Набор реагентов для иммуноферментного определения IgG-антител к антигенам Aspergillus spp. в сыворотке и плазме крови "Aspergillus IgG-ИФА" по ТУ 9398-121-18619450-2009 — инструкция и характеристики

РУ: ФСР 2009/05944 от 23.10.2009 · класс риска 2б

Производитель: ООО "ХЕМА" (Россия)

Вид изделия: Набор офтальмологический хирургический, не содержащий лекарственные средства, одноразового использования

Автоматически отфильтрованный фрагмент инструкции по применению (страницы, где похоже, что есть таблица технических характеристик) — не полный документ. Карточка РУ на портале Росздравнадзора →

Текст инструкции: технические характеристики

УТВЕРЖДЕНА ¡УТВЕРЖДАЮ»
Приказом Росздравнадзора Геь МЮО «ХЕМА»
от 2009 г. С. Лебедин
№ 2009 г.
ИНСТРУКЦИЯ
по применению Набора реагентов для иммуноферментного определения
IgG антител к антигенам Aspergillus spp. в сыворотке (плазме) крови
«Aspergillus IgG-ИФА»
1. НАЗНАЧЕНИЕ.
1.1. Набор реагентов «Aspergillus IgG-ИФА» предназначен для определения
специфических IgG антител к антигенам Aspergillus spp. в сыворотке (плазме) крови человека
методом твердофазного иммуноферментного анализа.
1.2. Грибки рот Aspergillus способны вызывать у человека местные и системные
инфекции, а также аллергические заболевания. В зависимости от формы заболевания, изотип
антител к Aspergillus spp. может быть разным. Низкие титры IgG антител свидетельствуют об
инфекции в прошлом и не имеют клинической значимости. В отличие от этого, при
аллергическом бронхолегочном аспергиллезе (АБЛА) уровень IgG антител к Aspergillus spp.
значительно возрастает и используется в качестве одного из диагностических критериев для
данной нозологии. Еще более высокие уровни IgG антител к Aspergillus spp. обнаруживаются
при аспергилломе и инвазивном аспергиллезе.
1.3. Диагностическая значимость определения.
Определение IgG антител к грибам Aspergillus spp. в клинической практике используется
обычно для следующих целей:
- лабораторная диагностика аспергиллеза у населения;
- дифференциальная диагностика (при оппортунистических заболеваниях,
например, микозах неясной этиологии);
- мониторинг эффективности проводимого лечения аспергиллеза.
2. ХАРАКТЕРИСТИКА НАБОРА.
2.1. Принцип работы Набора. Определение IgG антител к антигенам Aspergillus spp.
основано на использовании твердофазного варианта иммуноферментного анализа. На
внутренней поверхности лунок иммобилизован высокоочищенный рекомбинантный антиген
Aspergillus spp. В лунках планшета, при добавлении исследуемого образца сыворотки (плазмы)
крови, во время инкубации, происходит специфическое связывание IgG антител, содержащихся
в исследуемом образце, и антигена на твердой фазе.
Отмывка лунок планшета позволяет удалить избыток непрореагиповашпих компонентов.-*
Во время инкубации с конъюгатом происходит образов
«антиген Aspergillus spp. твердой фазы - специфические IgG антцт
2
мышиные моноклональные анти-IgG антитела, конъюгированные с пероксидазой хрена
(конъюгат)».
Отмывка лунок планшета позволяет удалить избыток непрореагировавших компонентов.
Во время инкубации с раствором субстрата тетраметилбензидина (ТМБ) происходит
специфическое связывание пероксидазы (конъюгат) с раствором субстрата тетраметилбензидина
(ТМБ), сопровождающееся изменением окраски растворов в лунках. Интенсивность окраски
прямо пропорциональна концентрации специфических IgG антител к антигенам Aspergillus spp.
в исследуемом образце.
Регистрация результатов реакции производится измерением оптической плотности
содержимого лунок планшета на спектрофотометре при длине волны 450 нм.
Обработка результатов реакции производится с помощью коэффициентного метода.
2.2. Состав Набора:
- планшет 96-луночный стрипированный с сорбированным на внутренней поверхности
лунок рекомбинантным антигеном Aspergillus spp., готов к использованию - 1 шт.;
- положительная контрольная сыворотка А на основе инактивированного пула
сывороток крови человека с высоким содержанием IgG антител к антигенам Aspergillus spp.,
готова к использованию - 1 пробирка или флакон (1,0 мл);
- положительная контрольная сыворотка В на основе инактивированного пула
сывороток крови человека с низким содержанием IgG антител к антигенам Aspergillus spp.,
готова к использованию - 1 пробирка или флакон (1,0 мл);
- отрицательная контрольная сыворотка на основе инактивированного пула
сывороток крови человека без содержания IgG антител к антигенам Aspergillus spp., готова к
использованию - 1 пробирка или флакон (1,0 мл);
- конъюгат (мышиные моноклональные антитела к IgG человека, конъюгированные с
пероксидазой хрена), готов к использованию - 1 флакон (И мл);
- ИФА-Буфер 7,0 - 7,2), готов к использованию - 1 флакон (22 мл);
(pH
- раствор субстрата тетраметилбензидина (ТМБ), готов к использованию - 1 флакон
(11 мл);
- концентрат отмывочного раствора, 21-кратный концентрат - 1 флакон (22 мл);
- стоп-реагент, готов к использованию - 1 флакон (11 мл);
- липкая лента с бумажной подложкой для заклеивания планшета, готова к
использованию - 2 шт.
3. АНАЛИТИЧЕСКИЕ И ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ.
3.1. Специфичность. При проверке на стандартной панели предприятия (СПП № 121-
013 v. 810 «Сыворотки крови человека, не содержащие содержащие IgG антитела к
антигенам Aspergillus spp. для определения специфичности», утвержденной генеральным
директором ООО «ХЕМА» 10.02.2008 г.) чувствительность составляет 100%.
3.2. Чувствительность. При проверке на стандартной панели предприятия (СПП №
121-012 v. 810 «Сыворотки крови человека, содержащие содержащие IgG антитела к
антигенам Aspergillus spp. для определения чувствительности», утвержденной генеральным
директором ООО «ХЕМА» 10.02.2008 г.) специфичность составляет 100%.
3.3. Воспроизводимость. Коэффициент вариации результатов определения содержания
IgG антител к антигенам Aspergillus spp. в одном и том же образце сыворотки (плазмы) крови с
использованием Набора реагентов «Aspergillus IgG-ИФА» не превышает 8,0%.
3.4. Сравнение Набора с аналогами.
При разработке и апробации Набора реагентов «Aspergillus IgG-ИФА» в качестве
референсного изделия медицинского назначения использовался Набор реагентов для
иммуноферментного выявления иммуноглобулинов класса G к грибам рода Aspergillus
«Аспергилл-^О-ИФА-Бест» производства ЗАО «Вектор-Бест», Россия (зарегистрирован в РФ,
РУ ФС № 012а2006/5687-06 от 27 декабря 2006 г.).
При проведении сравнения результатов на массиве образцов сывороток (плазм) крови
здоровых доноров и пациентов с подтвержденными диагнозами показана высокая корреляция
(Агг >0,95) между Наборами реагентов «Aspergillus IgG-ИФА» и «Аспергилл-^О-ИФА-Бест».
4. МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ.
4.1. Потенциальный риск применения Набора - класс 26 (ГОСТ Р 51609-2000).
4.2. Меры предосторожности-соблюдение «Правил устройства, техники безопасности,
производственной санитарии, противоэпидемического режима и личной гигиены при работе в
лабораториях (отделениях, отделах) санитарно-эпидемиологических учреждений системы
Министерства здравоохранения СССР» (Москва, 1981 г).
5. ОБОРУДОВАНИЕ И МАТЕРИАЛЫ, НЕОБХОДИМЫЕ ПРИ РАБОТЕ С НАБОРОМ:
- фотометр вертикального сканирования, позволяющий измерять оптическую
плотность раствора в лунках при длине волны 450 нм;
- дозаторы со сменными наконечниками, позволяющие отбирать объемы жидкости
в диапазоне 25-250 мкл;
- цилиндр мерный вместимостью 500 мл;
- вода дистиллированная;
- перчатки резиновые или пластиковые;
- бумага фильтровальная.
4
6. АНАЛИЗИРУЕМЫЕ ОБРАЗЦЫ. ПОДГОТОВКА РЕАГЕНТОВ ДЛЯ
АНАЛИЗА.
6.1. Перед проведением анализа компоненты Набора и исследуемые образцы сыворотки
(плазмы) крови следует выдержать при комнатной температуре (+18-25 °С) не менее 30 мин.
6.2. Образцы сыворотки (плазмы) крови, используемые для анализа, допускается
хранить при температуре +2-8 °С не более 24 ч или при температуре минус 20 °С не более 2
недель.
6.3. Для проведения анализа не следует использовать гемолизированную, мутную
сыворотку (плазму) крови, а также сыворотку (плазму) крови, содержащую азид натрия.
6.4. Приготовление планшета.
Вскрыть пакет с планшетом и установить на рамку необходимое количество стрипов.
Вскрытые стрипы следует использовать в течение 1 ч, длительному хранению не подлежат.
Оставшиеся неиспользованными стрипы, чтобы предотвратить воздействие на них влаги,
необходимо тщательно заклеить липкой лентой для заклеивания планшета и хранить в
упаковке при температуре +2-8 °С в течение всего срока годности Набора.
6.5. Приготовление отмывочного раствора.
Содержимое флакона с концентратом отмывочного раствора перенести в мерный
цилиндр вместимостью 500 мл, добавить 440 мл дистиллированной воды и тщательно
перемешать.
В случае дробного использования Набора следует отобрать необходимое количество
концентрата отмывочного раствора и развести дистиллированной водой в 20 раз (1 объем
концентрата + 19 объемов дистиллированной воды).
Приготовленный отмывочный раствор допускается хранить при комнатной температуре
(+18-25 °С) не более 2 сут или при температуре +2-8 °С не более 10 сут.
7. ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА.
7.1. Развести исследуемые образцы сыворотки (плазмы) крови в 21 раз ИФА-Буфером
{например, 10,0 мкл сыворотки (плазмы) крови + 200 мкл ИФА-Буфера}.
Тщательно перемешать разведенный образец, избегая вспенивания.
Разведенные образцы сывороток (плазм) крови длительному хранению не подлежат.
7.2. Внести в соответствующие лунки в дубликатах по 100 мкл положительной
контрольной сыворотки А, положительной контрольной сыворотки В и отрицательной
контрольной сыворотки.
В остальные лунки внести в дубликатах по 100 мкл разведенных (см. п. 7.1.)
исследуемых образцов сыворотки (плазмы) крови.
Внесение образцов в лунки планшета необходимо произвести в течение 5-10 мин.
7.3. Аккуратно перемешать содержимое планшета круговыми движениями
горизонтальной поверхности, заклеить планшет липкой ленто й для заклеивания - плд|
инкубировать его в течение 30 мин при комнатной температуре ta ) 0 Г (¡täfj Г J
0UTTU:?
Cr;':,CA
<<
Гп-^р.ш .ч .
5
7.4. По окончании инкубации удалить содержимое лунок аспирацией (например, с
помощью водоструйного насоса) или декантированием и промыть лунки планшета трижды
путем добавления во все лунки по 250 мкл отмывочного раствора. Перемешать содержимое
планшета круговыми движениями по горизонтальной поверхности с последующей аспирацией
или декантированием. При каждом декантировании необходимо тщательно удалять остатки
жидкости из лунок постукиванием планшета в перевернутом положении по фильтровальной
бумаге.
7.5. Внести во все лунки планшета по 100 мкл конъюгата.
Внесение конъюгата в лунки планшета необходимо произвести в течение 5-10 мин.
7.6. Аккуратно перемешать содержимое планшета круговыми движениями по
горизонтальной поверхности, заклеить планшет липкой лентой для заклеивания планшета и
инкубировать его в течение 30 мин при комнатной температуре (+18-25 °С ).
7.7. По окончании инкубации удалить содержимое лунок аспирацией (например, с
помощью водоструйного насоса) или декантированием и промыть лунки 5 раз (см. п.7.4.).
7.8. Внести во все лунки планшета по 100 мкл раствора субстрата тетраметилбензидина
(ТМБ).
Внесение раствора субстрата тетраметилбензидина (ТМБ) в лунки планшета
необходимо произвести в течение 1-2 мин.
Инкубировать планшет в темноте при комнатной температуре (+18-25 °С) в течение 15-
25 мин в зависимости от степени развития синего окрашивания.
7.9. Внести во все лунки планшета с той же скоростью и в той же последовательности,
как и раствор субстрата тетраметилбензидина (ТМБ), по 100 мкл стоп-реагента; при этом
содержимое лунок окрашивается в ярко-желтый цвет.
Внесение стоп-реагента в лунки планшета необходимо произвести в течение 1-2 мин.
8. РЕГИСТРАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ.
8.1. Измерить величину оптической плотности (ОП) в лунках планшета на фотометре
вертикального сканирования при длине волны 450 нм. Измерение ОП растворов в лунках
планшета необходимо произвести не позднее 5 мин после внесения стоп-реагента.
В случае невозможности своевременного измерения ОП растворов в лунках на
фотометре, планшет допускается хранить при температуре +2-8 °С не более 4 ч.
9. УЧЕТ РЕЗУЛЬТАТОВ РЕАКЦИИ.
9.1. Рассчитать среднее значение оптической плотности лунок с положительной
контрольной сывороткой В.
9.2. Умножить полученное значение на Коэффициент () (0,72), значение которого
также приведено в аналитическом паспорте и на этикетке флакона.
ПРИМЕЧАНИЕ:
Коэффициент () (0,72) является константой для всех <
И Ф А».