Л '
’’УТВЕРЖДАЮ”
Руководитель Департамента государственного
контроля качества, эффективности,
безопасности лекарственных средств
и медицинской техники М3 РФ
Р.У. Хабриев
1999 г.
ИНСТРУК
по применению наоора реагентов для о п р е д с а е н й я х о л е с т е р и н а
в сыворотке и плазме крови ^ШОвёка
Холестерин Ф С
Рекомендована к утверждению экспертной комиссией по лабораторным реагентам Ко
митета по новой медицинской технике М3 РФ
'?(
Протокол № ^ от_ __ ____ 1999 г.
НАЗНАЧЕНИЕ
Набор предназначен для количественного определения общего холестерина (эсте-
рифицированного и неэстерифицированного) в сыворотке или плазме крови человека в
клинико-диагностических и биохимических лабораториях и научно-исследовательской
практике.
Набор выпускается в трех видах фасовки и рассчитан, соответственно, на проведе
ние 125, 600 или 1000 определений при расходе 1,0 мл реагента 1 на один анализ.
ПРИНЦИП МЕТОДА
При гидролизе эфиров холестерина холестеринэстеразой образуется свободный
холестерин. Образовавшийся в результате гидролиза и имеющийся в пробе холестерин
окисляется кислородом воздуха под действием холестериноксидазы с образованием эк-
вимолярных количеств перекиси водорода. Под действием пероксидазы перекись водо
рода окисляет хромогенные субстраты с образованием окрашенного соединения, интен
сивность окраски которого прямо пропорциональна концентрации холестерина в пробе
и измеряется фотометрически при длине волны 500 (480-520) нм.
СОСТАВ НАБОРА
Реагент 1: буферно - ферментный раствор , содержащий калий фосфорнокислый -
250 ммоль/л, фенол - 5 ммоль/л, 4-аминоантипирин - 0,3 ммоль/л, холестеринэстеразу -
200 Е/л, холестериноксидазу - 100 Е/л, пероксидазу - 3000 Е/л - 5 флаконов (по 25 мл),
или 6 флаконов (по 100 мл), или 1 флакон (1000 мл).
Реагент 2: калибратор (калибровочный раствор холестерина, 5,2 ммоль/л, в рас
творе терджитола, 20% и азида натрия, 0,095%) - 1 флакон (3,0 мл), или 2 флакона (по 3,0
мл), или 3 флакона (по 3,0 мл).
Инструкция составлена; директором по науке и технике ЗАО “Диакон”, к.б.н.
Шарышевым А. А., зам.директора по науке Пущинского медицинского центра МОРАН,
д.м.н. Косяковой Н.И.
АНАЛИТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
Набор обеспечивает линейную область определения концентрации холестерина в
диапазоне от 1 ммоль/л до 19,4 ммоль/л, отклонение от линейности не превышает 5%.
Чувствительность - не более 0,5 ммоль/л, коэффициент вариации результатов определе
ний - не более 5%.
Качество набора можно оценивать по отечественным или зарубежным контроль
ным сывороткам, аттестованным данным методом.
Концентрация холестерина в сыворотке или плазме крови составляет 3,3 - 5,5
ммоль/л.
Рекомендуется в каждой лаборатории уточнить диапазон значений нормальных
величин для обследуемого контингента людей.
ОБРАЗЦЫ
Негемолизированная сыворотка или плазма крови. Сыворотку или плазму крови
следует отделить от форменных элементов крови не позднее, чем через 1 час после за
бора крови.
МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ
В реагентах 1 и 2 содержится токсичные компоненты - фенол и азид, соответст
венно. При работе с ними следует соблюдать осторожность и не допускать попадания
на кожу и слизистые; при попадании немедленно промыть пораженное место большим
количеством проточной воды. -При проглатывании следует выпить 0,5 л теплой воды и
вызвать рвоту.
При работе с набором следует надевать одноразовые резиновые или пластиковые
перчатки, т.к. образцы крови человека следует рассматривать как потенциально инфи
цированные, способные длительное время сохранять и передавать ВИЧ, вирус гепатита
или любой другой возбудитель вирусной инфекции.
ОБОРУДОВАНИЕ И РЕАГЕНТЫ:
- спектрофотометр или фотоэлектроколориметр, длина волны 500 (480-520 нм), кювета
с длиной оптического пути 10 мм;
- термостат, обеспечивающий температуру + 37 ^С;
- секундомер;
- пипетки, позволяющие отбирать объемы жидкости 10 и 1000 мкл;
- пробирки стеклянные вместимостью 3-5 мл;
- вода дистиллированная;
- 0,9% раствор NaCl ( физиологический раствор).
ПОДГОТОВКА К АНАЛИЗУ
Реагенты 1 и 2 готовы к использованию.
ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА
Компоненты реакционной смеси отбирать в количествах, указанных в таблице.
Таблица
Отмерить, мкл Опытная Калибровочная Контрольная
проба проба (холостая)
проба
Сыворотка или плазма крови 10
Вода дистиллированная 10
Калибратор 10
Реагент 1 1000 1000 1000
Примечание. При использовании автоматических или полуавтоматических био
химических анализаторов количество реагентов и анализируемых образцов в зависимо
сти от объема используемой кюветы может быть пропорционально изменено (соотно
шение сыворотки или плазме крови к реагенту 1 составляет 1:100).
Пробы перемешать и инкубировать при температуре +37® С в течение 10 мин или
при комнатной температуре (+18 - 25® С) в течение 20 мин. Измерить оптическую плот
ность опытной и калибровочной проб против контрольной (холостой) пробы при длине
волны 500 (480-520) нм в кювете с длиной оптического пути 10 мм. Окраска растворов
стабильна в течение 60 мин.
РАСЧЕТЫ
Содержание холестерина в сыворотке и плазме крови определить по формуле:
Ео'
С = -------- X 5,2
Е .
где: С концентрация холестерина в анализируемой пробе, ммоль/л;
Ео оптическая плотность анализируемой пробы, ед. опт. пл.;
Ек оптическая плотность калибратора, ед. опт. пл.;
5,2 содержание холестерина в калибраторе, ммоль/л.
УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ И ЭКСПЛУАТАЦИИ НАБОРА
Хранение наборов должно производиться при температуре + 2 - 8® С в упаковке
предприятия - изготовителя в течение всего срока годности. Допускается хранение на
боров при температуре до + 25® С не более 5 суток. Замораживание компонентов набора
не допускается.
Срок годности набора - 12 месяцев.
Реагент 1 после вскрытия флакона может храниться при температуре + 2 - 8® С в
темном месте в течение всего срока годности набора при условии достаточной герме
тичности флакона.
Калибратор после вскрытия флакона может храниться при температуре + 2 - 8® С
в течение 3 месяцев при условии достаточной герметичности флакона.
При содержании холестерина в сыворотке или плазме крови выше 19,4 ммоль/л
анализируемую пробу следует развести физиологическим раствором и полученный ре
зультат умножить на разведение.
Для получения надежных результатов необходимо строго соблюдать инструкцию
по применению набора.
По вопросам, касающимся качества набора Холестерин ФС следует обращаться в
ЗАО «Диакон » по адресу:
142292 г. Пущино, Московской обл., пр. Науки, 5; тел.факс (0967) 79-05-54, 79-05-28
и в ГосНИИ по стандартизации и контролю лекарственных средств М3 России по адресу:
117247, г. Москва, Научный проезд, 14, тел. (095) 120-60-95.
С
Директор по науке и технике ЗАО «Диакон »
кандидат биол. наук А.А. Шарышев
/
Зам директора по науке Пущинского
медицинского центра МОРАН
доктор мед. наук Н.И. Косякова