Набор реагентов для качественного и количественного определения ДНК HВV в плазме крови человека методом ПЦР с детекцией в режиме "реального времени" (Amplitech HBV (R)) по ТУ 20.59.52-052-19926214-2025 — инструкция и характеристики
Открытые закупки, где изделие проходит ТЗ
Сейчас открытых закупок, где изделие полностью проходит ТЗ, нет; список обновляется каждый день.
Построчная сверка ТЗ с характеристиками этого изделия и все закупки под ваши товары — в кабинете, 7 дней бесплатно.
Попробовать бесплатно
Текст инструкции: технические характеристики
Amplitech HBV (R) Набор реагентов для качественного и количественного определения ДНК HBV в плазме крови человека методом ПЦР с детекцией в режиме «реального времени» (Amplitech HBV (R)) по ТУ 20.59.52-052-19926214-2025 ИНСТРУКЦИЯ ПО ПРИМЕНЕНИЮ Р030-0 96 СОДЕРЖАНИЕ ВВЕДЕНИЕ ......................................................................................................................... 3 1 НАЗНАЧЕНИЕ .............................................................................................................. 4 2 ОБЛАСТЬ ПРИМЕНЕНИЯ ........................................................................................... 4 3 ПРОТИВОПОКАЗАНИЯ К ПРИМЕНЕНИЮ ................................................................ 4 4 РИСКИ ПРИМЕНЕНИЯ, ПОБОЧНЫЕ ЭФФЕКТЫ ...................................................... 4 5 СОСТАВ ....................................................................................................................... 4 6 ПРИНЦИП МЕТОДА .................................................................................................... 5 6.1 Прослеживаемость значения положительного контроля ПК1 HBV ................. 5 6.2 Характеристика положительного контроля ПК2 HBV ....................................... 6 7 НЕОБХОДИМОЕ ОБОРУДОВАНИЕ И МАТЕРИАЛЫ ............................................... 6 8 МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ ................................................................................. 7 9 ИССЛЕДУЕМЫЙ МАТЕРИАЛ ..................................................................................... 8 10 ПРОВЕДЕНИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ .............................................................................. 9 10.1 Автоматизированная экстракция ДНК и подготовка к проведению ПЦР с использованием автоматической станции «Amplitech E1». Проведение ПЦР и детекции .......................................................................................................................... 9 10.2 Экстракция ДНК и ручная подготовка к проведению ПЦР. Проведение ПЦР и детекции ........................................................................................................................ 10 11 УЧЁТ И ИНТЕРПРЕТАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ ............................................................ 12 12 ВОЗМОЖНЫЕ ОШИБКИ ........................................................................................... 13 13 КОНТРОЛЬ КАЧЕСТВА ............................................................................................. 14 13.1 Контроли, используемые в процессе исследования ...................................... 14 13.2 Мониторинг лаборатории на наличие контаминации ..................................... 14 13.3 Внутренний контроль качества лабораторных исследований ....................... 14 14 ФУНКЦИОНАЛЬНЫЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ НАБОРА ............................................... 15 14.1 Предел обнаружения ........................................................................................ 15 14.2 Диапазон измерения и предел измерения ...................................................... 15 14.3 Аналитическая специфичность ........................................................................ 15 14.4 Прецизионность измерения .............................................................................. 16 14.5 Правильность измерения .................................................................................. 16 14.6 Диагностические характеристики ..................................................................... 17 14.7 Корреляция ........................................................................................................ 17 15 УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ, ТРАНСПОРТИРОВАНИЯ И ЭКСПЛУАТАЦИИ НАБОРА 18 15.1 Срок годности .................................................................................................... 18 15.2 Хранение ............................................................................................................ 18 15.3 Транспортирование ........................................................................................... 18 15.4 Эксплуатация ..................................................................................................... 18 16 ПЕРЕЧЕНЬ СОКРАЩЕНИЙ ...................................................................................... 19 17 ПЕРЕЧЕНЬ ПРИМЕНЯЕМЫХ НАЦИОНАЛЬНЫХ СТАНДАРТОВ .......................... 19 18 ГАРАНТИИ ПРОИЗВОДИТЕЛЯ ................................................................................ 20 19 ТЕХНИЧЕСКАЯ ПОДДЕРЖКА .................................................................................. 20 20 СИМВОЛЫ, ИСПОЛЬЗУЕМЫЕ В ДОКУМЕНТАЦИИ ПРОИЗВОДИТЕЛЯ.............. 20 Amplitech HBV (R) Инструкция в.23.03.26 2 ВВЕДЕНИЕ 1. Настоящая инструкция по применению версии 23.03.26 распространяется на медицинское изделие «Набор реагентов для качественного и количественного определения ДНК HBV в плазме крови человека методом ПЦР с детекцией в режиме «реального времени» (Amplitech HBV (R)) по ТУ 20.59.52-052-19926214-2025» (далее – набор). Краткое наименование набора: Amplitech HBV (R). Набор следует применять в соответствии с действующей версией инструкции по применению. Для удобства работы в лаборатории допускается использовать действующую версию краткого руководства по применению набора. 2. Вирус гепатита В (HBV) – ДНК-содержащий вирус из семейства Hepadnaviridae, который поражает печень. Метод ПЦР позволяет выявлять ДНК HBV в плазме крови в среднем через 30 дней после инфицирования, когда специфические антитела отсутствуют, что позволяет диагностировать заболевание на максимально ранних сроках. В некоторых случаях ДНК HBV является единственным маркером скрытой HBV-инфекции. Набор реагентов «Amplitech HBV (R)» позволяет выявлять и количественно измерять ДНК HBV. Amplitech HBV (R) Инструкция в.23.03.26 3 1 НАЗНАЧЕНИЕ Набор предназначен для качественного и количественного определения ДНК HBV в биологическом материале методом ПЦР с гибридизационно-флуоресцентной детекцией в режиме «реального времени». Материалом для проведения ПЦР- исследования служат образцы ДНК, экстрагированной из плазмы крови человека (ЭДТА-K2). Набор предназначен для лабораторной диагностики in vitro (выявление и количественное определение вируса гепатита В). Применение набора не зависит от популяционных и демографических аспектов. 2 ОБЛАСТЬ ПРИМЕНЕНИЯ Набор предназначен для применения в клинической лабораторной диагностике для выявления и количественного определения вируса гепатита В. Отрицательные результаты исследования с помощью набора не исключают возможность инфицирования HBV и не должны использоваться в качестве единственной основы для принятия решения о лечении пациента. Отрицательные результаты исследования должны сочетаться с клиническими наблюдениями, историей болезни и эпидемиологической информацией. Набор может применяться в клинико-диагностических лабораториях. 3 ПРОТИВОПОКАЗАНИЯ К ПРИМЕНЕНИЮ Противопоказания к применению набора отсутствуют. 4 РИСКИ ПРИМЕНЕНИЯ, ПОБОЧНЫЕ ЭФФЕКТЫ При применении набора по назначению, в соответствии с данной инструкцией риски и побочные эффекты отсутствуют. 5 СОСТАВ Состав набора1 указан в таблице 1. Таблица 1 Состав набора Номинальный Компонент Кол-во Внешний вид объём, мл Планшет со Смесью HBV (R) 96-луночный делимый планшет, (Реакционная ПЦР-смесь со заклеенный защитной плёнкой, с специфическими праймерами, ‒ 1 шт. реагентом в виде геля (от светло- флуоресцентно-мечеными зондами, розового до красного цвета) на термостабильной ДНК-полимеразой, дне пробирок дНТФ, солями) Плёнки для планшета ‒ 2 шт. Клейкие плёнки ВК O (Раствор, содержащий генно-инженерную 0,96 1 пробирка Прозрачная бесцветная жидкость конструкцию с ДНК внутреннего контроля) ОК 4,8 2 пробирки Прозрачная бесцветная жидкость (Буферный раствор) 1 Набор упакован в коробку из картона. Amplitech HBV (R) Инструкция в.23.03.26 4 Номинальный Компонент Кол-во Внешний вид объём, мл ПК1 HBV (Раствор, содержащий генно-инженерную 4,8 2 пробирки Прозрачная бесцветная жидкость конструкцию с фрагментом ДНК HBV) ПК2 HBV (Раствор, содержащий генно-инженерную 4,8 2 пробирки Прозрачная бесцветная жидкость конструкцию с фрагментом ДНК HBV) В бумажном виде и электронном Инструкция по применению ‒ 1 шт. виде по адресу: http://www.amplitech.ru/resources/ Краткое руководство ‒ 1 шт. В бумажном виде В электронном виде2 по адресу: Паспорт ‒ 1 шт. http://www.amplitech.ru/quality/ Набор рассчитан на проведение исследования 96 образцов, включая контроли. 6 ПРИНЦИП МЕТОДА Исследование с помощью набора проводится методом ПЦР с гибридизационно- флуоресцентной детекцией продуктов амплификации в режиме «реального времени». Детекция продуктов ПЦР и раздельное выявление ДНК HBV и внутреннего контроля (ВК) обеспечивается применением в реакционной смеси для ПЦР флуоресцентно-меченых олигонуклеотидов, сигналы от которых регистрируются по различным каналам флуоресцентной детекции (см. таблицу 2). Таблица 2 Каналы детекции мишеней Канал детекции сигнала Мишень Область амплификации от флуорофора R6G3 ДНК HBV Core protein Искусственно синтезированная Cy5 ДНК ВК последовательность Линейная зависимость между исходной концентрацией ДНК-мишени в исследуемом образце и циклом начала экспоненциального увеличения флуоресцентного сигнала (порогового цикла, Ct) позволяет определять концентрацию ДНК HBV в образце относительно положительного контроля ПК1 HBV (образца с известной концентрацией ДНК-мишени), который проходит этап экстракции ДНК и ПЦР одновременно с исследуемыми образцами. Определение концентрации ДНК производится в соответствии с заданным значением концентрации ПК1 HBV и полученными значениями Ct для ПК1 HBV и исследуемых образцов. 6.1 Прослеживаемость значения положительного контроля ПК1 HBV Концентрация клонированного фрагмента ДНК HBV в ПК1 HBV составляет 5 lg ± 0,3 lg МЕ/мл. Концентрация ПК1 HBV определяется с помощью установленной производителем методики выполнения измерений относительно стандартного 2 В случае отсутствия доступа к Интернету обратитесь в службу технической поддержки по телефону (495) 374-13-46 для запроса о предоставлении бумажной версии паспорта. 3 Сигнал от флуорофора R6G регистрируется по каналу детекции сигнала от аналогичных флуорофоров HEX и JOE. Amplitech HBV (R) Инструкция в.23.03.26 5 образца предприятия (СОП), метрологически прослеженного до международного стандарта ВОЗ (5-й Международный стандарт ВОЗ для ДНК вируса гепатита В (HBV) для тестирования нуклеиновых кислот (NAT) (код NIBSC: 22/120)). 6.2 Характеристика положительного контроля ПК2 HBV Концентрация клонированного фрагмента ДНК HBV в ПК2 HBV составляет 4 lg ± 0,3 lg МЕ/мл. Концентрация ПК2 HBV определяется с помощью установленной производителем методики выполнения измерений относительно ПК1 HBV с аттестованным значением концентрации. 7 НЕОБХОДИМОЕ ОБОРУДОВАНИЕ И МАТЕРИАЛЫ Для работы с набором требуются оборудование и материалы, указанные в таблице 3. Таблица 3 Оборудование и материалы, необходимые для работы с набором Необходимое оборудование и материалы в случае автоматизированной подготовки к ручной подготовки к проведению ПЦР проведению ПЦР • автоматическая станция пробоподготовки • ПЦР-бокс; «Amplitech E1» («Амплитек», Россия; РУ № РЗН • Вортекс; 2022/16981); • дозаторы переменного объёма, механические • программируемый амплификатор с или электронные, с возможностью дозирования от системой детекции флуоресцентного сигнала в 10 до 200 мкл; режиме «реального времени» (ДТпрайм (ООО • штатив для ПЦР-планшетов; «НПО ДНК-Технология»; РУ № ФСР • программируемый амплификатор с системой 2011/10229), CFX96 (Bio-Rad Laboratories, Inc.; детекции флуоресцентного сигнала в режиме РУ № ФСЗ 2008/03399), Applied Biosystems «реального времени» (ДТпрайм (ООО «НПО ДНК- QuantStudio 5 (Life Technologies Holdings Pte. Технология»; РУ № ФСР 2011/10229), CFX96 (Bio- Ltd.; РУ № РЗН 2019/8446)); Rad Laboratories, Inc.; РУ № ФСЗ 2008/03399), • холодильник с камерой, поддерживающей Applied Biosystems QuantStudio 5 (Life Technologies температуру от 2 °С до 8 °С; Holdings Pte. Ltd.; РУ № РЗН 2019/8446)); • ёмкость для сброса использованных • холодильник с камерой, поддерживающей материалов; температуру от 2 °С до 8 °С; • перчатки медицинские, одноразовые, • наконечники для дозаторов переменного неопудренные. объёма, с фильтром, объёмом до 100 и 200 мкл, одноразовые, свободные от ДНКаз; • ёмкость для сброса использованных материалов; • перчатки медицинские, одноразовые, неопудренные. Amplitech HBV (R) Инструкция в.23.03.26 6 8 МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ Класс потенциального риска применения набора (согласно Приказу Министерства здравоохранения РФ № 4н от 06.06.2012) – 3. Работа должна проводиться в лаборатории, использующей методы амплификации нуклеиновых кислот для исследования материала, с соблюдением требований ГОСТ Р ИСО 15190 «Лаборатории медицинские. Требования безопасности», МУ 1.3.2569- 09 «Организация работы лабораторий, использующих методы амплификации нуклеиновых кислот при работе с материалом, содержащим микроорганизмы I–IV групп патогенности», СанПиН 3.3686-21 «Санитарно-эпидемиологические требования по профилактике инфекционных болезней». При работе необходимо всегда выполнять следующие требования: • Применять набор по назначению в соответствии с данной инструкцией. Отклонение от прописанных процедур и порядка действий может привести к получению недостоверных результатов исследования. • К работе с набором допускается только персонал, обученный методам молекулярной диагностики и правилам работы в клинико-диагностической лаборатории с освоением методов безопасной работы с патогенными биологическими агентами в соответствии с СанПиН 3.3686-21 (раздел IV). • Рассматривать исследуемые образцы как инфекционно-опасные, организовывать работу и хранение в соответствии с СанПиН 3.3686-21. • Утилизировать реагенты и плёнки для планшета (использованные, неиспользованные, пришедшие в негодность в связи с истечением срока годности и/или несоблюдением регламентированного режима хранения, транспортирования и применения) внешнюю упаковку набора, эксплуатационную документацию в соответствии с требованиями СанПиН 2.1.3684-21 «Санитарно-эпидемиологические требования к содержанию территорий городских и сельских поселений, к водным объектам, питьевой воде и питьевому водоснабжению, атмосферному воздуху, почвам, жилым помещениям, эксплуатации производственных, общественных помещений, организации и проведению санитарно-противоэпидемических (профилактических) мероприятий» к утилизации медицинских отходов класса Г. • Не открывать пробирки с продуктами амплификации в процессе их сбора и утилизации. • Утилизировать биологический материал, а также расходные материалы и инструменты, загрязнённые биологическим материалом, в соответствии с требованиями СанПиН 2.1.3684-21. • Не использовать набор, если нарушена внутренняя упаковка или внешний вид реагента не соответствует описанию, указанному в таблице 1. • Не использовать набор, если не соблюдались условия транспортирования и хранения согласно инструкции. • Не использовать набор по истечении срока годности. • Использовать отдельный для каждого образца/реагента одноразовый Amplitech HBV (R) Инструкция в.23.03.26 7 наконечник с фильтром. • Использовать защитную одежду в соответствии с МУ 1.3.2569-09. Все операции проводить только в одноразовых неопудренных перчатках для исключения контакта с организмом человека. • Не есть, не пить и не курить в процессе использования набора. Избегать контакта реагентов с кожей, глазами и слизистой оболочкой. Не глотать. Реагенты, входящие в состав набора, содержат натрия азид в концентрации не более 0,05 %, поэтому не классифицируются как опасные для здоровья человека и окружающей среды. При контакте немедленно промыть поражённое место большим количеством воды и при плохом самочувствии обратиться за медицинской помощью. При попадании внутрь рвоту не вызывать, прополоскать рот водой, обратиться к врачу при плохом самочувствии. Использование набора по назначению и соблюдение вышеперечисленных мер предосторожности исключает негативное воздействие на организм человека. 9 ИССЛЕДУЕМЫЙ МАТЕРИАЛ Набор предназначен для исследования только плазмы крови человека. Взятие, предварительную обработку, транспортирование и хранение биологического материала следует проводить в соответствии с: • МУ 1.3.2569-09 «Организация работы лабораторий, использующих методы амплификации нуклеиновых кислот при работе с материалом, содержащим микроорганизмы I-IV групп патогенности»; • требованиями, перечисленными в таблице 4. Таблица 4 Требования к взятию, предварительной обработке, условиям транспортирования и хранения исследуемого материала Взятие и предобработка Условия транспортирования и хранения Взятие цельной крови Взятие цельной крови провести натощак или через 3 ч после приёма пищи в пробирку с антикоагулянтом При температуре от 2 °С до 8 °С не более (раствором ЭДТА-K2). суток. ВНИМАНИЕ! Недопустимо использовать гепарин в ВНИМАНИЕ! Недопустимо замораживание качестве антикоагулянта. цельной крови. Тщательно перемешать кровь с антикоагулянтом, несколько раз перевернув пробирку. Предобработка для получения плазмы • При температуре от 2 °С до 8 °С не более Пробирки с цельной кровью центрифугировать 5 суток; 20 мин при 800–1600 х g при комнатной температуре. • При температуре минус 20 °С не более Затем отобрать плазму в количестве не менее 1 мл с года; использованием отдельного для каждого образца • Допускается однократное замораживание наконечника с фильтром в стерильные одноразовые материала. пробирки. Amplitech HBV (R) Инструкция в.23.03.26 8 10 ПРОВЕДЕНИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ 10.1 Автоматизированная экстракция ДНК и подготовка к проведению ПЦР с использованием автоматической станции «Amplitech E1». Проведение ПЦР и детекции ВНИМАНИЕ! Перед началом работы необходимо ознакомиться с руководством по эксплуатации автоматической станции «Amplitech E1». Экстракцию ДНК из исследуемого материала и контролей, а также внесение образцов экстрагированной ДНК в пробирки с реакционной Смесью HBV (R) провести с использованием автоматической станции «Amplitech E1» (ООО «Амплитек») согласно руководству по её эксплуатации и процедуре, указанной ниже. Для экстракции ДНК необходимо использовать форму выпуска 1 набора реагентов «НК- 400 (R)» (ООО «Амплитек»). 10.1.1 Перемешать содержимое пробирок с реагентами ВК, ОК, ПК1 HBV и ПК2 HBV и осадить капли на вортексе. 10.1.2 Подготовить картридж с реагентами из набора «НК-400 (R)» и внести в него исследуемые образцы и контроли согласно инструкции по его применению. Реагент ВК внести в объеме 10 мкл в точку. Контроли ОК, ПК1 HBV и ПК2 HBV внести не менее чем в одном повторе в объеме равном объему исследуемых образцов (400 или 800 мкл). 10.1.3 Установить на рабочий стол автоматической станции картридж с внесёнными исследуемыми образцами и контролями, а также расходные материалы, входящие в состав набора «НК-400 (R)», согласно руководству по эксплуатации станции. 10.1.4 Отрезать от планшета необходимое количество пробирок со Смесью HBV (R) и снять с них защитную плёнку. Примечание – Неиспользованные пробирки Планшета со Смесью HBV (R) необходимо упаковать в пакет с силикагелем, удалить лишний воздух и плотно закрыть застёжку Zip-Lock по всей длине. 10.1.5 Установить отрезанные пробирки со Смесью HBV (R) на рабочий стол автоматической станции в адаптер для контейнеров для элюата. 10.1.6 Запустить выполнение следующих протоколов согласно руководству по эксплуатации станции «Amplitech E1»: а) протокола экстракции ДНК с использованием штрих-кода для протокола, указанного в кратком руководстве по применению набора «НК-400 (R)»; б) протокола подготовки к проведению ПЦР с использованием штрих-кода для протокола, указанного в кратком руководстве по применению набора «Amplitech HBV (R)». ВНИМАНИЕ! Запуск протокола необходимо провести в течение 30 минут после установки всех реагентов на рабочем столе станции. 10.1.7 После завершения протоколов вынуть адаптер с пробирками и заклеить их плёнкой, входящей в состав набора «Amplitech HBV (R)». Элюат, внесённый в пробирки, содержит полученную в процессе экстракции ДНК. Amplitech HBV (R) Инструкция в.23.03.26 9 ВНИМАНИЕ! Пробирки, заклеенные плёнкой, не переворачивать и не встряхивать, чтобы избежать разбрызгивания содержимого по стенкам пробирок и попадания их на защитную плёнку. Пробирки с реакционной смесью с внесенным элюатом не подлежат хранению. Необходимо незамедлительно произвести запуск реакции амплификации. 10.1.8 Запрограммировать амплификатор для проведения ПЦР и детекции флуоресцентного сигнала согласно инструкции по его применению по программе, указанной в таблице 5. Таблица 5 Программа ПЦР и детекции при подготовке к проведению ПЦР с использованием автоматической станции «Amplitech E1» Детекция по каналам для Количество Цикл Температура, °С Время флуорофоров циклов 1 50 15 мин – 1 2 95 2 мин – 1 95 10 с – 3 42 60 20 с R6G4, Cy5 Примечания 1) При программировании амплификатора указать объём реакции: 50 мкл. 2) При одновременном проведении в одном приборе тестов только для выявления ДНК допускается исключить из указанной программы цикл «50 °С – 15 мин» для экономии времени. 3) Детекция может назначаться по другим каналам, помимо указанных, при одновременном проведении в одном приборе нескольких тестов с использованием указанной программы. 10.1.9 Поместить пробирки с реакционной смесью и элюатом в амплификатор и запустить программу. 10.2 Экстракция ДНК и ручная подготовка к проведению ПЦР. Проведение ПЦР и детекции 10.2.1 Провести экстракцию ДНК из исследуемого материала и контролей с использованием набора реагентов «НК-400 (R)» (ООО «Амплитек») согласно инструкции по его применению, с учётом требований к объёмам реагентов, указанных в таблице 6. Таблица 6 Требования к объёмам реагентов при экстракции ДНК Реагент Объём реагента для одного образца ВК О 10 мкл 70 мкл при объёме образца 400 мкл/ Реагент для элюции ДНК 100 мкл при объёме образца 800 мкл ВНИМАНИЕ! Каждая группа экстрагируемых образцов должна сопровождаться постановкой контролей ОК, ПК1, ПК2 не менее чем в одном повторе. Перед использованием контролей перемешать их и осадить капли на вортексе. 4 Сигнал от флуорофора R6G регистрируется по каналу детекции сигнала от аналогичных флуорофоров HEX и VIC. Amplitech HBV (R) Инструкция в.23.03.26 10 10.2.2 Отрезать от планшета необходимое количество пробирок со Смесью HBV (R). Снять с отрезанных пробирок защитную плёнку. Для удобства внесения образцов рекомендуется установить отрезанные пробирки в штатив для ПЦР-планшетов. Примечание – Неиспользованные пробирки Планшета со Смесью HBV (R) необходимо упаковать в пакет с силикагелем, удалить лишний воздух и плотно закрыть застёжку Zip-Lock по всей длине. 10.2.3 Внести в подготовленные пробирки с реакционной смесью по 45 мкл образцов ДНК, полученных в результате экстракции из исследуемых образцов и контролей (ОК, ПК1, ПК2). При внесении ДНК необходимо избегать попадания сорбента в реакционную смесь. Перемешать содержимое пипетированием, не допуская пузырьков воздуха. 10.2.4 После внесения образцов ДНК заклеить пробирки плёнкой, входящей в состав набора «Amplitech HBV (R)». ВНИМАНИЕ! Пробирки, заклеенные плёнкой, не переворачивать и не встряхивать, чтобы избежать разбрызгивания содержимого по стенкам пробирок и попадания его на защитную плёнку. Пробирки с реакционной смесью с внесенным элюатом не подлежат хранению. Необходимо незамедлительно произвести запуск реакции амплификации. 10.2.5 Запрограммировать амплификатор для проведения ПЦР и детекции флуоресцентного сигнала согласно инструкции по его применению по программе, указанной в таблице 7. Таблица 7 Программа ПЦР и детекции при ручной подготовке к проведению ПЦР Детекция по каналам для Количество Цикл Температура, °С Время флуорофоров циклов 1 50 15 мин – 1 2 95 15 мин – 1 95 10 с – 3 42 60 20 с R6G5, Cy5 Примечания 1) При программировании амплификатора указать объём реакции: 50 мкл. 2) При одновременном проведении в одном приборе тестов только для выявления ДНК допускается исключить из указанной программы цикл «50 °С – 15 мин» для экономии времени. 3) Детекция может назначаться по другим каналам, помимо указанных, при одновременном проведении в одном приборе нескольких тестов с использованием указанной программы. 10.2.6 Поместить пробирки с реакционной смесью и элюатом в амплификатор и запустить программу. 5 Сигнал от флуорофора R6G регистрируется по каналу детекции сигнала от аналогичных флуорофоров HEX и VIC. Amplitech HBV (R) Инструкция в.23.03.26 11 11 УЧЁТ И ИНТЕРПРЕТАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ 11.1 Учёт результатов осуществляется с помощью программного обеспечения используемого амплификатора согласно инструкции по его применению. Рекомендуется выставлять пороговую линию на уровне 10 % от разгорания положительного контроля. Кривые флуоресценции, пересекающие пороговую линию, должны иметь сигмообразную форму. 11.2 Проверить наличие значений Ct для исследуемого образца по каналам R6G, Cy5. 11.3 При наличии значений Ct по каналу R6G рассчитать концентрацию ДНК HBV в международных единицах измерения в одном миллилитре (МЕ/мл) согласно формуле (1). C ПК1 С = (1) ДНК HBV 2 (ΔCt - ΔCt ВК) где С – концентрация ДНК HBV, МЕ/мл; ДНК HBV C – концентрация ДНК HBV в ПК1, МЕ/мл (значение концентрации указано в ПК1 кратком руководстве для используемого лота набора); ΔCt – разность между значением порогового цикла (Ct) для исследуемого образца и значением Ct для ПК1 по каналу R6G; ΔCt ВК – разность между значением Ct для исследуемого образца и значением Ct для ПК1 по каналу Cy5. 11.4 Провести интерпретацию результатов для исследуемых образцов согласно таблице 8. Таблица 8 Интерпретация результатов для исследуемых образцов Результат Интерпретация Качественное определение ДНК HBV По каналу Cy5 значение Ct определено не больше граничного6. ДНК HBV в образце не выявлена. По каналу R6G значение Ct отсутствует. По каналу Cy5 значение Ct определено или отсутствует. В образце выявлена ДНК HBV. По каналу R6G определено значение Ct. По каналу Cy5 значение Ct отсутствует или определено больше граничного. Невалидный результат По каналу R6G значение Ct отсутствует. Количественное определение ДНК HBV По каналу Cy5 значение Ct определено не больше ДНК HBV в образце не выявлена. граничного. По каналу R6G значение Ct отсутствует. ДНК HBV в образце выявлена в Рассчитано значение концентрации ДНК HBV, концентрации в пределах укладывающееся в диапазон измерения набора. диапазона измерения набора. ДНК HBV в образце выявлена в Рассчитано значение концентрации ДНК HBV, не концентрации вне пределов укладывающееся в диапазон измерения набора. диапазона измерения набора. По каналу Cy5 значение Ct отсутствует или определено больше граничного. Невалидный результат По каналу R6G значение Ct отсутствует. 6 Граничные значения Ct указаны в кратком руководстве по применению набора. Amplitech HBV (R) Инструкция в.23.03.26 12 Результат исследования считают достоверным, если получены валидные результаты для контролей в соответствии с таблицей 9. Таблица 9 Критерии оценки для контролей Контроль Норма По каналу Cy5 значение Ct определено не больше граничного7. ОК По каналу R6G значение Ct отсутствует. ПК1 По каналам R6G, Cy5 значение Ct определено не больше граничного. По каналам R6G, Cy5 значение Ct определено не больше граничного. Рассчитанное значение8 концентрации ПК2 укладывается в диапазон ПК2 ±0,5 lg относительно значения, указанного в кратком руководстве для используемого лота набора. 12 ВОЗМОЖНЫЕ ОШИБКИ Рекомендации по устранению возможных ошибок, получаемых для исследуемых образцов и контролей в процессе исследования с помощью набора, указаны в таблице 10. Таблица 10 Рекомендации по устранению ошибок Возможная Ошибка причина Рекомендации по устранению возникновения Для ПК1 значение Ct по каналу R6G и/или Cy5 отсутствует или определено больше граничного7. Для ПК2 значение концентрации Некорректное Повторить исследование для всех определено вне заданного проведение экстракции образцов, начиная с этапа экстракции ДНК. диапазона. ДНК и/или ПЦР. Для ОК и/или ПК2 по каналу Cy5 значение Ct отсутствует или определено больше граничного. Контаминация Предпринять меры по выявлению и реагентов или Для ОК по каналу R6G определено ликвидации источника контаминации и исследуемых образцов значение Ct. повторить исследование для всех образцов, продуктами начиная с этапа экстракции ДНК. амплификации. Невалидный результат для Повторить исследование данного Некорректное исследуемого образца (значение исследуемого образца, начиная с этапа проведение экстракции Ct по каналу Cy5 отсутствует или экстракции ДНК. В случае ДНК. определено больше граничного, воспроизводимого результата Наличие в образце по каналу R6G значения Ct рекомендуется повторное взятие и ингибиторов ПЦР. отсутствуют). исследование биологического материала. Проверить правильность выбранного Для исследуемого уровня пороговой линии или параметров Некорректный выбор образца/контролей определено расчёта базовой линии. Если результат уровня пороговой значение порогового цикла, при получен при правильном уровне пороговой линии или параметров этом на графике флуоресценции линии (базовой линии), требуется повторно расчёта базовой отсутствует участок характерного провести амплификацию и детекцию для линии. экспоненциального подъёма этого образца или, в случае некорректного Некорректное (график представляет собой вида графика для контроля, амплификацию проведение ПЦР. приблизительно прямую линию). и детекцию для всех исследуемых образцов и контролей 7 Граничные значения Ct указаны в кратком руководстве по применению набора. 8 Концентрация ПК2 рассчитывается по формуле (1), как для исследуемого образца. Amplitech HBV (R) Инструкция в.23.03.26 13 13 КОНТРОЛЬ КАЧЕСТВА 13.1 Контроли, используемые в процессе исследования Результаты исследования контролей должны соответствовать критериям оценки, указанным в разделе 11. 13.1.1 Отрицательный и положительные контроли Каждая группа экстрагируемых образцов должна включать контрольные образцы: • ОК для выявления контаминации в процессе проведения исследования; • ПК1 HBV для контроля корректного прохождения исследования, а также для количественного определения ДНК HBV; • ПК2 HBV для контроля корректноcти расчёта концентрации ДНК HBV. 13.1.2 Внутренний контроль Для контроля качества экстракции ДНК и оценки влияния ингибиторов на результаты амплификации используется экзогенный ВК, который добавляется на этапе экстракции ДНК в каждый исследуемый образец и контроли. Отсутствие результатов амплификации для ВК и одновременно для ДНК HBV свидетельствует о присутствии ингибиторов ПЦР в образце или некорректном проведении экстракции ДНК. 13.2 Мониторинг лаборатории на наличие контаминации Для выявления возможной контаминации лаборатории продуктами амплификации, исследуемыми и контрольными образцами рекомендуется раз в месяц исследовать смывы с рабочих поверхностей лабораторной мебели, оборудования и поверхностей помещений согласно процедуре, указанной в МУ 1.3.2569-09. При обнаружении контаминации необходимо провести мероприятия по её устранению согласно указаниям, описанным в МУ 1.3.2569-09. 13.3 Внутренний контроль качества лабораторных исследований Рекомендуется проводить контроль качества выполнения исследований с использованием панелей контрольных образцов, предназначенных для проведения внутреннего и внешнего контролей качества лабораторных исследований по обнаружению и количественному определению ДНК HBV, либо сравнительным исследованием с использованием зарегистрированных в РФ наборов реагентов для качественного и количественного определения ДНК HBV в биологическом материале методом ПЦР. Amplitech HBV (R) Инструкция в.23.03.26 14 14 ФУНКЦИОНАЛЬНЫЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ НАБОРА 14.1 Предел обнаружения Предел обнаружения набора составляет: - 7,4 МЕ ДНК HBV в 1 мл исследуемого материала (95 % ДИ: 3,17–7,89 МЕ/мл) при экстракции из 400 мкл плазмы крови; - 3,7 МЕ ДНК HBV в 1 мл исследуемого материала (95 % ДИ: 1,86–4,07 МЕ/мл) при экстракции из 800 мкл плазмы крови. 14.2 Диапазон измерения и предел измерения Диапазон измерения набора составляет: - от 22,2 до 1 000 000 000 МЕ ДНК HBV в 1 мл исследуемого материала при экстракции из 400 мкл плазмы крови; - от 11,1 до 1 000 000 000 МЕ ДНК HBV в 1 мл исследуемого материала при экстракции из 800 мкл плазмы крови. Предел измерения набора совпадает с нижней границей диапазона измерения набора. 14.3 Аналитическая специфичность Аналитическая специфичность набора оценивалась при тестировании микроорганизмов, указанных в таблице 11, и геномной ДНК человека. НК микроорганизмов исследовалась в концентрации не менее 1∙106 копий/мл, геномная ДНК человека - в концентрации 1 мкг/мл. По итогам тестирования ложноположительных результатов выявлено не было. Таблица 11 Микроорганизмы, используемые для оценки аналитической специфичности Наименование Наименование Наименование Staphylococcus aureus CMV HIV Staphylococcus epidermidis EBV HHV6 Staphylococcus saprophyticus HAV HSV 1 типа Streptococcus agalactiae HСV HSV 2 типа Streptococcus pyogenes HDV VZV 14.3.1 Потенциально интерферирующие вещества Потенциально интерферирующие вещества (ингибиторы ПЦР) и их максимальные концентрации в образце, для которых оценивалось их ингибирующее влияние на ПЦР, перечислены в таблице 12. Amplitech HBV (R) Инструкция в.23.03.26 15 Таблица 12 Потенциально интерферирующие вещества Концентрация Обоснование Активный Тип Интерферент вещества в исследованной компонент интерферента образце концентрации Гемоглобин, Объём в образце в Эндогенная Цельная кровь холестерин, 10 % v/v условиях «наихудшего субстанция триглицериды случая» Гепарин Гепарин 0,15 МЕ/мл Концентрация в Антикоагулянт вакуумной пробирке ЭДТА-К2 ЭДТА-К2 0,5 мМ/мл Интерферон Лайфферон 500 МЕ/мл Двукратное альфа-2b Препараты, превышение назначаемые Зеффикс Ламивудин 0,02 мг/мл максимальной при терапии Энтекавир гепатитов терапевтической Сандоз Энтекавир 0,1 мг/мл концентрации в плазме Наличие возможного ингибирующего эффекта оценивалось путём проведения процедуры экстракции ДНК9 из образцов биологического материала, в которые добавлялись потенциальные интерференты в концентрациях согласно таблице 12 и стандартный образец предприятия, содержащий ДНК HBV в концентрации 20 МЕ/мл. Далее с экстрагированными образцами проводили ПЦР с детекцией в режиме «реального времени» с использованием набора реагентов «Amplitech HBV (R)». По результатам оценки было определено вещество (гепарин), ингибирующее ПЦР, а также показано, что влияние остальных испытанных веществ в концентрациях согласно таблице 12 на ПЦР, проводимую с использованием набора «Amplitech HBV (R)», отсутствует. 14.4 Прецизионность измерения Коэффициент вариации повторяемости CV значений концентрации, п характеризующий внутрисерийную повторяемость измерений с использованием набора, не превышает 5 %. Коэффициент вариации воспроизводимости CV значений концентрации, в характеризующий межсерийную воспроизводимость измерений с использованием набора, не превышает 10 %. 14.5 Правильность измерения Систематическая погрешность, характеризующая правильность измерения с использованием набора, не превышает 15 %. 9 Экстракция проводилась с использованием набора реагентов «НК-400 (R)» (ООО «Амплитек»). Amplitech HBV (R) Инструкция в.23.03.26 16 14.6 Диагностические характеристики Значения диагностической чувствительности (ДЧ) и диагностической специфичности (ДС) набора с доверительной вероятностью 95 % указаны в таблице 13. Таблица 13 Диагностические характеристики Объём образца при Количество образцов ДЧ, % ДС, % экстракции, мкл положит. отрицат. 400 112 170 97,4 – 100 98,3 – 100 800 105 170 97,2 – 100 98,3 – 100 14.7 Корреляция Корреляция экспериментальных значений концентраций, полученных при исследовании образцов биологического материала с использованием набора реагентов «Amplitech HBV (R)» и референтного набора реагентов, представлена на рисунке 1. Рисунок 1 Amplitech HBV (R) Инструкция в.23.03.26 17 15 УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ, ТРАНСПОРТИРОВАНИЯ И ЭКСПЛУАТАЦИИ НАБОРА 15.1 Срок годности Срок годности набора составляет 12 месяцев от даты изготовления. После вскрытия реагенты ВК О, ОК, ПК1 HBV, ПК2 HBV использовать до истечения срока годности набора. Планшет со Смесью HBV (R) после снятия защитной пленки хранить не более 30 минут. Не допускается смешивать компоненты наборов разных серий и использовать набор по истечении срока годности. 15.2 Хранение Набор в упаковке предприятия-изготовителя хранить при температуре от 2 °С до 8 °С и относительной влажности воздуха от 25 до 75 % в защищённом от солнечного света месте. Планшет со Смесью HBV (R) беречь от влаги. После транспортирования допускается хранить набор не более 5 суток при температуре от 8 °С до 25 °С. Реагенты после вскрытия хранить в тех же условиях, что и реагенты до вскрытия. 15.3 Транспортирование Набор транспортировать при температуре от 2 °С до 8 °С всеми видами крытых транспортных средств в термоконтейнерах с хладоэлементами или в авторефрижераторах. Допускается транспортировать набор при температуре от 8 °С до 25 °С не более 10 суток. 15.4 Эксплуатация Реагенты, входящие в состав набора, готовы к использованию. Повторное применение использованных для исследования реагентов не допускается. Исследование образцов с использованием набора должно проводиться при температуре от 18 °С до 25 °С и относительной влажности воздуха от 25 % до 75 %. Amplitech HBV (R) Инструкция в.23.03.26 18 16 ПЕРЕЧЕНЬ СОКРАЩЕНИЙ В настоящей инструкции применены следующие сокращения: Ct − cycle threshold (пороговый цикл) в. − версия ВК − внутренний контроль ДИ − доверительный интервал ДНК − дезоксирибонуклеиновая кислота ДНКаза − дезоксирибонуклеаза ОК − отрицательный контроль ПК − положительный контроль ПЦР − полимеразная цепная реакция 17 ПЕРЕЧЕНЬ ПРИМЕНЯЕМЫХ НАЦИОНАЛЬНЫХ СТАНДАРТОВ ГОСТ Р 51088-2013 Медицинские изделия для диагностики ин витро. Реагенты, наборы реагентов, тест-системы, контрольные материалы, питательные среды. Требования к изделиям и поддерживающей документации ГОСТ Р 51352-2013 Медицинские изделия для диагностики ин витро. Методы испытаний ГОСТ Р ИСО 18113-1-2024 Медицинские изделия для диагностики in vitro. Информация, предоставленная изготовителем (маркировка). Часть 1. Термины, определения и общие требования ГОСТ Р ИСО 18113-2-2024 Медицинские изделия для диагностики in vitro. Информация, предоставленная изготовителем (маркировка). Часть 2. Реагенты для диагностики in vitro для профессионального использования ГОСТ Р ИСО 23640-2015 Изделия медицинские для диагностики in vitro. Оценка стабильности реагентов для диагностики in vitro ГОСТ Р ИСО 15223-1-2023 Изделия медицинские. Символы, применяемые для передачи информации, предоставляемой изготовителем. Часть 1. Основные требования Amplitech HBV (R) Инструкция в.23.03.26 19 18 ГАРАНТИИ ПРОИЗВОДИТЕЛЯ Производитель гарантирует соответствие характеристик набора требованиям, указанным в технической и эксплуатационной документации, в течение указанного срока годности при соблюдении условий его транспортирования, хранения и применения. Рекламации на качество набора направлять в адрес производителя: ООО «Амплитек», 109235, Москва, ул. 1-я Курьяновская, д. 34, стр. 8, этаж 1 пом. II ком. 42, тел. (495) 374-13-46, e-mail: support@amplitech.ru. Сообщения о неблагоприятных событиях (инцидентах), возникших при работе с набором и не указанных в данной инструкции, следует направлять производителю по указанному выше адресу и в уполномоченный регуляторный орган согласно действующему законодательству. 19 ТЕХНИЧЕСКАЯ ПОДДЕРЖКА Консультацию по вопросам по работе с набором и его качеству можно получить по контактам, указанным на официальном сайте производителя: www.amplitech.ru. 20 СИМВОЛЫ, ИСПОЛЬЗУЕМЫЕ В ДОКУМЕНТАЦИИ ПРОИЗВОДИТЕЛЯ Изготовитель Код серии Дата изготовления Использовать до Медицинское изделие для Температурный диапазон диагностики in vitro Обратитесь к инструкции по Не допускать воздействия применению солнечного света Содержимого достаточно для Не допускать воздействия проведения <n> тестов влаги Номер по каталогу Диапазон влажности Общество с ограниченной ответственностью «Амплитек» (ООО «Амплитек»), Россия, 109235, Москва, ул. 1-я Курьяновская, д. 34, стр. 8, этаж 1 пом. II ком. 42 тел. (495) 374-13-46, www.amplitech.ru, e-mail: support@amplitech.ru Amplitech HBV (R) Инструкция в.23.03.26 20 Лист регистрации изменений Номера страниц Всего Изм. изменён- заменён- аннулиро- страниц в Номер документа Подпись Дата ных ных новых ванных документе Amplitech HBV (R) Инструкция 21 УТВЕРЖДАЮ Генеральный директор ООО «Амплитек» ________________ А.В. Ходяков ____.____.2026 НАБОР РЕАГЕНТОВ ДЛЯ КАЧЕСТВЕННОГО И КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ ДНК HBV В ПЛАЗМЕ КРОВИ ЧЕЛОВЕКА МЕТОДОМ ПЦР С ДЕТЕКЦИЕЙ В РЕЖИМЕ «РЕАЛЬНОГО ВРЕМЕНИ» (AMPLITECH HBV (R)) ПО ТУ 20.59.52-052-19926214-2025 Краткое руководство Лист утверждения Заместитель генерального директора по науке ООО «Амплитек» _________________ А.С. Коновалов 23.03.2026 Научный сотрудник отдела разработки и адаптации продукции ООО «Амплитек» _________________ А.А. Филичева 23.03.2026 ООО «Амплитек», Россия, 109235, Москва, ул. 1-я Курьяновская, д. 34, стр. 8, этаж 1 пом. II ком. 42 тел. (495) 374-13-46, www.amplitech.ru Amplitech HBV (R) Набор реагентов для качественного и количественного определения ДНК HBV в плазме крови человека методом ПЦР с детекцией в режиме «реального времени» (Amplitech HBV (R)) по ТУ 20.59.52-052-19926214-2025 КРАТКОЕ РУКОВОДСТВО P030-0 хххх 96 РЕАГЕНТЫ Реагент Внешний вид Меры предосторожности Планшет со Гель от светло-розового до красного Реагенты содержат азид натрия в концентрации не более Смесью HBV (R) цвета на дне пробирок 0,05 % веществ, поэтому не классифицируются как опасные для здоровья человека и окружающей среды. При контакте ВК O немедленно промыть пораженное место большим количеством ОК воды и при плохом самочувствии обратиться за медицинской Прозрачная бесцветная жидкость помощью. При попадании внутрь рвоту не вызывать, ПК1 HBV прополоскать рот водой, обратиться к врачу при плохом ПК2 HBV самочувствии. Экстракция ДНК и подготовка к проведению ПЦР с использованием автоматической станции «Аmplitech Е1» Материал для исследования - плазма крови человека (К2 ЭДТА). Для экстракции ДНК использовать форму выпуска 1 набора реагентов «НК-400 (R)» (ООО «Амплитек»). ВНИМАНИЕ! Необходимо ознакомиться с руководством по эксплуатации станции «Amplitech E1» и кратким руководством к набору «НК-400 (R)». 1 Перемешать содержимое пробирок с реагентами ОК, ВК О, ПК1 HBV, ПК2 HBV. 2 Подготовить картридж с реагентами из набора «НК-400 (R)» и внести в него исследуемые образцы и контроли согласно краткому руководству к набору «НК-400 (R)». ВНИМАНИЕ! Каждая группа экстрагируемых образцов должна сопровождаться постановкой контролей ОК, ПК1, ПК2 не менее чем в одном повторе. 3 Установить на рабочий стол станции «Amplitech E1» картридж с внесёнными исследуемыми образцами и контролями, а также расходные материалы, входящие в состав набора «НК-400 (R)», согласно руководству по эксплуатации станции. 4 Отрезать от планшета необходимое количество пробирок со Смесью HBV (R) и снять с них защитную плёнку. Примечание – Неиспользованные пробирки Планшета со Смесью HBV (R) необходимо упаковать в пакет с силикагелем, удалить лишний воздух и плотно закрыть застёжку Zip-Lock по всей длине. 5 Установить отрезанные пробирки со Смесью HBV (R) на рабочий стол автоматической станции в адаптер для контейнеров для элюата. 6 Запустить выполнение протокола, последовательно считав штрих-коды: а) протокола экстракции ДНК, указанного в кратком руководстве набора «НК-400 (R)»; б) используемого ряда картриджа набора «НК-400 (R)»; в) протокола подготовки к проведению ПЦР, указанного ниже. ВНИМАНИЕ! Запуск протокола провести в течение 30 минут после установки реагентов на рабочем столе станции. 7 После завершения протоколов вынуть адаптер с пробирками и заклеить их плёнкой, входящей в состав набора «Amplitech HBV (R)». ВНИМАНИЕ! Пробирки, заклеенные плёнкой, не переворачивать и не встряхивать, чтобы избежать разбрызгивания содержимого по стенкам пробирок и попадания их на защитную плёнку. Amplitech HBV (R) КР в.23.03.26 1 | Цикл | Температура, °С | Время | | Детекция по каналам для | | | Количество | | | | | | | флуорофоров | | | циклов | | | 1 | 50 | 15 мин | – | | | 1 | | | | 2 | 95 | 2 мин | – | | | 1 | | | | 3 | 95 | 10 с | – | | | 42 | | | | | 60 | 20 с | R6G1, Cy5 | | | | | | | Цикл | Температура, °С | Время | | Детекция по каналам для | | | Количество | | | | | | | флуорофоров | | | циклов | | | 1 | 50 | 15 мин | – | | | 1 | | | | 2 | 95 | 15 мин | – | | | 1 | | | | 3 | 95 | 10 с | – | | | 42 | | | | | 60 | 20 с | R6G1, Cy5 | | | | | | 8 Пробирки с реакционной смесью с внесенным элюатом не подлежат хранению. Необходимо незамедлительно произвести запуск реакции амплификации по следующей программе. Примечания 1) При программировании амплификатора указать объём реакции: 50 мкл. 2) Детекция может назначаться по другим каналам, помимо указанных, при одновременном проведении в одном приборе нескольких тестов с использованием указанной программы. 3) При одновременном поведении в одном приборе тестов только для выявления ДНК допускается исключить из указанной программы цикл «50 °С – 15 мин» для экономии времени. 9 Поместить пробирки с реакционной смесью и элюатом в амплификатор и запустить программу. Экстракция ДНК и ручная подготовка к проведению ПЦР Материал для исследования - плазма крови человека (К2 ЭДТА). 1 Провести экстракцию ДНК с использованием набора реагентов «НК-400 (R)» (ООО «Амплитек») согласно краткому руководству к набору. Примечание – Элюцию провести в объёме 70 мкл при экстракции из 400 мкл образца и в объеме 100 мкл при экстракции из 800 мкл образца. ВНИМАНИЕ! Каждая группа экстрагируемых образцов должна сопровождаться постановкой контролей ОК, ПК1, ПК2 не менее чем в одном повторе. Перед использованием контролей перемешать их и осадить капли на вортексе. 2 Отрезать от планшета необходимое количество пробирок со Смесью HBV (R) и снять с них защитную плёнку. Примечание – Неиспользованные пробирки Планшета со Смесью HBV (R) необходимо упаковать в пакет с силикагелем, удалить лишний воздух и плотно закрыть застёжку Zip-Lock по всей длине. 3 Для удобства внесения образцов ДНК рекомендуется установить отрезанные пробирки в штатив для ПЦР-планшетов. 4 Внести в подготовленные пробирки с реакционной смесью по 45 мкл образцов ДНК, полученных в результате экстракции из исследуемых образцов и контролей. ВНИМАНИЕ! При внесении ДНК необходимо избегать попадания сорбента в реакционную смесь. ВНИМАНИЕ! Перемешать содержимое пипетированием, не допуская пузырьков воздуха. 5 После внесения образцов ДНК заклеить пробирки плёнкой, входящей в состав набора «Amplitech HBV (R)». ВНИМАНИЕ! Пробирки, заклеенные плёнкой, не переворачивать и не встряхивать, чтобы избежать разбрызгивания содержимого по стенкам пробирок и попадания их на защитную плёнку. 6 Пробирки с реакционной смесью с внесенным элюатом не подлежат хранению. Необходимо незамедлительно произвести запуск реакции амплификации по следующей программе. Примечания 1) При программировании амплификатора указать объём реакции: 50 мкл. 2) Детекция может назначаться по другим каналам, помимо указанных, при одновременном проведении в одном приборе нескольких тестов с использованием указанной программы. 3) При одновременном поведении в одном приборе тестов только для выявления ДНК допускается исключить из указанной программы цикл «50 °С – 15 мин» для экономии времени. 1 Сигнал от флуорофора R6G регистрируется по каналу детекции сигнала от аналогичных флуорофоров HEX и VIC. Amplitech HBV (R) КР в.23.03.26 2 | Контроль | Значение концентрации | | | | | МЕ/мл | | lg (МЕ/мл) | | ПК1 HBV | Х | Х,XX | | | ПК2 HBV | Х | Х,XX | | УЧЁТ И ИНТЕРПРЕТАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ. ВОЗМОЖНЫЕ ОШИБКИ 1 Учёт результатов осуществляется с помощью программного обеспечения используемого амплификатора согласно инструкции по его применению. Рекомендуется выставлять пороговую линию на уровне 10 % от разгорания положительного контроля. Кривые флуоресценции, пересекающие пороговую линию, должны иметь сигмообразную форму. 2 Проверить наличие значений Ct для образцов по каналам R6G2, Cy5. Провести интерпретацию результатов для исследуемых образцов согласно таблицам, приведённым ниже. Качественное определение ДНК HBV Значение порогового цикла (Ct) по каналу Интерпретация R6G2 (ДНК HBV) Cy5 (ДНК ВК) отсутствует ≤ 35 ДНК HBV в образце не выявлена. определено определено или отсутствует В образце выявлена ДНК HBV. отсутствует > 35 или отсутствует Невалидный результат 3 При наличии значений Ct по каналу R6G рассчитать концентрацию ДНК HBV в международных единицах измерения в одном миллилитре (МЕ/мл) согласно формуле (1). C ПК1 С = (1) ДНК HBV 2 (ΔCt - ΔCt ВК) где С – концентрация ДНК HBV, МЕ/мл; ДНК HBV C – концентрация ДНК HBV в ПК1, МЕ/мл; ПК1 ΔCt – разность между значением порогового цикла (Ct) для исследуемого образца и значением Ct для ПК1 по каналу R6G; ΔCt ВК– разность между значением Ct для исследуемого образца и значением Ct для ПК1 по каналу Cy5. Значения концентрации контролей указаны в таблице, приведённой ниже. . 4 Результат исследования считают достоверным, если получены валидные результаты для контролей в соответствии с таблицей, приведённой ниже. Значение порогового цикла (Ct) по каналу Значение концентрации, Контроль R6G2 Cy5 lg (МЕ/мл) ОК отсутствует ≤ 35 − ПК1 ≤ 29 ≤ 35 − ПК23 ≤ 32 ≤ 354 Х,ХХ ± 0,5 . 5 Возможные ошибки при проведении исследования и рекомендации по их устранению указаны в инструкции по применению данного набора. . 2 Сигнал от флуорофора R6G регистрируется по каналу детекции сигнала от аналогичных флуорофоров HEX и VIC. 3 Концентрация ПК2 рассчитывается по формуле (1), как для исследуемого образца. 4 Переменная информация, специфичная для лота, выделена цветом. Amplitech HBV (R) КР в.23.03.26 3 Лист регистрации изменений Номера страниц Всего Изм. изменён- заменён- аннулиро- страниц в Номер документа Подпись Дата ных ных новых ванных документе Amplitech HBV (R) КР 4 ООО «Амплитек», Россия, 109235, Москва, ул. 1-я Курьяновская, д. 34, стр. 8, этаж 1 пом. II ком. 42 тел. (495) 374-13-46, e-mail: support@amplitech.ru ПАСПОРТ № 2006-26 Amplitech HBV (R) Набор реагентов для качественного и количественного определения ДНК HBV в плазме крови человека методом ПЦР с детекцией в режиме «реального времени» (Amplitech HBV (R)) по ТУ 20.59.52-052-19926214-2025 P030-0 2006 2026-04-06 2027-04-06 при температуре от 2 °С до 8 °С всеми видами крытых транспортных средств в термоконтейнерах Условия транспор- с хладоэлементами или в авторефрижераторах. Допускается транспортировать набор при тирования: температуре от 8 °С до 25 °С не более 10 суток. в упаковке предприятия-изготовителя хранить при температуре от 2 °С до 8 °С и относительной влажности воздуха от 25 до 75 % в защищённом от солнечного света месте. Планшет со Смесью Условия хранения: HBV (R) беречь от влаги. После транспортирования допускается хранить набор не более 5 суток при температуре от 8 °С до 25 °С. Контроль качества набора проведён по ТУ 20.59.52-052-19926214-2025. Состав набора и внешний вид компонентов Лот ком- Норма Результат понента наименование количество внешний вид контроля 96-луночный делимый планшет, заклеенный защитной плёнкой, с Планшет со Смесью 00001 1 шт. реагентом в виде геля (от светло- Соответствует HBV (R) розового до красного цвета) на дне пробирок 00122 Плёнки для планшета 2 шт. Клейкие плёнки Соответствует 00015 ВК O 0,96 мл х 1 пробирка Прозрачная бесцветная жидкость Соответствует 00029 ОК 4,8 мл х 2 пробирки Прозрачная бесцветная жидкость Соответствует 00019 ПК1 HBV 4,8 мл х 2 пробирки Прозрачная бесцветная жидкость Соответствует 00017 ПК2 HBV 4,8 мл х 2 пробирки Прозрачная бесцветная жидкость Соответствует В бумажном виде и электронном Инструкция по – 1 шт. виде по адресу: Соответствует применению http://www.amplitech.ru/resources/ – Краткое руководство 1 шт. В бумажном виде Соответствует В электронном виде по адресу: – Паспорт 1 шт. Соответствует http://www.amplitech.ru/quality/ Упаковка набора Показатель Норма Результат контроля Вид первичной и вторичной упаковки Соответствует требованиям ТУ. Соответствует Отсутствие видимых дефектов Отсутствие дефектов Соответствует Маркировка набора Показатель Норма Результат контроля Наличие информации на внутренней упаковке Информация соответствует компонентов набора и внешней упаковке Соответствует требованиям ТУ. набора в соответствии с требованиями ТУ Функциональные характеристики набора Показатель Норма Результат контроля Предел обнаружения Выявление ДНК HBV в концентрации ДНК HBV обнаружена. Соответствует 3,7 МЕ/мл при экстракции из 800 мкл Показатель Норма Результат контроля образца Валидность результатов тестирования для Последовательность ВК обнаружена. Соответствует исследуемых образцов Результаты соответствуют критериям Валидность результатов тестирования для оценки, указанным в инструкции по Соответствует контролей исследования (ОК, ПК1, ПК2) применению набора. Предел измерения Количественное определение ДНК HBV в Полученное расчётное значение концентрации1 22,2 МЕ/мл при экстракции из концентрации ДНК HBV в диапазоне от Соответствует 800 мкл образца 11,1 до 44,2 МЕ/мл. Количественное определение ДНК HBV в Полученное расчётное значение концентрации 50000 МЕ/мл при экстракции концентрации ДНК HBV в диапазоне от Соответствует из 800 мкл образца 25000 до 100000 МЕ/мл. Валидность результатов тестирования для Последовательность ВК обнаружена. Соответствует исследуемых образцов Результаты соответствуют критериям Валидность результатов тестирования для оценки, указанным в инструкции по Соответствует контролей исследования (ОК, ПК1, ПК2) применению набора. Заключение: Набор указанного лота соответствует требованиям ТУ 20.59.52-052-19926214-2025. Дата выдачи паспорта: 06.04.2026 Руководитель ОКК, Романенкова Е.С. 1 Нижняя граница диапазона измерения набора плюс 0,3 lg.