«УТВЕРЖДАЮ»
Генеральный директор
ИНСТРУКЦИЯ
по применению набора реагентов для выделения нуклеиновых кислот
из биологического материала и клинических образцов
«РеалБест Сигма»
в комплектациях «РеалБест Сигма (96)» и «РеалБест Сигма (384)»
1. НАЗНАЧЕНИЕ
1.1. Набор реагентов для выделения нуклеиновых кислот из биологического материала и
клинических образцов «РеалБест Сигма» предназначен для выделения нуклеиновых кислот
(ДНК и РНК) для последующего анализа методом ПЦР/ОТ-ПЦР. Набор применим со следующими
видами образцов: сыворотка (плазма) крови, лейкоцитарная фракция крови, биоптаты, соскобы
эпителиальных клеток, мазки со слизистых оболочек, слюна, мокрота, бронхоальвеолярный лаваж
(БАЛ), ликвор, моча, фекалии, сперма, дуоденальное содержимое (желчь), бактериальные
культуры и др.*, а также материалами объектов окружающей среды: суспензии членистоногих,
пробы воды, смывы с поверхностей и др.
* кроме образцов цельной крови.
1.2. Набор реагентов предназначен для выделения нуклеиновых кислот (НК) как ручным
способом, так и с использованием процессора магнитных частиц для очистки нуклеиновых кислот
«KingFisher Flex» («Thermo Fisher Scientific», Финляндия) или «RealFly» (АО «Вектор-Бест-
Балтика», Россия).
1.3. Набор реагентов предназначен для использования в качестве вспомогательного
средства для диагностики in vitro (выделение нуклеиновых кислот для дальнейшего исследования
методом ПЦР или ОТ-ПЦР).
1.4. Область применения - клиническая лабораторная диагностика.
Инструкция составлена сотрудниками АО «Вектор-Бест»: Директором
по производству Ткачевым В.К. и нач. отделения производства ПЦР наборов Трухиной А.В.
| Компонент набора (сокращение) Описание. | Количество при комплектации | |
| | на 96 образцов | на 384 образца |
| Лизирующий раствор с ВКО (ЛР) Жидкость от бесцветного до желтого цвета, допускается наличие осадка, исчезающего при нагревании, содержит гуанидинизотиоцинат (56,7%). | 2 флакона по 28 мл | 1 флакон, 200 мл |
| Раствор для отмывки (РО) Бесцветная жидкость. | 4 флакона по 28 мл | 1 флакон, 200 мл |
| Элюирующий раствор (ЭР) Бесцветная жидкость, содержит натрия азид (0,05%). | 2 флакона по 30 мл | 1 флакон, 240 мл |
| Сорбент Cуспензия магнитных частиц, содержит натрия азид (0,05%). | 2 флакона по 1 мл | 1 флакон, 3 мл |
| Отрицательный контрольный образец (ОКО) Бесцветная жидкость, содержит натрия азид (0,05%). | 2 флакона по 1 мл | 2 флакона по 1 мл |
| Ванночки для реагентов | 6 шт. | 3 шт. |
2. ХАРАКТЕРИСТИКА НАБОРА
2.1. Принцип метода.
Принцип действия набора «РеалБест Сигма» состоит в температурной обработке образца
многокомпонентным лизирующим раствором, который разрушает комплексы нуклеиновых
кислот с белками и обеспечивает условия, при которых нуклеиновые кислоты сорбируются на
поверхности магнитных частиц. После этого магнитные частицы проводятся через отмывку, в ходе
которой нуклеиновые кислоты остаются сорбированными на поверхности магнитных частиц, и
элюцию, в ходе которой нуклеиновые кислоты переходят с поверхности частиц в элюирующий
раствор. После этого проба готова к постановке ПЦР/ОТ-ПЦР.
Эффективность пробоподготовки в каждом исследуемом образце оценивается с помощью
внутреннего контрольного образца (ВКО), входящего в состав лизирующего раствора и
проходящего все стадии пробоподготовки и следующих за ней ПЦР или ОТ-ПЦР вместе с
выделяемыми нуклеиновыми кислотами.
Положительный контрольный образец (ПКО) входит в состав ПЦР-наборов серии
«РеалБест». ПКО проходит процедуру выделения наравне с биологическими пробами и
отрицательным контрольным образцом (ОКО).
2.2. Состав набора:
В комплект поставки входят:
– набор реагентов;
– инструкция по применению и паспорт (количество копий определяется в договоре на
поставку продукции).
Инструкция по применению и паспорт размещены на сайте: www.vector-best.ru.
2
2.3. Условия применения.
Набор применяется с наборами для качественного и количественного определения
нуклеиновых кислот серии «РеалБест».
Набор реагентов рассчитан на выделение нуклеиновых кислот из 96 образцов (комплектация
РеалБест Сигма (96)) и из 384 образцов (комплектация РеалБест Сигма (384)) объемом 100 мкл,
включая контрольные образцы.
Процедура выделения НК может осуществляться как ручным способом, так и с
использованием процессора магнитных частиц «KingFisher Flex» («Thermo Fisher Scientific»,
Финляндия) или «RealFly» (АО «Вектор-Бест-Балтика», Россия). Допускается адаптация других
станций для автоматического выделения нуклеиновых кислот, зарегистрированных в РФ и
удовлетворяющих следующим требованиям:
- возможность процессирования магнитных частиц (с использованием магнитных стержней
или магнитного штатива);
- наличие термостата или термошейкера с возможностью нагрева не менее чем до 110 °С;
- наличие системы перемешивания жидкостей шейкированием или пипетированием.
По вопросам применения/ адаптации других станций для автоматического выделения
нуклеиновых кислот следует обращаться к производителю набора реагентов.
Показания к применению. Набор реагентов предназначен для использования в качестве
вспомогательного средства для диагностики in vitro (выделение НК для дальнейшего исследования
методом ПЦР).
Противопоказания. Противопоказаний к применению нет (не применимо).
3. ТЕХНИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
3.1. Эффективность выделения РНК составляет 100%. Эффективность выделения РНК
контролируется по шести образцам с содержанием 500 копий/мл РНК ВГG, приготовленным из
стандартного образца предприятия СОП РНК ВГG (СОП 05-2-519), как процентное содержание
образцов, определенных набором «РеалБест РНК ВГG» (AO «Вектор-Бест», РЗН 2015/3257) как
положительные.
3.2. Эффективность выделения ДНК составляет 100%. Эффективность выделения ДНК
контролируется по шести образцам с содержанием 1000 копий/мл ДНК Parvovirus B19,
приготовленным из стандартного образца предприятия СОП ДНК Parvovirus B19 (СОП 05-2-462),
как процентное содержание образцов, определенных набором «РеалБест ДНК Parvovirus B19» (AO
«Вектор-Бест», РЗН 2014/1397) как положительные.
3.3. Эффективность выделения РНК/ДНК регистрируемым набором на 862 образцах
биоматериала в ходе проведенных испытаний составила 100 % (интервал 99,6%-100%, с
доверительной вероятностью 95%).
3.4. Интерферирующие вещества исследовали на модельных образцах клинического
3
| Биоматериал | ПИВ | Концентрация, до которой не обнаружено влияние |
| Сыворотка (плазма) крови | Триглицериды | 5% |
| | Цельная кровь | 5% |
| | Билирубин | 250 мкмоль/л |
| Лейкоцитарная фракция крови | Цельная кровь | 5% |
| Биоптаты | Хлоргексидина биглюконат | 0,25% по хлоргексидину |
| Соскобы и мазки урогенитального тракта | Цельная кровь | 5% |
| | Муцин | 5% |
| Мазки со слизистой носоглотки и ротоглотки | Цельная кровь | 2 % |
| | Муцин | 1% |
| Слюна | Муцин | 5 % |
| Мокрота, БАЛ | Цельная кровь | 0,5 % |
| | Муцин | 1% |
| | Цефтриаксон | 0,25% |
| Ликвор | Цельная кровь | 5% |
| Моча | Цельная кровь | 0,25% |
| | Глюкоза | 0,5% |
| | Белок | 3 г/л |
| Суспензия фекалий | Муцин | 1% |
| | Билирубин | 250 мкмоль/л |
| Сперма | Хлоргексидина биглюконат | 0,25% |
| Дуоденальное содержимое (желчь) | Цельная кровь | 2% |
| Бактериальная культура | Бактериальная агаризированная среда | 0,5% |
| Суспензии членистоногих | Цельная кровь | 5% |
| Смывы с поверхностей | Спирт этиловый | 0,5% |
материала путем внесения известных количеств интерферентов и инфекционного агента. Показано
отсутствие влияния потенциально интерферирующих веществ на результаты анализа при
соблюдении следующих условий (таблица 1):
Таблица 1
4. МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ
4.1. Потенциальный риск применения набора – класс 2б (Приказ МЗ РФ от 06.06.2012 № 4н).
4.2. При работе с набором следует соблюдать требования законодательства в сфере
санитарно-эпидемиологического благополучия. Набор предназначен для профессионального
применения в клинической лабораторной диагностике. К работе с набором допускается только
специально обученный персонал с высшим или средним медицинским, или биологическим
образованием, прошедший подготовку на лицензированных курсах первичной специализации по
работе с патогенными для человека микроорганизмами и получивший дополнительное
специальное образование на курсах повышения квалификации по молекулярно-биологическим
методам диагностики (например, врач клинической лабораторной диагностики, медицинский
4
лабораторный техник (фельдшер-лаборант), иной специалист).
4.3. ОКО, сорбент и элюирующий раствор содержат натрия азид, лизирующий раствор
содержит гуанидина тиоцианат в концентрации, указанной в п. 2.2 «Состав набора». При работе
с указанными растворами следует надевать одноразовые медицинские перчатки, избегать
попадания их компонентов на кожу и слизистые; при попадании немедленно промыть пораженное
место большим количеством проточной воды.
4.4. Для предотвращения контаминации необходимо территориально разделять этапы
выделения ДНК/РНК и постановки ПЦР/ОТ-ПЦР согласно МУ 1.3. 2569–09 «Организация
работы лабораторий, использующих методы амплификации нуклеиновых кислот при работе с
материалом, содержащим микроорганизмы I–IV групп патогенности».
4.5. При работе с набором необходимо надевать одноразовые медицинские перчатки,
использовать только одноразовые наконечники с фильтром для дозаторов.
4.6. Каждое рабочее место должно быть снабжено собственным набором дозаторов
переменного объема, необходимыми вспомогательными материалами и оборудованием.
Запрещается их перемещение между рабочими местами.
4.7. Не допускается использование одних и тех же наконечников при добавлении разных
образцов и реагентов.
4.8. После окончания работ для дезинфекции и предотвращения контаминации все рабочие
поверхности и оборудование следует подвергнуть действию бактерицидных УФ ламп в течение 1
часа. Затем обработать регламентированными санитарными правилами дезинфицирующими
средствами (такими, как: 0,8% раствор «Дезомакс-Иннова»; 1% раствор «Диабак»; 0,5%
раствор «Лизафин»; 1% раствор «Мистраль»; 1% раствор «Велтолен»).
4.9. Все использованные одноразовые материалы подвергать обработке дезинфицирующими
средствами с последующей утилизацией (см. МУ 287-113 «Методические указания по
дезинфекции, предстерилизационной очистке и стерилизации изделий медицинского назначения»).
4.10. На территории Российской Федерации при использовании медицинского изделия
образуются отходы, которые уничтожаются (утилизируются) в соответствии с СанПиН 2.1.3684-
21 «Санитарно-эпидемиологические требования к содержанию территорий городских и сельских
поселений, к водным объектам, питьевой воде и питьевому водоснабжению, атмосферному
воздуху, почвам, жилым помещениям, эксплуатации производственных, общественных
помещений, организации и проведению санитарно-противоэпидемических (профилактических)
мероприятий». Использованные по назначению наборы реагентов, изделия, пришедшие в
негодность, в том числе в связи с истечением срока годности, утилизируются как отходы,
относящиеся к классу Б. Упаковка набора реагентов подлежит уничтожению как отходы,
относящиеся к классу А (эпидемиологически безопасные отходы, по составу приближенные к
ТКО).
5
5. ОБОРУДОВАНИЕ И МАТЕРИАЛЫ
− ПЦР-бокс (например, бокс абактериальной воздушной среды типа БАВп-01-«Ламинар-С», ЗАО
«Ламинарные системы», Россия, ФСР 2010/07111);
− холодильник бытовой, поддерживающий температуру (2–8) °С;
− встряхиватель для пробирок типа «Вортекс» (например, «Bio-Vortex V-1 plus», BioSan, Латвия,
ФСЗ 2011/09797);
− микроцентрифуга, типа «Eppendorf» обеспечивающая относительное центробежное ускорение
не менее 12000 × g (например, «MiniSpin», Eppendorf, Германия, ФСЗ 2012/13316);
− дозаторы одноканальные с переменным объемом, со сменными наконечниками (например,
Sartorius, Германия, РЗН 2019/9356);
− одноразовые наконечники для дозаторов с защитным фильтром/аэрозольным барьером
(например, Sartorius, Германия, РЗН 2020/9707);
− перчатки медицинские одноразовые нестерильные неопудренные латексные или неопреновые
(например, перчатки «NeoTouch», Ansell HealthCare, Германия);
− контейнер для сбора отходов (например, «Контейнер для сбора острого инструментария –
МК–01», ООО «КМ-Проект», Россия, РЗН 2017/5395).
Дополнительно для ручной процедуры:
− термошейкер – термостатируемый шейкер орбитального типа, позволяющий проводить
перемешивание при 1300 об/мин и температуре (60−90) °С (например, «Thermo Shaker TS-100» с
блоком для 24 пробирок объемом 2,0 мл, BioSan, Латвия, РЗН 2022/16327);
− отсасыватель медицинский В-40 (например, ВИСМА-ПЛАНАР, Республика Беларусь, ФСЗ
2012/12851);
− одноразовые наконечники для дозаторов без защитного фильтра (например, Sarstedt, Германия,
ФСЗ 2009/04699);
− одноразовые полипропиленовые пробирки объемом 2 мл (например, Sarstedt, Германия, ФСЗ
2009/04699);
− магнитный штатив на 24 пробирки объемом 2 мл (например, кат. № 9258, АО «Вектор-Бест»,
Россия);
− штативы для микропробирок объемом 2 мл (например, ООО «НПФ Хеликон», Россия, РЗН
2022/16372).
Дополнительно для автоматической процедуры с использованием
KingFisher Flex или RealFly:
− процессор магнитных частиц для очистки нуклеиновых кислот «KingFisher Flex» (Thermo Fisher
Scientific, Финляндия, ФСЗ 2009/05562) или «RealFly» (АО «Вектор-Бест-Балтика», Россия, РЗН
2022/17782);
− дозатор восьмиканальный электронный переменного объема, со сменными наконечниками,
6
обеспечивающий возможность дозирования объемов до 1000 мкл (например, Thermo Fisher
Scientific, Финляндия, 100–1200 мкл, РЗН 2016/3779);
− гребенка наконечников, совместимая с автоматизированными системами выделения
нуклеиновых кислот (например, АО «СОЛТ», Россия, РЗН 2022/18492);
− глубоколуночный планшет 96 лунок, объемом 2,2 мл, совместимый с автоматизированными
системами выделения нуклеиновых кислот (например, АО «СОЛТ», Россия, РЗН 2022/17519).
6. ПОДГОТОВКА АНАЛИЗИРУЕМЫХ ОБРАЗЦОВ И РЕАГЕНТОВ
Взятие, транспортирование и хранение исследуемого материала осуществляется согласно
МУ 1.3. 2569-09 «Организация работы лабораторий, использующих методы амплификации
нуклеиновых кислот при работе с материалом, содержащим микроорганизмы I-IV групп
патогенности».
6.1. Подготовка анализируемых образцов.
При проведении работ с клиническими образцами в лаборатории необходимо обеспечить
безопасность работы в соответствии с требованиями законодательства в сфере санитарно-
эпидемиологического благополучия.
Материалом для исследования являются биологические образцы: сыворотка (плазма) крови,
лейкоцитарная фракция крови, биоптаты, соскобы эпителиальных клеток, мазки со слизистых
оболочек, слюна, мокрота, бронхоальвеолярный лаваж (БАЛ), ликвор, моча, фекалии,
дуоденальное содержимое (желчь), сперма и др., а также материалы из объектов окружающей
среды: суспензии членистоногих, пробы воды, смывы с поверхностей и др.
6.1.1. Подготовка образцов сыворотки (плазмы) крови.
В течение 6 часов1 после взятия крови следует выполнить центрифугирование для получения
сыворотки или плазмы (для получения плазмы использовать К ЭДТА или К ЭДТА в качестве
2 3
антикоагулянта). Следуйте инструкции производителя пробирок для получения сыворотки или
плазмы крови.
При использовании вакуумированных пробирок для забора венозной крови без
разделительного геля полученную в результате центрифугирования сыворотку или плазму следует
отобрать в отдельную пробирку.
При использовании вакуумированных пробирок для забора венозной крови с
разделительным гелем в случае, если центрифугирование и анализ проводятся с интервалом, не
превышающим 5 суток2, допускается отбор сыворотки или плазмы для анализа непосредственно
из первичной пробирки. При этом хранить образец следует при температуре (2–8) °С. В случае,
если центрифугирование и анализ проводятся с интервалом более 5 суток2, полученную в
результате центрифугирования сыворотку или плазму следует отобрать в отдельную пробирку и
заморозить при температуре, не превышающей минус 18 °С3.
Образцы сыворотки или плазмы крови, находящиеся в заморозке во вторичных пробирках,
7
перед использованием необходимо разморозить и перемешать на вортексе 3 раза по 2–3 секунды,
после чего центрифугировать при температуре (18–26) °С при 2000 × g в течение 5 минут. Для
проведения анализа требуется 100 мкл сыворотки или плазмы крови.
1 Для некоторых исследований рекомендуемое время, в течение которого следует выполнить
центрифугирование для получения сыворотки или плазмы, может составлять менее 6 часов. Необходимо
соблюдать требования соответствующих стандартов для исследований такого рода.
2 Для некоторых исследований рекомендуемая максимальная продолжительность временного
хранения образца сыворотки или плазмы перед проведением анализа при температуре (2–8) °С может
составлять менее 5 суток. Необходимо соблюдать требования соответствующих стандартов для
исследований такого рода.
3 Для некоторых исследований рекомендуемая максимальная температура хранения образца
сыворотки или плазмы может быть ниже минус 18 °С. Необходимо соблюдать требования
соответствующих стандартов для исследований такого рода.
Внимание
!
Не допускается применение для анализа образцов гепаринизированной
плазмы.
6.1.2. Подготовка образцов лейкоцитарной фракции крови.
Клетки крови (лейкоцитарную фракцию цельной крови, лейкоцитарную пленку) следует
отбирать после центрифугирования цельной крови и удаления плазмы. Используя наконечник с
фильтром аккуратно собрать лейкоцитарную массу с поверхности осадка клеток в объеме 0,2 мл и
перенести в одноразовую пробирку объемом 1,5–2,0 мл.
6.1.3. Подготовка образцов биоптатов.
Материал забирают из зоны предполагаемого местонахождения возбудителя инфекции, из
поврежденной ткани или из пограничного с поврежденным местом участка.
После того, как образец поступил в лабораторию, из него вырезается фрагмент размером со
спичечную головку. В случае, если ткань представлена мелкодисперсными фрагментами на анализ
берут 100 мкл суспензии. Фрагмент или суспензия помещается в пробирку с керамическими
шариками (Шарики керамические калиброванные, АО «Вектор-Бест», Россия). Затем в пробирку
вносится раствор для приготовления образцов (РПО)*. Далее пробирка с образцом помещается в
гомогенизатор.
Для увеличения срока сохранности НК в суспензии рекомендуется перенести
подготовленные образцы в пробирку с Транспортным раствором (М) (АО «Вектор-Бест»,
Россия, РЗН 2020/12962).
*раствор для подготовки образцов. Входит в наборы «Шарики керамические
калиброванные».
6.1.4. Подготовка образцов соскобов эпителиальных клеток, мазков со слизистых
оболочек.
Образцы соскобов, мазков забирают соответствующими одноразовыми сухими зондами в
пробирки с транспортным раствором (Транспортный раствор (АО «Вектор-Бест», Россия, РЗН
2017/6004), Транспортный раствор (М), (АО «Вектор-Бест», Россия)).
Коротким центрифугированием сбросить капли со стенок пробирок, содержащих соскобы,
8
мазки.
6.1.5. Подготовка образцов слюны.
В одноразовую пробирку объемом 1,5 или 2,0 мл отбирают не менее 1 мл слюны.
6.1.6. Подготовка образцов мокроты, БАЛ.
Образцы собирают в одноразовые контейнеры с широким горлом и завинчивающимися
крышками. Перед выделением нуклеиновых кислот необходимо провести предобработку.
Для мокроты: к образцу мокроты добавить равный объем 95%-го этилового спирта или
Транспортного раствора (М) (АО «Вектор-Бест», Россия). Тщательно перемешать, выдержать при
температуре (18–26) °С в течение 10 мин. Повторно тщательно перемешать. Для выделения НК
отобрать 100 мкл полученной взвеси, не захватывая комки слизи.
Для БАЛ: содержимое флакона перемешать переворачиванием, 1,5–2,0 мл образца
перенести в пробирку, центрифугировать при 13 000 об/мин в течение 5 мин. Надосадочную
жидкость удалить, не задевая осадок, оставить 200 мкл образца. Осадок ресуспендировать. Для
выделения НК отобрать 100 мкл образца, не захватывая комки слизи.
При большом объеме слизи образец БАЛ предварительно разбавить 95%-ным этиловым
спиртом или Транспортным раствором (М) (АО «Вектор-Бест», Россия), как для мокроты.
6.1.7. Подготовка образцов ликвора.
Ликвор забирается в пластиковые одноразовые пробирки объемом 1,5 или 2 мл.
6.1.8. Подготовка образцов мочи*.
* материал пригоден только для выделения ДНК.
Первую порцию утренней мочи собрать в чистый флакон с плотной крышкой. 1,5–2,0 мл
мочи отобрать в пробирку, центрифугировать при 3000 об/мин в течение 3 минут. Удалить
надосадочную жидкость, не задевая осадок, оставив ~100 мкл. Полученный образец использовать
для выделения нуклеиновых кислот. При получении большого количества осадка промыть его,
добавив 500 мкл Транспортного раствора (АО «Вектор-Бест», Россия). Перемешать на вортексе.
Повторить процедуру центрифугирования и удаления надосадочной жидкости.
6.1.9. Подготовка образцов суспензий фекалий.
Суспензия может быть приготовлена в соответствии с МУ 1.3.2569-09 либо с
использованием Транспортного раствора (М) (АО «Вектор-Бест», Россия). Для этого рабочую
поверхность урогенитального зонда полностью погружают в образец (при захвате избытка
образца, оставить избыток на стенке контейнера), после чего переносят зонд в пробирку с
Транспортным раствором (М) и тщательно ресуспендируют образец в растворе. Зонд извлекают
из пробирки и помещают в контейнер с дезинфицирующим раствором. Приготовленные суспензии
выдерживают при комнатной температуре не менее 5 минут до оседания крупной взвеси и частиц.
При необходимости пробирки центрифугируют при 3000 об/мин в течение 1 минуты. Для
выделения нуклеиновых кислот используют 100 мкл получившейся надосадочной жидкости.
9
Для приготовления суспензии из фекалий с полупрозрачной и водянистой консистенцией
отобрать 100 мкл образца одноразовым наконечником и внести в пробирку с Транспортным
раствором (М).
Внимание
!
Использование избытка образца фекалий при приготовлении суспензии, может
привести к ингибированию реакции обратной транскрипции и ПЦР.
6.1.10. Подготовка образцов спермы.
При работе с образцами спермы разбавить образец в два раза Транспортным раствором или
Транспортным раствором (М) (АО «Вектор-Бест», Россия), тщательно перемешать на вортексе в
течение 10 секунд.
6.1.11. Подготовка образцов дуоденального содержимого (желчи).
Непосредственно перед проведением гомогенизации образцы тщательно перемешивают на
вортексе и, не дожидаясь образования осадка, отбирают аликвоту в пробирки с керамическими
шариками. Пробирки помещают в гомогенизатор и проводят процедуру измельчения.
6.1.12. Приготовление суспензии членистоногих.
Метод 1 (при наличии автоматического гомогенизатора): Исследуемых членистоногих
поместить в пронумерованные пробирки с керамическими шариками (Шарики керамические
калиброванные, АО «Вектор-Бест»). Добавить в пробирки с членистоногими охлажденный
раствор для подготовки образцов (РПО)*. Пробирки поместить в гомогенизатор и провести
процедуру измельчения членистоногих.
Метод 2 (при отсутствии автоматического гомогенизатора): Исследуемых членистоногих
поместить в пронумерованные пластиковые пробирки объемом 1,5 мл. В пробирки с
членистоногими внести по 30 мкл раствора РПО* (в случае анализа напитавшихся членистоногих,
или членистоногих больших размеров внести по 50 мкл РПО). Поместить пробирки в охлажденный
до минус (20−30) °С штатив-холодильник или в жидкий азот и заморозить. Взять одну
замороженную пробирку с членистоногим и не дожидаясь оттаивания раствора, тщательно
измельчить членистоногое с помощью отдельного стерильного пестика. Не вынимая пестик,
поставить пробирку с измельченным членистоногим в штатив, помещенный в лед. Добавить в
пробирку 250 мкл охлажденного РПО. Аккуратно ополоснуть пестик в содержимом пробирки,
вынуть его и поместить в дезинфицирующий раствор.
Если размер клеща (напившегося кровью) в диаметре 6-10 мм, для экстракции НК
рекомендуется использовать 50 мкл суспензии клеща. Если диаметр клеща более 10 мм, для
экстракции НК рекомендуется использовать 30 мкл суспензии клеща.
*раствор для подготовки образцов. Входит в наборы «Шарики керамические
калиброванные».
Для увеличения срока сохранности НК в суспензии членистоногих рекомендуется перенести
подготовленные образцы в пробирку с Транспортным раствором (М).
10
6.1.13. Подготовка бактериальных культур.
Образцы бактериальных культур получают путем посева клинического материала на
универсальные или селективные питательные среды. Смешанные или чистые культуры на твердых
питательных средах забирают в пробирки с «Транспортным раствором» (АО «Вектор-Бест»,
Россия) тщательно перемешивают, 100 мкл полученной суспензии используют для выделения
ДНК. Смешанные или чистые культуры на жидких питательных средах, не требуют
предварительной подготовки, 100 мкл культуры используют для выделения ДНК.
6.1.14. Подготовка проб воды.
Взятие, транспортировка и хранение образцов воды осуществляется согласно МУК 4.2.2029–
05 «Санитарно-вирусологический контроль водных объектов». Для выделения нуклеиновых
кислот используют 100 мкл концентрата.
6.1.15. Подготовка смывов.
Смывы с поверхностей берут стерильными ватными тампонами или урогенитальными
зондами. Перед взятием смывов тампоны или зонды смачивают Транспортным раствором или
Транспортным раствором (М) (АО «Вектор-Бест», Россия). После взятия смыва тампон (зонд)
погружают в пробирку с Транспортным раствором или Транспортным раствором (М) (АО
«Вектор-Бест», Россия).
Таблица 2
Температура транспортирования и хранения образцов
Наименование биоматериала
(18–26) °С (2–8) °С минус (18–40) °С
Сыворотка (плазма) до 2 часов до 5 суток до 12 месяцев
Лейкоцитарная фракция крови до 2 часов до 2 суток до 1 месяца
до 2 недель/ до 3 месяцев в
Биоптаты до 2 часов до 1 суток
транспортном растворе (М)
Соскобы и мазки из
до 2 суток до 2 недель до 2 месяцев
урогенитального тракта
Соскобы и мазки из
респираторного тракта в до 2 суток до 5 суток до 2 месяцев
Транспортном растворе (М)
Слюна до 6 часов до 1 суток до 2 недель
Мокрота до 6 часов до 3 суток до 2 недель
БАЛ до 2 часов до 1 суток до 2 недель
Ликвор до 2 часов до 1 суток до 2 недель
Моча до 2 часов до 1 суток -
Суспензия фекалий в
до 6 часов до 5 суток до 1 месяца
Транспортном растворе (М)
Желчь до 6 часов до 3 суток до 1 недели
Сперма до 6 часов до 2 суток до 1 недели
11
Гомогенизированные
не рекомендуется до 1 суток до 2 недель
членистоногие
Бактериальные культуры до 6 часов до 3 суток до 2 недель
Образцы смывов с поверхностей до 6 часов до 3 суток до 2 недель
При температуре ниже минус 40°С – возможно длительное хранение.
Повторное замораживание-оттаивание образцов не допускается!
6.2. Подготовка компонентов набора.
6.2.1. Перед началом работы извлечь из холодильника набор реагентов, вскрыть упаковку
и выдержать флакон с лизирующим раствором (ЛР) с ВКО при температуре (50−60) °С для
растворения осадка в течение 30 минут, все остальные компоненты при температуре (18−26) °С в
течение 30 минут.
6.2.2. Каждая группа образцов, проходящая через процедуру выделения НК, должна
содержать ПКО и ОКО.
Извлечь из набора для ПЦР серии «РеалБест» флакон (пробирку) с ПКО, соответствующими
данному ПЦР набору, и подготовить их к работе согласно инструкции к набору для ПЦР.
7. ВЫДЕЛЕНИЕ НК РУЧНЫМ СПОСОБОМ
7.1. Отобрать и подписать необходимое для работы количество пробирок объемом 2 мл –
по количеству исследуемых образцов, включая необходимые контроли. Количество контрольных
образцов указано в инструкции к набору для выявления НК.
7.2. При выделении НК из 48 образцов (комплектация (РеалБест Сигма (96)):
Для проведения процедуры выделения из 48 образцов, включая контроли, понадобится по
одному флакону каждого компонента из набора.
7.2.1. Тщательно перемешать на вортексе содержимое флакона с сорбентом и внести 300 мкл
сорбента во флакон с лизирующим раствором.
Внимание
!
Лизирующий раствор после добавления сорбента хранить при температуре
(2–8) °С до 5 дней. После того, как лизирующий раствор с сорбентом извлекли из холодильника
флакон необходимо прогреть (п. 6.2.1.)
7.2.2. Аккуратно перемешать флакон с лизирующим раствором и сорбентом
переворачиванием 8–10 раз, избегая образования пены, и внести в подготовленные (п. 7.1)
пробирки по 500 мкл лизирующего раствора с сорбентом.
Внимание
!
В процессе розлива следить, чтобы суспензия оставалась однородной.
Необходимо придерживаться следующего правила: с момента последнего перемешивания
должно проходить не более 1 минуты; если за это время процесс розлива не был завершен,
следует закрыть флакон крышкой и аккуратно перемешать смесь переворачиванием, после чего
продолжить розлив.
12
7.3. При выделении НК менее чем из 48 образцов:
7.3.1. Внести в подготовленные пробирки (п. 7.1) по 500 мкл лизирующего раствора.
7.3.2. Тщательно перемешать на вортексе содержимое флакона с сорбентом и добавить по 10
мкл в каждую пробирку с предварительно внесенным лизирующим раствором.
Внимание
!
В процессе розлива сорбента следить, чтобы суспензия оставалась
однородной. Необходимо придерживаться следующего правила: с момента последнего
перемешивания сорбента должно проходить не более 1 минуты; если за это время процесс
розлива не был завершен, следует закрыть флакон и тщательно перемешать суспензию на
вортексе, после чего продолжить розлив.
7.4. В пробирку для ОКО внести 100 мкл ОКО, используя наконечник с аэрозольным
барьером.
7.5. В пробирку для ПКО внести 30 мкл ПКО и 70 мкл ОКО, используя наконечники с
аэрозольным барьером.
7.6. В остальные пробирки внести по 100 мкл исследуемых образцов, используя
наконечники с аэрозольным барьером.
7.7. Пробирки перенести в термошейкер и инкубировать при 65 °С с частотой вращения
1300 об/мин в течение 5 минут.
7.8. Центрифугировать пробирки при 13000 об/мин в течение 1 минуты.
7.9. Перенести пробирки в магнитный штатив.
7.10. Из каждой пробирки с помощью медицинского отсасывателя максимально полно
удалить надосадочную жидкость, используя отдельный наконечник (без фильтра) и не прикасаясь
к осадку магнитных частиц.
7.11. В каждую пробирку внести по 500 мкл раствора для отмывки, перемешать на
вортексе 5-10 секунд.
7.12. Центрифугировать пробирки при 13000 об/мин в течение 1 минуты. Перенести
пробирки в магнитный штатив.
7.13. Из каждой пробирки с помощью медицинского отсасывателя максимально полно
удалить надосадочную жидкость, используя отдельный наконечник (без фильтра) и не прикасаясь
к осадку магнитных частиц*.
* при выделении НК из образцов, содержащих большое количество примесей, пп.7.11.-7.13.
рекомендуется повторить.
7.14. В каждую пробирку к осадку добавить элюирующий раствор.
Если из выделенной биопробы будет производиться от 1 до 3 определений, следует добавить
200 мкл элюирующего раствора. Если определений будет производиться больше, добавить 600
мкл элюирующего раствора.
7.15. Тщательно перемешать на вортексе, ресуспендируя магнитный осадок, переместить
13
| Раствор | Объем раствора на лунку, мкл | Маркировка планшета |
| Раствор для отмывки | 500 | РО |
| Элюирующий раствор | 200 | ЭР |
пробирки в термошейкер и инкубировать с частотой вращения 1300 об/мин при 90 °С в течение 3
минут. Центрифугировать на микроцентрифуге при 13000 об/мин в течение 1 минуты. Пробы
готовы к постановке ПЦР или ОТ-ПЦР-анализа.
Внимание
!
Выделенную НК можно хранить при температуре (2−8) °С не более суток.
8. ВЫДЕЛЕНИЕ НК С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ KINGFISHER FLEX ИЛИ REALFLY
8.1. Промаркировать 4* глубоколуночных планшета: ЛР, РО, ЭР, ГР – по 1 планшету. Один
комплект планшетов позволяет провести выделение НК из 96 образцов, включая контроли.
*при выделении НК из образцов, содержащих большое количество примесей, рекомендуется
использовать два глубоколуночных планшета с РО, общее количество глубоколуночных
планшетов в таком случае будет 5.
При внесении реагентов и образцов ориентировать планшеты следует таким образом, чтобы
лунка А1 находилась слева сверху!
Для внесения реагентов в лунки планшета рекомендуется использовать восьмиканальный
дозатор и ванночки для реагентов.
8.2. Составить схему размещения контрольных и исследуемых образцов в
глубоколуночном планшете на трафарете. Количество контрольных образцов указано в
инструкциях к наборам для ПЦР (ОТ-ПЦР) серии «РеалБест».
Схема размещения контрольных и исследуемых образцов
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12
A ПКО №7 №15
B ОКО №8 №16
C №1 №9 №17
D №2 №10 №18
E №3 №11 №19
F №4 №12 №20
G №5 №13 №21
H №6 №14 №22
8.3. В глубоколуночный планшет ГР поместить насадку на магнитную головку.
8.4. Внести в соответствующие лунки планшетов растворы в соответствии с таблицей 3.
Для внесения растворов использовать многоканальный электронный дозатор и ванночки для
реагентов.
Таблица 3
8.5. Розлив лизирующего раствора с сорбентом в глубоколуночный планшет ЛР
рекомендуется проводить следующим образом:
8.5.1. Тщательно перемешать на вортексе содержимое флакона с сорбентом и перенести:
14
| Количество образцов, шт. | Объем лизирующего раствора, мл | Объем сорбента, мкл |
| 8 | 4,5 | 100 |
| 16 | 9 | 150 |
| 24 | 14 | 200 |
| 32 | 18 | 250 |
- 300 мкл сорбента во флакон с лизирующим раствором (комплектация «РеалБест Сигма (96)»);
- 2,4 мл сорбента во флакон с лизирующим раствором (комплектация «РеалБест Сигма (384)»).
Если количество образцов меньше 48, смешать лизирующий раствор и сорбент на
необходимое количество образцов согласно таблице 4.
Таблица 4
8.5.2. Аккуратно перемешать флакон с лизирующим раствором и сорбентом
переворачиванием 8–10 раз, избегая образования пены, и внести в соответствующие лунки
планшета по 500 мкл лизирующего раствора с сорбентом.
8.5.3. При заполнении планшета одноканальным дозатором повторять перемешивание
флакона через каждые 8 лунок, чтобы избежать оседания сорбента.
8.5.4. При заполнении планшета 8-ми канальным дозатором вылить содержимое флакона в
ванночку для реагентов. Немедленно заполнить раствором необходимое количество лунок
планшета.
Внимание
!
Время от момента переноса суспензии магнитных частиц в лизирующем
растворе в ванночку до окончания заполнения всех 48 лунок не должно превышать 1 минуту.
8.6. В одну лунку глубоколуночного планшета ЛР внести 70 мкл ОКО и 30 мкл ПКО из
соответствующих наборов для ПЦР серии «РеалБест», согласно схеме размещения образцов,
используя наконечники с аэрозольным барьером.
8.7. В одну лунку глубоколуночного планшета ЛР внести 100 мкл ОКО, согласно схеме
размещения образцов, используя наконечник с аэрозольным барьером.
8.8. В остальные лунки глубоколуночного планшета ЛР внести по 100 мкл исследуемых
образцов, согласно схеме размещения образцов, используя наконечники с аэрозольным барьером.
8.9. Включить станцию автоматического выделения KingFisher Flex или RealFly и
персональный компьютер, управляющий станцией.
8.10. Запустить на персональном компьютере программное обеспечение и выбрать протокол
выделения нуклеиновых кислот «РеалБест Сигма 1 отмывка» или «РеалБест Сигма 2
отмывки».
8.11. По запросу программного обеспечения станции автоматического выделения
установить глубоколуночные планшеты в прибор: ГР, ЛР, РО, РО*, ЭР. После установки планшета
ЭР запустится процесс выделения НК.
*при выборе протокола «РеалБест Сигма 1 отмывка» второй планшет РО не потребуется.
15
8.12. По окончании протокола выделения НК прибор подаст звуковой сигнал.
8.13. Вынуть из прибора глубоколуночный планшет ЭР.
8.14. Если для данной пробы будет проводиться больше трех определений – добавить 400
мкл элюирующего раствора.
8.15. Пробы, находящиеся в глубоколуночном планшете ЭР, раскапать в реакционные смеси
для ПЦР-анализа.
Внимание! Выделенную НК можно хранить при температуре (2−8) °С не более суток.
8.16. Между окончанием раскапывания элюата и постановкой реакционных смесей в
амплификатор должно пройти не более 15 минут.
9. УСЛОВИЯ ТРАНСПОРТИРОВАНИЯ, ХРАНЕНИЯ И ПРИМЕНЕНИЯ НАБОРА
9.1. Транспортировать изделия следует транспортом всех видов в крытых транспортных
средствах в соответствии с правилами перевозок, действующими на транспорте данного вида, при
температуре (2–8) °С. Допускается транспортирование при температуре до 26 °С не более 10 суток.
9.2. Хранение набора реагентов в упаковке предприятия-изготовителя должно
осуществляться при температуре (2–8) °С в течение всего срока годности в холодильных камерах
или холодильниках, обеспечивающих регламентированный температурный режим с ежедневной
регистрацией температуры.
9.3. При дробном использовании вскрытые компоненты набора следует хранить не более 1
месяца при температуре (2–8) °С. Допускается хранение лизирующего раствора при температуре
(18–26) °С в течение 7 суток.
9.4. Срок годности набора – 18 месяцев со дня выпуска. Не допускается применение
наборов по истечении срока их годности.
9.5 Для получения надежных результатов необходимо строгое соблюдение данной
инструкции по применению набора.
9.6. Изделие не требует технического обслуживания и не подлежит ремонту.
10. ГАРАНТИЙНЫЕ ОБЯЗАТЕЛЬСТВА
10.1. Производитель гарантирует соответствие выпускаемых изделий требованиям
нормативной и технической документации.
Безопасность и качество изделия гарантируются в течение всего срока годности.
10.2. Производитель отвечает за недостатки изделия, за исключением дефектов, возникших
вследствие нарушения правил пользования, условий транспортирования и хранения, либо
действия третьих лиц, либо непреодолимой силы.
10.3. Производитель обязуется за свой счет заменить изделие, технические и
функциональные характеристики (потребительские свойства) которого не соответствуют
нормативной и технической документации, если указанные недостатки явились следствием
скрытого дефекта материалов или некачественного изготовления изделия производителем.
16
Инструкция по применению и паспорт размещены на сайте: yvyvyv.vector-best.ru.
По вопросам, касающимся качества набора «РеалБест Сигма», следует обращаться в АО
«Вектор-Бест» по адресу:
630559, Новосибирская область, рп Кольцово, 3. Научно-производственная, к. 36, ком. 211
тел. (383) 252-51-62, 227-60-30;
тел./факс (383), 252-51-81, 252-51-77.
E-mail: plkobtk@vector-best.ru
Консультацию специалиста по работе с набором можно получить по тел.: (383) 252-51-75.
ГРАФИЧЕСКИЕ СИМВОЛЫ
Символ Описание Символ Описание
| IVD | Медицинское изделие для
REF Номер по каталогу
диагностики in vitro
Т
V Содержимого достаточно
Температурный диапазон
для проведения < и > тестов
1 1
LOT Код партии Дата изготовления
Обратитесь к инструкции по
ЕЛ
Изготовитель применению или инструкции по
применению в электронном виде
2
А
Использовать до Осторожно
Дата в формате:
YYYY-MM-DD Г од-Месяц-День
YYYY-MM Г од-Месяц
Начальник отделения
производства ПЦР-наборов
АО «Вектор-Бест»
Директор по производству
АО «Вектор-Бест» В.К. Ткачев
«СОГЛАСОВАНО»
Проректор по научной работе
ФГБОУ ВО НГМУ Минздрава России
д.м.н., профессор
м.п.
17
«УТВЕРЖДАЮ»
Генеральный директор
ИНСТРУКЦИЯ
по применению набора реагентов для выделения нуклеиновых кислот
из биологического материала и клинических образцов
«РеалБест Сигма»
в комплектации «РеалБест Сигма (П)»
1. НАЗНАЧЕНИЕ
1.1. Набор реагентов для выделения нуклеиновых кислот из биологического материала и
клинических образцов «РеалБест Сигма» предназначен для выделения нуклеиновых кислот
(ДНК и РНК) для последующего анализа методом ПЦР/ОТ-ПЦР. Набор применим со
следующими видами образцов: сыворотка (плазма) крови, лейкоцитарная фракция крови,
биоптаты, соскобы эпителиальных клеток, мазки со слизистых оболочек, слюна, мокрота,
бронхоальвеолярный лаваж (БАЛ), ликвор, моча, фекалии, сперма, дуоденальное содержимое
(желчь), бактериальные культуры и др.*, а также материалами объектов окружающей среды:
суспензии членистоногих, пробы воды, смывы с поверхностей и др.
* кроме образцов цельной крови.
1.2. Набор реагентов комплектации «РеалБест Сигма (П)» предназначен для выделения
нуклеиновых кислот (НК) с использованием процессора магнитных частиц для очистки
нуклеиновых кислот «KingFisher Flex» («Thermo Fisher Scientific», Финляндия) или «RealFly»
(АО «Вектор-Бест-Балтика», Россия).
1.3. Набор реагентов предназначен для использования в качестве вспомогательного
средства для диагностики in vitro (выделение нуклеиновых кислот для дальнейшего исследования
методом ПЦР или ОТ-ПЦР).
1.4. Область применения - клиническая лабораторная диагностика.
Инструкция составлена сотрудниками АО «Вектор-Бест»: Директором
по производству Ткачевым В.К. и нач. отделения производства ПЦР наборов Трухиной А.В.
| Компонент набора (сокращение) Описание. | Количество |
| Лизирующий раствор с ВКО (ЛР) Жидкость от бесцветного до желтого цвета, допускается наличие осадка, исчезающего при нагревании, содержит гуанидинизотиоцинат (56,7%). | 1 планшет, 0,5 мл × 96 |
| Раствор для отмывки (РО) Бесцветная жидкость. | 1 планшет, 0,5 мл × 96 |
| Элюирующий раствор (ЭР) Бесцветная жидкость, содержит натрия азид (0,05%). | 1 планшет, 0,2 мл × 96 |
| Элюирующий раствор (ЭР) Бесцветная жидкость, содержит натрия азид (0,05%). | 2 флакона по 30 мл |
| Сорбент Cуспензия магнитных частиц, содержит натрия азид (0,05%). | 1 планшет, 0,1 мл × 96 |
| Отрицательный контрольный образец (ОКО) Бесцветная жидкость, содержит натрия азид (0,05%). | 2 флакона по 1 мл |
| Гребенка наконечников (ГР) | 1 шт. |
2. ХАРАКТЕРИСТИКА НАБОРА
2.1. Принцип метода.
Принцип действия набора «РеалБест Сигма» состоит в температурной обработке образца
многокомпонентным лизирующим раствором, который разрушает комплексы нуклеиновых
кислот с белками и обеспечивает условия, при которых нуклеиновые кислоты сорбируются на
поверхности магнитных частиц. После этого магнитные частицы проводятся через отмывку, в
ходе которой нуклеиновые кислоты остаются сорбированными на поверхности магнитных
частиц, и элюцию, в ходе которой нуклеиновые кислоты переходят с поверхности частиц в
элюирующий раствор. После этого проба готова к постановке ПЦР/ОТ-ПЦР.
Эффективность пробоподготовки в каждом исследуемом образце оценивается с помощью
внутреннего контрольного образца (ВКО), входящего в состав лизирующего раствора и
проходящего все стадии пробоподготовки и следующих за ней ПЦР или ОТ-ПЦР вместе с
выделяемыми нуклеиновыми кислотами.
Положительный контрольный образец (ПКО) входит в состав ПЦР-наборов серии
«РеалБест». ПКО проходит процедуру выделения наравне с биологическими пробами и
отрицательным контрольным образцом (ОКО).
2.2. Состав набора:
В комплект поставки входят:
– набор реагентов;
– инструкция по применению и паспорт (количество копий определяется в договоре на
поставку продукции).
Инструкция по применению и паспорт размещены на сайте: www.vector-best.ru.
2
2.3. Условия применения.
Набор применяется с наборами для качественного и количественного определения
нуклеиновых кислот серии «РеалБест».
Набор реагентов рассчитан на выделение нуклеиновых кислот из 96 образцов объемом 100
мкл, включая контрольные образцы.
Процедура выделения НК осуществляется с использованием процессора магнитных частиц
«KingFisher Flex» («Thermo Fisher Scientific», Финляндия) или «RealFly» (АО «Вектор-Бест-
Балтика», Россия). Допускается адаптация других станций для автоматического выделения
нуклеиновых кислот, зарегистрированных в РФ и удовлетворяющих следующим требованиям:
- возможность процессирования магнитных частиц (с использованием магнитных стержней
или магнитного штатива);
- наличие термостата или термошейкера с возможностью нагрева не менее чем до 110°С;
- наличие системы перемешивания жидкостей шейкированием или пипетированием.
По вопросам применения/ адаптации других станций для автоматического выделения
нуклеиновых кислот следует обращаться к производителю набора реагентов.
Показания к применению. Набор реагентов предназначен для использования в качестве
вспомогательного средства для диагностики in vitro (выделение НК для дальнейшего
исследования методом ПЦР).
Противопоказания. Противопоказаний к применению нет (не применимо).
3. ТЕХНИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
3.1. Эффективность выделения РНК составляет 100%. Эффективность выделения РНК
контролируется по шести образцам с содержанием 500 копий/мл РНК ВГG, приготовленным из
стандартного образца предприятия СОП РНК ВГG (СОП 05-2-519), как процентное содержание
образцов, определенных набором «РеалБест РНК ВГG» (AO «Вектор-Бест», РЗН 2015/3257) как
положительные.
3.2. Эффективность выделения ДНК составляет 100%. Эффективность выделения ДНК
контролируется по шести образцам с содержанием 1000 копий/мл ДНК Parvovirus B19,
приготовленным из стандартного образца предприятия СОП ДНК Parvovirus B19 (СОП 05-2-
462), как процентное содержание образцов, определенных набором «РеалБест ДНК Parvovirus
B19» (AO «Вектор-Бест», РЗН 2014/1397) как положительные.
3.3. Эффективность выделения РНК/ДНК регистрируемым набором на 862 образцах
биоматериала в ходе проведенных испытаний составила 100 % (интервал 99,6%-100%, с
доверительной вероятностью 95%).
3.4. Интерферирующие вещества исследовали на модельных образцах клинического
материала путем внесения известных количеств интерферентов и инфекционного агента.
Показано отсутствие влияния потенциально интерферирующих веществ на результаты анализа
3
| Биоматериал | ПИВ | Концентрация, до которой не обнаружено влияние |
| Сыворотка (плазма) крови | Триглицериды | 5% |
| | Цельная кровь | 5% |
| | Билирубин | 250 мкмоль/л |
| Лейкоцитарная фракция крови | Цельная кровь | 5% |
| Биоптаты | Хлоргексидина биглюконат | 0,25% по хлоргексидину |
| Соскобы и мазки урогенитального тракта | Цельная кровь | 5% |
| | Муцин | 5% |
| Мазки со слизистой носоглотки и ротоглотки | Цельная кровь | 2 % |
| | Муцин | 1% |
| Слюна | Муцин | 5 % |
| Мокрота, БАЛ | Цельная кровь | 0,5 % |
| | Муцин | 1% |
| | Цефтриаксон | 0,25% |
| Ликвор | Цельная кровь | 5% |
| Моча | Цельная кровь | 0,25% |
| | Глюкоза | 0,5% |
| | Белок | 3 г/л |
| Суспензия фекалий | Муцин | 1% |
| | Билирубин | 250 мкмоль/л |
| Сперма | Хлоргексидина биглюконат | 0,25% |
| Дуоденальное содержимое (желчь) | Цельная кровь | 2% |
| Бактериальная культура | Бактериальная агаризированная среда | 0,5% |
| Суспензии членистоногих | Цельная кровь | 5% |
| Смывы с поверхностей | Спирт этиловый | 0,5% |
при соблюдении следующих условий (таблица 1):
Таблица 1
4. МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ
4.1. Потенциальный риск применения набора – класс 2б (Приказ МЗ РФ от 06.06.2012 № 4н).
4.2. При работе с набором следует соблюдать требования законодательства в сфере
санитарно-эпидемиологического благополучия. Набор предназначен для профессионального
применения в клинической лабораторной диагностике. К работе с набором допускается только
специально обученный персонал с высшим или средним медицинским, или биологическим
образованием, прошедший подготовку на лицензированных курсах первичной специализации по
работе с патогенными для человека микроорганизмами и получивший дополнительное
специальное образование на курсах повышения квалификации по молекулярно-биологическим
методам диагностики (например, врач клинической лабораторной диагностики, медицинский
лабораторный техник (фельдшер-лаборант), иной специалист).
4.3. ОКО, сорбент и элюирующий раствор содержат натрия азид, лизирующий раствор
4
содержит гуанидина тиоцианат в концентрации, указанной в п. 2.2 «Состав набора». При
работе с указанными растворами следует надевать одноразовые медицинские перчатки, избегать
попадания их компонентов на кожу и слизистые; при попадании немедленно промыть
пораженное место большим количеством проточной воды.
4.4. Для предотвращения контаминации необходимо территориально разделять этапы
выделения ДНК/РНК и постановки ПЦР/ ОТ-ПЦР согласно МУ 1.3. 2569–09 «Организация
работы лабораторий, использующих методы амплификации нуклеиновых кислот при работе с
материалом, содержащим микроорганизмы I–IV групп патогенности».
4.5. При работе с набором необходимо надевать одноразовые медицинские перчатки,
использовать только одноразовые наконечники с фильтром для дозаторов.
4.6. Каждое рабочее место должно быть снабжено собственным набором дозаторов
переменного объема, необходимыми вспомогательными материалами и оборудованием.
Запрещается их перемещение между рабочими местами.
4.7. Не допускается использование одних и тех же наконечников при добавлении разных
образцов и реагентов.
4.8. После окончания работ для дезинфекции и предотвращения контаминации все рабочие
поверхности и оборудование следует подвергнуть действию бактерицидных УФ ламп в течение
1 часа. Затем обработать регламентированными санитарными правилами дезинфицирующими
средствами (такими, как: 0,8% раствор «Дезомакс-Иннова»; 1% раствор «Диабак»; 0,5%
раствор «Лизафин»; 1% раствор «Мистраль»; 1% раствор «Велтолен»).
4.9. Все использованные одноразовые материалы подвергать обработке
дезинфицирующими средствами с последующей утилизацией (см. МУ 287-113 «Методические
указания по дезинфекции, предстерилизационной очистке и стерилизации изделий медицинского
назначения»).
4.10. На территории Российской Федерации при использовании медицинского изделия
образуются отходы, которые уничтожаются (утилизируются) в соответствии с СанПиН 2.1.3684-
21 «Санитарно-эпидемиологические требования к содержанию территорий городских и сельских
поселений, к водным объектам, питьевой воде и питьевому водоснабжению, атмосферному
воздуху, почвам, жилым помещениям, эксплуатации производственных, общественных
помещений, организации и проведению санитарно-противоэпидемических (профилактических)
мероприятий». Использованные по назначению наборы реагентов, изделия, пришедшие в
негодность, в том числе в связи с истечением срока годности, утилизируются как отходы,
относящиеся к классу Б. Упаковка набора реагентов подлежит уничтожению как отходы,
относящиеся к классу А (эпидемиологически безопасные отходы, по составу приближенные к
ТКО).
5
5. ОБОРУДОВАНИЕ И МАТЕРИАЛЫ
− ПЦР-бокс (например, бокс абактериальной воздушной среды типа БАВп-01-«Ламинар-С»,
ЗАО «Ламинарные системы», Россия, ФСР 2010/07111);
− холодильник бытовой, поддерживающий температуру (2–8) °С;
− встряхиватель для пробирок типа «Вортекс» (например, «Bio-Vortex V-1 plus», BioSan, Латвия,
ФСЗ 2011/09797);
− микроцентрифуга, типа «Eppendorf» обеспечивающая относительное центробежное
ускорение не менее 6000 × g (например, «MiniSpin», Eppendorf, Германия, ФСЗ 2012/13316);
− дозаторы одноканальные с переменным объемом, со сменными наконечниками (например,
Sartorius, Германия, РЗН 2019/9356);
− одноразовые наконечники для дозаторов с защитным фильтром/аэрозольным барьером
(например, Sartorius, Германия, РЗН 2020/9707);
− перчатки медицинские одноразовые нестерильные неопудренные латексные или неопреновые
(например, перчатки «NeoTouch», Ansell HealthCare, Германия);
− контейнер для сбора отходов (например, «Контейнер для сбора острого инструментария –
МК–01», КМ–Проект, Россия, РЗН 2017/5395);
− термостат – суховоздушный термостат, поддерживающий температуру (50–60) °С (например,
ТС-1/20 СПУ, Смоленское СКТБ СПУ, Россия, ФСР 2007/01585);
− процессор магнитных частиц для очистки нуклеиновых кислот «KingFisher Flex» (Thermo
Fisher Scientific, Финляндия, ФСЗ 2009/05562) или «RealFly» (АО «Вектор-Бест-Балтика»,
Россия, РЗН 2022/17782).
6. ПОДГОТОВКА АНАЛИЗИРУЕМЫХ ОБРАЗЦОВ И РЕАГЕНТОВ
Взятие, транспортирование и хранение исследуемого материала осуществляется согласно
МУ 1.3. 2569-09 «Организация работы лабораторий, использующих методы амплификации
нуклеиновых кислот при работе с материалом, содержащим микроорганизмы I-IV групп
патогенности».
6.1. Подготовка анализируемых образцов.
При проведении работ с клиническими образцами в лаборатории необходимо обеспечить
безопасность работы в соответствии с требованиями законодательства в сфере санитарно-
эпидемиологического благополучия.
Материалом для исследования являются биологические образцы: сыворотка (плазма)
крови, лейкоцитарная фракция крови, биоптаты, соскобы эпителиальных клеток, мазки со
слизистых оболочек, слюна, мокрота, бронхоальвеолярный лаваж (БАЛ), ликвор, моча, фекалии,
дуоденальное содержимое (желчь), сперма и др., а также материалы из объектов окружающей
среды: суспензии членистоногих, пробы воды, смывы с поверхностей и др.
6
6.1.1. Подготовка образцов сыворотки (плазмы) крови.
В течение 6 часов1 после взятия крови следует выполнить центрифугирование для
получения сыворотки или плазмы (для получения плазмы использовать К ЭДТА или К ЭДТА в
2 3
качестве антикоагулянта). Следуйте инструкции производителя пробирок для получения
сыворотки или плазмы крови.
При использовании вакуумированных пробирок для забора венозной крови без
разделительного геля полученную в результате центрифугирования сыворотку или плазму
следует отобрать в отдельную пробирку.
При использовании вакуумированных пробирок для забора венозной крови с
разделительным гелем в случае, если центрифугирование и анализ проводятся с интервалом, не
превышающим 5 суток2, допускается отбор сыворотки или плазмы для анализа непосредственно
из первичной пробирки. При этом хранить образец следует при температуре (2–8) °С. В случае,
если центрифугирование и анализ проводятся с интервалом более 5 суток2, полученную в
результате центрифугирования сыворотку или плазму следует отобрать в отдельную пробирку и
заморозить при температуре, не превышающей минус 18 °С3.
Образцы сыворотки или плазмы крови, находящиеся в заморозке во вторичных пробирках,
перед использованием необходимо разморозить и перемешать на вортексе 3 раза по 2–3 секунды,
после чего центрифугировать при температуре (18–26) °С при 2000 × g в течение 5 минут. Для
проведения анализа требуется 100 мкл сыворотки или плазмы крови.
1 Для некоторых исследований рекомендуемое время, в течение которого следует выполнить
центрифугирование для получения сыворотки или плазмы, может составлять менее 6 часов. Необходимо
соблюдать требования соответствующих стандартов для исследований такого рода.
2 Для некоторых исследований рекомендуемая максимальная продолжительность временного
хранения образца сыворотки или плазмы перед проведением анализа при температуре (2–8) °С может
составлять менее 5 суток. Необходимо соблюдать требования соответствующих стандартов для
исследований такого рода.
3 Для некоторых исследований рекомендуемая максимальная температура хранения образца
сыворотки или плазмы может быть ниже минус 18 °С. Необходимо соблюдать требования
соответствующих стандартов для исследований такого рода.
Внимание
!
Не допускается применение для анализа образцов гепаринизированной
плазмы.
6.1.2. Подготовка образцов лейкоцитарной фракции крови.
Клетки крови (лейкоцитарную фракцию цельной крови, лейкоцитарную пленку) следует
отбирать после центрифугирования цельной крови и удаления плазмы. Используя наконечник с
фильтром аккуратно собрать лейкоцитарную массу с поверхности осадка клеток в объеме 0,2 мл
и перенести в одноразовую пробирку объемом 1,5–2,0 мл.
6.1.3. Подготовка образцов биоптатов.
Материал забирают из зоны предполагаемого местонахождения возбудителя инфекции, из
поврежденной ткани или из пограничного с поврежденным местом участка.
После того, как образец поступил в лабораторию, из него вырезается фрагмент размером со
7
спичечную головку. В случае, если ткань представлена мелкодисперсными фрагментами на
анализ берут 100 мкл суспензии. Фрагмент или суспензия помещается в пробирку с
керамическими шариками (Шарики керамические калиброванные, АО «Вектор-Бест», Россия).
Затем в пробирку вносится раствор для приготовления образцов (РПО)*. Далее пробирка с
образцом помещается в гомогенизатор.
Для увеличения срока сохранности НК в суспензии рекомендуется перенести
подготовленные образцы в пробирку с Транспортным раствором (М) (АО «Вектор-Бест»,
Россия, РЗН 2020/12962).
*раствор для подготовки образцов. Входит в наборы «Шарики керамические
калиброванные».
6.1.4. Подготовка образцов соскобов эпителиальных клеток, мазков со слизистых
оболочек.
Образцы соскобов, мазков забирают соответствующими одноразовыми сухими зондами в
пробирки с транспортным раствором (Транспортный раствор (АО «Вектор-Бест», Россия, РЗН
2017/6004), Транспортный раствор (М), (АО «Вектор-Бест», Россия)).
Коротким центрифугированием сбросить капли со стенок пробирок, содержащих соскобы,
мазки.
6.1.5. Подготовка образцов слюны.
В одноразовую пробирку объемом 1,5 или 2,0 мл отбирают не менее 1 мл слюны.
6.1.6. Подготовка образцов мокроты, БАЛ.
Образцы собирают в одноразовые контейнеры с широким горлом и завинчивающимися
крышками. Перед выделением нуклеиновых кислот необходимо провести предобработку.
Для мокроты: к образцу мокроты добавить равный объем 95%-го этилового спирта или
Транспортного раствора (М) (АО «Вектор-Бест», Россия). Тщательно перемешать, выдержать
при температуре (18–26) °С в течение 10 мин. Повторно тщательно перемешать. Для выделения
НК отобрать 100 мкл полученной взвеси, не захватывая комки слизи.
Для БАЛ: содержимое флакона перемешать переворачиванием, 1,5–2,0 мл образца
перенести в пробирку, центрифугировать при 13 000 об/мин в течение 5 мин. Надосадочную
жидкость удалить, не задевая осадок, оставить 200 мкл образца. Осадок ресуспендировать. Для
выделения НК отобрать 100 мкл образца, не захватывая комки слизи.
При большом объеме слизи образец БАЛ предварительно разбавить 95%-ным этиловым
спиртом или Транспортным раствором (М) (АО «Вектор-Бест», Россия), как для мокроты.
6.1.7. Подготовка образцов ликвора.
Ликвор забирается в пластиковые одноразовые пробирки объемом 1,5 или 2 мл.
6.1.8. Подготовка образцов мочи*.
* материал пригоден только для выделения ДНК.
8
Первую порцию утренней мочи собрать в чистый флакон с плотной крышкой. 1,5–2,0 мл
мочи отобрать в пробирку, центрифугировать при 3000 об/мин в течение 3 минут. Удалить
надосадочную жидкость, не задевая осадок, оставив ~100 мкл. Полученный образец использовать
для выделения нуклеиновых кислот. При получении большого количества осадка промыть его,
добавив 500 мкл Транспортного раствора (АО «Вектор-Бест», Россия). Перемешать на вортексе.
Повторить процедуру центрифугирования и удаления надосадочной жидкости.
6.1.9. Подготовка образцов суспензий фекалий.
Суспензия может быть приготовлена в соответствии с МУ 1.3.2569-09 либо с
использованием Транспортного раствора (М) (АО «Вектор-Бест», Россия). Для этого рабочую
поверхность урогенитального зонда полностью погружают в образец (при захвате избытка
образца, оставить избыток на стенке контейнера), после чего переносят зонд в пробирку с
Транспортным раствором (М) и тщательно ресуспендируют образец в растворе. Зонд извлекают
из пробирки и помещают в контейнер с дезинфицирующим раствором. Приготовленные
суспензии выдерживают при комнатной температуре не менее 5 минут до оседания крупной
взвеси и частиц. При необходимости пробирки центрифугируют при 3000 об/мин в течение
1 минуты. Для выделения нуклеиновых кислот используют 100 мкл получившейся надосадочной
жидкости.
Для приготовления суспензии из фекалий с полупрозрачной и водянистой консистенцией
отобрать 100 мкл образца одноразовым наконечником и внести в пробирку с Транспортным
раствором (М).
Внимание
!
Использование избытка образца фекалий при приготовлении суспензии,
может привести к ингибированию реакции обратной транскрипции и ПЦР.
6.1.10. Подготовка образцов спермы.
При работе с образцами спермы разбавить образец в два раза Транспортным раствором или
Транспортным раствором (М) (АО «Вектор-Бест», Россия), тщательно перемешать на вортексе в
течение 10 секунд.
6.1.11. Подготовка образцов дуоденального содержимого (желчи).
Непосредственно перед проведением гомогенизации образцы тщательно перемешивают на
вортексе и, не дожидаясь образования осадка, отбирают аликвоту в пробирки с керамическими
шариками. Пробирки помещают в гомогенизатор и проводят процедуру измельчения.
6.1.12. Приготовление суспензии членистоногих.
Метод 1 (при наличии автоматического гомогенизатора): Исследуемых членистоногих
поместить в пронумерованные пробирки с керамическими шариками (Шарики керамические
калиброванные, АО «Вектор-Бест»). Добавить в пробирки с членистоногими охлажденный
раствор для подготовки образцов (РПО)*. Пробирки поместить в гомогенизатор и провести
процедуру измельчения членистоногих.
9
Метод 2 (при отсутствии автоматического гомогенизатора): Исследуемых
членистоногих поместить в пронумерованные пластиковые пробирки объемом 1,5 мл. В
пробирки с членистоногими внести по 30 мкл раствора РПО* (в случае анализа напитавшихся
членистоногих, или членистоногих больших размеров внести по 50 мкл РПО). Поместить
пробирки в охлажденный до минус (20−30) °С штатив-холодильник или в жидкий азот и
заморозить. Взять одну замороженную пробирку с членистоногим и не дожидаясь оттаивания
раствора, тщательно измельчить членистоногое с помощью отдельного стерильного пестика. Не
вынимая пестик, поставить пробирку с измельченным членистоногим в штатив, помещенный в
лед. Добавить в пробирку 250 мкл охлажденного РПО. Аккуратно ополоснуть пестик в
содержимом пробирки, вынуть его и поместить в дезинфицирующий раствор.
Если размер клеща (напившегося кровью) в диаметре 6-10 мм, для экстракции НК
рекомендуется использовать 50 мкл суспензии клеща. Если диаметр клеща более 10 мм, для
экстракции НК рекомендуется использовать 30 мкл суспензии клеща.
*раствор для подготовки образцов. Входит в наборы «Шарики керамические
калиброванные».
Для увеличения срока сохранности НК в суспензии членистоногих рекомендуется
перенести подготовленные образцы в пробирку с Транспортным раствором (М).
6.1.13. Подготовка бактериальных культур.
Образцы бактериальных культур получают путем посева клинического материала на
универсальные или селективные питательные среды. Смешанные или чистые культуры на
твердых питательных средах забирают в пробирки с «Транспортным раствором» (АО «Вектор-
Бест», Россия) тщательно перемешивают, 100 мкл полученной суспензии используют для
выделения ДНК. Смешанные или чистые культуры на жидких питательных средах, не требуют
предварительной подготовки, 100 мкл культуры используют для выделения ДНК.
6.1.14. Подготовка проб воды.
Взятие, транспортировка и хранение образцов воды осуществляется согласно МУК
4.2.2029–05 «Санитарно-вирусологический контроль водных объектов». Для выделения
нуклеиновых кислот используют 100 мкл концентрата.
6.1.15. Подготовка смывов.
Смывы с поверхностей берут стерильными ватными тампонами или урогенитальными
зондами. Перед взятием смывов тампоны или зонды смачивают Транспортным раствором или
Транспортным раствором (М) (АО «Вектор-Бест», Россия). После взятия смыва тампон (зонд)
погружают в пробирку с Транспортным раствором или Транспортным раствором (М) (АО
«Вектор-Бест», Россия).
10
Условия транспортирования и хранения образцов
Таблица 2
Температура транспортирования и хранения образцов
Наименование биоматериала
(18–26) °С (2–8) °С минус (18–40) °С
Сыворотка (плазма) до 2 часов до 5 суток до 12 месяцев
Лейкоцитарная фракция крови до 2 часов до 2 суток до 1 месяца
до 2 недель/ до 3 месяцев в
Биоптаты до 2 часов до 1 суток
транспортном растворе (М)
Соскобы и мазки из
до 2 суток до 2 недель до 2 месяцев
урогенитального тракта
Соскобы и мазки из
респираторного тракта в до 2 суток до 5 суток до 2 месяцев
Транспортном растворе (М)
Слюна до 6 часов до 1 суток до 2 недель
Мокрота до 6 часов до 3 суток до 2 недель
БАЛ до 2 часов до 1 суток до 2 недель
Ликвор до 2 часов до 1 суток до 2 недель
Моча до 2 часов до 1 суток -
Суспензия фекалий в
до 6 часов до 5 суток до 1 месяца
Транспортном растворе (М)
Желчь до 6 часов до 3 суток до 1 недели
Сперма до 6 часов до 2 суток до 1 недели
Гомогенизированные
не рекомендуется до 1 суток до 2 недель
членистоногие
Бактериальные культуры до 6 часов до 3 суток до 2 недель
Образцы смывов с поверхностей до 6 часов до 3 суток до 2 недель
При температуре ниже минус 40°С – возможно длительное хранение.
Повторное замораживание-оттаивание образцов не допускается!
6.2. Подготовка компонентов набора.
6.2.1. Перед началом работы извлечь набор реагентов из холодильника, вскрыть упаковку и
выдержать глубоколуночный планшет с лизирующим раствором с ВКО (ЛР) в термостате при
температуре (50−60) °С для растворения осадка в течение 30 минут, все остальные компоненты
при температуре (18−26) °С в течение 30 минут.
6.2.2. Каждая группа образцов, проходящая через процедуру выделения НК, должна
содержать ПКО и ОКО.
Извлечь из набора для ПЦР серии «РеалБест» флакон (пробирку) с ПКО,
соответствующими данному ПЦР набору, и подготовить его к работе согласно инструкции к
набору для ПЦР.
6.2.3. Удалить алюминиевую пленку с планшетов.
11
7. ВЫДЕЛЕНИЕ НК
7.1. При внесении реагентов и образцов ориентировать планшеты следует таким образом,
чтобы лунка А1 находилась слева сверху!
7.1. Составить схему размещения контрольных и исследуемых образцов в планшете на
трафарете. Количество контрольных образцов указано в инструкциях к наборам для ПЦР (ОТ-
ПЦР) серии «РеалБест».
Схема размещения контрольных и исследуемых образцов
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12
A ПКО №7 №15
B ОКО №8 №16
C №1 №9 №17
D №2 №10 №18
E №3 №11 №19
F №4 №12 №20
G №5 №13 №21
H №6 №14 №22
7.2. В одну лунку планшета ЛР внести 30 мкл ПКО и 70 мкл ОКО из соответствующих
наборов для ПЦР серии «РеалБест», согласно схеме размещения образцов, используя
наконечники с аэрозольным барьером.
7.3. В одну лунку планшета ЛР внести 100 мкл ОКО, согласно схеме размещения
образцов, используя наконечник с аэрозольным барьером.
7.4. В остальные лунки планшета ЛР внести по 100 мкл исследуемых образцов, согласно
схеме размещения образцов, используя наконечники с аэрозольным барьером.
7.5. Включить станцию автоматического выделения KingFisher Flex или RealFly и
персональный компьютер, управляющий станцией.
7.6. Запустить на персональном компьютере программное обеспечение и выбрать
протокол выделения нуклеиновых кислот «РеалБест Сигма планшеты».
7.7. По запросу программного обеспечения станции автоматического выделения
установить планшеты в прибор: ГР, Cорбент, ЛР, РО, ЭР. После установки планшета ЭР
запустится процесс выделения НК.
7.8. По окончании протокола выделения НК прибор подаст звуковой сигнал.
7.9. Вынуть из прибора планшет ЭР.
7.10. Если для данной пробы будет проводиться больше трех определений – добавить 400
мкл элюирующего раствора.
7.11. Пробы, находящиеся в планшете ЭР, внести в реакционные смеси для ПЦР-анализа.
Внимание! Выделенную НК можно хранить при температуре (2−8) °С не более суток.
7.12. Между окончанием внесения элюата и постановкой реакционных смесей в
12
амплификатор должно пройти не более 15 минут.
8. УСЛОВИЯ ТРАНСПОРТИРОВАНИЯ, ХРАНЕНИЯ И ПРИМЕНЕНИЯ НАБОРА
8.1. Транспортировать изделия следует транспортом всех видов в крытых транспортных
средствах в соответствии с правилами перевозок, действующими на транспорте данного вида, при
температуре (2–8) °С. Допускается транспортирование при температуре до 26 °С не более 10
суток.
8.2. Хранение набора реагентов в упаковке предприятия-изготовителя должно
осуществляться при температуре (2–8) °С в течение всего срока годности в холодильных камерах
или холодильниках, обеспечивающих регламентированный температурный режим с ежедневной
регистрацией температуры.
8.3. Комплектация «РеалБест Сигма (П)» не подлежит дробному использованию, поэтому
после удаления с планшетов алюминиевой пленки, следует использовать компоненты в течение
рабочего дня.
8.4. Срок годности набора – 18 месяцев со дня выпуска. Не допускается применение
наборов по истечении срока их годности.
8.5. Для получения надежных результатов необходимо строгое соблюдение данной
инструкции по применению набора.
8.6. Изделие не требует технического обслуживания и не подлежит ремонту.
9. ГАРАНТИЙНЫЕ ОБЯЗАТЕЛЬСТВА
9.1. Производитель гарантирует соответствие выпускаемых изделий требованиям
нормативной и технической документации.
Безопасность и качество изделия гарантируются в течение всего срока годности.
9.2. Производитель отвечает за недостатки изделия, за исключением дефектов, возникших
вследствие нарушения правил пользования, условий транспортирования и хранения, либо
действия третьих лиц, либо непреодолимой силы.
9.3. Производитель обязуется за свой счет заменить изделие, технические и
функциональные характеристики (потребительские свойства) которого не соответствуют
нормативной и технической документации, если указанные недостатки явились следствием
скрытого дефекта материалов или некачественного изготовления изделия производителем.
13
Инструкция по применению и паспорт размещены на сайте: www.vector-best.ru.
По вопросам, касающимся качества набора «РеалБест Сигма», следует обращаться в АО
«Вектор-Бест» по адресу:
630559, Новосибирская область, рп Кольцово, 3. Научно-производственная, к. 36, ком. 211
тел. (383) 252-51-62, 227-60-30;
тел./факс (383), 252-51-81, 252-51-77.
E-mail: plkobtk@vector-best.ru
Консультацию специалиста по работе с набором можно получить по тел.: (383) 252-51-75.
ГРАФИЧЕСКИЕ СИМВОЛЫ
Символ Описание Символ Описание
Медицинское изделие для
REF Номер по каталогу IтVD
диагностики in vitro
V Содержимого достаточно
Температурный диапазон
для проведения < п > тестов
LOT Код партии Дата изготовления
J • Обратитесь к инструкции по
Изготовитель 1. применению или инструкции по
2 применению в электронном виде
А
Использовать до Осторожно
Дата в формате:
YYYY-MM-DD Г од-Месяц-День
YYYY-MM Г од-Месяц
Начальник отделения
производства ПЦР-наборов
АО «Вектор-Бест»
Директор по производству
АО «Вектор-Бест»
«СОГЛАСОВАНО»
Проректор по научной работе
ФГБОУ ВО НЕМУ Минздрава России
д.м.н., профессор
м.п.
14
| Состав | Внешний вид | Результаты контроля |
| Упаковка 1: | | |
| Лизирующий раствор с ВКО (ЛР), 2 флакона по 28 мл | Жидкость от бесцветного до желтого цвета, допускается наличие осадка, исчезающего при нагревании | Соответствует |
| Раствор для отмывки (РО), 4 флакона по 28 мл | Бесцветная жидкость | Соответствует |
| Элюирующий раствор (ЭР), 2 флакона по 30 мл | Бесцветная жидкость | Соответствует |
| Сорбент, 2 флакона по 1 мл | Суспензия магнитных частиц | Соответствует |
| Отрицательный контрольный образец (ОКО), 2 флакона по 1 мл | Бесцветная жидкость | Соответствует |
| Ванночки для реагентов, 6 шт. | Ванночки из светлого полистирола | Соответствует |
| Показатель Норма Результаты контроля | | |
| Эффективность выделения РНК, % | 100 | 100 |
| Эффективность выделения ДНК, % | 100 | 100 |
Россия, 630559, Новосибирская обл., р.п. Кольцово, Научно-производственная зона, корпус 36, к. 211, АО «Вектор-Бест»
www.vector-best.ru
Для писем: 630117, г. Новосибирск, а/я 492 Приемная: тел. (383)-227-60-30
vbobtk@vector-best.ru
ПАСПОРТ № 5055-25 X-XXXX
РеалБест Сигма (96)
Набор реагентов для выделения нуклеиновых кислот из биологического материала и клинических
образцов
Номер серии 1
Дата изготовления 2025-12-01
Транспортировать при температуре 2-8°С. Допускается Дата выдачи паспорта 2025-12-01
транспортирование при температуре до 26°С не более 10
суток. Срок годности наборов до 2027-06-01
Дополнительная информация:
Заключение: Соответствует требованиям
ТУ 20.59.52-306-23548172-2025
по упаковке, маркировке, комплектности и по показателям
качества
Начальник ОБТК В.В. ШАПРОВ
| Состав | Внешний вид | Результаты контроля |
| Упаковка 1: | | |
| Лизирующий раствор с ВКО (ЛР), 2 флакона по 28 мл | Жидкость от бесцветного до желтого цвета, допускается наличие осадка, исчезающего при нагревании | Соответствует |
| Раствор для отмывки (РО), 4 флакона по 28 мл | Бесцветная жидкость | Соответствует |
| Элюирующий раствор (ЭР), 2 флакона по 30 мл | Бесцветная жидкость | Соответствует |
| Сорбент, 2 флакона по 1 мл | Суспензия магнитных частиц | Соответствует |
| Отрицательный контрольный образец (ОКО), 2 флакона по 1 мл | Бесцветная жидкость | Соответствует |
| Ванночки для реагентов, 6 шт. | Ванночки из светлого полистирола | Соответствует |
| Показатель Норма Результаты контроля | | |
| Эффективность выделения РНК, % | 100 | 100 |
| Эффективность выделения ДНК, % | 100 | 100 |
Россия, 630559, Новосибирская обл., р.п. Кольцово, Научно-производственная зона, корпус 36, к. 211, АО «Вектор-Бест»
www.vector-best.ru
Для писем: 630117, г. Новосибирск, а/я 492 Приемная: тел. (383)-227-60-30
vbobtk@vector-best.ru
ПАСПОРТ № 5056-25 X-XXXX
РеалБест Сигма (96)
Набор реагентов для выделения нуклеиновых кислот из биологического материала и клинических
образцов
Номер серии 2
Дата изготовления 2025-12-02
Транспортировать при температуре 2-8°С. Допускается Дата выдачи паспорта 2025-12-02
транспортирование при температуре до 26°С не более 10
суток. Срок годности наборов до 2027-06-02
Дополнительная информация:
Заключение: Соответствует требованиям
ТУ 20.59.52-306-23548172-2025
по упаковке, маркировке, комплектности и по показателям
качества
Начальник ОБТК В.В. ШАПРОВ
| Состав | Внешний вид | Результаты контроля |
| Упаковка 1: | | |
| Лизирующий раствор с ВКО (ЛР), 1 флакон, 200 мл | Жидкость от бесцветного до желтого цвета, допускается наличие осадка, исчезающего при нагревании | Соответствует |
| Раствор для отмывки (РО), 1 флакон, 200 мл | Бесцветная жидкость | Соответствует |
| Элюирующий раствор (ЭР), 1 флакон, 240 мл | Бесцветная жидкость | Соответствует |
| Сорбент, 1 флакон, 3 мл | Суспензия магнитных частиц | Соответствует |
| Отрицательный контрольный образец (ОКО), 2 флакона по 1 мл | Бесцветная жидкость | Соответствует |
| Ванночки для реагентов, 3 шт. | Ванночки из светлого полистирола | Соответствует |
| Показатель Норма Результаты контроля | | |
| Эффективность выделения РНК, % | 100 | 100 |
| Эффективность выделения ДНК, % | 100 | 100 |
Россия, 630559, Новосибирская обл., р.п. Кольцово, Научно-производственная зона, корпус 36, к. 211, АО «Вектор-Бест»
www.vector-best.ru
Для писем: 630117, г. Новосибирск, а/я 492 Приемная: тел. (383)-227-60-30
vbobtk@vector-best.ru
ПАСПОРТ № 5057-25 X-XXXX
РеалБест Сигма (384)
Набор реагентов для выделения нуклеиновых кислот из биологического материала и клинических
образцов
Номер серии 1
Дата изготовления 2025-12-01
Транспортировать при температуре 2-8°С. Допускается Дата выдачи паспорта 2025-12-01
транспортирование при температуре до 26°С не более 10
суток. Срок годности наборов до 2027-06-01
Дополнительная информация:
Заключение: Соответствует требованиям
ТУ 20.59.52-306-23548172-2025
по упаковке, маркировке, комплектности и по показателям
качества
Начальник ОБТК В.В. ШАПРОВ
| Состав | Внешний вид | Результаты контроля |
| Упаковка 1: | | |
| Лизирующий раствор с ВКО (ЛР), 1 флакон, 200 мл | Жидкость от бесцветного до желтого цвета, допускается наличие осадка, исчезающего при нагревании | Соответствует |
| Раствор для отмывки (РО), 1 флакон, 200 мл | Бесцветная жидкость | Соответствует |
| Элюирующий раствор (ЭР), 1 флакон, 240 мл | Бесцветная жидкость | Соответствует |
| Сорбент, 1 флакон, 3 мл | Суспензия магнитных частиц | Соответствует |
| Отрицательный контрольный образец (ОКО), 2 флакона по 1 мл | Бесцветная жидкость | Соответствует |
| Ванночки для реагентов, 3 шт. | Ванночки из светлого полистирола | Соответствует |
| Показатель Норма Результаты контроля | | |
| Эффективность выделения РНК, % | 100 | 100 |
| Эффективность выделения ДНК, % | 100 | 100 |
Россия, 630559, Новосибирская обл., р.п. Кольцово, Научно-производственная зона, корпус 36, к. 211, АО «Вектор-Бест»
www.vector-best.ru
Для писем: 630117, г. Новосибирск, а/я 492 Приемная: тел. (383)-227-60-30
vbobtk@vector-best.ru
ПАСПОРТ № 5058-25 X-XXXX
РеалБест Сигма (384)
Набор реагентов для выделения нуклеиновых кислот из биологического материала и клинических
образцов
Номер серии 2
Дата изготовления 2025-12-02
Транспортировать при температуре 2-8°С. Допускается Дата выдачи паспорта 2025-12-02
транспортирование при температуре до 26°С не более 10
суток. Срок годности наборов до 2027-06-02
Дополнительная информация:
Заключение: Соответствует требованиям
ТУ 20.59.52-306-23548172-2025
по упаковке, маркировке, комплектности и по показателям
качества
Начальник ОБТК В.В. ШАПРОВ
| Состав | Внешний вид | Результаты контроля |
| Упаковка 1: | | |
| Лизирующий раствор с ВКО (ЛР), 1 планшет (0,5 мл×96) | Жидкость от бесцветного до желтого цвета, допускается наличие осадка, исчезающего при нагревании | Соответствует |
| Раствор для отмывки (РО), 1 планшет (0,5 мл×96) | Бесцветная жидкость | Соответствует |
| Элюирующий раствор (ЭР), 1 планшет (0,2 мл×96), 2 флакона по 30 мл | Бесцветная жидкость | Соответствует |
| Сорбент, 1 планшет (0,1 мл×96) | Суспензия магнитных частиц | Соответствует |
| Отрицательный контрольный образец (ОКО), 2 флакона по 1 мл | Бесцветная жидкость | Соответствует |
| Гребенка наконечников (ГР), 1 шт. | Гребенка бесцветная из пластика (96 наконечников в одной рамке) | Соответствует |
| Показатель Норма Результаты контроля | | |
| Эффективность выделения РНК, % | 100 | 100 |
| Эффективность выделения ДНК, % | 100 | 100 |
Россия, 630559, Новосибирская обл., р.п. Кольцово, Научно-производственная зона, корпус 36, к. 211, АО «Вектор-Бест»
www.vector-best.ru
Для писем: 630117, г. Новосибирск, а/я 492 Приемная: тел. (383)-227-60-30
vbobtk@vector-best.ru
ПАСПОРТ № 5059-25 X-XXXX
РеалБест Сигма (П)
Набор реагентов для выделения нуклеиновых кислот из биологического материала и клинических
образцов
Номер серии 1
Дата изготовления 2025-12-01
Транспортировать при температуре 2-8°С. Допускается Дата выдачи паспорта 2025-12-01
транспортирование при температуре до 26°С не более 10
суток. Срок годности наборов до 2027-06-01
Дополнительная информация:
Заключение: Соответствует требованиям
ТУ 20.59.52-306-23548172-2025
по упаковке, маркировке, комплектности и по показателям
качества
Начальник ОБТК В.В. ШАПРОВ
| Состав | Внешний вид | Результаты контроля |
| Упаковка 1: | | |
| Лизирующий раствор с ВКО (ЛР), 1 планшет (0,5 мл×96) | Жидкость от бесцветного до желтого цвета, допускается наличие осадка, исчезающего при нагревании | Соответствует |
| Раствор для отмывки (РО), 1 планшет (0,5 мл×96) | Бесцветная жидкость | Соответствует |
| Элюирующий раствор (ЭР), 1 планшет (0,2 мл×96), 2 флакона по 30 мл | Бесцветная жидкость | Соответствует |
| Сорбент, 1 планшет (0,1 мл×96) | Суспензия магнитных частиц | Соответствует |
| Отрицательный контрольный образец (ОКО), 2 флакона по 1 мл | Бесцветная жидкость | Соответствует |
| Гребенка наконечников (ГР), 1 шт. | Гребенка бесцветная из пластика (96 наконечников в одной рамке) | Соответствует |
| Показатель Норма Результаты контроля | | |
| Эффективность выделения РНК, % | 100 | 100 |
| Эффективность выделения ДНК, % | 100 | 100 |
Россия, 630559, Новосибирская обл., р.п. Кольцово, Научно-производственная зона, корпус 36, к. 211, АО «Вектор-Бест»
www.vector-best.ru
Для писем: 630117, г. Новосибирск, а/я 492 Приемная: тел. (383)-227-60-30
vbobtk@vector-best.ru
ПАСПОРТ № 5060-25 X-XXXX
РеалБест Сигма (П)
Набор реагентов для выделения нуклеиновых кислот из биологического материала и клинических
образцов
Номер серии 2
Дата изготовления 2025-12-02
Транспортировать при температуре 2-8°С. Допускается Дата выдачи паспорта 2025-12-02
транспортирование при температуре до 26°С не более 10
суток. Срок годности наборов до 2027-06-02
Дополнительная информация:
Заключение: Соответствует требованиям
ТУ 20.59.52-306-23548172-2025
по упаковке, маркировке, комплектности и по показателям
качества
Начальник ОБТК В.В. ШАПРОВ
| | УТВЕРЖДАЮ |
| | Генеральный ди |
| | АО «Вектор-Бес |
| ЖЕНИЯ МЕДИЦИНС | КОГО ИЗДЕ |
| Р РЕАГЕНТОВ | |
| НУКЛЕИНОВЫХ КИСЛО | Т |
| РИАЛА И КЛИНИЧЕСКИ | Х ОБРАЗЦО |
| Бест Сигма) | |
ректор
ст»
ФОТОГРАФИЧЕСКИЕ ИЗОБРА ЕЛИЯ
НАБОР
ДЛЯ ВЫДЕЛЕНИЯ
ИЗ БИОЛОГИЧЕСКОГО МАТЕ ОВ
(Реал
Вариант «РеалБест Сигма (96)»
Фотографическое изображение общего вида медицинского изделия
Набор реагентов для выделения нуклеиновых кислот из биологического материала и клинических образцов «РеалБест Сигма»
Вариант: «РеалБест Сигма (96)»
2
Фотографическое изображение компонентов медицинского изделия №1
Набор реагентов для выделения нуклеиновых кислот из биологического материала и клинических образцов «РеалБест Сигма»
Вариант: «РеалБест Сигма (96)»
3
Фотографическое изображение компонентов медицинского изделия №2
Набор реагентов для выделения нуклеиновых кислот из биологического материала и клинических образцов «РеалБест Сигма»
Вариант: «РеалБест Сигма (96)»
4
Фотографическое изображение компонентов медицинского изделия №3
Набор реагентов для выделения нуклеиновых кислот из биологического материала и клинических образцов «РеалБест Сигма»
Вариант: «РеалБест Сигма (96)»
5
Фотографическое изображение компонентов медицинского изделия №4
Набор реагентов для выделения нуклеиновых кислот из биологического материала и клинических образцов «РеалБест Сигма»
Вариант: «РеалБест Сигма (96)»
6
1
Фотографическое изображение упаковки медицинского изделия №
Набор реагентов для выделения нуклеиновых кислот из биологического материала и клинических образцов «РеалБест Сигма»
Вариант: «РеалБест Сигма (96)»
7
Фотографическое изображение упаковки медицинского изделия №2
Набор реагентов для выделения нуклеиновых кислот из биологического материала и клинических образцов «РеалБест Сигма»
Вариант: «РеалБест Сигма (96)»
8
3
Фотографическое изображение упаковки медицинского изделия №
Набор реагентов для выделения нуклеиновых кислот из биологического материала и клинических образцов «РеалБест Сигма»
Вариант: «РеалБест Сигма (96)»
9
| | УТВЕРЖДАЮ |
| | Генеральный ди |
| | АО «Вектор-Бес |
| ЖЕНИЯ МЕДИЦИНС | КОГО ИЗДЕ |
| Р РЕАГЕНТОВ | |
| НУКЛЕИНОВЫХ КИСЛО | Т |
| РИАЛА И КЛИНИЧЕСКИ | Х ОБРАЗЦО |
| Бест Сигма) | |
ректор
ст»
ФОТОГРАФИЧЕСКИЕ ИЗОБРА ЕЛИЯ
НАБОР
ДЛЯ ВЫДЕЛЕНИЯ
ИЗ БИОЛОГИЧЕСКОГО МАТЕ ОВ
(Реал
Вариант «РеалБест Сигма (384)»
Фотографическое изображение общего вида медицинского изделия
Набор реагентов для выделения нуклеиновых кислот из биологического материала и клинических образцов «РеалБест Сигма»
Вариант: «РеалБест Сигма (384)»
2
Фотографическое изображение компонентов медицинского изделия №1
Набор реагентов для выделения нуклеиновых кислот из биологического материала и клинических образцов «РеалБест Сигма»
Вариант: «РеалБест Сигма (384)»
3
Фотографическое изображение компонентов медицинского изделия №2
Набор реагентов для выделения нуклеиновых кислот из биологического материала и клинических образцов «РеалБест Сигма»
Вариант: «РеалБест Сигма (384)»
4
Фотографическое изображение компонентов медицинского изделия №3
Набор реагентов для выделения нуклеиновых кислот из биологического материала и клинических образцов «РеалБест Сигма»
Вариант: «РеалБест Сигма (384)»
5
Фотографическое изображение компонентов медицинского изделия №4
Набор реагентов для выделения нуклеиновых кислот из биологического материала и клинических образцов «РеалБест Сигма»
Вариант: «РеалБест Сигма (384)»
6
Фотографическое изображение компонентов медицинского изделия №5
Набор реагентов для выделения нуклеиновых кислот из биологического материала и клинических образцов «РеалБест Сигма»
Вариант: «РеалБест Сигма (384)»
7
1
Фотографическое изображение упаковки медицинского изделия №
Набор реагентов для выделения нуклеиновых кислот из биологического материала и клинических образцов «РеалБест Сигма»
Вариант: «РеалБест Сигма (384)»
8
Фотографическое изображение упаковки медицинского изделия №2
Набор реагентов для выделения нуклеиновых кислот из биологического материала и клинических образцов «РеалБест Сигма»
Вариант: «РеалБест Сигма (384)»
9
3
Фотографическое изображение упаковки медицинского изделия №
Набор реагентов для выделения нуклеиновых кислот из биологического материала и клинических образцов «РеалБест Сигма»
Вариант: «РеалБест Сигма (384)»
10
| | УТВЕРЖДАЮ |
| | Г енеральный ди |
| | АО «Вектор-Бес |
| ЖЕНИЯ МЕДИЦИНС | КОГО ИЗДЕ |
| Р РЕАГЕНТОВ | |
| НУКЛЕИНОВЫХ КИСЛО | Т |
| РИАЛА И КЛИНИЧЕСКИ | Х ОБРАЗЦО |
| Бест Сигма) | |
ректор
ст»
ФОТОГРАФИЧЕСКИЕ ИЗОБРА ЕЛИЯ
НАБОР
ДЛЯ ВЫДЕЛЕНИЯ
ИЗ БИОЛОГИЧЕСКОГО МАТЕ ОВ
(Реал
Вариант «РеалБест Сигма (И)»
Фотографическое изображение общего вида медицинского изделия
Набор реагентов для выделения нуклеиновых кислот из биологического материала и клинических образцов «РеалБест Сигма»
Вариант: «РеалБест Сигма (П)»
2
Фотографическое изображение компонентов медицинского изделия №1
Набор реагентов для выделения нуклеиновых кислот из биологического материала и клинических образцов «РеалБест Сигма»
Вариант: «РеалБест Сигма (П)»
3
Фотографическое изображение компонентов медицинского изделия №2
Набор реагентов для выделения нуклеиновых кислот из биологического материала и клинических образцов «РеалБест Сигма»
Вариант: «РеалБест Сигма (П)»
4
Фотографическое изображение компонентов медицинского изделия №3
Набор реагентов для выделения нуклеиновых кислот из биологического материала и клинических образцов «РеалБест Сигма»
Вариант: «РеалБест Сигма (П)»
5
Фотографическое изображение компонентов медицинского изделия №4
Набор реагентов для выделения нуклеиновых кислот из биологического материала и клинических образцов «РеалБест Сигма»
Вариант: «РеалБест Сигма (П)»
6
1
Фотографическое изображение упаковки медицинского изделия №
Набор реагентов для выделения нуклеиновых кислот из биологического материала и клинических образцов «РеалБест Сигма»
Вариант: «РеалБест Сигма (П)»
7
Фотографическое изображение упаковки медицинского изделия №2
Набор реагентов для выделения нуклеиновых кислот из биологического материала и клинических образцов «РеалБест Сигма»
Вариант: «РеалБест Сигма (П)»
8
3
Фотографическое изображение упаковки медицинского изделия №
Набор реагентов для выделения нуклеиновых кислот из биологического материала и клинических образцов «РеалБест Сигма»
Вариант: «РеалБест Сигма (П)»
9