвоты хранить под плотно закрытой пробкой при температуре не
выше (-10°С) в течение всего срока годности Набора. Не допускается замораживание и
оттаивание реагента более 1 раза.
8.2. Приготовление раствора AHTH-HBeAg-MnnyC.
Содержимое флакона с лиофилизированным AHTH-HBsAg-MHHyC растворить в 1
мл дистиллированной воды.
Приготовленный раствор допускается хранить при температуре (+ 2-8°С) не более 1
месяца. При дробном использовании Набора приготовленный раствор разделить на части и
неиспользованные аликвоты хранить под плотно закрытой пробкой при температуре не
выше (-10°С) в течение всего срока годности Набора. Не допускается замораживание и
оттаивание реагента более 1 раза.
8.3. Растворы для ИФА готовятся в соответствии с инструкциями по применению
% ' i тест-систем.
9. ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА.
На примере Набора реагентов «HBsAg-ИФА» (производства ООО «ХЕМА», кат №
009)
9.1. Подготовку планшета и внесение контрольных образцов (К+ и К.) осуществляют
в соответствии с инструкцией по применению Набора реагентов «HBsAg-ИФА». ОП лунок
с отрицательным образцом используют далее для подсчета среднего значения ОП К. и
1
значения ОПГ.
9.2. Внести в соответствующие лунки в дубликатах по 150 мкл положительной
контрольной сыворотки К+ и отрицательной контрольной сыворотки К..
В остальные лунки внести в дубликатах по 150 мкл исследуемых образцов
сыворотки (плазмы) крови, подлежащих подтверждению.
Внесение контрольных сывороток и исследуемых образцов в лунки планшета
необходимо произвести в течение 5-10 мин.
9.3. В первые лунки с контрольными и исследуемыми образцами добавить по 25 мкл
контрольного реагента AHTH-HBsAg-MIfflyC, во вторые лунки по 25 мкл
нейтрализующего реагента - AHTИ-HBsAg-ПЛЮC.
9.4. Внести во все лунки планшета по 50 мкл раствора конъюгата.
Внесение конъюгата в лунки планшета необходимо произвести в течение 1-3 мин.
9.5. Аккуратно перемешать содержимое планшета круговыми движениями по
горизонтальной поверхности, заклеить планшет липкой лентой для заклеивания планшета и
инкубировать его в течение 120 мин при температуре +42 ±0,1 в термостате или в течение
75 мин при температуре +42 ± 0,1 °С при постоянном встряхивании (500 об/мин) в
термошейкере.
9.6. Последующие этапы ИФА выполняются в соответствии с инструкцией по
применению Набора реагентов «HBsAg-ИФА».
При использовании в тесте других иммуноферментных тест-систем для определения
HBsAg, объемы вносимых в лунку и контрольных и исследуемых образцов должны
соответствовать величинам, рекомендуемым в инструкциях по их применению. При этом,
объемы вносимых в лунки контрольного и нейтрализующего реагентов для разных тест-
систем одинаковы (25 мкл). Параметры этапов ИФА (длительность и температурный
режим), так же должны соответствовать рекомендуемым в инструкциях, по применению
используемых в подтверждающем тесте иммуноферментных тест-систем.
10. РЕГИСТРАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ.
10.1. Измерить величину оптической плотности (ОП) растворов в лунках планшета
% ь
на фотометре вертикального сканирования при длине волны (фильтр) 450 нм или с
использованием комбинации: рефенс-фильтр 450 нм и дифференциальный фильтр 620-680
нм.
Измерение ОП растворов в лунках планшета необходимо произвести не позднее 10
мин после внесения стоп-реагента в лунки планшета.
7 2
11. УЧЕТ РЕЗУЛЬТАТОВ РЕАКЦИИ.
11.1. Реакцию учитывают, если значение оптической плотности (ОП) в лунках с
контрольными образцами без добавления контрольного или нейтрализующего реагентов
соответствуют требованиям, изложенным в инструкции по применению тест-системы.
ОПТ (граничное значение оптической плотности) рассчитывают по формуле,
приведенной в используемой тест-системе.
11.2. Присутствие поверхностного антигена гепатита В (HBsAg) в исследуемых
образцах и контрольных положительных образцах определяется показателем
нейтрализации - это соотношение значений оптической плотности образца после
нейтрализации и значений оптической плотности образца до нейтрализации.
Показатель нейтрализации (%) определяется по формуле:
(ОПк — ОПн)
*100^
(ОПк — О ПК — ср)
Где:
ОПк - оптическая плотность образца после внесения AHTn-HBsAg-MHHyC;
ОПн - оптическая плотность образца после внесения AHTИ-HBsAg-ПЛЮC;
ОПК-ср - среднее значение оптической плотности контрольного отрицательного
образца.
Показатель нейтрализации оптической плотности контрольного положительного
образца должен быть >50%.
Значения ОПк и ОПн в лунках с отрицательным контрольным образцом должны
быть ниже значения ОПГ.
ИНТЕРПРЕТАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ:
11.3. Образец сыворотки (плазмы) крови следует считать серопозитивным
(положительным) если значение ОПк > ОПГ и показатель нейтрализации >50%. В этом
случае присутствие в образце HBsAg следует считать доказанным и дальнейшая проверка
не требуется.
Образец сыворотки (плазмы) крови следует считать серонегативным
« I »
(отрицательным) если значении ОПк < ОПГ и показатель нейтрализации <50%. В этом
случае тест необходимо повторить более тщательно во избежание попадания в лунку с
контрольным реагентом нейтрализующего реагента. При повторении предьщущего
результата образец следует считать не содержащим HBsAg.
Образец с ОП>1,0, не подвергшийся нейтрализации, следует развести в 25 раз
рабочим промывочным раствором и повторить тестирование. Если после разведения в 25
раз сохранятся высокие значения ОП и образец не подвергается нейтрализации, то