"УТВЕРЖДАЮ”
Руководитель Департамента государственного
контроля качества, эффективности,
безопасности лекарс^6^|йы^<^едств
и медицинской т(
/; h Р.У. Хабриев
И Н С Т Р У К Ц И Я '
по применению набора реагентов для определения содержания общего белка
в сыворотке и плазме крови человека
Общий белок ФС
Рекомендована к утверждению экспертной комиссией по лабораторным реагентам
Комитета по новой медицинской технике М3 РФ
Протокол j4o от 2 ^ 1999 г.
НАЗНАЧЕНИЕ
Набор предназначен для количественного определения общего белка в сыворотке
или плазме крови человека биуретовым методом в клршико-диагностическргс и биохими
ческих лабораториях и научно-исследовательской практике.
Набор выпускается в трех видах фасовки и рассчитан, соответственно, на проведе
ние 100, 500 или 1000 определений при расходе 1,0 мл рабочего реагента на одрш анализ.
ПРИНЦИП МЕТОДА
Белки образуют с ионами меди в щелочной среде комплекс, интенспвность окраски
которого прямо пропорциональна концентрации общего белка в пробе и измеряется фото
метрически при длине волны 540 (520 - 560) нм.
СОСТАВ НАБОРА
Реагент 1: раствор, содержащий гидроокись натрия, 100 ммоль/л; калий-натрий
ВИНН0КР1СЛЫЙ, 16 ммоль/л - 4 флакона (по 20 мл), или 5 флаконов (по 80 мл), или 1 флакон
(800 мл).
Реагент 2: раствор, содержащий сульфат меди, 6 ммоль/л; йодид калия, 15 м^юль/л;
гидроокись натрия, 100 ммоль/л; калий-натрий виннокислый, 16 ммоль/л - 1 флакон
(20 мл), или 1 флакон (100 мл), или 1 флакон ( 200 мл).
Реагент 3: калибратор (калибровочный раствор сывороточного человеческого аль
бумина, 50 г/л, в растворе хлористого натрия, 0,9% и азида натрия, 0,095%) - 1 флакон (3,0
мл), или 2 флакона (по 3,0 мл), или 3 флакона (по 3,0 мл).
Инструкция составлена директором по науке и технике ЗАО «Диакон», к.б.н.
Шарышевым А. А., зам, директора по науке Пущинского медицинского центра МОРАН,
д.м.н. Косяковой Н.И.
АНАЛИТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
Набор обеспечивает линейную область определения концентрации общего белка в
диапазоне от 10 до 150 г/л, отклонение от линейности не превышает 3%. Чувствительность
- не более 5 г/л, коэффициент вариации результатов определений - не более 3%.
Качество набора можно оценивать по отечественным или зарубежным контрольным
сывороткам, аттестованным данным методом.
Нормальные величины концентрации общего белка в сыворотке или плазме крови
человека составляют 64 - 83 г/л.
Рекомендуется в каждой лаборатории уточнить диапазон значений нормальных ве
личин для обследуемого контингента людей.
ОБРАЗЦЫ
Негемолизированная сыворотка или плазма крови. Сыворотку или плазму крови
следует отделить от форменных элементов крови не позднее, че^м через 1 час после забора
крови.
МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ
В реагентах 1 и 2 содержится щелочь, в реагенте 3 содержится токсичный компо
нент - азид натрия. При работе с ними следует соблюдать осторожность и не допускать
попадания на кожу и слизистые; при попадании немедленно промыть пораженное место
большим количеством проточной воды. При проглатывании следует выпить 0,5 л теплой
воды и вызвать рвоту.
При работе с набором следует надевать одноразовые резиновые или пластиковые
перчатки, т.к. образцы крови человека следует рассматривать как потенциально инфици
рованные, способные длительное время сохранять и передавать ВИЧ, вирус гепатита или
любой другой возбудитель вирусной инфекции.
ОБОРУДОВАНИЕ И РЕАГЕНТЫ:
- Спектрофотометр или фотоэлектроколориметр, длина волны 540 (520 - 560) нм, кювета
с длиной оптического пути 10 мм;
- термостат, обеспечивающий температуру + 37 °С;
- секундомер;
- пипетки, позволяющие отбирать объемы жидкости 20 и 1000 мкл;
- пробирки стеклянные вместимостью 3-5 мл;
- цилиндры стеклянные мерные вместимостью 50 и 100 мл;
- колба коническая вместимостью 200 мл;
- вода дистиллированная;
- 0,9% раствор NaCl (физиологический раствор).
ПОДГОТОВКА К АНАЛИЗУ
Приготовление рабочего реагента: смешать в колбе конической вместимостью 200
мл 4 объема реагента 1 и один объем реагента 2. Тщательно закрыть флаконы с реагентами
1 и 2 непосредственно после каждого использованрхя.
Рабочий реагент можно хранить при температуре + 2-25 °С в темном месте не более
года.
Реагент 3 готов к использованию.
ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА
Компоненты реакционной смеси отбирать в количествах, указанных в таблице.
3
Таблица
Отмерить, мкл Опытная Калибровочная Контрольная
проба проба (холостая)
проба
Сыворотка или плазма крови 20
Вода дистиллированная 20
Калибратор 20
Рабочий реагент 1000 1000 1000
Примечание. При использовании автоматических или полуавтоматических биохи
мических анализаторов количество реагентов и анализируемых образцов в зависимости от
объема используемой кюветы может быть пропорционально изменено (соотношение сы
воротки или плазмы крови к рабочему реагенту составляет 1:50).
Пробы перемешать и инкубировать при те^мпературе + 37 °С или при комнатной
температуре (+ 18-25 °С) в течение 10 мин. Измерить оптическую плотность опытной и
калибровочной проб против контрольной (холостой) пробы при длине волны 540 (520 -
560) нм в кювете с длиной оптического пути 10 мм. Окраска растворов стабильна в тече
ние 60 мин.
РАСЧЕТЫ
Содержание общего белка в сыворотке и плазме крови определить по формуле;
Е
о
с = -------- X 50
Е
где: С — концентрация общего белка в анализируемой пробе, г/л;
Е о — оптическая плотность анализируемой пробы, ед. опт. пл.;
Е к — оптическая плотность калибратора, ед. опт. пл.;
50 — содержание общего белка в калибраторе, г/л.
УСЛОВИЯ ХРАНИЕНИЯ И ЭКСПЛУАТАЦИИ НАБОРА
Хранение наборов должно производиться при температуре + 2-8 °С в упаковке
предприятия-изготовителя в течение всего срока годности. Допускается хранение наборов
при температуре до + 25 °С не более 5 суток. Замораживание компонентов набора не до
пускается.
Срок годности набора - 18 месяцев.
Реагенты 1 и 2 после вскрытия флаконов могут храниться при температуре
+ 2-25 °С в темном месте в течение всего срока годности наборов при условии достаточ
ной герметичности флаконов. ^
Рабочий реагент может храниться при температуре + 2-25 °С в темном месте в течение*
12 месяцев при условии достаточной герметичности флакона.
Калибратор после вскрытия флакона может храниться при температуре + 2-8 °С не
более 3 месяцев при условии достаточной герметичности флакона.
- ■' :v - ------------- .■.. .■ ; ... ■ . - , -r , . ,i---------1... ..;и.д, '...■ ■.>|д. ^ ии[лдя^»чдми Ч и
f
4
При содержании общего белка в сыворотке или плазме крови выше 150 г/л анализи
руемую пробу следует развести физиологическим раствором и полученный результат ум
ножить на разведение.
Для получения надежных результатов необходимо строго соблюдать инструкцию по
применению набора.
По вопросам, касающимся качества набора Общий белок ФС, следует обращаться в
ЗАО «Диакон» по адресу:
142292, г. Пущино, Московской обл., пр. Науки, 5; тел. факс (0967) 79-05-54, 79-05-28 и в
ГосНИИ по стандартизации и контролю лекарственных средств М3 России по адресу:
117246, г. Москва, Научный проезд, 14; тел. (095) 120-60-96, 120-60-95.
^ Директор по науке и технике ЗАО «Диакон»,
кандидат биол. наук / А.А. Шарышев.
Зам. директора по науке
Пущинского медицинского центра МОРАН,
доктор мед. наук h Н.И. Косякова.