Реагенты in vitro диагностические для радиоиммунного определения гормонального статуса (см. Приложение на 1 листе) — инструкция и характеристики

РУ: ФСЗ 2010/06659 · класс риска 1

Производитель: "ИММУНОТЕХ с.р.о." (Чехия)

Вид изделия: Свободный тироксин ИВД, набор, радиоиммунный анализ (РИА) · Общий кортизол ИВД, калибратор · Инсулин ИВД, реагент

В госконтрактах 44-ФЗ: 4 контракта.

Автоматически отфильтрованный фрагмент инструкции по применению (страницы, где похоже, что есть таблица технических характеристик) — не полный документ. Карточка РУ на портале Росздравнадзора →

Текст инструкции: технические характеристики

ОКП 93 9817
УТВЕРЖДАЮ
Генеральный директор
ООО «Бекмен Культер»
Ян Поспишил
2012 г.
ИНСТРУКЦИЯ
по применению изделия медицинского назначения
Реагенты in vitro диагностические для радиоиммунного определения
гормонального статуса.
Производства компании ИММУНОТЕХ с.р.о. (IMMUNOTECH s.r.o.), Чешская республика
Соответствует требованиям национальных стандартов:
ГОСТ Р 51088-97, ГОСТ Р 51352-99
Содержание:
1. Принцип метода.
2. Реагенты, входящие в состав набора.
3. Дополнительные материалы и оборудование.
4. Меры предосторожности.
5. Получение, обработка, хранение и разведение образцов.
6. Процедура анализа.
7. Результаты.
8. Контроль качества.
9. Ожидаемые значения.
10. Аналитические характеристики.
11. Ограничение метода.
2012
Инструкция no
IM M U N O T E C H использованию
A BHCKMAN COULTER COMPANY
RUSSIAN
RMA ACTH
р ш |Й^1М2030- V
ш щ НАБОР ДЛЯ ИММУНОРАДИОМЕТРИЧЕСКОГО IN VITRO ОПРЕДЕЛЕНИЯ АКТГ С€
13485 В ПЛАЗМЕ КРОВИ ЧЕЛОВЕКА
certified
1. ПРИНЦИП МЕТОДА 2.8 Промывочный раствор (20Х): 1 флакон, 50 мл
Иммунорадиометрическое определение АКТГ относится к анализам типа Концентрированный раствор должен быть разбавлен перед
«сэндвич». В данном наборе используется предварительная химическая использованием дистиллированной водой.
модификация АСТГ в сукцинил-АКТГ (сАКТГ), Внимание: Температура и сроки годности, указанные на этикетках флаконов
Так как АКТГ обладает выраженной видовой специфичностью и является файне с реагентами, относятся только к их хранению в производственных условиях
нестабильным соединением, получение высокоаффинных антител к вплоть до момента комплектации набора и не распространяются на
кортикотропину человека, пригодных для использования в методах ИРМА, полученную пользователем продукцию.
является сложной задачей. Ацилирование АКТГ, стабилизирующее его молекулу 3. ДОПОЛНИТЕЛЬНЫЕ МАТЕРИАЛЫ И ОБОРУДОВАНИЕ
и повышающее иммуногенность при введении животному, позволило получить
Помимо стандартного лабораторного оборудования, необходимо иметь следующее:
высокоаффинные моноклональные антитела к сАКТГ человека. Специфичность - полипропиленовые пробирки
данных антител предполагает проведение аналогичной химической - полуавтоматические пипетки (300 мкл, 500 нкл)
модификации эндогенного АКТГ в исследуемых образцах с помощью простой и - полуавтоматические пипетки (50 мкл; 100 мкл; 250 мкл, 2 мл).
воспроизводимой процедуры с использованием ацилирующего реагента, - вихревой смеситель типа 'vortex’
входящего в состав набора. Химическая модификация анализируемых образцов - горизонтальный или орбитальный встряхиватепь
повышает стабильность АКТГ и упрощает работу по их хранению и подготовке к - водоструйный насос
- гамма-счетчик для измерения активности
анализу.
В данном наборе используется три вида мышиных моноклональных антител к 4. МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ
О различным эпитопам молекулы сАКТГ. Модифицированные образцы и
4.1 Общие замечания:
калибровочные пробы инкубируют в пробирках, покрытых двумя видами
- Перед использованием довести реагенты до комнатной температуры.
моноклональных антител. Затем удапяют содержимое пробирок и проводят еще
- Не смешивать реагенты из наборов разных серий.
одну инкубацию с антителами, меченными ’”1. После окончания второй - Анализ калибровочных и исследуемых проб должен проводиться одновременно.
инкубации содержимое пробирок удаляют, отмывают несвязанные меченые - Для получения воспроизводимых результатов очень важно соблюдать
антитела и измеряют связанную активность '“*1. Концентрацию сАКТГ, прямо рекомендуемые условия встряхивания пробирок.
пропорциональную связанной активности, определяют методом интерполяции - Анализ рекомендуется проводить в дубликатах.
по калибровочной кривой. - Пробирки только для одноразового применения.
2. РЕАГЕНТЫ, ВХОДЯЩИЕ В СОСТАВ НАБОРА 4.2 Основные правила обращения с радиоактивными веществами.
Получение, использование и транспортировка радиоактивных материалов должны
Все реагенты стабильны при 2-8”С до окончания срока годности, указанного на
происходить в соответствии с принятыми в данной стране нормами радиационной
упаковке набора. Условия хранения реагентов после их растворения или безопасности и санитарными правилами работы с радиоактивными веществами.
разбавления указаны в разделе «Процедура анализа». - В лабораториях запрещается принимать пищу, курить, пользоваться косметикой.
2.1 Пробирки, покрытые моноклональными антителами к сАКТГ: 2 х 50 - Не пипетировать растворы радиоактивных веществ ртом.
шт. (готовы к использованию) - Для ограничения контакта с радиоактивными материалами рекомендуется
использовать разовые перчатки и лабораторную спецодежду.
2.2 Метка, раствор моноклональных антител к сАКТГ, меченных ’”1: - Все манипуляции с радиоактивными веществами следует проводить в специально
1 флакон, 11 мл (готова к использованию) оборудованных для этого помещениях, удаленных от мест постоянного
На дату изготовления флакон содержит 814 кБк1-иммуноглобулинов в пребывания людей.
бу(^ре с белком, красителем и азидом натрия (< 0,1 %, см. п. Меры - Радиоактивные вещества следует хранить с использованием контейнеров в
предхторожности). специально отведенных для этого местах.
- Необходимо регистрировать поступление и расход радиоактивных материалов.
2.3 Калибровочные пробы: 5 флаконов по 2 мл + 1 флакон с 4 мл - Лабораторное оборудование и посуду следует хранить отдельно, чтобы
«нулевой» калибровочной пробы (готовы к использованию) предотвратить их зафязнение радиоактивными изотопами.
Калибровочные пробы содержат сыворотку крови человека, - Любой случай радиоактивного загрязнения или исчезновения радиоактивного
обработанную янтарным ангидридом (см. п. Меры предосторожности), и материала должен рассматриваться в соответствии с законодательством.
поэтому не требуют дальнейшей химической модификации. - Утилизация радиоактивных отходов должна осуществляться в соответствии с
законодательством.
Калибровочные пробы содержат синтетический сАКТГ в диапазоне
4.3 Азид натрия
концентраций от О до 1500 пг/мл в сыворотке крови человека с азидом
Некоторые компоненты набора содержат азид натрия в качестве консерванта.
натрия (<0.1%; см. п. Меры предосторожности). Точные концентрации, Вступая в реакцию со свинцом, медью и латунью, азид натрия образует
калиброванные по международному стандарту NIBSC 74/555, указаны на взрывоопасные азиды металлов. Отработанные реагенты следует разбавлять
этикетках флаконов. большим количеством водопроводной воды, после чего их можно сливать в
2.4 Контрольная сыворотка: 2 флакона (лиофилизованные препараты) канализацию.
Внимание: Принимая во внимание нестабильность АКТГ, в состав 4.4 Янтарный ангидрид
каждого набора входит по 2 одинаковых флакона с контрольной Янтарный ангидрид может вызывать ожоги. При попадании е глаза или на кожу
сывороткой. Остатки растворенной контрольной сыворотки, не тщательно промыть пораженное место водой.
обработанной янтарным ангидридом, нельзя сохранять для дальнейшего 4.5 ДМСО
использования, даже при низкой температуре. При проведении
ДМСО может вызывать раздражение и аллергические реакции при попадании на
последующих определений рекомендуется использовать второй флакон.
кожу, при вдыхании его паров и приеме внутрь. В случае контакта с кожей или
Препарат содержит лиофилизованную сыворотку крови человека глазами, тщательно промыть их холодной водой.
(см. п. Меры предосторожности) с известным содержанием
4.6 Сыворотка крови человека
синтетического АКТГ. Ожидаемый диапазон концентраций указан на
Материал человеческого происхождения, входящий в состав компонентов набора, не
этикетках флаконов.
содержит антител к HIV1, HIV 2, HCV и к поверхностному антигену вируса гепатита В
2.5 Щелочной раствор: 1 флакон, 15 мл (готов к использованию) (HBsAg). Тем не менее, ни один из существующих методов анализа не может
Буферный раствор содержит азид натрия (<0.1%; см. п. Меры гарантировать полного отсутствия инфекционных агентов в исследуемом материале.
предосторожности). Поэтому при работе с компонентами набора следует соблюдать необходимые меры
предосторожности.
2.6 Ацилирующий реагент: 1 флакон (лиофилизованный препарат) С исследуемыми образцами сыворотки крови следует обращаться как с
Флакон содержит 600 мг янтарного ангидрида (см. п. Меры потенциально инфекционным материалом, могущим содержать вирусы СПИД и
предосторожности), лиофилизованного с красителем (феноловым гепатита. Весь использованный материал должен быть уничтожен по действующим
красным). государственным правилам и инструкциям.
2.7 ДМСО (диметилсупьфоксид): 1 флакон, 3 мл (готов к использованию) 5. ПОЛУЧЕНИЕ, ОБРАБОТКА, ХРАНЕНИЕ И РАЗВЕДЕНИЕ ОБРАЗЦОВ
Перед использованием необходимо, чтобы препарат ДМСО полностью - Собрать кровь в силиконизированные стеклянные или пластиковые пробирки с
оттаял при комнатной температуре (см. п. Меры предосторожности). ЭДТА. Не использовать гепарин в качестве антикоагулянта. Не использовать
стеклянные пробирки, не покрытые силиконом, т.к. они адсорбируют АКТГ.
PI-2030-2008-03-15 17/24
- Как можно быстрее отделить плазму центрифугированием при 2-8°С. 7.1 Калибровочная кривая
- В виду того, что АКТГ является крайне нестабильной молекулой, образцы плазмы
Построить калибровочную кривую, откладывая соотношение ВЛ" (%) или
следует разделить на аликвоты и заморозить при температуре -18*С, если анализ
не будет проводиться немедленно. Избегать повторного замораживания и В/Вмакс. (%) по вертикальной оси, а концентрацию АКТГ в калибровочных
оттаивания проб. пробах (пг/мл) по горизонтальной оси калибровочного фафика
Так как ацилирование повышает стабильность АКТГ, образцы плазмы можно (Збщий счет: 289601 имп./мин.
обрабатывать сразу же после центрифугирования (см. п. 6.2.1.). Ацилированные
Имп./мин.
образцы можно хранить в течение недели при 2-8°С. Для бопее длительного Кал. пробы АКТГ (пг/мл) (п=3) ВЛГ(%) В/Вмакс, (%)
хранения их нужно заморозить при температуре ниже -18°С. Бпагодаря достаточно 0 0 38? 0,13 о,з6
высокой стабильности сАКТГ к замораживанию и опаиванию, ацилированные 1 10 1956 0,68 1,81
образцы можно не разделять на несколько аликвот. 2 30 4710 1,63 4,35
■ Если концентрация АКТГ в образце превышает максимальный стандарт, его 3 100 13269 4,58 12,2
следует ацилировать, а затем развести «нулевой» калибровочной пробой и 4 500 54225 18,7 50,1
провести анализ повторно. 5 1500 108325 37,4 100
6. ПРОЦЕДУРА АНАЛИЗА (Пример типичной калибровочной кривой. Не использовать для обсчета результатов.)
72 Образцы
6.1 Подготовка реагентов Для каждого анализируемого образца найти на вертикальной оси
Довести все реагенты до комнатной температуры. калибровочного фафика значение ВЯ(%) или В/Вмакс.{%), а на
6.1.1 Растворение контрольной сыворотки горизонтальной оси соответствующую концентрацию АКТГ в пг/мл.
Растворить содержимое одного из флаконов с контрольной сывороткой в Примечание : На этикетках флаконов с калибровочными пробами
указанном на этикетке объеме дистиллированной воды. Через 10 - 20 указаны концентрации с учетом разведения образца в процессе его
минут (макс) аккуратно перемешать, избегая образования пены. Остатки ацилирования, поэтому никакой дополнительной коррекции результатов
растворенной контрольной сыворотки, не обработанной янтарным не требуется (прямое определение по калибровочной кривой).
ангидридом, нельзя сохранять для дальнейшего использования, даже при
низкой температуре. При проведении последующих определений 8. КОНТРОЛЬ КАЧЕСТВА
рекомендуется использовать второй флакон. В соответствии с требованиями Good laboratory practices для контроля качества
проводимых исследований спедует регупярно использовать контрольные образцы, которые
6.1.2 Растворение ацилирующего реагента должны проходить те же стадии анализа, что и анализируемые пробы. Резупьтаты контроля
Растворить содержимое флакона в объеме ДМСО, указанном на этикетке качества рекомендуется обрабатывать с помощью специальных статистических методов.
и аккуратно перемешать перед использованием. Подготовленный к работе В случае серьезного поврехздения упаковки, или в случае несоответствия полученных
ацилирующий реагент можно хранить при 2-8°С до окончания срока результатов аналитическим характеристикам (см.п.Ю) обратитесь, пожалуйста, к нашим
годности набора. Незначительное потемнение реагента, иногда специалистам: Тел.:+420 272 017 391;
наблюдающееся в процессе хранения, никак не влияет на его Факс: +420 272 017 385; e-mail: ipigp^;ii;m|a!tekm?n;wHgr.wm
ацилирующую способность. Тел.:+7 495 937 1664; Факс: +7 495 254 64 07; e-mail: beckman.ruiatieckmancouller com
6.1.3 Приготовление промывочного раствора 9. ОЖИДАЕМЫЕ ЗНАЧЕНИЯ
Тщательно смешать содержимое флакона с концентратом промывающего
В каждой лаборатории рекомендуется установить собственные уровни АКТГ,
раствора и 950 мл дистиллированной воды. Подготовленный к работе
соответствующие нормальным. Приведенные ниже значения являются
промывающий раствор можно хранить при 2-8*С до окончания срока
ориентировочными.
годности набора.
Предельное Предельное
6.2 Анализ Количество Среднее Медиана значение для 95% значение для 99%
обследованных значение
6.2.1 Ацилирование контрольных сывороток и анализируемых образцов популяции популяции
45 18,5 пг/мл 15 пг/мл <40 пг/мл <50 пг/мл
Внимание: не ацилировать калибровочные пробы
10. АНАЛИТИЧЕСКИЕ ХАРАКГЕРИСТИКИ
В полипропиленовые пробирки внести реагенты в следующем порядке> (более подробная информация приведена в разделе “APPENDIX")
- 500 мкл образца или контрольной сыворотки 10.1 Аналитическая чувствительность: 1,2 пг/мл
- 250 мкл щелочного раствора
10.2 Специфичность
- 50 мкп ацилирующего реагента
Антитела, используемые в данном наборе, имеют высокую специфичность к АКТГ,
Перекрестная реакция с близкородственными соединениями (АКТГ 1-24; 1-10; 18-39;
Немедленно перемешать на вихревом смесителе
11-24; аМСГ и ПОМК) как в отсутствии АКТГ (кросс-реактивность), так и при его
Инкубировать 5 минут при 18-25°С наличии (интерференция), крайне мала.
Примечание 1: В табпице указано количество реагентов, достаточное для проведения 10.3 Воспроизводимость
анализа в дубликатах. Если анализ будет проводиться в монопликатах, то используемые
10.3.1 Внутри анализа
объемы образца, щелочного раствора и ацилирующего реагента могут быть уменьшены
Анализ образцов проводили в 10 репликатзх в пределах одной серии определений.
наполовину.
Коэффициент вариации измеренных уровней АКТГ не превышал 9,1%.
Примечание 2: Если процесс химической модификации АКТГ прошел успешно, то цвет
10.3.2 Между анализами
индикатора, входящего в состав ацилирующего реагента, должен стать желтым. В
Анализ образцов в дубликатах проводили в 10 различных сериях опредепений.
противном случае он будет иметь фиолетовый оттенок.
Коэффициент вариации измеренных уровней АКТГ не превышал 9,6 %.
6.2.2 Схема анализа
10.4 Точность
Иммунологическая стадия 1 Иммунологическая стадия Измерение
2 результатов 10.4.1 Тест на разведение
пр В о б п и о р к к р и ы т п в ы о н е с е л с а т е н и д т : о и в т а е т л е а л м ь и н о В кажд - у 1 ю 0 0 пр м о к б л и р м к е у т к в и н * ести по П д р п в о р а м о ы р м а т ы ь з в а п о р п ч о о н б о и 2 г р о м к л и О р 9 а 9 б з % р в а е д з д о ц е ы н 1 1 и 3 я с % н . а в ы 'н с у о л к е о в й о й к ' о к н а ц л е и н б т р р о а в ц о и ч е н й о й А п К р Т о Г б ое а . ц В ил ел и и р ч о и в н ал а и ' от и к ры д т е и л я а ' л с и о от с а е в р и и п й а н ы о е т
раствора 10.4.2 Тест на “открытие" стандартной добавки
- 300 мкл калибровочных проб, Инкубировать 2 часа Известные копичества АКТГ добавляли в образцы плазмы с низкой его
или ацилированных образцов и при 18-25*С концентрацией, ацилировали полученные пробы и проводили анализ. Величина
контрольных сывороток и постоянном встряхивании Измерить 'открытия' составила от 100%до 110%.
связанную (В) и
Инкубировать 1 час (350 осц./мин.) общую (Т) активность 10.5 Диапазон определений (от аналитической чувствительности до значения
при 18-25*0 '*1 в течение наивысшей калибровочной пробы): 1,2 -1500 pg/mL.
и постоянном встряхивании Тщательно удалить содержимое 1 минуты
(350 осц./мин.) пробирок 11. ОГРАНИЧЕНИЯ МЕТОДА
(кроме проб "Т') Нарушение методики проведения анализа может привести к искажению результатов
Тщательно удалить исследования. Результаты определения должны быть интерпретированы в сеете общей
содержимое всех пробирок клинической картины пациента, включая анамнез, данные других тестов и подходящую иную
информацию.
* В две допопнительные пробирки внести поЮОикп четки для измерения общей Для получения плазмы нельзя использовать гепарин, так как он связывает АКТГ. В качестве
активности Щ антикоагулянта рекомендуется использовать ЭДТА.
7. РЕЗУЛЬТАТЫ При выпопнении анализов с использованием антител возможна интерференция
Результаты рассчитывают методом интерполяции по калибровочной фивой, гетерофипьными антитепами в пробе пациента. У пациентов, имеющих постоянный контакт
с животными или проходивших иммунотерапию ипи диатостические процедуры с
полученной одновременно с анализом неизвестных образцов.
использованием иммуноглобулинов или их фрагментов, могут вырабатываться антитела
(т.е. НАМА), которые влияют на резупьтаты иммунного анализа.
Влияние этих антител может привести к попучению ошибочных резупьтатов. Тщательно
проверяйте результаты анализов пациентов с подозрением на наличие этих антител.
Ш| IMMUNOTECH SAS -130 av. de Lattre de Tassigny - B.P.177 -13276 Marseille Cedex 9 France - Тё1. (33) 4 91 17 27 00 - Fax: (33) 4 91 41 43 58
PI-2030-2008-03-15 18/24
Инструкция no
IM M U N O T EC H
A BECKMAN COULTER COMPANY использованию
RUSSIAN
REF
RIA ALDOSTERONE
moT] С€
НАБОР для РАДИОИММУНОЛОГИЧЕСКОГО IN VITRO ОПРЕДЕЛЕНИЯ
1134851
АЛЬДОСТЕРОНА В СЫВОРОТКЕ, ПЛАЗМЕ И МОЧЕ ЧЕЛОВЕКА
certified
1. ПРИНЦИП МЕТОДА 4.3 Азид натрия
Некоторые компоненты набора содержат азид натрия в качестве консерванта.
Радиоиимунологическоб определение альдостерона является конкурентным видом Вступая в реакцию со свинцом, медыо и латунью, азид натрия образует
анализа. Исследуемые образцы, контрольные и калибровочные пробы инкубируют в
пробирках, покрытых моноклональными антителами, совместно с раствором ’^^l- взрывоопасные азиды металлов. Отработанные реагенты следует разбавлять
альдостерона в качестве метки. После окончания инкубации удаляют жидкое содержимое большим количеством водопроводной воды, после чего их можно сливать в
пробирок и измеряют связанную активность ’^1. Концентрацию альдостерона в канализацию.
анализируемых образцах определяют методом интерполяции по калибровочной кривой.
4.4 Сыворотка крови
2. РЕАГЕНТЫ, ВХОДЯЩИЕ В СОСТАВ НАБОРА Материал человеческого происхохщения, используемый в наборе, не содержит
Все реагенты стабильны при 2-8*С до окончания срока годности набора. Условия хранения антител к вирусам HIV 1, HIV 2, HCV, а также к поверхностному антигену вируса
компонентов набора после их растворения или разбавления указаны в разделе «Процедура гепатита В (HbsAg). Так как ни один из существующих методов не может
анализа». гарантировать полного отсутствия инфекционных агентов в анализируемых
образцах, компоненты набора следует рассматривать как потенциально
2.1 Пробирки, покрытые моноклональными антителами к альдостерону: инфекционный материал и использовать при работе с ними все необходимые меры
2 X 50 шт (готовы к исгюльзованию) предосторожности.
С исследуемыми образцами сыворотки крови также следует обращаться как с
2.2 Метка, раствор '^’1-альдостерона: один флакон, 55 мл (готова к
потенциально инфекционным материалом, могущим содержать вирусы СПИД и
использованию)
гепатита. Весь использованный материал должен быть уничтожен по действующим
На дату изготовления флакон содержит 145 кБк 1-альдостерона в буфере с государственным правилам и инструкциям.
белком и красителем.
2.3 Калибровочные пробы: 6 флаконов (лиофилизованные препараты) 5. ПОЛУЧЕНИЕ, ОБРАБОТКА, ХРАНЕНИЕ И РАЗВЕДЕНИЕ ОБРАЗЦОВ
Калибровочные пробы содержат альдостерон в диапазоне концентраций от О до
5.1 Получение образцов плазмы и сыворотки крови
2000 пг/мл (О - 5,55 нмоль/л) в сыворотке крови человека с азидом натрия (< 0.1 %,
- Собрать кровь в чистые сухие пробирки, или пробирки, содержащие гепарин или
см. п. Меры предосторожности). Точные концентрации указаны на этикетках
ЭДТА.
флаконов. Значения калибровочных проб были получены с помощью внутреннего
- Отделить сыворотку/плазму крови центрифугированием.
стандарта.
- Образцы сыворотки и плазмы можно хранить при 2-8'С в течение 24 часов. Для
2.4 Контрольная сыворотка: один флакон (пиофилизованный препарат). более длительного хранения их необходимо разделить на аликвоты и заморозить
Флакон содержит лиофилизованную сыворотку крови человека с известным при температуре < -18'С. Избегать повторного замораживания-опаивания проб.
количеством альдостерона и азидом натрия (< 0.1 %, см. п. Меры - Если концентрация альдостерона в исследуемом образце выходит за пределы
предосторожности). Ожидаемый диапазон концентраций указан на этикетке флакона. калибровочной кривой, его необходимо разбавить сывороткой крови с низким
Внимание. Теипература и сроки годности, указанные на этикетках фпаконов с уровнем альдостерона или специальным разбавителем (см.п. 12) и провести
реагентат. относятся только к их хранению в производственных условиях вплоть до анализ повторно.
иоиента коиппектации набора и не распространяются на полученную заказчиком
5.2 Получение и обработка образцов мочи
продукцию.
5.2.1 Сбор образцов мочи
3. ДОПОЛНИТЕЛЬНЫЕ МАТЕРИАЛЫ И ОБОРУДОВАНИЕ - Собрать суточную мочу.
Помимо стандартного лабораторного оборудования необходимо иметь следующее: - Измерить ее объем.
• микропипетки (10 мкл; 50 мкл) - Для хранения образцов их следует разделить на аликвоты и заморозить при
- полуавтоматическая пипетка (500 мкл) температуре < -18’С.
' вихревой смеситель типа Vortex
5.2.2 Гидролиз образцов мочи
- горизонтальный или орбитальный встряхиватель
Определение альдостерона в образцах мочи проводится после их кислотного
- водоструйный насос
гидролиза:
- гамма-счетчик для измерения активности
а. В стеклянные пробирки внести по 100 мкл проб мочи и 1 мл 0,1Н HCI.
4. МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ б. Закрыть пробирки пробками и инкубировать в темном месте в течение
18-22 часов при температуре 30±2'С.
4.1 Общие замечания: 5.2.3 Разведение моча
- Перед использованием довести реагенты до комнатной температуры. Образцы мочи с очень высокой концентрацией альдостерона могут быть разбавлены
- Не смешивать реагенты из наборов разных серий. наполовину дистиллированной водой перед проведением кислотного гидролиза.
- Анализ калибровочных проб должен проводиться одновременно с исследуемыми
образцами. 6. ПРОЦЕДУРА АНАЛИЗА
- Для получения воспроизводимых результатов очень важно соблюдать
рекомендуемые условия встряхивания пробирок. 6.1 Растворение калибровочных и контрольных проб.
- Анализ рекомендуется проводить в дубликатах. Довести флаконы до комнатной температуры и растворить содержимое в указанном
- Пробирки только для одноразового применения. на этикетке объеме дистиллированной воды. Через 30 минут аккуратно перемешать
содержимое флаконов на вихревом смесителе, избегая образования пены.
4.2 Основные правила обращения с радиоактивными веществами.
Подготовленные к работе растворы можно хранить в течение 2 недель при 2-8*С,
Получение, использование и транспортировка радиоактивных материалов должны
или разделенными на аликвоты при < -18‘С до окончания срока годности набора.
происходить в соответствии с принятыми в данной стране нормами радиационной
6.2 Схема определения альдостерона в пробах сыворотки или плазмы
- в лабораториях запрещается принимать пищу, курить, пользоваться косметикой. Калибровочные Образцы Пробирки
- Не пипетировать растворы радиоактивных веществ ртом. Стадия и контрольные сыворотки для общего
- Для ограничения контакта с радиоактивными материалами рекомендуется пробы или плазмы счета (Т)
использовать разовые перчатки и лабораторную спецодехэду.
1: Внесение реагентов
- Все манипуляции с радиоактивными веществами следует проводить в специально
В покрытые антителами пробирки
оборудованных для этого помещениях, удаленных от мест постоянного
последовательно внести:
пребывания людей.
- Калибровочные и контрольные
- Радиоактивные вещества следует хранить с использованием контейнеров в 50 мкл
пробы
специально отведенных для этого местах. 50 мкл
• образцы сыворотки
- Необходимо регистрировать поступление и расход радиоактивных материалов.
- раствор метки
- Лабораторное оборудование и посуду следует хранить отдельно, чтобы 500 мкл 500 мкл 500 мкл
предотвратить их загрязнение радиоактивными изотопами. Перемешать
- Любой случай радиоактивного загрязнения или исчезновения радиоактивного 2: Инкубация
материала должен рассматриваться в соответствии с законодательством. 3 часа при 18-25‘С и постоянном встряхивании (350 осц./мин.)
- Утилизация радиоактивных отходов должна осуществляться в соответствии с 3: Измерение результатов
законодательством. Тщательно удалить содержимое пробирок (кроме проб Т).
Измерить связанную (В) и общую (Т) активность (имп./мии ).
PI-1664-2011-11-04_RU 1/4
6.3 Схема процедуры определения альдостерона в пробах мочи 9.2 Экскреция с мочой:
Калибровочны Альдостерон (мкг/24ч)
Пробирки
е Образцы Пограничные
Стадия для общего Пограничные
и контрольные мочи л Средняя значения для 95%
счета (Т) значения
пробы популяции
1: Внесение реагентов 64 8.1 1.4-20 2.1-18
В покрытые антителами пробирки
последовательно внести: 10. АНАЛИТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
• Калибровочные и контрольные пробы 50мкл (более подробная информация приведена в разделе “APPENDIX")
' Solution и бОмкл
■ образцы мочи Юмкл 10.1 Чувствительность : 6 пг/мл
■ раствор метки___________ 500 нт 500 мкл 500 мкл 10.2 Специфичность
Перемешать Антитела, используемые в данном наборе, имеют высокую специфичность к
2: Инкубация альдостерону. Перекрестная реакция с другими природными стероидами
Зчаса при 18-25*С и постоянном встряхивании (350 осц./мин.) (кортизоном, кортикостероном, дегидроэпиандростероном и др.) очень мала.
3: Измерение результатов
Тщателы<о удалить содержимое пробирок (кроме проб Т). 10.3 Воспроизводимость
___________Измерить связанную (В) и общую (Т) активность (имп./мин.). 10.3.1 Внутри анализа
Образцы анализировали в 20 реппикатах в одной серии определений. Коэффициент
7. РЕЗУЛЬТАТЫ вариации измеренного уровня альдостерона в сыворотке крови не превышал 9.5 %.
Результаты рассчитывают методом интерполяции по калибровочной кривой, полученной
10.3.2 Между анализами
одновременно с анализом неизвестных образцов.
Анализ образцов в дубликатах проводили в 5 различных сериях определений.
7.1 Калибровочная кривая Коэффициент вариации измеренного уровня альдостерона в сыворотке крови не
Результаты контроля качества набора, указанные на отдельном листке-вкладыше, превышал 10.4%.
получены при построении калибровочной кривой в полулогарифмических
10.4 Точность
координатах («сплайн» функция) с соотношением ВЯ (%) ипи В/ВО (%) по
вертикальной оси и концентрацией альдостерона (пг/мл) по горизонтальной оси 10.4.1 Тест на разведение
калибровочного графика. Другие методы обсчета могут давать несколько «Открытие» альдостерона при серийном разведении образцов с высокой
отличающиеся результаты. концентрацией составило от 83 до 98%.
Общий счет : 36373 имп./мин 10.4.2Тест на «открытие» стандартной добавки
Стандарты Аль ( д пг о / с м т л е ) рон HMnJuHH. (п°3) В/Т(%) В/Во (%) И го з р в м е о ст н н а ы . И е зм к е о р л е и н ч н е а ст я в в а е л а и л ч ь и д н о а с т « е о р т о кр н ы а ти д я о » б а с в о л ст я а л в и л я к л а о о б т р а 8 з 2 ц д а о м 10 с 7 % н . изким уровнем
о 16471 45.3 100
12 14091 38.7 85.5 10.5 Диапазон определений (от аналитической чувствительности до значения
40 12202 33.5 74.1 наивысшей калибровочной пробы): 6 - 2000 pg/mL.
160 8714 24.0 52.9 11. ОГРАНИЧЕНИЯ МЕТОДА
600 5551 153 33.7
2000 3095 8.51 18.8 Нарушение методики проведения анализа может привести к искажению результатов
исследования. Результаты определения должны быть интерпретированы в сеете общей
(Пример типичной калибровочной кривой. Не испопьзовть для обсчета результатов.)
клинической картины пациента, включая анамнез, данные других тестов и подходящую иную
7.2 Образцы информацию.
Дпя каждого образца найти на вертикальной оси калибровочного графика Не испопьзовать для анализа образцы сыворотки крови с повышенным содержанием
соотношение ВЯ (%) или В/ВО (%), а на горизонтальной оси соответствующую желчных пигментов.
концентрацию альдостерона.
При выполнении анализов с использованием антител возможна интерференция
Для перевода концентраций из пг/мл в нмоль/л нужно умножить полученный
гетерофильными антителами в пробе пациента. У пациентов, имеющих постоянный контакт
результат на 2.774.
с животными или проходивших иммунотерапию или диагностические процедуры с
7.3 Образцы мочи использованием иммуноглобулинов или их фрагментов, могут вырабатываться антитела
Расчет концентраций альдостерона в образцах мочи проводится согласно п. 7.2. (т.е. НАМА), которые влияют на результаты иммунного анализа.
Суточную экскрецию альдостерона с мочой (мкг/24часа) можно рассчитать по Влияние этих антител может привести к получению ошибочных результатов. Тщателы<о
формуле: проверяйте результаты анализов пациентов с подозрением на наличие этих антител.
Y = Xx0.056xV 12. РЕАГЕНТЫ, ПОСТАВЛЯЕМЫЕ ПО ОТДЕЛЬНОМУ ЗАПРОСУ
где
12.1 Solution и : 1 флакон, 3 мл (лиофктизованный препарат).
- Y = суточная экскреция альдостерона (мкг/24 часа)
- X = концентрация альдостерона в моче (пг/мл) Поставляется по дополнительному запросу: кат.№ IM1736.
- Y = объем суточной мочи в литрах - Применение см. §6.3.
- Данный реагент можно использовать при работе с набором RIA Aldosterone (кат.№
8. КОНТРОЛЬ КАЧЕСТВА 1М1664)пюбой серии.
- Флакон содержит сыворотку крови человека с азидом натрия (<0.1%; см.п. Меры
В соответствии с требованиями Good laboratory practices для контроля качества проводимых
предосторожности).
исследований следует регулярно использовать контрольные образцы, которые должны
- Приготовление и хранение:
проходить те же стадии анализа, что и анализируемые пробы. Результаты контроля
После доведения до комнатной температуры растворить лиофилизованный
качества рекомендуется обрабатывать с помощью специальных статистических методов.
препарат в объеме дистиллированной воды приведенном на этикетке флакона.
В спучае серьезного повреждения упаковки, ипи в случае несоответствия полученных Через 30 минут аккуратно перемешать содержимое, избегая образования пены.
результатов аналитическим характеристикам (см.п.Ю) обратитесь, пожалуйста, к нашим Неиспопьзованный реагент стабилен при температуре 2-8'С до окончания срока
специалистам: Тел.: +420 272 017 391. Факс: +420 272 017 385; годности, указанного на этикетке флакона. Раствор можно хранить в течение одной
e-mail: imunochemfilliecKmancouller.com недели при 2-8'С или его разделить на аликвоты и хранить при температуре <-
Тел.:->7 495 937 1664; Факс: +7 495 254 64 07; e-mail: beckman.rulSbeckmancoulter com 18’С до окончания срока годности, указанного на этикетке фпакона.
9. ОЖИДАЕМЫЕ ЗНАЧЕНИЯ 12.2 Буфер для разведения сыворотки: 1 флакон, 2.5 мл
В каждой лаборатории рекомендуется установить собственные уровни альдостерона, (лиофилизованный препарат).
соответствующие нормальным. Приведенные ниже значения являются ориентировочными. Поставляется по допопнительному запросу: кат.№ IM2445.
- Применение см. §5.1.
9.1 Сыворотка и плазма крови: - Данный реагент можно использовать при работе с набором RIA Aldosterone (кат.№
Взрослые Альдостерон (пг/мл) IM1664) любой серии.
Пограничные - Флакон содержит сыворотку крови человека с азидом натрия (<0.1%; см.п. Меры
п Средняя Пограничные значения для 95% предосторожности).
значения популяции - В начале необходимо определить эндогенное содержание альдостерона в данном
Лежа 169 45 8-172 10-105 растворе буфера. Далее провести отсчет данной концентрации от полученного
Стоя 106 114 30 - 355 34-273 результата разведенного образца, прежде чем результат умножить на фактор
разведения. Это важно особенно в случае образцов, у которых измеренная
концентрация разведенного образца близка двойному количеству концентрации
Дети Альдостерон (пг/мл)
альдостерона в буфере.
п Пограничные значения
- Приготовление и хранение
Новорожденные 12 300-1900 После доведения до комнатной температуры растворить лиофилизованный
От 1 месяца до 2 лет 47 20-1100 препарат в объеме дистиллированной воды приведенном на этикетке флакона.
От 3 до 16 лет 33 12-340 Через 30 минут аккуратно перемешать содержимое, избегая образования пены.
Неиспользованный реагент стабилен при температуре 2-8*С до окончания срока
годности, указанного на этикетке флакона. Раствор можно хранить в течение одной
недели при 2-8'С или его разделить на аликвоты и хранить при температуре
<-18*С до окончания срока годности, указанного на этикетке флакона.
Hi IMMUNOTECH SAS -130 av. de Lattre de Tassigny - B.P.177 -13276 Marseille Cedex 9 France - Тё1. (33) 4 91 17 27 00 - Fax: (33) 4 91 41 43 58
PI-1664-2011-11-04_RU 2/4
EMAZ SLOVENSKY
Аитб то npoi'bv Eivai апара1тг|то va xpnoipoTioiriSti airoKAEicniKd kqi povo (je тг) Tento vyrobok moze byt' pouzity vyhradne so siipravou Immunotech RIA
ouoKtuii Immunotech RIA Aldosterone (api9|j6; кат. IM1664). Aldosterone (kat.e.lM1664).
npiv ТП xpil^n 6юРй(Л£ TTpoatKTiKd T15 обпу'Е? ттои caivoSsuouv тп ouokeui^ RIA Pred pouiitim si pozome preiitajte nSvod priloieny к suprave RIA Aldosterone. PlatnS
Aldosterone. T i? обпу'Е? рттор£1т£ vo ti? прорпб£ит£1т£ апб tov Siavopta oa? vydanie tohoto nivodu mdfete ziskat' od svojho miestneho distributora, alebo nSs
0a TK PpeIte othv nAEKxpoviKii 6iEU0uvcrri immuno-techsuD@t)eckman.com mdfete kontaktovat' na nasledujiicich e-mailovych adres^ch:
immunochem(5)beckman,com beckman.skiSbeckman.com alebo imunochemi5)beckman.coni
ПРОФУААЕЕН UPOZORNENIA A BEZPECN0STN£ OPATRENIA
Avepuimvo; op6^ Biologicky material I'udskeho povodu
To avepuTTivric npoMEuoni; uAiKd ттои TTEpitxovToi ото avTiSpaoTi^pia tou kit Material rudsk6ho pdvodu obsiahnuty v reagenciich tejto siipravy mal negativny test
PpMnKOv apviiTiKd, oc 6ti афорй ото avriawpaTO qvti-HIV 1 koi HIV 2, ша na pritomnost' protilitok proti vimsom HIV 1 a 2, virusu hepatitidy С a proti
avTiacuMOTa HCV kqi to ЕтткрауЕюкб avTiydvo tti^ Нттат1т1ба? В. ПорбАо аитй, о povrchovdmu antigfenu hepatitidy В (HBsAg). Ziadna z dostupnych metdd nedSva
XEipicrpd? T0U5 TTptnEi va yIvetqi от va i^tov iKcvd va p£Ta6(i)OOuv ti^ ooSeveie^. stopercentnii istotu neinfekinosti, preto je пи1пё pracovat's tynnito reagenciami ako s
Aev undpxEi Kdnoio YvuaTii pt0o6o? Myxou ттои va 6iaa(paAi^Ei (je andAuTti potenciSlne infekinymi.
pEfaidTrira 6ti 6ev undpxEi TTapdyovToq (jbAuvoiii;, уГаитй то Абуо eIvoi ашра1тг1то So vSetkymi krvnyrri vzorkami sa musi manipulovat' ako spotenciSlne infekinymi
va AapPdvovTai npo9uAd^Ei? KOTd тп бйркЕЮ toj X£ipKJpou. (hepatitis alebo AIDS). VSetok vzniknuty odpad treba likvidovat' podfa platnych
OAa та б£|урата орои koi ттАЬстрато? TTptnsi va та xtipiCtOTE iKavd va predpisov.
(JETa5aKJ0uv ao0tvEi£? (tt.x. Г1пат1т|6а AIDS). AripioupyniJtvo аттбррфра va Azid sodny
£KKa0apio0Ei cju(j(pu)va ^J£ loxuu Kovoviapd. Niektor6 substande sii konzervovany azidom sodnym. Azid sodny md2e reagovat's
A^6(0 TOU NoTpiou olovom, medou alebo mosadzou za vzniku prisluSnych vybuSnych azidov. Preto
KdTTOio avTiSpaoTiipia ttepiexouv o(I5io tou NoTplou to? ouviripriTiKd, To o^lSio tou likvidovan^ reagende splachujte verkym mnozstvom vody.
NoTplou MTTopEl va avTiSpdoEi ps to хо^кй to рйАиРбо ттро? то ахпратюрб
EKpr|KTiK(i)v o^iSiiov T(i)v pETdMiov. H ап6рр|фп tuv avTiSpaoTtipluiv ttp^ttei va ПО-РУССКИ
yivETQi ptaa аттб то uSpauAiKd аиатрра, хРП<^фопо1(1)эта? psydXE? поа6тг1ТЕ?
Данный реагент можно использовать только при работе с набором Immunotech
VEpOU.
RIA Aldosterone (кат.№ 1664).
CESKY
Прочитайте внимательно инструкцию, поставляемую вместе набором RIA
lento vyrot)ek smi byt pou^it vyhradnS se soupravou lininunotech RIA Aldosterone Aldosterone перед его использованием. Действующая редакция инструкции
(kati. IM1664). может быть поучена у eaujero местного дистрибутора или с использованием
следующего адреса электронной почты: imunochem(5)beckman.com
Pfed pouJillm si pefilivg pfeCtSte nSvod, poskytovany se soupravou RIA Aldosterone. beckman.ru (Sbeckman.com
Р1а1пё vydSni tohoto nSvodu mOfete zlskat od sv6ho mlstniho distributora, nebo nis
muiete kontaktovat na nSsledujlcI e-mailov6 adrese: imunochemiSbeckman.com МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ
Сыворотка крови человека
BEZPEtNOSTNi OPATftENi Материал человеческого происхождения, входящий в состав компонентов
Biologicky materlSI lldskiho pdvodu набора, не содержит антител к HIV 1, HIV 2, HCV и к поверхностному антигену
Material lidskfeho pOvodu obsaieny v reagenciich 1ё1о soupravy m§l negativni test na вируса гепатита В (HBsAg). Тем не менее, ни один из существующих методов
pfitomnost protilStek proti viru HIV 1 a 2, viru hepatitidy С a proli povrchov^mu анализа не может гарантировать полного отсутствия инфекционных агентов в
antigenu hepatitidy В (HBsAg). iMni z dostupnycfi metod nemuJie deit stoprocentnl исследуемом материале. Поэтому при работе с компонентами набора следует
jistotu neinfekinosti. Je tedy nutn6 pracovat s tSmito reagenciemi jako s potenciSIng соблюдать необходимые меры предосторожности.
infekSnlmi. С исследуемыми образцами сыворотки крови следует обращаться как с
Se vSemi krevnimi vzorky nnusi byt manipulov^no, jako s potenciSlnS infekSnimi потенциально инфекционным материалом, могущим содержать вирусы СПИД и
(hepatitis, nebo AIDS). VeSkery vznikly odpad je ti'eba likvidovat podle platnych гепатита. Утилизация отходов должна осуществляться в соответствии с
pi'edpisCi. законодательством.
Azid sodny Азид натрия
МёМегё substance jsou konzervovany azidem sodnym. Azid sodny mu2e reagovat s Некоторые компоненты набора содержат азид натрия в качестве консерванта.
olovem, mSdi nebo mosazi za vzniku pfisluSnych vybuSnych azidii. Proto likvidovan6 Вступая в реакцию со свинцом, медью и латунью, азид натрия образует
reagende splachujte velkym mnofetvim vody. взрывоопасные азиды металлов. Отработанные реагенты следует разбавлять
большим количеством водопроводной воды, после чего их можно сливать в
канализацию.
■ IMMUNOTECH SAS -130 av. de Lattre de Tassigny - B.P.177 -13276 Marseille Cedex 9 France - Tel. (33) 4 91 17 27 00 - Fax : (33) 4 91 41 43 58
PI-2445-2006-05-09 212
Инструкция no
использованию
BECKM AN
COULTER.
RUSSIAN
IVD C O R TISO L RIA KIT :IM1841
НАБОР ДЛЯ РАДИОИММУНОЛОГИЧЕСКОГО IN VITRO ОПРЕДЕЛЕНИЯ С€
КОРТИЗОЛА В СЫВОРОТКЕ, ПЛАЗМЕ И МОЧЕ ЧЕЛОВЕКА
- Все манипуляции с радиоактивными веществами следует проводить в специально
1. ПРИНЦИП МЕТОДА оборудованных для этого помещениях, удаленных от мест постоянного
Радиоимиунологичвсков опрадвпвнив кортизола является конкурентным видом анализа, С пребывания людей.
помощью данного набора можно проводить определение кортизола: - Радиоактивные вещества следует хранить с использованием контейнеров в
- непосрвдствеино в сыворотке, плазме и моче специально отведенных для этого местах.
■поспе экаракции мочи дихлорэтаном, испарения органической фазы и растворения ■ Необходимо регистрировать поступление и расход радиоактивных материалов.
экстракта в <нулевой1 калибровочной пробе. - Лабораторное оборудование и посуду следует хранить отдельно, чтобы
Образцы сыворотки, плазмы, мочи и ее экстрактов, а также контрольные и калибровочные предотвратить их зафязнение радиоактивными изотопами.
пробы инкубируют в пробирках, покрытых моноклональными антитепами, совместно с - Любой случай радиоактивного зафязнения или исчезновения радиоактивного
раствором '*|-кортизола в качестве метки. После окончания инкубации удаляют жидкое материала должен рассматриваться в соответствии с законодательством.
содержимое пробирок и измеряют связанную активность Концентрацию кортизола а - Утилизация радиоактивных отходов должна осуществляться в соответствии с
анализируемых образцах опредепяют методом интерпопяции по калибровочной кривой. законодательством.
4.3 Азид натрия
2. РЕАГЕНТЫ, ВХОДЯЩИЕ В СОСТАВ НАБОРА
Некоторые компоненты набора содержат азид натрия в качестве консерванта.
Все реагенты стабильны при 2-8‘С до окончания срока годности набора указанного на
Вступая в реакцию со свинцом, медью и латунью, азид натрия образует взрыво­
этикетке. Сроки годности, указанные на этикетках флаконов с реагентами, относятся только
опасные азиды металлов. Отработанные реагенты следует разбавлять большим
к их хранению в производственных условиях вппоть до момента комплектации набора и не
количеством водопроводной воды, после чего их можно сливать в канализацию.
распространяются наполученную заказчиком продукцию.
4.4 Сыворотка крови
2.1 Пробирки, покрьггые моноклональными антителами к кортизолу: 2 х 50 шт. Со всеми образцами сыворотки и плазмы крови следует обращаться как с потен­
(готовы к использованию]. циально инфекционным материалом, могущим содержать вирусы СПИД и гепатита.
2.2 Метка, раствор '"{-кортизола: один флакон, 55 мл (готова к использованию). Утилизация отходов должна осуществляться в соответствии с законодательством.
На дату выпуска препарат содержит 185 кБк '*1-меченого кортизола в растворе 4.5 Дихлорметан
буф«ра с бычьим сывороточным альбумином, азидом натрия (<0,1%, см. п. Меры Дихлорметан является высоко летучим и огнеопасным растворителем. Стадии
предосторожности) и краситепем эксфакции и испарения следует проводить в вытяжном шкафу. Избегать открытого
2.3 Калибровочные пробы: 5 флаконов по 0,5 мл и 1 флакон с 5 мл кнулевой» огня. Не пипетировать реагент ртом
калибровочной пробы (готовы к использованию).
Калибровочные пробы содержат кортизол в диапазоне концентраций от О до 2000 нМ 5. ПОЛУЧЕНИЕ, ОБРАБОТКА, ХРАНЕНИЕ И РАЗВЕДЕНИЕ ОБРАЗЦОВ
в буфере с бычьим сывороточным апьбумином и азидом натрия (< 0,1 %, см. п. 5.1 Образцы плазмы и сыворотки крови
Меры предосторожности). Точные концентрации указаны на этикетках флаконов. - Собрать кровь в чистые сухие пробирки, или пробирки, содержащие гепарин или
Калибровочные пробы аиестованы относитепьно референсных препаратов ЭДТА.
ERMCI-DA193. - Отделить сыворотку или плазму крови центрифугированием,
кНупввую» калибровочную пробу можно также заказать отдельно (кат. № IM1959 - - Образцы сыворотки и ппазмы можно хранить при 2-8'С в течение 24 часов. Для
10млили1М3444 - 250мл) более длительного хранения их необходимо разделить на аликвоты и заморозить
Примечание: Иногда возможно снижение прозрачности ’нупевого' калибратора, что при температуре <-18'С, Избегать повторного замораживания-опаивания проб.
не впияниет на характериаики теста. - Если измеренное значение кортизола в образце превышает максимальную
2.4 Контрольная сыворотка: 1 флакон (0,5 мл), (готова к использованию) концентрацию в калибровочных пробах, его следует развести снупевой»
Флакон содержит кортизол в буфере с бычьим сывороточным альбумином и азидом калибровочной пробой и провести анализ повторно.
натрия (< 0,1 %, см. п. Меры предосторожности). Ожидаемый диапазон концентраций 5.2 Образцы мочи
указан на этикетке флакона. - Собрать суточную мочу а колбы. Стабилизация образцов не требуется,
- Измерить ее объем,
3. ДОПОЛНИТЕЛЬНЫЕ МАТЕРИАЛЫ И ОБОРУДОВАНИЕ - Для хранения образцов их следует разделить на аликвоты и заморозить при
Помимо стандартного лабораторного оборудования необходимо иметь следующее: <-18*С,
3.1 Для прямого определения кортизола в сыворотке, плазме и моче - Если измеренное значение кортизола в образце превышает максимальную
• микропипетка (50 мкл) концентрацию в калибровочных пробах, его следует развести дистиллированной
- полуавтоматическая пипетка (500 мкл) водой и провести анализ повторно,
- вихревой смеситель типа vortex
6. ПРОЦЕДУРА АНАЛИЗА
- горизонтальный, или орбитальный естряхиватель
- водоструйный насос 6.1 Экстракция проб мочи (по желанию: прямое определение • см.п. (.3).
- гамма-счетчик Внимание; Экстракцию следует проводить е чистых стекпянных пробирках или
3.2 Для определения кортизола в экстрактах мочи (по желанию) флаконах со стеклянными или тефлоновыми пробками, ополоснутых дихпорметаном
Необходимо иметь следующие дополнительные материалы и оборудование: (см.п. Меры предосторожности) и высушенных. Перед проведением экстракции
-дихлорметан (метиленхлорид), не стабилизированный этанолом, х.ч. образцы спедует довести до комнатной температуры и тщатепьно перемешать.
- стеклянные пипетки на 2 и 5 мл
- Стеклянные пробирки или флаконы с завинчивающимися Перед анализом проводится экстракция только образцов мочи. Не
крышками и тефлоновыми прокладками экстрагировать калибровочные пробы.
- испаритель - Охладить необходимое количество дихлорметана на ледяной бане.
- Промаркировать необходимое количество пробирок (фпаконов).
4. МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ - Поместить пронумерованные пробирки (фпаконы) на ледяную баню и внести в них
4.1 Общие замечания: по 500 мкп анализируемых проб мочи,
- Перед использованием довести реагенты до комнатной температуры. - В каждую пробирку (флакон) внести стеклянной пипеткой по 5 мл дихлорметана,
- Не смешивать реагенты из наборов разных серий. тщательно закрыть их пробками и перемешать содержимое на вихревом
- Для каждой серии определений необходимо строить новую калибровочную кривую. смеситепе в течение 1 минуты.
- Для получения воспроизводимых результатов очень важно соблюдать - Оставить пробирки при комнатной температуре до разделения водной и
рекомендуемые условия встряхивания пробирок. органической фазы.
- Анализ рекомендуется проводить в дубликатах. - С помощью водоструйного насоса удапить верхнюю водную фазу,
■ Пробирки предназначены дпя однократного испопьзования. - Отобрать 2 мл органической фазы с помощью стеклянной пипетки или шприца,
4.2 Основные правила обращения с радиоактивными веществами. - Попностью испарить органическую фазу в испарителе без подогрева,
Получение, использование и транспортировка радиоактивных материалов должны - Растворить высушенные экстракты в 200 мкл кнулевой» калибровочной пробы.
происходить в соответствии с принятыми в данной стране нормами радиационной Через 15 минут интенсивно перемешать содержимое пробирок.
безопасности и санитарными правилами работы с радиоактивными веществами.
- В лабораториях запрещается принимать пищу, курить, пользоваться косметикой.
- Не пипетировать растворы радиоактивных веществ ртом.
■ Для офаничения контакта с радиоактивными материалами рекомендуется
использовать разовые перчатки и лабораторную спецодежду.
PI-1841-2012-01-26
6^ Схема опредепения кортизола в пробах сыворотки и экстрактах мочи «. КОНТРОЛЬ КАЧЕСТВА
В соответствии с требованиями «Good laboratory practices» для контроля качества
Калибровочные Сыворотки Пробирки
проводимых исследований следует регулярно использовать контрольные образцы, которые
Стадия и контролы<ые и жтракгь для общего должны проходить те же стадии анализа, что и анализируемые пробы. Результаты контроля
пробы мочи счета (Т) качеава рекомендуется обрабатывать с помощью специальных статистических методов. В
1: Внесение реагентов случае серьезного повреждения упаковки, или в случае несоответствия полученных
В покрытые антителами пробирки результатов аналитическим характеристикам (см.п.Ю) обратитесь, пожалуйста, к вашему
последовательно внести: дистрибьютору или к нашим слециалистам:Тел.:'»420 272 017 391; Факс; -М20 272 017 385:
E-mail: imunochemiabeckman.com Тел.:+7 495 937 1664; Факс: +7 495 254 64 07;
- Калибровочные и контропы^ые
E-mail: beckman.ru (Sbeckman.com
пробы 50мкл
- образцы сыворотки, плазми и 9. ожидаемые значения
экстракты мочи 50 мкл в каждой лаборатории рекомендуется установить собственные уровни кортизола,
- раствор метки________ 500 мкл 500 мкл 500 мкл соответствующие нормальным. Приведенные ниже значения являются ориентировочными.
Перемешать 9.1 Сыворотка крови:
2 Инкубация Утро: от 260 до 720 нмоль/л (л = 69) Вечер: от 50 до 350 нмоль/л (л = 84)
_______1 час при 18-25*С и постоянном встряхивании (£400 осц./мин.) 9.2
3: Измерение результатов Стандартное Пофаничные значения
Среднее значение
Тщательно удалить содержимое пробирок (кроме проб Т). Вид анализа отклонение для 95% популяции
(нмоль/24 часа)
________Измерить связанную (В) и общую (Т) активность (имп./мин.). (нмоль/24 часа) (нмопь/24часа)
Прямой 114 55 38-208
6.3 Схема процедуры прямого определения кортизола в пробах мочи С экстракцией 103 45 30-197
Калибровочные Пробирки
Стадия и контрольные Образцы для общего 10. аналитические ХАРАКТЕРИСТИКИ
мочи (более подробная информация приведена в разделе “APPENDIX")
пробы счета (Т)
10.1 Аналитическая чувствительность: 10 нмоль/л
1: Внесение реагентов
В покрытые антителами пробирки 10.2 Специфичность
Антитела, используемые в данном наборе, имеют высокую специфичность к
поспедовательно внести:
кортизолу. Перекрестная реакция с другими природными стероидами
- калибровочные и контрольные (альдостероном, кортикостероном, кортизоном, 11-дезо«сикортикостероном,
пробы 50 мкл прогестероном и др.), а также лекарственными препаратами, могущими
- образцы мочи 50 мкл присутствовать а сыворотке крови пациентов (даназол, преднизолон, спиронолактон
• «нулевая» калибровочная проба 50 мкл и др.), очень мала.
(внимание: только в 10.3 Воспроизводимость
образцы мочи)
10.3.1 Внутри анализа
- раствор метки________ 500 мкл 500 мкл 500 мкл Анализ проб проводипи е 10 повторах е одной и той же серии опредепений.
Перемешать Коэффициент вариации при измерении содержания кортизола а пробах сыворотки
2: Инкубация крови не превышал 5,8 %.
1 час при 18-25*С и постоянном встряхивании (ЫОО осц./мин.) 10.3.2 Между анализами
3: Измерение результатов Анализ образцов в дубликатах проводили в 17 различных сериях определений.
Тщательно удалить содержимое пробирок (кроме проб Т). Коэффициент вариации при измерении содержания кортизола в пробах сыворотки
________Измерить связанную (В) и общую (Т) активность (имп./мин ). крови не превышал 9.2 %.
10.4 Точность
7. РЕЗУЛЬТАТЫ
10.4.1 Тест на разведение
Результаты рассчитывают методом интерполяции по калибровочной кривой, полученной «Открытие» кортизола при серийном разведении образцов с высокой его
одновременно с анализом неизвестных образцов. концентрацией составило от 85 до 115%.
7.1 Калиброючни кривая 10.4.2 Тест на «открытие» стандартной добавки
Результаты контроля качества набора, приведенные в этой инструкции, лопучены Известные количества кортизола добавляли к образцам с низким уровнен гормона.
лри построении калибровочной кривой в полулогарифмических координатах Измеренная величина «открытия» составила от 95 до 113%.
(<сплайн> функция) с соотношением вГГ (%) или В/Во (%) по вертикальной оси и
концентрацией кортизола (нмоль/л) по горизонтальной оси калибровочного фафика. 10.5 Диапазон определений (от аналитической чувствительности до значения
наивысшей калибровочной пробы): 10 - 2000 нмоль/л.
Общий счет: 66953 имп./м1н.
Кортимл 11. ОГРАНИЧЕНИЯ МЕТОДА
проба (ниоль/л) Имп7ммн.(п«3) ВЯ(%) ВЯ.(%) Нарушение методики проведения анализа может привести к искажению результатов
0 0 622217 92,9 100 исследования.
1 20 53531 00,0 86.0 Результаты определения должны быть интерпретированы в свете общей клинической
2 70 38175 57,0 61,4 картины пациента, включая анамнез, данные других тестов и подходящую иную
3 200 217» 32,5 34,9 информацию
4 700 9233 13,в 14,8
Не использовать для анализа образцы сыворотки с гемолизом.
5 2000 4271 6.38 6,87
Несмотря на очень низкую перекрестную реакцию с лекарственными кортикоидами, в
(Примр типичной калибровочной кривой. Не использовать для обсчета результатов.) частности, с преднизопоном и преднизоном, применение высоких доз этих препаратов
7.2 Образцы может привести к кажущемуся повышению уровня кортизола в сыворотке крови и моче из-за
Для каждого образца найти на вертикальной оси калибровочного фафика интерференции вводимых веществ или их метаболитов. Поэтому не рекомендуется
соотношение ВЯ (%) или В/Во (Ч), а на горизонтальной оси соответствующую проводить прямое определение кортизола у пациентов, систематически принимающих
концентрацию кортизола. Для перевода концентраций из нмоль/л е нг/мл нужно кортикостероиды.
умножить полненный результат на 0,362. При выполнении анализов с использованием антител возможна интерференция
7.2.1 Образцы сыворотки, плазмы и экстракты мочи гетерофильными антителами в пробе пациента, У пациентов, имеющих постоянный контакт
Значения концентраций, измеренные с помощью данного набора, выражены в с животными или проходивших иммунотерапию или диагностические процедуры с
нмоль/п. Если концентрация кортизола в образце превышает 2000 нмоль/л, его использованием иммуноглобулинов или их фрагментов, могут вырабатываться антитела
нужно разбавить 1нулевой1 калибровочной пробой и провести анализ повторно. (те. МАМА), которые влияют на результаты иммунного анализа.
Определение суточной экскреции кортизола с мочой приведено в следующем Влияние этих антител может привести к получению ошибочных результатов. Тщательно
разделе. проверяйте результаты анализов пациентов с подозрением на наличие этих антител
7.2.2 Прямое определение кортизола в пробах мочи 12. РЕАГЕНТЫ, ПОСТАВЛЯЕМЫЕ ДОПОЛНИТЕЛЬНО ПО ЗАКАЗУ
Иамеинниб пвяммм мбшдм иачеиия слшат умможит^ на 1.С9, Фактор
разведения пробы мочи прм добавлении к ней 50 мкл «нулевой» калибровочной кНулевая» калибровочная проба (лиофилизованный препарат).
пробы. Образцы с концентрацией кортизола свыше 2000 нмоль/л следует развести Поставляется дополнительно по заказу: кат.№ IM1959 -10 мл или кат.№ IM3444
дистиллированной водой и провести анализ повторно. -250 мл.
При расхождении полученных результатов с клинической картиной, а также с - Применение см. §; 5.1,6.1,6.3.
данными других лабораторных исследований рекомендуется провести повторный - Данный реагент можно использовать при работе с набором RIA Cortisol (кат.№
анализ мочи с экстракцией дихлорметаном.
IM1841) любой серии.
Суточную экскрецию кортизола с мочой (Q) (нмоль/24часа) можно рассчитать по - Флакон содержит азид натрия (<0,1 %; см.л. Меры предосторожности).
формуле: Хранение:
Неиспользованный реагент стабилен 10 недель при температуре 2-8*С. Раствор
Q = UxV
можно хранить до окончания срока годности, указанного на этикетке флакона,
где разделив на аликвоты при температуре <-16*С.
- и = концентрация кортизола в моче (нмоль/л)
Наличие опалесценции не влияет на результат анализа.
- V = объем мочи в литрах/24 часа
IMMUNOTECH s.r.o. - Radiovd 1 -102 27 Prague 10 - Czech Republic ■ Phone. +420-272017444 - Fax : +420-272017385
PI-1841-2012-01-26
Инструкция no
IMMUNOTECH использованию
A BECKMAN COULTFP COMPANV
RUSSIAN
IM1452
Г9001 НАБОР ДЛЯ РАДИОИММУНОЛОГИЧЕСКОГО IN VITRO ОПРЕДЕЛЕНИЯ С€
U3485
17 АЛЬФА-ГИДРОКСИПРОГЕСТЕРОН В СЫВОРОТКЕ И ПЛАЗМЕ КРОВИ ЧЕЛОВЕКА
c e r t i f i e d
1. ПРИНЦИП МЕТОДА нормами радиационной безопасности и санитарными правилами работы с
Радиоимммунологическое определенеие 17 альфа-гидроксипрогестерон (17 радиоактивными веществами.
ОН-Р) относится к конкурентным видам анализа.С помощью данного набора - В лабораториях запрещается принимать пищу, курить, пользоваться косметикой.
■ Не пипетировать растворы радиоактивных веществ ртом.
можно проводить определение 17 ОН-Р
- Для офаничения контакта с радиоактивными материалами рекомендуется
- дня прямого определения в сыворотке или плазме крови,
использовать разовые перчатки и лабораторную спецодежду.
- или для анализа после экстракции образцов эфиром, испарения растворителя - Все манипуляции с радиоактивными веществами следует проводить в специально
и растворения сухих экстрактов в аналитическом буфере. оборудованных для этого помещениях, удаленных от мест постоянного
Анализируемые образцы сыворотки или плазмы крови, растворенные пребывания людей.
эфирные экстракты, калибровочные и контрольные пробы инкубируют с ’“I -17 - Радиоактивные вещества следует хранить с использованием контейнеров в
ОН-Р в пробирках, покрытых антителами. После окончания инкубации жидкое специально отведенных для этого местах.
содержиме пробирок удаляют и измеряют связанную активность ’»|. - Необходимо регистрировать поступление и расход радиоактивных материалов.
- Лабораторное оборудование и посуду следует хранить отдельно, чтобы
2. РЕАГЕНТЫ, ВХОДЯЩИЕ В СОСТАВ НАБОРА предотвратить их загрязнение радиоактивными изотопами.
- Любой случай радиоактивного зафязнения или исчезновения радиоактивного
Все реагенты стабильны при 2-8°С до окончания срока годности, указанного на материала должен рассматриваться в соответствии с законодательством.
этикетке набора. - Утилизация радиоактивных отходов должна осуществляться в соответствии с
2.1 Пробирки, покрытые антителами к 17 ОН-Р: 2 х 50 шт. (готовы к законодательством.
использованию) 4.3 Азид натрия
Некоторые компоненты набора содержат азид натрия в качестве консерванта.
2.2 Метка, раствор ”4-17 ОН-Р: один флакон, 105 мл (готова к
Вступая в реакцию со свинцом, медью и латуныо, азид натрия образует
использованию) взрывоопасные азиды металлов.
На дату изготовления флакон содержит 185 кБк '“I -17 ОН-Р в буфере Отработанные реагенты следует разбавлять большим количеством водопроводной
с белком и красителем. воды, после чего их можно сливать в канализацию.
2.3 Калибровочные пробы: 6 флаконов 1 мл (готовы к использованию) 4.4 Сыворотка крови
Калибровочные пробы содержат 17 ОН-Р в диапазоне концентраций от О С исследуемыми образцами сыворотки крови следует обращаться как с
до 50 нг/мл (от О до 151,3 nmol/L) в буфере с бычьим сывороточным потенциально инфекционным материалом, могущим содержать вирусы СПИД и
альбумином и азидом натрия (<0,1%, см. п. Меры предосторожности). гепатита. Весь использованный материал должен быть уничтожен по действующим
государственным правилам и инструкциям.
Точные концентрации указаны на этикетках флаконов. Значения
калибровочных проб были получены с помощью внутреннего стандарта. 4.5 Этиловый эфир
Этиловый эфир крайне летуч и отеоласен. Экстракцию и испарение эфира
2.4 Контрольная сывороти: 1 флакон 1 мл (готова к использованию) следует проводить в вытяжном шкафу. Избегать открытого огня. Не пипетировать
Флакон содержит известное количество 17 ОН-Р в буфере с бычьим реагенты ртом.
сывороточным альбумином и азидом натрия (<0.1%, см, п. Меры
предосторожности). Ожидаемый диапазон концентраций указан на 5. ПОЛУЧЕНИЕ, ОБРАБОТКА, ХРАНЕНИЕ И РАЗВЕДЕНИЕ ОБРАЗЦОВ
этикетке флакона. - Собрать кровь в чистые сухие пробирки, или пробирки с ЭДТА, или
2.5 Буфер для растворения сухих экстрактов: 1 флакон, 30 мл (готов к гепарином.
использованию) - Отделить сыворотку/илиплазму от клеток крови центрифугированием.
Препарат содержит бычий сывороточный альбумин и азид натрия - Образцы сыворотки и плазмы можно хранить при 2-8“С в течение 24
(<0,1%, см. п. Меры предосторожности). часов. Для более длительного хранения их необходимо разделить на
Внимание: Теипература и сроки годности, указанные на этикетках флаконов с аликвоты и заморозить при температуре < -18”С. Избегать повторного
реагентами, относятся только к их хранению в производственных условиях вплоть до замораживания-оттаивания проб.
момента комплектации набора и не распространяются на полученную пользователем - Если концентраци 17 ОН-Р, измеренная прямым методом, превышает
продукцию. максимальную калибровочную пробу, образец следует развести
сывороткой с низким содержанием гормона (<0,1 нг/мл) и провести
3. ДОПОЛНИТЕЛЬНЫЕ МАТЕРИАЛЫ И ОБОРУДОВАНИЕ
анализ повторно.
Помимо стандартного лабораторного оборудования необходимо иметь следующее: - Если концентрация 17 ОН-Р, измеренная экстракционным методом,
3.1 Для прямого определения : превышает максимальную калибровочную пробу, нужно дополнительно
- микролипетка (50 мкл). развести экстракты буфером для их растворения и провести анализ
- лолуавтоматическая пилетка (1 мл, 200 мкл). повторно.
■ вихревой смеситель хила vortex.
- водяная баня на 37'С. 6. ПРОЦЕДУРА АНАЛИЗА
- водоструйный насос.
- гамма-счетчик для измерения активности '^1. 6.1 Экстракция образцов (по желанию, см. п. Ограничения метода)
Внимание: Экстракцию проводят в предварительно ополоснутых
3.2 Для процедуры с экстракцией (по желанию):
эфиром чистых стеклянных флаконах или пробирках с тефлоновыми
- микролилетка(50мкл).
или стеклянными пробками. Процедура экстракции необходима
- Стеклянные лилетки (5 мл, 10 мл).
■ Стеклянные флаконы вместимостью от 5 мл до 10 мл с тефлоновыми или только для образцов плазмы или сыворотки крови. Не
стеклянными лробкаии. экстрагировать калибровочные пробы.
- Стеклянные лробирки руех. 6 мл (12x75 мм) для отделения органической - Перед экстракцией довести образцы до комнатной температуры и хорошо
фазы перемешать.
- Исларитель для эфира (типа Speed Vac) или водяная баня на 37’С. - Промаркировать по одному стеклянному флакону для каждого образца.
- этиловый эфир (чл.а.). - В соответствующие флаконы внести по 200 мкл анализируемых образцов.
- В каждый флакон внести по 5 мл этилового эфира (см. п.Меры
4. МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ предосторожности) и тщательно закрыть их пробками.
4.1 Общие замечания: - Интенсивно перемешать содержимое флаконов на вихревом смесителе.
- Поместить флаконы в морозильную камеру и выдержать при температуре <-18
- Перед использованием довести реагенты до комнатной температуры.
*С до замерзания водной фазы.
• Не смешивать реагенты из наборов разных сермй.
- Анализ калибровочных проб должен проводиться одновременно с - Аккуратно перелить органическую фазу в промаркированные стеклянные
пробирки Ругех (6 мл). Следить, чтобы в них не попала водная фаза.
исследуемыми образцами.
- Полностью испарить эфир с помощью испарителя (например, типа Speed Vac)
• Анализ рекомендуется проводить в дубликатах.
или поместить пробирки на водяную баню при 37‘С.
■ Пробирки только для одноразового применения.
Внимание: пробирки должны быть надежно закреплены в штативе, т.к. после
4.2 Основные правила обращения с радиоактивными веществами. испарения эфира они начнут всплывать.
Получение, использование и транспортировка радиоактивных материалов должны На этой стадии выполнение анализа можно приостановить. Закрытые
происходить в соответствии с принятыми в данной стране пробирки с сухими экстрактами можно хранить до 7 дней при 2-8"С
Р1IM1452 2010-05-27_RU 1/4
■ в пробирки с сухими экстрактами внести по 200 мкл нкл буфера, 10. АНАЛИТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
предназначенного для их растворения. Тщательно перемешать содержимое (болев подробная информация приведена в разделе APPENDIX)
пробирок в течение 30 сек. на вихревом смесителе.
10.1 Чувствительность : 0,046 пнг/мл (0,14 nmol/L).
6.2 Процедура анализ (см. таблицу на следующей странице)
10.2 Специфичность
7. РЕЗУЛЬТАТЫ Антитела, используемые в данном наборе, имеют высокую
Результаты рассчитывают методом интерполяции по калибровочной кривой, специфичность к 17 ОН-Р Перекрестная реакция сдругими природными
полученной одновременно с анализом неизвестных образцов. стероидами (17 альфа-гидроксипрегненолоном, прогестероном и др.) и
лекарственными препаратами, могущими присутствовать в сыворотке
7.1 Калибровочная кривая
крови пациента (даназол, спиронолактон и др.), очень мала.
Результаты, приведенные в этой инструкции, получены при построении
калибровочной кривой в полулогарифмических ("сплайн" функция) с 10.3 Воспроизводимость
соотношением В/Т(%) или В/ВО.(%) по вертикальной оси и 10.3.1 Внутри анализа
концентрацией 17 ОН-Р (нг/мл) по горизонтальной оси калибровочного Анализ образцов проводили в пределах одной серии определений в 15
графика. Другие методы обсчета могут давать несколько отличающиеся репликатах с использованием безэкстракционной процедуры и в 15
результаты. репликатах после проведения экстракции. Коэффициент вариации не
Общий счет: 60645 имп./мин. превышал 7,2% в прямом методе и 7,8% в экстракционном.
Км. проб^ 17 ОН-Р |нг/мп| ИмпУмин. |п»31 BfT Ш
10.3.2 Между анализами
О 42634 70.3 100
Анализ образцов в дубликатах проводили в 10 различных сериях
0,1 38997 64.3 91,5
0,35 32573 53,7 76,4 определений.Коэффициент вариации измеренных уровней не превышал
2 17029 28,1 39,9 5,6% в прямом определении и 15,7% в определении после экстракции.
10 6926 11.4 16,2 10.4 Точность
50 2442 4,0 5,7
(Пример типичной калибровочной кривой. Не использовать для обсчета результатов.) 10.4.1 Тест на разведение
Образцы сыворотки крови с высоким уровнем 17 ОН-Р (<0,1 нг/мл)
7.2 Образцы
серийно разводили образцами с низким уровнем. Измеренная величина
Для каждого образца найти на вертикальной оси калибровочного
открытия составляла от 82% до 120%.
графика значение ВЯ(%) или В/ВО(%), а на горизонтальной оси
соответствующую концентрацию 17 ОН-Р. Для перевода концентраций из 10.4.2 Тест на "открытие"
нг/мл в nmol/L, нужно умножить полученный результат на 3,026. Известные количества 17 ОН-Р добавляли к образцам сыворотки крови с
низкой его концентрацией. Измеренная величина "открытия" составляла
8. КОНТРОЛЬ КАЧЕСТВА 88% -108%.
В соответствии с требованиями Good laboratory practices для контроля качества
10.5 Диапазон определений (от аналитической чувствительности до значения
проводимых исследований следует регулярно использовать контрольные образцы,
наивысшей калибровочной пробы): 0,046 - 50 пнг/мл.
которые должны
проходить те же стадии анализа, что и анализируемые пробы. Результаты контроля
11. ОГРАНИЧЕНИЯ МЕТОДА
качества рекомендуется обрабатывать с помощью специальных статистических методов.
Нарушение методики проведения анализа может привести к искажению результатов
В случае серьезного повреждения упаковки, или в случае несоответствия полученных
исследования. Результаты определения должны быть интерпретированы в свете общей
результатов аналитическим характеристикам (см.п.10) обратитесь, пожалуйста, к нашим
клинической картины пациента, включая анамнез, данные других тестов и подходящую иную
специалистам: Тел.:+420 267 008 391;
информацию.
Факс: +420 267 008 385; e-mail: У очень маленьких детей (в частности, в возрасте до 3 месяцев) наблюдается очень
Тел.:+7 095 937 1664; Факс: +7 095 254 64 07; e-mail: tieckman.rufiibecliman.com высокий уровень 17 ОН-прегненолон-сульфата. В таких случаях рекомендуется
проводить анализ с предварительной экстракцией 17 ОН-Р эфиром.
9. ОЖИДАЕМЫЕ ЗНАЧЕНИЯ
Несмотря на низкую прекрестную реакцию, у пациентов, регулярно получающих
В каждой лаборатории рекомендуется установить собственные уровни 17 ОН- спиронолактон, могут наблюдаться ложно завышенные уровни 17 ОН-Р. В этой связи
Р, соответствующие нормальным. Приведенные ниже значения являются лечение спиронолактоном нужно прекратить не менее чем за три недели до проведения
ориентировочными. анализа.
17 0H-P нг/мл нмол/л При выполнении анализов с использованием антител возможна интерференция
Мужчины 0,5-2,4 1,5-7,2 гетерофильными антителами в пробе пациента. У пациентов, имеющих постоянный контакт
Женщины в пре-менопаузе: с животными ипи проходивших иммунотерапию или диагностические процедуры с
использованием иммуноглобулинов или их фрагментов, могут вырабатываться антитела
Фолликулярная фаза : 0,15-1,1 0,45- 3,3 (т.е. НАМА), которые влияют на результаты иммунного анализа.
Лютеиновая фаза : 0,7-3,1 2,1-9,4 Влияние этих антител может привести к получению ошибочных результатов. Тщательно
Женщины в пост-менопаузе: 0,08-1,3 0,24-3,9 проверяйте результаты анализов пациентов с подозрением на наличие этих антител.
Пороговое значение уровня гормона в сыворотке крови детей в возрасте от 1
до 3 лет составляет 2 нг/мл (6,05 nmol/L), для детей младше года - 3 нг/мл
(9,08 nmol/L).
6.2 Процедура Анализа
Стадия 1 Стадия 2 Стадия 3
Внесение реагентов Инкубация Измерение результатов
В покрытые антителами пробирки Тщательно удалить содержимое
последовательно внести: Закрыть пробирки пробирок (кроме проб Т)
- 50 мкл калибровочных, Измерить связанную (В) и общую
Инкубировать 180 минут при 37°С
контрольных и анализируемых проб, (Т) активность (имп./мин.)
на водяной бане.
или их экстрактов и
в течение 1 минуты
-1 мл метки ,
Перемешать
* Для определения общей активности '2S| (имп./мин.) в две дополнительные пробирки внести по 1 мл раствора метки.
■ I IMMUNOTECH SAS -130 av. de Lattre de Tassigny - B.P.177 - 13276 Marseille Cedex 9 France - Тё1. (33) 4 91 17 27 00 - Fax : (33) 4 91 41 43 58
PIIM1452 2010-05-27_RU 2/4
. \_ 5
(1 )
i -
Инструкция no
использованию
BECKMAN
COULTER.
RUSSIAN
IVD LH IRMA KIT 1M1381 - IM3302
НАБОР ДЛЯ ИММУНОРАДИОМЕТРИЧЕСКОГО IN VITRO ОПРЕДЕЛЕНИЯ С€
ЛЮТЕИНИЗИРУЮЩЕГО ГОРМОНА В СЫВОРОТКЕ И ПЛАЗМЕ КРОВИ ЧЕЛОВЕКА
1. ПРИНЦИП МЕТОДА - Пробирки предназначены для однократного использования.
Иммунорадиометрическое определение лютеинизируихцего гормона (ЛГ) 4.2 Основные правила обращения с радиоактивными веществами.
относится к анализам типа ‘сэьщвич' в котором используется два вида мышиных Получекие, использование и транспортировка радиоактивных материалов должны
монокпоналы1ых антител к различным эпитопам его молекулы. Исследуемые происходить в соответствии с принятыми в данной стране нормами радиационной
образцы, контрольные и калибровочные пробы инкубируют в пробирках, безопасности и санитарными правилами работы с радиоактивными веществами.
покрытых одним видом моноклональных антител в присутствии вторых антител, - В лабораториях запрещается принимать пищу, курить, пользоваться косметикой.
меченных '“I. После окончания инкубации содержимое пробирок удаляют, - Не пипетировать растворы радиоактивных веществ ртом,
- Для офаничения контакта с радиоактивными материалами рекомендуется
отмывают несвязанные меченые антитела и измеряют связанную активность
использовать разовые перчатки и лабораторную спецодехаду.
'“I. Концентрацию ЛГ, прямо пропорциональную связанной активности,
- Все манипуляции с радиоактивными веществами следует проводить в специально
определяют методом интерполяции по калибровочной кривой. оборудованных для этого помещениях, удаленных от мест постоянного
пребывания людей.
2. РЕАГЕНТЫ, ВХОДЯЩИЕ В СОСТАВ НАБОРА
- Радиоактивные вещества следует хранить с использованием контейнеров в
Все реагенты стабильны при 2-8”С до окончания срока годности набора, специально отведенных для этого местах.
указанного на его этикетке. Сроки годности, указанные на этикетках флаконов с - Необходимо регистрировать поступление и расход радиоактивных материалов.
реагентами, относятся только к их хранению в производственных условиях - Лабораторное оборудование и посуду следует хранить отдельно, чтобы
вплоть до момента комплектации набора и не распространяются наполученную предотвратить их зафязнение радиоактивными изотопами.
■ Любой случай радиоактивного зафязнения или исчезновения радиоактивного
заказчиком продукцию.
материала должен рассматриваться в соответствии с законодательством.
Условия хранения реагентов после их растворения или разбавления указаны в - Утилизация радиоактивных отходов должна осуществляться в соответствии с
разделе ‘Процедура анализа”. законодательством.
2.1 Набор для определения ЛГ: 100 пробирок (Кат.М« #1381) 4.3 Азид натрия
2.1.1 Пробирки, покрытые моноклональными антителами к ЛГ;2 х 50 шт Некоторые компоненты набора содержат азид натрия в качестве
(готовы к использованию) консерванта. Вступая в реакцию со свинцом, медью и латунью, азид
натрия образует взрывоопасные азиды металлов. Отработанные
2.1.2 Метка, раствор моноклональных антител к ЛГ, меченных '»1:
реагенты следует разбавлять большим количеством водопроводной воды,
1 флакон, 5,5 мл (готова к использованию)
после чего их можно сливать в канализацию.
На дату изготовления флакон содержит 370 кБк1-иммуноглобулинов в
буфере с бычьим сывороточным альбумином, красителем и азидом 4.4 Сыворотка крови человека
натрия (< 0,1 %, см. п. Меры предосторожности). Материал человеческого происхождения, входящий в состав компонентов
набора, не содержит антител к HIV 1, HIV 2, HCV и к поверхностному
2.1.3 Калибровочные пробы; 6 флаконов (лиофилизованные препараты)
антигену вируса гепатита В (HBsAg). Тем не менее, ни один из
Калиб^вочные пробы содержат ЛГ человека в диапазоне концентраций
существующих методов анализа не может гарантировать полного
от О до 180 МЕ/л в сыворотке крови лошади с азидом натрия (< 0,1 %, см.
отсутствия инфекционных агентов в исследуемом материале. Поэтому
п. Меры предосторожности). Точные концентрации, калиброванные по
при работе с компонентами набора следует соблюдать необходимые
международному стандарту WHO 2nd IS 80/552, указаны на этикетках
меры предосторожности.
флаконов.
С исследуемыми образцами сыворотки крови следует обращаться как с
2.1.4 Контрольная сыворотка: 1 флакон (лиофилизованный препарат) потенциально инфекционным материалом, могущим содержать вирусы
Флакон содержит сыворотку крови человека с известной концентрацией СПИД и гепатита. Утилизация отходов должна осуществляться в
ЛГ и азидом натрия (<0,1%, см. п. Меры предосторожности). Ожидаемый соответствии с законодательством.
диапазон концентраций указан на дополнительном листке-вкладыше.
5. ПОЛУЧЕНИЕ, ОБРАБОТКА, ХРАНЕНИЕ И РАЗВЕДЕНИЕ ОБРАЗЦОВ
2.1.5 Промывочный раствор (20Х): 1 флакон, 50 мл
- Собрать кровь в чистые сухие пробирки, или пробирки, содержащие
Перед использованием концентрат должен быть разведен.
антикоагулянг.
2.2 Набор для определения пролактина: 400 пробирок (Кат. № #3302) - Отделить сыворотку или плазму крови центрифугированием.
2.2.1 Пробирки, покрытые моноклональными антителами к ЛГ: 8 х 50 шт - О^азцы сыворотки и плазмы можно хранить при 2-8’С в течение
(готовы к использованию) 24 часов. Для &лее длительного хранения их необходимо разделить на
2.2.2 Метка, раствор моноклональных антител к ЛГ, меченных <»1: аликвоты и заморозить при температуре < -18°С. Избегать повторного
4 флакона по 5,5 мл (готова к использованию) замораживания-опаивания проб.
- Если концентрация ЛГ в исследуемом образце превышает
2.2.3 Калибровочные пробы: 6 флаконов (лиофилизованные препараты) максимальную калибровочную пробу, его необходимо развести
2.2.4 Контрольная сыворотка: 1 флакон (лиофилизованный препарат) «нулевой» калибровочной пробой и провести анализ повторно.
2.2.5 Промывочный раствор (20х): 2 флакона по 50 мл 6. ПРОЦЕДУРА АНАЛИЗА
3. ДОПОЛНИТЕЛЬНЫЕ МАТЕРИАЛЫ И ОБОРУДОВАНИЕ 6.1 Подготовка реагентов
Помимо стандартного лабораторного оборудования, необходимо иметь Довести все реагенты до комнатной температуры.
следующее: 6.1.1 Растворение калибровочных и контрольной проб
- микропипетка (100 мкп) 2 Растворить содержимое флаконов в объеме дистиллированной воды,
- полуавтоматические пипетки (50 мкл, мл) указанной на этикетках флаконов. Через 30 минут аккуратно перемешать,
- вихревой смеситель типа “vortex" избегая образования пены. Растворенные калибровочные и контрольные
- горизонтальный или орбитальный встряхиватель пробы можно хранить при 2-8°С в течение одной недели или разде­
- водоструйный насос ленными на аликвоты при < -18°С до окончания срока годности набора.
- гамма-счетчик для измерения активности '“I.
6.1.2 Приготовление промывочного раствора
4. МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ Смешать содержимое флакона с концентратом промывочного раствора и
950 мл дистиллированной воды. Подготовленный к работе промывочный
4.1 Общие замечания:
раствор можно хранить при 2-8"С до окончания срока годности набора.
- Перед использованием довести реагенты до комнатной температуры.
- Не смешивать реагенты из наборов разных серий.
- Анализ калибровочных и исследуемых проб должен проводиться
одновременно.
- Анализ рекомендуется проводить в дубликатах.
РИ 381-2012-01-26
6.2 Процедура анализа (см. приведенную ниже таблицу)
Дети ЛГ МЕ/л)
7. РЕЗУЛЬТАТЫ Девочки Мальчики
Результаты рассчитывают методом интерполяции по калибровочной кривой, лолученной Мин. Макс Мин. Макс.
одновременно с анализом неизвестных образцов. - Препубертатные <0,19 <0,6
7.1 Калибровочная кривая - Стадии полового развития PII <0,6 <2,4
Результаты приведенные в этой инструкции, получены при построении PIII, PIV, PV 0,32 2,7 0,24 5,9
калибровочной кривой в логарифмических координатах (сплайн-функция) с
измеренной активностью '^1 (В-Во, имп./мин.) по вертикальной оси и концентрацией 10. АНАЛИТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
ЛГ (МВл) по горизонтальной оси калибровочного графика. Другие методы обсчета (Более подробная информация приведена в разделе “APPENDIX")
Общий счет 117 064 имп./мин. 10.1 Чувствительность
КалиСровочные ЛГ (МЕ/л) ИМП./МИН. (П‘3| ВЯ(%) В-Во, 10.1.1 Аналитическая чувствительность: 0,2 МЕ/л
пробы ИМП./МИН.
0 0 101 0,09 10.1.2 Функциональная чувствительность: 0,4 МЕ/л.
1 0,47 282 0,24 181 10.2. Специфичность
2 2,40 1170 1,00 1069 Антитела, используемые в данном наборе, обладают высокой
3 14,7 6310 5,39 6 209
слецифичностью к ЛГ. Перекрестная реакция с близкородственными
4 60,0 22674 19,4 22 573
5 170 49663 .... 49 562 соединениями (ТТГ, ФСГ, ХГЧ) очень низка.
(Прииер типичной калибровочной кривой. Не испопьзоеть дпя обсчета результатов.) 10.3. Воспроизводимость
7.2. Образцы 10.3.1 Внутри анализа
Для каждого образца найти на вертикальной оси калибровочного графика Анализ образцов проводили в 10 релликатах в пределах одной серии
значение В-Во (имп./мин), а на горизонтальной оси соответствующую определений. Коэффициент вариации измеренных уровней ЛГ в
концентрацию ЛГ в МЕ/л. Результаты, полученные в разбавленных сыворотке крови не превышал 6,7%.
пробах, следует умножить на фактор разведения.
10.3.2 Между анализами
8. КОНТРОЛЬ КАЧЕСТВА Анализ образцов в дубликатах проводили в 10 различных сериях
В соответствии с требованиями Good laboratory practices для контроля качества проводимых определений. Коэффициент вариации измеренных уровней ЛГ в
исследований следует регулярно ислопьзоеать контрольные образцы, которые должны сыворотке крови не превышал 3,7%.
проходить те же стадии анализа, что и анализируемые пробы. Результаты контроля 10.4 Точность
качества рекомендуется обрабатывать с помощью специальных статистических методов.
В случае серьезного повреждения упаковки, или в случае несоответствия полученных 10.4.1 Тест на разведение
результатов аналитическим характеристикам (см.п.Ю) обратитесь, пожалуйста, к вашему Образцы с высокой концентрацией ЛГ серийно разводили «нулевой»
дистрибьютору или к машин специалистам: калибровочной пробой. Процент ‘открытия’ составил от 83% до 113%.
Тел.:4420 272 017 391; Факс: -Й20 272 017 385; E-mail: imunocheni(Sbeckman.com
10.4.2 Тест на “открытие” стандартной добавки
Тел.:-»7 495 937 1664; Факс: *7 495 254 64 07; E-mail: beckman.ruiaitMckman.com
Известные количества ЛГ добавляли к образцам сыворотки крови с
9. ОЖИДАЕМЫЕ ЗНАЧЕНИЯ низким его содержанием. Измеренная величина «отфытия» составляла от
В каждой лаборатории рекомендуется установить собственные референсные 100% до 126%.
уровни ЛГ, соответствующие нормальным. Приведенные ниже значения 10.5 Диапазон определений (от аналитической чувствительности до значения
являются ориентировочными. наивысшей калибровочной пробы): 0,2-180 МЕ/л.
Взрослые ЛГ(МЕ/л)
11. ОГРАНИЧЕНИЯ МЕТОДА
п Мин. 5-й Медиана 95-й Макс. Нарушение методики проведения анализа может привести к искажению результатов
персентиль персентиль
исследования.
Мужчины 167 0,5 1,8 4,2 8,4 10 Результаты определения должны быть интерпретированы в сеете общей клинической
Женщины картины пациента, включая анамнез, данные другах тестов и подходящую иную
Фолликулярная фаза 121 0,8 3,0 6,6 18,6 27,1 информацию
Преовуляторный лик 46 9,6 12,4 37 88,7 155 При выполнении анализов с использованием антител возможна интерференция
Лютеиноеая фаза 81 0,7 1,1 5,7 11,8 24,5 гетерофильными антителами в пробе пациента. У пациентов, имеющих постоянный контакт
Постменопауза 20 13,5 16 31 66 96 с животными или проходивших иммунотерапию или диагаостические процедуры с
использованием иммуноглобулинов или их фрагментов, могут вырабатываться антитела
(т.е. НАМА), которые влияют на результаты иммунного анализа.
Влияние этих антител может привести к получению ошибочных результатов. Тщательно
проверяйте результаты анализов пациентов с подозрением на наличие этих антител.
6.2 Процедура АНАЛИЗА
Стадия 1 Стадия 2 Стадия 3
Внесение реагентов * Инкубация Измерение результатов
В покрытые антителами Тщательно удалить содержимое
пробирки последовательно всех пробирок
внести: Инкубировать (кроме проб«Т»).
90 мин
-100 мкл калибровочных,
при 18-25°С Промыть пробирки
контрольных и анализируемых
и постоянном встряхивании 2 раза по 2 мл
проб
(>350 осц./мин.) промывочного раствора.
и
- 50 мкл метки. Измерить связанную (В) и общую
(Т) активность 12S| в течение 1 мин.
Перемешать.
* В две дополнительные пробирки внести по 50 мкл метки для оценки общей активности (пробы «Т»),
■1 IMMUNOTECH s.r.o. - RadiovS 1 -102 27 Prague 10 - Czech Republic - Phone. +420-272017444 - Fax: +420-272017385
PI-1381-2012-01-26
Инструкция по
использованию
BECKMAN
COULTER.
RUSSIAN
IVD
FSH IRMA KIT IM2125 - IM3301
НАБОР ДЛЯ ИММУНОРАДИОМЕТРИЧЕСКОГО IN VITRO ОПРЕДЕЛЕНИЯ С€
ФСГ В СЫВОРОТКЕ И ПЛАЗМЕ КРОВИ ЧЕЛОВЕКА
1. ПРИНЦИП МЕТОДА
4.2 Основные правила обращения с радиоактивными веществами.
Иммунорадиометрическое определение ФСГ относится к анализам типа «сэндвич». Получение, использование и транспортировка радиоактивных материалов должны
В наборе используется два вида мышиных монокпоналы<ых антител к различным происходить в соответствии с принятыми в данной стране нормами радиационной
эпитопам его молекулы. Исследуемые образцы, контрольные и калибровочные безопасности и санитарными правилами работы с радиоактивными веществами.
пробы инкубируют в пробирках, пофытых одним видом моноклональных антител, - В лабораториях запрещается принимать пищу, курить, пользоваться косметикой.
совместно с раствором других моноклональных антител, меченных '“I. После - Не пипетировать растворы радиоактивных веществ ртом.
- Для офаничения контакта с радиоактивными материалами рекомендуется
окончания инкубации удаляют жидкое содержимое, промывают пробирки и
использовать разовые перчатки и лабораторную спецодежду.
измеряют связанную активность '“I. Концентрацию ФСГ, прямо пропорциональную - Все манипуляции с радиоактивными веществами следует проводить в специально
связанной активности, определяют методом интерполяции по калибровочной оборудованных для этого помещениях, удаленных от мест постоянного
кривой. пребывания людей.
- Радиоактивные вещества следует хранить с использованием контейнеров в
2. РЕАГЕНТЫ, ВХОДЯЩИЕ В СОСТАВ НАБОРА специально отведенных для этого местах.
Все реагенты стабильны при 2-4’С до окончания срока годности набора. Сроки годности, - Необходимо регистрировать поступление и расход радиоактивных материалов.
указанные на этикетках флаконов с реагентами, относятся толы<о к их хранению в - Лабораторное оборудование и посуду следует хранить отдельно, чтобы
лроиэводственных условиях вплоть до момента комплектации набора и не распространяются предотвратить их загрязнение радиоактивными изотопами.
налолученную заказчиком продукцию. - Любой случай радиоактивного зафязнения или исчезновения радиоактивного
Условия хранения компонентов набора после их растворения или разбавления указаны в материала должен рассматриваться в соответствии с законодателылвом.
разделе «Процедура анализа». ■ Утилизация радиоактивных отходов должна осуществляться в соответствии с
законодательством.
2.1 Набор для определения ФСГ: 100 пробирок (Кат. №2125)
4.3 Азид натрия
2.1.1 Пробирки, покрытые моноклональными антителами к ФСГ: 2 х 50 шт. Некоторые компоненты набора содержат азид натрия в качестве консерванта.
(готовы к использованию) Вступая в реакцию со свинцом, медью и латунью, азид натрия образует
2.1.2 Метка, раствор моноклональных антител к ФСГ, меченных'’’!: 1 флакон, взрывоопасные азиды металлов. Отработанные реагенты следует разбавлять
большим количеством водопроводной воды, после чего их можно сливать в
5,5 мл (готова к использованию)
канализацию.
На дату изготовления флакон содержит 370 кБк 1-иммуноглобулинов в
буфере с белком, красителем и азидом натрия (< 0.1 %, см. п. Меры 4.4 Сыворотка крови человека
предосторожности). Материал человеческого происхождения, входящий в состав компонентов набора, не
содержит антител к HIV1, HIV 2, HCV и к поверхностному антигену вируса гепатита В
2.1.3 Калибровочнь(с пробы: 6 флаконов по 1 мл (готовы к использованию) (HBsAg). Тем не менее, ни один из существующих методов анализа не может
Калибровочные пробы содержат ФСГ в диапазоне концентраций от О до гарантировать полного отсутствия инфекционных агентов в исследуемом материале.
180МЕ/Л в сыворотке крови человека (см. п. Меры предосторожности). Поэтому при работе с компонентами набора следует соблюдать необходимые меры
Точные концентрации, калиброванные по международному стандарту WHO предосторожности.
С исследуемыми образцами сыворотки крови следует обращаться как с
94/632, указаны на этикетках флаконов.
потенциально инфекционным материалом, могущим содержать вирусы СПИД и
2.1.4 Контрольная сыворотка: 2 флакона (лиофилизованные препараты) гепатита. Утилизация отходов должна осуществляться в соответствии с
Флаконы содержат сыворотку крови человека с известным содержанием законодательством.
ФСГ(см. п. Меры предосторожности). Ожидаемые диапазоны концентраций
5. ПОЛУЧЕНИЕ, ОБРАБОТКА, ХРАНЕНИЕ И РАЗВЕДЕНИЕ ОБРАЗЦОВ
указаны на дополнительном листке-вкладыше.
- Собрать кровь в чистые сухие пробирки, или пробирки с
2.1.5 Промывочный раствор (20Х): 1 флакон, 50 мл
антикоагулянтом.
Концентрированный раствор должен быть перед использованием разведен.
- Отделить сыворотку или плазму крови центрифугированием.
2.2 Набор для определения ФСГ: 400 пробирок (Кат. № 3301) - Образцы сыворотки и плазмы можно хранить при 2-8*0 в течение
2.2.1 Пробирки, покрь(тые моноклональными антителами к ФСГ: 8 х 50 шт. 24 часов. Для ^лее длительного хранения их необходимо разделить на
(готовы к использованию) аликвоты и заморозить при температуре < -18"С. Избегать повторного
замораживанияч)паивания проб.
2.2.2 Метка, раствор моноклональных антител к ФСГ, меченных'”!:
- Если концентрация ФСГ в образце превышает концентрацию
4 флакона по 5,5 мл (готова к использованию)
максимальнох калибровочной пробы, его следует разбавить нулевой
2.2.3 Калибровочные пробы: 6 флаконов по 1 мл (готовы к использованию) калибровочной пробой.
2.2.4 Контрольная сыворотка: 2 флакона (лиофилизованные препараты)
6. ПРОЦЕДУРА АНАЛИЗА
2.2.5 Промывочный раствор (20Х): 2 флакона по 50 мл.
6.1 Подготовка реагентов
3. ДОПОЛНИТЕЛЬНЫЕ МАТЕРИАЛЫ И ОБОРУДОВАНИЕ Довести все реагенты до комнатной температуры.
Помимо стандартного лабораторного оборудования необходимо иметь следующее: 6.2 Растворение контрольных сывороток
- микропипетка (100 мкл) Растворить содержимое флаконов в указанном на этикетке объеме
- полуавтоматические пипетки (50 мкл, 2 мл) дистиллированной воды. Через 30 минут аккуратно перемешать, избегая
- вихревой смеситель типа Vortex образования пены. Подготовленные к работе контрольные сыворотки
- горизонтальный или орбитальный встряхиватель можно хранить в течение 7 дней при 2-8 ’С, или разделенными на
- водоструйный насос аликвоты при < -18"С до окончания срока годности набора.
- гамма счетчик для измерения активности ’«I.
6.1.2 Приготовление промывочного раствора
4. МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ Смешать содержимое флакона с концентратом промывочного раствора и
950 мл дистиллированной воды. Подготовленный к работе промывочный
4.1 Общие замечания: раствор можно хранить при 2-8”С до окончания срока годности набора.
- Перед использованием довести реагенты до комнатной температуры.
6.2 Процедура анализа : (см. Таблица ниже приведенная).
- Не смешивать реагенты из наборов разных серий.
- Анализ калибровочных и исследуемых проб должен проводиться 7. РЕЗУЛЬТАТЫ
одновременно. Результаты рассчитывают методом интерполяции по калибровочной кривой,
Для получения воспроизводимых результатов очень важно соблюдать полученной одновременно с анализом неизвестных образцов.
рекомендуемые условия встряхивания пробирок.
- Анализ рекомендуется проводить в дубликатах. 7.1 Калибровочная кривая
- Пробирки предназначены для однократного использования. Результаты контроля качества, указанные на отдельном листке-
вкладыше, получены при построении калибровочной кривой в
PI-2125-2012-01-26
л
логарифмических координатах (сплайн-функция) со значениями скоростей 10.1.1 Аналитическая чувствительность: 0,2 МЕ/л
счета '“I в калибровочных лробах (В - Во, имл./мин.) по вертикальной оси и
10.1.2 Функциональная чувствительность: 0,5 МЕ/л
концентрацией ФСГ по горизонтальной оси калибровочного графика (МЕ/л).
Другие методы обсчета могут давать несколько отличающиеся результаты. 10.2 Специфичность
Антитела, используемые в данном наборе, имеют высокую специфичность
Общий счет: 127 770 имл./мин. к ФСГ. Перекрестная реакция с близкородственными структурными
Калибровочные ФСГ(МЕ/п) ИМП./МИН. ВП{%) В-Во, соединениями (ЛГ, ТТГ, ХГЧ) чрезвычайно мала.
пробы (п-3) имп^мин.
10.3 Воспроизводимость
О 130 0,10
0,53 324 0,25 194 10.3.1 Внутри анализа
2,60 1 179 0,92 1049 Анализ образцов проводили в 8 релликатах в пределах одной серии
15,7 6 330 4,95 6200 определений. Коэффициент вариации измеренных уровней ФСГ в
61,0 22118 17,3 21 988 сыворотке крови не превышал 2,6%.
180 52660 41,2 52530 10.3.2 Между анализами
(Прииер типичной калибровочной кривой. Не испопыовть дня обсчета результатов.) Анализ образцов в дубликатах проводили в 38 различных сериях
7.2. Образцы определений. Коэффициент вариации измеренных уровней ФСГ в
Для каждого образца найти на вертикальной оси калибровочного графика сыворотке крови не превышал 6,3 %.
значения скоростей счета (В-Во, имл./мин.), а на горизонтальной оси 10.4 Точность
соответствующую концентрацию ФСГ в МЕ/п. Результаты, полученные для
10.4.1 Тест на разведение
разбавленных проб, следует умножить на фактор разведения.
Образцы сывороток крови с высоким уровнем ФСГ серийно разводили
8. КОНТРОЛЬ КАЧЕСТВА нулевой калибровочной пробой. Рассчитанные соотношения ожидаемых и
В соответствии с требованиями Good laboratory practices для контроля качества измеренных концентраций подчиняются следующему уравнению
проводимых исследований следует регулярно использовать контрольные образцы, линейной регрессии:
которые должны проходить те же стадии анализа, что и анализируемые пробы. у = 1.04х + 0.24;г* = 0.98(п = 24)
Результаты контроля качества рекомендуется обрабатывать с помощью
специальных статистических методов. где X - измеренное значение концентрации
В случае серьезного повреждения упаковки, или в случае несоответствия у - ожидаемое значение концентрации.
полученных результатов аналитическим характеристикам (см.л.Ю) обратитесь, 10.4.2 Тест на «открытие» стандартной добавки
пожалуйста, к вашему дистрибьютору или к нашим специалистам: Известные количества ФСГ добавляли в образцы сыворотки крови с
Тел.:-*420 267 008 391; Факс: -b420 267 008 385; низким содержанием гормона. Измеренные результаты подчинялись
E-mail: imunochem@b)ecknian.com Тел .:-i-7 495 9371664; следующему уравнению линейной регрессии:
Факс: +7 495 254 64 07; E-mail: tieckman.ru@beckman.com
у = 1.00х + 0.12;г^ = 0.99(п = 15)
9. ОЖИДАЕМЫЕ ЗНАЧЕНИЯ
В каждой лаборатории рекомендуется установить собственные уровни ФСГ, где X - измеренные значения концентраций
соответствующие нормальным. Приведенные ниже значения (МЕ/л) являются у - ожидаемые значения концентраций
ориентировочными. 10.5 Диапазон определений (от аналитической чувствительности до значения
наивысшей калибровочной пробы): 0,2 -180 МЕ/п
п Минимум 5% пер- Медиана 95% пер- Максимум 11. ОГРАНИЧЕНИЯ МЕТОДА
сентиль сентиль Нарушение методики проведения анализа может привести к искажению результатов
Мужчины 167 1,3 2,2 5,1 10 11,5 исследования.
Женщины Результаты определения должны быть интерпретированы в свете общей клинической
Фолликулярная фаза 122 2,2 3,4 6,5 12 15 картины пациента, включая анамнез, данные других тестов и подходящую иную
Преовуляторная фаза 36 2,6 3,0 11,2 71 100 информацию.
Лютеиновая фаза 81 1,3 1,7 4,0 9 10 При выполнении анализов с использованием антител возможна интерференция
гетерофильными антителами в пробе пациента. У пациентов, имеющих постоянный контакт
Постменопауза 20 27 32 72,2 103 129
с животными или проходивших иммунотерапию или диагностические процедуры с
Концентрации ФСГ в сыворотке крови лрелубертатных детей не превышают 1 МЕ/л. использованием иммуноглобулинов или их фрагментов, могут вырабатываться антитела
(т.е. НАМА), которые влияют на результаты иммунного анализа.
10. АНАЛИТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ Влияние этих антител может привести к получению ошибочных результатов. Тщательно
(более подробная информация приведена в разделе “APPENDIX" проверяйте результаты анализов пациентов с подозрением на наличие этих антител.
10.1 Чувствительность
6.2 Процедура анализа
Стадия 1 Стадия 2 Стадия 3
Внесение реагентов * Инкубация Измерение результатов
В покрытые антителами пробирки Инкубировать 90 мин. Тщательно удалить содержимое
последовательно внести: при 18-25°С и постоянном пробирок (кроме проб «I»).
встряхивании (>350 осц./мин.)
-100 мкл калибровочных, Промыть пробирки 2 раза
контрольных и анализируемых проб или по 2 мл промывочного раствора.
и
в течение ночи Измерить связанную (В) и общую (Т)
- 50 мкл метки.
(18 часов) при 18-25°С активность (имп./мин.)
Перемешать. без встряхивания. в течение 1 минуты.
* В две дополнительные пробирки внести по 50 мкл метки для определения общей активности (Т)'25|.
IMMUNOTECH s.r.o. - Radiovi 1 -102 27 Prague 10 - Czect) Republic - Phone. ■ь420-272017444 - Fax: -M20-272017385
d
PI-2125-2012-01-26
Инструкция no
BECKMAN использованию
COULTER.
RUSSIAN
IVD
PR O LAC TIN IRM A KIT; IM2121 - IM3303
НАБОР ДЛЯ ИММУНОРАДИОМЕТРИЧЕСКОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ С€
ПРОЛАКТИНА В СЫВОРОТКЕ И ПЛАЗМЕ КРОВИ ЧЕЛОВЕКА
1. ПРИНЦИП МЕТОДА - водоструйный насос
- гамма счетчик для измерения активности
Иммунорадиометрическое определение пролактина относится к анализам типа
Для осаждения макропролактина (при необходимости)
«сэндвич». В наборе используются два вида мышиных моноклональных антител
- микропипетка(400 мкл)
к различным эпитопам пролактина. Набор определяет биологически активную, - полуавтоматическая пипетка (400 мкл)
мономерную форму пролактина(22-23 кДа), а также две другие формы - полипропиленовые или стеклянные пробирки
пролактина: димерную(50-60 кДа) и высокомолекулярный (или макрспролакгин; - преципитирующий реагент (поставляется по запросу: кат. No. А09775).
>160 кДа). Набор позволяет определять пролактин после осаждения - центрифуга с охлаждением (3000 д).
макропролакгина.
4. МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ
Иаледуемые образцы, контрольные и калибровочные пробы инкубируют в
пробирках, пофытых одним видом моноклональных антител, совместно с 4.1 Общие замечания:
раствором других моноклональных антител, меченных '«I. После окончания - Перед использованием довести реагенты до комнатной температуры.
инкубации удаляют жидкое содержимое, промывают пробирки и измеряют - Не смешивать реагенты из наборов разных серий.
связанную активность '“I. Концентрацию пролактина, прямо пропорциональную - Анализ калибровочных и исследуемых проб должен проводиться одновременно.
- Для получения воспроизводимых результатов очень важно соблюдать
связанной акгивности, определяют методом интерполяции по калибровочной
рекомендуемые условия встряхивания пробирок.
кривой. - Анализ рекомендуется проводить в дубликатах.
- Пробирки предназначены для однократного использования.
2. РЕАГЕНТЫ, ВХОДЯЩИЕ В СОСТАВ НАБОРА
4.2 Основные правила обращения с радиоактивными веществами.
Все реагенты стабильны при 2-8“С до окончания срока годности набора,
Получение, использование и транспортировка радиоактивных материалов должны
указанного на этикетке. Сроки годности, указанные на этикетках флаконов с происходить в соответствии с принятыми в данной стране нормами радиационной
реагентами, относятся только к их хранению в производственных условиях безопасности и санитарными правилами работы с радиоактивными веществами.
вплоть до момента комплектации набора и не распространяются наполученную - В лабораториях запрещается принимать пищу, курить, пользоваться косметикой.
заказчиком продукцию. - Не пипетировать растворы радиоактивных веществ ртом.
Условия хранения компонентов набора после их растворения или разбавления - Для офаничения контакта с радиоактивными материалами рекомендуется
использовать разовые перчатки и лабораторную спецодежду.
указаны в разделе «Процедура анализа».
- Все манипуляции с радиоактивными веществами следует проводить в специально
2.1 Набор для определения пролактина: 100 пробирок (Кат. № 2121) оборудованных для этого помещениях, удаленных от мест постоянного
пребывания людей.
2.1.1 Пробирки, покрытые моноклональными антителами к пролактину:
- Радиоактивные вещества следует хранить с использованием контейнеров в
2 X 50 шт. (готовы к использованию) специально отведенных для этого местах.
2.1.2 Метка, раствор моноклональных антител к пролактину, меченных’’‘1: • Необходимо регастрировать поступление и расход радиоактивных материалов.
1 флакон, 55 мл (готова к использованию) - Лабораторное оборудование и посуду следует хранить отдельно, чтобы
На дату изготовления флакон содержит 370 кБк 1-иммуноглобулинов в предотвратить их загрязнение радиоактивными изотопами.
- Любой случай радиоактивного зафязнения или исчезновения радиоактивного
буфере с бычьим сывороточным альбумином, красителем и азидом
материала должен рассматриваться в соответствии с законодателы:твом,
натрия (< 0.1 %, см. п. Меры предосторожности), - Утилизация радиоактивных отходов должна осуществляться в соответствии с
2.1.3. Калибровочнь(е пробы: 5 флаконов (лиофилизованные препараты) и законодательством.
1 флакон с 5 мл «нулевой» калибровочной пробы (готова к 4.3 Азид натрия
использованию) Некоторые компоненты набора содержат азид натрия в качестве консерванта.
Калибровочные пробы содержат пролактин в диапазоне концентраций от Вступая в реакцию со свинцом, медью и латунью, азид натрия образует
0 до 180 нг/мл в лошадиной сыворотке крови с азидом натрия (< 0.1 %, см. взрывоопасные азиды металлов. Отработанные реагенты следует разбавлять
большим количеством водопроводной воды, посла чего их можно сливать в
п. Меры предосторожности). Точные концентрации пролактина,
канализацию.
калиброванные по международному стандарту WHO 3rd 18 84/500,
4.4 Сыворотка крови человека
указаны на этикетках флаконов.
Материал человеческого происхождения, входящий в состав компонентов набора, не
2.1.4 Контрольная сыворотка: 2 флакона (лиофилизованные препараты) содержит антител к HIV1, HIV 2, HCV и к поверхностному антигену вируса гепатита В
Флаконы содержат лиофилизованную сыворотку крови человека (см. п. (HBsAg). Тем не менее, ни один из существующих методов анализа не может
Меры предосторожности) с известным содержанием пролактина. гарантировать полного отсутствия инфекционных агентов в исследуемом материале.
Ожидаемый диапазон концентраций указан на дополнительном листке- Поэтому при работе с компонентами набора следует соблюдать необходимые меры
предосторожности.
вкладыше
С исследуемыми образцами сыворотки крови следует обращаться как с
2.1.5 Промывочный раствор (20Х): 1 флакон, 50 мл потенциально инфекционным материалом, могущим содержать вирусы СПИД и
Концентрированный раствор должен быть разведен перед использо­ гепатита. Утилизация отходов должна осуществляться в соответствии с
ванием. законодательством.
2.2 Набор для определения пролактина; 400 пробирок (Кат. № 3303) 5. ПОЛУЧЕНИЕ, ОБРАБОТКА, ХРАНЕНИЕ И РАЗВЕДЕНИЕ ОБРАЗЦОВ
2.2.1 Пробирки, покрытые моноклональными антителами к пролактину: - Собрать кровь в чистые сухие пробирки, или пробирки с антикоагулянтом.
8 X 50 шт. (готовы к использованию) - Отделить сыворотку или плазму крови центрифугированием.
- Образцы сыворотки и плазмы можно хранить при 2-8'С в течение 24 часов. Для
2.2.2 Метка, раствор моноклональных антител к пролактину, меченных *^‘1: более длительного хранения их необходимо разделить на аликвоты и заморозить
4 флакона по 55 мл (готова к использованию) при температуре <-18*С, Избегать повторного замораживания-опаивания проб,
- Если концентрация пролактина в образце превышает максимальную
2.2.3 Калибровочные пробы: 5 флаконов (лиофилизованные препараты) и
калибровочную пробу, его следует разбавить нулевой калибровочной пробой.
1 флакон с 5 мл «нулевой» калибровочной пробы (готова к
использованию) 6. ПРОЦЕДУРА АНАЛИЗА
2.2.4 Контрольная сыворотка: 2 флакона (лиофилизованные препараты) 6.1 Подготовка реагентов
2.2.5 Промывочный раствор (20Х): 2 флакона по 50 мл. Довести все реагенты до комнатной температуры.
6.1.1 Растворение калибровочных проб и контрольных сывороток
3. ДОПОЛНИТЕЛЬНЫЕ МАТЕРИАЛЫ И ОБОРУДОВАНИЕ
Растворить содержимое флаконов в указанном на этикетке объеме
Помимо стандартного лабораторного оборудования необходимо иметь дистиллированной воды. Через 30 минут аккуратно перемешать, избегая
следующее: образования пены. Подготовленные к работе контрольные и
- микропипетка (50 мкл) калибровочные пробы можно хранить в течение 1 недели при 2-8 'С, или
- полуавтоматические пипетки (500 мкл, 2 мп)
разделенными на аликвоты при <-18'С до окончания срока годности
- вихревой смеситель типа Vortex
- горизонтальный или орбитальный встряхиватель набора.
PI-2121-12-01-26
6.1.2 Приготовление промывочного раствора 10.1.2 Функциональная ч вствитепьность: 0,65нг/мп
Смешать содержимое флакона с концентратом промывочного раствора и 10.2 Специфичность
950 мл дистиллированной воды. Подготовленный к работе промывочный Антитела, используемые в данном наборе, имеют высокую специфичность к
раствор можно хранить при 2-8*С до окончания срока годности набора. пролактину Перекрестная реакция с близкородственными структурными
соединениями (ЛГ, ФСГ, ТТГ, ХГЧ, СТГ, ПЛЧ) очень мала.
6.2 Процедура анализа: (см. Таблицу приведенную ниже).
10.3 Воспроизводимость
7. РЕЗУЛЬТАТЫ 10.3.1 Внутри анализа
Результаты рассчитывают методом интерполяции по калибровочной фивой, Анализ образцов проводили в 10 репликатах в пределах одной серии определений.
полученной одновременно с анализом неизвестных образцов. Коэффициент вариации измеренных уровней пролакгина в сыворотке крови не
превышал 2,8%.
7.1 Калибровочная кривая
10.3.2 Между анализами
Результаты, приведенные в этой инструкции, получены при построении
Анализ образцов в дубликатах проводипи а 9 различных сериях определений.
калибровочной кривой в линейных координатах с соотношением ВЯ {%) Коэффициент вариации измеренных уровней пропактина в сыворотке крови не
или В/Вш, {%) по вертикальной оси и концентрацией пролакгина в нг/мл превышал 8,0 %.
по горизонтальной оси калибровочного фафика. Другие методы обсчета 10.4 Точность
могут давать несколько отличающиеся результаты.
10.4.1 Тест на разведение
Общий счет: 125 024 имп./мин. Образцы сыворотки крови с высоким уровнем пропактина серийно разводили
Пролактин Ими ./мин. нупевой калибровочной пробой. Процент 'открытия' составил 83% • 133%.
Кал. пробы ВЯ (%) В/Вм^ (%)
(иг/мп) ("=3) 10.4.2 Тест на «открытие» стандартной добавки
О 103 0,08 0,26 Известные количества пропактина добавляли в образцы сыворотки с низкой его
1,9 502 0,40 1,28 концентрацией. Измеренная величина 'открытия' составила от 85%до 105%.
9,5 2 249 1,80 5,75 10.5 Диапазон определений (от аналитической чувствительности до значения
43 11812 9,45 30.2 наивысшей калибровочной пробы): 0,5 -180 нг/мл.
86 23972 19.2 61.2
11. ОГРАНИЧЕНИЯ МЕТОДА
180 39150 31.3 100 Нарушение методики проведения анализа может привести к искажению результатов
(Пример типичной калибровочной кривой. Не испопьзовать дпя обсчета результатов.) исследования.
72. Образцы Результаты определения должны быть интерпретированы в сеете общей клинической
Для каждого образца найти на вертикальной оси калибровочного графика картины пациента, включая анамнез, данные других тестов и подходящую иную
информацию
значение ВЯ {%) или В/В™с.(%), а на горизонтальной оси
В данном наборе используются оптимальные условия проведения анализа, позволяющие
соответствующую концентрацию пролакгина в нг/мл или мМЕ/л (1 нг =
минимизировать «хук-эффект». Даже чрезвычайно высокие концентрации пропактина,
30,3 мкМЕ). Результаты, полученные для разбавленных проб, следует такие как 15000 нг/мл, дают ответ, больший, чем в максимальной калибровочной пробе.
умножить на фактор разведения. Образцы с высокой концентрацией пропактина, выходящей за предепы калибровочной
кривой, можно развести «нулевой калибровочной пробой (разбавителем для образцов) и
8. КОНТРОЛЬ КАЧЕСТВА провести анализ повторно. Значения, полученные для разбавленных образцов, следует
В соответствии с требованиями Good laboratory practices для контроля «ачестоа проводимых умножить на фактор разведения.
исследований следует регулярно использовать контрольные образцы, которые должны При выполнении анализов с использованием антител возможна интерференция
проходить те же аадии анализа, что и анализируемые пробы. Результаты контроля гетерофильными антителами в пробе пациента. У пациентов, имеющих постоянный контакт
качества рекомендуется обрабатывать с помощью специальных статистических методов. с животными или проходивших иммунотерапию или диагтгостические процедуры с
В случае серьезного повреждения упаковки, или в случав несоответствия полученных использованием иммуноглобулинов или их фрапиентов, могут вырабатываться антитела
результатов аналитическим характеристикам (см.п.Ю) обратитесь, пожалуйста, к вашему (I.e. HAMA), которые влияют на результаты иммунного анализа.
дистрибьютору или к нашим специалистам: Влияние этих антител может привести к получению ошибочных результатов. Тщательно
Тел.:+420 272 017 391; Факс: <420 272 017 385; проверяйте результаты анализов пациентов с подозрением на наличие этих антител.
E-mail: innmOtfmailWClWian.Wm Ten.:-f7 495 937 1664; Иногда, уровень пролакгина значительно повышен при высокой концентрации
Факс: +7 495 254 64 07; E-mail: bed<man,ru6)l)eckman.com макропролактина. В этих случаях, повышенная концентрация пролакгина может быть
выявлена у пациентов без клинических проявлений гиперпролактинемии. Определение
9. ОЖИДАЕМЫЕ ЗНАЧЕНИЯ пропактина после осаждения макропропактина может помочь выявить такие случаи - см. §.
В каждой лаборатории рекомендуется установить собственные уровни 12.
пролакгина, соответствующие нормальным. Приведенные ниже значения 12. ПОДГОТОВКА ОБРАЗЦОВ С ПРЕЦИПИТИРУЮЩИМ РЕАГЕНТОМ - ПРИ
являются ориентировочными. НЕОБХОДИМОСТИ
п Минимум 5% пер- Медиана 95% пер- Максимум В полипропипеновые или стеклянные пробирки внести по 400 мкл анализируемых образцов
и контрольных сывороток, добавить к ним 400 мкл преципитирующего реагента
сентиль сентиль
(поставляется по запросу; кат. № А 09775).
Мужчины 185 1,0 2,8 5,0 11,0 18,0
Женщины Не обрабатывать прецилитирующим реагентом калибровочные пробы.
Менструальный цикл*144 1,0 3,7 8,0 17,2 27,0 Перемешать на встряхиватепе типа Vortex, оставить на 30 мин. при комнатной температуре,
Постменопауза 18 2,0 3,3 5,8 10,6 13,0 и затем центрифугировать 15 мин. при 3000 g и 4*0.
■ Наиболее высокие уровни наблюдаются в период овуляции. В супернатанте проводить опредепенив таким же образом, как и в исследуемых образцах,
см. § 6.
10. АНАЛИТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ Необходимо полученную концентрацию умножить на 2, чтобы учесть развеление образцов.
Около 23 % (10-42 %) мономерного пропактина осаждается с прецилитирующим реагентом.
(Более подробная информация приведена в разделе “APPENDIX" Если концентрация пропактина (поспе коррекции фактором разведения 2) менее 50 % от
10.1 Чувствительность концентрации в образцах до осаждения, существует высокая вероятность наличия
макропролактина.
10.1.1 Аналитическая чувствительность: 0,5 нг/мл
6.2 Процедура анализа
Стадия 1 Стадия 2 Стадия 3
Внесение реагентов * Инкубация Измерение результатов
В покрытые антителами про­ Тщательно удалить содержимое
бирки последовательно внести: Инкубировать пробирок (кроме проб «Т»),
1 час
- 50 мкл калибровочных, Промыть пробирки два раза
при 18-25Х и
контрольных и анализируемых по 2 мл промывочного раствора.
постоянном встряхивании
проб и
(>350 осц./мин.). Измерить связанную (В) и общую
- 500 мкл метки. активность (Т), имп./мин.
Перемешать. в течение 1 мин.
* В две дополнительные пробирки внести по 500 мкл метки для оценки общей активности (пробы «Т»).
m l IMMUNOTECH s.r.o. - RadiovS 1 -102 27 Prague 10 - Czech Republic - Phone. ^420-272017444 - Fax: -И20-272017385
PI-2121-2012-01-26
Инструкция no
IMMUNOTECH
A BPCKMAN COULTER COMPANY использованию
RUSSIAN
IVD RIA Testosterone, directly VIM1119 '
M S НАБОР ДЛЯ РАДИОИММУНОЛОГИЧЕСКОГО IN VITRO ОПРЕДЕЛЕНИЯ ОБЩЕГО
С€
\ 134851 ТЕСТОСТЕРОНА В СЫВОРОТКЕ И ПЛАЗМЕ КРОВИ ЧЕЛОВЕКА
ce rt if ie d
1. ПРИНЦИП МЕТОДА
- Лабораторное оборудование и посуду следует хранить отдельно, чтобы
Радиоиммунологическое определение тестостерона относится к конкурентным предотвратить их зафязнение радиоактивными изотопами.
видам анализа. Исследуемые образцы, контролы<ые и калибровочные пробы - Любой случай радиоактивного зафязнения или исчезновения
инкубируют с меткой, '»1-тестостероном, в пробирках, покрытых антителами. радиоактивного материала должен рассматриваться в соответствии с
После окончания инкубации удаляют жидкое содержимое пробирок и измеряют законодательством.
связанную активность '“I. Концентрацию тестостерона определяют методом - Утилизация радиоактивных отходов должна осуществляться в
интерполяции по калибровочной кривой. соответствии с законодательством,
2. РЕАГЕНТЫ, ВХОДЯЩИЕ В СОСТАВ НАБОРА 4.3 Азид натрия
Все реагенты стабильны при 2-8°С до окончания срока годности набора. Некоторые компоненты набора содержат азид натрия в качестве
консерванта. Вступая в реакцию со свинцом, медью и латунью, азид
2.1 Пробирки, покрытые антителами к тестостерону: 2 х 50 шт (готовы к натрия образует взрывоопасные азиды металлов. Отработанные
использованию). реагенты следует разбавлять большим количеством водопроводной воды,
2.2 Метка, '^Ч-тестостерон: 1 флакон 55 мл (готова к использованию) после чего их можно сливать в канализацию.
На дату изготовления флакон содержит 185 кБк '“1-тестостерона в буфере 4.4 Сыворотка крови человека
с желатином и красителем Материал человеческого происхождения, входящий в состав компонентов
2.3 Калибровочные пробы: 6 флаконов по 0.5 мл (готовы к набора, не содержит антител к HIV 1, HIV 2, HCV и к поверхностному
использованию) антигену вируса гепатита В (HBsAg). Тем не менее, ни один из
Калибровочные пробы содержат тестостерон в диапазоне концентраций существующих методов анализа не может гарантировать полного
от О до 20 нг/мл (от О до 69 нмоль/л) в сыворотке крови человека с азидом отсутствия инфекционных агентов в исследуемом материале. Поэтому
натрия (<0,1 %; см. п. Меры предосторожности). Точные концентрации при работе с компонентами набора следует соблюдать необходимые
указаны на этикетках флаконов. Значения калибровочных проб были меры предосторожности.
получены с помощью внутреннего стандарта. С исследуемыми образцами сыворотки крови следует обращаться как с
2.4 Контрольная сыворотка: 1 флакон 0.5 мл (готова к использованию) потенциально инфекционным материалом, могущим содержать вирусы
Флакон содержит известное количество тестостерона в сыворотке крови СПИД и гепатита. Весь использованный материал должен быть уничтожен
по действующим государственным правилам и инструкциям.
человека с азидом натрия (<0,1%; см.п. Меры предосторожности).
ВниманОижеи: дТаееммпыейр адтиаупрааз оин с ркоонкиц егнотдрнаоцситйи у,к уакзаазна ннан ыэтеи кнеат кэте фиклеаткокнаах. флаконов 5. СБОР, ОБРАБОТКА, ХРАНЕНИЕ И РАЗВЕДЕНИЕ ОБРАЗЦОВ
с реагентами, относятся только к их хранению в производственных условиях - Собрать кровь в чистые сухие пробирки, или пробирки с ЭДТА, или
вплоть до момента комплектации набора и не распространяются на гепарином.
полученную заказчиком продукцию. - Отделить сыворотку или плазму крови центрифугированием.
- Образцы сыворотки и плазмы можно хранить при 2-8°С в течение 24
3. ДОПОЛНИТЕЛЬНЫЕ МАТЕРИАЛЫ И ОБОРУДОВАНИЕ часов. Для более длительного хранения их необходимо разделить на
аликвоты и заморозить при температуре < -IS'C. Избегать повторного
Помимо стандартного лабораторного оборудования необходимо иметь
замораживанияч)ттаивания проб.
следующее:
- Если концентрация тестостерона в образце превышает концентрацию в
- микропипетка(50 мкл)
максимальной калибровочной пробе, его следует разбавить сывороткой
- полуавтоматическая пипетка (500 мкл)
с низким содержанием гормона (<0,1 нг/мл).
- вихревой смеситель типа Vortex
- водяная баня на 37*С 6. ПРОЦЕДУРА АНАЛИЗА: (см. Таблицу на следующей странице).
- водоструйный насос
- гамма-счетчик для измерения активности '»1. 7. РЕЗУЛЬТАТЫ
Результаты рассчитывают методом интерполяции по калибровочной кривой,
4. МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ
полученной одновременно с анализом неизвестных образцов.
4.1 Общие замечания:
7.1 Калибровочная кривая
- Перед использованием довести все реагенты до комнатной
Результаты контроля качества набора, указанные на отдельном листке-
температуры.
вкладыше, получены при построении калибровочной кривой в
- Не смешивать реагенты из наборов разных серий.
лолулогарифмичеаих координатах («сплайн-функция) с соотношением
- Анализ калибровочных и неизвестных проб должен проводиться
ВД' (%) или В/ВО (%) по вертикальной оси и концентрацией тестостерона
одновременно.
(нг/мл) по горизонтальной оси калибровочного графика. Другие методы
- Анализ рекомендуется проводить в дубликатах.
обсчета могут давать несколько отличающиеся результаты.
- Пробирки толы<о для одноразового применения.
Общий счет: имп./мин. 70026
4.2 Основные правила обращения с радиоактивными веществами
Калибровочн Тестостерон Имп^мин.
Получение, использование и транспортировка радиоактивных материалов ВЯ(%) В/ВО (%)
ые пробы (нг/мп) (п=3)
должны происходить в соответствии с принятыми в данной стране
нормами радиационной безопасности и санитарными правилами работы с 0 0 37791 54 100
радиоак-тивными веществами. 1 0,1 32539 46,5 86,1
- В лабораториях запрещается принимать пищу, курить, пользоваться 2 0,4 24736 35,3 65,5
косметикой. 3 1 19089 27,3 50,5
- Не липетировать растворы радиоактивных веществ ртом. 4 4,4 10831 15,5 28,7
- Для ограничения контакта с радиоактивными материалами 5 23 5075 7,25 13,4
рекомендуется использовать разовые перчатки и лабораторную (Притр типичной капибровочноО кривой. Не использовать для обсчета результатов.)
спецодежду. 72 Образцы
- Все манипуляции с радиоактивными веществами следует проводить в Для каждого образца найти на вертикальной оси калибровочного фафика
специально оборудованных для этого помещениях, удаленных от мест значение В/Т (%) или В/ВО (%), а на горизонтальной оси соответствующую
постоянного пребывания людей. концентрацию тестостерона в нг/мл.
- Радиоактивные вещества следует хранить с использованием Для перевода концентраций из нг/мл в нмоль/л нужно умножить
контейнеров в специально отведенных для этого местах. полученный результат на 3.47
- Необходимо регистрировать поступление и расход радиоактивных
материалов.
PI-1119-2011-03-29_RU 1/4
8. КОНТРОЛЬ КАЧЕСТВА 10.4.2 Тест на открытие стандартной добавки
В соответствии с требованиями Good laboratory practices для контроля качества В образцы с низкой концентрацией гормона вносили известные
проводимых исследований следует регулярно использовать контрольные количества тестостерона. Процент «открытия» составил от 91 %до 117%.
образцы, которые должны проходить те же стадии анализа, что и 10.5 Диапазон определений (от аналитической чувствительности до значения
анализируемые пробы. Результаты контроля качества рекомендуется наивысшей калибровочной пробы): 0,025 - 20 ng/mL.
обрабатывать с помощью специальных статистических методов.
11. ОГРАНИЧЕНИЯ МЕТОДА
В случае серьезного повреждения упаковки, или в случае несоответствия
полученных результатов аналитическим характеристикам (см.п.Ю) обратитесь, Нарушение методики проведения анализа может привести к искажению
пожалуйста, к нашим специалистам: Тел.:+420 267 008 391; результатов исследования. Результаты определения должны быть
интерпретированы в свете общей клинической картины пациента, включая
Факс: +420 267 008 385; e-mail: imunochem@beckman.com
Тел.:+7 095 9371664; Факс: +7 095 254 64 07; e-mail: beckman.ru@beckman.com анамнез, данные других тестов и подходящую иную информацию.
При выполнении анализов с использованием антител возможна интерференция
9. ОЖИДАЕМЫЕ ЗНАЧЕНИЯ гетерофильными антителами в пробе пациента. У пациентов, имеющих
В каждой паборатории рекомендуется установить собственные уровни постоянный контакт с животными или проходивших иммунотерапию или
тестостерона, соответствующие нормальным. Приведенные ниже значения диагностические процедуры с использованием иммуноглобулинов или их
являются всего лишь ориентировочными: фрагментов, могут вырабатываться антитела (т.е. НАМА), которые влияют на
Минимум Максимум результаты иммунного анализа.
n Возраст
(нг/мл) (нг/мл) Влияние этих антител может привести к получению ошибочных результатов.
Мужчины 50 18-81 3,0 12 Тщательно проверяйте результаты анализов пациентов с подозрением на
Женщины 115 18-64 0,07 0,65 наличие этих антител.
10. АНАЛИТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ 12. РЕАГЕНТЫ, ПОСТАВЛЯЕМЫЕ ПО ОТДЕЛЬНОМУ ЗАПРОСУ
(более подробная информация приведена в разделе “APPENDIX”) Буфер для разведения сыворотки: 1 флакон, 5 мл (готов к
использованию).
10.1 Чувствительность: 0,025 нг/мл
Поставляется по дополнительному запросу: кат.№ IM2007.
10.2 Специфичность - Применение см. § 5.
Антитела, используемые в данном наборе, обладают высокой - Данный реагент можно использовать при работе с набором RIA
специфичностью к тестхтерону. Перекрестная реакция с Testosterone {кат.№ IM1119) любой серии.
бпизкородственными стероидами (5а-дигидротестостерон, - Флакон содержит сыворотку крови человека с азидом натрия (<0,1%;
д4-андростендион и др.). см.п. И^еры предосторожности).
10.3 Воспроизводимость - В начале необходимо опредепить эндогенное содержание тестостерона
в данном растворе буфера. Далее провести отсчет данной концентрации
10.3.1 Внутри анализа
от полученного результата разведенного образца, прежде чем результат
Анапиз образцов проводили в 10 репликатах в пределах одной серии
умножить на фактор разведения. Это важно особенно в случае
определений. Коэффициент вариации измеренных уровней тестостерона
образцов, у которых измеренная концентрация разведенного образца
не превышал 14,8 %.
близка двойному количеству концентрации тестостерона в буфере.
10.3.2 Между анализами - Неиспользованный реагент стабилен при температуре <-18°С до
Анализ образцов в дубликатах проводили в 10 различных сериях окончания срока годности, указанного на этикетке флакона. После
определений. Коэффициент вариации измеренных уровней тестхтерона вскрытия флакона раствор можно хранить в течение одной недели при
не превышал 15%. 2-8*С или его разделить на аликвоты и хранить при температуре <-18'С
10.4 Точность до окончания срока годности, указанного на этикетке фпакона.
10.4.1 Тест на разведение
Образцы с высокой концентрацией тестостерона серийно разводили
сывороткой крови с низким содержанием гормона. Процент «открытия»
составил от 83 % до 129%.
6. Процедура АНАЛИЗА
Стадия 1 Стадия 2 Стадия 3
Внесение реагентов * Инкубация Измерение результатов
В покрытые антителами
пробирки последовательно
внести: Тщательно удалить содержимое
Закрыть пробирки. всех пробирок
- 50 мкл калибровочных, (кроме проб «Т»).
контрольных и анализируемых Инкубировать 3 часа
проб при 37“С Измерить связанную (В) и
и на водяной бане. общую (Т) активность ^25| в
- 500 мкл метки. течение 1 мин.
Перемешать.
' В две дополнительные пробирки внести по 500 мкл метки для оценки об1цей активности ''25| (пробы «Т»),
1М IMMUNOTECH SAS -130 av. de Lattre de Tassigny - B.P.177 -13276 Marseille Cedex 9 France - Тёк (33) 4 91 17 27 00 - Fax : (33) 4 91 41 43 58
PI-1119-2011-03-29_RU 2/4
Инструкция no
IMMUNOTECH
A BECKMAN COULTER COMPANV использованию
RUSSIAN
IVD
RIA P R O G E S TE R O N E IM1188
Ш Я Ж ? НАБОР для РАДИОИММУНОЛОГИЧЕСКОГО IN VITRO ОПРЕДЕЛЕНИЯ С€
Si 13485
ПРОГЕСТЕРОНА В СЫВОРОТКЕ И ПЛАЗМЕ КРОВИ ЧЕЛОВЕКА
c er t i f ie d
1. ПРИНЦИП МЕТОДА
- Лабораторное оборудование и посуду следует хранить 0тделы(0, чтобы
предотвратить их зафязнение радиоактивными изотопами.
Радиоиммунологическое определение прогестерона относится к конкурентным - Любой случай радиоактивного зафязнения или исчезновения радиоактивного
видам анализа. Исследуемые образцы и калибровочные пробы инкубируют с материала должен рассматриваться в соответствии с законодательством.
прогестероном, меченным '»1, в пробирках, покрытых антителами. После - Утилизация радиоактивных отходов должна осуществляться в соответствии с
инкубации удаляют жидкое содержимое пробирок и измеряют связанную законодательством.
активность'“1. Концентрацию прогестерона в исследуемых образцах определяют 4.3 Азид натрия
по калибровочной кривой методом интерполяции. Некоторые компоненты набора содержат азид натрия в качестве
Калибровочные консерванта. Вступая в реакцию со свинцом, медью и латуныо, азид
натрия образует взрывоопасные азиды металлов. Отработанные
2. РЕАГЕНТЫ, ВХОДЯЩИЕ В 2 С -Ъ О ° С С ТАВ НАБОРА реагенты следует разбавлять большим количеством водопроводной воды,
Все реагенты стабильны при до окончания срока годности, указанного на после чего их можно сливать в канализацию.
этикетке набора.
4.4 Сыворотка крови человека
2.1 Пробирки, покрытые антителами к прогестерону: 2 х 50 шт. {готовы к Материал человеческого происхождения, входящий в состав компонентов
использованию). данного набора, не содержит антител к HIV 1, HIV 2, HCV, а также к
2.2 Метка,’’Ч-лрогестерон: 1 флакон, 55 мл (готова к использованию). поверхностному антигену вируса гепатита В (HBsAg). Однако ни один из
На дату изготовления флакон содержит 185 кБк ’«|-прогестерона в существующих методов анализа не может гарантировать полного
белковом буферном растворе с азидом натрия (<0,1%; отсутствия инфекционных агентов в исследуемом материале. Поэтому
см. п. Меры предосторожности. при работе с компонентами набора следует соблюдать необходимые
меры предосторожности.
2.3 Калибровочные пробы: 6 флаконов по 0,5 мл (готовы к
С исследуемыми образцами сыворотки крови следует обращаться как с
использованию)
потенциально инфекционным материалом, могущим содержать вирусы
Калибровочные пробы содержат прогестерон в диапазоне концентраций
СПИД и гепатита. Весь использованный материал должен быть уничтожен
от О до 50 нг/мл в сыворотке крови человека с азидом натрия (<0,1%;
по действующим государственным правилам и инструкциям.
см. п. Меры предосторожности). Точные концентрации, калиброванные по
стандарту BCR 347, указаны на этикетках флаконов. 5. ПОЛУЧЕНИЕ, ОБРАБОТКА, ХРАНЕНИЕ И РАЗВЕДЕНИЕ ОБРАЗЦОВ
2.4 Контрольная сыворотка: 1 флакон, 0,5 мл (готова к использованию). - Собрать кровь в чистые сухие пробирки, или пробирки, содержащие
Флакон содержит сыворотку крови с известным содержанием гепарин или ЭДТА.
прогестерона и азидом натрия (<0,1%; см.п. Меры предосторожности). - Отделить сыворотку/плазму от клеток крови центрифугированием.
Ожидаемый диапазон концентраций указан на этикетке флакона. - Образцы сыворотки и плазмы можно хранить при 2-8°С в течение 24
Внимание: Температура и сроки годности, указанные на этикетках флаконов с часов. Для более длительного хранения их необходимо разделить на
реагентами, относятся только к их хранению в производственных условиях аликвоты и заморозить при температуре < -18"С. Избегать повторного
замораживанияч)ттаивания проб.
вплоть до момента комплектации набора и не распространяются на полученную
заказчиком продукцию. - Если концентрация прогестерона в пробе превышает максимальный
стандарт, ее следует развести сывороткой крови с низким содержанием
3. ДОПОЛНИТЕЛЬНЫЕ МАТЕРИАЛЫ И ОБОРУДОВАНИЕ гормона (например, сывороткой крови мужчин с концентрацией
Помимо стандартного лабораторного оборудования необходимо иметь прогестерона < 0,1 нг/мл).
следующее:
6. ПРОЦЕДУРА АНАЛИЗА (см. таблицу на следующей странице).
- микропипетка (50 мкл)
- полуавтоматическая пипетка (500 мкл) 7. РЕЗУЛЬТАТЫ
- вихревой смеситель типа Vortex
Результаты рассчитывают по калибровочной фивой методом интерполяции.
- горизонтальный или орбитальный встряхиватель Анализ калибровочных проб и исследуемых образцов должен проводиться
- водоструйный насос
одновременно.
- гамма-счетчик для измерения активности '“I.
7.1 Калибровочная кривая
4. МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ Результаты контроля качества набора, указанные на отдельном листке-
4.1 Общие замечания: вкпадыше, получены при построении калибровочной кривой в
- Перед использованием довести реагенты до комнатной температуры. логарифмических координатах («сплайн» функция) с соотношением В/Т
- Не смешивать реагенты из наборов разных серий. (%) или В/Во (%) по вертикальной оси и концентрацией прогестерона
- Анализ калибровочных проб должен проводиться одновременно (нг/мл) по горизонтальной оси калибровочного графика. Другие методы
с исследуемыми образцами. обсчета могут давать несколько отличающиеся результаты.
- Для получения воспроизводимых результатов очень важно соблюдать Общая активность: 47452 имп./мин.
рекомендуемые условия встряхивания пробирок. Прогестерон Имп^мин.
Стандарты вп- (%) В/ВО (%)
- Анализ рекомендуется проводить в дубликатах. (нг/мл) (п=3)
- Пробирки только для одноразового применения. 0 0 24570 51,8 100
4.2 Основные правила обращения с радиоактивными веществами. 1 0,12 21234 44,7 86,4
Получение, использование и транспортировка радиоактивных материалов 2 0,55 17733 37,4 72,2
должны происходить в соответствии с принятыми в данной стране 3 2,0 10221 21,5 41,6
нормами радиационной безопасности и санитарными правилами работы с 4 8,7 4802 10,1 19,5
радиоактивными веществами. 5 49 1529 3,22 .......6,22,.,.....
- В лабораториях запрещается принимать пищу, курить, пользоваться косметикой. (Прииер типичной калибровочной кривой. Не истпьзоеть для обсчета результатов.)
- Не пипетировать рааворы радиоактивных веществ ртом. 7J Образцы
- Для офзничения контакта с радиоактивными материалами рекомендуется
Для каждого образца найти на вертикальной оси калибровочного фафика
использовать разовые перчатки и лабораторную спецодежду.
значение ВЯ (%) или В/Во (%), а на горизонтальной оси соответствующую
- Все манипуляции с радиоактивными веществами следует проводить в специально
оборудованных для этого помещениях, удаленных от мест постоянного концентрацию прогестерона.
пребывания людей. Для перевода концентраций из нг/мл в нмоль/л (нМ) нужно умножить
- Радиоактивные вещества следует хранить с испопьзованием контейнеров в полученный результат на 3,18.
специально отведенных для этого местах.
- Необходимо регистрировать поступление и расход радиоактивных материалов.
IM1188 2011-03-24 RU 1/4
10.3.2 Между анализами
8. КОНТРОЛЬ КАЧЕСТВА
Анализ образцов в дубликатах проводили в 40 различных сериях
В соответствии с требованиями Good laboratory practices для контроля качества определений. Коэффициент вариации измеренного уровня прогестерона в
проводимых исследований следует регулярно использовать контрольные сыворотке крови не превышал 7,2 %.
образцы, которые должны проходить те же стадии анализа, что и
10.4 Точность
анализируемые пробы. Результаты контроля качества рекомендуется
обрабатывать с помощью специальных статистических методов. 10.4.1 Тест на разведение
В случае серьезного повреждения упаковки, или в случае несоответствия Образцы с высокой концентрацией прогестерона серийно разводили
полученных результатов аналитическим характеристикам (см.л.Ю) обратитесь, сывороткой с низким содержанием гормона (например, мужской
пожалуйста, к нашим специалистам: Тел.:+420 272 017 391; сывороткой с уровнем прогестерона <, 0,1 нг/мл). Процент «открытия»
составлял от 102 % до 113 %.
Факс: +420 272 017 385; e-mail: imunochem@beckmancoulter.com
Тел.:+7 495 9371664; Факс: +7 495 254 64 07; e-mail: 10.4.2Тестна «открытие»
beckman.ru(S)beckmancouller.com Известные количества прогестерона добавляли в образцы с низкой его
концентрацией. Процент «открытия» составлял от 76% до 114%.
9. ОЖИДАЕМЫЕ ЗНАЧЕНИЯ
10.5 Диапазон определений (от аналитической чувствительности до значения
В каждой лаборатории рекомендуется установить собственные уровни наивысшей калибровочной пробы): 0,05 - 50 ng/mL.
прогестерона, соответствующие нормальным. Приведенные ниже значения
являются ориентировочными. 11. ОГРАНИЧЕНИЯ МЕТОДА
Прогестерон нг/мл нмоль/л Нарушение методики проведения анализа может привести к искажению
Мужчины (от 2^0 70 лет) 0,13-1,26 0,4-4,0 результатов исследования. Результаты определения должны быть
Женщины: интерпретированы в свете общей клинической картины пациента, включая
Фолликулярная 0,06-1,26 0,2-4,0 анамнез, данные других тестов и подходящую иную информацию.
фаза 0,08-1,2 0,25-3,8 Не исследовать липемичные образцы.
Овуляторный лик 2,5-25 8-78 При выполнении анализов с использованием антител возможна интерференция
Лютеиновая фаза гетерофильными антителами в пробе пациента. У пациентов, имеющих
Женщины в пост-менопаузе 0,06-1,6 0,2-5 постоянный контакт с животными или проходивших иммунотерапию или
диагностические процедуры с использованием иммуноглобулинов или их
10. АНАЛИТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
фрагментов, могут вырабатываться антитела (т.е. НАМА), которые влияют на
(болев подробная информация приведена в разделе “APPENDIX”) результаты иммунного анализа.
10.1 Чувствительность: 0,05 нг/мл (0,16 нмоль/л) Влияние этих антител может привести к получению ошибочных результатов.
10.2 Специфичность Тщательно проверяйте результаты анализов пациентов с подозрением на
наличие этих антител.
Антитела, используемые в данном наборе, имеют высокую специфичность
к прогестерону.
10.3 Воспроизводимость
10.3.1 Внутри анализа
Образцы анализировали е 20 релликатах в одной серии определений.
Коэффициент вариации измеренного уровня прогестерона в сыворотке
крови не превышал 6,5 %.
6. ПРОЦЕДУРА Анализа
Стадия 1 Стадия 2 Стадия 3
Внесение компонентов Инкубация Измерение результатов
В покрытые антителами
пробирки последовательно
внести: Тщательно удалить
содержимое пробирок
Инкубировать 1 час
- 50 мкл калибровочных, (кроме проб «Т»)
при 18-25°С
контрольных или
и постоянном встряхивании
анализируемых проб Измерить связанную (В) и
(350 осц./мин.)
- 500 мкл метки* общую (Т) активность
(имп./мин.) в течение 1 минуты.
Перемешать
* В две дополнительные пробирки для определения общего счета (Т) внести по 500 мкл метки.
M i IMMUNOTECH SAS -130 av. de Lattre de Tassigny - B.P.177 - 13276 Marseille Cedex 9 France - Тё1. (33) 4 91 17 27 00 - Fax : (33) 4 91 41 43 58
IM1188 2011-03-24-RU 2/4
Инструкция no
IMMUNOTECH
A BECKMAN COULTER COMPANY использованию
RUSSIAN
RIA ESTRA D IO L ^^' М21854 ' -
I900f
НАБОР ДЛЯ РАДИОИММУНОЛОГИЧЕСКОГО IN VITRO ОПРЕДЕЛЕНИЯ С€
} 134851
ЭСТРАДИОЛА В СЫВОРОТКЕ И ПЛАЗМЕ КРОВИ ЧЕЛОВЕКА
ce rt if ie d
1. ПРИНЦИП МЕТОДА - Лабораторное оборудование и посуду следует хранить отдельно, чтобы
Радиоиммунологическое определение хтрадиола относится к конкурентным предотвратить их загрязнение радиоактивными изотопами.
видам анализа. Исследуемые образцы, контрольные и калибровочные пробы - Любой спучай радиоактивного загрязнения или исчезновения радиоактивного
инкубирукзт 3 часа (1 час для образцов сывороток крови женщин с материала должен рассматриваться в соответствии с законодательством.
- Утилизация радиоактивных отходов должна осуществляться в соответствии с
индуцированной овуляцией) с меткой, '«1-хтрадиолом, в пробирках, покрытых
законодательством.
антителами. После окончания инкубации удаляют жидкое содержимое пробирок
4.3 Азид натрия
и измеряют связанную активность '«I. Концентрацию хтрадиола определяют
Некоторые компоненты набора содержат азид натрия в качестве консерванта.
методом интерполяции по калибровочной кривой.
Вступая в реакцию со свинцом, медью и латунью, азид натрия образует
2. РЕАГЕНТЫ, ВХОДЯЩИЕ В СОСТАВ НАБОРА взрывоопасные азиды металлов. Отработанные реагенты следует разбавлять
большим количеством водопроводной воды, после чего их можно сливать в
Все реагенты стабильны при 2-8°С до окончания срока годности набора. канализацию.
2.1 Пробирки, покрытые антителами к эстрадиолу: 2 х 50 шт (готовы к 4.4 Сыворотка крови человека
использованию) Материал человеческого происхождения, входящий в состав компонентов набора, не
2.2 Метка, '»|.эстрадиоп (55Х): 1 флакон, 1 мл содержит антител к HIV1, HIV 2, HCV и к поверхностному антигену вируса гепатита В
(HBsAg). Тем не менее, ни один из существующих методов анализа не может
Концентрированный раствор следует перед использованием развести
гарантировать полного отсутствия инфекционных агентов в исследуемом материале.
буфером. На дату изготовления флакон содержит не более чем 142 кБк Поэтому при работе с компонентами набора следует соблюдать необходимые меры
меченого хтрадиола в этаноле. предосторожности.
2.3 Буфер для разведения метки: 1 флакон, 54 мл (готов к использованию) С исследуемыми образцами сыворотки крови следует обращаться как с
потенциально инфекционным материалом, могущим содержать вирусы СПИД и
В состав буфера входит азид натрия (<0,1%, см.п.Меры
гепатита. Весь использованный материал должен быть уничтожен по действующим
предхторожности). государственным правилам и инструкциям.
2.4 Калибровочные пробы: 7 флаконов по 1 мл (готовы к использованию)
5. ПОЛУЧЕНИЕ, ОБРАБОТКА, ХРАНЕНИЕ И РАЗВЕДЕНИЕ ОБРАЗЦОВ
Калибровочные пробы содержат хтрадиол в диапазоне концентраций от
О ДО5000 пг/нл сыворотке крови человека с азидом натрия (< 0,1%; см. п. - Собрать кровь в чистые сухие пробирки, или пробирки с ЭДТА.
Меры предосторожности). Значения калибровочных проб были получены - Отделить сыворотку или плазму крови центрифугированием.
с помощью внутреннего стандарта. - Образцы сыворотки и плазмы можно хранить при 2-8”С в течение 24
часов. Для более длительного хранения их необходимо разделить на
2.5 Контрольная сыворотка: 1 флакон, 1 мл (готова к использованию)
аликвоты и заморозить при температуре < -18°С. Избегать повторного
Флакон содержит известное количество хтрадиола в сыворотке крови
замораживания-оттаивания проб.
человека с азидом натрия (<0,1%; см.п. Меры предосторожности).
- Если концентрация хтрадиола в исследуемом образце превышает
Ожидаемый диапазон концентраций указан на этикетке флакона.
Внимание: Температура и сроки годности, указанные на этикетках фпаконов концетрацию в максимальной калибровочной пробе, их следует
с реагентами, относятся только к их хранению условиях развести буфером для разведения сыворотки (см. §12).
вплоть до момента комплектаи,ии набора ив пнрео ирзавсопдрстовстенрнаыняхю тся на
6. ПРОЦЕДУРА АНАЛИЗА
полученную заказчиком продукцию.
6.1 Разведение метки (55 X)
3. ДОПОЛНИТЕЛЬНЫЕ МАТЕРИАЛЫ И ОБОРУДОВАНИЕ Содержимое флакона с меткой внести во флакон с буфером для
разведения метки. Аккуратно перемешать, из^гая образования пены.
Помимо стандартного лабораторного оборудования необходимо иметь
Подготовленный к работе раствор можно хранить при 2-8°С до окончания
следующее:
срока годности набора.
- микропипетка (100 мкл) Пробирки, в которые был добавлен трейсер, становятся
- полуавтоматическая пипетка (500 мкл) рВандиимоаанктиеи:в ными. Следовательно, о6раш,аться с ними необходимо в
- вихревой смеситель типа Vorlex соответствии с нормами безопасности (см. п. 4.2).
- горизонтальный или орбитальный хтряхиватель
- водоструйный насос 6.2 Процедура анализ: (см. Таблицу на следующей странице).
- гамма-счетчик для измерения активности '“I.
7. РЕЗУЛЬТАТЫ
4. МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ Результаты рассчитывают методом интерполяции по калибровочной кривой,
4.1 Общие правила полученной одновременно с анализом неизвестных образцов.
- Перед использованием довести все реагенты до комнатной 7.1 Калибровочная кривая
температуры. Результаты контроля качества набора, приведенные в этой инструкции,
- Не смешивать реагенты из наборов разных серий. получены при построении калибровочной кривой в полулогарифмических
- Анализ калибровочных и неизвестных проб должен проводиться координатах («сплайнх-функция) с соотношением ВЛ" (%) или В/Во (%) по
одновременно. вертикальной оси и концентрацией хтрадиола (пг/мл) по горизонтальной
- Для получения воспроизводимых результатов очень важно соблюдать оси калибровочного графика. Другие методы обсчета могут давать
рекомендуемую частоту встряхивания пробирок несколько отличающиеся результаты.
- Анализ рекомендуется проводить в дубликатах.
Общий счет: 51851 имп./мин.
- Пробирки предназначены для однократного использования.
Калибровоч Эстрадиол Имп./мин.
В/Т (%) В/ВО(%)
4.2 Основные правила обращения с радиоактивными веществами ные пробы (пг/мл) (п=3)
Получение, использование и транспортировка радиоактивных материалов должны 0 0 38327 70,1 100
происходить в соответствии с принятыми в данной стране нормами радиационной 1 8 30517 58,9 84,0
безопасности и санитарными правилами работы с радиоактивными веществами.
2 25 27147 52,4 74,7
- В лабораториях запрещается принимать пищу, курить, пользоваться косметикой.
- Не пипетировать растворы радиоактивных веществ ртом. 3 125 19101 36,8 52,6
■ Для ограничения контакта с радиоактивными материалами рекомендуется 4 500 10642 20,5 29,3
использовать разовые перчатки и пабораторную спецодежду. 5 1500 5203 10,0 14,3
- Все манипуляции с радиоактивными веществами следует проводить в специально 6 5000 2749 5,3 7,6
оборудованных для этого помещениях, удаленных от мест постоянного (Пример типичной калибровочной кривой. Не использоезть для обсчета результатов.)
пребывания людей.
■ Радиоактивные вещества следует хранить с использованием контейнеров в
специально отведенных для этого местах.
- Необходимо регистрировать поступление и расход радиоактивных материалов.
PI-A21854-2009-05-05 17/24
7.2. Образцы 10.4 Точность
Для каждого образца найти на вертикальной оси калибровочного фафика 10.4.1 Тест на разведение
значение ВЛ" (%) или В/Во (%), а на горизонтальной оси соответствующую Образцы с высокой концентрацией эстрадиола серийно разводили
концентрацию эстрадиопа в пг/нл. сывороткой крови с низким содержанием гормона. Процент “открытия"
Для перевода концентраций из пг/мл в пмоль/л нужно умножить составил от 83 % до 108%.
ггалученный результат на 3,671. 10.4.2Тест на открытие стандартной добавки
В образцы с низкой конценграцией гормона вносили известные
8. КОНТРОЛЬ КАЧЕСТВА
количества хтрадиола. Процент «открытия» составил от 82 % до 111 %.
В соответствии с требованиями Good laboratory practices для контроля качеаеа проводимых
исследований следует регулярно использовать контрольные образцы, которые должны 10.5 Диапазон определений (от аналитической чувствительности до значения
проходить те же стадии анализа, что и анализируемые пробы. Результаты контроля наивысшей калибровочной пробы): 6 - 5000 pg/mL.
качества рекомендуется обрабатывать с помощью специальных статистических методов.
В случае серьезного повреждения упаковки, или в случае несоответствия попученных 11. ОГРАНИЧЕНИЯ МЕТОДА
резупьтатов аналитическим характеристикам (см.п.Ю) обратитесь, пожалуйста, к нашим Набор не использовать для определения хтрадиола в образцах и детей.
специалистам: Тел.:+420 272 017 391; Нарушение методики проведения анализа может привести к искажению
Факс: +420 272 017 385; e-mail: 1гтц1посИет(5!Ьескгт1апсоц11ег.сот результатов исследования. Результаты определения должны быть
Тел.:+7 495 937 1664; Факс: +7 495 254 64 07; e-mail: 1жг.ктяп riiiati(!r.l(mancoulter com интерпретированы в свете общей клинической картины пациента, включая
анамнез, данные других тестов и подходящую иную информацию.
9. ОЖИДАЕМЫЕ ЗНАЧЕНИЯ
В каждой лаборатории рекомендуется установить собственные уровни При выполнении анализов с использованием антител возможна интерференция
хтрадиола, соответствую1цие нормальным. Приведенные ниже значения гетерофильными антителами в пробе пациента. У пациентов, имеющих
являются всего лишь ориентировочными: постоянный контакт с животными или проходивших иммунотерапию или
диагностические процедуры с использованием иммуноглобулинов или их
Эстрадиоп (пг/мл)
фрагментов, могут вырабатываться антитела (т.е. НАМА), которые влияют на
Мужчины 15 - 71 результаты иммунного анализа.
Женщины Влияние этих антител может привести к получению ошибочных результатов.
Середина фолликулярной фазы 57 - 227 Тщательно проверяйте результаты анализов пациентов с подозрением на
Преовуляторная фаза 127 - 476 наличие этих антител.
Середина лютеиновой фазы 77 - 277
Женщины в постменопаузе <82 12. РЕАГЕНТЫ, НЕ ВХОДЯЩИЕ В СОСТАВ НАБОРА
Буфер для разведения сыворотки: 1 флакон, 10 мл (готов к использованию) .
10. АНАЛИТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ Поставляется по дополнительному запросу: кат.№ IM1863.
(более подробная информация приведена в разделе “APPENDIX”) - Применение см. § 5.
10.1 Чувствительность; <6 пг/мл - Данный реагент можно использовать при работе с набором RIA ESTRADIOL
(кат.№ А21854) любой серии.
10.2 Специфичность
- Флакон содержит низкое количество хтрадиола в сыворотке крови человека
Антитела, используемые в данном наборе, обладают высокой
с азидом натрия (<0,1%; см.п. Меры предосторожности). Рекомендуется
специфичностью к эстрадиолу. Перекрестная реакция с
провести отсчет данной концентрации от полученного результата
близкородственными стероидами (эстрадиол-Зч;ульфат, эстрон, эстриол,
разведенного образца, прежде чем результат умножить на фактор
кортизол и др.), а также с лекарственными препаратами, могущими
разведения. Таким образом вы уточните получаемые результаты, особенно в
присутствовать в сыворотке крови пациентов (тамоксифен и др.),
случае образцов, у которых измеренная концентрация разведенного образца
чрезвычайно мала.
близка двойному количеству концентрации хтрадиола в буфере.
10.3 Воспроизводимость - Неиспользованный реагенг можно хранить при температуре <-18°С до
10.3.1 Внутри анализа окончания срока годности, указанного на этикетке флакона. После открытия
Анализ образцов проводили в 25 репликатах в пределах одной серии флакона раствор можно хранить в течение одной недели при 2-8°С или его
определений. Коэффициент вариации измеренных уровней хтрадиола в разделить на аликвоты и хранить при температуре <-18°С до окончания срока
сыворотке крови не превышал 12,1 %. годности, указанного на этикетке флакона.
10.3.2 Между анализами
Анализ образцов в дубликатах проводили в 25 различных сериях
определений. Коэффициент вариации измеренных уровней эстрадиола в
сыворотке крови не превышал 11,2 %.
6.2 Процедура Анализа
Стадия 1 Стадия 2 Стадия 3
Внесение реагентов * Инкубация Измерение результатов
В покрытые антителами
пробирки
Инкубировать 3 часа
последовательно внести: Тщательно удалить
при 18-25Х
содержимое всех пробирок
и постоянном встряхивании
-100 мкл калибровочных, (кроме проб «Т»).
(350 осц./мин.).
контрольных и анализируемых
проб Измерить связанную (В)
(1 час для образцов сывороток
и и общую (Т) активность
крови женщин с
- 500 мкл метки. в течение 1 мин.
индуцированной овуляцией).
Перемешать.
' В две дополнительные пробирки внести по 500 мкл метки для оценки общей активности (пробы «Т»).
ИЙ IMMUNOTECH SAS -130 av. de Lattre de Tassigny - B.P.177 - 13276 Marseille Cedex 9 France - T6I. (33) 4 91 17 27 GO - Fax : (33) 4 91 41 43 58
PI-A21854-2009-05-05 18/24
Инструкция ПО
IMMUNOTECH
использованию
А BECKMAN COULTFR COMPANY
IVD
RIA DHEA IM1138
т ш 1 НАБОР ДЛЯ РАДИОИММУНОЛОГИЧЕСКОГО IN VITRO ОПРЕДЕЛЕНИЯ С€
л 34851
ДЕГИДРОЭПИАНДРОСТЕРОНА В СЫВОРОТКЕ И ПЛАЗМЕ КРОВИ ЧЕЛОВЕКА
ce rt i f ie d
• Все манипуляции с радиоактивными веществами следует проводить в специально
1. ПРИНЦИП МЕТОДА оборудованных для этого помещениях, удаленных от мест постоянного
Радиоиммунологическое определение дегидроэпиандростерона (ДГЭА) пребывания людей.
относится к конкурентным видам анализа. Перед анализом исследуемые - Радиоактивные вещества следует хранить с использованием контейнеров в
специально отведенных для этого местах.
образцы сыворотки или плазмы крови экстрагируют этиловым эфиром. После
- Необходимо регистрировать поступление и расход радиоактивных материалов.
испарения растворителя сухой остаток ресуспендируют в буфере, входящем в
- Лабораторное оборудование и посуду следует хранить отдельно, чтобы
состав набора. Растворенные экстракты и калибровочные пробы инкубируют со предотвратить их зафяэнение радиоактивными изотопами.
'«1-ДГЭА в пробирках, покрытых антителами. Затем удаляют содержимое - Любой случай радиоактивного зафязнения или исчезновения радиоактивного
пробирок и измеряют связанную активность '“I. Концентрацию ДГЭА материала должен рассматриваться в соответствии с законодательством.
определяют методом интерполяции по калибровочной кривой. • Утилизация радиоактивных отходов должна осуществляться в соответствии с
законодательством.
2. РЕАГЕНТЫ, ВХОДЯЩИЕ В СОСТАВ НАБОРА 4.3 Азид натрия
Все реагенты стабильны при 2-8°С до окончания срока годности набора Некоторые компоненты набора содержат азид натрия в качестве консерванта.
указанного на этикетке набора. Вступая в реакцию со свинцом, медью и латунью, азид натрия образует
взрывоопасные азиды металлов. Отработанные реагенты следует разбавлять
2.1 Пробирки, покрытые моноклональными антителами к ДГЭА:
большим количеством водопроводной воды, после чего их можно сливать в
2 X 50 шт. (готовы к использованию) канализацию.
О 2.2 Метка, '«1-ДГЭА: 1 флакон, 55 мл (готова к использованию) 4.4 Сыворотка крови человека
На дату изготовления флакон содержит 185 кБк ’«1-ДГЭА в буфере с С исследуемыми образцами сыворотки крови следует обращаться как с
белком, азидом натрия (<0,1%; см. п. Меры предосторожности) и потенциально инфекционным материалом, могущим содержать вирусы СПИД и
красителем. гепатита. Весь использованный материал должен быть уничтожен по действующим
государственным правилам и инструкциям.
2.3 Калибровочные пробы: 6 флаконов по 1 мп (готовы к использованию)
Калиб^вочные пробы содержат ДГЭА в диапазоне концентраций от О до 4.5 Этиловый эфир
Этиловый эфир крайне летуч и огнеопасен. Экстракцию и испарение эфира следует
30 нг/мл (О - 104 нмоль/л) в буферном растворе того же состава, что и
проводить в хорошо вентилируемом помещении. Избегать любого контакта с
буфер для растворения сухих экстрактов. В состав препарата входит азид
открытым огнем и не пипетировать реагенты ртом.
натрия (<0,1 %; см. п. Меры предосторожности). Точные концентрации
указаны на этикетках флаконов. Значения калибровочных проб были 5. ПОЛУЧЕНИЕ, ОБРАБОТКА, ХРАНЕНИЕ И РАЗВЕДЕНИЕ ОБРАЗЦОВ
получены с помощью внутреннего стандарта. - Собрать кровь в чистые сухие пробирки, или пробирки с ЭДТА, или
2.4 Буфер для растворения экстрактов: 1 флакон, 30 мл гепарином.
(готов к использованию) - Отделить сыворотку или плазму крови центрифугированием.
Данный буфер предназначен для растворения сухих экстрактов - Образцы сыворотки и плазмы можно хранить при 2-8°С в течение 24
анализируемых образцов. Препарат содержит бычий сывороточный часов. Для более длительного хранения их необходимо разделить на
альбумин и азид натрия (<0,1%; см .п. Меры предосторожности). аликвоты и заморозить при температуре <-18°С. Избегать повторного
Внимание: Температура и сроки годности, указанные на этикетках флаконов замораживания-оттаивания проб. Не проводить опаивание проб при
с реагентами, относятся только к их хранению в производственных условиях температуре выше 25°С.
вплоть до момента комплектации набора и не распространяются на - Если концентрация ДГЭА в анализируемом образце превышает
полученную заказчиком продукцию. максимальный стандарт, его экстракт следует дополнительно разбавить
буфером для растворения.
3. ДОПОЛНИТЕЛЬНЫЕ МАТЕРИАЛЫ И ОБОРУДОВАНИЕ
6. ПРОЦЕДУРА АНАЛИЗА
Помимо стандартного лабораторного оборудования необходимо иметь
следующее: 6.1 Экстракция образцов
- микропипетки (100 мкп; 300 мкл) Внимание: Экстракцию проводят в предварительно ополоснутых эфиром
- полуавтоматические пипетки (300 мкл; 500 мкл) чистых стеклянных флаконах или пробирках с тефлоновыми или
- стеклянные пипетки (5 мл или 10 мл) стеклянными пробками.
-стеклянные флаконы вместимостью 5-10мл с тефлоновыми или Органическую фазу следует отделять тщательно, следя за тем, чтобы в
стеклянными пробками нее не попала водная фаза.
- стеклянные пробирки на 6 мл (12 мм х 75 мм) для отделения эфирной Процедура экстракции необходима только для аназизируемых
фазы образцов. Не экстрагировать калибровочные пробы.
- безводный этиловый эфир (ч.д.а.) Перед проведением экстракции образцы необходимо довести до
- испаритель типа Speed Vac, или водяная баня на 37 °С комнатной температуры и тщательно перемешать.
- вихревой смеситель типа Vortex - Промаркировать по одному флакону для каждого анализируемого
- водоструйный насос образца.
- гаммачметчик для измерения активности '“I. - Внести во флаконы по 300 мкл соответствующих образцов.
- Во все флаконы добавить по 3 мл этилового эфира (см. п. Меры
4. МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ предосторожности) и тщательно закрыть их пробками.
- Интенсивно перемешать содержимое флаконов на вихревом смесителе.
4.1 Общие замечания:
■ Перед использованием довести все реагенты до комнатной температуры. - Поместить флаконы в морозильную камеру (<-18"С) до замерзания
- Не смешивать реагенты из наборов разных серий. водной фазы.
- Анализ калибровочных и неизвестных проб должен проводиться одновременно. - Аккуратно перелить органическую фазу в промаркированные 6мл
- Анализ рекомендуется проводить в дубликатах. пробирки Ругех. Следить, чтобы в них не попала водная фаза.
- Пробирки предназначены для однократного использования. - Полностью испарить эфир с помощью испарителя (например, типа
4.2 Основные правила обращения с радиоактивными веществами Speed Vac), или поместить пробирки на водяную баню при 37°С.
Получение, использование и транспортировка радиоактивных материалов должны Внимание: пробирки должны быть надежно закреплены в штативе, так
происходить в соответствии с принятыми в данной стране нормами радиационной как после испарения эфира они начнут всплывать.
безопасности и санитарными правилами работы с радиоактивными веществами. На этой стадии выполнение анализа можно приостановить. Закрытые
- 6 лабораториях запрещается принимать пищу, курить, пользоваться косметикой. пробками пробирки с сухими экстрактами можно хранить при 2-8°С в течение
- Не пипетировать растворы радиоактивных веществ ртом.
7 дней.
- Для ограничения контакта с радиоактивными материалами рекомендуется
использовать разовые перчатки и лабораторную спецодежду. - В пробирки с сухими экстрактами внести по 300 мкл буфера для
растворения и интенсивно перемешать содержимое на вихревом
смесителе в течение 30 секунд.
РИ138-2007-01-02 15/20
6.2 Процедура анализа (см. таблица ниже приведенная) Дети:
7. РЕЗУЛЬТАТЫ Возраст Йинимум-Максимум (нг/мл)
Результаты рассчитывают методом интерполяции по калибровочной кривой, (лет) Девочки п Мальчики п
полученной одновременно с анализом неизвестных образцов. 0-8 0,3-2,0 84 0,3-2,2 94
7.1 Калибровочная кривая 8-10 0,5-3,5 9 0,3-2,5 30
Результаты, приведенные в данной инструкции, получены лри построении 10-12 0,5-5,5 21 0,3-3,5 33
калибровочной кривой в полулогарифмических координатах («сплайн- 12-14 0,8-9,0 26 0,9-6,0 22
функция) с соотношением В/Г (%) или В/Во (%) по вертикальной оси и
концентрацией ДГЭА (нг/мл) по горизонтальной оси калибровочного 10. АНАЛИТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
графика. Другие методы обсчета могуг давать несколько отличающиеся (более подробная информация приведена в разделе “APPENDIX")
результаты.
10.1 Аналитическая чувствительность: 0,3 нг/мл
Общий счет: 73 006 имп./мин.
10.2 Специфичность
Калибровочные ДГЭА Имп./мин.
В/Т (%) В/ВО (%) Антитела, используемые в данном наборе, обладают высокой
пробы (нг/мл)
о специфичностью к ДГЭА. Перекрестная реакция с близкородственными
47084 64.5 100 стероидами (альдостероном, андростероном, прогестероном и др.), а
0,50 40 573 55.6 86,2
также лекарственными препаратами, могущими присутствовать в
1,00 34 741 47.6 73,8 сыворотке крови пациентов (Даназол и др.), чрезвычайно мала.
3,30 23258 31,9 49,4
12,00 11810 16,2 25,1 10.3 Воспроизводимость
35,00 5510 7,55 11,7 10.3.1 Внутри анализа
(Пример типичной калибровочной крмой. Не использовать для обсчета рез/пьтатов.) Анализ образцов проводили в 12 репликатах в пределах одной серии
7.2 Образцы определений. Коэффициент вариации измеренных уровней ДГЭА в
Для каждого образца найти на вертикальной оси калибровочного графика сыворотке крови не превышал 7,9 %.
значение ВЯ (%) или В/Во (%), а на горизонтальной оси соответствующую 10.3.2 Между анализами
концентрацию ДГЭА (нг/мл) Анализ образцов в дубликатах проводили в 18 различных сериях
Для перевода концентраций из нг/мл в нмоль/л нужно умножить определений. Коэффициент вариации измеренных уровней ДГЭА в
полученный результат на 3,47. сыворотке крови не превышал 11,9 %.
8. КОНТРОЛЬ КАЧЕСТВА 10.4 Точность
В соответствии с требованиями Good laboratory practices для контроля качества проводимых 10.4.1 Тест на разведение
исследований следует регулярно использовать контрольные образцы, которые должны Образцы с высокой концентрацией ДГЭА экстрагировали и серийно
проходить те же стадии анализа, что и анализируемые пробы. Результаты контроля разводили буфером для растворения. Величина "открытия" составила от
качества рекомендуется обрабатывать с помощью специальных статистических методов. 94% до 120%.
В случае серьезного повреждения упаковки, или в случае несоответствия полученных
результатов аналитическим характеристикам (см.п.Ю) обратитесь, пожалуйста, к нашим 10.4.2Тест на открытие стандартной добавки
специалистам: Тел.:+420 267 008 391; В образцы с низкой концентрацией гормона вносили известные
Факс: +420 267 008 385; e-mail: imunochemiabeckman.com количества ДГЭА. Величина «открытия» составила от 94 до 110 %.
Тел.:+7 095 937 1664; Факс: +7 095 254 64 07; e-nnail: bjigknijin п^(5!^№l;kman.wm 10.5 Диапазон определений (от аналитической чувствительности до значения
наивысшей калибровочной пробы): 0.3 - 30 ng/mL.
9. ОЖИДАЕМЫЕ ЗНАЧЕНИЯ
В каждой лаборатории рекомендуется установить собственные уровни ДГЭА, 11. ОГРАНИЧЕНИЯ МЕТОДА
соответствующие нормальным. Приведенные ниже значения являются всего Нарушение методики проведения анализа может привести к искажению результатов
лишь ориентировочными: исследования. Результаты определения должны быть интерпретированы в свете общей
клинической картины пациента, включая анамнез, данные других тестов и подходящую иную
Мужчины (20 - 50 лет): 1,5 - 9 нг/мл (5 - 31 нмоль/л), п=100
информацию.
Женщины: 1 - 8 нг/мл (3,5 - 28 нмоль/л), п= 108 Не рекомендуется использовать гемолизные и иктерические образцы.
При вылолнении анализов с использованием антител возможна интерференция
гетерофильными антителами в пробе пациента. У пациентов, имеющих постоянный контакт
с животными или проходивших иммунотерапию или диагностические процедуры с
использованием иммуноглобулинов или их фрагментов, могут вырабатываться антитела
(т.е. НАМА), которые влияют на результаты иммунного анализа.
Влияние этих антител может привести к получению ошибочных результатов. Тщательно
проверяйте результаты анализов пациентов с подозрением на наличие этих антител.
6.2 Процедура АНАЛИЗА
Стадия 1 Стадия 2 Стадия 3
Внесение реагентов * Инкубация Измерение результатов
В покрытые антителами
пробирки последовательно
внести:
Тщательно удалить содержимое
Закрыть пробирки.
всех пробирок
-100 МКЛ калибровочных
(кроме проб «Т»),
проб Инкубировать 1 час
или экстрактов при 37°С
Измерить связанную (В) и
анализируемых образцов на водяной бане.
общую (Т) активность в
и
течение 1 мин.
- 500 мкл метки.
Перемешать.
* в две дополнительные пробирки внести по 500 мкл метки для оценки общей активности '^5| (пробы «Т»).
1й1 IMMUNOTECH SAS -130 av. de Lattre de Tassigny - B.P.177 -13276 Marseille Cedex 9 France - T6I. (33) 4 91 17 27 00 - Fax : (33) 4 91 41 43 58
PI-1138-2007-01-02 16/20
о-.-* ^
Инструкция ПО
IMMUNOTECH
использованию
А 0F.CKMAN COULTFR COMPANV
IVD RIA DHEA sulfate Г\Ь1М0729
2-.' -■ ■ ^ jL'
j 90011 НАБОР для РАДИОИММУНОЛОГИЧЕСКОГО IN VITRO ОПРЕДЕЛЕНИЯ С€
f 13485 / ДЕГИДРОЭПИАНДРОСТЕРОН-СУЛЬФАТА В СЫВОРОТКЕ И ПЛАЗМЕ КРОВИ ЧЕЛОВЕКА
ce rt if ie d
1. ПРИНЦИП МЕТОДА - Любой случай радиоактивного загрязнения или исчезновения радиоакгивного
Радиоиммунологическое определение дегидроэпиандростерон-сульфата материала должен рассматриваться в соответствии с законодательством.
(ДГЭА-сульфата) относится к конкурентным видам анализа. Исследуемые ■ Утилизация радиоактивных отходов должна осуществляться в соответствии с
законодательством.
образцы, контрольные и калибровочные лробы инкубируют с меткой,
'”1-ДГЭА-сул14)атом, в лробирках, покрытых моноклональными антителами. 4.3 Азид натрия
После окончания инкубации удаляют жидкое содержимое пробирок и измеряют Некоторые компоненты набора содержат азид натрия в качестве
связанную активность ’“I. Концентрацию ДГЭА-сульфата определяют методом консерванта. Встулая в реакцию со свинцом, медью и латунью, азид
интерполяции по калибровочной кривой. натрия образует взрывоопасные азиды металлов. Отработанные
реагенты следует разбавлять большим количеством водопроводной воды,
2. РЕАГЕНТЫ, ВХОДЯЩИЕ В СОСТАВ НАБОРА после чего их можно сливать в канализацию.
Все реагенты стабильны при 2-8°С до окончания срока годности набора. 4.4 Сыворотка крови человека
Условия хранения компонентов набора после их растворения или разбавления Материал человеческого происхождения, входящий в состав компонентов
указаны в разделе «Процедура анализа», набора, не содержит антител к HIV 1, HIV 2, HCV и к поверхностному
2.1 Пробирки, покрытые антителами к ДГЭА-сульфату: 2 х 50 шт. (готовы антигену вируса гепатита В (HBsAg). Тем не менее, ни один из
к использованию) существующих методов анализа не может гарантировать полного
отсутствия инфекционных агентов в исследуемом материале. Поэтому
2.2 Метка, 1251-ДГЭА-сульфат: 1 флакон 55 мл (готова к использованию)
при работе с компонентами набора следует соблюдать необходимые
На дату изготовления флакон содержит 185 кБк '25|-ДГЭА-сульфата в
меры предосторожности.
буфере с белком, азидом натрия {<0,1%; см. п. Меры предосторожности) и
С исследуемыми образцами сыворотки крови следует обращаться как с
красителем.
потенциально инфекционным материалом, могущим содержать вирусы
2.3 Калибровочные пробы: 6 флаконов (лиофилизованные препараты) СПИД и гепатита. Весь использованный материал должен быть уничтожен
Калиб^вочные пробы содержат ДГЭА-сульфат в диапазоне концентраций по действующим государственным правилам и инструкциям.
от О до 1000 мкг/100 мл, лиофилизованный в сыворотке крови человека
5. ПОЛУЧЕНИЕ, ОБРАБОТКА, ХРАНЕНИЕ И РАЗВЕДЕНИЕ ОБРАЗЦОВ
(см. п. Меры предосторожности). Точные концентрации указаны на
этикетках флаконов. Значения калибровочных проб были получены с - Собрать кровь в чистые сухие пробирки, или пробирки с ЭДТА, или
помощью внутреннего стандарта. гепарином.
- Отделить сыворотку или плазму крови центрифугированием.
2.4 Контрольная сыворотка : 1 флакон (лиофилизованный препарат)
Образцы сыворотки и плазмы можно хранить при 2-8"С в течение
Флакон содержит известное количество ДГЭА-сульфата,
24 часов. Для &лее длительного хранения их необходимо разделить на
лиофилизованного в сыворотке крови человека (см.п. Меры
аликвоты и заморозить при температуре < -18°С. Избегать повторного
предосторожности). Ожидаемый диапазон концентраций указан на
замораживания-оттаивания проб.
этикетке флакона.
- Если концентрация ДГЭА-сульфата в образце превышает концентрацию
Внимание: Температура и сроки годности, указанные на этикетках флаконов
в максимальной калибровочной пробе, его следует разбавить нулевой
с реагентами, относятся только к их хранению в производственных условиях
калибровочной пробой.
вплоть до момента комплектации набора и не распространяются на
полученную заказчиком продукцию. 6. ПРОЦЕДУРА АНАЛИЗА
6.1 Растворение калибровочных проб и контрольной сыворотки
3. ДОПОЛНИТЕЛЬНЫЕ МАТЕРИАЛЫ И ОБОРУДОВАНИЕ
Довести флаконы до комнатной температуры и растворить их содержимое
Помимо стандартного лабораторного оборудования необходимо иметь в объеме дистиллированной воды, указанном на этикетках. Через 10
следующее: минут аккуратно перемешать, избегая образования пены. Подготовленные
- микропипетка(25 мкл) к работе растворы можно хранить 30 дней при 2-8°С, или разделенными
- полуавтоматическая пипетка (500 мкл) на аликвоты при <-18°С до окончания срока годности набора.
- вихревой смеситель типа Vortex
6.2 Процедура анализа (см. Таблицу на следующей странице)
• водяная баня на 37”С
- водоструйный насос 7. РЕЗУЛЬТАТЫ
- гамма-счетчик для измерения активности
Результаты рассчитывают методом интерполяции по калибровочной кривой,
4. МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ полученной одновременно с анализом неизвестных образцов.
7.1 Калибровочная кривая
4.1 Общие замечания:
Результаты контроля качества набора, приведенные в этой инструкции,
- Перед использованием довести все реагенты до комнатной
получены при построении калибровочной кривой в полулогарифмических
температуры.
координатах («сплайнк-функция) с соотношением ВЯ (%) или В/ВО (%) по
- Не смешивать реагенты из наборов разных серий.
вертикальной оси и концентрацией ДГЭА-сульфата (мкг/100мл) по
- Анализ калибровочных и неизвестных проб должен проводиться
горизонтальной оси калибровочного графика. Другие методы обсчета
одновременно.
могут давать несколько отличающиеся результаты.
- Анализ рекомендуется проводить в дубликатах.
- Пробирки только для одноразового применения. Общий счет: 61702 имп./мин.
4.2 Основные правила обращения с радиоактивными веществами Калибровочные ДГЭА-сульфат ИМП./МИН.
В/Т {%) В/ВО (%)
Получение, использование и транспортировка радиоактивных материалов должны пробы (мкг/100 мл) (п=3)
лроиаодить в соответствии с принятыми в данной стране нормани радиационной 0 0 37587 60,9 100
безопасности и санитарными правилами работы с радиоактивными веществами. 1 10 29278 47,4 77,9
- В лабораториях запрещается принимать пищу, курить, пользоваться косметикой.
2 30 20937 33,9 55,7
- Не пилетировать растворы радиоактивных веществ ртом.
- Для ограничения контакта с радиоактивными материалами рекомендуется 3 100 11050 17,9 29,4
использовать разовые перчатки и лабораторную спецодежду. 4 300 5447 8,83 14,5
• Все манипуляции с радиоактивными веществами следует проводить в специально 5 1000 2480 4,02 6,60
оборудованных для этого помещениях, удаленных от мест постоянного (Пример типичной калибровочной кривой. Не использовать для обсчета результатов.)
пребывания людей.
- Радиоактивные вещества следует хранить с использованием контейнеров в
специально отведенных для этого местах.
- Необходимо регистрировать поступление и расход радиоактивных материалов.
■ Лабораторное оборудование и посуду следует хранить отдельно, чтобы
предотвратить их загрязнение радиоактивными изотопами.
PI-0729-2011-03-24_RU 1/4
7.2 Образцы 10.1 Чувствительность: 6 мкг/100 мл.
Для каждого образца найти на вертикальной оси калибровочного фафика 10.2 Специфичность
значение ВП (%) или В/Во (%), а на горизонтальной оси соответствующую Антитела, используемые в данном наборе, обладают высокой
концентрацию ДГЭА-сульфата. специфичностью к ДГЭА-сульфату. Перекрестная реакция с
Для перевода концентраций из мкг/100 мл в мкмоль/л нужно умножить близкородственными стероидами (андростендион, Д4-андростендион,
полученный результат на 0,027. кортизол и др.), а также лекарственными препаратами, могущими
присутствовать в сыворотке крови пациентов, чрезвычайно мала.
8. КОНТРОЛЬ КАЧЕСТВА
10.3 Воспроизводимость
В соответствии с требованиями Good laboratory practices для контроля качества
проводимых исследований следует регулярно использовать контрольные образцы, которые 10.3.1 Внутри анализа
должны проходить те же стадии анализа, что и анализируемые пробы. Результаты контроля Анализ образцов проводили в 9 релликатах в пределах одной серии
«ачества рекомендуется обрабатывать с помощью специальных статистических методов, определений. Коэффициент вариации измеренных уровней ДГЭА-
В случав серьезного повреждения упаковки, или в случае несоответствия полученных сульфата не превышал 7,4 %.
результатов аналитическим характеристикам (см.п.Ю) обратитесь, пожалуйста, к нашим
специалистам; Теп,:+420 272 017 391; 10.3.2 Между анализами
Анализ образцов в дубликатах проводили в 9 различных сериях
Факс; +420 272 017 385; e-mail; imiinochemlSbeckmancoulter.corr
Тел.;+7 495 937 1664; Факс; +7 495 254 64 07; e-mail; beckman rulStwckmancoulter com определений. Коэффициент вариации измеренных уровней ДГЭА-
сульфата не превышал 10,6 %.
9. ОЖИДАЕМЫЕ ЗНАЧЕНИЯ
10.4 Точность
В каждой лаборатории рекомендуется установить собственные уровни ДГЭА-
10.4.1 Тест на разведение
сульфата, соответствующие нормальным. Приведенные ниже значения
Образцы с высокой концентрацией ДГЭАч:ульфата серийно разводили
являются всего лишь ориентировочными:
"нулевой" калибровочной пробой. Процент "открытия" составил от 90 % до
ДГЭА<упьфат (мкг/100 мл) 105%.
Среднее Стандартное Пределы для 95% 10.4.2Тест на открытие стандартной добавки
Взрослые п значение отклонение популяции В образцы с низкой концентрацией гормона вносили известные
количества ДГЭА-сульфата. Процент «открытия» составил от 90 до 110 %.
Мужчины 111 254 102 133-441
10.5 Диапазон определений (от аналитической чувствительности до значения
Женщины 98 155 70 30-333
наивысшей калибровочной пробы): 6 -1000 tjg/100 mL.
Менопауза 11 80 47 32-204*
11. ОГРАНИЧЕНИЯ МЕТОДА
■ Предельное значение для всей популяции
Нарушение методики проведения анализа может привести к искажению
Дети ДГЗА-сульфат (мкг/100 мл) результатов исследования. Результаты определения должны быть
интерпретированы в свете общей клинической картины пациента, включая
Возраст п з С н р а е ч д е н н е и е е С о т т а к н л д о а н р е т н н и о е е Пред п е о л п ы ул д я л ци я и всей а П н р а и м в н ы ез п , о д л а н н е н н ы ии е д а р н у а г л и и х з о т в ес с т о и в с п и о п л о ь д з х о о в д а я н щ ие у м ю а и н н т у и ю т е и л н ф в о о р зм м о а ж ци н ю а . интерференция
<1 месяц 16 109 83 9-338 гетерофильными антителами в пробе пациента. У пациентов, имеющих
постоянный контакт с животными или проходивших иммунотерапию или
1-9 лет 72 14 14 5-85
диагностические процедуры с использованием иммуноглобулинов или их
9-11 лет 38 39 27 5-98 фрагментов, могут вырабатываться антитела (т.е. НАМА), которые влияют на
11-15 лет 29 78 45 20-263 результаты иммунного анализа.
15-17лет 12 118 46 28 - 238 Влияние этих антител может привести к получению ошибочных результатов.
Тщательно проверяйте результаты анализов пациентов с подозрением на
наличие этих антител.
10. АНАЛИТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
(болвв подробная информация приведена в разделе “APPENDIX")
6.2 Процедура Анализа
Стадия 1 Стадия 2 Стадия 3
Внесение реагентов * Инкубация Измерение результатов
В покрытые антителами
пробирки
последовательно внести: Тщательно удалить
Закрыть пробирки. содержимое всех пробирок
- 25 мкл калибровочных, (кроме проб «Т»).
контрольных и анализируемых Инкубировать 30 мин
проб при 37°С Измерить связанную (В) и
и на ВОДЯНОЙ бане. общую (Т) активность в
- 500 мкл метки. течение 1 мин.
Перемешать.
*В две дополнительные пробирки внести по 500 мкл метки для оценки общей активности '2S| (пробы «Т»).
мУ IMMUNOTECH SAS -130 av. de Lattre de Tassigny - B.P.177 -13276 Marseille Cedex 9 France - T6I. (33) 4 91 17 27 00 - Fax: (33) 4 91 41 43 58
PI-0729-2011-03-24_RU 2/4
Инструкция по
использованию
f BECKMAN
RUSSIAN
IVD TSH IRM A KIT IM3459:-1M3461
НАБОР ДЛЯ ИММУНОРАДИОМЕТРИЧЕСКОГО IN VITRO ОПРЕДЕЛЕНИЯ
С€
ТИРЕОТРОПНОГО ГОРМОНА В СЫВОРОТКЕ И ПЛАЗМЕ КРОВИ ЧЕЛОВЕКА
1. ПРИНЦИП МЕТОДА 4.2 Основные правила обращения с радиоактивными веществами.
Получение, использование и транспортировка радиоактивных материалов должны
Иммунорадиометрическое определение тиреотропного гормона (ТТГ) относится происходить в соответствии с принятыми в данной стране нормами радиационной
к анализам типа «сэндвич». В наборе используются два вида мышиных безопасности и санитарными правилами работы с радиоактивными веществами.
моноклональных антител к различным эпитопам ТТГ. Исследуемые образцы, - В лабораториях запрещается принимать пищу, курить, пользоваться косметикой.
контрольные и калибровочные пробы инкубируют в пробирках, покрытых одним - Не пипетировать растворы радиоактивных веществ ртом.
видом моноклональных антител, совмеано с раствором других моноклональных - Для офаничения контакта с радиоактивными материалами рекомендуется
антител, меченных '“I. После окончания инкубации удаляют жидкое содержимое использовать разовые перчатки и лабораторную слецодежцу.
- Все манипуляции с радиоактивными веществами следует проводить в специально
пробирок и отмывают несвязанные меченые антитела. Связанную активность
оборудованных для этого помещениях, удаленных от мест постоянного
'“I измеряют на гамма-счетчике. Концентрацию ТТГ, прямо пропорциональную пребывания людей.
связанной активности, определяют методом интерполяции по калибровочной - Радиоактивные вещества следует хранить с использованием контейнеров в
кривой. специально отведенных для этого местах.
■ Необходимо регистрировать поступление и расход радиоактивных материалов.
2. РЕАГЕНТЫ, ВХОДЯЩИЕ В СОСТАВ НАБОРА - Лабораторное оборудование и посуду следует хранить отдельно, чтобы
Все реагенты стабильны при 2-8”С до окончания срока годности набора, предотвратить их зафязнение радиоактивными изотопами.
указанного на упаковке. Сроки годности, указанные на этикетках флаконов с - Любой случай радиоактивного зафязнения или исчезновения радиоактивного
материала должен рассматриваться а соответствии с законодательством.
реагентами, относятся только к их хранению в производственных условиях
- Утилизация радиоактивных отходов должна осуществляться в соответствии с
вплоть до момента комплектации набора и не распространяются наполученную законодательством.
заказчиком продукцию.
4.3 Азид натрия
Условия хранения компонентов набора после их растворения или разбавления
Некоторые компоненты набора содержат азид натрия в качестве
указаны в разделе «Процедура анализа».
консерванта. Вступая в реакцию со свинцом, медью и латунью, азид
2.1 Набор для определения ТТГ, 100 пробирок (Кат. № 3459) натрия образует взрывоопасные азиды металлов. Отработанные
2.1.1 Пробирки с антителами к ТТГ: 2 х 50 шт. (готовы к использованию) реагенты следует разбавлять большим количеством водопроводной воды,
после чего их можно сливать в канализацию.
2.1.2 Метка, моноклональные антитела к ТТГ, меченные ’“I; 1 флакон,
(11 мл) (готова к использованию) 4.4 Сыворотка крови человека
На дату изготовления флакон содержит 515 кБк '“1-иммуноглобулинов в Материал человеческого происхождения, входящий в состав компонентов
буфере с бычьим сывороточным альбумином, красителем и азидом набора, не содержит антител к HIV 1, HIV 2, HCV и к поверхностному
натрия (< 0,1 %, см. п. Меры предосторожности). антигену вируса гепатита В (HBsAg). Тем не менее, ни один из
существующих методов анализа не может гарантировать полного
2.1.3 Калибровочные пробы: 7 флаконов по 1 мл (готовы к использованию)
отсутствия инфекционных агентов в исследуемом материале. Поэтому
Калибровочные пробы содержат ТТГ в диапазоне концентраций от О до
при работе с компонентами набора следует соблюдать необходимые
50 мМЕ/л в бычьей сыворотке. Точные концентрации, калиброванные по
меры предосторожности.
международному стандарту WHO 3rti IS 2003 81/565, указаны на этикетках
С исследуемыми образцами сыворотки крови следует обращаться как с
флаконов.
потенциально инфекционным материалом, могущим содержать вирусы
2.1.4 Контрольная сыворотка: 2 флакона (лиофилизованные препараты) СПИД и гепатита. Весь использованный материал должен быть уничтожен
Флаконы содержат лиофилизованную бычью сыворотку с известным по действующим государственным правилам и инструкциям.
количеством ТТГ. Ожидаемый диапазон концентраций указан на этикетках
флаконов. 5. ПОЛУЧЕНИЕ, ОБРАБОТКА, ХРАНЕНИЕ И РАЗВЕДЕНИЕ ОБРАЗЦОВ
2.1.5 Промывочный раствор (20х): 1 флакон, 50 мл - Собрать кровь в чистые сухие пробирки, или пробирки с анти­
Концентрированный раствор должен быть разведен перед коагулянтом ЭДТА или гепарином.
использованием. - Отделить сыворотку или плазму крови центрифугированием.
- О^азцы сыворотки и плазмы можно хранить при 2-8*С в течение
2.2 Набор для определения ТТГ (400 пробирок, Кат.М» 3461)
24 часов. Для fenee длительного хранения их необходимо разделить на
2.2.1 Пробирки с антителами к ТТГ: 8 х 50 шт. (готовы к использованию) аликвоты и заморозить при температуре <-18“С. Избегать повторного
2.2.2 Метка, моноклональные антитела к ТТГ, меченные ’”1:4 флакона (по замораживания-оттаивания проб.
11 мл) (готова к использованию) - Если концентрация ТТГ в образце превышает концентрацию в
максимальной калибровочной пробе, его следует разбавить нулевой
2.2.3 Калибровочные пробы: 7 флаконов по 1 мл (готовы к использованию)
калибровочной пробой.
2.2.4 Контрольная сыворотка: 2 флакона (лиофилизованные препараты)
6. ПРОЦЕДУРА АНАЛИЗА
2.2.6 Промывочный раствор (20х): 2 флакона по 50 мл
6.1 Подготовка реагентов
3. ДОПОЛНИТЕЛЬНЫЕ МАТЕРИАЛЫ И ОБОРУДОВАНИЕ Довести все реагенты до комнатной температуры.
Помимо стандартного лабораторного оборудования необходимо иметь
6.1.1 Растворение контрольных сывороток
следующее:
Растворить содержимое флаконов в указанном на этикетке объеме
- микропипетка (100 мкл)
дистиллированной воды. Через 30 минут аккуратно перемешать, избегая
- полуавтоматическая пипетка (100 мкл, 2 мл)
образования пены. Подготовленные к работе калибровочные пробы
- вихревой смеситель типа Vorlex
можно хранить один день при 2-8°С, или разделенными на аликвоты при
- горизонтальный или орбитальный встряхиватель
<-18°С до окончания срока годности набора.
- водоструйный насос
- гамма-счетчик для измерения активности **1. 6.1.2 Приготовление промывочного раствора
Смешать содержимое флакона с концентратом промывочного раствора и
4. МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ 950 мл дистиллированной воды. Подготовленный к работе промывочный
раствор можно хранить при 2-8‘С до окончания срока годности набора.
4.1 Общие замечания:
- Перед использованием довести реагенты до комнатной температуры. 6.2 Процедура анализа: (см. Таблицу ниже приведенную).
- Не смешивать реагенты из наборов разных серий.
7. РЕЗУЛЬТАТЫ
- Анализ калиб[Х)вочных и исследуемых проб должен проводиться
одновременно. Результаты рассчитывают методом интерполяции по калибровочной кривой,
- Анализ рекомендуется проводить в дубликатах. полученной одновременно с анализом неизвестных образцов.
- Пробирки только для одноразового применения.
7.1 Калибровочная кривая
PI-3459-2012-01-26
Результаты приведенные в этой инструкции, получены при построении
калибровочной кривой в логарифмических координатах («сплайн» 10. АНАЛИТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
функция) со связанной активностью (В-Во, имп./мин.) по вертикальной (болев подробная информация приведена в разделе “APPENDIX")
оси и концентрацией ТТГ (мМЕ/л) по горизонтальной оси калибровочного 10.1 Чувствительность
графика. Другие методы обсчета могут давать несколько отличающиеся
10.1.1 Аналитическая чувствительность: 0,020 мМЕ/л
результаты.
10.1.2 Функциональная чувствительность; 0,101 мМЕ/л
Общий счет: 231 657 имп./мин.
10.2 Специфичность
Калибровочные
ПГ (мМЕ/п) Имп./мин. (п=3) В-Во (ИМП./МИН.) Антитела, используемые в данном наборе, имеют высокую специфичность
проСы
к ТТГ. Перекрестная реакция с близкородственными структурными
О 93
соединениями (ЛГ, ФСГ, ХГЧ, СТГ, пролактин) очень мала,
0,15 319 226
0,50 847 754 10.3 Воспроизводимость
1,50 2436 2 343 10.3.1 Внутри анализа
5.00 8 043 7950 Анализ образцов проводили в 10 репликатах в пределах одной серии
15.0 22789 22696 определений. Коэффициент вариации измеренных уровней ЯГ в
50.0 68701 66608 сыворотке крови не превышал 3,7%.
(Прииер типичной калибровочной кривой. Не использовать для обсчета результатов.)
10.3.2 Между анализами
7.2. Образцы Анализ образцов в дубликатах проводили в 16 различных сериях
Для каждого образца найти на вертикальной оси калибровочного графика определений. Коэффициент вариации измеренных уровней ТТГ в
значение В-Во (имп./мин.), а на горизонтальной оси соответствукзщую сыворотке крови не превышал 8,6 %.
концентрацию ТТГ в мМЕ/л. Результаты, полученные для разбавленных
10.4 Точность
проб, следует умножить на фактор разведения.
10.4.1 Тест на разведение
8. КОНТРОЛЬ КАЧЕСТВА Образцы сыворотки крови с высоким уровнем ТТГ серийно разводили
В соответствии с требованиями Good laboratory practices для контроля качества нулевой калибровочной пробой. Процент 'открытия' составил 92% -110%.
проводимых исследований следует регулярно использовать контрольные 10.4.2 Тест на «открытие» стандартной добавки
образцы, которые должны проходить те же стадии анализа, что и Известные количества ТТГ добавляли в образцы сыворотки с низкой его
анализируемые пробы. Результаты контроля качества рекомендуется концентрацией. Измеренная величина 'открытия' составила от 93% до
обрабатывать с помощью специальных статистических методов. 106%.
В случае серьезного повреждения упаковки, или в случае несоответствия
полученных результатов аналитическим характеристикам (см.п.Ю) обратитесь, 10.5 Диапазон определений (от аналитической чувствительности до значения
пожалуйста, к вашему дистрибьютору или к нашим специалистам: наивысшей калибровочной пробы): 0,020 - 50 мМЕ/л.
Тел.:-н420 272 017 391; Факс: -b420 272 017 385; 11. ОГРАНИЧЕНИЯ МЕТОДА
E-mail: imunochem@t)eckmaii .com Нарушение методики проведения анализа может привести к искажению
Тел.:+7 495 9371664; Факс: *7 495 254 64 07; результатов исследования.
E-mail: teckman.m® taeckman.com Результаты определения должны быть интерпретированы в свете общей
клинической картины пациента, включая анамнез, данные других тестов и
9. ОЖИДАЕМЫЕ ЗНАЧЕНИЯ
подходящую иную информацию
В каждой лаборатории рекомендуется установить собственные уровни ТТГ, При выполнении анализов с использованием антител возможна интерференция
соответствующие нормальным. Результаты определения должны быть гетерофильными антителами в пробе пациента. У пациентов, имеющих
интерпретированы в свете общей клинической картины пациента, включая постоянный контакт с животными или проходивших иммунотерапию или
анамнез, данные других тестов и подходящую иную информацию. Приведенные диагностические процедуры с использованием иммуноглобулинов или их
ниже значения являются ориентировочными. фрагментов, могут вырабатываться антитела (т.е. НАМА), которые влияют на
Эутиреоз(п = 127) 0,17 - 4,05мМЕ/л результаты иммунного анализа.
Гипертиреоз(п=71) 50,15мМЕ/л Влияние этих антител может привести к получению ошибочных результатов.
Нелеченый тпотиреоз (п = 58) >5 мМЕ/л Тщательно проверяйте результаты анализов пациентов с подозрением на
наличие этих антител.
6.2 Процедура АНАЛИЗА
Стадия 1 Стадия 2 Стадия 3
Внесение реагентов * Инкубация Измерение результатов
В покрытые антителами
Тщательно удалить
пробирки
содержимое пробирок
последовательно внести:
(кроме проб «Т»).
Инкубировать 1 час
-100 мкл калибровочных,
при 18-25°С и Промыть пробирки
контрольных и
постоянном встряхивании два раза по 2мл
анализируемых проб
(>280 осц./мин.) промывочного раствора.
и
-100 мкл метки. Измерить связанную (В)
и общую активность (Т),
Перемешать.
имп./мин. в течение 1 минуты.
* В две дополнительные пробирки внести по 100 мкл метки для определения общей активности (Т), имп./мин.
^ IMMUNOTECH s.ro. - RadiovS 1 -102 27 Prague 10 - Czech Republic - Phone. t420-272017444 - Fax: -*420-272017385
PI-3459-2012-01-26
г' -
Инструкция no
использованию
BECKMAN
COULTER.
RUSSIAN
IVD TO TAL T3 RIA KIT
НАБОР ДЛЯ РАДИОИММУНОЛОГИЧЕСКОГО IN VITRO ОПРЕДЕЛЕНИЯ С€
ОБЩЕГО ТРИЙОДТИРОНИНА (ИЗ) В СЫВОРОТКЕ И ПЛАЗМЕ КРОВИ ЧЕЛОВЕКА
- Анализ калибровочных и неизвестных проб должен проводиться
1. ПРИНЦИП МЕТОДА одновременно.
Радиоиммунолоточеское определение общего трийсдтиронина (ТЗ) относится к - Анализ рекомендуется проводить в дубликатах.
конкурентным видам анализа. Исследуемые образцы и калибровочные пробы - Пробирки предназначены для однократного использования.
инкубируют со '“1-ТЗ в пробирках, покрытых антителами. Затем удаляют
4.2 Основные правила обращения с радиоактивными веществами
содержимое пробирок и измеряют связанную активность Щ. Концентрацию ТЗ
Получение, использование и транспортировка радиоактивных материалов
определякзт методом интерполяции по калибровочной фивой.
должны происходить в соответствии с принятыми в данной стране
2. РЕАГЕНТЫ, ВХОДЯЩИЕ В СОСТАВ НАБОРА нормами радиационной безопасности и санитарными правилами работы с
радиоактивными веществами.
Все реагенты стабилы<ы при 2-8*С до окончания срока годности набора. Сроки
- В лабораториях запрещается принимать пищу, курить, пользоваться
годности, указанные на этикетках флаконов с реагентами, относятся толысо к их
косметикой.
хранению в производственных условиях вплоть до момента комплектации
- Не пипетировать растворы радиоактивных веществ ртом.
набора и не распространяются наполученную заказчиком продукцию.
- Для ограничения контакта с радиоактивными материалами
Условия хранения после растворения и разбавления реагентов указаны в
рекомендуется использовать разовые перчатки и лабораторную
разделе 'Процедура анализа'.
спецодежду.
2.1 Набор для определения общего ТЗ, 100 пробирок (Kar.Ns #1699) - Все манипуляции с радиоактивными веществами следует проводить в
2.1.1 Пробирки, покрытые моноклональными антителами к ТЗ: 2 х 50 шт специально оборудованных для этого помещениях, удаленных от мест
(готовы к использованию) постоянного пребывания людей.
- Радиоактивные вещества следует хранить с использованием
2.1.2 Метка, '“1-ТЗ: 1 флакон, 22 мп (готова к использованию)
контейнеров в специально отведенных дпя этого местах.
На дату изготовления флакон содержит 165 кБк '“|-ТЗ в буфере с белком,
- Необходимо релстрировать поступление и расход радиоактивных
азидом натрия (<0,1%; см. п. Меры предосторожности) и красителем.
материалов.
Примечание: Наличие сгустков в растворе метки не влияет на результат
- Лабораторное оборудование и посуду следует хранить отдельно, чтобы
анализа.
предотвратить их загрязнение радиоактивными изотопами.
2.1.3 Калибровочные пробы: 6 флаконов по 0,5 мп - Лю^й случай радиоактивного загрязнения или исчезновения
(готовы к использованию) радиоактивного материала должен рассматриваться в соответствии с
Калибровочные пробы содержат ТЗ в диапазоне концентраций законодательством.
от О до 12 нмоль/л в сыворотке крови человека с азидом натрия - Утилизация радиоактивных отходов должна осуществляться в
(< 0,1 %; см. п. Меры предосторожности). После внесения калибровочных соответствии с законодательством.
проб в пробирки нужно немедленно плотно закупорить флаконы
4.3 Азид натрия
пробками и хранить их при 2-8 *С. Испарение жидкости может привести к
Некоторые компоненты набора содержат азид натрия в качестве
искажению результатов анализа при последующих определениях. Точные
консерванта. Вступая в реакцию со свинцом, медыо и латуныо, азид
концентрации, калиброванные по стандарту IRMM-469, указаны на
натрия образует взрывоопасные азиды металлов. Отработанные
этикетках флаконов.
реагенты следует разбавлять большим количеством водопроводной воды,
2.1.4 Контрольная сыворотка: 2 флакона (лиофилизованные препараты) после чего их можно сливать в канализацию.
Флаконы содержат лиофилизованную сыворотку крови человека
4.4 Сыворотка крови человека
с известным содержанием ТЗ (см. п. Меры предосторожности).
Материал человеческого проиаождения, входящий в состав компонентов
Ожидаемые диапазоны концентраций указаны на дополнительном листке-
набора, не содержит антител к HIV 1, HIV 2, HCV и к поверхностному
вкладыше. После внесения контрольных проб в пробирки нужно
антигену вируса гепатита В (HBsAg). Тем не менее, ни один из
немедленно плотно закупорить флаконы пробками и хранить их, как
существующих методов анализа не может гарантировать полного
указано в п. 6.1. Испарение жидкости может привести к искажению
отсутствия инфекционных агентов в исследуемом материале. Поэтому
результатов анализа при последующих определениях.
при работе с компонентами набора следует соблюдать необходимые
2.2 Набор для определения общего ТЗ, 400 пробирок (Кат. № #3287) меры предосторожности.
2.2.1 Пробирки, покрытые моноклональными антителами к ТЗ: 8 х 50 шт. С исследуемыми образцами сыворотки крови следует обращаться как с
(готовы к использованию) потенциально инфекционным материалом, могущим содержать вирусы
СПИД и гепатита. Утилизация отходов должна осуществляться в
2.2.2 Метка, <”1-ТЗ: 4 флакона по 22 мл (готова к использованию)
соответствии с законодательством.
2.2.3 Калибровочные пробы: 6 флаконов по 0,5 мл
(готовы к использованию) 5. ПОЛУЧЕНИЕ, ОБРАБОТКА И ХРАНЕНИЕ ОБРАЗЦОВ
2.2.4 Контрольная сыворотка: 2 флакона (лиофилизованные препараты) - Собрать кровь в чистые сухие пробирки, или пробирки с ЭДТА, или
гепарином.
3. ДОПОЛНИТЕЛЬНЫЕ МАТЕРИАЛЫ И ОБОРУДОВАНИЕ - Отделить сыворотку или плазму крови центрифугированием.
Помимо стандартного лабораторного оборудования необходимо иметь - Образцы сыворотки и плазмы можно хранить при 2-8’С в течение
следующее: 24 часов. Для более длительного хранения их необходимо разделить на
- микропипетки (25 мкл) аликвоты и заморозить при температуре < -18‘С. Избегать повторного
- полуавтоматические пипетки (200 мкл) замораживания-оттаивания проб.
- вихревой смеситель типа Vortex
6. ПРОЦЕДУРА АНАЛИЗА
- горизонтальный или орбитальный встряхиватель
- водоструйный насос 6.1 Растворение контрольных сывороток
- гамма-счетчик для измерения активности '»1 Довести флаконы с контрольными сыворотками до комнатной
температуры и растворить их содержимое в объеме дистиллированной
4. МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ
воды, указанной на этикетке. Через 10 минуг аккуратно перемешать,
4.1 Общие замечания: избегая образования пены. Растворенные контрольные сыворотки можно
- Перед использованием довести все реагенты до комнатной хранить при 2-8"С в течение 1 недели, или разделенными на аликвоты
температуры. при <-18‘С до окончания срока годности набора.
- Не смешивать реагенты из наборов разных серий. 6Ji Процедура анализа (см. таблицу на следующей странице)
PI-1699-2012-01-26
7. РЕЗУЛЬТАТЫ 10. АНАЛИТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
Результаты рассчитывают методом интерполяции по калибровочной фивой, (более подробная информация приведена в разделе “APPENDIX")
полученной одновременно с анализом неизвестных образцов.
10.1 Чувствительность
7.1. Калибровочная кривая
10.1.1 Аналитическая чувствительность: 0,3 нмоль/л
Результаты контроля качества набора, указанные на отдельном листке-
вкпадыше, получены при построении калибровочной кривой в координатах 10.1.2 Функциональная чувствительность: 0,5 нмоль/л
logit-log (spline) с соотношением ВЯ (%) или В/Во (%) по вертикальной оси 10.2 Специфичность
и концентрацией ТЗ (нмоль/л) по горизонтальной оси калибровочного Антитела, используемые в данном наборе, обладают высокой
графика. Другие методы обсчета могут давать несколько отличающиеся специфичностью к ТЗ. Перекрестная реакция с близкородственными
результаты._________________________________________________ молекулами (реверсивный ТЗ, L-T4, D-T4 и др.) чрезвычайно мала.
Общий счет: 55 739 имп./мин. 10.3 Воспроизводимость
Калибровочные ТТЗ Имл^мин.
ВП' (%) В/Во(%) 10.3.1 Внутри анализа
пробы (нмопь/л) (п=3)
о Анализ образцов проводили в 10 репликатах в пределах одной серии
41 993 75,3 100
определений. Коэффициент вариации измеренных уровней ТЗ в
0,75 33 375 59,9 79,5
сыворотке крови не превышал 6,3 %.
1,50 24922 44.7 59.3
3.00 15 480 27.8 36,9 10.3.2 Между анализами
6.00 8930 16,0 21.3 Анализ образцов в дубликатах проводили в 10 различных сериях
12,0 5128 9,20 12,2 опредепений. Коэффициент вариации измеренных уровней ТЗ в
(Пршер типичной калибровочной кривой. Не использовать для обсчета результатов.) сыворотке крови не превышал 7,7 %.
7.2. Образцы 10.4 Точность
Дпя каждого образца найти на вертикальной оси калибровочного фафика 10.4.1 Тест на разведение
значение В/Т (%) или В/Во (%), а на горизонтальной оси соответствующую Величина 'открытия' в серийно разведенных образцах с высокой
концентрацию ТЗ в нмоль/л. концентрацией ТЗ составила от 90% до 110%.
Для перевода концентраций из нмоль/л в нг/100мл нужно умножить
10.4.2 Тест на открытие стандартной добавки
попученный результат на 65.
В образцы с низкой концентрацией гормона вносили известные
8. КОНТРОЛЬ КАЧЕСТВА количества ТЗ. Величина «открытия» составила от 93% до 106%.
В соответствии с требованиями Good laboratory practices для контроля качества 10.5 Диапазон определений (от аналитической чувствительности до значения
проводимых исследований следует регулярно использовать контрольные наивысшей калибровочной пробы): 0,3-12 нмоль/л.
образцы, которые должны проходить те же стадии анализа, что и
11. ОГРАНИЧЕНИЯ МЕТОДА
анализируемые пробы. Результаты контроля качества рекомендуется
обрабатывать с помощью специальных статистических методов. Нарушение методики проведения анализа может привести к искажению
В случае серьезного повреждения упаковки, или в случае несоответствия результатов исследования.
полученных результатов аналитическим характеристикам (см.п.Ю) обратитесь, Результаты определения должны быть интерпретированы в свете общей
пожалуйста, к вашему дистрибьютору или к нашим специалистам: клинической картины пациента, включая анамнез, данные друшх тестов и
подходящую иную информацию
Тел.:+420 272 017 391; Факс: +420 272 017 385; E-mail: imunochem@t)ecl<man.coin При выполнении анализов с использованием антител возможна интерференция
Тел.:+7 495 9371664; Факс: +7 495 254 64 07; E-mail: t)eckman .ruiS)t)ecknian com гетерофильными антителами в пробе пациента. У пациентов, имеющих
постоянный контакт с животными или проходивших иммунотерапию или
9. ОЖИДАЕМЫЕ ЗНАЧЕНИЯ
диатостические процедуры с использованием иммуноглобулинов или их
В каждой паборатории рекомендуется установить собственные уровни ТЗ, фрагментов, могут вырабатываться антитела (т.е. НАМА), которые влияют на
соответствующие нормальным. Ориентировочно, диапазон концентраций результаты иммунного анализа.
общего ТЗ в сыворотке или плазме нелеченых эутиреоидных пациентов Влияние этих антител может привести к получению ошибочных результатов.
составляет 1,2 - 2,8 нмопь/п. Тщательно проверяйте результаты анализов пациентов с подозрением на
наличие этих антител.
6.2 Процедура АНАЛИЗА
Стадия 1 Стадия 2 Стадия 3
Внесение реагентов * Инкубация Измерение результатов
В покрытые антителами
пробирки последовательно
внести: Тщательно удалить
Инкубировать 1 час содержимое всех пробирок
- 25 мкл калибровочных проб, при 18-25 "С (кроме проб «Т»).
контрольных и и постоянном
анализируемых образцов встряхивании Измерить связанную (В)
и (>280 осц./мин.). и общую (Т) активность ^“ 1
- 200 мкл метки. в течение 1 мин.
Перемешать.
■ в две дополнительные пробирки внести по 200 мкл метки для оценки общей активности '2*1 (пробы «Т»).
IMMUNOTECH s.r.o. - RadiovS 1 -102 27 Prague 10 - Czech Republic - Phone. -^420-272017444 - Fax : +420-272017385
РИ699-2012-01-26
Инструкция no
использованию
BECKM AN
COULTER
IVD TO TAL T4 RIA KIT: IM1447-IM3286
НАБОР для РАДИОИММУНОЛОГИЧЕСКОГО IN VITRO ОПРЕДЕЛЕНИЯ
ОБЩЕГО ТИРОКСИНА (П4) В СЫВОРОТКЕ И ПЛАЗМЕ КРОВИ ЧЕЛОВЕКА
4.2 Основные правила обращения с радиоактивными веществами
1. ПРИНЦИП МЕТОДА
Получение, испольоование и транспортировка радиоактивных материалов должны
Радиоиммунолотческое определение общего тироксина (ТТ4) относится к лроисходить в соответствии с принятыми е данной стране норманн радиационной
конкурентным видам анализа. Исследуемые образцы и калибровочные пробы безопасности и санитарными правилами работы с радиоактивными веществами.
инкубируют со '“I-T4 в пробирках, пофытых антителами. Затем удаляют - В лабораториях запрещается принимать пищу, курить, пользоваться косметикой,
содержимое пробирок и измеряют связанную активность '“I. Концентрацию Т4 - Не пипетировать растворы радиоактивных веществ ртом,
определяют методом интерполяции по калибровочной кривой. - Для офаничения контакта с радиоактивными материалами рекомендуется
использовать разовые перчатки и лабораторную спецодежду.
2. РЕАГЕНТЫ, ВХОДЯЩИЕ В СОСТАВ НАБОРА - Все манипуляции с радиоактивными веществами следует проводить в специально
Все реагенты стабильны при 2-8*С до окончания срока годности набора. Сроки оборудованных для этого помещениях, удаленных от мест постоянного
годности, указанные на этикетках флаконов с реагентами, относятся толы<о к их пребывания людей.
хранению в производственных условиях вплоть до момента комплектации - Радиоактивные вещества следует хранить с использованием контейнеров в
набора и не распространяются наполученную заказчиком продукцию. специально отведенных для этого местах.
- Необходимо реп<стрировать поступление и расход радиоактивных материалов,
Условия хранения после растворения и разбавления реагентов указаны в
■ Лабораторное оборудование и посуду следует хранить отдельно, чтобы
разделе "Процедура анализа', предотвратить их зафязнение радиоактивными изотопами,
2.1 Набор для определения общего Т4,100 пробирок (Кат.№1447) - Любой случай радиоактивного зафязнения или исчезновения радиоактивного
материала должен рассматриваться в соответствии с законодательством,
2.1.1 Пробирки, покрытые моноклональными антителами к Т4:2 х 50 шт - Утилизация радиоактивных отходов должна осуществляться в соответствии с
(готовы к использованию) законодательством.
2.1.2 Метка, '"I-T4:1 флакон, 55 мп (готова к использованию) 4.3 Азид натрия
На дату изготовления флакон содержит 110 кБк '“I-T4 в буфере с белком, Некоторые компоненты набора содержат азид натрия в качестве консерванта.
азидом натрия (<0,1%; см. п. Меры предосторожности) и красителем. Вступая в реакцию со свинцом, медью и латунью, азид натрия образует
взрывоопасные азиды металлов. Отработанные реагенты следует разбавлять
2.1.3 Калибровочные пробы: 6 флаконов по 0,5 мп большим количеством водопроводной воды, после чего их можно сливать в
(готовы к использованию) канализацию,
Калибровочные пробы содержат Т4 в диапазоне концентраций
4.4 Сыворотка крови человека
от О до 400 нмоль/л в сыворотке крови человека с азидом натрия
Материал человеческого происхождения, входящий в состав компонентов набора, не
(< 0,1 %; см. п. Меры предосторожности). После внесения калибровочных содержит антител«HIV1, HIV 2, HCV и к поверхностному антигену вируса гепатита В
проб в пробирки нужно немедленно плотно закупорить флаконы (HBsAg), Тем не менее, ни один из существующих методов анализа не может
пробками и хранить их при 2-8 ‘С. Испарение жидкости может привести к гарантировать полного отсутствия инфекционных агентов в исследуемом материале.
искажению результатов анализа при последующих определениях. Точные Поэтому при работе с компонентами набора следует соблюдать необходимые меры
концентрации, калиброванные по стандарту IRMM-468, указаны на предосторожности,
С исследуемыми образцами сыворотки крови следует обращаться как с
этикетках флаконов.
потенциально инфекционным материалом, могущим содержать вирусы СПИД и
2.1.4 Контрольная сыворотка: 2 флакона (лиофилизованные препараты) гепатита. Утилизация отходов должна осуществляться в соответствии с
Флаконы содержат лиофилизованную сыворотку крови человека с законодательством,
известным содержанием Т4 (см. п. Меры предосторожности). Ожидаемые
5. ПОЛУЧЕНИЕ, ОБРАБОТКА И ХРАНЕНИЕ ОБРАЗЦОВ
диапазоны концентраций указаны на дополнительном листке-вкладыше.
После внесения контрольных проб в пробирки нужно немедленно - Собрать кровь в чистые сухие пробирки, или пробирки с ЭДТА, или
плотно закупорить флаконы пробками и хранить их, как указано в п. 6.1. гепарином.
Испарение жидкости может привести к искажению результатов анализа - Отделить сыворотку или плазму крови центрифугированием.
при последующих определениях. - Образцы сыворотки и плазмы можно хранить при 2-8‘С в течение
24 часов. Для более длительного хранения их необходимо разделить на
2.2 Набор для определения общего Т4,400 пробирок (Кат. № 3286)
аликвоты и заморозить при температуре < -18*0. Избегать повторного
2.2.1 Пробирки, покрытые моноклональными антителами к Т4:8 х 50 шт. замораживания-опаивания проб.
(готовы к использованию)
6. ПРОЦЕДУРА АНАЛИЗА
2.2.2 Метка, '“I-T4:4 флакона по 55 мл (готова к использованию)
6.1 Растворение контрольных сывороток
2.2.3 Калибровочные пробы: 6 флаконов по 0,5 мл
Довести флаконы с контрольными сыворотками до комнатной
(готовы к использованию)
температуры и растворить их содержимое в объеме дистиллированной
2.2.4 Контрольная сыворотка: 2 флакона (лиофилизованные препараты) воды, указанной на этикетке. Через 10 минут аккуратно перемешать,
избегая образования пены. Растворенные контрольные сыворотки можно
3. ДОПОЛНИТЕЛЬНЫЕ МАТЕРИАЛЫ И ОБОРУДОВАНИЕ
хранить при 2-8°С в течение 1 недели, или разделенными на аликвоты
Помимо стандартного лабораторного оборудования необходимо иметь при <-18”С до окончания срока годности набора. Избегать повторного
следующее: замораживания-опаивания проб.
- микропипетки (20 мкп)
- полуавтоматические пипетки (500 мкл) 6.2 Процедура анализа (см. таблицу приведенную ниже)
- вихревой смеситель типа Vortex
7. РЕЗУЛЬТАТЫ
- горизонтальный или орбитальный встряхиватель
Результаты рассчитывают методом интерполяции по калибровочной кривой,
- водоструйный насос
полученной одновременно с анализом неизвестных образцов.
- гамма-счетчик для измерения активности ’“I.
7.1. Калибровочная кривая
4. МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ Результаты контроля качества набора, приведенные в этой инструкции,
получены при построении калибровочной кривой в координатах logit-log
4.1 Общие замечания:
- Перед использованием довести все реагенты до комнатной (взвешенная кубическая рефессия) с соотношением Bf[ (%) или В/Во (%)
температуры. по вертикальной оси и концентрацией Т4 (нмоль/л) по горизонтальной оси
- Не смешивать реагенты из наборов разных серий. калибровочного фафика. Другие методы обсчета могут давать несколько
- Анализ калибровочных и неизвестных проб должен проводиться отличающиеся результаты.
одновременно.
- Анализ рекомендуется проводить в дубликатах,
- Пробирки предназначены для однократного испопьзования.
PI-1447-2012-01-26
Общий счет: 44 140 имп./мин. 10.3 Воспроизводимость
Калибровочные ТТ4 ИМП./МИН.
ВП(%) В/Во(%) 10.3.1 Внутри анализа
пробы (нмопь/п) JnyL Анализ образцов проводили в 10 репликатах в пределах одной серии
О 34 959 77,2 100
определений. Коэффициент вариации измеренных уровней 14 в
26 31 590 71.6 90,4
сыворотке крови не превышал 6,2 %.
53 26 213 59,4 75,0
105 17 048 38.6 48.8 10.3.2 Между анализами
210 9727 22,0 27.8 Анализ образцов в дубликатах проводили в 10 различных сериях
420 5187 11,8 14.8 определений. Коэффициент вариации измеренных уровней Т4 в
(Притер типичной калибровочной кривой. Не использовать для обсчета результатов.) сыворотке крови не превышал 8,6 %.
7.2. Образцы 10.4 Точность
Для каждого образца найти на вертикальной оси калибровочного графика 10.4.1 Тест на разведение
значение В/Т {%) или В/Во {%), а на горизонтальной оси соответствующую 10 образцов сыворотки крови с высоким содержанием 14 серийно
концентрацию Т4 в нмоль/л. разводили ‘нулевой’ калибровочной пробой. Затем рассчитывали
Для перевода концентраций из нмоль/л в нг/100мл нужно умножить соотношение ожидаемых и измеренных концентраций и проводили
полученный результат на 77,7. регрессионный анализ полученных результатов,
у =1,096 X-7,290; г = 0,987 (п = 30),
8. КОНТРОЛЬ КАЧЕСТВА
где
В соответствии с требованиями Good laboratory practices для контроля качества
X - ожидаемое значение концентрации
лроводимых исследований следует регулярно использовать контрольные образцы, которые
у - измеренное значение концентрации.
должны проходить те же стадии анализа, что и анализируемые пробы. Результаты контроля
качества рекомендуется обрабатывать с помощью специальных статистических методов. 10.4.2 Тест на открытие стандартной добавки
В случае серьезного повреждения упаковки, или в случае несоответствия полученных Значение "открытия" было рассчитано для 10 образцов сыворотки крови,
результатов аналитическим характеристикам (см.л.Ю) обратитесь, пожалуйста, к вашему которые были смешаны с различными калибровочными пробами
дистрибьютору или к нашим специалистам:
тироксина. Измеренные результаты подчиняются следующему уравнению
Тел.:-М20 272 017 391; Факс: -*420 272 017 385; линейной регрессии:
E-mail: imunochemlSbeckman .com Тел.:+7 495 9371664; у =1,050 X-1,834; г = 0,993 (п = 40),
Факс: +7 495 254 64 07; E-mail: beckman.rulSbeckman.com где
X -ожидаемое значение концентрации
9. ОЖИДАЕМЫЕ ЗНАЧЕНИЯ
у - измеренное значение концентрации.
В каждой лаборатории рекомендуется установить собственные уровни Т4,
соответствующие нормальным. Ориентировочно, диапазон концентраций 10.5 Диапазон определений (от аналитической чувавительности до значения
общего Т4 в сыворотке и плазме нелеченых эутиреоидных пациентов составляет наивысшей калибровочной пробы): 13 - 400 нмоль/л.
60-160 нмоль/п. 11. ОГРАНИЧЕНИЯ МЕТОДА
Нарушение методики проведения анализа может привести к искажению
10. АНАЛИТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
результатов исследования.
(болев подробная информация приведена в разделе “APPENDIX")
Результаты определения должны быть интерпретированы в свете общей
10.1 Чувствительность клинической картины пациента, включая анамнез, данные других тестов и
10.1.1 Аналитическая чувствительность: 13 нмоль/л подходящую иную информацию
При выполнении анализов с использованием антител возможна интерференция
10.1.2 Функциональная чувствительность: 16,7 нмоль/л
гетерофильными антителами в пробе пациента. У пациентов, имеющих
10.2 Специфичность постоянный контакт с животными или проходивших иммунотерапию или
Антитела, используемые в данном наборе, обладают высокой диагностические процедуры с использованием иммуноглобулинов или их
специфичностью к Т4. Перекрестная реакция с близкородственными фрагментов, могут вырабатываться антитела (т.е. НАМА), которые влияют на
молекулами {L-T3, D-T3 и др.) чрезвычайно мала. результаты иммунного анализа.
Влияние этих антител может привести к получению ошибочных результатов.
Тщательно проверяйте результаты анализов пациентов с подозрением на
наличие этих антител.
6.2 Процедура АНАЛИЗА
Стадия 1 Стадия 2 Стадия 3
Внесение реагентов * Инкубация Измерение результатов
В покрытые антителами
пробирки последовательно
внести: Тщательно удалить
Инкубировать 1 час содержимое всех пробирок
- 20 мкл калибровочных проб. при 18-25 °С (кроме проб «Т»).
контрольных и анализируемых и постоянном
образцов встряхивании Измерить связанную (В)
и (>280 осц./мин.). и общую (Т) активность
- 500 мкл метки. в течение 1 мин.
Перемешать.
* в две дополнительные пробирки внести по 500 мкл метки для оценки общей активности '2*1 (пробы «Т»).
IMMUNOTECH s.r.o. - RadiovS 1 - 102 27 Prague 10 - Czech Republic - Phone. +420-272017444 - Fax : +420-272017385
PI-1447-2012-01-26
о *
Инструкция no
BECKMAN использованию
COULTER.
RUSSIAN
IVD RIA FT3 IM1579 - IM3320
НАБОР ДЛЯ РАДИОИММУНОЛОГИЧЕСКОГО IN VITRO ОПРЕДЕЛЕНИЯ
а
СВОБОДНОГО ТРИЙОДТИРОНИНА В СЫВОРОТКЕ И ПЛАЗМЕ КРОВИ ЧЕЛОВЕКА
1. ПРИНЦИП МЕТОДА
4.2 Основные правила обращения с радиоактивными веществами.
Радиоиммунологическое определение свободного трийодтиронина (св.ТЗ)
Получение, использование и транспортировка радиоактивных материалов
относится к конкурентным видам анализа с использованием меченых антител.
должны происходить в соответствии с принятыми в данной стране
Исследуемые об^зцы и калибровочные пробы инкубируют с моноклоналы^ыми
нормами радиационной безопасности и санитарными правилами работы с
антителами к ТЗ, меченными <»1, в пробирках, лофытых аналогом ТЗ (лигандом).
радиоактивными веществами.
Происходит конкуренция между свободным трийодтиронином, присутствующим
- В лабораториях запрещается принимать пищу, курить, пользоваться
в образцах, и лигандом за связывание с мечеными антителами. После
косметикой.
инкубации удаляют жидкое содержимое пробирок и измеряют связанную
- Не пипетировать растворы радиоактивных веществ ртом.
активность '“I. Концентрацию свободного ТЗ определяют по калибровочной
- Для офаничения контакта с радиоактивными материалами
фивой методом интерполяции.
рекомендуется использовать разовые перчатки и лабораторную
2. РЕАГЕНТЫ, ВХОДЯЩИЕ В СОСТАВ НАБОРА спецодежду.
- Все манипуляции с радиоактивными веществами следует проводить в
Все реагенты стабильны при 2-8'С до окончания срока годности, указанного на
специально оборудованных для этого помещениях, удаленных от мест
этикетке набора. Сроки годности, указанные на этикетках флаконов с
постоянного пребывания людей.
реагентами, относятся только к их хранению в производственных условиях
- Радиоактивные вещества следует хранить с использованием
вплоть до момента комплектации набора и не распространяются напопученную
контейнеров в специально отведенных для этого местах.
заказчиком продукцию.
- Необходимо регистрировать поступление и расход радиоактивных
2.1 Набор для определения свободного ТЗ, 100 пробирок (Кат. № 1579) материалов.
2.1.1 Пробирки, покрытые лигандом: 2 х 50 шт. (готовы к использованию). - Лабораторное оборудование и посуду следует хранить отдельно, чтобы
предотвратить их загрязнение радиоактивными изотопами.
2.1.2 Метка, моноклональные антитела к ТЗ, меченные один флакон,
- Любой случай радиоактивного загрязнения или исчезновения
45 мл (готова к использованию).
радиоактивного материала должен рассматриваться в соответствии с
На дату изготовления флакон содержит 225 кБк 1-иммуноглобупинов в
законодательством.
бу(^рном растворе с бычьим сывороточным альбумином, фасителем и
- Утилизация радиоактивных отходов должна осуществляться в
азидом натрия (< 0,1 %, см. п. Меры предосторожности).
соответствии с законодательством.
2.1.3 Калибровочные пробы: 5 флаконов по 1 мл (готовы к использованию).
4.3 Азид натрия
Калиб^вочные пробы содержат известные количества свободного ТЗ в
Некоторые компоненты набора содержат азид натрия в качестве
диапазоне концентраций от О до 44 пмоль/л, в сыворотке крови человека с
консерванта. Вступая в реакцию со свинцом, медью и латунью, азид
азидом натрия (< 0,1 %; см. п. Меры предосторожности). Точные
натрия образует взрывоопасные азиды металлов. Отработанные
концентрации свободной формы гормона указаны на этикетках флаконов.
реагенты следует разбавлять большим количеством водопроводной воды,
Значения калибровочных проб были получены с помощью внутреннего
после чего их можно сливать в канализацию.
стандарта.
4.4 Сыворотка крови человека
2.1.4 Контрольная сыворотка: один флакон, 1 мл (готова к использованию).
Материал человеческого происхождения, входящий в состав компонентов
Флакон содержит сыворотку крови человека с известным уровнем
данного набора, не содержит антител к HIV 1, HIV 2, HCV, а также к
свободного ТЗ с азидом натрия (< 0,1 %; см. п. Меры предосторожности).
поверхностному антигену вируса гепатита В (HbsAg). Однако ни один из
Ожидаемый диапазон концентраций указан на этикетке флакона.
существующих методов анализа не может гарантировать полного
2.2 Набор для определения свободного ТЗ, 400 пробирок (Кат. № 3320) отсутствия инфекционных агентов в исследуемом материале. Поэтому
2.2.1 Пробирки, покрытые лигандом: 8 х 50 шт. (готовы к использованию). при работе с компонентами набора следует соблюдать необходимые
меры предосторожности.
2.2.2 Метка, моноклональные антитела к ТЗ, меченные <»1:4 флакона по
С исследуемыми образцами сыворотки крови следует обращаться как с
45 мл (готова к использованию).
потенциально инфекционным материалом, могущим содержать вирусы
2.2.3 Калибровочные пробы: 5 флаконов по 1 мл (готовы к использованию). СПИД и гепатита. Весь использованный материал должен быть уничтожен
2.2.4 Контрольная сыворотка: один флакон, 1 мл (готова к использованию). по действующим государственным правилам и инструкциям.
3. ДОПОЛНИТЕЛЬНЫЕ МАТЕРИАЛЫ И ОБОРУДОВАНИЕ 5. ПОЛУЧЕНИЕ, ОБРАБОТКА И ХРАНЕНИЕ ОБРАЗЦОВ
Помимо стандартного лабораторного оборудования необходимо иметь - Собрать кровь в чистые сухие пробирки, или пробирки, содержащие
следующее: ЭДТА, по возможности, натощак.
- микропипетка (100 мкл) - Отделить сыворотку/плазму от клеток крови центрифугированием.
- полуавтоматическая пипетка (400 мкл) - Образцы сыворотки и плазмы можно хранить при 2-8'С в течение
- вихревой смеситель типа Vortex 48 часов. Для №пее длительного хранения их необходимо разделить на
- горизонтальный или орбитальный встряхиватель аликвоты и заморозить при температуре < -18'С. Избегать повторного
- водоструйный насос замораживания-оттаивания проб.
- гамма-счетчик для измерения активности
6. ПРОЦЕДУРА АНАЛИЗА (см. таблицу на следующей странице).
4. МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ
7. РЕЗУЛЬТАТЫ
4.1 Общие замечания:
Результаты рассчитывают по калибровочной фивой методом интерполяции.
- Перед использованием довести реагенты до комнатной температуры.
Анализ калибровочных проб и исследуемых образцов должен проводиться
- Не смешивать реагенты из наборов разных серий.
одновременно.
- Анализ калиб(Х)вочных проб должен проводиться одновременно с
исследуемыми образцами. 7.1 Калибровочная кривая
- Для получения воспроизводимых результатов очень важно соблюдать Результаты контроля качества набора, указанные в разделе ‘APPENDIX",
рекомендуемые условия встряхивания пробирок. получены при построении калибровочной фивой в логарифмических
- Анализ рекомендуется проводить в дубликатах. координатах («сплайн» функция) с соотношением ВЯ (%) или В/Во (%) по
- Пробирки только для одноразового применения. вертикальной оси и концентрацией свободного ТЗ (пмоль/л) по
горизонтальной оси калибровочного графика. Другие методы обсчета
могут давать несколько отличающиеся результаты.
PI-1579-2012-01-26
10. АНАЛИТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
Общая активность: 85959 имп./ мин. (болев подробная информация приведена в разделе “APPENDIX")
СВ.ТЗ Имп^мин. 10.1 Чувствительность
Стандарты В/ВО (%)
(пмопь/п) ("=3) 10.1.1 Анапитическая чувствительность: 0,5 пмоль/л
О 82116 95,5 100
2,1 68939 80,2 84,0 10.1.2 Функциональная чувствительность: 1,0 пмоль/л
5,1 52225 60,8 63,6 10.2 Специфичность
10,4 34354 40,0 41.8 Антитела, используемые в данном наборе, имеют высокую специфичность
44 8890 10,3 10.8 к ТЗ, Перекрестная реакция со структурными аналогами (L-T4, D-T4, ТЗг и
(Пример типичной калибровочной кривой. Не использовать для обсчета результатов.) др.) очень мала.
7.2 Образцы 10.3 Воспроизводимость
Для каждого образца найти на вертикальной оси калибровочного графика
10.3.1 Внутри анализа
значение ВЯ (%) или В/Во (%), а на горизонтальной оси соответствующую
Образцы анализировали в 15 репликатах в одной серии определений.
концентрацию свободного ТЗ.
Коэффициент вариации измеренного уровня свободного ТЗ в сыворотке
Для перевода концентраций из лмоль/л (лМ) в пг/мл нужно умножить
крови не превышал 6,4 %.
полученный результат на 0,651.
10.3.2 Между анализами
8. КОНТРОЛЬ КАЧЕСТВА Анализ образцов в дубликатах проводили в 10 различных сериях
В соответствии с требованиями «Good laboratory practices» для контроля определений. Коэффициент вариации измеренного уровня свободного ТЗ
качества проводимых исследований следует регулярно ислользовать в сыворотке крови не превышал 5,5 %.
контрольные образцы, которые должны проходить те же стадии анализа, что и 10.4 Диапазон определений (от аналитической чувствительности до значения
анализируемые пробы. Результаты контроля качества рекомендуется наивысшей калибровочной пробы): 0.5 - 44 пмоль/л
обрабатывать с помощью специальных статистических методов.
11. ОГРАНИЧЕНИЯ МЕТОДА
В случае серьезного повреждения упаковки, или в случае несоответствия
полученных результатов аналитическим характеристикам (см.п.Ю) обратитесь, Нарушение методики проведения анализа может привести к искажению
пожалуйста, к нашим специалистам: Тел,:+420 272 017 391; результатов исследования. Результаты определения должны быть
Факс: +420 272 017 385; e-mail: imunochemiSbeckman .com интерпретированы в свете общей клинической картины пациента, включая
Тел.:+7 495 9371664; Факс: +7 495 254 64 07; анамнез, данные других тестов и подходящую иную информацию.
e-mail: beckman.ru@beckman.com При выполнении анализов с использованием антител возможна интерференция
гетерофильными антителами в пробе пациента. У пациентов, имеющих
9. ОЖИДАЕМЫЕ ЗНАЧЕНИЯ постоянный контакт с животными или проходивших иммунотерапию или
В каждой лаборатории рекомендуется установить собственные уровни диатостические процедуры с использованием иммуноглобулинов или их
свободного ТЗ, соответствующие нормальным. Приведенные ниже значения фрагментов, могут вырабатываться антитела (т.е. НАМА), которые влияют на
являются всего лишь ориентировочными: результаты иммунного анализа.
Влияние этих антител может привести к получению ошибочных результатов.
Тщательно проверяйте результаты анализов пациентов с подозрением на
2,5 - 5,8 пмоль/л
наличие этих антител.
Примечание: Данные результаты были получены в ходе нескольких
исследований, проведенных на 531 эутиреоидном пациенте.
6. ПРОЦЕДУРА АНАЛИЗА
Стадия 1 Стадия 2 Стадия 3
Внесение компонентов * Инкубация Измерение результатов
В покрытые лигандом
пробирки последовательно Тщательно удалить
внести: содержимое пробирок
Инкубировать
(кроме проб «Т»).
120 минут
-100 мкл калибровочных,
при 18-25Х
контрольных или Измерить связанную (В) и
и постоянном встряхивании
анализируемых проб общую (Т) активность ^25|
(350 осц./мин.)
- 400 мкл метки. (имп./мин.) в течение 1
минуты.
Перемешать.
•В две дополнительные пробирки для определения общего счета (Т) внести по 400 мкл метки.
^ IMMUNOTECH s.r.o. - Radiova 1 - 102 27 Prague 10 - Czech Republic - Phone. +420-272017444 - Fax: -*420-272017385
PI-1579-2012-01-26
[ f jj
Инструкция по
использованию
BECKM AN
COULTER
RUSSIAN
IVD FT4 RIA KIT IM1363 - IM3321
НАБОР для РАДИОИММУНОЛОГИЧЕСКОГО IN VITRO ОПРЕДЕЛЕНИЯ
с с
СВОБОДНОГО ТИРОКСИНА (FT4) В СЫВОРОТКЕ И ПЛАЗМЕ КРОВИ ЧЕЛОВЕКА
- гамма-счетчик для измерения активности '“I.
1. ПРИНЦИП МЕТОДА
Радиоиммунологическое определение свободного тироксина (FT4) относится к 4. МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ
конкурентным видам анализа и использует меченые антитела. Образцы 4.1 Общие замечания:
инкубируют в пробирках, покрытых авидином, совместно с монокпоналы<ыми - Перед использованием довести все реагенты до комнатной
'“1-антителами к тироксину и биотинилированным аналогом тироксина температуры.
(лигандом). Свободный тироксин образца вытесняет определенную часть - Не смешивать реагенты из наборов разных серий.
лиганда из его комплекса с антителами. Комплекс ‘лиганд-антитела’ - Анализ калибровочных и неизвестных проб должен проводиться
связывается с авцдином, имообилизированном на стенках пробирок. Значение одновременно.
связанной пробирками радиоактивности обратно пропорционально концентрации - Анализ рекомендуется проводить в дубликатах.
свободного тироксина в образце. Концентрацию Т4 определяют методом - Пробирки предназначены для однократного использования
интерполяции по калибровочной кривой.
4.2 Основные правила обращения с радиоактивными веществами
2. РЕАГЕНТЫ, ВХОДЯЩИЕ В СОСТАВ НАБОРА Получение, использование и транслортировка радиоактивных материалов должны
Все реагенты стабильны при 2-8"С до окончания срока годности набора. Сроки лроиюодить в соответствии с принятыми в данной стране нормами радиационной
годности, указанные на этикетках флаконов с реагентами, относятся только к их беэоласности и санитарными правилами работы с радиоактивными веществами.
хранению в производственных условиях вплоть до момента комплектации - В лабораториях эалрещается лринимать лищу. курить, лользоваться косметикой.
набора и не распространяются наполученную заказчиком продукцию. - Не лилетировать растворы радиоактивных веществ ртом.
- Для офаничения контакта с радиоактивными материалами рекомендуется
Условия хранения после растворения и разбавления реагентов указаны в
ислользовать разовые лерчатки и лабораторную слецодеаду.
разделе ‘Процедура анализа". - Все манилуляции с радиоактивными веществами следует проводить в специально
2.1 Набор для определения свободного Т4,100 пробирок (Кат.№13б3) оборудованных для этого помещениях, удаленных от мест постоянного
пребывания людей.
2.1.1 Пробирки, покрытые авидином: 2 х 50 шт (готовы к использованию) - Радиоактивные вещества следует хранить с ислользованием контейнеров в
2.1.2 Моноклональные ’’М меченые антитела: 1 флакон, 45 мп (готова к слециально отведенных для этого местах.
использованию) - Необходимо регистрировать постулление и расход радиоактивных материалов.
Флакон содержит менше чем 310 кБк (на день изготовления) '“1-меченого ■ Лабораторное оборудование и посуду следует хранить отдельно, чтобы
предотвратить их зафязнение радиоактивными изотопами.
иммуноглобулина в жидкой форме в буфере с белком, азидом натрия
- Любой случай радиоактивного зафязнения или исчезновения радиоактивного
(<0,1%; см. п. Меры предосторожности) и красителем. материала должен рассматриваться в соответствии с законодательством.
2.1.3 Калибровочные пробы: 5 флаконов по 0,5 мп (готовы к - Утилизация радиоактивных отходов должна осуществляться в соответствии с
использованию) законодательством.
Калибровочные пробы содержат 14 в диапазоне концентраций от О до 4.3 Азид натрия
75 пмоль/л в сыворотке крови человека с азидом натрия {< 0,1 %; см. п. Некоторые компоненты набора содержат азид натрия в качестве
Меры предосторожности). Точные концентрации указаны на этикетках консерванта. Вступая в реакцию со свинцом, медью и латунью, азид
флаконов. После внесения калибровочных проб в пробирки нужно натрия образует взрывоопасные азиды металлов. Отработанные
немедленно плотно закупорить флаконы пробками и хранить их при реагенты следует разбавлять большим количеством водопроводной воды,
2-8 'С. Испарение жидкости может привести к искажению результатов после чего их можно сливать в канализацию.
анализа при последующих определениях. Значения калибровочных проб 4.4 Сыворотка крови человека
были получены с помощью внутреннего стандарта Материал человеческого происхоадения, входящий в состав компонентов
2.1.4 Лиганд: 1 флакон (12 мл); готов к использованию. набора, не содержит антител к HIV 1, HIV 2, HCV и к поверхностному
Флакон содержит раствор пиганда с бычьим белком и азидом натрия антигену вируса гепатита В (HBsAg). Тем не менее, ни один из
(<0,1%, смотри п. Меры предосторожности). существующих методов анализа не может гарантировать полного
отсутствия инфекционных агентов в исследуемом материале. Поэтому при
2.1.5 Контрольная сыворотка: 1 флакон (лиофилизованный препарат)
работе с компонентами набора следует соблюдать необходимые меры
Флакон содержит лиофилизованную сыворотку крови человека (см. п.
предосторожности.
Меры предосторожности) с известным содержанием Т4. Ожидаемые
С исследуемыми образцами сыворотки крови следует обращаться как с
диапазоны концентраций указаны на дополнительном пистке-вкладыше.
потенциально инфекционным материалом, могущим содержать вирусы
После внесения контрольных проб в пробирки нужно немедленно плотно
СПИД и гепатита. Утилизация отходов должна осуществляться в
закупорить флаконы пробками и хранить их, как указано в п. 6.1.
соответствии с законодательством.
Испарение жидкости может привести к искажению результатов анализа
при последующих определениях. 5. ПОЛУЧЕНИЕ, ОБРАБОТКА И ХРАНЕНИЕ ОБРАЗЦОВ
2.2 Набор для определения свободного Т4,400 пробирок (Кат. № 3321) - Собрать кровь, взятую натощак, в чистые сухие пробирки, или пробирки
2.2.1 Пробирки, покрытые авидином: 8 х 50 шт. (готовы к использованию) сЭДТА, или гепарином.
- Отделить сыворотку или плазму крови центрифугированием.
2.2.2 Моноклональные ’>‘1 меченые антитела: 4 флакона по 45 мл (готова к
- Образцы сыворотки и плазмы можно хранить при 2-8'С в течение
использованию) 48 часов. Дня более длительного хранения их необходимо разделить на
2.2.3 Калибровочные пробы: 5 флаконов по 0,5 мл (готовы к аликвоты и заморозить при температуре < -18’С. Избегать повторного
использованию) замораживания-оттаивания проб.
2.2.4 Лиганд: 4 флакона (по 12 мл каждый); готов к использованию.
6. ПРОЦЕДУРА АНАЛИЗА
2.2.5 Контрольная сыворотка: 1 флакон (лиофилизованный препарат)
6.1 Растворение контрольной сыворотки
3. ДОПОЛНИТЕЛЬНЫЕ МАТЕРИАЛЫ И ОБОРУДОВАНИЕ Довести реагенты до комнатной температуры. Растворить содержимое
Помимо стандартного лабораторного оборудования необходимо иметь флакона в объеме дистиллированной воды, указанной на этикетке Через
следующее: 10 мин. аккуратно перемешать содержимое, избегая образования пены.
- микропипетки (25 мкл) Хранить при <-18*С до окончания срока годности набора.
- полуавтоматические пипетки (100 мкл и 400 мкл) 6.2 Процедура анализа (см. таблицу проведенную ниже)
- вихревой смеситель типа Vortex
- горизонтальный или орбитальный встряхиватепь
- водоструйный насос
PI-1363-2012-01-26
7. РЕЗУЛЬТАТЫ 10.1 Чувствительность
Результаты рассчитывают методом интерполяции по калибровочной кривой, 10.1.1 Аналитическая чувствительность: 0,5 пмоль/л
полученной одновременно с анализом неизвестных образцов.
10.1.2 Функциональная чувствительность: 2,4 пмоль/л
7.1. Калибровочная кривая
10.2 Специфичность
Результаты контроля качества набора, приведенные в этой инструкции,
Антитела, используемые в данном наборе, обладают высокой
получены при построении калибровочной кривой в полулогарифмических
специфичностью к Т4. Перекрестная реакция с близкородственными
координатах («сплайн» функция) с соотношением В/Т (%) или В/Во {%) по
молекулами (D -Т4, ТЗ, гТЗ и др.) а также с лекарственными препаратами,
вертикальной оси и концентрацией Т4 (пмоль/л) по горизонтальной оси
могущими присутствовать в сыворотке крови пациентов (амиодарон и др.),
калибровочного фафика. Другие методы обсчета могут давать несколы<о
чрезвычайно мала.
отличакзщиеся результаты._____________________________________
Общий счет: 100 549 имп./мин. 10.3 Воспроизводимость
Калибровочные Имп^мин. 10.3.1 Внутри анализа
FT4 (пмоль/л) В/Т(%) В/Во(%)
пробы Jni3]_ Анализ образцов проводили в 25 репликатах в пределах одной серии
О 65 929 65.7 100 определений. Коэффициент вариации измеренных уровней Т4 в
2,60 51 766 51,5 78,5 сыворотке крови не превышал 8,3 %.
12,1 26994 26.8 40,9 10.3.2 Между анализами
29,4 7 522 7,51 11,4 Анализ образцов в дубликатах проводили в 10 различных сериях
83,0 1415 1,41 2,15 определений. Коэффициент вариации измеренных уровней Т4 в
(flpinup типичной калибровочной кривой. Не использовать для обсчета результатов.) сыворотке крови не превышал 7,5 %.
7.2. Образцы 10.4 Диапазон определений (от аналитической чувствительности до значения
Для каждого образца найти на вертикальной оси калибровочного фафика наивысшей калибровочной пробы): 0,5 - 75 пмоль/л.
значение В/Т (%) или В/Во (%), а на горизонтальной оси соответствующую
концентрацию Т4 в пмоль/л. 11. ОГРАНИЧЕНИЯ МЕТОДА
Для перевода концентраций из пмоль/л в нг/100мл нужно умножить Нарушение методики проведения анализа может привести к искажению
полученный результат на 0,0777. результатов исследования. Результаты определения должны быть
интерпретированы в свете общей клинической картины пациента, включая
8. КОНТРОЛЬ КАЧЕСТВА
анамнез, данные других тестов и подходящую иную информацию.
В соответствии с требованиями Good laboratory practices для контроля качества
Биотин в сыворотке крови в концентрации ниже 40 нг/мл не оказывает влияния
проводимых исследований следует регулярно использовать контрольные образцы, которые
на результат анализа. У пациентов, проходящих курс лечения биотином в
должны проходить те же стадии анализа, что и анализируемые пробы. Результаты контроля
качества рекомендуется обрабатывать с помойные специальных статистически» методов. высоких концентрациях (>5 мг в день), кровь следует брать не ранее, чем через
В случае серьезного повреждения упаковки, или в случае несоответствия 3 часа после введения биотина.
полученных результатов аналитическим характеристикам (см.п.Ю) обратитесь, Набор не предназначен для тестирования неонатальных образцов сывороток
пожалуйста, к вашему дистрибьютору или к нашим специалистам: Тел.:+420 272 крови.
017 391; Факс: +420 272 017 385; E-mail: imunochem@beckman.corn Метод не был проверен на иктерических или гемолизированных образцах.
Тел.:+7 495 9371664; Факс: +7 495 254 64 07; E-mail: beckman.ru@beckman.com
При выполнении анализов с использованием антител возможна интерференция
9. ОЖИДАЕМЫЕ ЗНАЧЕНИЯ гетерофильными антителами в пробе пациента. У пациентов, имеющих
В каждой лаборатории рекомендуется установить собственные уровни Т4, постоянный контакт с животными или проходивших иммунотерапию или
соответствующие нормальным. Следующий диапазон концентраций относится к диажостические процедуры с испопьзованием иммуноглобулинов или их
клиническим данным: фрагментов, могут вырабатываться антитела (т.е. НАМА), которые влияют на
результаты иммунного анализа.
11,5-23,0 пмопь/л Влияние этих антител может привести к получению ошибочных результатов.
Внимание: Эти значения были получены по обследованию 198 образцов от Тщательно проверяйте результаты анализов пациентов с подозрением на
здоровых (эутиреоз) людей. наличие этих антител.
10. АНАЛИТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
(более подробная инфориация приведена в раздела “APPENDIX")
6.2 Процедура АНАЛИЗА
Стадия 1 Стадия 2 Стадия 3
Внесение реагентов * Инкубация Измерение результатов
В покрытые антителами
пробирки последовательно
внести:
Тщательно удалить
Инкубировать
- 25 мкп калибровочных проб, содержимое всех пробирок
60 минут
контрольных и анализируемых (кроме проб «Т»).
при 18-25 X
образцов
и постоянном
и Измерить связанную (В)
встряхивании
- 400 мкл метки и общую (Т) активность
и (>350 осц./мин.) в течение 1 мин.
-100 мкл лиганда.
Перемешать.
* В две дополнительные пробирки внести по 400 мкп метки для оценки общей активности '2^1 (пробы «Т»).
IMMUNOTECH s.r.o. - Radiov^ 1 -102 27 Prague 10 - Czech Republic - Phone. +420-272017444 - Fax : +420-272017385
PI-1363-2012-01-26
Инструкция по
BECKMAN использованию
COULTER.
RUSSIAN
IVD
Anti-TPO RIA КГ A56719
НАБОР ДЛЯ РАДИОИММУНОЛОГИЧЕСКОГО IN VITRO ОПРЕДЕЛЕНИЯ АНТИТЕЛ С€
certified К ТИРЕОПЕРОКСИДАЗЕ (анти-ТПО) В СЫВОРОТКЕ КРОВИ ЧЕЛОВЕКА
- Пробирки предназначены для однократного использования.
1. ПРИНЦИП МЕТОДА
4.2 Основные правила обращения с радиоактивными веществами.
В данном наборе используется конкурентный радиоиммунологический метод
Получение, использование и транспортировка радиоактивных материалов
определения анти-ТПО. Исследуемые образцы, контрольные и калибровочные
должны происходить в соответствии с принятыми в данной стране
пробы инкубируют с меткой, '»1-ТП0, в пробирках, покрытых моноклональными
нормами радиационной безопасности и санитарными правилами работы с
антителами двух видов. После окончания инкубации удаляют жидкое
радиоактивными веществами.
содержимое, промывают пробирки и измеряют связанную активноаь '“I.
- В лабораториях запрещается принимать пищу, курить, пользоваться
Концентрацию анти-ТПО определяют методом интерполяции по калибровочной
косметикой.
кривой.
- Не пипетировать растворы радиоактивных веществ ртом.
2. РЕАГЕНТЫ, ВХОДЯЩИЕ В СОСТАВ НАБОРА - Для ограничения контакта с радиоактивными материалами
рекомендуется использовать разовые перчатки и лабораторную
Все реагенты стабильны при 2-8°С до окончания срока годности набора.
спецодежду.
Условия хранения компонентов набора после их растворения или разбавления
- Все манипуляции с радиоактивными веществами следует проводить в
указаны в разделе «Процедура анализа»
специально оборудованных для этого помещениях, удаленных от мест
• Пробирки, покрытые двумя видами моноклональных антител к ТПО: постоянного пребывания людей.
2х 50 шт. (готовы к использованию) - Радиоактивные вещества следует хранить с использованием
2.2 Метка, '”1 -ТПО: 1 флакон (лиофилизованный препарат) контейнеров в специально отведенных для этого местах.
На дату изготовления флакон содержит 640 кБк '“1-ТПО с бычьим - Необходимо регистрировать поступление и рааод радиоактивных
сывороточным альбумином, красителем и азидом натрия (< 0,1 %, см. п. материалов.
Меры предосторожности). Объем разбавителя для растворения метки - Лабораторное оборудование и посуду следует хранить отдельно, чтобы
указан на этикетке флакона. предотвратить их загрязнение радиоактивными изотопами.
- Любой случай радиоактивного загрязнения или итезновения
2.3 Разбавитель для метки; 1 флакон, 22 мл (готов к использованию)
радиоактивного материала должен рассматриваться в соответствии с
В состав разбавителя входит буфер с бычьим сывороточным альбумином,
законодательством.
азидом натрия (< 0,1%, см. п. Меры предосторожности) и краситель.
- Утилизация радиоактивных отходов должна осуществляться в
2.4 Калибровочные пробы: 5 флаконов по 400 мкл и 1 флакон с 1 мл соответствии с законодательством.
"нулевого стандарта" (готовы к использованию)
4.3 Азид натрия
Калибровочные пробы содержат антитела к ТПО в диапазоне
Некоторые компоненты набора содержат азид натрия в качестве
концентраций от О до 2500 МЕ/мл в бычьей сыворотке с азидом натрия
консерванта. Вступая в реакцию со свинцом, медью и латунью, азид
(<0,Г/о, см. п. Меры предосторожности). Точные концентрации,
натрия образует взрывоопасные азиды металлов. Отработанные
калиброванные по международному стандарту NIBSC 66/387, указаны на
реагенты следует разбавлять большим количеством водопроводной воды,
этикетках флаконов.
после чего их можно сливать в канализацию.
2.5 Контрольная сыворотка: 2 флакона (лиофилизованные препараты)
4.4 Сыворотка крови человека
Флаконы содержат известное количество антител к ТПО,
Материал человеческого происхождения, входящий в состав компонентов
лиофилизованных в бычьей сыворотке с азидом натрия (<0,1%, см. п.
набора, не содержит антител к HIV 1, HIV 2, HCV и к поверхностному
Меры предосторожности). Ожидаемые диапазоны концентраций указаны
антигену вируса гепатита В (HBsAg). Тем не менее, ни один из
на отдельном листке-вкладыше.
существующих методов анализа не может гарантировать полного
2.6 Промывочный раствор (20х): 1 флакон, 50 мл отсутствия инфекционных агентов в исследуемом материале. Поэтому
• Концентрированный раствор должен быть разведен перед при работе с компонентами набора следует соблюдать необходимые
использованием. меры предосторожности.
Внимание: Температура и сроки годности, указанные на этикетках флаконов С исследуемыми образцами сыворотки крови следует обращаться как с
с реагентами, относятся только к их хранению в производственных условиях потенциально инфекционным материалом, могущим содержать вирусы
вплоть до момента комплектации набора и не распространяются на СПИД и гепатита. Утилизация отходов должна осуществляться в
полученную заказчиком продукцию, соответствии с законодательством.
3. ДОПОЛНИТЕЛЬНЫЕ МАТЕРИАЛЫ И ОБОРУДОВАНИЕ 5. ПОЛУЧЕНИЕ, ОБРАБОТКА, ХРАНЕНИЕ И РАЗВЕДЕНИЕ ОБРАЗЦОВ
Помимо стандартного лабораторного оборудования необходимо иметь 5.1 Получение и хранение образцов сыворотки крови
следующее: - Собрать кровь в чистые сухие пробирки.
- микропипетка (20 мкл) - Отделить сыворотку крови центрифугированием.
- полуавтоматические пипетки (200 мкл и 2 мл) - Образцы сыворотки можно хранить при 2-8°С в течение 24 часов.
- вихревой смеситель типа Vortex - Для более длительного хранения их необходимо заморозить при
• горизонтальный или орбитальный встряхиватель температуре < -18°С. Избегать повторного замораживания и оттаивания
- водоструйный насос образцов.
- гамма-счетчик для измерения активности ’^^1.
6. ПРОЦЕДУРА АНАЛИЗА
4. МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ
6.1 Подготовка и хранение реагентов.
4.1 Общие замечания: Довести все реагенты до комнатной температуры.
- Перед использованием довести реагенты до комнатной температуры.
6.1.1 Растворение метки
- Не смешивать реагенты из наборов разных серий.
Растворить лиофилизованный препарат метки в содержимом флакона
- Флаконы с калибровочными и контрольными пробами следует держать
с разбавителем. Через 10 минут аккуратно перемешать, избегая
открытыми в течение минимального промежутка времени для
образования пены. Подготовленный к работе препарат метки можно
предотвращения испарения жидкости.
хранить при 2-8 °С до окончания срока годности набора.
- Анализ калибровочных и исследуемых проб должен проводиться
одновременно.
- Для получения воспроизводимых результатов очень важно соблюдать
рекомендуемые условия встряхивания пробирок.
- Анализ рекомендуется проводить в дубликатах.
PI-A56719-2010-07-14
6.1.2 Растворение контрольных сывороток
9. ОЖИДАЕМЫЕ ЗНАЧЕНИЯ
Растворить содержимое флаконов в объеме дистиллированной воды,
В ка>едой лаборатории рекомендуется установить собственные уровни
указанной на этикетке. Через 10 минут аккуратно перемешать, избегая
анти-ТПО, соответствующие нормальным. Результаты, приведенные ниже, были
образования пены. Подготовленные к работе контрольные сыворотки
получены для образцов сыворотки крови здоровых доноров (л = 309). В 95%
можно хранить при <-18°С до окончания срока годности набора.
случаев измеренные значения были ниже 12 МЕ/мл (рекомендуемая
Допускается не более двух повторных циклов замораживания и
пограничная концентрация).
оттаивания контрольных сывороток.
6.1.3 Приготовление промывочного раствора 10. АНАЛИТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
Смешать содержимое флакона с концентратом промывочного раствора и (бопее подробная информация приведена в разделе "APPENDIX")
950 мл дистиллированной воды. Подготовленный к работе промывочный
10.1 Чувствительность
раствор можно хранить при 2-8 °С до окончания срока годности набора.
10.1.1 Аналитическая чувствительность; 2 МЕ/мл
6.2 Схема анализа
Стадия 1 Стадия 2 Стадия 3 10.1.2 Функциональная чувствительность: 6,1 ME /мл
Внесение реагентов* Инкубация Измерение результатов 10.2 Воспроизводимость
В покрытые Тщательно удалить 10.2.1 Внутри анализа
антителами пробирки Инкубировать содержимое пробирок Анализ образцов проводили в 20 репликатах в пределах одной серии
последовательно внести: 60 минут (кроме проб Т). определений. Коэффициент вариации измеренных уровней анти-ТПО в
сыворотке крови не превышал 12,4 %.
-20 мкл при 18-25 °С и Промыть пробирки
калибровочных, контроль­ постоянном 2 мл промывочного раствора 10.2.2 Между анализами
ных и анализируемых проб, встряхивании и удалить жидкость. Анализ образцов в дубликатах проводили в 7 различных сериях
и (> 280 ОСЦ./МИН.). Измерить связанную определений. Коэффициент вариации измеренных уровней анти-ТПО в
- 200 мкл метки. активность (имп./мин.) сыворотке крови не превышал 12,5 %.
Перемешать, в течение 1 минуты. 10.3 Точность
Общепринятым является тот факт, что при определении аутоантител
* В две дополнительные пробирки внести по 200 мкл метки для определения тесты на открытие стандартной добавки и параллелизм могут не давать
общей активности (“Т”), имп./мин. удовлетворительных результатов.
Р езультаты 10.4 Диапазон определений (от аналитической чувствительности до значения
наивысшей калибровочной пробы): 2 - 2 500 МЕ/мл.
Результаты рассчитывают методом интерполяции по калибровочной кривой,
полученной одновременно с анализом неизвестных образцов. 11. ОГРАНИЧЕНИЯ МЕТОДА
7.1. Калибровочная кривая Нарушение методики проведения анализа может привести к искажению
Результаты, приведенные в этой инструкции, получены при построении результатов исследования.
калибровочной кривой в логарифмических координатах («сплайн» Результаты определения должны быть интерпретированы в свете общей
функция) с соотношением ВП (%) или В/Во (%) по вертикальной оси и клинической картины пациента, включая анамнез, данные других тестов и
концентрацией анти-ТПО (МЕ/мл) по горизонтальной оси калибровочного подходящую иную информацию
графика. Другие методы обсчета могут давать несколько отличающиеся Не рекомендуется использовать для анализа сыворотки крови с гемолизом и
результаты. липемией.
При выполнении анализов с использованием антител возможна интерференция
Общий счет: 220 950 имп./мин. гетерофильными антителами в пробе пациента. У пациентов, имеющих
Анти-ТПО Имп./мин. постоянный контакт с животными или проходивших иммунотерапию или
Кал. пробы В/Т (%) В/Во (%)
(МЕ/мл) (п=3) диагностические процедуры с использованием иммуноглобулинов или их
0 0 85908 39,2 100 фрагментов, могут вырабатываться антитела (т.е. НАШ), которые влияют на
1 7,8 65314 29,8 76,0 результаты иммунного анализа.
2 27 47131 21,5 54,9 Влияние этих антител может привести к получению ошибочных результатов.
3 108 27 580 12,6 32,1 Тщательно проверяйте результаты анализов пациентов с подозрением на
4 500 14615 6,7 17,0 наличие этих антител.
(Приме5р типичной капи2б 2р6ов5очмой кривой8. Н7е9 3использовать д4п,я0 обсчета резуль1т0а,2тов.)
7.2. Образцы
Для каждого образца найти на вертикальной оси калибровочного графика
значение В/Т (%) или В/Во {%), а на горизонтальной оси соответствующую
концентрацию анти-ТПО в МЕ/мл.
8. КОНТРОЛЬ КАЧЕСТВА
В соответствии с требованиями Good laboratory practices для контроля качества
проводимых исследований следует регулярно использовать контрольные
образцы, которые должны проходить те же стадии анализа, что и
анализируемые пробы. Результаты контроля качества рекомендуется
обрабатывать с помощью специальных статистических методов.
В случае серьезного повреждения упаковки, или в случае несоответствия
полученных результатов аналитическим характеристикам (см.п.Ю) обратитесь,
пожалуйста, к вашему дистрибьютору или к нашим специалистам:
Тел.:-*420 272 017 391; Факс: +420 272 017 385;
E-mail; imunochem@beckman.com
Тел.:+7 495 937 1664; Факс: +7 495 254 64 07;
E-niail: beckman.nj(S)beckman.com
■ IMMUNOTECH s.r.o. - Radiovi 1 -102 27 Prague 10 - Czech Republic - Phone. -*420-272017444 - Fax ; -*420-272017385
PI-A56719-2010-07-14
1ШМ 1ШОТЕСН
' А ВЕСКМА >4 COULTER COMPANY
r.o.
\ j Immunotech s
viy Radiova 1,1C 127 Praha 10, Czech RepuNir
1^-60197944 ПЙ-Сгб(11й7ЭД4
{ f^ k y ^ - b r ru r
Инструкция по
использованию
BECKMAN
COULTER. RUSSIAN
IVD Anti-hTg IRM A KIT №-IM3223
НАБОР ДЛЯ ИММУНОРАДИОМЕТРИЧЕСКОГО IN VITRO ОПРЕДЕЛЕНИЯ С€
АНТИТЕЛ К ТИРЕОГЛОБУЛИНУ В СЫВОРОТКЕ И ПЛАЗМЕ КРОВИ ЧЕЛОВЕКА
- Пробирки предназначены для однократного использования.
1. ПРИНЦИП МЕТОДА
4.2 Основные правила обращения с радиоактивными веществами.
Иммунорадиометрическое определение аутоантител к тиреоглобулину (Ат-ТГ)
Получение, использование и транспортировка радиоактивных материалов
относится к анализам типа «сэьщвич». Исследуемые образцы, контролыше и
должны происходить в соответствии с принятыми в данной стране нормами
калибровочные пробы инкубируют в пробирках, покрытых тиреоглобулином
радиационной безопасности и санитарными правилами работы с
человека. Если в анализируемых образцах присутствуют аутоантитела, то они
радиоактивными веществами.
связываются с иммобилизованным тиреоглобулином. Затем пробирки промывают
В лабораториях запрещается принимать пищу, курить, пользоваться
и вносят метку ('»1-бвлок А). После окончания второй инкубации пробирки
косметикой.
промывают еще раз и измеряют связанную активность ’»1. Конценграцию Ат-ТГ,
Не пипетировать растворы радиоактивных веществ ртом.
прямо пропорциональную связанной активности, определяют методом
- Для ограничения контакта с радиоактивными материалами
интерполяции по калибровочной кривой.
рекомендуется использовать разовые перчатки и лабораторную
2. РЕАГЕНТЫ, ВХОДЯЩИЕ В СОСТАВ НАБОРА спецодежду.
Все манипуляции с радиоактивными веществами следует проводить в
Все реагенты стабильны при 2-8*0 до окончания срока годности набора. Сроки
специально оборудованных для этого помещениях, удаленных от мест
годности, указанные на этикетках флаконов с реагентами, относятся только к их
постоянного пребывания людей.
хранению в производственных условиях вплоть до момента комплектации набора
Радиоактивные вещества следует хранить с использованием
и не распространяются наполученную заказчиком продукцию.
контейнеров в специально отведенных для этого местах.
Условия хранения компонентов набора после их растворения или разбавления
Необходимо регистрировать поступление и расход радиоактивных
указаны в разделе «Процедура анализа».
материалов.
2.1 Пробирки, покрытые тиреоглобулином человека: 2 х 50 шт. (готовы к - Лабораторное оборудование и посуду следует хранить отдельно,
использованию). чтобы предотвратить их загрязнение радиоактивными изотопами.
2.2 Метка, раствор белка А, меченного '”1: 1 фпакон, 55 мл (готова к Любой случай радиоактивного загрязнения или исчезновения
использованию). радиоактивного материала должен рассматриваться в соответствии с
На дату изготовления флакон содержит 325 кБк '»1-6елка А в буфере с законодательством.
бычьим сывороточным альбумином, красителем и азидом натрия (< 0.1 %, - Утилизация радиоактивных отходов должна осуществляться в
см. п. Меры предосторожности). соответствии с законодательством.
Внимание: Любое случайное загрязнение препарата метки 4.3 Азид натрия
иммуноглобулинами мыши или человека приводит к искажению результатов Некоторые компоненты набора содержат азид натрия в качестве
анализа! консерванта. Вступая в реакцию со свинцом, медью и патуныо, азид натрия
2.3 Буферный раствор: 1 фпакон, 55 мп (готов к использованию). образует взрывоопасные азиды металлов. Отработанные реагенты следует
Бус^рный раствор содержит бычий сывороточный альбумин и азид натрия разбавлять большим количеством водопроводной воды, после чего их
< 0,1 %, см. п. Меры предосторожности) и краситель. можно сливать в канализацию.
2.4 Калибровочные пробы: 6 флаконов по 0,5 мл (готовы к использованию). 4.4 Сыворотка крови человека
Калиб^вочные пробы содержат Ат-ТГ в диапазоне концентраций от О до Материал человеческого происхождения, входящий в состав компонентов
3000 МЕ/мл в буфере с бычьим сывороточным альбумином и азидом натрия набора, не содержит антител к HIV 1, HIV 2, HCV и к поверхностному
(< 0,1 %, см. п. Меры предосторожности). Точные концентрации Ат-ТГ, антигену вируса гепатита В (HBsAg). Тем не менее, ни один из
кали^ванные по международному стандарту IRP 65/093, указаны на существующих методов анализа не может гарантировать полного
этикетках флаконов. отсутствия инфекционных агентов в исследуемом материале. Поэтому при
работе с компонентами набора спедует соблюдать необходимые меры
2.5 Контрольная сыворотка: 2 флакона (лиофилизованные препараты).
предосторожности.
Флаконы содержат лиофилизованную сыворотку крови человека (см. п.
С исследуемыми образцами сыворотки крови следует обращаться как с
Меры предосторожности). Объем дистиллированной воды для растворения
потенциально инфекционным материалом, могущим содержать вирусы
и ожидаемые диапазоны концентраций указаны на отдельном листке-
СПИД и гепатита. Утилизация отходов должна осуществляться в
вкладыше.
соответствии с законодательством.
2.6 Промывочный раствор (20х): 1 фпакон, 50 мл
Концентрированный раствор должен быть разведен перед использованием 5. ПОЛУЧЕНИЕ, ОБРАБОТКА, ХРАНЕНИЕ И РАЗВЕДЕНИЕ ОБРАЗЦОВ
дистиллированной водой. - Собрать кровь в чистые сухие пробирки, или пробирки, содержащие ЭДТА,
гепарин или цитрат натрия.
3. ДОПОЛНИТЕЛЬНЫЕ МАТЕРИАЛЫ И ОБОРУДОВАНИЕ
- Отделить сыворотку/плазму крови центрифугированием, часов.
Помимо стандартного лабораторного оборудования необходимо иметь - Офазцы сыворотки и плазмы можно хранить при 2-8*С в течение 48
следующее: часов. Для более длительного хранения их необходимо заморозить при
- микропипетка(20 мкл) температуре < -18*0. Опаивание образцов проводится при комнатной
- полуавтоматические пипетки (500 мкл и 3 мл) температуре.
- вихревой смеситель типа Vortex - Если концентрация Ат-ТГ в исследуемом образце выходит за пределы
- горизонтальный или орбитальный встряхиватель (не менее 280 осц./мин.) калибровочной кривой, его спедует развести буфером, входящим в состав
- водоструйный насос набора. Следует иметь в виду, что из-за гетерогенности аутоантител к ТГ
- гамма-счетчик для измерения активности '“I результаты, полученные в разбавленных образцах, могут не подчиняться
линейной зависимости.
4. МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ
4.1 Общие замечания 6. ПРОЦЕДУРА АНАЛИЗА
- Перед использованием довести реагенты до комнатной температуры. 6.1 Подготовка и хранение реагентов.
- Не смешивать реагенты из наборов разных серий. -Довести все реагенты до комнатной температуры.
- Анализ калибровочных и исследуемых проб должен проводиться
6.1.1 Растворение контрольных сывороток
одновременно.
Растворить лиофилизованные препараты в указанном на этикетке объеме
- Для получения воспроизводимых результатов очень важно соблюдать
дистиллированной воды. Через 10 минут аккуратно перемешать
рекомендуемые условия встряхивания пробирок.
содержимое флаконов, избегая образования пены. Подготовленные к
- Анализ рекомендуется проводить в дубликатах.
работе контрольные сыворотки можно хранить при <-18*0 до окончания
PI-3223-2012-01-26
срока годности набора. Допускается повторное замораживание-оттаивание аутоангител результаты, полученные в некоторых разведенных образцах,
контрольных образцов. могут не иметь линейной зависимости.
6.1.2 Приготовление промывочного раствора 8. КОНТРОЛЬ КАЧЕСТВА
Смешать содержимое флакона с концентратом промывочного раствора и
В соответствии с требованиями Good latwratory practices для контроля качества
950 мл дистиллированной воды. Подготовленный к работе промывочный
проводимых исследований следует регулярно использовать контрольные
раствор можно хранить при 2-8 "С до окончания срока годности набора.
образцы, которые должны проходить те же стадии анализа, что и анализируемые
Примечание: 6 случае, если объем промывающего раствора недостаточен
пробы. Результаты контроля качества рекомендуется обрабатывать с помощью
{использование автоматических промывающих устройств), допустимо
специальных статистических методов.
разведение в 25 раз.
В случае серьезного повреждения упаковки, или в случае несоответствия
6.2 Схема анализа полученных результатов аналитическим характеристикам (см.п.Ю) обратитесь,
Стадия 3 пожалуйста, к вашему дистрибьютору или к нашим специалистам:
Стадия 1 Стадия 2 Промывка, внесение Теп.:+420 272 017 391; Факс: 420 272 017 385;
Внесение реагентов Первая инкубация реагентов E-mail: imunochem@beckman.com Teл.:-^7 495 9371664;
Факс: +7 495 254 64 07; E-mail: beckman .rulSbeckman com
В покрытые пробирки Тщательно удалить
последовательно содержимое пробирок. 9. ОЖИДАЕМЫЕ ЗНАЧЕНИЯ
внести: В каждой лаборатории рекомендуется установить собственные уровни Ат-ТГ,
Инкубировать Промыть пробирки 3 раза соответствующие нормальным. Рекомендуемая пофаничная концентрация Ат-ТГ
- 500 мкл буфера 90 минут по 3 мл промывочного составляет 30 МЕ/мл.
и при 18-25 °С раствора и тщательно
10. АНАЛИТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
-20 мкл и постоянном удалить содержимое (болев подробная информация приведена в разделе “APPENDIX")
калибровочных, встряхивании пробирок.
10.1 Чувствительность
контрольных и (> 280 0СЦ./МИН.).
Во все пробирки внести 10.1.1 Аналитическая чувствительность: 5 МЕ/мл,
анализируемых проб.
по 500 мкл метки.*) 10.1.2 Функциональная чувствительность: 19,7 МЕ/мл
Перемешать. 10.2. Специфичность
Перемешать. Принцип метода, используемый в данном наборе (покрытие пробирок
высокоочищенным препаратом ТГ человека), позволяет определять только
* Для определения общей активности (имп./мин.) в две антитела к тиреоглобулину.
дополнительные пробирки внести по 500 мкл раствора метки. 10.3 Воспроизводимость
Стадия 4 Стадия 5 10.3.1 Внутри анализа
Вторая инкубация Счет Анализ образцов проводили в 26 репликатах в пределах одной серии
определений. Коэффициент вариации измеренных уровней Ат-ТГ в
Инкубировать пробирки Тщательно удалить содержимое
сыворотке крови не превышал 10,4%.
60 минут пробирок.
10.3.2 Между анализами
при 18-25 “С Измерить связанную активность Анализ образцов в дубликатах проводили в 10 различных сериях
и постоянном встряхивании (имп./мин.) в течение 1 минуты. определений. Коэффициент вариации измеренных уровней Ат-ТГ в
(>280 осц./мин.). сыворотке крови не превышал 10,2 %.
10.4 Точность
7. РЕЗУЛЬТАТЫ 10.4.1 Тест на разведение
Результаты рассчитывают методам интерполяции по калибровочной кривой, Три образца сыворотки крови с высокой концентрацией Ат-ТГ разводили
полученной одновременно с анализом неизвестных образцов. буфером, входящим в состав набора. Процент «открытия» составил 87-
118%. Из-за гетерогенности аугоантител человека результаты, полученные
7.1. Калибровочная кривая
Результаты контроля качества набора, указанные в разделе ‘APPENDIX", для некоторых проб, не давали линейной зависимости.
получены при построении калибровочной кривой в логарифмических 10.5 Диапазон определений (от аналитической чувствительности до значения
координатах («сплайн» функция) со связанной активностью ’”1 (В - Во, наивысшей калибровочной пробы): 5 - 3000 МЕ/мл.
имп./мин.) по вертикальной оси и концентрацией Ат-ТГ (МЕ/мл) по
горизонтальной оси калибровочного графика. Другие методы обсчета могут 11. ОГРАНИЧЕНИЯ МЕТОДА
Нарушение методики проведения анализа может привести к искажению
давать несколько отличающиеся результаты.
результатов исследования.
Результаты определения должны быть интерпретированы в свете общей
Общий счет: 74 815 имп./мин.
клинической картины пациента, включая анамнез, данные других тестов и
Калибро­
Имп./мин. В-Во подходящую иную информацию
вочные Ат-ТГ (МЕ/мл) вп- (%)
пробы (п=3) (ИМП./МИН.) При выполнении анализов с использованием антител возможна интерференция
0 0 146 0.20 гетерофильными антителами в пробе пациента. У пациентов, имеющих
1 32 2021 2.74 1875 постоянный контакт с животными или проходивших иммунотерапию или
2 96 5341 4.24 5195 диатостические процедуры с использованием иммуноглобулинов или их
3 290 13327 18.1 13181 фрагментов, могут вырабатываться антитела (т.е. НАМА), которые влияют на
4 1090 25698 34.8 25552 результаты иммунного анализа.
5 3390 34415 46.6 34269 Влияние этих антител может привести к получению ошибочных результатов.
(Притер типичной калибровочной кривой. Не использовать для обсчета результатов.) Тщательно проверяйте результаты анализов пациентов с подозрением на наличие
этих антител.
7.2. Образцы
Для каждого образца найти на вертикальной хи калибровочного фафика
значение В-Во (имп./мин.), а на горизонтальной оси соответствующую
концентрацию Ат-ТГ. Результаты, полученные для разбавленных проб,
следует умножить на фактор разведения. Однако из-за гетерогенности
IMMUNOTECH s.r.o. - RadiovS 1 -102 27 Prague 10 - Czech Republic - Phone. +420-272017444 - Fax: +420-272017385
PI-3223-2012-01-26
Инструкция no
использованию
BECKM AN
COULTER.
RUSSIAN
Insulin(e) IRM A KIT :|M3210
НАБОР для ИММУНОРАДИОМЕТРИЧЕСКОГО IN VITRO ОПРЕДЕЛЕНИЯ
С€
ИНСУЛИНА В СЫВОРОТКЕ И ПЛАЗМЕ КРОВИ ЧЕЛОВЕКА
- Анализ рекомендуется проводить в дубликатах.
1. ПРИНЦИП МЕТОДА - Пробирки предназначены для однократного использования.
Иммунорадионетричвскоб определение инсулина относится к анализам типа «сэндвич» с 4.2 Основные правила обращения с радиоактивными веществами.
ислольмванием двух видов мышиных моноклоналы<ых антител к различным эпитопам его Получение, использование и транспортировка радиоактивных материалов должны
нолвулы. Данный набор может быть использован: проиаодить в соответствии с принятыми в данной стране нормами радиационной
- для прямого определения иммунореактивного инсулина (свободный инсулин + безопасности и санитарными правилами работы с радиоактивными веществами.
инсулин, в комплексе с аутоантителами к инсулину) в сыворотке или плазме крови, - В лабораториях запрещается принимать пищу, курить, пользоваться косметикой.
■ для определения свободного инсулина после предварительно* обработки проб - Не пипетировать растворы радиоактивных веществ ртом.
преципитирующим реагентом (поставляется по отдельному запросу, кат. № - Для офаничения контакта с радиоактивными материалами рекомендуется
А09775). использовать разовые перчатки и лабораторную спецодежду.
Анализируемые образцы и контрольные сыворотки (нативные, или обработанные - Все манипуляции с радиоактивными веществами следует проводить в специально
преципитирующим реагентом), а также калибровочные пробы инкубируют в пробирках, оборудованных для этого помещениях, удаленных от мест постоянного
покрытых одним видом моноштанальных антител, совместно с раствором других пребывания людей.
моноклональных антител, меченных ’’‘I. После окончания инкубации удаляют жидкое - Радиоактивные вещества следует хранить с использованием контейнеров в
содержимое, промывают пробирки и измеряют связанную активность '*1. Концентрацию специально отведенных для этого местах.
инсулина, прямо пропорциональную связанной активности, определяют методом - Необходимо регистрировать поступление и расход радиоактивных материалов.
интерполяции по калибровочной кривой. - Лабораторное оборудование и посуду следует хранить отделы«о, чтобы
предотвратить их зафязнение радиоактивными изотопами.
2. РЕАГЕНТЫ, ВХОДЯЩИЕ В СОСТАВ НАБОРА
- Любой случай радиоактивного зафязнения или исчезновения радиоактивного
Все реагенты стабильны при 2-8’С до окончания срока годности набора. Сроки годности, материала должен рассматриваться в соответствии с законодательством
указанные на этикетках флаконов с реагентами, относятся только к их хранению в - Утилизация радиоактивных отходов должна осуществляться в соответствии с
производственных условиях вплоть до момента комплектации набора и не законодательством.
распроараняются наполученную заказчиком продукцию.
4.3 Азид натрия
Условия хранения компонентов набора после их растворения или разбавления указаны в
Некоторые компоненты набора содержат азид натрия в качестве консерванта.
разделе кПроцедура анализа».
Вступая в реакцию со свинцом, медью и латунью, азид натрия образует
2.1 Пробирки, покрытые моноклональными антителами к инсулину: 2 х взрывоопасные азиды металлов. Отработанные реагенты следует разбавлять
50 шт. (готовы к использованию) большим количеством водопроводной воды, после чего их можно сливать в
канализацию.
2.2 Метка, раствор моноклональных антител к инсулину, меченнь(х”Ч:
4.4 Сыворотка крови человека
1 флакон, 11 мл (готова к использованию)
Материал человеческого происхождения, входящий в состав компонентов набора, не
На дату изготовления флакон содержит МО кБк 1-иммуноглобулинов в содержит антител к HIV1, HIV 2, HCV и к поверхностному антигену вируса гепатита В
буфере с бычьим сывороточным альбумином, фасителем и азидом (HBsAg). Тем не менее, ни один из существующих методов анализа не может
натрия (< 0,1 %, см. п. Меры предосторожности). гарантировать полного отсутствия инфекционных агентов в исследуемом материале.
Примечание: Наличие сгустка в растворе метки не влияет на качество Поэтому при работе с компонентами набора следует соблюдать необходимые меры
(результат) анализа. Они растворяются при легком встряхивании. предосторожности.
С исследуемыми образцами сыворотки кроеи следует обращаться как с потен­
2.3 Калибровочные пробы, S флаконов по 1 мл и 1 флакон с 2 мл циально инфекционным материалом, могущим содержать вирусы СПИД и гепатита.
«нулевой» калибровочной пробы (готовы к использованию) Утилизация отходов должна осуществляться в соответствии с законодательством.
Калибровочные пробы содержат инсулин в диапазоне концентраций от О
до 300 мкМЕ/мл в буфере с бычьим сывороточным альбумином азидом 5. ПОЛУЧЕНИЕ, ОБРАБОТКА, ХРАНЕНИЕ И РАЗВЕДЕНИЕ ОБРАЗЦОВ
натрия (< 0,1 %, см. п. Меры предосторожности). Точные концентрации, - Собрать кровь в чистые сухие пробирки, или пробирки с ЭДТА,
калиброванные по международному стандарту WHO 1* IRP 66/304, гепарином или цитратом натрия в качестве антикоагулянта.
указаны на этикетках флаконов (1 мкМЕ/мл = 43,3 нг/л = 7,46 пмоль/л). - Отделить сыворотку или плазму крови центрифушрованием.
- О^азцы сыворотки и плазмы можно хранить при 2-8'С в течение
2.4 Контрольная сыворотка: 2 флакона (лиофилизованные препараты)
24 часов. Для fcnee длительного хранения их необходимо разделить на
Флаконы содержат лиофилизованную сыворотку крови человека с
аликвоты и заморозить при температуре <-18"С. Избегать повторного
известным содержанием инсулина (см. п. Меры предосторожности).
замораживания-опаивания проб.
Ожидаемый диапазон концентраций указан на дополнительном листке-
- Если концентрация инсулина в образце превышает максимальный
вкладыше .
стандарт, его следует разбавить нулевой калибровочной пробой.
2.5 Промывочный раствор (20Х): 1 флакон, 50 мл
Концентрированный раствор должен быть перед использованием 6. ПРОЦЕДУРА АНАЛИЗА
разведен.
6.1 Подготовка реагентов
3. ДОПОЛНИТЕЛЬНЫЕ МАТЕРИАЛЫ И ОБОРУДОВАНИЕ Довести все реагенты до комнатной температуры.
Помимо стандартного лабораторного оборудования необходимо иметь 6.1.1 Растворение контрольных сывороток
следующее: Растворить содержимое флаконов в указанном на этикетке объеме
Для определения иммунореактивного инсулина: дистиллированной воды. Через 10 минут аккуратно перемешать, избегая
- микропипетка(50 мкл) образования пены. Подготовленные к работе контрольные сыворотки
- полуавтоматические пипетки (100 мкл, 2 мл) можно хранить один день при 2-8'С, или при <-18”С до окончания срока
- вихревой смеситель типа Vortex годности набора. Допускается не более четырех повторных циклов
- горизонтальный или орбитальный встряхиватель замораживания-оттаивания контрольных проб.
- водоструйный насос 6.1.2 Приготовление промывочного раствора
- гамма счетчик для измерения активности Смешать содержимое флакона с концентратом промывочного раствора и
Для определения свободного инсулина (по желанию): 950 мл дистиллированной воды. Подготовленный к работе промывочный
- микропипетки (100 мкл и 400 мкп) раствор можно хранить при 2^'С до окончания срока годности набора.
- полуавтоматическая пипетка (400 мкл) 6.2 Подготовка образцов и контрольных сывороток дпя определения
- полипропиленовые или стеклянные пробирки свободного инсулина
- преципитирующий реагент (поставляется по запросу; кат. No. А09775) - В полипропиленовые или стеклянные пробирки внести по 400 мкл
- центрифуга с охлаждением (3000 д). анализируемых образцов и контрольных сывороток и добавить к ним по
400 мкл преципитирующего реагента (поставляется по запросу; кат. No.
4. МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ
А09775).
4,1 Общие замечания: Не обрабатывать преципитирующим реагентом
- Перед использованием довести реагенты до комнатной температуры. калибровочные пробы.
- Не смешивать реагенты из наборов разных серий.
- Анализ калибровочных и исследуемых проб должен проводиться одновременно.
PI-3210-2012-01-26
- Перемешать содержимое пробирок на вихревом смесителе и
Концентрация инсулина (мкМЕ/мл)
центрифугировать пробы не менее 15 минут при 3000 g и 4'С. Время (мин.)
Среднее значение ± SO
Порученный супернатант содержит только свободный инсулин.
0 8,81 3,1
6.3 Процедура анализа (см. Таблица ниже приведенная) 15 42,7 ±12,6
7. РЕЗУЛЬТАТЫ 30 56,1 *24,0
60 44,4 ±14,1
Результаты рассчитывают методом интерполяции по калибровочной кривой,
120 17,6 ±7,2
полученной одновременно с анализом неизвестных образцов.
7.1 Калибровочная кривая 10. АНАЛИТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
Результаты, приведенные в данной инструкции, получены при построении (болев подробная инфориация приведена в разделе “APPENDIX")
калибровочной кривой в логарифмических координатах (>сплайн» функция] со
связанной активностью '^1 (В - Во, инп./мин.) по вертикальной оси и концентрацией 10.1 Чувствительность
инсулина (мкМЕ/мл) по горизонтальной оси калибровочного фафика. Другие методы 10.1.1 Аналитическая чувствительность: 0,5 мкМЕ/мл
обсчета могут давать несколько отличающиеся результаты.__________________
10.1.2 Функциональная чувствительность; 1,04 мкМЕ/мл
Общий счет: 201 392 имп./мин
Инсулин Имп./мин. 10.2 Специфичность
Кал. пробы ВЯ(%) В-Во (имп7мин.|
(мкМВмл) (п«3) Антитела, используемые в данном наборе, не дают перекрестной реакции
О 59 0,03 с проинсулином, des 31,32-проинсулином и С-пептидом человека.
3,20 501 0,25 442
10.5 1615 0,80 1556 10.3 Воспроизводимость
31.5 5 612 2,79 5 553 10.3.1 Внутри анализа
105 20 406 10,1 20 347 Образцы анализировали в 25 репликатах в пределах одной серии
315 61 940 30,8 61881
определений. Коэффициент вариации измеренного уровня инсулина в
(Притер типичной калибровочной кривой. Не использовать для обсчета результатов.)
сыворотке крови не превышал 4,3%.
11 Образцы
Для каждого образца найти на вертикальной оси калибровочного графика 10.3.2 Между анализами
Анализ образцов в дубликатах проводили в 25 различных сериях
значение В-Во (имп./мин.), а на горизонтальной оси соответствующую
определений. Коэффициент вариации измеренного уровня инсулина в
концентрацию инсулина (мкМЕ/мл), Результаты, полученные для
разбавленных образцов, следует умножить на фактор разведения. сыворотке крови не превышал 3,4 %.
Концентрацию свободного инсулина определяют аналогичным образом с 10.4 Точность
использованием той же самой калибровочной кривой. Полученные 10.4.1 Тест на разведение
результаты не нужно умножать на фактор разведения, т.к. разбавление Образцы с высокой концентрацией инсулина серийно разводили
проб преципитирующим реагентом компенсируется повышенным объемом «нулевым» стандартом. Измеренная величина «открытия» составляла от
супернатанта, вносимого в пробирки. 87% до 119%.
8. КОНТРОЛЬ КАЧЕСТВА 10.4.2 Тест на «открытие» стандартной добавки
В соответствии с требованиями Good laboratory practices для контроля качества проводимых Известные количества инсулина добавляли к образцам с низким уровнем
исследований следует регулярно использовать контрольные образцы, которые должны гормона. Измеренная величина «открытия» составляла от 94 до 107%.
проходить те же стадии анализа, что и анализируемые пробы. Результаты контроля
10.5 Диапазон определений (от аналитической чувствительности до значения
качества рекомендуется обрабатывать с помощью специальных статистических методов.
наивысшей калибровочной пробы): 0,5 - 300 мкМЕ/мл,
В случае серьезного повреждения упаковки, или в случае несоответствия полученных
результатов аналитическим характеристикам (см.п.Ю) обратитесь, пожалуйста, к вашему
11. ОГРАНИЧЕНИЯ МЕТОДА
дистрибьютору или к нашим специалистам:
Нарушение методики проведения анализа может привести к искажению результатов
Твл,:+420 272 017 391; Факс: +420 272 017 385; E-niail: imijnoctiem@t)eckman.com
исследования.
Тел.:+7 495 937 1664; Оакс: +7 495 254 64 07; Ечлаг!: beckman.rufflbeckman.com
Результаты определения должны быть интерпретированы в свете общей клинической
9. ОЖИДАЕМЫЕ ЗНАЧЕНИЯ картины пациента, включая анамнез, данные других тестов и подходящую иную
информацию
Концентрации инсулина, измеренные натощак у здоровых людей, составляют от Анализ инсулина можно проводить в сыворотках крови с лилемией, но не рекомендуется
2,1 до 22 мкМЕ/мл. Приведенные значения являются толы<о ориентировочными, использовать образцы с гемолизом.
т.к. в каждой лаборатории рекомендуется установить собавенные уровни При выполнении анализов с использованием антител возможна интерференция
инсулина, соответствующие нормальным. гетерофильными антителами в пробе пациента. У пациентов, имеющих постоянный контакт
В таблице в качестве примера приведены средние значения концентрации с животными или проходивших иммунотерапию или диатостические процедуры с
инсулина в сыворотке крови доноров в ходе проведения перорального использованием иммуноглобулинов или их фрапкентов, могут вырабатываться антитела
(т.е. НАМА), которые влияют на результаты иммунного анализа.
глюкозотолерантного теста.
Влияние этих антител может привести к получению ошибочных результатов. Тщательно
проверяйте результаты анализов пациентов с подозрением на наличие этих антител.
6.3 Процедура АНАЛИЗА
Стадия 1 Стадия 2 Стадия 3
Внесение реагентов * Инкубация Измерение результатов
• Определение иммунореактивного инсулина -
Тщательно удалить содержимое
В покрытые антителами пробирки последовательно внести:
пробирок (кроме проб Т)
- 50 мкл калибровочных, контрольных и анализирумых проб и
-100 мкл метки. Промыть пробирки 2 раза
Инкубировать
Перемешать. по 2 мл промывочного раствора.
2часапри18-25‘’С
- Определение свободного инсулина ■ Удалить жидкость.
и постоянном
В покрытые антителами пробирки последовательно внести:
встряхивании
- 50 мкл калибровочных проб, (> 280 ОСЦ./МИН.). Измерить общую (Т) и
или
связанную (В) акгивность
-100 мкл супернатантов контрольных и анализируемых проб и
'«1 (ИМП./МИН.) в течение
-100 мкл метки.
1 минуты.
Перемешать.
* Для определения общей активности (имп./мин.) в две дополнительные пробирки внести по 100 мкл раствора метки.
■ I IMMUNOTECH s.r.o. - Radiov41 -102 27 Prague 10 - Czech Republic - Phone. +420-272017444 - Fax: +420-272017385
PI-3210-2012-01-26
IMMUNOTECH
A BECKMAN COULTER COMPANY
IVD
IRMA GH
Ш Ш 1
НАБОР ДЛЯ ИММУНОРАДИОМЕТРИЧЕСКОГО IN VITRO ОПРЕДЕЛЕНИЯ с е
113485
ГОРМОНА РОСТА В СЫВОРОТКЕ И ПЛАЗМЕ КРОВИ ЧЕЛОВЕКА
cert if ied
1. ПРИНЦИП МЕТОДА
- Анализ рекомендуется проводить в дубликатах.
Иммунорадиометрическое определение гормона роста (СТГ) относится к - Пробирки только для одноразового применения.
анализам типа «сэндвич». В наборе используется два вида мышиных
4.2 Основные правила обращения с радиоактивными веществами.
моноклональных антител к различным эпитопам СТГ. Антитела распознают
Получение, использование и транспортировка радиоактивных материалов
мономер с молекулярным весом 22 кДа, димер и СТГ в комплексе со
должны происходить в соответствии с принятыми в данной стране
связывающим белком. Исследуемые образцы и калибровочные пробы
нормами радиационной безопасности и санитарными правилами работы с
инкубируют в пробирках, покрытых одним видом моноклональных антител,
радиоактивными веществами.
совместно с раствором других моноклональных антител, меченных '“*1. После
- В лабораториях запрещается принимать пищу, курить, пользоваться
окончания инкубации удаляют жидкое содержимое пробирок и измеряют
косметикой.
связанную активность Концентрацию СТГ, прямо пропорциональную
- Не пипетировать растворы радиоактивных веществ ртом.
связанной активности, определяют методом интерполяции по калибровочной
- Для ограничения контакта с радиоактивными материалами
кривой.
рекомендуется использовать разовые перчатки и лабораторную
2. РЕАГЕНТЫ, ВХОДЯЩИЕ В СОСТАВ НАБОРА спецодежду.
- Все манипуляции с радиоактивными веществами следует проводить в
Все реагенты стабильны при 2-8“С до окончания срока годности набора.
специально оборудованных для этого помещениях, удаленных от мест
Условия хранения компонентов набора после их растворения или разбавления
постоянного пребывания людей.
указаны в разделе «Процедура анализа».
о - Необходимо регистрировать поступление и расход радиоактивных
2.1 Пробирки, покрытые моноклональными антителами к СТГ: 2 х 50 шт. материалов.
(готовы к использованию). - Лабораторное оборудование и посуду следует хранить отдельно, чтобы
2.2 Метка, раствор моноклональных антител к СТГ, меченных 1251:1 предотвратить их зафязнение радиоактивными имтопами.
флакон, 11 мл (готова к использованию). - Любой случай радиоактивного зафязнения или исчезновения
На дату изготовления флакон содержит 370 кБк '^^(.иммуноглобулинов в радиоактивного материала должен рассматриваться в соответствии с
буфере с бычьим сывороточным альбумином, красителем и азидом законодательством.
натрия (< 0,1 %, см. п. Меры предосторожности). - Утилизация радиоактивных отходов должна осуществляться в
соответствии с законодательством.
2.3 Калибровочные пробы: 5 флаконов по 0,5 мл (лиофилизованные
препараты) +1 флакон с 5 мл нулевой калибровочной пробы (готов к 4.3 Азид натрия
использованию). Некоторые компоненты набора содержат азид натрия в качестве
Калибровочные пробы содержат СТГ в диапазоне концентраций от О до консерванта. Вступая в реакцию со свинцом, медью и латунью, азид
100 мМЕ/л в бычьей сыворотке с азидом натрия (< 0,1 %, см. п. Меры натрия образует взрывоопасные азиды металлов. Отработанные
предосторожности) для нулевой калибровочной пробы, или в буфере с реагенты следует разбавлять большим количеством водопроводной воды,
бычьим сывороточным альбумином и азидом натрия (< 0,1 %, см. п. Меры после чего их можно сливать в канализацию.
предосторожности) для остальных, лиофилизованных калибровочных 4.4 Сыворотка крови человека
проб. Точные концентрации СТГ, калиброванные по международному С исследуемыми образцами сыворотки крови следует обращаться как с
стандарту WHO 2nd IS 98/574 в сыворотке крови человека, указаны на потенциально инфекционным материалом, могущим содержать вирусы
этикетках флаконов. 1 мМЕ соответствует 0,33 мкг. СПИД и гепатита. Весь использованный материал должен быть уничтожен
Примечание: Не использовать для тестов на отфытие. по действующим государственным правилам и инструкциям.
2.4 Контрольная: 1 флакон 0,5 мл (лиофилизованные препараты).
5. ПОЛУЧЕНИЕ, ОБРАБОТКА, ХРАНЕНИЕ И РАЗВЕДЕНИЕ ОБРАЗЦОВ
Флакон содержит известное количество СТГ в буфере с бычьим
сывороточным альбумином и азидом натрия (< 0,1 %, см. п. Меры - Собрать кровь в чистые сухие пробирки, или пробирки, содержащие
предосторожности). Ожидаемый диапазон концентраций указан на антикоагулякг.
этикетке флакона. - Отделить сыворотку/плазму крови центрифугированием.
- Образцы сыворотки и плазмы можно хранить при 2-8°С в течение 24
2.5 Промывочный раствор (20х): 1 флакон, 50 мл.
о часов. Для более длительного хранения их необходимо разделить на
Концентрированный раствор должен быть разведен перед
аликвоты и заморозить при температуре < -1В'’С. Избегать повторного
использованием.
замораживания-оттаивания проб.
Внимание: Температура и сроки годности, указанные на этикетках флаконов - Если концентрация СТГ в исследуемом образце выходит за пределы
с реагентами, относятся только к их хранению в производственных условиях калибровочной кривой, его необходимо разбавить нулевой
вплоть do момента комплектации набора и не распространяются на калибровочной пробой и провести анализ повторно.
полученную пользователем продукцию.
6. ПРОЦЕДУРА АНАЛИЗА
3. ДОПОЛНИТЕЛЬНЫЕ МАТЕРИАЛЫ И ОБОРУДОВАНИЕ
6.1 Подготовка реагентов
Помимо стандартного лабораторного оборудования необходимо иметь Довести все реагенты до комнатной температуры.
следующее:
6.1.1 Растворение калибровочных проб и контрольной сыворотки
- микропипетка(50 мкл)
Флаконы лиофилизованных калибровочных проб (кроме нулевой
- полуавтоматические пипетки (100 мкл; 2 мл)
калибровочной пробы готовой к использованию) и контрольной сыворотки
- вихревой смеситель типа Vortex
довести до комнатной температуры, после чего растворить содержимое
- горизонтальный или орбитальный встряхиватель
флаконов в 0,5 мл дистиллированной воды. Через 30 мин. аккуратно
- водоструйный насос
перемешать содержимое флаконов, избегая обрахвания пены. Не
- гамма-счетчик для измерения активности '»1.
использовать вихревой смеситель типа Vortex. Подготовленные к
4. МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ работе препараты калибровочных проб и контрольной сыворотки можно
хранить при 2-8°С в течение недели или при <-18“С более длительный
4.1 Общие замечания:
срок.
- Перед использованием довести реагенты до комнатной температуры.
- Не смешивать реагенты из наборов разных серий. 6.1.2 Подготовка промывочного раствора
-Анализ калибровочных и исследуемых проб должен проводиться Смешать содержимое флакона с концентратом буферного раствора и
одновременно. 950 мл дистиллированной воды. Разбавленный раствор можно хранить
- Для получения воспроизводимых результатов очень важно соблюдать при 2-8°С до окончания срока годности набора.
рекомендуемые условия встряхивания пробирок. 6.2 Процедура анализа (см. Таблицу на следующей странице)
Р1-1397-2007-10-22 17/28
7. РЕЗУЛЬТАТЫ 10. АНАЛИТИЧЕСКИЕ ХАРАКГЕРИСТИКИ
Результаты рассчитывают методом интерполяции по калибровочной фивой, (более подробная информация приведена в разделе “APPENDIX")
полученной одновременно с анализом неизвестных образцов. 10.1 Аналитическая чувствительность: 0.1 мМЕ/л
7.1 Калибровочная кривая
10.2 Специфичность
Результаты, приведенные в этой инструкции, получены при построении
Антитела, используемые в данном наборе, обладают высокой
калибровочной кривой в линейных координатах с соотношением В/Т {%) специфичностью к СТГ. Перекрестная реакция с близкородственными
или В/Вмакс. (%) по вертикальной оси и концентрацией СТГ (мМЕ/л) по
соединениями (ХГЧ, плацентарным лактогеном, плацентарным гормоном
горизонтальной оси калибровочного графика. Другие методы обсчета роста, пролакгином) очень низка.
могут давать несколько отличающиеся результаты.
10.3 Воспроизводимость
Общий счет: 134307 имп./мин.
10.3.1 Внутри анализа
Имп7мин.
Кал. пробы СТГ (мМЕ/л) ВЯ (%) В/Вмакс. Анализ образцов проводили в 15 репликатах в пределах одной серии
i"=3)
определений. Коэффициент вариации не превышал 1.5 %.
О 52 0,04 0,07
0.5 593 0,44 0,84 10.3.2 Между анализами
2 2065 1,54 2,92 Анализ образцов в дубликатах проводили в 64 различных сериях
10 8884 6,61 12,6 определений. Коэффициент вариации не превышал 14.0 %.
50 43446 32,3 61,5 10.4 Точность
100 70700 52,6 100
10.4.1 Тест на разведение
(Пример типичной калибровочной кривой. Не использовать для обсчета результатов.)
Образцы сыворотки крови с высокой концентрацией СТГ разводили
7.2 Образцы нулевой калиброжочной пробой. Процент «открытия» составил 89-109 %.
Для каждого образца найти на вертикальной оси калибровочного графика
10.4.2 Тест на «открытие» стандартной добавки
значение ВЯ или В/Вмакс., а на горизонтальной оси соответствующую
Известные количества СТГ добавляли к образцам сыворотки крови с
концентрацию СТГ в мМЕ/л. Для перевода концентраций из мМЕ/л в нг/мл,
низкой его концентрацией. Измеренная величина «открытия» составляла
нужно умножить полученный результат на 0.33.
89.5%-123.7%.
8. КОНТРОЛЬ КАЧЕСТВА 10.5 Диапазон определений (от аналитической чувствительности до значения
В соответствии с требованиями Good laboratory practices для контроля качества наивысшей калибровочной пробы): 0.10 -100 mlU/L
проводимых исследований следует регулярно использовать контрольные
образцы, которые должны проходить те же стадии анализа, что и 11. ОГРАНИЧЕНИЯ МЕТОДА
анализируемые пробы. Результаты контроля качества рекомендуется Нарушение методики проведения анализа может привести к искажению
обрабатывать с помощью специальных статистических методов. результатов иаледования. Результаты определения должны быть
В случае серьезного повреждения упаковки, или в случае несоответствия интерпретированы в свете общей клинической картины пациента, включая
полученных результатов аналитическим характеристикам (см.п.Ю) обратитесь, анамнез, данные других тестов и подходящую иную информацию.
пожалуйста, к нашим специалистам; Тел.:+420 272 017 391; «Хук-эффект» в данном наборе не наблюдался до концентрации СТГ, равной
3000 мМЕ/л.
Факс: +420 272 017 385; e-mail: itn unochem@t)eckmancouller.com
Тел.:+7 495 9371664; Факс: +7 495 254 64 07; e-mail: При выполнении анализов с использованием антител возможна интерференция
t)eckrran ruiatieckmancoulter.com гетерофильными антителами в пробе пациента. У пациентов, имеющих
постоянный контакт с животными или проходивших иммунотерапию или
9. ОЖИДАЕМЫЕ ЗНАЧЕНИЯ диагностические процедуры с использованием иммуноглобулинов или их
В каждой лаборатории рекомендуется установить собственные уровни СТГ, фрагментов, могут вырабатываться антитела (т.е. НА1УА), которые влияют на
соответствующие нормальным. результаты иммунного анализа.
Несмотря на трудности в интерпретации результатов определения базального Влияние этих антител может привести к получению ошибочных результатов.
уровня СТГ из-за наличия циркадного ритма, его нормальные значения у Тщательно проверяйте результаты анализов пациентов с подозрением на
всрослых обычно ниже 20 мМЕ/л. наличие этих антител.
Для детей в тесте со стимуляцией нижнее пороговое значение, характерное для
дефицита СТГ, составляет 20 мМЕ/л.
6.2 Процедура Анализа
Стадия 1 Стадия 2 Стадия 3
Внесение реагентов * Инкубация Измерение результатов
В покрытые антителами Тщательно удалить содержимое
пробирки последовательно пробирок
внести: (кроме проб Т)
Инкубировать 1 часа
при 18-25 ”С
- 50 мкл калибровочных, Промыть пробирки 2 раза
и постоянном встряхивании
контрольных и по 2 мл промывочного раствора
(350 осц./мин.)
анализируемых проб и
-100 мкл метки. Измерить связанную (В) и
общую (Т) активность ^25|
Перемешать (имп./мин.) в течение 1 минуты
* Для определения общей активности '2S| (имп./мин.) в две дополнительные пробирки внести по 100 мкл раствора метки.
IMMUNOTECH SAS -130 av. de Lattre de Tassigny - B.P.177 -13276 Marseille Cedex 9 France - Tel. (33) 4 91 17 27 GO - Fax : (33) 4 91 41 43 58
PI-1397-2007-10-22 18/28
IMMUNOTECH И н с т р у к ц и я ПО
А BECKMAN COULTER COMPANV
и с п о л ь зо в ан и ю
RUSSIAN
IVD
IRMA IGF-I А15729
ш я п ш НАБОР ДЛЯ ИММУНОРАДИОМЕТРИЧЕСКОГО IN VITRO ОПРЕДЕЛЕНИЯ
С €
§£iSi_13485 ИНСУЛИНОПОДОБНОГО ФАКТОР РОСТА I В СЫВОРОТКЕ И ПЛАЗМЕ КРОВИ ЧЕЛОВЕКА
certified
1. ПРИНЦИП МЕТОДА - в лабораториях запрещается принимать пищу, курить, пользоваться косметикой.
Иммунорадиометрическое определение IGF-I отностися к анализам типа - Не пипетировать растворы радиоактивных веществ ртом.
- Для офаничения контакта с радиоактивными материалами рекомендуется
"сэндвич", в котором используется пара мышиных моноклональныз антител к
использовать разовые перчатки и лабораторную спецодежду.
различным эпитопам его молекулы. Для высвобождения IGF-I из комплексов со - Все манипуляции с радиоактивными веществами следует проводить в специально
связывающими белками предварительно проводится стадия диссоциации. оборудованных для этого помещениях, удаленных от мест постоянного
Анализируемые образцы, контрольные и калибровочные пробы инкубируют в пребывания людей.
пробирках, покрытых одним видом моноклональных антител, в присутствии - Радиоактивные вещества следует хранить с использованием контейнеров в
второго вида моноклональных антител, меченных йодом 125. Затем удаляют специально отведенных для этого местах.
- Необходимо регастрировать поступление и расход радиоактивных материалов.
содержимое пробирок и измеряют связанную активность’*®!. Концентрацию
- Лабораторное оборудование и посуду следует хранить отделыно, чтобы
IGF-I, прямо пропорциональную связанной активности, определяют методом предотвратить их загрязнение радиоактивными изотопами.
интерполяции по калибровочной кривой. - Любой случай радиоактивного загрязнения или исчезновения радиоактивного
материала должен рассматриваться в соответствии с законодательством.
2. РЕАГЕНТЫ, ВХОДЯЩИЕ В СОСТАВ НАБОРА - Утилизация радиоакгавных отходов должна осуществляться в соответствии с
Все реагенты стабильны при 2-8”С до окончания срока годности набора. законодательством.
Условия хранения компонентов набора после их растворения или разбавления
4.3 Азид натрия
указаны в разделе "Процедура анализа".
Некоторые компоненты набора содержат азид натрия в качестве
2.1 Пробирки, покрытые антителами к IGF-1: 2x50 шт. (готовы к использованию) консерванта. Вступая в реакцию со свинцом, медью и латуныо, азид
о 2.2 Метка, антитела к IGF-I, меченные : 1 флакон, 33 мл (готова к натрия образует взрывоопасные азиды металлов.
использованию) Отработанные реагенты следует разбавлять большим количеством
На дату изготовления флакон содержит не более 370 кБк '“I- водопроводной воды, после чего их можно сливать в канализацию.
иммуноглобулинов в буфере с бычьим сывороточным альбумином, 4.4 Сыворотка крови
азидом натрия (<0,1%, см. л. Меры предосторожности) и красителем. С исследуемыми образцами сыворотки или плазмы крови следует
2.3 Калибровочные пробы : 6 флаконов (лиофилизованные препараты) обращаться как с потенциально инфекционным материалом, могущим
Калибровочные пробы содержат IGF-I в диапазоне концентраций от О до содержать вирусы СПИД и гепатита. Весь использованный материал должен
1200 нг/мл в буфере с бычьим сывороточным альбумином и быть уничтожен по действующим государавенным правилам и инструкциям.
консервантами. Точные концентрации, калиброванные по международному
5. ПОЛУЧЕНИЕ, ОБРАБОТКА, ХРАНЕНИЕ И РАЗВЕДЕНИЕ ОБРАЗЦОВ
стандарту WHO 87/518, указаны на этикетках флаконов.
- Собрать кровь в чистые сухие пробирки, или в пробирки с
2.4 Контрольная сыворотка : 1 флакон (лиофилизованный препарат)
добавлением гепарина, ЭДТА или цитрата натрия.
Флакон содержит известное количество IGF-I, лиофилизованного в
- Отделить сыворотку/плазму от клеток крови центрифугированием.
буфере с бычьим сывороточным альбумином. Ожидаемый диапазон
- Образцы сыворотки и плазмы можно хранить при 2-8”С в течение 24
концентраций указан на этикетке флакона.
часов. Для более длительного хранения их необходимо разделить на
2.5 Буфер для диссоциации : 2 флакона по 25 мл (готовы к использованию)
аликвоты и заморозить при температуре < -18"С. Избегать повторного
Препарат содержит бычий сывороточный альбумин
замораживания-оттаивания проб.
2.6 Промывочный раствор (20х): 1 флакон, 50 мл. - Если концентрация IGF-I в анализируемом образце превышает
Концентрированный раствор должен быть разведен перед максимальную калибровочную пробу, его следует развести буфером
Внима и н с и п е о : л Т ь е зо м в п а е н р и а е т м у . ра и сроки годности, указанные на этикетках флаконов для диссоциации и провести анализ повторно.
с реагентами, относятся только к их хранению в производственных условиях 6. ПРОЦЕДУРА АНАЛИЗА
вплоть до момента комплектации набора и не распространяются на
6.1 Подготовка реагентов
полученную пользователем продукцию.
Довести все реагенты до комнатной температуры.
6.1.1 Растворение калибровочных проб и контрольных сывороток
3. ДОПОЛНИТЕЛЬНЫЕ МАТЕРИАЛЫ И ОБОРУДОВАНИЕ
Растворить содержимое флаконов в объеме дистиллированной воды,
о Помимо стандартного лабораторного оборудования необходимо иметь следующее: указанной на этикетках. Через 30 минут аккуратно перемешать, избегая
- микропипетка(50 мкл) образования пены. Подготовленные к работе калибровочные и
- полуавтоматическая пипетка (300 мкп, 1 мл) контрольные пробы можно хранит при 2-8°С, в течение недели, или
- вихревой смеситель типа vortex разделенные на аликвоты при <-18”С до окончания срока годности набора.
- горизонтальный или орбитальный встряхиватель (не менее 300 осц./мин.)
6.1.2 Подготовка промывочного раствора
- водоструйный насос
Тщательно смешать содержимое флакона с концентратом и 950 мл
- гамма-счетчик для измерения активности '“I.
дистиллированной воды. Подготовленный к работе промывочный
4. МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ раствор можно хранить при 2-8°С до окончания срока годности набора.
4.1 Общие замечания: 6.2 Подготовка анализируемых проб и контрольных образцов
- Перед использованием довести реагенты до комнатной температуры.
Калибровочные пробы не обрабатывать (не разводить).
- Не смешивать реагенты из наборов разных серий.
- Анализ калибровочных проб должен проводиться одновременно с - В полипропиленовые пробирки внести последовательно 50 мкл
исследуемыми образцами. образца и 1 мл буфера для диссоциации (таким образом можно
- Для получения воспроизводимых результатов очень важно соблюдать обработать 50 проб; для обработки 100 проб необходимо 25 мкл
рекомендуемые условия встряхивания пробирок. образца и 500 мкл буфера).
- Анализ рекомендуется проводить в дубликатах. - Перемешать содержимое на вихревом смесителе.
- Необходимо строго соблюдать порядок внесения реагентов. Подготовленные к анализу образцы можно хранить при 2-8°С в течение
- Пробирки только для одноразового применения. 48 часов, или при <-18°С в течение длительного времени.
4.2 Основные правила обращения с радиоактивными веществами. 6.3 Процедура анализа (см. таблицу на следующей странице)
Получение, использование и транспортировка радиоактивных
7. РЕЗУЛЬТАТЫ
материалов должны происходить в соответствии с принятыми в данной
стране нормами радиационной безопасности и санитарными правилами Результаты рассчитывают методом интерполяции по калибровочной кривой,
работы с радиоактивными веществами. полученной одновременно с анализом неизвестных образцов.
PI-A15729-2011-03-14_RU 1/4
7.1 Калибровочная кривая Дети с замедленным конституционным развитием
Результаты, приведенные в этой инструкции, получены при построении Данные дети имеют рост на два и более стандартных отклонения ниже,
калибровочной кривой в полулогарифмических координатах {"сппайн" чемсредний рост в контрольной фупе, концентрацию СТГ после
функция) с соотношением В/Т (%) или В/Вмакс. {%) по вертикальной оси и стимулирующего теста, превышающую 20 мМЕ/л, и постоянную скорость роста.
концентрацией IGF-I (нг/мл) по горизонтальной оси калибровочного графика. Стадия полового развития lfiF-инг/мл)
Другие методы обсчета могут давать несколы<о отличающиеся результаты. (лет) п Среднее значение Минимум кЯаксимум
Общий счет: 127559 имп./мин. Р1 04 13 114 98 180
ИМП./МИН.
Кал. пробы IGF-I (нг/мл) —1п=?1_ ВЯ(%) В;Вмакс. (%) 5-7 25 115 98 156
8-9 21 129 76 186
О 257 0,20 0,43 10-11 24 151 76 234
30 1138 0,89 1.93 >12 27 198 131 278
100 4496 3,52 7,65 Р2 20 258 163 502
300 18620 14,59 31,72 РЗ 14 351 185 617
600 39285 30,79 66.93 Р4 9 423 272 540
1200 58695 46,00 100
10. АНАЛИТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
(Притр типичной калибровочной кривой. Не испопыовать дпя обсчета результатов.) (более подробная информация приведена в разделе APPENDIX)
7.2 Образцы
Для каждого образца найти на вертикальной оси калибровочного графика 10.1 Чувствительность : 2 нг/мл
соотношение ВЯ (%) или В/Вмакс (%), а на горизонтальной оси 10.2 Специфичность
соответствующую концентрацию IGF-I в пг/мл. Антитела, используемые в данном наборе, имеют высокую специфичность
8 к IGF-I. Перекрестная реакция с рядом близкородственных соединений
. КОНТРОЛЬ КАЧЕСТВА
(инсулин, проинсулин, IGF II, СТГ) очень мала.
В соответствии с требованиями Good laboratory practices дпя конгроля качества
10.3 Воспроизводимость
проводимых исследований следует регулярно использовать контрольные
образцы, которые должны проходить те же стадии анализа, что и анализируемые 10.3.1 Внутри анализа
пробы. Результаты контроля качества рекомендуется обрабатывать с помощью Образцы анализировали в 25 репликатах в одной серии определений.
специальных статистических методов. Коэффициент вариации измеренного уровня IGF-I в сыворотке крови не
В случае серьезного повреждения упаковки, или в случае несоответствия превышал 6,3%.
полученных результатов аналитическим характеристикам (см.п.Ю) обратитесь, 10.3.2 Между анализами
пожалуйста, к нашим специалистам: Тел.:+420 272 017 391; Факс: +420 272 017 385; Анализ образцов в дубликатах проводили в 25 различных сериях
e-mail: 1типос11еп1@1)ес1(глапсои11егсот.Тел.:-|-7 495 937 1664; Факс: +7 495 254 определений. Коэффициент вариации измеренного уровня IGF-I в
64 07: e-mail: t)ecl<nnan.ru@t)eckfrancoulter.com. сыворотке крови не превышал 6,8%.
9. ОЖИДАЕМЫЕ ЗНАЧЕНИЯ 10.4 Точность
В каждой лаборатории рекомендуется установить собственные уровни IGF-I, 10.4.1 Тест на разведение
соответствующие нормальным. Приведенные ниже значения являются Образцы сыворотки крови с высокой концентрацией IGF-I разводили
ориентировочными. нулевой калиброжочной пробой. Процент 'открытия' составил 88% -111%.
10.4.2 Тест на "открытие”
. . . 1eiXirnirn) Известные количества IGF-I добавляли к образцам сыворотки крови с
Во (л з е р т а ) ст n Минимум п зн о а г ч р е а н н и и я ч н д ы ля е Медиана П зн о а г ч р е а н н и и я ч н д ы ля е Максимум низкой его концентрацией. Измеренная величина ’открытия" составляла
5% популяции 95% популяции 91%-103%.
20-30 51 219 232 288 385 644 10.5 Диапазон определений (от аналитической чувствительности до значения
3040 44 140 177 245 382 405 наивысшей калибровочной пробы): 2 -1200 нг/мл.
40-50 43 64 124 199 290 336 11. ОГРАНИЧЕНИЯ МЕТОДА
50-60 18 71 71 147 263 284 Нарушение методики проведения анализа может привести к искажению
60-70 20 94 94 141 269 269 результатов исследования. Результаты определения должны быть
интерпретированы в свете общей клинической картины пациента, включая
70-80 20 72 76 117 160 167
анамнез, данные других тестов и подходящую иную информацию.
]ети При выполнении анализов с использованием антител возможна интерференция
Ладия полоиго раз (л ви ет т ) ия п IGF-I (ngJmL) гетерофильными антителами в пробе пациента. У пациентов, имеющих
постоянный контакт с животными или проходивших иммунотерапию или
Среднее значение Минимум Максимум
диатостические процедуры с использованием иммуноглобулинов или их
Р1 04 5 114 49 171
фрагментов, могут вырабатываться антитела (т.е. НАМА), которые влияют на
>4 27 250 76 499
результаты иммунного анализа.
Р2 6 303 247 396
Влияние этих антител может привести к получению ошибочных результатов.
РЗ 7 414 249 642
Тщательно проверяйте результаты анализов пациентов с подозрением на
Р4-Р5 7 400 271 550
наличие этих антител.
6.3 Процедура Анализа
Стадия 1 Стадия 2 Стадия 3
Внесение реагентов Инкубация Измерение результатов
В покрытые антителами пробирки Тщательно удалить содержимое
последовательно внести: Инкубировать 60 минут при пробирок (кроме проб Т).
18-25°С и ПОСТОЯННОМ
- 300 МКЛ метки*, встряхивании (350 осц./мин.) Промыть пробирки 2 раза
- 50 мкл калибровочных, по 2 мл промывочного раствора.
контрольных и анализируемых проб.
Измерить связанную (В) и общую
Перемешать, (Т) активность 125| (имп./мин.)
в течение 1 минуты.
* в две дополнительные пробирки внести по 300 мкл метки для оценки общей активности (пробы«Т»).
М1 IMMUNOTECH SAS -130 av. de Lattre de Tassigny - B.P.177 -13276 Marseille Cedex 9 France - Tel. (33) 4 91 17 27 00 - Fax: (33) 4 91 41 43 58
PI-A15729-2011-03-14_RU 2/4