«МБС-Тест ВИЧ РНК качественный» Набор реагентов для выделения и качественного определения РНК вируса иммунодефицита человека методом ОТ-ПЦР в режиме реального времени, ТУ 20.59.52-080-26329720-2025 — инструкция и характеристики
Открытые закупки, где изделие проходит ТЗ
Сейчас открытых закупок, где изделие полностью проходит ТЗ, нет; список обновляется каждый день.
Построчная сверка ТЗ с характеристиками этого изделия и все закупки под ваши товары — в кабинете, 7 дней бесплатно.
Попробовать бесплатно
Текст инструкции: технические характеристики
Вариант исполнения 1. 2 Компоненты для выделения. Упаковка 1 3 8 Вариант исполнения 2 9 Компоненты для выделения. Упаковка 1 10 16 Вариант исполнения 3 17 Компоненты для выделения. Упаковка 1 18 30 Вариант исполнения 4 31 Компоненты для выделения. Упаковка 1 32 1 НАЗНАЧЕНИЕ «МБС-Тест ВИЧ РНК качественный» Набор реагентов для выделения и качественного определения РНК вируса иммунодефицита человека методом ОТ-ПЦР в режиме реального времени, ТУ 20.59.52-080-26329720-2025 (далее по тексту – набор реагентов), предназначен для выделения и качественного определения РНК вируса иммунодефицита человека (далее по тексту - ВИЧ) из образцов сыворотки (плазмы) крови, цельной крови и капиллярной крови человека (далее по тексту – анализируемые образцы) методом обратной транскрипции и полимеразной цепной реакции с гибридизационно- флуоресцентной детекцией продуктов реакции в режиме реального времени (далее по тексту – ПЦР-РВ). Функциональное назначение: Набор реагентов предназначен как вспомогательное средство для диагностики ВИЧ- инфекции и выбора схемы антиретровирусной терапии у пациентов с ВИЧ-инфекцией. Описание аналита: Вирус иммунодефицита человека (ВИЧ) является возбудителем синдрома приобретенного иммунодефицита (СПИД). Инфекция передается при сексуальных контактах, при контакте с зараженной кровью или ее препаратами, а также от инфицированной матери к ребенку во внутриутробном периоде. Острая фаза ВИЧ- инфекции, для которой характерна симптоматика, сходная с гриппом, проявляется через 3– 5 недель после инфицирования и соотносится с высокими показателями виремии. Иммунный ответ на проникновение вируса становится детектируемым в интервале от 4 до 6 недель с момента возникновения первоначальных симптомов. После завершения сероконверсии уровень вирусной нагрузки в периферической крови снижается, и у большинства инфицированных наступает бессимптомная стадия, способная продолжаться на протяжении нескольких лет. Качественное определение РНК вируса иммунодефицита человека (ВИЧ) методом ОТ-ПЦР в режиме реального времени позволяет обнаружить наличие вируса в крови на ранних стадиях инфекции, включая период до сероконверсии («диагностическое окно»). Определение РНК ВИЧ используется для подтверждения диагноза при неясных или противоречивых серологических результатах, а также для обследования новорождённых от ВИЧ-инфицированных матерей. 2 Специфическое расстройство, состояние или фактор риска Инфекция, вызванная вирусом иммунодефицита человека (ВИЧ), характеризуется поражением клеток иммунной системы, преимущественно CD4⁺ Т-лимфоцитов, и развитием вторичного иммунодефицита различной степени выраженности. ВИЧ является лабораторным маркером инфекционного процесса и фактором риска прогрессирования заболевания. Определение РНК ВИЧ методом ОТ-ПЦР в режиме реального времени позволяет выявить наличие вируса в организме и используется для лабораторного подтверждения диагноза ВИЧ-инфекции, включая ранние стадии заболевания. В качестве анализируемого образца используется сыворотка, плазма с цитратом натрия или ЭДТА (К , К ), цельная кровь и капиллярная кровь человека. 2 3 Популяционные и демографические аспекты применения Набор реагентов может быть использован для исследования всех групп населения без градации по популяционному или демографическому признаку. Область применения – клиническая лабораторная диагностика. Показания к применению: диагностика ВИЧ-инфекции. Противопоказания к применению: не применимо. Сокращенное наименование медицинского изделия для диагностики in vitro «МБС-Тест ВИЧ РНК качественный». Предназначенный пользователь набора реагентов Только для профессионального использования. Сотрудники клинико-диагностических лабораторий медицинских учреждений. 2 ПРИНЦИП МЕТОДА Принцип метода основан на качественном определении содержания РНК вируса иммунодефицита человека в образце с использованием процесса амплификации участков генома ВИЧ с помощью специфических к этим участкам праймеров и гибридизационных зондов (флуоресцентно меченные зонды), MMLV-обратной транскриптазы и Taq ДНК- полимеразы (входящей в состав «ПЦР-буфера») с последующим определением накопления специфического флуоресцентного сигнала на амплификаторе с системой детекции флуоресцентного сигнала в режиме реального времени. Выявление наличия или отсутствия РНК ВИЧ в анализируемых образцах включает в себя две стадии: 1) выделение РНК из анализируемых образцов, включающее лизис образцов, сорбцию РНК на магнитные частицы, отмывки и элюцию; 3 | Наименование компонента | Количество | | | | | | кат № | кат № | кат № | кат № | | | Вариант исполнения 1 | Вариант исполнения 2 | Вариант исполнения 3 | Вариант исполнения 4 | | Компоненты для выделения. Упаковка 1 | 1 шт. в составе: | 1 шт. в составе: | 1 шт. в составе: | 1 шт. в составе: | | «ЛБ» – лизирующий раствор – прозрачная от бесцвет- ного до коричневого цвета жидкость с взвесью маг- нитных частиц коричневого или черного цвета. До- пускается расслоение на надосадочную жидкость и осадок магнитных частиц. Допускается выпадение кристаллов и хлопьев белого цвета. После встряхива- ния образуется однородный раствор со взвесью маг- нитных частиц коричневого или черного цвета. Опасные вещества: гуанидин тиоционат Консервант: не более 0,15% проклин 300 | 1 фл. (33,0 мл) | 1 фл. (33,0 мл) | 1 планшет 96 лунок по 300 мкл | 1 планшет 96 лунок по 300 мкл | | «РП» – раствор для преципитации – прозрачная бес- | 1 фл. | 1 фл. | 1 фл. | 1 фл. | 2) амплификация методом ОТ-ПЦР в реальном времени, с использованием специфических праймеров и гибридизационных зондов. Для контроля анализа и выделения в составе ПЦР-смеси предусмотрены праймеры и гибридизационные зонды, специфические для участка генома человека (эндогенный внутренний контроль). Внутренний контроль (ВК) позволяет контролировать этапы выделения нуклеиновых кислот и проведения ПЦР, отсутствие в образце ингибиторов ПЦР. 3 ХАРАКТЕРИСТИКА НАБОРА РЕАГЕНТОВ Набор реагентов поставляется нестерильным. Стерилизация перед применением не требуется. 3.1 Состав набора реагентов Набор реагентов выпускают в виде комплекта на 100 реакций, включая контрольные образцы. Варианты исполнения 1 и 2 предназначены для ручной постановки анализа и с по- мощью автоматических станций для выделения нуклеиновых кислот (далее по тексту – ав- томатические станции) при условии, что запрограммирована последовательность дей- ствий, изложенная в инструкции, на 100 реакций. Варианты исполнения 3 и 4 предназна- чены для постановки анализа с помощью автоматических станций с магнитной головкой при условии, что запрограммирована последовательность действий, изложенная в ин- струкции, на 100 реакций. Состав набора реагентов представлен в таблице 1. Т а б л и ц а 1 – Состав набора реагентов 4 | цветная жидкость. Опасные вещества: изопропанол | (55,0 мл) | (55,0 мл) | (55,0 мл) | (55,0 мл) | | «ПР» – буферный раствор для отмывки магнитных ча- стиц – прозрачная бесцветная жидкость. Опасные вещества: изопропанол Консервант: не более 0,15% проклин 300 | 3 фл. (по 85,0 мл) | 3 фл. (по 85,0 мл) | 3 планшета 96 лунок по 750 мкл | 3 планшета 96 лунок по 750 мкл | | «ЭР» – буферный раствор для элюции – прозрачная бесцветная жидкость. Консервант: не более 0,15% проклин 300 | 1 фл. (16,0 мл) | 1 фл. (16,0 мл) | 1 планшет 96 лунок по 140 мкл | 1 планшет 96 лунок по 140 мкл | | Пакет 1, в составе: Планшет глубоколуночный 2,2 мл на 96 лунок – 1 шт. Гребенка для глубоколуночного планшета – 1 шт. | - | - | 1 шт. | 1 шт. | | Пакет 2, в составе: Пленка клейкая для планшетов – 1 шт. Ванночка для реагентов – 2 шт. | - | - | 1 шт. | 1 шт. | | Пакет 3, в составе: Планшет для ПЦР на 96 лунок – 1 шт. Пленка для ПЦР – 1 шт. | 1 шт. | - | 1 шт. | - | | Пакет 4, в составе: Микропробирки для ПЦР 8 штук/стрип – 12 шт. | - | 1 шт. | - | 1 шт. | | Пакет 5, в составе: Крышки для микропробирок для ПЦР 8 штук/стрип – 12 шт. | - | 1 шт. | - | 1 шт. | | Эксплуатационная документация: | | | | | | | 1 шт. | 1 шт. | 1 шт. | 1 шт. | | Компоненты для ПЦР-РВ. Упаковка 2 | | | | | | | Пакет 1, в составе: | | 1 шт. | 1 шт. | 1 шт. | 1 шт. | | «ПЦР-буфер» – буфер для полимеразной цепной реакции - прозрачная бесцветная жидкость. Консервант: не более 0,1% проклин 300 | 1 пр. (1,0 мл) | | | | | | «ПЦР-смесь» –смесь для полимеразной цепной реакции – прозрачная светло-фиолетового цвета жидкость. Консервант: не более 0,1% проклин 300 | 1 пр. (0,6 мл) | | | | | | Пакет 2, в составе: | | 1 шт. | 1 шт. | 1 шт. | 1 шт. | | «Фермент RT» - MMLV-обратная транскриптаза – прозрачная бесцветная вязкая жидкость. | 1 пр. (0,15 мл) | | | | | | «ОКО» – отрицательный контрольный образец – прозрачная бесцветная жидкость. | 1 пр. (0,4 мл) | | | | | | «ПКО» - положительный контрольный образец – прозрачная бесцветная жидкость. | | 1 пр. (0,4 мл) | 1 пр. (0,4 мл) | 1 пр. (0,4 мл) | 1 пр. (0,4 мл) | Примечание 1 Паспорт на серию входит в комплект поставки набора реагентов. Число экземпляров паспорта каждой серии определено в договоре на поставку продукции. 2 Паспорт безопасности предоставляется транспортной компании в количестве – 1 шт. и конечному потребителю при запросе, количество экземпляров, определено в договоре на поставку продукции. 3 Планшет глубоколуночный 2,2 мл на 96 лунок - прозрачный бесцветный (нейтральный) планшет; материал полипропилен; 96 лунок; объем лунки 2,2±0,22 мл; 44,3±0,4 мм (высота); 127,8±0,6 мм (длина); 85,5±0,4 мм (ширина); массой 96,0±9,6 г. 4 Гребенка для глубоколуночного планшета - прозрачная бесцветная (нейтральная) гребенка; материал полипропилен; 126,8±0,5 мм (длина); 85,2±0,3 мм (ширина); 48,0±0,3 мм (высота); массой 52,6±5,26 г. 5 | Инфекционный агент | № последовательности в Genbank | Инфекционный агент | № сборки генома в Genbank | | Вирус гепатита А | NC_001489.1 | Пикорнавирусы | GCF_000860505.1 | | Вирус гепатита B | NC_003977.2 | Гепаднавирусы | GCF_000861825.2 | | Вирус гепатита C | NC_004102.1 | Flaviviridae | GCF_000861845.1 | | Вирус гепатита D | NC_059681.1 | Kolmioviridae | GCF_018547865.1 | | цитомегаловирус | NC_006273.2 | Герпесвирусы | GCF_000845245.1 | | вирус Эпштейна-Барр | NC_007605.1 | Герпесвирусы | GCF_002402265.1 | | вирус простого герпеса типы 1, 2 | NC_001806.2 NC_001798.2 | Герпесвирусы | GCF_000859985.2 GCF_000858385.2 | | вирус ветряной оспы | NC_001348.1 | Герпесвирусы | GCF_000858285.1 | | вирус герпеса человека типы 6, 8 | NC_001664.4 NC_009333.1 | Герпесвирусы | GCF_000845685.2 GCF_000838265.1 | | парвовирус В19 | NC_000883.2 | Парвовирусы | GCF_000839645.1 | | вирус клещевого энцефалита | NC_001672.1 | Flaviviridae | GCF_000863125.1 | | вирус лихорадки западного Нила | NC_001563.2 | Flaviviridae | GCF_000861085.1 | | аденовирус типы 2, 3, 7 | AC_000007.1 PP068614.1 AC_000018.1 | Аденовирусы | GCF_000859465.1 - GCF_000859485.1 | | Legionella pneumophila | NZ_CP013742.1 | Бактерия | GCF_001941585.1 | | Streptococcus pneumoniae | NZ_LN831051.1 | Бактерия | GCF_001457635.1 | 5 Пленка клейкая для планшета - бесцветная прозрачная пленка; материал поливинилхлорид; 130,0±13,0 мм (длина); 90,0±9,0 мм (ширина); массой 2,7±0,5 г. 6 Ванночка для реагентов - бесцветная или белая ванночка; 100±1,0 мм (длина); 50±5,0 мм (ширина); 19±1,9 мм (высота); массой 2,25±0,5 г. 7 Планшет для ПЦР на 96 лунок - бесцветный прозрачный планшет; количество лунок 96; материал полипропилен; 127,76±12,7 мм (длина); 85,48±8,5 мм (ширина); 80±8 мм (высота). 8 Пленка для ПЦР - бесцветная прозрачная пленка; материал полиолефин; 140,0±0,5 мм (длина) 78,0±0,3 мм (ширина); массой 2,4±0,2 г. 9 Микропробирки для ПЦР 8 штук/стрип - бесцветные прозрачные пробирки, соединенные в один ряд (стрип), количество в стрипе 8 шт.; материал полипропилен; объём лунки 0,20±0,02 мл; 80,0±8,0 мм (длина). 10 Крышки для микропробирок для ПЦР 8 штук/стрип - бесцветные прозрачные, соединенные в один ряд (стрип), количество в стрипе 8 шт.; материал полипропилен; 80,0±8,0 мм (длина); 8,0±0,8 мм (ширина). 3.2 Число анализируемых образцов биологического материала Набор реагентов предназначен для ручных и автоматических постановок анализа и рассчитан на выполнение 100 определений (тестов), включая контрольные образцы. 4 АНАЛИТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ НАБОРА РЕАГЕНТОВ 4.1 Аналитическая специфичность 4.1.1 Анализ in silico Для анализа in silico были взяты генетические последовательности инфекционных агентов наиболее близких к ВИЧ, либо тех, что могут встретиться у болеющих ВИЧ. Таблица 3 Инфекционные агенты, вовлеченные в анализ: 6 Staphylococcus aureus NC_007795.1 Бактерия GCF_000013425.1 Для анализа использовали доступные он-лайн ресурсы: BLAST (https://blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi), а также MUSCLE (https://www.ebi.ac.uk /Tools/msa/muscle/). В наборе реагентов реализована методика качественного определения гена-мишени через специфическую амплификацию. Специфические олигонуклеотидные последовательности с флуоресцентной меткой и без таковой были разработаны таким образом, чтобы избежать любой неспецифической амплификации ДНК, выделенной из анализируемых образцов. Анализ специфичности был проведен in silico с использованием базы данных BLAST, который не выявил существенной гомологии с другими генными мишенями. 4.1.2 Анализ in vitro Для анализа in vitro было проанализировано 60 образцов сыворотки (плазмы) крови, цельной крови и капиллярной крови человека на другие инфекции близкие к ВИЧ, либо тех, что могут встретиться у болеющих ВИЧ – вирус гепатита A, вирус гепатита B, вирус гепатита C, вирус гепатита D, Legionella pneumophila, Streptococcus pneumoniae. Проведенный анализ in vitro показал отсутствие ложноположительных результатов в анализируемых образцах, содержащих проанализированные инфекционные агенты. 4.2 Потенциально интерферирующие вещества При выделении нуклеиновых кислот (далее по тексту – НК) из анализируемых образцов гемоглобин (до 160 мг/мл), триглицериды (до 50 мг/мл), общий билирубин (до 60 мг/мл) не влияют на результат анализа. Гуанидин тиоцианат (до 50 мМ), мочевина (до 50 мМ), изопропиловый спирт (до 5 %) – вещества, которые могут попадать в образец при выделении НК (из компонентов для выделения набора реагентов) не влияют на результат анализа. 7 4.3 Чувствительность Чувствительность набора реагентов при контроле на положительных образцах рабочей панели «РП РНК (+/-) ОТ-ПЦР ВИЧ», аттестованной ОБТК ООО «Медико- биологический Союз», должна быть не менее 100 % без ложноотрицательных результатов. 4.4 Специфичность Специфичность набора реагентов при контроле на отрицательных образцах рабочей панели «РП РНК (+/-) ОТ-ПЦР ВИЧ», аттестованной ОБТК ООО «Медико-биологический Союз», должна быть не менее 100 % без ложноположительных результатов. 4.5 Воспроизводимость Внутрисерийная воспроизводимость анализа была протестирована в ходе клинико- лабораторных испытаний с использованием 10 положительных и 10 отрицательных образцов сыворотки крови, в 5 повторах на наборах реагентов одной серии. Коэффициент вариации не превысил 8%. Межсерийная воспроизводимость анализа была протестирована в ходе клинико- лабораторных испытаний с использованием 10 положительных и 10 отрицательных образцов сыворотки крови, на 2 сериях набора реагентов. Коэффициент вариации не превысил 8%. 4.6 Предел обнаружения Предел обнаружения был определен с помощью 4го международного стандарта ВОЗ РНК ВИЧ-1 (4th WHO international standard for HIV-1 RNA for Nucleic Acid Amplification Techniques 16/194). Предел обнаружения для всех типов анализируемых образцов составляет 10 копий/мл или 17,2 МЕ/мл. 4.7 Эффективность выявления различных субтипов ВИЧ-1 Эффективность выявления различных субтипов ВИЧ-1 подтверждена с использованием 1-ой международной референсной панели ВОЗ циркулирующих рекомбинантных форм (CRF) ВИЧ-1 (NIBSC код 13/214) и 2-ой международной референсной панели ВОЗ субтипов ВИЧ-1 (NIBSC код 12/224, включает субтипы A, B, C, D, AE (CRF 01_AE), F, G, AG-GH и группы O и N). 5 ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ НАБОРА РЕАГЕНТОВ При определении диагностической чувствительности и диагностической специфичности в ходе клинических испытаний было использовано 780 образцов 8 (сыворотки крови, плазмы (К2ЭДТА, К3ЭДТА, цитрат натрия), цельной и капиллярной крови). Диагностическая чувствительность набора реагентов (с доверительной вероятностью 95%) составила 100 % (98,4-100%). Диагностическая специфичность набора реагентов (с доверительной вероятностью 95%) составила 100 % (99,1-100%). 6 МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ И РИСКИ ПРИМЕНЕНИЯ НАБОРА РЕАГЕНТОВ Потенциальный риск применения набора реагентов – класс 3 (Приказ МЗ РФ №4н от 06.06.2012 г.). При работе с набором реагентов соблюдать требования ГОСТ Р ИСО 15190-2023 «Лаборатории медицинские. Требования безопасности», СанПиН 3.3686-21 «Санитарно- эпидемиологические требования по профилактике инфекционных болезней», методиче- ских указаний МУ 1.3.2569-09 «Организация работы лабораторий, использующих методы амплификации нуклеиновых кислот при работе с материалом, содержащим микроорганиз- мы I–IV групп патогенности» и СП 2.1.3678-20 «Санитарно-эпидемиологические требова- ния к эксплуатации помещений, зданий, сооружений, оборудования и транспорта, а также условиям деятельности хозяйствующих субъектов, осуществляющих продажу товаров, выполнение работ или оказание услуг». К работе с набором реагентов допускают специально обученный персонал, прошед- ший дополнительное профессиональное обучение правилам безопасной работы с микроор- ганизмами III-IV групп патогенности и молекулярно-генетическим методам. Компоненты набора реагентов «ЛБ», «ПР», «ЭР» содержат в качестве консерванта не более 0,15 % проклина 300. Компоненты набора реагентов «ПЦР буфер», «ПЦР-смесь» содержат в качестве консерванта не более 0,1 % проклина 300. Изопропанол, входящий в состав компонентов «РП» и «ПР», обладает раздражаю- щим действием. Следует избегать разбрызгивания и попадания на кожу и слизистые. Ис- пользовать только в хорошо вентилируемом помещении! Избегать разбрызгивания, вды- хания, проглатывания и попадания компонента на кожу, слизистые и в глаза! Беречь от ис- точников воспламенения / нагревания / искр / открытого огня! При пожаре тушить огне- тушителями на основе диоксида углерода, порошковым средством для тушения или водя- ной струей мелкого разбрызгивания. При борьбе с крупными пожарами применять водя- 9 ную струю мелкого разбрызгивания или спиртоустойчивую пену. Полноструйная вода НЕ пригодна для тушения! Гуанидин тиоцианат, входящий с состав компонента «ЛБ», обладает раздражающим действием. Следует избегать разбрызгивания и попадания их на кожу и слизистые. При проглатывании компонентов набора реагентов прополоскать полость рта, обра- титься за медицинской помощью при плохом самочувствии. НЕ вызывать рвоту! При вды- хании компонентов набора реагентов выйти на свежий воздух, обратиться за медицинской помощью при плохом самочувствии. При попадании компонентов набора реагентов на ко- жу и/или одежду немедленно снять всю загрязненную одежду, промыть кожу проточной водой, обратиться за медицинской помощью при плохом самочувствии. При попадании компонентов набора реагентов в глаза осторожно промыть глаза проточной водой в тече- ние нескольких минут. Снять контактные линзы (при наличии), если это легко сделать. Продолжить промывание глаз. Немедленно обратиться за медицинской помощью! Все реактивы, входящие в состав компонентов набора реагентов в используемых концентрациях, являются нетоксичными. Все использованные материалы, инструменты и оборудование, рабочее место дез- инфицировать в соответствии с требованиями СанПиН 3.3686-21 и МУ 287-113. Обеззараживание и/или обезвреживание и утилизацию всех анализируемых образцов, компонентов и отходов набора реагентов, несущих потенциальную биологическую опасность, производить в соответствии с разделом «Утилизация набора реагентов» настоящей инструкции по применению. При удалении отходов после амплификации (пробирок, содержащих продукты ПЦР) недопустимо открывание пробирок и разбрызгивание содержимого, поскольку это может привести к контаминации продуктами ПЦР лабораторной зоны, оборудования и реагентов. 7 ОБОРУДОВАНИЕ И МАТЕРИАЛЫ, ПРЕДУСМОТРЕННЫЕ ДЛЯ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ В КОМБИНАЦИИ С НАБОРОМ РЕАГЕНТОВ 7.1 При ручной постановке анализа необходимо нижеперечисленное оборудование и материалы: − амплификатор с флуоресцентной детекцией в режиме реального времени (далее по тексту - амплификатор): планшетного или роторного типа; с 3, 4, 5 или 6 каналами детек- ции; возможностью флуоресцентной детекции на каналах FAM/Green и R6G/JOE/HEX/VIC/Yellow; с возможностью градиента температур внутреннего блока от 30 °С до 99 °С, например: термоциклер для амплификации нуклеиновых кислот 1000, про- 10 изводства "Био-Рад Лабораториез, Инк.", США (РУ ФСЗ 2008/03399) или амплификатор нуклеиновых кислот CFX Opus 96 Dx с детекцией продуктов ПЦР в режиме реального времени, производства «Био-Рад Лабораториез, Инк.», США (РУ РЗН 2022/18397) или ам- плификатор детектирующий «ДТпрайм» по ТУ 9443-004-96301278-2010, производства ООО "НПО ДНК-Технология", Россия (РУ ФСР 2011/10229) или амплификатор детекти- рующий «ДТлайт» по ТУ 9443-003-96301278-2010, производства ООО "НПО ДНК- Технология", Россия (РУ ФСР 2011/10228) или прибор для проведения полимеразной цеп- ной реакции в режиме реального времени Rotor-Gene Q, производства «КИАГЕН ГмбХ», Германия (РУ ФСЗ 2010/07595) или амплификатор нуклеиновых кислот Applied Biosystems QuantStudio 5 с гибридизационно-флуоресцентной детекцией продуктов ПЦР в режиме ре- ального времени, производства "Лайф Текнолоджис Холдингс Пте. Лтд", Сингапур (РУ РЗН 2019/8446) и аналогичные; − бокс биологической безопасности 2-го класса; − бокс абактериальной воздушной среды (ПЦР-бокс); − морозильная камера, поддерживающая температуру от минус 24 до минус 16 °С или холодильник с морозильной камерой, поддерживающий температуру от минус 24 до минус 16 °С. − микроцентрифуга; − термостат или термостатирующий шейкер, поддерживающие температуру (80 ± 1) °С; − встряхиватель для пробирок, типа вортекс (далее по тексту - вортекс); − вакуумный отсасыватель (аспиратор) для удаления надосадочной жидкости (при необходимости); − одноканальные полуавтоматические дозаторы пипеточные с переменным или фик- сированным объемом, позволяющие отбирать объемы жидкостей от 1 до 1000 мкл, атте- стованные по значению средней дозы и сходимости результатов, погрешность измерения которых должна быть не более 3 %; − многоканальные (8-ми или 12-ти канальные) полуавтоматические дозаторы пипе- точные с переменным объемом, позволяющие отбирать объемы жидкостей от 1 до 1000 мкл, аттестованные по значению средней дозы и сходимости результатов, погрешность измерения которых должна быть не более 3 %; − штативы для микропробирок вместимостью 0,2 и 2,0 мл; − контейнер для сбора и обеззараживания наконечников; 11 − одноразовые наконечники для полуавтоматических одноканальных дозаторов пи- петочных с аэрозольным барьером; − пробирки одноразовые полипропиленовые вместимостью 1,5 – 2,0 мл, сертифици- рованные на отсутствие РНКаз и ДНКаз; − магнитный штатив или магнитный стержень; − халат, шапочки, обувь и одноразовые нестерильные неопудренные медицинские перчатки. 7.2 При постановке анализа на автоматической станции необходимо: − автоматические станции для выделения и очистки нуклеиновых кислот из различ- ных типов биоматериала, основанные на методе магнитной сепарации, использующие глу- боколуночные планшеты, например автоматическая станция для выделения нуклеиновых кислот с принадлежностями для ПЦР исследований: процессор магнитных частиц для очистки нуклеиновых кислот, клеток и белков KingFisher Flex, производства «Термо Фи- шер Сайентифик», Финляндия (РУ ФСЗ 2009/05562), или система для автоматического выделения и очистки нуклеиновых кислот из биологического материала AutoPure 96, про- изводства ООО «Ханьчжоуская компания инструментов» Китай, (РУ РЗН 2022/16430) или аналогичные; − автоматические дозирующие модульные роботизированные платформы, которые осуществляют дозирование жидких образцов и реагентов из лабораторного пластика лю- бого типа, а также способные перемещать этот пластик между широким спектром инте- грированных устройств, например станция для раскапывания: станция дозирующая авто- матическая Microlab STARlet с принадлежностями производства «Гамильтон Бонадуц AГ», Швейцария (РУ РЗН 2018/6981) или анализатор автоматический модульный Freedom EVO с принадлежностями, производства «ТЕКАН Швайц АГ», Швейцария (РУ ФСЗ 2008/03047) или ПЦР-станция для автоматического выделения нуклеиновых кислот (Fully automated nucleic acid extractor) ADC CH-196 (РУ № РЗН 2024/23110) или аналогичные; − амплификатор с флуоресцентной детекцией в режиме реального времени (далее по тексту - амплификатор): планшетного или роторного типа; с 3, 4, 5 или 6 каналами детекции; возможностью флуоресцентной детекции на каналах FAM/Green и R6G/JOE/HEX/VIC/Yellow; с возможностью градиента температур внутреннего блока от 30 °С до 99 °С, например: термоциклер для амплификации нуклеиновых кислот 1000, производства "Био-Рад Лабораториез, Инк.", США (РУ ФСЗ 2008/03399) или амплификатор нуклеиновых кислот CFX Opus 96 Dx с детекцией продуктов ПЦР в режиме 12 реального времени, производства «Био-Рад Лабораториез, Инк.», США (РУ РЗН 2022/18397) или амплификатор детектирующий «ДТпрайм» по ТУ 9443-004-96301278- 2010, производства ООО "НПО ДНК-Технология", Россия (РУ ФСР 2011/10229) или амплификатор детектирующий «ДТлайт» по ТУ 9443-003-96301278-2010, производства ООО "НПО ДНК-Технология", Россия (РУ ФСР 2011/10228) или прибор для проведения полимеразной цепной реакции в режиме реального времени Rotor-Gene Q, производства «КИАГЕН ГмбХ», Германия (РУ ФСЗ 2010/07595) или амплификатор нуклеиновых кислот Applied Biosystems QuantStudio 5 с гибридизационно-флуоресцентной детекцией продуктов ПЦР в режиме реального времени, производства "Лайф Текнолоджис Холдингс Пте. Лтд", Сингапур (РУ РЗН 2019/8446) и аналогичные; − бокс биологической безопасности 2-го класса; − бокс абактериальной воздушной среды (ПЦР-бокс); − морозильная камера, поддерживающая температуру от минус 24 до минус 16 °С или холодильник с морозильной камерой, поддерживающей температуру от минус 24 до минус 16 °С. − микроцентрифуга; − термостат или термостатирующий шейкер, поддерживающие температуру (80 ± 1) °С; − вортекс; − одноканальные полуавтоматические дозаторы пипеточные с переменным или фик- сированным объемом, позволяющие отбирать объемы жидкостей от 1 до 1000 мкл, атте- стованные по значению средней дозы и сходимости результатов, погрешность измерения которых должна быть не более 3 %; − многоканальные (8-ми или 12-ти канальные) полуавтоматические дозаторы пипе- точные с переменным объемом, позволяющие отбирать объемы жидкостей от 1 до 1000 мкл, аттестованные по значению средней дозы и сходимости результатов, погрешность измерения которых должна быть не более 3 %; − штативы для микропробирок вместимостью 0,2 и 2,0 мл; − магнитная подставка для глубоколуночных планшетов (при наличии); − контейнер для сбора и обеззараживания наконечников; − одноразовые наконечники для полуавтоматических одноканальных дозаторов пи- петочных с аэрозольным барьером; 13 − планшеты глубоколуночные 2,2 мл на 96 лунок и 0,5 мл на 96 лунок (для вариан- тов исполнения 1 и 2); − насадка на магнитные стержни; − ванночки для реагентов; − халат, шапочки, обувь и одноразовые нестерильные неопудренные медицинские перчатки. 8 АНАЛИЗИРУЕМЫЕ ОБРАЗЦЫ Идентификацию и прослеживаемость анализируемых образцов проводить в соответствии с системой менеджмента качества лаборатории. ВНИМАНИЕ! Выделять НК из образцов сыворотки (плазмы) крови, цельной крови или капиллярной крови человека необходимо только с помощью «Компонентов для выде- ления. Упаковка 1», входящих в состав набора реагентов. Забор цельной и капиллярной крови проводить в соответствии с «ГОСТ Р 59778- 2021. Процедуры взятия проб венозной и капиллярной крови для лабораторных исследований». После забора пробирку обязательно аккуратно перевернуть несколько раз вверх дном, чтобы кровь в пробирке тщательно перемешалась с антикоагулянтом. Для получения сыворотки крови образец цельной крови человека инкубируют при комнатной температуре в течение 30 мин до полного образования сгустка или при 370С на 15 мин. Центрифугируют при комнатной температуре в течение 20 мин при 1600 g. Перенести сыворотку крови человека отдельными наконечниками с фильтром в пробирки объемом 1,5 или 2,0 мл. Сыворотка не должна быть гемолизированной. Образец готов к проведению анализа. ВНИМАНИЕ! Образцы цельной крови НЕ ЗАМОРАЖИВАТЬ! Антикоагулянты: К2ЭДТА, К3ЭДТА и цитрат натрия не влияют на результаты анализа. ВНИМАНИЕ! НЕЛЬЗЯ использовать для забора крови вакуумные системы, содержащие в качестве антикоагулянта соли гепарина! В соответствии с «МУ 1.3.2569-09 «Организация работы лабораторий, использующих методы амплификации нуклеиновых кислот при работе с материалом, содержащим микроорганизмы I-IV групп патогенности», перед выделением НК образцы цельной крови могут храниться и транспортироваться: - в течение 48 часов при температуре от 2 до 8 °С или - в течение 8 часов при температуре от 20 до 25 °С. 14 После хранения образцов нужно их доводить до комнатной температуры и переворачивать 3-6 кратным переворачиванием пробирки для перемешивания. Для выделения НК из сыворотки (плазмы) крови, цельной крови или капиллярной крови необходимо 200 мкл биологического образца. Выделенные образцы НК из образцов сыворотки (плазмы) крови, цельной крови или капиллярной крови допускается хранить при температуре от 2 до 8 °С в течение одного часа, при температуре от минус 24 до минус 16 °С в течение 2-х недель и при температуре ниже минус 65 °С в течение года. Для хранения НК необходимо, не захватывая магнитные частицы, перенести надосадочную жидкость после выделения НК в новую чистую пробирку имеющую специальную маркировку RNase-free, DNase-free. Объем образцов НК, выделенных из сыворотки (плазмы) крови, цельной крови или капиллярной крови необходимый для проведения анализа ПЦР-РВ составляет 35 мкл. 9 ОЖИДАЕМЫЕ И ПРЕДСКАЗУЕМЫЕ ПОБОЧНЫЕ ЭФФЕКТЫ, СВЯЗАННЫЕ С ПРИМЕНЕНИЕМ НАБОРА РЕАГЕНТОВ Побочные эффекты, связанные с применением набора реагентов, такие как получение ложноположительных и ложноотрицательных результатов, могут наблюдаться в следующих случаях: Использование компонентов с истекшим сроком годности. Использование «Компоненты для выделения. Упаковка 1» и «Компоненты для ПЦР- РВ. Упаковка 2» из наборов реагентов разных серий или смешивание их в процессе приго- товления растворов. Использование компонентов из наборов реагентов других производителей. Несоблюдение условий и сроков хранения вскрытых компонентов в случае частич- ной постановки. Использование для приготовления реакционной смеси нестерильных пробирок. Несоблюдение условий хранения анализируемых образцов, которое может привести к разрушению аналита или появлению в анализируемом образце веществ, искажающих ре- зультат анализа. Неправильное дозирование растворов, которое приводит как к росту, так и к сниже- нию регистрируемой флуоресценции. Изменение концентрации раствора за счет испарения жидкости из открытого флако- на с компонентом. Использование оборудования, не прошедшего регламентированного периодического 15 технического обслуживания и/или поверки/аттестации и/или эксплуатирующегося не в со- ответствии с инструкцией по применению на данное оборудование. Использование для работы с компонентами, анализируемыми и контрольными об- разцами нестерильных наконечников. Внесение анализируемых образцов одним наконечником. Использование для дезинфекции посуды, оборудования, материалов и рабочих по- верхностей неразрешенных и/или оказывающих влияние на результат ПЦР-РВ дезинфици- рующих средств. Рекомендуется использовать, например, дезсредства: хлорамин и другие хлорсодержащие средства. Рекомендуется использовать неопудренные перчатки и одноразовые нарукавники. 10 ПОДГОТОВКА «КОМПОНЕНТЫ ДЛЯ ВЫДЕЛЕНИЯ. УПАКОВКА 1» НАБОРА РЕАГЕНТОВ Варианты исполнения 1 и 2 Для выделения НК из анализируемых образцов использовать «Компоненты для вы- деления. Упаковка 1», входящие в состав набора реагентов. Извлечь из коробки набора реагентов «ЛБ», «РП», «ПР» и «ЭР», проверить целостность упаковки и срок годности каждого компонента набора реагентов. При обнаружении повреждения или при истечении срока годности компоненты набора реагентов следует обработать в соответствии с разделом «Утилизация набора реагентов» настоящей инструкции по применению. Перед применением все вышеперечисленные компоненты инкубировать при комнатной температуре (от 15 до 25 °С) в течение 15 мин., затем аккуратно перемешать содержимое флаконов. ВНИМАНИЕ! При наличии во флаконах с компонентами «ЛБ» кристаллического осадка или хлопьев необходимо прогреть их содержимое при температуре 65 °С до полного растворения осадка. Хранение: неиспользованные и вcкрытые компоненты «ЛБ», «ПР», «РП», «ЭР» хранить при температуре от 2 до 8 °С в течение срока годности набора реагентов. Варианты исполнения 3 и 4 Извлечь из коробки набора реагентов «ЛБ», «РП», «ПР», «ЭР» проверить целостность упаковки и срок годности каждого компонента набора реагентов. При обнаружении повреждения или при истечении срока годности компоненты набора реагентов следует обработать в соответствии с разделом «Утилизация набора реагентов» настоящей инструкции по применению. Перед применением все вышеперечисленные 16 компоненты инкубировать при комнатной температуре (от 15 до 25 °С) в течение 15 мин. Затем процентрифугировать на центрифуге для планшетов все предразлитые планшеты. Хранение: неиспользованные компоненты «ЛБ», «ПР», «ЭР», а также вскрытые и неиспользованные флаконы «РП» хранить при температуре от 2 до 8 °С в течение срока годности набора реагентов. Вскрытые предразлитые планшеты с компонентами, «ЛБ», «ПР», «ЭР» не хранятся. ВЫДЕЛЕНИЕ НК ИЗ ОБРАЗЦОВ ВНИМАНИЕ! При работе с биоматериалами необходимо использовать только одноразовые стерильные пластиковые расходные материалы, имеющие специальную маркировку RNase-free, DNase-free. Для проведения всех манипуляций использовать одноразовые наконечники с фильтрами. 10.1 Ручная методика выделения НК: 10.1.1 Предварительная подготовка анализируемых образцов 10.1.1.1 Промаркировать по одной одноразовой пластиковой пробирке объёмом 1,5 мл для каждого анализируемого образца. 10.1.1.2 Перемешать анализируемые образцы вручную, переворачивая пробирку 8- 10 раз. 10.1.1.3 Отобрать в каждую промаркированную пробирку по 200 мкл соответствующего анализируемого образца. 10.1.2 Процедура экстракции НК ВНИМАНИЕ! Необходимо периодически встряхивать «ЛБ» для перемешивания магнитных частиц во время разнесения его по пробиркам. ВНИМАНИЕ! При выполнении процедуры по пп. 10.1.2.1-10.1.2.7 рекомендуется открывать крышку только той пробирки, с которой идет работа, и сразу закрывать её после проведения манипуляции. НЕ открывать сразу несколько пробирок, для исключения контаминации! 10.1.2.1 В пробирку с предварительно подготовленными 200 мкл анализируемого образца внести 300 мкл «ЛБ», перемешать пипетированием, затем 500 мкл «РП», перемешать содержимое пробирок на вортексе в течение 3 сек. ВНИМАНИЕ! Обязательно использовать отдельный одноразовый наконечник для каждой манипуляции, чтобы исключить контаминацию компонентов «ЛБ» и «РП». 10.1.2.2 Инкубировать пробирки в твердотельном термостате при температуре 95 °С в течение 15 минут. Перемешивать содержимое на вортексе 3 сек каждые 2 минуты. 17 10.1.2.3 После инкубации перемешать образцы на вортексе в течение 5 сек и осадить капли на миницентрифуге на максимальном количестве оборотов. 10.1.2.4 Поместить пробирки в магнитный штатив, выдержать 1-2 минуты, затем отобрать надосадочную жидкость из пробирок с помощью вакуумного отсасывателя или пипеточного дозатора, не задевая магнитных частиц. ВНИМАНИЕ! Держать пробирки в магнитном штативе при удалении надосадочной жидкости. Использовать отдельный одноразовый наконечник с аэрозольным барьером (при использовании пипеточного дозатора) или без такового (при использовании вакуумного отсасывателя) для каждого анализируемого образца. ВНИМАНИЕ! При добавлении раствора, пробирки не вынимать из магнитного штатива! На каждом этапе необходимо убедиться, что магнитные частицы все время остаются смоченными растворами. НЕ ДОПУСКАТЬ высыхания магнитных частиц! 10.1.2.5 Внести по 750 мкл «ПР» в каждую пробирку. 10.1.2.6 Закрыть пробирки, перемешать содержимое пробирок переворачиванием магнитного штатива 8-10 раз. НЕ ВЫНИМАТЬ ПРОБИРКИ ИЗ МАГНИТНОГО ШТАТИ- ВА! Отобрать надосадочную жидкость пипеточным дозатором или вакуумным отсасыва- телем из пробирок и с крышек пробирок, не задевая магнитных частиц, и держа пробирки в магнитном штативе. 10.1.2.7 Повторить процедуру отмывки магнитных частиц по пп. 10.1.2.5-10.1.2.6 еще два раза. После последней отмывки собрать остаток «ПР» из-под крышки пробирки. Общее количество отмывок – 3. 10.1.2.8 Открыть пробирки и подсушить осадок магнитных частиц в твердотельном термостате при температуре 75 °С в течение 3-х минут. 10.1.2.9 Не вынимая пробирки из твердотельного термостата добавить на дно про- бирок по 140 мкл «ЭР». Закрыть крышки пробирок. 10.1.2.10 Проверить, что «ЭР» полностью покрывает магнитные частицы, иначе ак- куратно перемешать в течение 1-3 секунд на вортексе. 10.1.2.11 Инкубировать пробирки в твердотельном термостате при температуре 75 °С в течение 10 минут. Перемешивать содержимое на вортексе по 3 сек каждые 2 мину- ты. 10.1.2.12 После инкубации перемешать образцы на вортексе в течение 5 сек и оса- дить капли на миницентрифуге на максимальном количестве оборотов. 10.1.2.13 Образцы выделенных НК готовы для постановки ПЦР анализа. 18 10.1.2.14 Перед внесением в реакционную смесь пробирки с образцами выделенных НК необходимо поставить на магнитный штатив. ВНИМАНИЕ! Отбирать образец выделенной НК для постановки ПЦР анализа необходимо аккуратно, избегая попадания магнитных частиц в наконечник пипеточного дозатора. Образцы выделенных НК могут храниться при температуре от 2 до 8 °С в течение одного часа, при температуре от минус 24 до минус 16 °С в течение 2-х недель, при темпе- ратуре ниже минус 65°С в течение года. Для хранения НК необходимо, не захватывая маг- нитные частицы, перенести надосадочную жидкость после выделения НК в новую чистую пробирку имеющую специальную маркировку RNase-free, DNase-free. 10.2 Методика выделения НК с использованием автоматических дозирующих станций ВНИМАНИЕ! При использовании автоматической станции для выделения НК необходимо ознакомиться с инструкцией по эксплуатации данной автоматической станции и запрограммировать последовательность действий (при необходимости обратиться в компанию, обслуживающую автоматическую дозирующую станцию), указанную ниже. 10.2.1 Подготовка к проведению процедуры выделения НК Внести необходимое количество реагентов «ЛБ», «РП», «ПР», «ЭР», соответствующее количеству анализируемых образцов, в картриджи для реагентов автоматической станции: • Картридж «ЛБ»: 1) Рассчитать необходимый объём по формуле: 300 мкл «ЛБ» x (N+2), где N – количество анализируемых образцов. Пример расчета: количество анализируемых образцов 50. 300 мкл x (50+2) = 15 600 мкл «ЛБ» 2) Внести рассчитанный объём в картридж. ВНИМАНИЕ! Необходимо перемешать содержимое флакона «ЛБ» перед внесением в картридж. Картридж «РП»: 1) Рассчитать необходимый объём по формуле: 500 мкл «РП» x (N+2), где N – количество анализируемых образцов. Пример расчета: количество анализируемых образцов 50. 500 мкл x (50+2) = 26 000 мкл «РП» 19 2) Внести рассчитанный объём в картридж. • Картриджи с «ПР» - 3 картриджа: 1) Рассчитать необходимый объём по формуле: 750 мкл «ПР» x (N+2), где N – количество анализируемых образцов. Пример расчета: количество анализируемых образцов 50. 750 мкл x (50 +2) = 39 000 мкл «ПР» 2) Внести рассчитанный объём в 3 картриджа • Картридж «ЭР»: 1) Рассчитать необходимый объём по формуле: 140 мкл «ЭР» x (N+2), где N – количество анализируемых образцов. Пример расчета: количество анализируемых образцов 50. 140 мкл x (50 +2) = 7 280 мкл «ЭР». 2) Внести рассчитанный объём в картридж. 10.2.2 Предварительная подготовка анализируемых образцов 10.2.2.1 Предварительную подготовку анализируемых образцов проводить в соответствии с Разделом 8 Анализируемые образцы и п. 10.1 Ручной методики выделения НК. 10.2.2.2 Внести в лунки планшета или пробирки (в зависимости от модели автоматической станции) весь объем предварительно подготовленного анализируемого образца. 10.2.3 Процедура экстракции НК Запрограммировать следующую последовательность действий (при необходимости обратиться в компанию, обслуживающую автоматическую дозирующую станцию), указанную ниже: 10.2.3.1 Внести в лунки планшета или пробирки с образцами (п. 10.2.2.2) по 300 мкл «ЛБ» и 500 мкл «РП», перемешать. 10.2.3.2 Инкубировать образцы при температуре 95 °С в течение 15 мин при постоянном аккуратном перемешивании. 10.2.3.3 Поместить пробирки или планшет в магнитный штатив (далее по тексту – МШ) на 3 мин. 10.2.3.4 Удалить надосадочную жидкость, не вынимая пробирки или планшет из МШ. 20 10.2.3.5 Добавить в образцы по 750 мкл «ПР», перемешать содержимое, поместить в МШ на 3 мин. 10.2.3.6 Отобрать надосадочную жидкость аналогично п. 10.2.3.4. 10.2.3.7 Добавить в образцы по 750 мкл «ПР», перемешать содержимое, поместить в МШ на 3 мин. Отобрать надосадочную жидкость аналогично п.10.2.3.4. 10.2.3.8 Добавить в образцы по 750 мкл «ПР» и удалить надосадочную жидкость, не вынимая пробирки или планшет из МШ, содержимое не перемешивать. 10.2.3.9 Подсушить осадок магнитных частиц при температуре 75 °С в течение 3-х минут. 10.2.3.10 Добавить в лунки планшета или пробирки по 140 мкл «ЭР» и инкубировать при 75 °С в течение 10 мин при постоянном аккуратном перемешивании. 10.2.3.11 Поместить пробирки или планшет в МШ на 1 мин. 10.2.3.12 Перенести надосадочную жидкость в новые пробирки или планшет, не задевая осадок магнитных частиц. 10.2.3.13 Образцы выделенных НК готовы для постановки ПЦР анализа. Образцы выделенных НК могут храниться при температуре от 2 до 8 °С в течение одного часа, при температуре от минус 24 до минус 16 °С в течение 2-х недель и при тем- пературе ниже минус 65 °С в течение года. 10.3 Методика выделения НК с использованием автоматических станций с магнитной головкой 10.3.1 Предварительная подготовка анализируемых образцов Предварительную подготовку анализируемых образцов проводить в соответствии с Разделом 8 Анализируемые образцы и п. 10.1 Ручной методики выделения НК. 10.3.2.1 Подготовка к проведению процедуры выделения НК Варианты исполнения 1 и 2 10.3.2.1.1 Приготовить и промаркировать пять глубоколуночных планшетов: «Образец», «ПР 1», «ПР 2», «ПР 3» и «ЭР». 10.3.2.1.2 Внести в каждую лунку соответствующих глубоколуночных планшетов: • В планшеты «ПР 1», «ПР 2», «ПР 3» - по 750 мкл «ПР»; • В планшет «ЭР» - по 140 мкл «ЭР»; • В планшет «Образец» - по 300 мкл «ЛБ», затем по 200 мкл соответствующего образца. Затем по 500 мкл «РП». Допускается поменять порядок на «ЛБ» -> «РП» -> образец. 21 10.3.2.1.3 Поместить новую насадку на магнитную головку (далее по тексту – МГ) в планшет для хранения насадки. Поместить все планшеты в автоматическую станцию согласно протоколу. 10.3.2.2 Подготовка к проведению процедуры выделения НК Варианты исполнения 3 и 4 10.3.2.2.1 Достать из упаковки и открутить на центрифуге для планшетов планшеты: «ЛБ», «ПР 1», «ПР 2», «ПР 3» и «ЭР». ВНИМАНИЕ! В каждой лунке планшета «ЭР» находится по 140 мкл раствора. Перед постановкой в станцию выделения необходимо убедиться, что весь раствор находиться на дне лунок планшета, в противном случае результаты анализа могут быть некорректными. 10.3.2.2.2 Внести в каждую лунку планшета «ЛБ» по 200 мкл соответствующего образца. Затем по 500 мкл «РП». Допускается поменять порядок на «РП» -> образец 10.3.2.2.3 Поместить новую насадку на магнитную головку (далее по тексту – МГ) в планшет для хранения насадки. Поместить все планшеты в автоматическую станцию согласно протоколу. Стандартный протокол – слот 1 планшет с гребенкой, слот 2 планшет «ЛБ», слот 3 «ПР 1», слот 4 «ПР 2», слот 5 «ПР 3», слот 8 «ЭР». 10.3.3 Процедура экстракции НК 10.3.3.1 Инкубировать планшет «Образец» при температуре 95 °С в течение 15 мин, при постоянном аккуратном перемешивании (скорость средняя или 5 из 10). 10.3.3.2 Поместить МГ в планшет «Образец» на 1 мин. 10.3.3.3 Переместить МГ с магнитными частицами в планшет «ПР 1», перемешать содержимое в течении 1 мин. 10.3.3.4 Переместить МГ с магнитными частицами в планшет «ПР 2», перемешать содержимое в течении 1 мин. 10.3.3.5 Переместить МГ с магнитными частицами в планшет «ПР 3», перемешать содержимое в течении 1 мин. 10.3.3.6 Собрать магнитные частицы и высушить на воздухе в течение 3-х мин. 10.3.3.7 Переместить МГ с магнитными частицами в планшет «ЭР». 10.3.3.8 Инкубировать планшет при температуре 75 °С в течение 10 мин при постоянном аккуратном перемешивании (скорость средняя или 5 из 10). 10.3.3.9 Удалить МГ с магнитными частицами. 22 10.3.3.10 Содержимое лунок планшета «ЭР» содержит выделенные образцы НК. Образцы выделенных НК готовы для постановки ПЦР анализа. 10.3.3.11 Образцы выделенных НК могут храниться при температуре от 2 до 8 °С в течение одного часа, при температуре от минус 24 до минус 16 °С в течение 2-х недель и при температуре ниже минус 65 °С в течение года. 11 ПОДГОТОВКА ОБОРУДОВАНИЯ ДЛЯ ПЦР-РВ Для проведения анализа ПЦР-РВ с помощью «Компоненты для ПЦР-РВ. Упаковка 2» с использованием амплификатора, необходимо его подготовить заранее в соответствии с руководством по эксплуатации. 12 ПОДГОТОВКА «КОМПОНЕНТЫ ДЛЯ ПЦР. УПАКОВКА 2» НАБОРА РЕАГЕНТОВ Подготовка «ПЦР-смесь», «ПЦР-буфер» и «Фермент RT» «ПЦР-буфер», «ПЦР-смесь» и «Фермент RT» готовы к использованию. Перед применением все растворы необходимо разморозить при комнатной температуре, аккуратно перемешать и осадить капли с крышки пробирки кратким центрифугированием в течение 1-3 сек. Хранение: неиспользованные и вcкрытые компоненты «ПЦР-буфер», «ПЦР-смесь» и «Фермент RT» хранить при температуре от минус 24 до минус 16 °С в течение срока годности набора реагентов. 13 ПРОВЕДЕНИЕ ПЦР-РВ ВНИМАНИЕ! При работе с НК необходимо использовать только одноразовые стерильные пла- стиковые расходные материалы, имеющие специальную маркировку RNase-free, DNase-free. Для внесения в пробирки/лунки планшета реагентов, проб НК и контрольных образцов использовать одноразовые наконечники с фильтрами ВНИМАНИЕ! Компоненты реакционной смеси следует смешивать непосредственно перед про- ведением ПЦР-исследования Подготовка Расчет количества микропробирок (N) или лунок планшета производится микропробирок/ по формуле: N= n + 2, где n – количество выделенных анализируемых образцов, планшета ПЦР 2 – положительный и отрицательный контрольные образцы – «ПКО» и «ОКО». При необходимости, отрицательный и положительный контрольные об- разцы можно поставить в двух повторах: Тогда N = n + 4, где n – количество выделенных анализируемых образ- цов, 4 – отрицательный и положительный контрольные образцы в двух повто- рах каждый – 2 х «ПКО» и 2 х «ОКО». В случае использования микропробирок отобрать необходимое для про- ведения анализа число пробирок или стрипованных пробирок, промарки- ровать и расположить в штативе. 23 ВНИМАНИЕ! В зависимости от используемого оборудования для проведения ПЦР-РВ надписи на пробирках следует располагать таким образом, чтобы они не мешали детектированию флу- оресцентного сигнала. См. руководство по использованию амплификатора для проведения ПЦР- РВ. Приготовление ре- В пробирке объемом 1,5 - 2 мл смешать реагенты для приготовления ре- акционной смеси акционной смеси из расчета на необходимое количество микропроби- рок/лунок планшета N, согласно приведенной ниже таблице. Название Объем реагента на одну Объем реагента для анали- реагента реакцию (микропробир- за N микропробирок/лунок ку/лунку) (с учётом 10% запаса объ- ема) «ПЦР- 5 мкл 5×N×1,1 мкл смесь» «ПЦР- 9 мкл 9×N×1,1 мкл буфер» «Фермент 1 мкл 1×N×1,1 мкл RT» Перемешать приготовленную реакционную смесь на вортексе и осадить капли с крышки пробирки кратким центрифугированием (1-3 с). Внесение реакци- В каждую микропробирку/лунку планшета внести по 15 мкл реакционной онной смеси* смеси. Внесение образцов в Внесение образцов в пробирки/лунки планшета с реакционной смесью пробирки/лунки необходимо осуществлять в следующей последовательности (для исключения контаминации): планшета с реакци- 1. 35 мкл «ОКО» онной смесью* 2. по 35 мкл выделенных образцов НК 3. 35 мкл «ПКО» Планшет заклеить пленкой для ПЦР. В случае использования микропробирок закрыть крышки. Перед постановкой в амплификатор рекомендуется осадить капли со стенок пробирок кратким центрифугированием (1-3 с). При постановке отрицательного и положительного контрольных образцов в двух повторах п.п. 1, 3-7 выполнить в двух повторах без внесения изменения последовательности внесения образцов в лунки плашки или микропробирки. Регистрация Выполнить в соответствии с «Процедурой измерения и оценки результа- результатов та» анализа *Внесение реакционной смеси и образцов в лунки планшета можно производить на автоматической дозирующей станции. Для этого необходимо запрограммировать внесение реакционной смеси и образцов (при необходимости обратиться в компанию, обслуживающую автоматическую дозирующую станцию). 24 | Количество циклов | Температура (℃) | Время | Измерение флуоресценции в каналах | | 1 | 50 | 25 мин | - | | 1 | 95 | 15 мин | - | | 5 | 95 | 10 с | - | | | 60 | 10 с | - | | | 72 | 10 с | - | | 45 | 95 | 10 с | - | | | 60 | 10 с | FAM/Green, R6G/JOE/HEX/VIC/Yellow | | | 72 | 10 с | - | 13.1 Процедура измерения и оценка результата Ввести в прибор для ПЦР-РВ программу проведения амплификации и детекции флуоресцентных сигналов: Для детектирования сигнала при амплификации РНК ВИЧ в наборе реагентов ис- пользуются гибридизационные зонды, меченные флюорофором HEX. Для детектирования сигнала при амплификации ВК (эндогенный внутренний контроль) в системе используется гибридизационный зонд, меченный флюорофором FAM. Для детекции следует выбирать два канала детекции FAM/Green и R6G/JOE/HEX/VIC/Yellow. Запрограммировать положение пробирок с отрицательным контрольным образцом, положительным контрольным образцом, анализируемыми образцами согласно инструкци- ям по эксплуатации к соответствующему амплификатору для ПЦР-РВ. Поместить пробирки или планшет в амплификатор. Запустить программу и провести ПЦР-РВ с флуоресцентной регистрацией в режиме реального времени. 14 РАСЧЕТЫ Полученные данные – кривые накопления флуоресцентного сигнала анализируются с помощью программного обеспечения используемого прибора для проведения ПЦР-РВ в соответствии с инструкцией к прибору. 14.1 Условия правильности работы набора реагентов В положительном контрольном образце прибор должен фиксировать: – нарастание сигнала флуоресценции в канале HEX и определять значение порогового цикла Ct в канале HEX; – нарастание сигнала флуоресценции в канале FAM и определять значение порогового цикла Ct в канале FAM. В отрицательном контрольном образце прибор должен: 25 – НЕ фиксировать нарастание сигнала флуоресценции в канале HEX и НЕ определять Ct в канале HEX; – НЕ фиксировать нарастание сигнала флуоресценции в канале FAM и НЕ определять Ct в канале FAM. В каждом анализируемом образце прибор должен фиксировать: – нарастание сигнала флуоресценции в канале FAM и определять Ct в канале FAM. Ct в канале FAM у образцов должно находиться в пределах диапазона ВК, значения диапазона представлены в паспорте для всех типов амплификаторов. 14.2 Учет результатов анализа На основании значений порогового цикла Ct (пересечение кривой флуоресценции с установленной на соответствующем уровне пороговой линией) происходит учет образца как положительного или отрицательного по присутствию вируса иммунодефицита человека. 14.3 Условия регистрации результатов: Для «ОКО»: – значение Ct в каналах FAM и HEX должно быть больше порогового значения или не определяться, в зависимости от типа амплификатора это значение может меняться, в приложении к паспорту набора реагентов указаны значения для всех типов амплификаторов; – если значение Ct в каналах FAM и HEX меньше или равно пороговому значению, то это свидетельствует о наличии контаминации в системе. В этом случае результаты по данной индивидуальной постановке ПЦР-РВ считаются недостоверными. Требуется предпринять меры по выявлению и ликвидации источника контаминации и повторить анализ. Для «ПКО»: – полученные значения Ct, должны укладываться в диапазон значений, приведенный в приложении к паспорту набора реагентов. 14.4 Интерпретация результатов анализа Качественное определение РНК ВИЧ: Расчет можно провести с использованием программного обеспечения, анализирующего файл с амплификатора. Если в анализируемом образце значение Ct в канале HEX не определяется или больше, чем пороговое значение, а значение Ct в канале FAM определяется внутри 26 диапазона ВК, анализируемый образец считать отрицательным, то есть не содержащим РНК ВИЧ. Если в анализируемом образце значение Ct в канале HEX определяется до порогового значения, при этом Ct в канале FAM определяется до порогового значения образец считать положительным, то есть содержащим РНК ВИЧ. Если в анализируемом образце значение Ct в канале FAM не определяется, или определяется вне диапазона ВК, а значение Ct в канале HEX не определяется или больше, чем пороговое значение, результат анализа образца считать не достоверным. Вероятна низкая концентрация РНК ВИЧ в анализируемом образце, либо некорректное проведение выделения. Требуется перевыделение и повторный анализ, при повторении проблемы - повторное взятие клинического материала и повторный анализ. Внимание! Данный набор реагентов нельзя использовать для постановки диагноза. 14.5 Ограничения теста На результаты теста может оказать влияние прием препаратов на основе крови (в течение последних трех месяцев), моноклональных антител, иммуносупрессивных препаратов, кортикостероидов, цитостатиков, гепарин, применяемый при антикоагулянтной терапии, а также недавно проведенные (за два месяца до анализа) процедуры переливания крови. 15 УТИЛИЗАЦИЯ НАБОРА РЕАГЕНТОВ В процессе использования набора реагентов и утилизации наборов реагентов с ис- текшим сроком годности токсичные отходы не образуются. Отходы, образующиеся в процессе использования набора реагентов, относить к классу Б, наборы реагентов с истекшим сроком годности – к классу Г. Обращение (сбор, временное хранение, обеззараживание и/или обезвреживание и транспортирование) отходов, образующихся в процессе использования и утилизации набо- ра реагентов с истекшим сроком годности, проводить согласно СанПиН 2.1.3684-21 «Са- нитарно-эпидемиологические требования к содержанию территорий городских и сель- ских поселений, к водным объектам, питьевой воде и питьевому водоснабжению, атмо- сферному воздуху, почвам, жилым помещениям, эксплуатации производственных, обще- ственных помещений, организации и проведению санитарно-противоэпидемических (профилактических) мероприятий». 27 Для обеззараживания и/или обезвреживания отходов в соответствии с МУ 287-113 «Методические указания по дезинфекции, предстерилизационной очистке и стерилизации изделий медицинского назначения» использовать зарегистрированные в РФ дезсредства и оборудование в соответствии с инструкциями по их применению. Отходы утилизировать через организации, имеющие лицензию на этот вид деятельности. 16 УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ, ТРАНСПОРТИРОВАНИЯ И ЭКСПЛУАТАЦИИ НАБОРА РЕАГЕНТОВ Срок годности набора реагентов – 12 месяцев с даты изготовления, указанной на этикетке. Срок годности вскрытых компонентов набора реагентов – 12 месяцев с даты изготовления, указанной на этикетке. Внимание! Компоненты для выделения в предразлитых планшетах вариантов исполнения 3 и 4 в случае повреждения или вскрытия пленки не хранятся. Набор реагентов с истекшим сроком годности применению не подлежит. «Компоненты для выделения. Упаковка 1» набора реагентов необходимо хранить и транспортировать в оригинальной упаковке в соответствии с СанПиН 3.3686–21 «Санитарно-эпидемиологические требования по профилактике инфекционных болезней» раздел XLVIII «Условия транспортирования и хранения иммунобиологических препаратов» при температуре от 2 до 25 °С в течение срока годности. Замораживание не допускается! «Компоненты для ПЦР-РВ. Упаковка 2» набора реагентов необходимо хранить и транспортировать в оригинальной упаковке в соответствии с СанПиН 3.3686–21 «Санитарно-эпидемиологические требования по профилактике инфекционных болезней» раздел XLVIII «Условия транспортирования и хранения иммунобиологических препаратов» при температуре от минус 24 до минус 16°С в течение срока годности. Допускается однократное транспортирование «Компоненты для ПЦР-РВ. Упаковка 2» набора реагентов при температуре от 2 до 8 °С не более 7 суток. Набор реагентов эксплуатировать при следующих условиях: – температура окружающей среды (17 – 27) °С; – относительная влажность воздуха (не более 70) %; – атмосферное давление (84,0 – 106,7) кПа / (630 – 800) мм. рт. ст. 28 | Символ | Наименование символа | Символ | Наименование символа | | ГОСТ Р ИСО 15223-1 | | | | | | Использовать до | | Обратитесь к инструкции по применению или к ин- струкции по применению в электронном виде | | | Дата изготовления | | Осторожно | | | Код партии | | Медицинское изделие для диагностики in vitro | | | Не допускать воздействия солнечного света | 100 | Содержимого достаточно для проведения n (100) те- стов | | | Не допускать воздействия влаги | | Температурный диапазон | 17 ГАРАНТИИ ПРОИЗВОДИТЕЛЯ Производитель гарантирует соответствие выпускаемых наборов реагентов требованиям нормативной и технической документации. Безопасность и качество набора реагентов гарантируются в течение всего срока годности. Производитель отвечает за недостатки набора реагентов, за исключением дефектов, возникших вследствие нарушения правил применения, условий транспортирования и хранения, либо действия третьих лиц, либо непреодолимой силы. Производитель обязуется за свой счет заменить набор реагентов, технические и функциональные характеристики (потребительские свойства) которого не соответствуют нормативной и технической документации, если указанные недостатки явились следствием скрытого дефекта материалов или некачественного изготовления набора реагентов производителем. По вопросам, касающимся качества набора реагентов, обращаться на предприятие- изготовитель ООО «Медико-биологический Союз» по адресу: 630090, Новосибирская область, г. Новосибирск, ул. Инженерная, д.16; головной офис, тел./факс: 8-(383)-363-77-18; отдел продаж, тел./факс: 8-(383)-363-77-09; многоканальный телефон: 8-(383)-363-77-01; ОБТК, тел./факс: 8-(383)-363-77-23, e-mail: obtk@mbu.ru 18 СИМВОЛЫ, ПРИМЕНЯЕМЫЕ ДЛЯ МАРКИРОВКИ НАБОРА РЕАГЕНТОВ 29 | | Хрупкое, обращаться осторожно | | Верх (ГОСТ 14192) | | | Номер по каталогу | | Не использовать при повреждении упаковки | | | | | Запрет на повторное применение | 30 Краткая схема анализа Краткая схема анализа набором реагентов «МБС-Тест ВИЧ РНК качественный» 1 ПОДГОТОВКА К ВЫДЕЛЕНИЮ ОБРАЗЦОВ Перед применением инкубировать при комнатной температуре (от 15 до 25 °С) в течение 15 мин «ЛБ», «РП», «ПР», и «ЭР», затем аккуратно перемешать содержимое флаконов. При наличии во флаконах с компонентами кристаллическо- го осадка или хлопьев необходимо прогреть их содержимое при 65 °С до полного растворения осадка. 2 ВЫДЕЛЕНИЕ НУКЛЕИНОВЫХ КИСЛОТ С ПОМОЩЬЮ РУЧНОЙ МЕТОДИКИ ВНИМАНИЕ! При выделении НК с помощью автоматических станций необходимо следовать алгоритму инструкции, описанному в соответствующих разделах. 3 ПРЕДВАРИТЕЛЬНАЯ ПОДГОТОВКА ОБРАЗЦОВ К ЭТАПУ ВЫДЕЛЕНИЯ НК 3.1 Промаркировать по одной одноразовой пластиковой пробирке объёмом 1,5 мл для каждого анализируемого об- разца. 3.2 Перемешать анализируемые образцы вручную, переворачивая пробирку 8-10 раз. 3.3 Отобрать в каждую промаркированную пробирку по 200 мкл соответствующего анализируемого образца. 4 ВЫДЕЛЕНИЕ НУКЛЕИНОВЫХ КИСЛОТ ИЗ ПРЕДВАРИТЕЛЬНО ПОДГОТОВЛЕННЫХ ОБРАЗЦОВ 4.1. В пробирку с предварительно подготовленными образцами (п. 3) внести 300 мкл «ЛБ», перемешать пипетирова- нием, затем 500 мкл «РП», перемешать содержимое пробирок на вортексе в течение 3 сек. 4.2 Инкубировать пробирки в твердотельном термостате при температуре 95 °С в течение 15 минут. Перемешивать содержимое на вортексе 3 сек каждые 2 минуты. 4.3 После инкубации перемешать образцы на вортексе в течение 5 сек и осадить капли на миницентрифуге на макси- мальном количестве оборотов. 4.4 Поместить пробирки в магнитный штатив, выдержать 1-2 минуты, затем отобрать надосадочную жидкость из про- бирок с помощью вакуумного отсасывателя или пипеточного дозатора, не задевая магнитных частиц. ВНИМАНИЕ! При добавлении раствора, пробирки не вынимать из магнитного штатива! На каждом этапе необходи- мо убедиться, что магнитные частицы все время остаются смоченными растворами. НЕ ДОПУСКАТЬ высыхания магнитных частиц! 4.5 Внести по 750 мкл «ПР» в каждую пробирку. 4.6 Закрыть пробирки, перемешать содержимое пробирок переворачиванием магнитного штатива 8-10 раз. НЕ ВЫ- НИМАТЬ ПРОБИРКИ ИЗ МАГНИТНОГО ШТАТИВА! Отобрать надосадочную жидкость пипеточным дозатором или вакуумным отсасывателем из пробирок и с крышек пробирок, не задевая магнитных частиц, и держа пробирки в магнитном штативе. 4.7 Повторить процедуру отмывки магнитных частиц по пп. 4.5-4.6 еще два раза. После последней отмывки собрать остаток «ПР» из-под крышки пробирки. Общее количество отмывок – 3. 4.8 Открыть пробирки и подсушить осадок магнитных частиц в твердотельном термостате при температуре 75 °С в течение 3-х минут. 4.9 Не вынимая пробирки из твердотельного термостата добавить на дно пробирок по 140 мкл «ЭР». Закрыть крышки пробирок. 4.10 Проверить, что «ЭР» полностью покрывает магнитные частицы, иначе аккуратно перемешать в течение 1-3 се- кунд на вортексе. 4.11 Инкубировать пробирки в твердотельном термостате при температуре 75 °С в течение 10 минут. Перемешивать содержимое на вортексе по 3 сек каждые 2 минуты. 4.12 После инкубации перемешать образцы на вортексе в течение 5 сек и осадить капли на миницентрифуге на мак- симальном количестве оборотов. 4.13 Образцы выделенных НК готовы для постановки ПЦР анализа. 4.14 Перед внесением в реакционную смесь пробирки с образцами выделенных НК необходимо поставить на магнит- ный штатив. 5 ПОДГОТОВКА К ПЦР АНАЛИЗУ 5.1 Подготовить амплификатор заранее в соответствии с руководством по эксплуатации. 5.2 Разморозить «ПЦР-буфер», «ПЦР-смесь» и «Фермент RT» при комнатной температуре, перемешать и осадить капли с крышки 6 ПОДГОТОВКА МИКРОПРОБИРОК/ПЛАНШЕТА Положительный и отрицательный контроли в одном повто- Положительный и отрицательный контроли ре: в двух повторах: Рассчитать количество микропробирок/лунок (N) по формуле: N= Рассчитать количество микропробирок/лунок (N) n + 2 по формуле: N= n + 4 где n – количество выделенных анализируемых образцов, где n – количество выделенных анализируемых 2 – положительный и отрицательный контрольные образцы – образцов, «ПКО» и «ОКО» 4 – положительный и отрицательный контроль- 31 | Название реагента | Объем реагента на одну реакцию | Объем реагента для анализа N проб (с учётом 10% запаса объема) | | «ПЦР-буфер» | 9 мкл | 9×N×1,1 мкл | | «ПЦР-смесь» | 5 мкл | 5×N×1,1 мкл | | «Фермент RT» | 1 мкл | 1×N×1,1 мкл | | Количество циклов | Температура (℃) | Время | Измерение флуоресценции в каналах | | 1 | 50 | 25 мин | - | | 1 | 95 | 15 мин | - | | 5 | 95 | 10 с | - | | | 60 | 10 с | - | | | 72 | 10 с | - | | 45 | 95 | 10 с | - | | | 60 | 10 с | FAM/Green, R6G/JOE/HEX/VIC/Yellow | | | 72 | 10 с | - | ные образцы в двух повторах каждый – 2 х «ПКО» и 2 х «ОКО» Внимание! Надписи на пробирках следует располагать таким образом, чтобы они не мешали детектированию флуо- ресцентного сигнала 7 ПРИГОТОВЛЕНИЕ РЕАКЦИОННОЙ СМЕСИ Внимание! Компоненты реакционной смеси следует смешивать непосредственно перед проведением ПЦР 7.1 В пробирке объемом 1,5-2 мл смешать реагенты из расчета на необходимое количество N проб: 7.2 Перемешать приготовленную реакционную смесь на вортексе и осадить капли с крышки 8 ВНЕСЕНИЕ РЕАКЦИОННОЙ СМЕСИ, ПОЛОЖИТЕЛЬНОГО И ОТРИЦАТЕЛЬНОГО КОНТРОЛЯ И АНАЛИЗИРУЕМЫХ ОБРАЗЦОВ Положительный и отрицательный контроли в одном повто- Положительный и отрицательный контроли ре: в двух повторах: 1) В каждую микропробирку/лунку планшета внести по 15 мкл 1) В каждую микропробирку/лунку планшета реакционной смеси внести по 15 мкл реакционной смеси 2) Внесение образцов в пробирки/лунки планшета с реакционной 2) Внесение образцов в пробирки/лунки смесью необходимо осуществлять в следующей планшета с реакционной смесью необходимо последовательности (для исключения контаминации): осуществлять в следующей последовательности 1. 35 мкл «ОКО» (для исключения контаминации): 2. по 35 мкл выделенных образцов НК 1. 35 мкл «ОКО» 3. 35 мкл «ПКО» 2. 35 мкл «ОКО» 3) Планшет заклеить пленкой для ПЦР. 3. по 35 мкл выделенных образцов НК В случае использования микропробирок закрыть крышки. Перед 4. 35 мкл «ПКО» постановкой в амплификатор рекомендуется осадить капли со 5. 35 мкл «ПКО» стенок пробирок кратким центрифугированием (1-3 с) 3) Планшет заклеить пленкой для ПЦР. В случае использования микропробирок закрыть крышки. Перед постановкой в амплификатор рекомендуется осадить капли со стенок проби- рок кратким центрифугированием (1-3 с) 9 ПРОВЕДЕНИЕ АМПЛИФИКАЦИИ С ДЕТЕКЦИЕЙ В РЕЖИМЕ «РЕАЛЬНОГО ВРЕМЕНИ» 9.1 Ввести программу в амплификатор: 9.2 Для детекции следует выбирать два канала: Канал детекции FAM/Green R6G/JOE/HEX/VIC/Yellow Мишень ВК ВИЧ 9.3 Запрограммировать положение пробирок с отрицательным контрольным образцом, положительным контрольным образцом и анализируемыми образцами согласно рекомендациям к соответствующему амплификатору 9.4 Поместить пробирки в амплификатор, запустить программу и провести ПЦР-РВ 10 ИНТЕРПРЕТАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ Для «ОКО» значение Ct в каналах FAM и HEX должно быть больше порогового значения или не определяться, в за- висимости от типа амплификатора это значение может меняться, в приложении к паспорту набора реагентов указаны значения для всех типов амплификаторов. Если значение Ct в каналах FAM и HEX меньше или равно пороговому значению, то это свидетельствует о наличии контаминации в системе. В этом случае результаты по данной индивидуальной постановке ПЦР-РВ считаются недо- стоверными. Требуется предпринять меры по выявлению и ликвидации источника контаминации и повторить анализ. Для «ПКО» полученные значения Ct, должны укладываться в диапазон значений, приведенный в приложении к пас- порту набора реагентов. 32 Расчет можно проводить с использованием программного обеспечения, анализирующего файл с амплификатора. Если Ct образца по HEX больше, чем пороговое значение или не определяется, а значение Ct по FAM определяется внутри диапазона ВК, анализируемый образец считать отрицательным, то есть не содержащим РНК ВИЧ. Если Ct образца по HEX определяется до порогового значения, при этом Ct по FAM определяется до порогового зна- чения образец считать положительным, то есть содержащим РНК ВИЧ. Если Ct образца по FAM не определяется, или определяется вне диапазона ВК, а значение Ct в канале HEX не определяется или больше, чем пороговое значение, результат анализа образца считать не достоверным. Вероятна низкая концентрация РНК ВИЧ в анализируемом образце, либо некорректное проведение выделения. Требуется перевыделение и повторный анализ, при повторении проблемы - повторное взятие клинического материала и повторный анализ. Внимание! Данный набор реагентов нельзя использовать для постановки диагноза. Дата создания 25.05.2026 г. 33