Набор реагентов для выявления РНК вирусов Puumala orthohantavirus и Dobrava-Belgrade orthohantavirus методом ОТ-ПЦР AmpliSens® Hanta PUUV / DOBV — инструкция и характеристики
Открытые закупки, где изделие проходит ТЗ
Сейчас открытых закупок, где изделие полностью проходит ТЗ, нет; список обновляется каждый день.
Построчная сверка ТЗ с характеристиками этого изделия и все закупки под ваши товары — в кабинете, 7 дней бесплатно.
Попробовать бесплатно
Текст инструкции: технические характеристики
УТВЕРЖДАЮ»
Директор Федерального бюджетного
учреждения науки «Центральный
научно-исследовательский институт
эпидемиологии» Федеральной
службы по надзору в сфере защиты
прав потребителей и благополучия
человека
____________________ В.Г. Акимкин
«____»__________________ 20___г.
ИНСТРУКЦИЯ ПО ПРИМЕНЕНИЮ
Набор реагентов для выявления РНК вирусов
Puumala orthohantavirus и Dobrava-Belgrade orthohantavirus
методом ОТ-ПЦР
AmpliSens Hanta PUUV / DOBV
AmpliSens
ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии
Роспотребнадзора,
Российская Федерация, 111123,
г. Москва, ул. Новогиреевская, д. 3А
г. Москва, ул. Новогиреевская, д. 3А, стр. 6
тел. (495) 974 9642, е-mail: amplisens@pcr.ru
| ОГЛАВЛЕНИЕ | | |
| СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ ........................................................................ | ......................... | . 3 |
| НАЗНАЧЕНИЕ ......................................................................................... | ......................... | . 3 |
| ПОКАЗАНИЯ И ПРОТИВОПОКАЗАНИЯ К ПРИМЕНЕНИЮ НАБОРА | РЕАГЕНТОВ ... | . 4 |
| ПРИНЦИП МЕТОДА ................................................................................ | ......................... | . 4 |
| ФОРМЫ КОМПЛЕКТАЦИИ ..................................................................... | ......................... | . 5 |
| АНАЛИТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ ................................................ | ......................... | . 5 |
| ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ ........................................... | ......................... | . 8 |
| МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ ............................................................. | ........................ | 10 |
| СВЕДЕНИЯ ОБ УТИЛИЗАЦИИ .............................................................. | ........................ | 11 |
| ДОПОЛНИТЕЛЬНЫЕ МАТЕРИАЛЫ И ОБОРУДОВАНИЕ .................... | ........................ | 11 |
| ВЗЯТИЕ, ТРАНСПОРТИРОВАНИЕ И ХРАНЕНИЕ ИССЛЕДУЕМОГО | МАТЕРИАЛА . | 15 |
| ПОДГОТОВКА ИССЛЕДУЕМОГО МАТЕРИАЛА К ЭКСТРАКЦИИ РНК | ....................... | 17 |
| ИНТЕРФЕРИРУЮЩИЕ ВЕЩЕСТВА И ОГРАНИЧЕНИЯ ПО ИСПОЛЬ | ЗОВАНИЮ ПР | ОБ |
| ИССЛЕДУЕМОГО МАТЕРИАЛА ............................................................. | ........................ | 18 |
| ПРОВЕДЕНИЕ ПЦР-ИССЛЕДОВАНИЯ ................................................. | ........................ | 19 |
| ЭКСТРАКЦИЯ РНК ИЗ ИССЛЕДУЕМЫХ ОБРАЗЦОВ .......................... | ........................ | 19 |
| ФОРМА FRT-48F ..................................................................................... | ........................ | 22 |
| СОСТАВ ............................................................................................... | ........................ | 22 |
| ОБРАТНАЯ ТРАНСКРИПЦИЯ И АМПЛИФИКАЦИЯ С ДЕТЕКЦИЕ | Й В РЕЖИМЕ | |
| «РЕАЛЬНОГО ВРЕМЕНИ» ................................................................. | ........................ | 23 |
| А. Подготовка проб для ОТ-ПЦР ................................................... | ........................ | 23 |
| Б. Запуск амплификации ................................................................ | ........................ | 24 |
| В. Анализ и интерпретация результатов ...................................... | ........................ | 25 |
| СРОК ГОДНОСТИ. УСЛОВИЯ ТРАНСПОРТИРОВАНИЯ И ХРАНЕН | ИЯ .................... | 30 |
| ГАРАНТИЙНЫЕ ОБЯЗАТЕЛЬСТВА ИЗГОТОВИТЕЛЯ ......................... | ........................ | 31 |
| СИМВОЛЫ, ИСПОЛЬЗУЕМЫЕ В ПЕЧАТНОЙ ПРОДУКЦИИ ............... | ........................ | 32 |
| VER | 19.06.26 / стр. 2 из | 32 |
Б
2
| IC (ВКО STI-87-rec) | - экзогенный внутренний контрольный образец |
| ДНК | - дезоксирибонуклеиновая кислота |
| кДНК | - комплементарная ДНК, получаемая в реакции обратной транскрипции на матрице РНК |
| дНТФ | - дезоксирибонуклеозидтрифосфат |
| МУ | - методические указания |
| ОТ-ПЦР | - полимеразная цепная реакция с обратной транскрипцией |
| ПЦР | - полимеразная цепная реакция |
| РНК | - рибонуклеиновая кислота |
| РУ | - регистрационное удостоверение |
| СанПиН | - санитарные правила и нормы |
| ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии Роспотребнадзора | - Федеральное бюджетное учреждение науки «Центральный научно-исследовательский институт эпидемиологии» Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека |
| AmpliSens Hanta PUUV / DOBV | - Набор реагентов для выявления РНК вирусов Puumala orthohantavirus и Dobrava-Belgrade orthohantavirus методом ОТ-ПЦР AmpliSens Hanta PUUV / DOBV |
| Ct | - сycle threshold (пороговый цикл) |
| C– | - отрицательный контроль экстракции |
| C+ | - положительный контроль экстракции |
| PUUV | - Puumala orthohantavirus, Orthohantavirus Puumalaense |
| DOBV | - Dobrava-Belgrade orthohantavirus, Orthohantavirus Dobravaense |
| Hanta | - род Orthohantavirus |
| PCR C– | - отрицательный контроль ОТ-ПЦР |
| PCR C+ | - положительный контроль ОТ-ПЦР |
| FRT | - флуоресцентная детекция в режиме «реального времени» |
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
В настоящей инструкции применяются следующие
сокращения и обозначения:
НАЗНАЧЕНИЕ
Набор реагентов AmpliSens Hanta PUUV / DOBV
предназначен для качественного определения и
дифференциации РНК вирусов Puumala orthohantavirus (PUUV)
и Dobrava-Belgrade orthohantavirus (DOBV) в биологическом
материале (плазма венозной крови, моча) методом ОТ-ПЦР с
гибридизационно-флуоресцентной детекцией продуктов
амплификации. Материалом для проведения ОТ-ПЦР служат
пробы РНК, экстрагированной из исследуемого материала.
Ограничения по применению медицинского изделия в
различных популяционных и демографических группах
отсутствуют.
Набор реагентов используется в клинической лабораторной
диагностике для исследования биологического материала,
VER 19.06.26 / стр. 3 из 32
полученного от лиц с подозрением на геморрагическую
лихорадку с почечным синдромом, вызванную вирусами PUUV
и/или DOBV.
Набор реагентов может применяться для исследования
тканевого материала грызунов при проведении
профилактических мероприятий с целью предотвращения
заболевания человека вирусами PUUV и DOBV и с целью
эпидемиологического надзора за распространением
возбудителя.
Потенциальные пользователи медицинского изделия: к
работе с набором реагентов допускаются только медицинские
работники, обученные методам молекулярной диагностики и
правилам работы в клинико-диагностической лаборатории в
установленном порядке.
ПОКАЗАНИЯ И ПРОТИВОПОКАЗАНИЯ К ПРИМЕНЕНИЮ
НАБОРА РЕАГЕНТОВ
Набор реагентов используется в клинической лабораторной
диагностике для исследования биологического материала,
полученного от лиц с подозрением на геморрагическую
лихорадку с почечным синдромом, вызванную вирусами PUUV
и/или DOBV, а также для исследования грызунов.
Противопоказания отсутствуют, за исключением случаев,
когда взятие материала не может быть осуществлено по
медицинским показаниям.
ПРИНЦИП МЕТОДА
Принцип тестирования основывается на экстракции РНК из
образцов исследуемого материала совместно с экзогенным
внутренним контрольным образцом (IC (ВКО STI-87-rec)) и
одновременном проведении реакции обратной транскрипции
РНК и амплификации участков кДНК выявляемых
микроорганизмов и кДНК IC (ВКО STI-87-rec)с гибридизационно-
флуоресцентной детекцией. IC (ВКО STI-87-rec) позволяет
контролировать все этапы ПЦР-исследования для каждого
образца и оценивать влияние ингибиторов на результаты ПЦР-
исследования.
Обратная транскрипция РНК проводится с помощью
фермента TM-Ревертазы. Амплификация участка кДНК
проводится при помощи специфичных к этому участку
VER 19.06.26 / стр. 4 из 32
| | Канал для | | FAM | JOE | ROX |
| | флуорофора | | | | |
| кДНК-мишень | | | кДНК IC (ВКО STI-87-rec) | кДНК DOBV | кДНК PUUV |
| Область амплификации | | | искусственная нуклеотидная последовательность | Участок S- сегмента генома | Участок S- сегмента генома |
праймеров и фермента Taq-полимеразы. В составе реакционной
смеси присутствуют флуоресцентно-меченые олигонуклеотиды,
комплементарные участкам амплифицируемых кДНК-мишеней,
что позволяет регистрировать накопление специфического
продукта амплификации путем измерения интенсивности
флуоресцентного сигнала с помощью амплификатора с
системой детекции флуоресцентного сигнала в режиме
«реального времени».
На этапе ОТ-ПЦР одновременно в одной пробирке
проводится амплификация трех кДНК-мишеней. Результаты
амплификации регистрируются по каналам флуоресцентной
детекции, указанным в табл. 1:
Таблица 1
ФОРМЫ КОМПЛЕКТАЦИИ
Таблица 2
Характеристика Форма FRT-48F
Число реакций амплификации, включая контроли 48
Тип амплификатора роторный и планшетный
Форма FRT-48F используется для проведения ОТ-ПЦР c
гибридизационно-флуоресцентной детекцией в режиме
«реального времени». Для проведения полного ПЦР-
исследования необходимо использовать комплекты реагентов
для экстракции РНК.
АНАЛИТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
Для данного набора реагентов применимы следующие
характеристики:
VER 19.06.26 / стр. 5 из 32
Интервал (диапазон) измерений и предел обнаружения
Таблица 3
Вид Объем образца Аналитическая
Комплект для
исследуемого для экстракции, чувствительность (предел
экстракции РНК
материала мкл обнаружения), копий /мл
100 «РИБО-преп» 1x103
Плазма
200 2,5x103
венозной крови «МАГНО-сорб»
1000 5x102
Моча 1000 «МАГНО-сорб» 5x102
Тканевой 100 «РИБО-преп» 5x103
материал
100 «МАГНО-сорб» 5x103
грызунов
Данный предел обнаружения достигается при соблюдении
правил, указанных в разделах «Взятие, транспортирование и
хранение исследуемого материала» и «Подготовка
исследуемого материала к экстракции РНК».
Аналитическая специфичность
Набор реагентов обнаруживает участки РНК заявленных
микроорганизмов. Аналитическая специфичность набора
реагентов доказана при исследовании ДНК/РНК следующих
микроорганизмов/штаммов, а также геномной ДНК человека и
мелких млекопитающих:
клиническиe образцы, видовая принадлежность которых
определена с помощью метода прямого секвенирования:
Puumala orthohantavirus, Dobrava-Belgrade orthohantavirus
генотип Куркино, Dobrava-Belgrade orthohantavirus генотип
Сочи, Puumala (ТКД/Уфа-97), Dobrava (EAT/Липецк-07) в
концентрации не менее 1х103 ГЭ/мл;
штаммы из коллекции Дзагуровой Т.К. из ФНЦИРИП
им. М. Г. Чумакова РАН: Amur orthohantavirus (AP-
111/Хабаровск-89), Hantaan orthohantavirus (76/118), Tula
orthohantavirus (MA-1009), Seoul orthohantavirus (SR-111) в
концентрации от 1х106 ГЭ/мл до 1х109 ГЭ/мл;
клиническиe образцы, видовая принадлежность которых
определена с помощью метода прямого секвенирования:
Borrelia miyamotoi (Kurgan-09(7)-IP), Dengue virus (DENV)
(DENV-14), Leptospira borgpetersenii (серогруппа Tarassovi)
(I-3), Leptospira kirschneri (серогруппа Bataviae) (I-7),
Powassan virus (POWV) (Pow-24), Rickettsia conorii subsp.
Conorii (Astrakhan-2014-H-3), Rickettsia heilongjiangensis
(Gorno-Altaisk-2014-H-14), West Nile virus (WNV) (VLG-4),
VER 19.06.26 / стр. 6 из 32
Yellow fever virus (YFV) (17D), Zika virus (ZIKV) (Zika
virus/H.sapiens/ LKA/Peg/2024) в концентрации от 1х106 ГЭ/мл
до 1х109 ГЭ/мл;
штаммы из коллекции ATCC® (American Type Culture
Collection, США): Acinetobacter baumanii ATCC® 19606™,
Bordetella pertussis ATCC® 9340™, Сampylobacter jejuni
ATCC® 33560™, Candida albicans ATCC® 14053™, Clostridium
difficile ATCC® 9689™, Corynebacterium jeikeium ATCC®
43734™, Enterococcus faecalis (vancomycin resistant) ATCC®
51299™, Escherichia coli ATCC® 35218™, Haemophilus
influenzae ATCC® 9006™, Klebsiella oxytoca ATCC® 49131™,
Klebsiella pneumoniae ATCC® 27736™, Listeria monocytogenes
ATCC® 7644™, Moraxella (Branhamella) catarrhalis ATCC®
8176™, Neisseria meningitidis ATCC® 13090™ (Serogroup B),
Proteus vulgaris ATCC® 6380™, Pseudomonas aeruginosa
ATCC® 15442™, Salmonella enterica subsp. enterica serovar
Typhimurium ATCC® 14028™, Shigella sonnei Weldin ATCC®
25931™, Staphylococcus aureus (MRSA) ATCC® 43300™,
Staphylococcus epidermidis ATCC® 12228™, Staphylococcus
haemolyticus ATCC® 29970™, Staphylococcus saprophyticus
ATCC® 49907™, Streptococcus agalactiae ATCC® 13813™,
Streptococcus pneumoniae ATCC® 6303™, Streptococcus
pyogenes ATCC® 19615™, Vibrio parahaemolyticus ATCC®
17802™, Vibrio vulnificus ATCC® 27562™ в концентрации от
1х106 ГЭ/мл до 1х109 ГЭ/мл;
ДНК вирусов: Quantitative Genomic DNA from Human
adenovirus 41 ATCC® VR-930DQ™, Quantitative Synthetic DNA
from Hepatitis A virus ATCC® VR-3257SD™ в концентрации от
1х106 ГЭ/мл до 1х109 ГЭ/мл;
ДНК человека, а также мелких млекопитающих: рыжей
полевки (Clethrionomys glareolus), желтогорлой мыши
(Apodemus flavicollis), лесной мыши (Apodemus sylvaticus),
обыкновенной полевки (Microtus arvalis), обыкновенной
бурозубки (Sorex araneus), полевой мыши (Apodemus
agrarius), полевки-экономки (Microtus oeconomus), мыши-
малютки (Micromys minutus), малой бурозубки (Sorex
minutus), красной полевки (Clethrionomys rutilus) в
концентрации 1 мг/мл.
VER 19.06.26 / стр. 7 из 32
При тестировании образцов ДНК/РНК вышеперечисленных
микроорганизмов, ДНК человека и мелких млекопитающих
неспецифических реакций выявлено не было.
Информация об интерферирующих веществах указана в
разделе «Интерферирующие вещества и ограничения по
использованию проб исследуемого материала».
Повторяемость и воспроизводимость исследования
Повторяемость и воспроизводимость исследования были
определены путем тестирования положительных модельных
образцов и отрицательных образцов. Положительные образцы
представляли собой смесь стандартных образцов предприятия,
содержащих РНК PUUV и РНК DOBV, с конечной концентрацией
5x103 копий/мл каждого, в качестве отрицательного образца был
использован образец, не содержащий РНК PUUV и РНК DOBV.
Условия повторяемости включали в себя тестирование в
одной и той же лаборатории, одним и тем же оператором, с
использованием одного и того же оборудования в пределах
короткого промежутка времени. Условия воспроизводимости –
тестирование в двух независимых лабораториях, разными
операторами, в разные дни, на различных приборах разных
серий набора реагентов. Результаты представлены в табл. 4.
Таблица 4
Повторяемость Воспроизводимость
Тип образцов Количество Совпадение Количество Совпадение
образцов результатов, % образцов результатов, %
Положительные 10 100 40 100
Отрицательные 10 100 40 100
ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
Для определения диагностических характеристик набора
реагентов были использованы 75 образцов плазмы венозной
крови, 75 образцов мочи, 75 образцов тканевого материала
грызунов.
Диагностические чувствительность и специфичность
Для определения диагностических характеристик
качественного определения набора реагентов были
использованы следующие образцы, полученные от пациентов с
подозрением на геморрагическую лихорадку с почечным
синдромом, вызванную вирусами PUUV и/или DOBV (см.
табл. 5):
VER 19.06.26 / стр. 8 из 32
| Вид исследуемого материала | Возбудитель | | Диагностическая | | | Диагностическая | |
| | | | чувствительность | | | специфичность | |
| | | | (с доверительной | | | (с доверительной | |
| | | | вероятностью 95 %) | | | вероятностью 95 %) | |
| Плазма венозной крови | Puumala orthohantavirus | 100 (86,28-100) % | | | 100 (86,28-100) % | | |
| | Dobrava-Belgrade orthohantavirus | 100 (86,28-100) % | | | 100 (86,28-100) % | | |
| Моча | Puumala orthohantavirus | 100 (86,28-100) % | | | 100 (86,28-100) % | | |
| | Dobrava-Belgrade orthohantavirus | 100 (86,28-100) % | | | 100 (86,28-100) % | | |
| Тканевой материал грызунов | Puumala orthohantavirus | 100 (86,28-100) % | | | 100 (86,28-100) % | | |
| | Dobrava-Belgrade orthohantavirus | 100 (86,28-100) % | | | 100 (86,28-100) % | | |
Таблица 5
Вид исследуемого материала Количество образцов
Плазма венозной крови 75
Моча 75
Тканевой материал грызунов 75
Всего 225
В качестве референтного метода использовался метод
прямого секвенирования по методике Сэнгера.
Таблица 6
Результаты тестирования набора реагентов AmpliSens®
Hanta PUUV / DOBV в сравнении с референтным методом
Вид Результаты применения Результаты применения
исследуемого Возбудитель AmpliSens® Hanta PUUV / метода сравнения
материала DOBV положительных отрицательных
Всего положительных 25 0
Puumala
исследовано
Плазма orthohantavirus отрицательных 0 25
50 образцов
венозной
Dobrava- Всего положительных 25 0
крови
Belgrade исследовано
отрицательных 0 25
orthohantavirus 50 образцов
Всего положительных 25 0
Puumala
исследовано
orthohantavirus отрицательных 0 25
50 образцов
Моча
Dobrava- Всего положительных 25 0
Belgrade исследовано
отрицательных 0 25
orthohantavirus 50 образцов
Всего положительных 25 0
Puumala
исследовано
Тканевой orthohantavirus отрицательных 0 25
50 образцов
материал
Dobrava- Всего положительных 25 0
грызунов
Belgrade исследовано
отрицательных 0 25
orthohantavirus 50 образцов
Таблица 7
Диагностические характеристики набора реагентов
AmpliSens® Hanta PUUV / DOBV
VER 19.06.26 / стр. 9 из 32
МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ
Работа должна проводиться в лаборатории, выполняющей
молекулярно-биологические (ПЦР) исследования
биологического материала на наличие возбудителей
инфекционных болезней, с соблюдением СанПиН 3.3686-21
«Санитарно-эпидемиологические требования по профилактике
инфекционных болезней», СанПиН 2.1.3684-21 «Санитарно-
эпидемиологические требования к содержанию территорий
городских и сельских поселений, к водным объектам, питьевой
воде и питьевому водоснабжению, атмосферному воздуху,
почвам, жилым помещениям, эксплуатации производственных,
общественных помещений, организации и проведению
санитарно-противоэпидемических (профилактических)
мероприятий» и МУ 1.3.2569-09 «Организация работы
лабораторий, использующих методы амплификации
нуклеиновых кислот при работе с материалом, содержащим
микроорганизмы I–IV групп патогенности».
Набор реагентов предназначен для одноразового применения
для проведения ПЦР-исследования указанного количества проб
(см. раздел «Формы комплектации»).
Набор реагентов готов к применению согласно данной
инструкции. Применять набор реагентов строго по назначению.
При работе необходимо всегда выполнять следующие
требования:
- Температура в помещении лаборатории должна быть от 20 до
28 °С, относительная влажность от 15 до 75 %.
- Допускать к работе с набором реагентов только персонал,
обученный методам молекулярной диагностики и правилам
работы в клинико-диагностической лаборатории в
установленном порядке.
- Не использовать набор реагентов, если нарушена
внутренняя упаковка или внешний вид реагента не
соответствует описанию.
- Не использовать набор реагентов, если не соблюдались
условия транспортирования и хранения согласно инструкции.
- Не использовать набор реагентов по истечении срока
годности.
- Использовать одноразовые неопудренные перчатки,
лабораторные халаты, защищать глаза во время работы с
VER 19.06.26 / стр. 10 из 32
образцами и реагентами. Тщательно вымыть руки по
окончании работы. Все операции проводятся только в
перчатках для исключения контакта с организмом человека.
- Избегать вдыхания паров, контакта с кожей, глазами и
слизистой оболочкой. Вреден при проглатывании. При
контакте немедленно промыть пораженное место водой, при
необходимости обратиться за медицинской помощью.
При использовании по назначению и соблюдении
вышеперечисленных мер предосторожности набор реагентов
безопасен.
При соблюдении условий транспортировки, эксплуатации и
хранения риски взрыва и возгорания отсутствуют.
Сведения о безопасности набора реагентов доступны по
запросу.
СВЕДЕНИЯ ОБ УТИЛИЗАЦИИ
Неиспользованные реагенты, реагенты с истекшим сроком
годности, а также использованные реагенты, упаковку1,
биологический материал, материалы, инструменты и предметы,
загрязненные биологическим материалом, следует удалять в
соответствии с требованиями СанПиН 2.1.3684-21 «Санитарно-
эпидемиологические требования к содержанию территорий
городских и сельских поселений, к водным объектам, питьевой
воде и питьевому водоснабжению, атмосферному воздуху,
почвам, жилым помещениям, эксплуатации производственных,
общественных помещений, организации и проведению
санитарно-противоэпидемических (профилактических)
мероприятий».
ВНИМАНИЕ! При удалении отходов после амплификации
(пробирок, содержащих продукты ПЦР) недопустимо
открывание пробирок и разбрызгивание содержимого, поскольку
это может привести к контаминации продуктами ПЦР
лабораторной зоны, оборудования и реагентов.
ДОПОЛНИТЕЛЬНЫЕ МАТЕРИАЛЫ И ОБОРУДОВАНИЕ
Перечисленные ниже дополнительные материалы и
оборудование, относящиеся к категории медицинских изделий и
зарегистрированные на территории Российской Федерации или
1 Неиспользованные реагенты, реагенты с истекшим сроком годности, использованные
реагенты, упаковка относятся к классу опасности медицинских отходов Г.
VER 19.06.26 / стр. 11 из 32
Евразийского экономического союза, не имеют ограничений по
совместному использованию с данным набором реагентов,
кроме позиций, для которых указаны конкретные примеры.
Взятие исследуемого материала
1. Пинцет и ножницы.
2. Вакуумная система забора крови Vacuette.
3. Пробирки вакуумные для взятия, хранения и
транспортировки проб крови для лабораторных
исследований in vitro с ЭДТА или цитратом натрия в качестве
антикоагулянта.
4. Иглы стерильные двусторонние трубчатые к вакуумным
пробиркам для взятия венозной крови для лабораторных
исследований in vitro.
5. Центрифуга медицинская лабораторная.
6. Емкость для взятия, хранения и транспортировки
биологических образцов объемом 50-60 мл, стерильная.
7. Одноразовые полипропиленовые плотно закрывающиеся
пробирки объемом 1,5; 2 мл.
Предварительная подготовка исследуемого материала
8. 0,9 % раствор натрия хлорида (стерильный физиологический
раствор) или фосфатный буферный раствор (PBS) (натрия
хлорид, 137 мМ; калия хлорид, 2,7 мМ; натрия монофосфат,
10 мМ; калия дифосфат, 2 мМ; pH=7,5±0,2).
9. Одноразовые полипропиленовые завинчивающиеся или
плотно закрывающиеся пробирки объемом 1,5 мл.
10. Завинчивающиеся крышки к пробиркам.
11. Одноразовые наконечники для дозаторов переменного
объема с фильтром до 100, до 200, до 1000 мкл.
12. Штативы для пробирок объемом 1,5 мл.
13. Отдельные для каждой пробы стерильные инструменты для
гомогенизации (фарфоровая ступка с пестиком) или
гомогенизатор для проведения пробоподготовки тканевого
материала.
14. Автоматические дозаторы переменного объема.
15. Холодильник от 2 до 8 °С с морозильной камерой от минус 24
до минус 16 С.
16. Отдельный халат, шапочка, обувь и одноразовые перчатки.
17. Одноразовые пластиковые контейнеры для сброса и
инактивации материалов.
VER 19.06.26 / стр. 12 из 32
Экстракция РНК из исследуемых образцов
18. Комплект реагентов для экстракции НК – Комплект реагентов
для выделения РНК/ДНК из клинического материала «РИБО-
преп» (РУ № ФСР 2008/03147) и Комплект реагентов для
экстракции РНК/ДНК из биологического материала «МАГНО-
сорб» вариант 100-1000, вариант 100-100М или вариант 100-
200М (РУ № ФСР 2010/07265).
19. Дополнительные материалы и оборудование для экстракции
РНК – согласно инструкции к комплекту реагентов для
экстракции РНК.
При использовании автоматических станций для экстракции
нуклеиновых кислот:
20. Автоматическая станция для экстракции НК «открытого типа»
(например, Процессор магнитных частиц для очистки
нуклеиновых кислот, клеток и белков KingFisher (вариант
исполнения KingFisher Flex) «Термо Фишер Сайентифик Ой»,
Финляндия (РУ № ФСЗ 2009/05562), Система для
автоматического выделения и очистки нуклеиновых кислот из
биологического материала Auto-Pure для диагностики in vitro
(вариант исполнения Система для автоматического
выделения и очистки нуклеиновых кислот из биологического
материала Auto-Pure 96 для диагностики in vitro) ООО
«Ханчжоуская компания инструментов Аошэн», Китай
(РУ № РЗН 2022/16430)).
21. Комплект реагентов для экстракции РНК (например,
Комплект реагентов для экстракции РНК/ДНК из
биологического материала «МАГНО-сорб», ФБУН ЦНИИ
Эпидемиологии Роспотребнадзора, Россия
(РУ № ФСР 2010/07265)).
22. Набор необходимых расходных материалов к используемой
автоматической станции в соответствии с рекомендациями
производителя.
Обратная транскрипция и амплификация с
гибридизационно-флуоресцентной детекцией продуктов
амплификации
23. Одноразовые полипропиленовые пробирки:
а) завинчивающиеся или плотно закрывающиеся пробирки
объемом 1,5 мл – для приготовления реакционной смеси;
б) тонкостенные пробирки для ПЦР объемом 0,2 мл с
VER 19.06.26 / стр. 13 из 32
выпуклой или плоской оптически прозрачной крышкой или
пробирки объемом 0,2 мл в стрипах по 8 шт. с
прозрачными крышками или 96-луночные плашки с
объемом лунки 0,2 мл с прозрачной самоклеящейся
пленкой – при использовании прибора планшетного типа;
в) тонкостенные пробирки для ПЦР объемом 0,2 мл с
плоской крышкой или пробирки для ПЦР к Rotor-Gene
объемом 0,1 мл в стрипах по 4 шт. с крышками – при
использовании прибора роторного типа.
24. Одноразовые наконечники для дозаторов переменного
объема с фильтром до 10, до 100, до 1000 мкл.
25. Штативы для пробирок объемом 0,2 мл или 0,1 мл.
26. Бокс абактериальной воздушной среды (ПЦР-бокс, УФ-бокс)
или бокс микробиологической безопасности II класса защиты.
27. Центрифуга-вортекс.
28. Автоматические дозаторы переменного объема.
29. Программируемый амплификатор с системой детекции
флуоресцентного сигнала в режиме «реального времени»
(например, Прибор для проведения полимеразной цепной
реакции в режиме реального времени Rotor-Gene Q (QIAGEN
GmbH («Киаген ГмбХ»), Германия (РУ № ФСЗ 2010/07595)),
Термоциклер для амплификации нуклеиновых кислот 1000, с
принадлежностями исполнения: C1000, S1000, С1000 Touch
(CFX96 Touch qPCR System) «Био-Рад Лабораториез, Инк.»,
США (РУ № ФСЗ 2008/03399), Амплификатор
детектирующий «ДТпрайм» по ТУ 9443-004-96301278-2010
(ООО «НПО ДНК-Технология», Россия
(РУ № ФСР 2011/10229)).
30. Холодильник от 2 до 8 °С с морозильной камерой от минус 24
до минус 16 °С.
31. Отдельный халат, шапочка, обувь и одноразовые перчатки.
32. Емкость для сброса наконечников.
33. ПО для запуска амплификации и автоматической обработки
результатов – ПО ARTS (см. руководство оператора ПО
AmpliSens® Hanta PUUV / DOBV Soft).
VER 19.06.26 / стр. 14 из 32
ВЗЯТИЕ, ТРАНСПОРТИРОВАНИЕ И ХРАНЕНИЕ
ИССЛЕДУЕМОГО МАТЕРИАЛА2
Материалом для исследования служат:
плазма венозной крови,
тканевой материал грызунов.
Плазма венозной крови
Взятие венозной крови рекомендуется производить из
локтевой вены натощак или через 3 часа после приема пищи в
пробирку или в специальную вакуумную систему с К ЭДТА /
2
К ЭДТА (конечная концентрация в крови 1,2-2,0 мг/мл) или с
3
цитратом натрия (конечная концентрация в крови 0,105-0,129
моль/л) в качестве антикоагулянта.
Гепарин в качестве антикоагулянта использовать нельзя!
Закрытую пробирку с кровью сразу после взятия плавно
перевернуть вверх дном несколько раз, чтобы кровь в пробирке
тщательно перемешалась с антикоагулянтом. После плавного
перемешивания пробирку поместить в штатив.
Допускается хранение образцов венозной крови до
проведения предварительной подготовки:
при температуре от 20 до 25 °С – в течение 2 часов;
при температуре от 2 до 8 °С – в течение 12 часов.
Недопустимо замораживание образца венозной крови!
Получение плазмы венозной крови провести не позднее
указанного времени.
Для получения плазмы венозной крови пробирки с цельной
кровью центрифугировать 10 мин при 10 тыс. g (например,
12 тыс. об/мин для микроцентрифуги MiniSpin, Eppendorf
Manufacturing Corporation), допускается центрифугирование при
600 g в течение 10 мин. Не захватывая осадок эритроцитов,
перенести супернатант отдельным наконечником с фильтром в
стерильную одноразовую пробирку объемом 1,5 мл.
Допускается хранение плазмы венозной крови до проведения
ПЦР-исследования:
при температуре от 2 до 8 °С – в течение 1 суток;
при температуре от минус 24 до минус 16 °С – в течение
2 См. также «Взятие, транспортировка, хранение биологического материала для ПЦР-
диагностики: методические рекомендации» / Домонова Э.А., Творогова М.Г., Подколзин А.Т.
[и др.]. Москва: ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии, 2021. 112 с. ISBN 978-5-6045286-6-2, DOI:
https://doi.org/10.36233/978-5-6045286-6-2, веб-сайт https://prepcr.crie.ru/
VER 19.06.26 / стр. 15 из 32
3 месяцев;
при температуре не выше минус 68 °С – длительно.
Моча
Сбор мочи провести после тщательного туалета наружных
половых органов.
Для исследования отобрать первую порцию утренней мочи в
объёме 15–30 мл в контейнер, плотно закрыть крышкой. У
новорождённых и детей грудного возраста допускается сбор
мочи с помощью мочеприёмника педиатрического.
При использовании для хранения и транспортировки
вакуумной пробирки для мочи со стабилизатором: образец мочи
перемешать переворачиванием в исходной ёмкости, вставить
крышку вакуумной пробирки в устройство для отбора (иглу
держателя). Надавить, чтобы игла устройства/держателя
проколола крышку пробирки (крышку с пробирки не снимать!),
наполнить пробирку и затем вынуть ее из устройства/держателя.
Пробирку перевернуть 6-8 раз для тщательного перемешивания
мочи со стабилизатором.
Допускается хранение образцов мочи до проведения
предобработки:
при температуре от 18 до 25 °С – в течение 1-2 часов;
при температуре от 2 до 8 °С – в течение 24 часов.
При использовании вакуумной пробирки для мочи со
стабилизатором:
при температуре от 18 до 25 °С – в течение 8 часов;
при температуре от 2 до 8 °С – в течение 48 часов.
Не допускается замораживание материала!
Тканевой материал грызунов
Тканевой материал грызунов (легкие) отбирают стерильным
инструментом (например, пинцет) в пробирку объемом 1,5 или 2
мл с плотно закрывающейся крышкой. Пробирку плотно
закрывают крышкой.
Допускается хранение образцов тканевого материала:
при температуре от 20 до 25 °С – в течение 6 часов;
при температуре от 2 до 8 °С – в течение 3 суток;
при температуре от минус 24 до минус 16 °С – в течение
1 недели;
при температуре не выше минус 68 °С – длительно.
VER 19.06.26 / стр. 16 из 32
ПОДГОТОВКА ИССЛЕДУЕМОГО МАТЕРИАЛА К ЭКСТРАКЦИИ
РНК2
Образцы плазмы крови, а также образцы прозрачной мочи не
требуют предварительной подготовки.
Образцы мочи требуют предварительной подготовки, если на
исследование предоставлены образцы мутной мочи.
В пробирки объемом 1,5 мл отобрать по 1200 мкл мочи.
Центрифугируют пробы при 10 тыс. g (например, 12 тыс. об/мин
для микроцентрифуги типа «Эппендорф») в течение 1 мин.
1000 мкл осветленной суспензии используют для экстракции
РНК с использованием комплекта «МАГНО-сорб». Если
материал будет исследован позже, чем через 1 сутки после
забора, необходимо перенести по 1100 мкл мочи в несколько
пробирок объемом 1,5 мл, затем в них внести глицерин в объеме
10 % от объема пробы (120 мкл), перемешать на вортексе для
равномерного распределения глицерина.
Допускается хранение образцов чистой мочи или мочи с
глицерином:
при температуре от минус 24 до минус 16 °С – в течение
1 недели;
при температуре не выше минус 68 °С – длительно.
Допускается однократное замораживание-оттаивание
материала.
Образцы тканевого материала грызунов требуют
предварительной подготовки.
Гомогенизировать тканевой материал грызунов (легкие) с
использованием автоматического гомогенизатора или
стерильных фарфоровых ступок и пестиков, затем приготовить
10 % суспензию на охлаждённом 0,9 % растворе натрия хлорида
(стерильный физиологический раствор) или фосфатном
буферном растворе (PBS). Для этого на 1 объём растёртой
ткани добавить 9 объёмов физиологического раствора или
фосфатного буфера. Суспензию перенести в пробирку, осадить
кратким центрифугированием при 500 g (например,
2,7 тыс. об/мин для микроцентрифуги MiniSpin, Eppendorf
Manufacturing Corporation) в течение 10-30 с. 100 мкл
надосадочной жидкости использовать для экстракции РНК.
Допускается хранение предварительно обработанных
образцов гомогенизированного тканевого материала грызунов
VER 19.06.26 / стр. 17 из 32
до проведения ПЦР-исследования:
при температуре от минус 24 до минус 16 °С – в течение
1 недели;
при температуре не выше минус 68 °С – длительно.
Допускается однократное замораживание-оттаивание
материала от момента взятия до проведения ПЦР.
ИНТЕРФЕРИРУЮЩИЕ ВЕЩЕСТВА И ОГРАНИЧЕНИЯ ПО
ИСПОЛЬЗОВАНИЮ ПРОБ ИССЛЕДУЕМОГО МАТЕРИАЛА
Для контроля эффективности экстракции РНК и реакции
амплификации в наборе реагентов предусмотрено
использование внутреннего контрольного образца (IC (ВКО STI-
87-rec)), который добавляется в каждый биологический образец
на этапе экстракции нуклеиновых кислот. По окончании реакции
амплификации наличие сигнала, свидетельствующего о
накоплении фрагментов кДНК IC (ВКО STI-87-rec), говорит о
достаточной эффективности экстракции нуклеиновых кислот и
отсутствии ингибиторов ПЦР.
Ограничения по использованию проб
Непригодными для исследования являются:
- образцы венозной крови, подвергшиеся многократному
замораживанию-оттаиванию;
- образцы венозной крови, взятые в пробирки с гепарином в
качестве антикоагулянта.
Потенциально интерферирующие вещества
Для оценки потенциальной интерференции были выбраны
эндогенные и/или экзогенные вещества, которые могут
присутствовать в биологическом материале, используемом для
исследования (см. табл. 5).
Были протестированы модельные образцы (плазма венозной
крови, тканевой материал грызунов, моча) без добавления и с
добавлением потенциально интерферирующих веществ.
Концентрация каждого потенциально интерферирующего
вещества указана в табл. 8. В модельные образцы добавляли
также стандартные образцы предприятия, содержащие РНК
PUUV и РНК DOBV, до конечной концентрации,
соответствующей пределу обнаружения.
VER 19.06.26 / стр. 18 из 32
Таблица 8
Вид Вид Протестированная
Потенциальный Наличие
исследуемого потенциального концентрация в
интерферент3 интерференции
материала интерферента образце4
Билирубин 210 мкмоль/л Не обнаружено
Эндогенные Холестерин 7,8 ммоль/л Не обнаружено
вещества Триглицериды 37 ммоль/л Не обнаружено
Гемоглобин 250 г/л Не обнаружено
Плазма
Цитрат натрия 0,129 моль/л Не обнаружено
венозной крови
12 МЕ/мл
Экзогенные Литий гепарин Обнаружено
30 МЕ/мл
вещества5
ЭДТА (К ЭДТА) 2 мг/мл Не обнаружено
2
ЭДТА (К ЭДТА) 2 мг/мл Не обнаружено
3
Тканевой материал
Гемоглобин 250 г/л Не обнаружено
грызунов
Альбумин 500 мг/л Не обнаружено
Билирубин 33 мкмоль/л Не обнаружено
Эндогенные
Более 100 в поле
вещества Ураты Не обнаружено
Моча зрения
Соотношение
Кровь образец: кровь Не обнаружено
1:1
ПРОВЕДЕНИЕ ПЦР-ИССЛЕДОВАНИЯ
ПЦР-исследование состоит из следующих этапов:
экстракция РНК из исследуемых образцов,
обратная транскрипция РНК и амплификации кДНК с
гибридизационно-флуоресцентной детекцией в режиме
«реального времени»,
анализ и интерпретация результатов.
ЭКСТРАКЦИЯ РНК ИЗ ИССЛЕДУЕМЫХ ОБРАЗЦОВ
ВНИМАНИЕ! При работе с РНК необходимо использовать
только одноразовые пластиковые расходные материалы,
имеющие специальную маркировку RNase-free, DNase-free.
Для экстракции РНК используются комплекты реагентов
«РИБО-преп», «МАГНО-сорб» (вариант 100-1000, вариант 100-
100М или вариант 100-200М). Комплект реагентов «МАГНО-
сорб» может применяться совместно с автоматическими
3 Для лекарственных средств указано действующее вещество и название препарата в
скобках.
4 Для лекарственных средств указана концентрация действующего вещества.
5 В соответствии с ГОСТ Р 53079.4-2008 (Технологии лабораторные клинические. Обеспечение
качества клинических лабораторных исследований. Часть 4. Правила ведения
преаналитического этапа) калия ЭДТА используют в концентрации от 1,2 до 2 мг/мл, лития
гепарин – в концентрации от 12 до 30 МЕ/мл, цитрат натрия в концентрации от 0,105 до
0,129 моль/л.
VER 19.06.26 / стр. 19 из 32
| | Вид исследуемого | | | Комплект для | | Объем образца для | Объем |
| | материала | | | экстракции РНК | | экстракции, мкл | элюции, мкл |
| Плазма венозной крови | | | «РИБО-преп» | | | 100 | 50 |
| | | | «МАГНО-сорб» вариант 100-200М | | | 200 | 100 |
| | | | «МАГНО-сорб» вариант 100-1000 | | | 1000 | 100 |
| Моча | | | «МАГНО-сорб» вариант 100-1000 | | | 1000 | 100 |
| Тканевой материал грызунов | | | «РИБО-преп» | | | 100 | 50 |
| | | | «МАГНО-сорб» вариант 100-100М | | | 100 | 100 |
станциями для экстракции нуклеиновых кислот «открытого
типа»6.
Порядок работы с комплектами реагентов «РИБО-преп»,
«МАГНО-сорб» смотрите в инструкции к соответствующему
комплекту для экстракции.
Экстракцию РНК из каждого исследуемого образца и
контролей необходимо проводить в присутствии внутреннего
контрольного образца – IC (ВКО-STI-87-rec).
Объем IC (ВКО-STI-87-rec) – 10 мкл в каждую пробирку.
В каждую группу экстрагируемых образцов необходимо
включать один повтор отрицательного (С–) контроля. Контроль
C– проходит все этапы ПЦР-исследования, начиная с этапа
экстракции, и позволяет контролировать возможную
контаминацию исследуемых образцов. Для этого в пробирку
отрицательного контроля экстракции (С–) внести 100 мкл С–.
ВНИМАНИЕ! При получении новой серии набора реагентов
необходима постановка положительного контроля экстракции
(C+). C+ проходит все этапы ПЦР-исследования, начиная с
этапа экстракции, и позволяет оценивать его корректность. Для
этого в пробирку C+ внести 10 мкл C+ (Hanta PUUV / DOBV-rec)
и 90 мкл C– соответственно.
Объемы исследуемых образцов и объем элюции НК-пробы
указаны в табл. 9:
Таблица 9
ВНИМАНИЕ! Реакцию ОТ-ПЦР рекомендуется проводить сразу
после получения проб РНК. Допускается хранение проб РНК при
температуре от 2 до 8 °С не более 30 мин, при температуре от
минус 24 до минус 16 °С – не более недели и при температуре
6 Станции, совместимые с наборами реагентов различных производителей.
VER 19.06.26 / стр. 20 из 32
не выше минус 68 °С – до года. Допускается однократное
замораживание-оттаивание проб РНК.
.
VER 19.06.26 / стр. 21 из 32
| Реагент | | Описание | Объем, мл | | | Количество | , |
| | | | | | | шт. | |
| | Часть 1 из 2 | | | | | | |
| C+ (Hanta PUUV / DOBV-rec) | | Прозрачная бесцветная жидкость | 0,2 | | 1 | | |
| PCR C+ (Hanta PUUV / DOBV) | | Прозрачная бесцветная жидкость | 0,2 | | 1 | | |
| PCR C– | | Прозрачная бесцветная жидкость | 0,2 | | 1 | | |
| IC (ВКО STI-87-rec) | | Прозрачная бесцветная жидкость | 0,5 | | 1 | | |
| C– | | Прозрачная бесцветная жидкость | 1,2 | | 2 | | |
| | Часть 2 из 2 | | | | | | |
| Мix-Hanta PUUV / DOBV | | Прозрачная жидкость от бесцветного до светло-лилового цвета | 0,5 | | 1 | | |
| Buffer-С | | Прозрачная бесцветная жидкость | 0,25 | | 1 | | |
| TaqF | | Прозрачная бесцветная жидкость | 0,03 | | 1 | | |
| RTase | | Прозрачная бесцветная жидкость | 0,015 | | 1 | | |
| RT-G-mix-2 | | Прозрачная бесцветная жидкость | 0,015 | | 1 | | |
СОСТАВ
ФОРМА FRT-48F
СОСТАВ
Таблица 10
Реагенты упакованы раздельно в соответствии с температурой
хранения (см. раздел «Хранение»).
Программное обеспечение на электронном носителе или на
сайте Изготовителя (www.amplisens.ru) – программное
обеспечение AmpliSens® Hanta PUUV / DOBV Soft (1 шт.),
руководство оператора (1 шт.).
Эксплуатационная документация на бумажном носителе и на
сайте Изготовителя (www.amplisens.ru) – инструкция по
применению (1 шт.), паспорт качества (1 шт.), вкладыш для
автоматизированной работы (1 шт.), вкладыш с настройками
(1 шт.), краткое руководство (1 шт.).
VER 19.06.26 / стр. 22 из 32
| | Компонент реакционной | | Объем, мкл | Обозначения |
| | смеси | | | |
| Mix-Hanta PUUV / DOBV | | | 10*(N+К+1) | 0,25; 0,5; 5; 10 – объем реагента, требующийся на одну реакцию, N – количество исследуемых образцов, К – количество контролей, 1 – запас на одну реакцию |
| Buffer-С | | | 5*(N+К+1) | |
| TaqF | | | 0,5*(N+К+1) | |
| RTase | | | 0,25*(N+К+1) | |
| RT-G-mix-2 | | | 0,25*(N+К+1) | |
ПРОВЕДЕНИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
ОБРАТНАЯ ТРАНСКРИПЦИЯ И АМПЛИФИКАЦИЯ С
ДЕТЕКЦИЕЙ В РЕЖИМЕ «РЕАЛЬНОГО ВРЕМЕНИ»
ВНИМАНИЕ! При работе с РНК необходимо использовать
только одноразовые стерильные пластиковые расходные
материалы, имеющие специальную маркировку RNase-free,
DNase-free.
ВНИМАНИЕ! Для внесения в пробирки реагентов, проб РНК и
контрольных образцов использовать одноразовые наконечники
с фильтрами.
А. Подготовка проб для ОТ-ПЦР
Общий объем реакционной смеси – 25 мкл, включая объем
пробы РНК – 10 мкл.
ВНИМАНИЕ! Компоненты реакционной смеси следует смешивать
непосредственно перед проведением ОТ-ПЦР.
1. Разморозить и перемешать содержимое пробирок с
реагентами, осадить капли на вортексе.
2. В отдельной пробирке подготовить реакционную смесь,
смешав необходимое количество Mix-Hanta PUUV / DOBV,
Buffer-С, TaqF, RTase, RT-G-mix-2 согласно табл. 11.
Перемешать и осадить капли на вортексе.
Таблица 11
3. Отобрать необходимое количество индивидуальных или
стрипованных пробирок для обратной транскрипции и
амплификации РНК исследуемых и контрольных образцов.
4. Внести в каждую пробирку по 15 мкл приготовленной
реакционной смеси. Неиспользованные остатки реакционной
смеси выбросить.
5. В подготовленные пробирки с различными реакционными
смесями внести по 10 мкл проб РНК, полученных в
результате экстракции из исследуемых образцов.
ВНИМАНИЕ! При добавлении проб РНК, экстрагированных с
помощью комплектов реагентов для проведения экстракции
VER 19.06.26 / стр. 23 из 32
ПРОВЕДЕНИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
методом магнитной сепарации, необходимо избегать попадания
сорбента в реакционную смесь.
ВНИМАНИЕ! Содержимое пробирок необходимо тщательно
перемешать пипетированием, не допуская появления пузырьков
воздуха.
6. Поставить контрольные реакции:
а) отрицательный контроль экстракции (C–) – в пробирку
с реакционной смесью внести 10 мкл пробы,
экстрагированной из C–.
б) положительный контроль ОТ-ПЦР (PCR C+) – в
пробирки с реакционной смесью внести 10 мкл PCR C+
(Hanta PUUV / DOBV).
ВНИМАНИЕ! При получении новой серии набора реагентов
необходима постановка положительного контроля
экстракции (C+). Для этого в пробирку с реакционной смесью
внести 10 мкл пробы, экстрагированной из С+. При подозрении
на возможную контаминацию также необходима постановка
отрицательного контроля ОТ-ПЦР (PCR C–). Для этого в
пробирку с реакционной смесью внести 10 мкл PCR C–.
ВНИМАНИЕ! Провести ОТ-ПЦР сразу после соединения
реакционной смеси c РНК-пробами и контролями.
ВНИМАНИЕ! При постановке ПЦР в стрипованных пробирках
необходимо использовать одинаковые оптически-прозрачные
крышки для стрипованных пробирок/пленку для ПЦР для всех
образцов, загружаемых в один реакционных блок планшетного
амплификатора. Необходимо плотно закрыть/заклеить
пробирки, избегая загрязнения поверхности.
Б. Запуск амплификации
1. Установить пробирки в ячейки реакционного модуля прибора.
Рекомендуется:
а) перед постановкой в амплификатор планшетного типа
осадить капли со стенок пробирок.
б) в случае неполной загрузки приборов планшетного типа
дополнительно установить пустые пробирки по краям его
реакционного модуля амплификатора.
2. Запустить программу амплификации:
а) либо с использованием ПО ARTS совместно с ПО
AmpliSens® Hanta PUUV / DOBV Soft;
VER 19.06.26 / стр. 24 из 32
| Цикл | Температура, °С | Время | | Детекция флуоресцентного | | Количество циклов |
| | | | | сигнала по каналам для | | |
| | | | | флуорофоров | | |
| 1 | 50 | 15 мин | – | | | 1 |
| 2 | 95 | 15 мин | – | | | 1 |
| 3 | 95 | 10 с | – | | | 45 |
| | 60 | 20 с | FAM, JOE, ROX | | | |
ПРОВЕДЕНИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
Примечание – Детектирующий амплификатор должен быть
совместим с ПО ARTS.
б) либо в ручном режиме, запрограммировав детектирующий
амплификатор для выполнения программы, указанной в
табл. 12, согласно инструкции по его применению.
Таблица 12
Единая программа амплификации и детекции
флуоресцентного сигнала «АмплиСенс»
ВНИМАНИЕ! С использованием единой программы можно
одновременно проводить в одном приборе любое сочетание
тестов, включая тесты с обратной транскрипцией и
амплификацией.
В. Анализ и интерпретация результатов
ВНИМАНИЕ! Установление диагноза и назначение лечения
должны производиться врачом соответствующей
специализации.
Анализируют кривые накопления флуоресцентного сигнала,
свидетельствующего о накоплении продукта амплификации, по
трем каналам:
Таблица 13
Канал для флуорофора FAM JOE ROX
кДНК-мишень кДНК IC (ВКО STI-87-rec) кДНК DOBV кДНК PUUV
Анализ и интерпретацию полученных результатов проводят
вручную с помощью ПО прибора, используемого для
проведения ПЦР c детекцией в режиме «реального времени»
или в автоматическом режиме, используя ПО ARTS совместно с
ПО AmpliSens® Hanta PUUV / DOBV Soft. Порядок работы с ПО
AmpliSens® Hanta PUUV / DOBV Soft описан в руководстве
оператора.
Результаты интерпретируют на основании наличия (или
отсутствия) пересечения кривой флуоресценции S-образной
(сигмообразной) формы с установленной на соответствующем
VER 19.06.26 / стр. 25 из 32
| | Значение Сt по каналу для флуорофора | | | | | | | Результат |
| | FAM | | | JOE | | | ROX | |
| определено меньше граничного | | | отсутствует | | | отсутствует | | РНК PUUV/DOBV НЕ обнаружена |
| определено или отсутствует | | | определено меньше граничного | | | определено, отсутствует или больше граничного | | РНК DOBV обнаружена |
| определено или отсутствует | | | определено, отсутствует или больше граничного | | | определено меньше граничного | | РНК PUUV обнаружена |
| отсутствует или больше граничного | | | отсутствует или больше граничного | | | отсутствует или больше граничного | | Невалидный* |
| определено меньше граничного | | | определено больше граничного | | | определено больше граничного | | Сомнительный** |
ПРОВЕДЕНИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
уровне пороговой линией, что определяет наличие (или
отсутствие) для данной пробы РНК значения порогового цикла
(Ct). При использовании ПО ARTS совместно с ПО AmpliSens®
Hanta PUUV / DOBV Soft значения Ct определяются
автоматически.
Результаты для контролей этапов экстракции и амплификации
должны соответствовать критериям, указанным в табл. 14 и во
вкладыше с настройками, прилагаемом к набору реагентов.
Таблица 14
Результаты для контролей различных этапов
ПЦР-исследования
Контролируе- Значение Сt по каналу для флуорофора
Конт-
мый этап ПЦР-
роль FAM JOE ROX
исследования
Экстракция определено определено определено
C+
РНК меньше граничного меньше граничного меньше граничного
Экстракция определено
C– отсутствует отсутствует
РНК меньше граничного
PCR C– ОТ-ПЦР отсутствует отсутствует отсутствует
определено определено определено
PCR C+ ОТ-ПЦР
меньше граничного меньше граничного меньше граничного
При наличии отклонений результатов для контролей от
указанных выше интерпретация ряда исследуемых образцов
невозможна (см. «Возможные ошибки»).
Принцип интерпретации результатов указан в таблице 15.
Таблица 15
Интерпретация результатов анализа исследуемых образцов
* В случае получения невалидного результата необходимо
провести повторное ПЦР-исследование соответствующего
исследуемого образца, начиная с этапа экстракции РНК.
VER 19.06.26 / стр. 26 из 32
ПРОВЕДЕНИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
** В случае получения сомнительного результата необходимо
провести повторное ПЦР-исследование соответствующего
исследуемого образца, начиная с этапа амплификации. В случае
повторения аналогичного результата образец считать
положительным. При получении отрицательного результата в
повторной постановке образец считать сомнительным и
рекомендовать повторное взятие материала для анализа.
ВНИМАНИЕ! Граничные значения Ct указаны во вкладыше с
настройками, прилагаемом к набору реагентов.
Возможные ошибки:
1. Для положительного контроля ОТ-ПЦР (PCR C+):
а) значение порогового цикла (Сt) по каналам для
флуорофоров JOE и/или ROX отсутствует или превышает
граничное значение. Невозможна интерпретация
результатов для образцов, в которых не обнаружена РНК
аналита, определяемого по данному каналу. Необходимо
повторить ОТ-ПЦР-исследование для таких образцов, а
для образцов, начиная с этапа амплификации, в которых
обнаружена РНК определяемых аналитов, требуется
исключить ситуацию, описанную в п. 5.
б) значение порогового цикла (Сt) по каналу для
флуорофора FAM отсутствует или превышает граничное
значение. Интерпретацию результатов проводят в
соответствии с табл. 15.
2. Для положительного контроля экстракции (C+):
а) значение порогового цикла по каналам для флуорофоров
JOE и/или ROX отсутствует или превышает граничное
значение. Невозможна интерпретация результатов для
образцов, в которых не обнаружена РНК аналита,
определяемого по данному каналу. Необходимо
повторить ОТ-ПЦР-исследование для таких образцов,
начиная с этапа экстракции РНК, а для образцов, в
которых обнаружена РНК определяемых аналитов,
требуется исключить ситуацию, описанную в п. 5.
б) значение порогового цикла (Сt) по каналу для
флуорофора FAM отсутствует или превышает граничное
значение. Интерпретацию результатов проводят в
соответствии с табл. 15.
3. Для отрицательного контроля экстракции (C–):
VER 19.06.26 / стр. 27 из 32
ПРОВЕДЕНИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
а) по каналам для флуорофоров JOE и/или ROX определено
значение порогового цикла (Сt). Вероятна контаминация
лаборатории продуктами амплификации или
контаминация реагентов, исследуемых образцов на
каком-либо этапе ОТ-ПЦР-исследования. Невозможна
интерпретация результатов для образцов, в которых
обнаружена РНК аналита, определяемого по данному
каналу. Необходимо предпринять меры по выявлению и
ликвидации источника контаминации и повторить ОТ-
ПЦР-исследование для таких образцов, начиная с этапа
экстракции РНК.
б) по каналу для флуорофора FAM значение порогового
цикла (Сt) отсутствует или определено больше
граничного. Интерпретацию результатов проводят в
соответствии с табл. 15.
4. Для отрицательного контроля ОТ-ПЦР (PCR C–):
а) по каналам для флуорофоров JOE и/или ROX определено
значение порогового цикла (Сt). Вероятна контаминация
лаборатории продуктами амплификации или
контаминация реагентов, исследуемых образцов на
каком-либо этапе ОТ-ПЦР-исследования. Невозможна
интерпретация результатов для образцов, в которых
обнаружена РНК аналита, определяемого по данному
каналу. Необходимо предпринять меры по выявлению и
ликвидации источника контаминации и повторить ОТ-
ПЦР-исследование для таких образцов, начиная с этапа
амплификации.
б) по каналу для флуорофора FAM определено значение
порогового цикла (Сt). Вероятна контаминация
лаборатории продуктами амплификации или
контаминация реагентов, исследуемых образцов на
каком-либо этапе ОТ-ПЦР-исследования. Невозможна
интерпретация результатов для образцов, в которых не
обнаружена РНК определяемых аналитов. Необходимо
предпринять меры по выявлению и ликвидации источника
контаминации и повторить ОТ-ПЦР-исследование для
таких образцов, начиная с этапа амплификации.
5. Для исследуемого образца определено значение порогового
цикла, при этом на графике флуоресценции (в режиме
просмотра необработанных («сырых») данных) отсутствует
VER 19.06.26 / стр. 28 из 32
СРОК ГОДНОСТИ. УСЛОВИЯ ТРАНСПОРТИРОВАНИЯ И
ХРАНЕНИЯ
Срок годности. 12 мес. Набор реагентов с истекшим сроком
годности применению не подлежит. Срок годности вскрытых
реагентов соответствует сроку годности, указанному на
этикетках для невскрытых реагентов.
Транспортирование.
Транспортирование проводить всеми видами крытых
транспортных средств в термоконтейнерах, содержащих
хладоэлементы, или в авторефрижераторах.
Набор реагентов транспортировать при температуре от 2 до 8 °С
не более 5 сут.
Хранение.
Реагенты после вскрытия хранить при той же температуре, что
до вскрытия.
Форма FRT-48F состоит из двух частей, хранящихся при разных
температурах:
- часть 1 (PCR C+ (Hanta PUUV / DOBV), C+ (Hanta PUUV /
DOBV-rec), PCR C–, IC (ВКО STI-87-rec), C–) хранить в
холодильной камере при температуре от 2 до 8 °С;
- часть 2 (Mix-Hanta PUUV / DOBV, Buffer-С, TaqF, RTase, RT-
G-mix-2) хранить в морозильной камере при температуре от
минус 24 до минус 16 °С. Mix-Hanta PUUV / DOBV хранить в
защищенном от света месте. Допускается проводить
замораживание и оттаивание реагентов не более 13 раз.
Холодильные и морозильные камеры должны обеспечивать
регламентированный температурный режим.
VER 19.06.26 / стр. 30 из 32
ГАРАНТИЙНЫЕ ОБЯЗАТЕЛЬСТВА ИЗГОТОВИТЕЛЯ
Изготовитель гарантирует соответствие основных
параметров и характеристик набора реагентов требованиям,
указанным в технической и эксплуатационной документации, в
течение указанного срока годности при соблюдении всех
условий транспортирования, хранения и применения.
Медицинское изделие техническому обслуживанию и ремонту
не подлежит.
Рекламации на качество набора реагентов направлять по
адресу 111123, г. Москва, ул. Новогиреевская, дом 3А, e-mail:
obtk@pcr.ru. Отзывы и предложения о продукции AmpliSens® вы
можете оставить, заполнив анкету потребителя на сайте:
www.amplisens.ru.
При выявлении побочных действий, не указанных в
инструкции по применению набора реагентов, нежелательных
реакций при его использовании, фактов и обстоятельств,
создающих угрозу жизни и здоровью граждан и медицинских
работников при применении набора реагентов, рекомендуется
направить сообщение по адресу, указанному выше, и в
уполномоченную государственную регулирующую организацию
(в РФ – Федеральная служба по надзору в сфере
здравоохранения) в соответствии с действующим
законодательством.
VER 19.06.26 / стр. 31 из 32
| Номер по каталогу | Осторожно |
| | Содержимого |
| Код партии | |
| | проведения < |
| Медицинское изделие для | |
| | Использовать |
| диагностики in vitro | |
| | Обратитесь к |
| | применению и |
| Дата изменения | |
| | по применени |
| | виде |
| | Не допускать |
| Температурный диапазон | |
| | солнечного св |
| Изготовитель | Дата изготовл |
СИМВОЛЫ, ИСПОЛЬЗУЕМЫЕ В ПЕЧАТНОЙ ПРОДУКЦИИ
достаточно для
n> тестов
до
инструкции по
или к инструкции
ю в электронном
воздействия
вета
ения
VER 19.06.26 / стр. 32 из 32
ОГЛАВЛЕНИЕ
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ .................................................................................................. 3
ОБЩИЕ СВЕДЕНИЯ ......................................................................................................... 3
НАЗНАЧЕНИЕ ................................................................................................................... 4
ПРИНЦИП РАБОТЫ .......................................................................................................... 4
УСЛОВИЯ ВЫПОЛНЕНИЯ ПРОГРАММЫ ....................................................................... 4
Требования к техническим средствам оператора ...................................................... 4
Требования к входным данным ................................................................................... 5
Требования к информационной безопасности ........................................................... 5
ВЫПОЛНЕНИЕ ПРОГРАММЫ ......................................................................................... 6
Загрузка ПО в ARTS ..................................................................................................... 6
Формирование и запуск постановки ............................................................................ 6
Анализ и интерпретация результатов ......................................................................... 7
Авторизация результатов исследования .................................................................... 9
Формирование бланка с результатами ....................................................................... 9
СООБЩЕНИЯ ОПЕРАТОРУ ........................................................................................... 10
ТЕХНИЧЕСКАЯ ПОДДЕРЖКА И ИНФОРМАЦИЯ О РАЗРАБОТЧИКЕ ........................ 11
VER 13.02.26 / стр. 2 из 12
| ВКО | - внутренний контрольный образец |
| ГЭ | - геномный эквивалент (геном) |
| ДНК | - дезоксирибонуклеиновая кислота |
| Детектирующий амплификатор | - прибор для проведения амплификации c детекцией в режиме «реального времени» |
| МЕ | - международная единица |
| ПО | - программное обеспечение AmpliSens® Hanta PUUV / DOBV Soft |
| ОТ-ПЦР | - полимеразная цепная реакция с обратной транскрипцией |
| РНК | - рибонуклеиновая кислота |
| ARTS | - программное обеспечение ARTS |
| С+ | - положительный контроль экстракции |
| С- | - отрицательный контроль экстракции |
| Ct | - сycle threshold (пороговый цикл) |
| PCR C– | - отрицательный контроль амплификации |
| PUUV | - Puumala orthohantavirus |
| DOBV | - Dobrava-Belgrade orthohantavirus |
| Hanta | - род Orthohantavirus |
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
В настоящем руководстве применяются следующие сокращения и обозначения:
ОБЩИЕ СВЕДЕНИЯ
Наименование и версия программного обеспечения:
AmpliSens® Hanta PUUV / DOBV Soft.
Версия ПО отображается для каждой серии набора реагентов во вкладыше для
автоматизированной работы, а также доступна в каталоге методик или в пакете
методик.
В соответствии с разделом «Порядок нумерации версий программного
обеспечения» третье числовое значение версии (изменения, не влияющие на
функционал, безопасность и эффективность медицинского изделия) может
изменяться при выпуске новой серий набора реагентов. Данное изменение не требует
внесения изменений в комплект регистрационной документации на медицинское
изделие.
Способ размещения и доступа к программному обеспечению: входит в состав
набора реагентов AmpliSens® Hanta PUUV / DOBV. ПО и руководство оператора
предоставляются на электронном носителе или на сайте Изготовителя
(www.amplisens.ru).
Класс безопасности: Класс А в соответствии с п. 4.3 ГОСТ IEC 62304.
Порядок нумерации версий программного обеспечения: Обозначение версии
состоит из трех чисел, разделенных точками, означающих нумерацию мажорных,
минорных и незначимых изменений соответственно. Мажорные изменения означают
изменение функционального назначения, принципа работы, структуры и функций
составных частей программного обеспечения; минорные изменения означают
VER 13.02.26 / стр. 3 из 12
изменения названий и обозначений в информационном блоке программного
обеспечения; незначимые изменения означают изменения (включая исправление
ошибок) и доработки, не изменяющие функции, описанные для мажорных и минорных
изменений.
Программное обеспечение соответствует требованиям ГОСТ IEC 62304.
НАЗНАЧЕНИЕ
ПО предназначено для автоматического программирования детектирующего
амплификатора, совместимого с ARTS, и автоматической обработки и интерпретации
результатов исследования при использовании набора реагентов AmpliSens® Hanta
PUUV / DOBV (далее – набор реагентов). ПО представляет собой программу,
содержащую критерии анализа кривых флуоресценции и алгоритм интерпретации
результатов, а также информацию об аналитах, используемом биологическом
материале, реагентах и контрольных образцах, программе амплификации, указанных
в инструкции к набору реагентов.
ПРИНЦИП РАБОТЫ
ПО совместимо с ARTS. В соответствии с информацией об используемом
биологическом материале, реагентах, контрольных образцах и программе
амплификации, указанной в ПО, ARTS осуществляет запуск детектирующих
амплификаторов. После завершения амплификации ARTS визуализирует
полученные флуоресцентные кривые и осуществляет автоматический экспорт
полученных данных для контрольных и исследуемых образцов в ПО.
ПО проводит автоматическую интерпретацию результатов с использованием
полученных значений пороговых циклов (Ct), включая оценку валидности контрольных
образцов и исследования в целом. Полученные в ПО результаты автоматически
передаются в ARTS для их визуализации оператору.
Допускается программирование и запуск детектирующего амплификатора без
использования ПО и ARTS. В этом случае файл с данными, полученный на
детектирующем амплификаторе, можно экспортировать в ПО для дальнейшей
автоматической интерпретации результатов.
Технологии искусственного интеллекта в ПО не используются.
УСЛОВИЯ ВЫПОЛНЕНИЯ ПРОГРАММЫ
Требования к техническим средствам оператора
Требования к персональному компьютеру указаны в таблице 1.
VER 13.02.26 / стр. 4 из 12
Таблица 1
Характеристика Минимальное значение
Оперативная память 4 ГБ
Свободное место на жестком диске, включая
16 ГБ
установку совместимого ПО
- Windows 7 Service pack 1;
- Microsoft Excel 2003;
Совместимое программное обеспечение
- ARTS версии 1.0.9;
- PostgreSQL версии 12
32-разрядный (x86) или 64-разрядный (x64)
Процессор
с тактовой частотой 1,5 ГГц
Графическое устройство DirectX 9 с драйвером WDDM 1.0
Требования к входным данным
Обозначения ячеек исследуемых и контрольных образцов в интерфейсе ARTS
должны строго соответствовать их фактическому расположению в реакционном блоке
детектирующего амплификатора.
Требования к информационной безопасности
Влияние угроз и уязвимостей ПО на пользователей или пациентов отсутствует.
ПО не содержит и не обрабатывает персональные данные пациентов.
Средства криптографической защиты в ПО не используются.
Доступ к ПО осуществляется с помощью авторизации пользователя в ARTS
(учетная запись). Уровень доступа пользователей должен быть обеспечен исходя из
требуемой функциональности.
В рамках инфраструктуры информационных технологий, использующей ПО,
необходимо:
− предпринять меры обеспечения информационной безопасности и
кибербезопасности для непрерывного функционирования ПО и исключения
возможности несанкционированного доступа к информации в ПО;
− предпринять меры, обеспечивающие защиту от нарушения целостности
информации в ПО;
− обеспечить наличие регулярных архивных копий ПО (в т.ч. базы данных) с
возможностью их восстановления;
− использовать средства защиты от вредоносных программ;
− соблюдать требования к информационной безопасности, указанные в руководстве
оператора ARTS.
VER 13.02.26 / стр. 5 из 12
ВЫПОЛНЕНИЕ ПРОГРАММЫ
Загрузка ПО в ARTS
Загрузка ПО в ARTS при наличии подключения персонального компьютера к сети
Интернет производится автоматически при запуске ARTS.
При отсутствии подключения персонального компьютера к сети Интернет загрузка
в ARTS производится вручную с электронного носителя путем выбора файла с
пакетом программного обеспечения, включающим ПО.
После завершения загрузки установленное ПО отображается в списке пакетов
методик и доступно для формирования и расчета постановок.
Формирование и запуск постановки
Формирование постановки производится с использованием интерфейса ARTS. В
соответствии с руководством оператора к ARTS необходимо выполнить следующие
действия:
1. Открыть ARTS.
2. Зарегистрировать серию набора реагентов и ввести переменную информацию (при
наличии), используя информацию из вкладыша для автоматизированной работы к
данной серии набора реагентов.
3. При необходимости сформировать список образцов для исследования с
применением набора реагентов (вручную или загрузить из лабораторных
информационных систем).
4. Выбрать детектирующий амплификатор и необходимый реакционный блок.
5. Сформировать постановку:
5.1. Выбрать из списка доступных программных обеспечений ПО AmpliSens® Hanta
PUUV / DOBV и серию набора реагентов.
5.2. На схематическом изображении реакционного блока детектирующего
амплификатора в используемых ячейках разместить образцы из списка,
сформированного в п. 3 (или ввести их обозначения вручную), и контрольные
образцы.
5.3. Сохранить постановку.
6. Осуществить запуск амплификации. Ход амплификации отобразится в виде
кривых накопления флуоресценции.
Примечание – Допускается программирование и запуск детектирующего
амплификатора вручную в соответствии с программой амплификации, указанной в
инструкции к набору реагентов.
VER 13.02.26 / стр. 6 из 12
Анализ и интерпретация результатов
После завершения амплификации ARTS автоматически визуализирует кривые
флуоресценции.
Примечание – Если детектирующий амплификатор был запрограммирован и
запущен вручную, необходимо сформировать постановку, как описано выше,
загрузить файл, полученный в детектирующем амплификаторе, и осуществить
виртуальный расчет в соответствии с руководством оператора ARTS.
Соответствие названий флуорофоров и каналов детекции в ARTS указано в
таблице 2.
Таблица 2
Флуорофор FAM JOE ROX
Название канала детекции FAM HEX ROX
В соответствии с критериями анализа кривых флуоресценции, указанными в ПО,
автоматически определяется статус каждой кривой по каждому каналу детекции:
положительный, отрицательный или сомнительный.
Статус присваивается на основании критериев, оценивающих отклонения формы
кривой накопления флуоресценции от нормальной (S-образной) формы, например:
− наличие неспецифических скачков флуоресцентного сигнала;
− низкое соотношение сигнал/шум;
− кинетика накопления флуоресцентного сигнала, отличная от S-образной.
Сомнительные кривые классифицируются на «Сомнительно +» и
«Сомнительно –», что следует интерпретировать как:
«Сомнительно +» – наиболее вероятно, что для кривой получен положительный
результат, требуется подтверждение.
«Сомнительно –» – наиболее вероятно, что для кривой получен отрицательный
результат, требуется подтверждение.
Каждой сомнительной кривой необходимо присвоить статус: «Положительный»,
«Отрицательный» или сделать заключение о необходимости повторного
исследования данного образца. Для этого:
1. Отобразить кривые по всем каналам детекции в режиме отображения «сырых»
данных с прибора (режим «RAW»).
ВНИМАНИЕ! Не следует принимать решение о статусе сомнительной кривой на
основании просмотра нормализованных кривых (режим «Norma»), т.к. в данном
режиме отображаются флуоресцентные кривые после математической обработки.
2. Отфильтровать кривые со статусом «Сомнительный» по каждому каналу. В
VER 13.02.26 / стр. 7 из 12
скобках рядом с названием канала указано количество сомнительных кривых.
3. В списке образцов последовательно присвоить кривым статус «Положительный»,
«Отрицательный» или сделать заключение о необходимости повторного
исследования данного образца («Перестановка» – образцы будут возвращены в
список образцов для возможности повторного исследования).
ВНИМАНИЕ! Присвоение статуса сомнительным кривым производится на основании
экспертного мнения сотрудника лаборатории, осуществляющего анализ результатов.
В случае если для сомнительной флуоресцентной кривой не удается принять
однозначного решения по ее статусу, рекомендуется провести повторное
исследование для данного образца.
После просмотра кривых флуоресценции и присвоения статуса всем
сомнительным флуоресцентным кривым необходимо запустить интерпретацию
результатов.
Будут выведены результаты, автоматически полученные ПО на основании
значений порогового цикла (Ct) для исследуемых образцов, включая оценку
валидности контрольных образцов и исследования в целом.
Результаты для контрольных образцов выводятся с детализацией по каналам
детекции. Если для одного или нескольких контрольных образцов или при построении
калибровочной прямой получено сообщение об ошибке, данный результат
дублируется в строке статуса постановки.
Результаты для исследуемых образцов выводятся в качественном формате с
учетом статуса контролей и указанием канала детекции.
Возможные варианты интерпретации результатов исследуемых образцов и
соответствующие им комментарии для лаборатории указаны в таблице 3.
Таблица 3
Качественное определение Комментарии для лаборатории
Обнаружено –
Не обнаружено –
Невалидный Повторить исследование с этапа экстракции
Сомнительный Повторить исследование с этапа амплификации
Возможные варианты результатов для контролей и интерпретации результатов
для исследуемых образцов с учетом статуса контролей, а также соответствующие
комментарии для лаборатории указаны в таблице 4.
VER 13.02.26 / стр. 8 из 12
| Статус контроля | Интерпретация результатов для исследуемых образцов с учетом статуса контроля | Комментарии для лаборатории |
| | В соответствии с таблицей 3 | – |
| Ошибка C+ | Интерпретация невозможна для образцов, в которых не обнаружен аналит, определяемый по данному каналу | Повторить исследование с этапа экстракции |
| Ошибка C+ (по каналу ВКО) | В соответствии с таблицей 3 | – |
| Контаминация С– | Интерпретация невозможна для образцов, в которых обнаружен аналит, определяемый по данному каналу | Повторить исследование с этапа экстракции |
| Ошибка С– | В соответствии с таблицей 3 | – |
| Ошибка PCR C+ | Интерпретация невозможна для образцов, в которых не обнаружен аналит, определяемый по данному каналу | Повторить исследование с этапа амплификации |
| Ошибка PCR C+ (по каналу ВКО) | В соответствии с таблицей 3 | – |
| Контаминация PCR C– | Интерпретация невозможна для образцов, в которых обнаружен аналит, определяемый по данному каналу | Повторить исследование с этапа амплификации |
| Контаминация PCR C– (по каналу ВКО) | Интерпретация невозможна для образцов, в которых не обнаружены определяемые аналиты | Повторить исследование с этапа амплификации |
Таблица 4
В случаях, перечисленных в таблице 6, для соответствующих исследуемых
образцов в таблице результатов выводится сообщение «Интерпретация невозможна»
с указанием причины (например, «Интерпретация невозможна (Ошибка ПК)»).
Авторизация результатов исследования
После вывода результатов для исследуемых образцов необходимо авторизовать
(подтвердить) или отвергнуть (отклонить) результаты автоматической интерпретации.
В том числе, возможны следующие действия в соответствии с руководством
оператора к ARTS:
− отправка образца на повторное исследование;
− отмена результата исследования всех образцов в постановке;
− авторизация результата исследования каждого образца;
− авторизация результата исследования всех образцов в постановке;
− выгрузка результатов исследования в формате электронной таблицы.
− выгрузка постановки в отдельный файл для просмотра в ARTS.
VER 13.02.26 / стр. 9 из 12
Формирование бланка с результатами
ВНИМАНИЕ! Только авторизованные результаты исследования, полученные с
помощью ПО, передаются в ARTS для формирования бланков с результатами для
исследуемых образцов и/или передачи в лабораторную информационную систему.
Формирование бланков с результатами производится оператором в ARTS. Поиск,
просмотр и печать бланков осуществляется через интерфейс ARTS в соответствии с
руководством оператора ARTS.
ВНИМАНИЕ! Установление диагноза и назначение лечения должны производиться
врачом соответствующей специализации.
СООБЩЕНИЯ ОПЕРАТОРУ
Сообщение Причина сообщения Дальнейшие действия оператора
Для AmpliSens®
Hanta PUUV / Указать положение ПК в
В реакционном блоке не
DOBV Soft не реакционном блоке, используя
размещен PCR C+
размещен кнопку PCR C+
контроль PCR C+
Для AmpliSens®
Hanta PUUV / Указать положение ОК в
В реакционном блоке не
DOBV Soft не реакционном блоке, используя
размещен С–
размещен кнопку С–
контроль С–
Краткое описание действий
оператора выводится в столбце
Значение Ct для образца C+
«Комментарии для лаборатории» в
отсутствует или превышает
Ошибка C+ соответствии с таблицей 4. Более
граничное по каналам для
подробную информацию см. в
флуорофоров JOE и/или ROX
инструкции по применению набора
реагентов
Краткое описание действий
оператора выводится в столбце
Значение Ct для образца C+
«Комментарии для лаборатории» в
Ошибка C+ (по отсутствует или превышает
соответствии с таблицей 4. Более
каналу ВКО) граничное по каналу для
подробную информацию см. в
флуорофора FAM
инструкции по применению набора
реагентов
Краткое описание действий
Значение Ct для образца PCR оператора выводится в столбце
C+ отсутствует или «Комментарии для лаборатории» в
Ошибка PCR C+ превышает граничное по соответствии с таблицей 4. Более
каналам для флуорофоров подробную информацию см. в
JOE и/или ROX инструкции по применению набора
реагентов
Краткое описание действий
оператора выводится в столбце
Значение Ct для образца PCR
«Комментарии для лаборатории» в
Ошибка PCR C+ C+ отсутствует или
соответствии с таблицей 4. Более
(по каналу ВКО) превышает граничное по
подробную информацию см. в
каналу для флуорофора FAM
инструкции по применению набора
реагентов
VER 13.02.26 / стр. 10 из 12
Сообщение Причина сообщения Дальнейшие действия оператора
Краткое описание действий
оператора выводится в столбце
Определено значение Ct для «Комментарии для лаборатории» в
Контаминация С– образца С– по каналам для соответствии с таблицей 4. Более
флуорофоров JOE и/или ROX подробную информацию см. в
инструкции по применению набора
реагентов
Краткое описание действий
оператора выводится в столбце
Определено значение Ct для
«Комментарии для лаборатории» в
Контаминация PCR образца PCR C- по каналам
соответствии с таблицей 4. Более
C– для флуорофоров JOE и/или
подробную информацию см. в
ROX
инструкции по применению набора
реагентов
Краткое описание действий
оператора выводится в столбце
Определено значение Ct для «Комментарии для лаборатории» в
Контаминация PCR
образца PCR C- по каналу для соответствии с таблицей 4. Более
C– (по каналу ВКО)
флуорофора FAM подробную информацию см. в
инструкции по применению набора
реагентов
Краткое описание действий
оператора выводится в столбце
Значение Ct для образца С–
«Комментарии для лаборатории» в
отсутствует или превышает
Ошибка С– соответствии с таблицей 4. Более
граничное по каналу для
подробную информацию см. в
флуорофора FAM
инструкции по применению набора
реагентов
ТЕХНИЧЕСКАЯ ПОДДЕРЖКА И ИНФОРМАЦИЯ О РАЗРАБОТЧИКЕ
При выявлении сбоев в работе ПО рекомендуется обращаться в техническую
поддержку. При обращении в техническую поддержку необходимо предоставить
следующую информацию:
- Номер версии ПО и ARTS.
- Описание ошибки (текст или изображение).
- Описание действия / последовательности действий, при которых возникла ошибка.
- Контакты для обратной связи.
Сотрудники технической поддержки могут запросить дополнительную
информацию для решения вопроса.
Телефон: +7 (495) 304 22 06 в рабочие часы организации.
Почта: lab@amplisens.ru в режиме 24х7.
Разработчик ПО: Федеральное бюджетное учреждение науки «Центральный
научно-исследовательский институт эпидемиологии» Федеральной службы по
надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (ФБУН ЦНИИ
Эпидемиологии Роспотребнадзора).
VER 13.02.26 / стр. 11 из 12
Руководство оператора и интерфейс программного обеспечения разработаны на
русском языке и могут быть переведены на другие языки без внесения изменений в
программный код ПО.
VER 13.02.26 / стр. 12 из 12
Инструкция по применению набора
реагентов расположена на сайте
www.amplisens.ru
Краткое руководство
набор реагентов
AmpliSens Hanta PUUV / DOBV
Форма FRT-48F: REF H-4781-1
ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии
Роспотребнадзора,
Российская Федерация, 111123,
г. Москва, ул. Новогиреевская, д. 3А
г. Москва, ул. Новогиреевская, д. 3А, стр. 6
тел. (495) 974 9642,
е-mail: amplisens@pcr.ru
VER 19.06.2026
ВНИМАНИЕ! Краткое руководство предназначено для удобства работы с набором реагентов в лаборатории
и может быть использовано только после детального ознакомления с инструкцией по применению данного
набора реагентов. Анализ и интерпретацию результатов необходимо проводить в соответствии с
инструкцией к набору реагентов.
ЭКСТРАКЦИЯ РНК ИЗ ИССЛЕДУЕМЫХ ОБРАЗЦОВ
Комплекты для экстракции:
– «РИБО-преп»;
– «МАГНО-сорб» (с использованием магнитных штативов вручную или автоматических станций для экстракции
нуклеиновых кислот1).
Контроли: Внутренний контрольный образец IC (ВКО-STI-87-rec) – в каждом образце.
Для каждой группы экстрагируемых образцов: 1 отрицательный контроль экстракции (С–),
ВНИМАНИЕ! При получении новой серии набора реагентов необходима постановка положительного контроля
экстракции (C+). В пробирку положительного контроля экстракции (C+) внести 10 мкл C+ (Hanta PUUV / DOBV-rec)
и 90 мкл C– соответственно.
Объем исследуемого образца, контролей и элюции
При экстракции с помощью «РИБО-преп» добавить:
IC (ВКО-STI-87-rec) 10 мкл в каждую пробирку
плазма венозной крови,
100 мкл в пробирки для исследуемых образцов
тканевой материал грызунов
C– 100 мкл в пробирку для C–
Элюция
все образцы 50 мкл в каждую пробирку
1 Например, KingFisher Flex, Auto-Pure 96.
Стр. 1 из 3
| | Внести по 15 мкл | | | |
| Приготовленной реакционной смеси | | в каждую пробирку | | |
| | Внести по 10 мкл | | | |
| Проб РНК, экстрагированных из исследуемых образцов, С– | | в пробирки для исследуемых образцов, C– | При проведении экстракции методом магнитной сепарации необходимо избегать попадания сорбента в реакционную смесь! | |
| PCR C+ (Hanta PUUV / DOBV) | | в пробирку для PCR C+ | | |
При экстракции с помощью «МАГНО-сорб» из 100 мкл добавить:
IC (ВКО-STI-87-rec) 10 мкл на каждый образец
в пробирки/лунки для исследуемых
тканевой материал грызунов 100 мкл
образцов
C– 100 мкл в пробирку/лунку для C–
Элюция
все образцы 100 мкл в каждую пробирку/лунку
При экстракции с помощью «МАГНО-сорб» из 200 мкл добавить:
IC (ВКО-STI-87-rec) 10 мкл на каждый образец
в пробирки/лунки для исследуемых
плазма венозной крови 200 мкл
образцов
C– 100 мкл в пробирку/лунку для C–
Элюция
все образцы 100 мкл в каждую пробирку/лунку
При экстракции с помощью «МАГНО-сорб» из 1000 мкл добавить:
IC (ВКО-STI-87-rec) 10 мкл на каждый образец
в пробирки/лунки для исследуемых
плазма венозной крови, моча 1000 мкл
образцов
C– 100 мкл в пробирку/лунку для C–
Элюция
все образцы 100 мкл в каждую пробирку/лунку
ВНИМАНИЕ! Реакцию ОТ-ПЦР рекомендуется проводить сразу после получения проб РНК. Допускается хранение
проб РНК при температуре от 2 до 8°С не более 30 мин, при температуре от минус 24 до минус 16 °С – не более
недели и при температуре не выше минус 68 °С – до года. Допускается однократное замораживание-оттаивание
проб РНК.
ПОДГОТОВКА ПРОБ ДЛЯ ОТ-ПЦР С ПОМОЩЬЮ Формы FRT-48F
Общий объем реакционной смеси: 25 мкл, включая объем пробы РНК (10 мкл).
Контроли: для каждой группы амплифицируемых образцов 1 положительный контроль ОТ-ПЦР (PCR C+) и 1
отрицательный контроль экстракции (C–).
- Разморозить и перемешать содержимое пробирок с реагентами, осадить капли на вортексе.
- В отдельной пробирке подготовить реакционную смесь:
Компонент реакционной смеси Объем, мкл Обозначения
Мix-Hanta PUUV / DOBV 10*(N+K+1)
0,25; 0,5; 5; 10 – объем реагента, требующийся на
Buffer-C 5*(N+K+1)
одну реакцию,
TaqF 0,5*(N+K+1) N – количество исследуемых образцов;
K – количество контролей;
RTase 0,25*(N+К+1)
1 – запас на одну реакцию
RT-G-mix-2 0,25*(N+К+1)
ВНИМАНИЕ! Компоненты реакционной смеси следует смешивать непосредственно перед проведением ОТ-ПЦР.
Отобрать необходимое количество пробирок или стрипов для ОТ-ПЦР исследуемых и контрольных образцов:
ВНИМАНИЕ! При получении новой серии набора реагентов необходима постановка положительного контроля
экстракции (C+). Для этого в пробирку с реакционной смесью внести 10 мкл пробы, экстрагированной из С+. При
подозрении на возможную контаминацию также необходима постановка отрицательного контроля ОТ-ПЦР (PCR
С–). Для этого в пробирку с реакционной смесью внести 10 мкл PCR С–.
ВНИМАНИЕ! Содержимое пробирок необходимо тщательно перемешать пипетированием, не допуская появления
пузырьков воздуха.
ВНИМАНИЕ! Провести ОТ-ПЦР сразу после соединения реакционной смеси c РНК-пробами и контролями.
ПРОВЕДЕНИЕ ОТ-ПЦР С ДЕТЕКЦИЕЙ В РЕЖИМЕ «РЕАЛЬНОГО ВРЕМЕНИ»
- Установить пробирки в ячейки реакционного модуля и запустить прибор. Рекомендуется:
а) перед постановкой в амплификатор планшетного типа осадить капли со стенок пробирок.
б) в случае неполной загрузки амплификатора планшетного типа дополнительно установить пустые пробирки
Стр. 2 из 3
по краям его реакционного модуля амплификатора.
- Запустить программу амплификации:
а) либо с использованием ПО ARTS совместно с ПО AmpliSens® Hanta PUUV / DOBV Soft. Детектирующий
амплификатор должен быть совместим с ПО ARTS.
б) либо в ручном режиме, запрограммировав детектирующий амплификатор для выполнения программы,
указанной ниже.
Единая программа амплификации «АмплиСенс»
Цикл
Температура, °С Время Детекция флуоресц. сигнала по каналам для флуорофоров Кол-во циклов
1 50 15 мин – 1
2 95 15 мин – 1
95 10 с –
3 45
60 20 с FAM, JOE, ROX
ВНИМАНИЕ! С использованием единой программы можно одновременно проводить в одном приборе любое
сочетание тестов, включая тесты с обратной транскрипцией и амплификацией
АНАЛИЗ И ИНТЕРПРЕТАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ
Анализ результатов проводить вручную с помощью алгоритма, приведенного в инструкции, или с помощью ПО
ARTS совместно с ПО AmpliSens® Hanta PUUV / DOBV Soft.
Анализируют кривые накопления флуоресцентного сигнала по каналам:
Флуорофор FAM JOE ROX
Мишень для амплификации кДНК IC (ВКО STI-87-rec) кДНК DOBV кДНК PUUV
ВНИМАНИЕ! К каждому набору реагентов прилагается вкладыш с настройками, в котором указаны в котором
указаны настройки для приборов и граничные значения порогового цикла (Ct), необходимые для проведения
анализа и интерпретации результатов.
Стр. 3 из 3
ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии Роспотребнадзора
111123, Москва, ул. Новогиреевская 3А,
тел. (495) 974-96-42, факс (495) 305-54-23, e-mail: obtk@pcr.ru
ПАСПОРТ КАЧЕСТВА
Набор реагентов для выявления РНК вирусов
Puumala orthohantavirus и Dobrava-Belgrade orthohantavirus
методом ОТ-ПЦР
AmpliSens Hanta PUUV / DOBV
2026-04-27
Форма FRT-48F
27.04.26
2027-04-27
ТУ 20.59.52-478-01897593-2024
Комплектность, упаковка и маркировка набора указанной серии соответствуют требованиям ТУ.
1. Технические характеристики:
Результаты
Наименование показателя Норма
контроля
Результат для положительного контроля Определено значение Ct меньше граничного по
соответствует
экстракции (С+ (Hanta PUUV / DOBV-rec)) каналам для флуорофоров FAM, JOE, ROX
Определено значение Ct меньше граничного по каналу
Результат для отрицательного контроля
для флуорофора FAM. Значение Ct отсутствует по соответствует
экстракции (C–)
каналам для флуорофоров JOE и ROX
Результат для отрицательного контроля ОТ- Значение Ct отсутствует по каналам для флуорофоров
соответствует
ПЦР (PCR C–) FAM, JOE, ROX
Результат для положительного контроля ОТ- Определено значение Ct меньше граничного по
соответствует
ПЦР (PCR С+ (Hanta PUUV / DOBV)) каналам для флуорофоров FAM, JOE, ROX
2. Состав, внешний вид:
Результаты В составе формы
Наименование реагента Характеристика и нормы
контроля комплектации
C+ (Hanta PUUV / DOBV-rec) Прозрачная бесцветная жидкость соответствует FRT-48F (часть 1 из 2)
PCR C+ (Hanta PUUV / DOBV) Прозрачная бесцветная жидкость соответствует FRT-48F (часть 1 из 2)
PCR C– Прозрачная бесцветная жидкость соответствует FRT-48F (часть 1 из 2)
IC (ВКО STI-87-rec) Прозрачная бесцветная жидкость соответствует FRT-48F (часть 1 из 2)
C– Прозрачная бесцветная жидкость соответствует FRT-48F (часть 1 из 2)
Мix-Hanta PUUV / DOBV
Прозрачная жидкость от бесцветного до
соответствует FRT-48F (часть 2 из 2)
светло-лилового цвета
Buffer-С Прозрачная бесцветная жидкость соответствует FRT-48F (часть 2 из 2)
TaqF Прозрачная бесцветная жидкость соответствует FRT-48F (часть 2 из 2)
RTase Прозрачная бесцветная жидкость соответствует FRT-48F (часть 2 из 2)
RT-G-mix-2 Прозрачная бесцветная жидкость соответствует FRT-48F (часть 2 из 2)
3. Условия транспортирования и хранения:
Транспортирование.
Транспортирование проводить всеми видами крытых транспортных средств в термоконтейнерах, содержащих
хладоэлементы, или в авторефрижераторах.
Набор реагентов транспортировать при температуре от 2 до 8 °С не более 5 сут.
Хранение.
Реагенты после вскрытия хранить при той же температуре, что до вскрытия.
Форма FRT-48F состоит из двух частей, хранящихся при разных температурах:
- часть 1 (PCR C+ (Hanta PUUV / DOBV), C+ (Hanta PUUV / DOBV-rec), PCR C–, IC (ВКО STI-87-rec), C–) хранить в
холодильной камере при температуре от 2 до 8 °С;
- часть 2 (Mix-Hanta PUUV / DOBV, Buffer-С, TaqF, RTase, RT-G-mix-2) хранить в морозильной камере при температуре от
минус 24 до минус 16 °С. Mix-Hanta PUUV / DOBV хранить в защищенном от света месте. Допускается проводить
замораживание и оттаивание реагентов не более 13 раз.
Холодильные и морозильные камеры должны обеспечивать регламентированный температурный режим.
Дата выдачи 27.04.26
Руководитель ГКК (Кодуа О.И.)
(подпись) (Ф.И.О.)
Форма FRT-48F: REF H-4781-1
ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии Роспотребнадзора
111123, Москва, ул. Новогиреевская 3А,
тел. (495) 974-96-42, факс (495) 305-54-23, e-mail: obtk@pcr.ru
ПАСПОРТ КАЧЕСТВА
Набор реагентов для выявления РНК вирусов
Puumala orthohantavirus и Dobrava-Belgrade orthohantavirus
методом ОТ-ПЦР
AmpliSens Hanta PUUV / DOBV
2026-04-27
Форма FRT-48F
А27.04.26
2027-04-27
ТУ 20.59.52-478-01897593-2024
Комплектность, упаковка и маркировка набора указанной серии соответствуют требованиям ТУ.
1. Технические характеристики:
Результаты
Наименование показателя Норма
контроля
Результат для положительного контроля Определено значение Ct меньше граничного по
соответствует
экстракции (С+ (Hanta PUUV / DOBV-rec)) каналам для флуорофоров FAM, JOE, ROX
Определено значение Ct меньше граничного по каналу
Результат для отрицательного контроля
для флуорофора FAM. Значение Ct отсутствует по соответствует
экстракции (C–)
каналам для флуорофоров JOE и ROX
Результат для отрицательного контроля ОТ- Значение Ct отсутствует по каналам для флуорофоров
соответствует
ПЦР (PCR C–) FAM, JOE, ROX
Результат для положительного контроля ОТ- Определено значение Ct меньше граничного по
соответствует
ПЦР (PCR С+ (Hanta PUUV / DOBV)) каналам для флуорофоров FAM, JOE, ROX
2. Состав, внешний вид:
Результаты В составе формы
Наименование реагента Характеристика и нормы
контроля комплектации
C+ (Hanta PUUV / DOBV-rec) Прозрачная бесцветная жидкость соответствует FRT-48F (часть 1 из 2)
PCR C+ (Hanta PUUV / DOBV) Прозрачная бесцветная жидкость соответствует FRT-48F (часть 1 из 2)
PCR C– Прозрачная бесцветная жидкость соответствует FRT-48F (часть 1 из 2)
IC (ВКО STI-87-rec) Прозрачная бесцветная жидкость соответствует FRT-48F (часть 1 из 2)
C– Прозрачная бесцветная жидкость соответствует FRT-48F (часть 1 из 2)
Мix-Hanta PUUV / DOBV
Прозрачная жидкость от бесцветного до
соответствует FRT-48F (часть 2 из 2)
светло-лилового цвета
Buffer-С Прозрачная бесцветная жидкость соответствует FRT-48F (часть 2 из 2)
TaqF Прозрачная бесцветная жидкость соответствует FRT-48F (часть 2 из 2)
RTase Прозрачная бесцветная жидкость соответствует FRT-48F (часть 2 из 2)
RT-G-mix-2 Прозрачная бесцветная жидкость соответствует FRT-48F (часть 2 из 2)
3. Условия транспортирования и хранения:
Транспортирование.
Транспортирование проводить всеми видами крытых транспортных средств в термоконтейнерах, содержащих
хладоэлементы, или в авторефрижераторах.
Набор реагентов транспортировать при температуре от 2 до 8 °С не более 5 сут.
Хранение.
Реагенты после вскрытия хранить при той же температуре, что до вскрытия.
Форма FRT-48F состоит из двух частей, хранящихся при разных температурах:
- часть 1 (PCR C+ (Hanta PUUV / DOBV), C+ (Hanta PUUV / DOBV-rec), PCR C–, IC (ВКО STI-87-rec), C–) хранить в
холодильной камере при температуре от 2 до 8 °С;
- часть 2 (Mix-Hanta PUUV / DOBV, Buffer-С, TaqF, RTase, RT-G-mix-2) хранить в морозильной камере при температуре от
минус 24 до минус 16 °С. Mix-Hanta PUUV / DOBV хранить в защищенном от света месте. Допускается проводить
замораживание и оттаивание реагентов не более 13 раз.
Холодильные и морозильные камеры должны обеспечивать регламентированный температурный режим.
Дата выдачи 27.04.26
Руководитель ГКК (Кодуа О.И.)
(подпись) (Ф.И.О.)
Форма FRT-48F: REF H-4781-1
_ . . . КОПИЯ Br.?JIЛ
L
Прошито,пронумеровано скреплено r1c•iftri,10·:
~f2::~~---- лист~-..
РуловодптсльСJ!)'l!<"бЫ регистрации мециципских издсэий
ФGYJJцнииЭпидсмиологии l'ос11отрсбнащоr,а
(До;;срсн:шс,ъ}:о·128/25-от JJ.l l.202:7i 1'.)·
| Канал | Calibrate / Gain Optimisation… / Опт.уровня сигн | More Settings/ Outlier Removal/ Устранение выбросов | Slope Correct / Коррект. уклона | Threshold / Порог | Eliminate Cycles before / Исключить циклы |
| FAM/Green | от 5Fl до 10Fl | 10 % | включена | 0,02 | 5 |
| JOE/Yellow | от 1Fl до 3Fl | 10 % | включена | 0,03 | 5 |
| ROX/Orange | от 2Fl до 5Fl | 10 % | включена | 0,03 | 5 |
| Канал | Calibrate / Gain Optimisation… / Опт.уровня сигн | More Settings/ Outlier Removal/ Устранение выбросов | Slope Correct / Коррект. уклона | Threshold / Порог | Eliminate Cycles before / Исключить циклы |
| FAM/Green | от 5Fl до 10Fl | 10 % | включена | 0,02 | 5 |
| JOE/Yellow | от 1Fl до 3Fl | 10 % | включена | 0,03 | 5 |
| ROX/Orange | от 2Fl до 5Fl | 10 % | включена | 0,03 | 5 |
| Образец | Программа прибора | | | AmpliSens® Hanta PUUV / DOBV Soft | | |
| | Канал для флуорофора | | | | | |
| | FAM | JOE | ROX | FAM | JOE | ROX |
| PCR C+ | 33 | 33 | 31 | 37 | 34 | 32 |
| C– | 35 | отсутствует | | 38 | отсутствует | |
| C+ | 35 | 33 | 30 | 38 | 34 | 31 |
| PCR C– | отсутствует | | | отсутствует | | |
| Исследуемые образцы | 35 | 42 | 42 | 38 | 42 | 42 |
| Образец | Программа прибора | | | AmpliSens® Hanta PUUV / DOBV Soft | | |
| | Канал для флуорофора | | | | | |
| | FAM | JOE | ROX | FAM | JOE | ROX |
| PCR C+ | 33 | 33 | 31 | 37 | 34 | 32 |
| C– | 35 | отсутствует | | 38 | отсутствует | |
| C+ | 35 | 33 | 30 | 38 | 34 | 31 |
| PCR C– | отсутствует | | | отсутствует | | |
| Исследуемые образцы | 35 | 42 | 42 | 38 | 42 | 42 |
ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии
Роспотребнадзора Роспотребнадзора
ВКЛАДЫШ с настройками ВКЛАДЫШ с настройками
к набору реагентов к набору реагентов
AmpliSens Hanta PUUV / DOBV AmpliSens Hanta PUUV / DOBV
Форма FRT-48F REF H-4781-1 Форма FRT-48F REF H-4781-1
LOT 27.04.26 LOT 27.04.26
Настройки для приборов роторного типа Настройки для приборов роторного типа
Rotor-Gene 3000/6000/Q Rotor-Gene 3000/6000/Q
Примечание – В том случае, если кривые флуоресценции по каналам FAM/Green и ROX/Orange Примечание – В том случае, если кривые флуоресценции по каналам FAM/Green и ROX/Orange
не соответствуют экспоненциальному росту, установить значение порога отрицательных проб не соответствуют экспоненциальному росту, установить значение порога отрицательных проб
(NTC threshold /Порог Фона - ПФ) равным 15 %. (NTC threshold /Порог Фона - ПФ) равным 15 %.
Настройки для приборов планшетного типа Настройки для приборов планшетного типа
CFX96, ДТ-96/«ДТпрайм» CFX96, ДТ-96/«ДТпрайм»
Примечание – Для каждого шага этапа циклирования, нажав кнопку Step Options, задать скорость Примечание – Для каждого шага этапа циклирования, нажав кнопку Step Options, задать скорость
нагревания/охлаждения Ramp Rate 2,5 °С/sec. Для прибора CFX96 указать нормализацию данных нагревания/охлаждения Ramp Rate 2,5 °С/sec. Для прибора CFX96 указать нормализацию данных
All Selected Rows 2-20. All Selected Rows 2-20.
Канал Threshold/Порог Канал Threshold/Порог
Установить пороговую линию на уровне 5% от максимального уровня Установить пороговую линию на уровне 5% от максимального уровня
Fam,Hex,Rox Fam,Hex,Rox
флуоресценции образцов ПКО в последнем цикле амплификации флуоресценции образцов ПКО в последнем цикле амплификации
Примечание – Кривая флуоресценции ПКО должна пересекать пороговую линию на участке характерного Примечание – Кривая флуоресценции ПКО должна пересекать пороговую линию на участке характерного
экспоненциального подъема флуоресценции, переходящего в линейный подъем. экспоненциального подъема флуоресценции, переходящего в линейный подъем.
Граничные значения порогового цикла Ct для приборов роторного типа: Граничные значения порогового цикла Ct для приборов роторного типа:
Продолжение см. на обратной стороне Продолжение см. на обратной стороне
| Образец | Программа прибора | | | AmpliSens® Hanta PUUV / DOBV Soft | | |
| | Канал для флуорофора | | | | | |
| | FAM | JOE | ROX | FAM | JOE | ROX |
| PCR C+ | 37 | 36 | 34 | 37 | 37 | 35 |
| C– | 38 | отсутствует | | 38 | отсутствует | |
| C+ | 38 | 36 | 33 | 38 | 37 | 34 |
| PCR C– | отсутствует | | | отсутствует | | |
| Исследуемые образцы | 38 | 44 | 44 | 38 | 44 | 44 |
| Образец | Программа прибора | | | AmpliSens® Hanta PUUV / DOBV Soft | | |
| | Канал для флуорофора | | | | | |
| | FAM | JOE | ROX | FAM | JOE | ROX |
| PCR C+ | 37 | 36 | 34 | 37 | 37 | 35 |
| C– | 38 | отсутствует | | 38 | отсутствует | |
| C+ | 38 | 36 | 33 | 38 | 37 | 34 |
| PCR C– | отсутствует | | | отсутствует | | |
| Исследуемые образцы | 38 | 44 | 44 | 38 | 44 | 44 |
Граничные значения порогового цикла Ct для приборов планшетного типа: Граничные значения порогового цикла Ct для приборов планшетного типа:
| Канал | Calibrate / Gain Optimisation… / Опт.уровня сигн | More Settings/ Outlier Removal/ Устранение выбросов | Slope Correct / Коррект. уклона | Threshold / Порог | Eliminate Cycles before / Исключить циклы |
| FAM/Green | от 5Fl до 10Fl | 10 % | включена | 0,02 | 5 |
| JOE/Yellow | от 1Fl до 3Fl | 10 % | включена | 0,03 | 5 |
| ROX/Orange | от 2Fl до 5Fl | 10 % | включена | 0,03 | 5 |
| Канал | Calibrate / Gain Optimisation… / Опт.уровня сигн | More Settings/ Outlier Removal/ Устранение выбросов | Slope Correct / Коррект. уклона | Threshold / Порог | Eliminate Cycles before / Исключить циклы |
| FAM/Green | от 5Fl до 10Fl | 10 % | включена | 0,02 | 5 |
| JOE/Yellow | от 1Fl до 3Fl | 10 % | включена | 0,03 | 5 |
| ROX/Orange | от 2Fl до 5Fl | 10 % | включена | 0,03 | 5 |
| Образец | Программа прибора | | | AmpliSens® Hanta PUUV / DOBV Soft | | |
| | Канал для флуорофора | | | | | |
| | FAM | JOE | ROX | FAM | JOE | ROX |
| PCR C+ | 33 | 33 | 31 | 37 | 34 | 32 |
| C– | 35 | отсутствует | | 38 | отсутствует | |
| C+ | 35 | 33 | 30 | 38 | 34 | 31 |
| PCR C– | отсутствует | | | отсутствует | | |
| Исследуемые образцы | 35 | 42 | 42 | 38 | 42 | 42 |
| Образец | Программа прибора | | | AmpliSens® Hanta PUUV / DOBV Soft | | |
| | Канал для флуорофора | | | | | |
| | FAM | JOE | ROX | FAM | JOE | ROX |
| PCR C+ | 33 | 33 | 31 | 37 | 34 | 32 |
| C– | 35 | отсутствует | | 38 | отсутствует | |
| C+ | 35 | 33 | 30 | 38 | 34 | 31 |
| PCR C– | отсутствует | | | отсутствует | | |
| Исследуемые образцы | 35 | 42 | 42 | 38 | 42 | 42 |
ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии
Роспотребнадзора Роспотребнадзора
ВКЛАДЫШ с настройками ВКЛАДЫШ с настройками
к набору реагентов к набору реагентов
AmpliSens Hanta PUUV / DOBV AmpliSens Hanta PUUV / DOBV
Форма FRT-48F REF H-4781-1 Форма FRT-48F REF H-4781-1
LOT A27.04.26 LOT A27.04.26
Настройки для приборов роторного типа Настройки для приборов роторного типа
Rotor-Gene 3000/6000/Q Rotor-Gene 3000/6000/Q
Примечание – В том случае, если кривые флуоресценции по каналам FAM/Green и ROX/Orange Примечание – В том случае, если кривые флуоресценции по каналам FAM/Green и ROX/Orange
не соответствуют экспоненциальному росту, установить значение порога отрицательных проб не соответствуют экспоненциальному росту, установить значение порога отрицательных проб
(NTC threshold /Порог Фона - ПФ) равным 15 %. (NTC threshold /Порог Фона - ПФ) равным 15 %.
Настройки для приборов планшетного типа Настройки для приборов планшетного типа
CFX96, ДТ-96/«ДТпрайм» CFX96, ДТ-96/«ДТпрайм»
Примечание – Для каждого шага этапа циклирования, нажав кнопку Step Options, задать скорость Примечание – Для каждого шага этапа циклирования, нажав кнопку Step Options, задать скорость
нагревания/охлаждения Ramp Rate 2,5 °С/sec. Для прибора CFX96 указать нормализацию данных нагревания/охлаждения Ramp Rate 2,5 °С/sec. Для прибора CFX96 указать нормализацию данных
All Selected Rows 2-20. All Selected Rows 2-20.
Канал Threshold/Порог Канал Threshold/Порог
Установить пороговую линию на уровне 5% от максимального уровня Установить пороговую линию на уровне 5% от максимального уровня
Fam,Hex,Rox Fam,Hex,Rox
флуоресценции образцов ПКО в последнем цикле амплификации флуоресценции образцов ПКО в последнем цикле амплификации
Примечание – Кривая флуоресценции ПКО должна пересекать пороговую линию на участке характерного Примечание – Кривая флуоресценции ПКО должна пересекать пороговую линию на участке характерного
экспоненциального подъема флуоресценции, переходящего в линейный подъем. экспоненциального подъема флуоресценции, переходящего в линейный подъем.
Граничные значения порогового цикла Ct для приборов роторного типа: Граничные значения порогового цикла Ct для приборов роторного типа:
Продолжение см. на обратной стороне Продолжение см. на обратной стороне
| Образец | Программа прибора | | | AmpliSens® Hanta PUUV / DOBV Soft | | |
| | Канал для флуорофора | | | | | |
| | FAM | JOE | ROX | FAM | JOE | ROX |
| PCR C+ | 37 | 36 | 34 | 37 | 37 | 35 |
| C– | 38 | отсутствует | | 38 | отсутствует | |
| C+ | 38 | 36 | 33 | 38 | 37 | 34 |
| PCR C– | отсутствует | | | отсутствует | | |
| Исследуемые образцы | 38 | 44 | 44 | 38 | 44 | 44 |
| Образец | Программа прибора | | | AmpliSens® Hanta PUUV / DOBV Soft | | |
| | Канал для флуорофора | | | | | |
| | FAM | JOE | ROX | FAM | JOE | ROX |
| PCR C+ | 37 | 36 | 34 | 37 | 37 | 35 |
| C– | 38 | отсутствует | | 38 | отсутствует | |
| C+ | 38 | 36 | 33 | 38 | 37 | 34 |
| PCR C– | отсутствует | | | отсутствует | | |
| Исследуемые образцы | 38 | 44 | 44 | 38 | 44 | 44 |
Граничные значения порогового цикла Ct для приборов планшетного типа: Граничные значения порогового цикла Ct для приборов планшетного типа:
ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии Роспотребнадзора ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии Роспотребнадзора
ВКЛАДЫШ ВКЛАДЫШ
для автоматизированной работы для автоматизированной работы
к набору реагентов AmpliSens® Hanta PUUV / DOBV к набору реагентов AmpliSens® Hanta PUUV / DOBV
Форма FRT-48F 27.04.26 Форма FRT-48F 27.04.26
H-4781-1 2027-04-27 H-4781-1 2027-04-27
Информация для запуска амплификации, анализа и интерпретации результатов Информация для запуска амплификации, анализа и интерпретации результатов
автоматизированным способом автоматизированным способом
ПО AmpliSens® Hanta PUUV / DOBV Soft в. 1.0.0 ПО AmpliSens® Hanta PUUV / DOBV Soft в. 1.0.0
QR-код для автоматического ввода информации в ПО QR-код для автоматического ввода информации в ПО
ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии Роспотребнадзора ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии Роспотребнадзора
ВКЛАДЫШ ВКЛАДЫШ
для автоматизированной работы для автоматизированной работы
к набору реагентов AmpliSens® Hanta PUUV / DOBV к набору реагентов AmpliSens® Hanta PUUV / DOBV
Форма FRT-48F 27.04.26 Форма FRT-48F 27.04.26
H-4781-1 2027-04-27 H-4781-1 2027-04-27
Информация для запуска амплификации, анализа и интерпретации результатов Информация для запуска амплификации, анализа и интерпретации результатов
автоматизированным способом автоматизированным способом
ПО AmpliSens® Hanta PUUV / DOBV Soft в. 1.0.0 ПО AmpliSens® Hanta PUUV / DOBV Soft в. 1.0.0
QR-код для автоматического ввода информации в ПО QR-код для автоматического ввода информации в ПО
ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии Роспотребнадзора ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии Роспотребнадзора
ВКЛАДЫШ ВКЛАДЫШ
для автоматизированной работы для автоматизированной работы
к набору реагентов AmpliSens® Hanta PUUV / DOBV к набору реагентов AmpliSens® Hanta PUUV / DOBV
Форма FRT-48F A27.04.26 Форма FRT-48F A27.04.26
H-4781-1 2027-04-27 H-4781-1 2027-04-27
Информация для запуска амплификации, анализа и интерпретации результатов Информация для запуска амплификации, анализа и интерпретации результатов
автоматизированным способом автоматизированным способом
ПО AmpliSens® Hanta PUUV / DOBV Soft в. 1.0.0 ПО AmpliSens® Hanta PUUV / DOBV Soft в. 1.0.0
QR-код для автоматического ввода информации в ПО QR-код для автоматического ввода информации в ПО
ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии Роспотребнадзора ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии Роспотребнадзора
ВКЛАДЫШ ВКЛАДЫШ
для автоматизированной работы для автоматизированной работы
к набору реагентов AmpliSens® Hanta PUUV / DOBV к набору реагентов AmpliSens® Hanta PUUV / DOBV
Форма FRT-48F A27.04.26 Форма FRT-48F A27.04.26
H-4781-1 2027-04-27 H-4781-1 2027-04-27
Информация для запуска амплификации, анализа и интерпретации результатов Информация для запуска амплификации, анализа и интерпретации результатов
автоматизированным способом автоматизированным способом
ПО AmpliSens® Hanta PUUV / DOBV Soft в. 1.0.0 ПО AmpliSens® Hanta PUUV / DOBV Soft в. 1.0.0
QR-код для автоматического ввода информации в ПО QR-код для автоматического ввода информации в ПО
· · ,:i(OII.ИЯ ВЕРНЛ ·0,J!·
Пrо·
,._
u·
1
1п
•
,
)
~1J"
••
Il"J""'',·'
,V
·•·
.;
·
.
~
,.
•
,
r
.
r
.
)·\J скрс
'-~
п
•
л
,
с
\,,.J
и
,
о
V.
исчз
~1
п
,, , -· --·-
··------· . . . . лист__ . _
Руководитс.п.cj1y;xб}.i;-:<с:rистр;щи11 мсдипинских излслий
ФБУН ЦI-IИИ Эппдсмиолоrии Роспотрсбпалзора
(Доверснлость,'{,!_l-22Q1.pт17.11/025 г.)
··ic;::;.~
Л.О.Л11сицы!1а
~tf!i» ~~: .dJ/;г.
«
:;, -м.п.
··----~'--------·---~--
Фотография реагентов, входящих в набор реагентов AmpliSens Hanta PUUV / DOBV Форма FRT-48F.
Серия 27.04.26, Часть 2
22
Фотография программного обеспечения AmpliSens® Hanta PUUV / DOBV Soft на электронном носителе,
входящего в состав набора реагентов AmpliSens Hanta PUUV / DOBV Форма FRT-48F
23
1
Прот~и~о п::а;;;/9
~
Руководительслужбырегистрациимедицинских изделий
~~!~{1;1>- Эпидемиологии Роспотребнадзора
'фо.вер
~'
е
J·
нно
,.
с.ть
..,
·
,.
,0
,,•
28/25от 17.11.2025 г.)
~п ..,:.;.,2~-0.Лисицына
-~Рь 2oolьr.
«~.!7»
s
~
«УТВЕРЖДАЮ»
Директор Федерального бюджетного
учреждения науки «Центральный
научно-исследовательский институт
эпидемиологии» Федеральной
службы по надзору в сфере защиты
прав потребителей и благополучия
человека
________________ В.Г. Акимкин
«____»______________ 20___г.
Макет маркировки медицинского изделия
Набор реагентов для выявления РНК вирусов
Puumala orthohantavirus и Dobrava-Belgrade orthohantavirus
методом ОТ-ПЦР
AmpliSens Hanta PUUV / DOBV
Форма FRT-48F
На 4 листах
Маркировка набора реагентов Форма FRT-48F
Часть 1
Маркировка реагентов, входящих в состав набора реагентов Форма FRT-48F
Часть 1
Наименование реагента Маркировка
C+ (Hanta PUUV / DOBV-rec)
PCR C+ (Hanta PUUV / DOBV)
PCR C–
стр. 2 из 4
IC (ВКО STI-87-rec)
C–
Маркировка набора реагентов Форма FRT-48F
Часть 2
Маркировка реагентов, входящих в состав набора реагентов Форма FRT-48F
Часть 2
Наименование реагента Маркировка
Мix-Hanta PUUV / DOBV
Buffer-C
стр. 3 из 4
TaqF
RTase
RT-G-mix-2
Маркировка программного обеспечения
Допускается нанесение машиночитаемой маркировки на изделия для обеспечения
их идентификации и прослеживаемости.
Программное обеспечение маркируется в случае поставки на электронном носителе.
стр. 4 из 4
L_
Прошито:J1~~2о.2t'~о искреплено печатью:
а--
--~~- лист
Руководительслужбы регистрации медицинскихизделий
ФБУНЦНИИ Эпидемиологии Роспотребнадзора
(доверенность№ 128/25от 17.11.2025 r.)
~
А.О.Лисицына
«УТВЕРЖДАЮ»
Директор Федерального бюджетного
учреждения науки «Центральный
научно-исследовательский институт
эпидемиологии» Федеральной службы
по надзору в сфере защиты прав
потребителей и благополучия
человека
________________ В.Г. Акимкин
«____»_______________20__ г.
Макет упаковки медицинского изделия
Набор реагентов для выявления РНК вирусов Puumala orthohantavirus и Dobrava-Belgrade
orthohantavirus методом ОТ-ПЦР
AmpliSens Hanta PUUV / DOBV
Форма FRT-48F
На 11 листах
| Упаковка | Внешний вид |
| Коробка | Информация, предоставляемая на упаковке (часть 1) |
стр. 2 из 11
| Упаковка | Внешний вид |
| Коробка | Информация, предоставляемая на упаковке (часть 2) |
стр. 3 из 11
| Упаковка | Внешний вид |
| Коробка | Макет коробки (часть 1) |
стр. 4 из 11
| Упаковка | Внешний вид |
| Коробка | Макет коробки (часть 2) |
стр. 5 из 11
| Упаковка | Внешний вид |
| Коробка | Фото коробки (часть 1) |
стр. 6 из 11
| Упаковка | Внешний вид |
| Коробка | Фото коробки (часть 2) |
стр. 7 из 11
| Упаковка | Внешний вид |
| Пакет с замком Zip-Lock | Макет пакета с замком Zip-Lock (часть 1 / часть 2) |
стр. 8 из 11
| Упаковка | Внешний вид |
| Пакет с замком Zip-Lock | Фото пакета с замком Zip-Loсk (часть 1 / часть 2) |
стр. 9 из 11
| Упаковка | Внешний вид |
| Пакет с замком Zip-Lock | Макет пакета с замком Zip-Lock (часть 1 / часть 2) |
стр. 10 из 11
| Упаковка | Внешний вид |
| Пакет с замком Zip-Lock | Фото пакета с замком Zip-Loсk (часть 1 / часть 2) |
Примечание: возможны другие варианты цветового решения и дизайна упаковки набора реагентов.
стр. 11 из 11
l
Прошито,пронумерованонскрепленопсчатыо: ::i::f.
__ __ JIИCT~
А.О.Лисицы1ш