ДНК-зонды для детекции точек разрыва генов NTRK1 (1q23), NTRK2 (9q21), NTRK3 (15q25), 6q (ROS1) (6q22), ALK (2p23), RET (10q11) в образцах тканей человека методом флуоресцентной гибридизации in situ (FISH) для диагностики in vitro — инструкция и характеристики
Открытые закупки, где изделие проходит ТЗ
Сейчас открытых закупок, где изделие полностью проходит ТЗ, нет; список обновляется каждый день.
Построчная сверка ТЗ с характеристиками этого изделия и все закупки под ваши товары — в кабинете, 7 дней бесплатно.
Попробовать бесплатно
Текст инструкции: технические характеристики
УТВЕРЖДАЮ
пиr~~ ООО «Вирхов»
Н.А. Мерзлов
_,,,,,._,,.--,'--f-,......,..,.-t;-'------;-,;;--,.('-fr-
14.05.2026 г.
ИНСТРУКЦИЯ ПО ПРИМЕНЕНИЮ НА МЕДИЦИНСКОЕ ИЗДЕЛИЕ ДЛЯ
ДИАГНОСТИКИ IN VITRO
ДНК-зонды для детекции точек разрыва генов NТRКl (lq23), NТRК2 (9q21),
NТRКЗ (15q25), бq (ROSl) (6q22), ALK (2р23), RET (l0ql 1) в образцах
тканей человека методом флуоресцентной гибридизации in situ (FISH) для
диагностики in vitro, в моделях
Версия 3
2026
1. Наименование
ДНК-зонды для детекции точек разрыва генов NTRK1 (1q23), NTRK2
(9q21), NTRK3 (15q25), 6q (ROS1) (6q22), ALK (2p23), RET (10q11) в образцах
тканей человека методом флуоресцентной гибридизации in situ (FISH) для
диагностики in vitro, в моделях (далее по тексту – ДНК-зонды, изделие).
2. Назначение
ДНК-зонды предназначены для качественной детекции точек разрыва
при хромосомных аберрациях специфической нуклеотидной
последовательности генов NTRK1 в регионе 1q23 хромосомы 1, NTRK2 в
регионе 9q21 хромосомы 9, NTRK3 в регионе 15q25 хромосомы 15, 6q (ROS1)
в регионе 6q22 хромосомы 6, ALK в регионе 2p23 хромосомы 2, RET в регионе
10q11 хромосомы 10, ассоциированных с немелкоклеточным раком легкого, в
образцах тканей человека, фиксированных формалином и залитых в парафин
блоках (FFPE), методом флуоресцентной гибридизации in situ (FISH) с целью
диагностики немелкоклеточного рака легкого.
Функциональное назначение: вспомогательное средство в
диагностике in vitro. Применение изделия не имеет популяционно-
демографических ограничений.
3. Показания, противопоказания и побочные явления
Показания к применению: в качестве вспомогательного средства в
диагностике немелкоклеточного рака легкого.
Противопоказания: в рамках установленного производителем
назначения не имеет.
Побочные явления: при соблюдении условий и правил
транспортирования, хранения и применения не выявлены.
Специфическая патология, состояние или фактор риска:
немелкоклеточный рак легкого.
4. Потенциальные пользователи и область применения
Потенциальный потребитель: врач – лабораторный генетик, врач
клинической лабораторной диагностики и другие специалисты в области
2
клинической лабораторной диагностики. Только для профессионального
использования.
Область применения – клиническая лабораторная диагностика.
Код вида – 326200 Гибридизация нуклеиновых кислот ИВД, зонд.
5. Состав изделия
«ДНК-зонды для детекции точек разрыва генов NTRK1 (1q23), NTRK2
(9q21), NTRK3 (15q25), 6q (ROS1) (6q22), ALK (2p23), RET (10q11) в образцах
тканей человека методом флуоресцентной гибридизации in situ (FISH) для
диагностики in vitro, в моделях», выпускается в 7 моделях:
1) Модель 1, в составе:
1. Двухцветный ДНК-зонд для детекции точек разрыва гена NTRK1
(1q23) (NTRK1 gene break apart detection probe), 100 мкл/пробирка – 1 шт.;
2. Двухцветный ДНК-зонд для детекции точек разрыва гена NTRK2
(9q21) (NTRK2 (9q21) gene break apart detection probe), 100 мкл/пробирка – 1
шт.;
3. Двухцветный ДНК-зонд для детекции точек разрыва гена NTRK3
(15q25) (NTRK3 (15q25) gene break apart detection probe), 100 мкл/пробирка – 1
шт.;
4. Двухцветный ДНК-зонд для детекции точек разрыва гена 6q (ROS1)
(6q22) (6q (ROS1) gene detection probe), 100 мкл/пробирка – 1 шт.;
5. Двухцветный ДНК-зонд для детекции точек разрыва гена ALK
(2p23) (ALK gene fusion detection probe), 100 мкл/пробирка – 1 шт.;
6. Двухцветный ДНК-зонд для детекции точек разрыва гена RET
(10q11) (RET gene break apart detection probe), 100 мкл/пробирка – 1 шт.;
7. Инструкция по применению – 1 шт.
2) Модель 2, в составе:
1. Двухцветный ДНК-зонд для детекции точек разрыва гена NTRK1
(1q23) (NTRK1 gene break apart detection probe), 100 мкл/пробирка – 1 шт.;
2. Инструкция по применению – 1 шт.
3) Модель 3, в составе:
3
1. Двухцветный ДНК-зонд для детекции точек разрыва гена NTRK2
(9q21) (NTRK2 (9q21) gene break apart detection probe), 100 мкл/пробирка – 1
шт.;
2. Инструкция по применению – 1 шт.
4) Модель 4, в составе:
1. Двухцветный ДНК-зонд для детекции точек разрыва гена NTRK3
(15q25) (NTRK3 (15q25) gene break apart detection probe), 100 мкл/пробирка – 1
шт.;
2. Инструкция по применению – 1 шт.
5) Модель 5, в составе:
1. Двухцветный ДНК-зонд для детекции точек разрыва гена 6q (ROS1)
(6q22) (6q (ROS1) gene detection probe), 100 мкл/пробирка – 1 шт.;
2. Инструкция по применению – 1 шт.
6) Модель 6, в составе:
1. Двухцветный ДНК-зонд для детекции точек разрыва гена ALK
(2p23) (ALK gene fusion detection probe), 100 мкл/пробирка – 1 шт.;
2. Инструкция по применению – 1 шт.
7) Модель 7, в составе:
1. Двухцветный ДНК-зонд для детекции точек разрыва гена RET
(10q11) (RET gene break apart detection probe), 100 мкл/пробирка – 1 шт.;
2. Инструкция по применению – 1 шт.
Состав ДНК-зондов:
Деионизованный формамид – 50%, цитратный буфер,
концентрат 2х (SSC - saline-sodium citrate), сульфат
Двухцветный ДНК-зонд для декстрана – 10%, ДНК-зонд, соответствующий 3′-
детекции точек разрыва гена концевой последовательности гена NTRK1, меченный
NTRK1 (1q23) (NTRK1 gene родамином флуоресцеином оранжевого цвета, ДНК-
break apart detection probe) зонд, соответствующий 5′-концевой
последовательности гена NTRK1, меченный
флуоресцеинизотиоцианатом зеленого цвета
Деионизованный формамид – 50%, цитратный буфер,
Двухцветный ДНК-зонд для
концентрат 2х (SSC - saline-sodium citrate), сульфат
детекции точек разрыва гена
декстрана – 10%, ДНК-зонд, соответствующий 3′-
NTRK2 (9q21) (NTRK2 (9q21)
концевой последовательности гена NTRK2, меченный
gene break apart detection probe)
родамином флуоресцеином оранжевого цвета, ДНК-
4
| | зонд, соответствующий 5′-концевой последовательности гена NTRK2, меченный флуоресцеинизотиоцианатом зеленого цвета |
| Двухцветный ДНК-зонд для детекции точек разрыва гена NTRK3 (15q25) (NTRK3 (15q25) gene break apart detection probe) | Деионизованный формамид – 50%, цитратный буфер, концентрат 2х (SSC - saline-sodium citrate), сульфат декстрана – 10%, ДНК-зонд, соответствующий 3′- концевой последовательности гена NTRK3, меченный родамином флуоресцеином оранжевого цвета, ДНК- зонд, соответствующий 5′-концевой последовательности гена NTRK3, меченный флуоресцеинизотиоцианатом зеленого цвета |
| Двухцветный ДНК-зонд для детекции точек разрыва гена 6q (ROS1) (6q22) (6q (ROS1) gene detection probe) | Деионизованный формамид – 50%, цитратный буфер, концентрат 2х (SSC - saline-sodium citrate), сульфат декстрана – 10%, ДНК-зонд, соответствующий 5′- концевой последовательности гена 6q, меченный родамином флуоресцеином оранжевого цвета, ДНК- зонд, соответствующий 3′-концевой последовательности гена 6q, меченный флуоресцеинизотиоцианатом зеленого цвета |
| Двухцветный ДНК-зонд для детекции точек разрыва гена ALK (2p23) (ALK gene fusion detection probe) | Деионизованный формамид – 50%, цитратный буфер, концентрат 2х (SSC - saline-sodium citrate), сульфат декстрана – 10%, ДНК-зонд, соответствующий 5′- концевой последовательности гена ALK, меченный родамином флуоресцеином оранжевого цвета, ДНК- зонд, соответствующий 3′-концевой последовательности гена ALK, меченный флуоресцеинизотиоцианатом зеленого цвета |
| Двухцветный ДНК-зонд для детекции точек разрыва гена RET (10q11) (RET gene break apart detection probe) | Деионизованный формамид – 50%, цитратный буфер, концентрат 2х (SSC - saline-sodium citrate), сульфат декстрана – 10%, ДНК-зонд, соответствующий 5′- концевой последовательности гена RET, меченный родамином флуоресцеином оранжевого цвета, ДНК- зонд, соответствующий 3′-концевой последовательности гена RET, меченный флуоресцеинизотиоцианатом зеленого цвета |
Каждый ДНК-зонд рассчитан на 10 исследований.
В составе медицинского изделия отсутствуют материалы, вступающие в
непосредственный или опосредованный контакт с организмом пациента
(телом человека).
В составе компонентов медицинского изделия отсутствуют
лекарственные средства.
Компоненты изделия не являются стерильными и не требуют
стерилизации.
5
6. Упаковка
− Первичная упаковка
Первичная упаковка ДНК-зондов представляет собой прозрачную
бесцветную микропробирку вместимостью 200 мкл с навинчивающейся
прозрачной бесцветной крышкой.
− Вторичная упаковка
Вторичная упаковка представляет собой пластиковый закрывающийся
контейнер серого цвета с пятью ячейками.
− Потребительская упаковка
Потребительская упаковка представляет собой прозрачный
полиэтиленовый пакет с застежкой zip-lock.
Вторичные упаковки помещают в потребительскую упаковку в
количестве, соответствующем номеру модели. Количество вторичных
упаковок внутри потребительской:
Модель № 1 – 2 шт.;
Модели №№ 2-7 – 1 шт.
Инструкция по применению должна быть вложена в потребительскую
упаковку.
7. Описание медицинского изделия, научная обоснованность
аналита
Гены NTRK1, NTRK2, NTRK3 кодируют членов семейства
нейротрофических тирозинкиназных рецепторов (NTKR). Эти киназы
представляют собой мембраносвязанные рецепторы, которые при связывании
с нейротрофином фосфорилируют сами себя и участников сигнального пути
MAPK. Наличие этих киназ приводит к дифференцировке клеток. Мутации в
гене NTRK1 связаны с врождённой нечувствительностью к боли, ангидрозом,
самоповреждающим поведением, когнитивными нарушениями и
немелкоклеточным раком легкого (НМРЛ). Мутации в гене NTRK2 связаны с
6
ожирением и немелкоклеточным раком легкого. Мутации в гене NTRK3 были
связаны с немелкоклеточным раком легкого. Были обнаружены
альтернативные варианты транскрипционного сплайсинга этих генов.
Ген ROS1 (рецепторная тирозинкиназа, ROS1) расположен в регионе
6q22 хромосомы 6 и кодирует рецепторную тирозинкиназу (RTK), которая
связана с ростом, пролиферацией, дифференцировкой и выживанием клеток.
Во время перестройки гена ROS1 внеклеточная область теряется, а
трансмембранная область и внутриклеточная область тирозинкиназы
сохраняются. Место перестройки в основном находится в экзонах 32-36 гена
ROS1. При немелкоклеточном раке легкого происходит слияние гена ROS1 в
основном с SLC34A2, CD74, EZR и SDC4 и непрерывная активация области
тирозинкиназы ROS1 и нижележащего сигнального пути, что приводит к
возникновению и развитию опухоли.
Ген ALK расположен на хромосоме 2р23. В норме человеческий ALK
может быть транскрибирован для получения мРНК длиной 6222 п.о., которая
состоит из 29 экзонов, кодирующих 1620 аминокислотных
последовательностей и трансмембранный белок типа I массой 200 кда. Этот
белок является рецепторной тирозинкиназой (RTK) и относится к
суперсемейству инсулинов RTK. Было обнаружено, что многие типы слияния
генов ALK были обнаружены при немелкоклеточном раке легкого, что
доказало, что слияние генов ALK является сильным канцерогенным фактором.
Индивидуализированная молекулярная таргетная терапия, основанная
на рецепторе эпидермального фактора роста (EGFR) и киназе анапластической
лимфомы (ALK), стала актуальной темой исследований при
немелкоклеточном раке легкого. Многие клинические исследования доказали,
что ингибиторы ALK могут принести пользу пациентам с ALK-позитивным
НМРЛ. Поэтому определение статуса гена ALK у пациентов с НМРЛ имеет
большое клиническое значение.
7
Ген RET (протоонкоген Ret) кодирует трансмембранный рецептор,
относящийся к семейству тирозиновых протеинкиназ. Связывание лигандов,
таких как GDNF (нейротрофический фактор, вырабатываемый глиальными
клетками), и других родственных белков с кодируемым рецептором
стимулирует димеризацию рецептора и активацию нижестоящих сигнальных
путей, которые играют роль в дифференцировке, росте, миграции и
выживании клеток. Кодируемый рецептор важен для развития нервной
системы, а также органов и тканей, происходящих из нервного гребня. Этот
протоонкоген может подвергаться онкогенной активации как за счёт
цитогенетической перестройки, так и за счёт активирующих точечных
мутаций. Мутации в этом гене связаны с немелкоклеточным раком легкого.
Клиническая значимость хромосомных аберраций при
немелкоклеточном раке легкого
Диагноз НМРЛ основывается на данных анамнеза, осмотра, результатах
инструментальных методов обследования и патоморфологическом
заключении, установленном на основании морфологического исследования,
материал для которого может быть получен при биопсии или аспирате из
первичной опухоли или метастатического очага. Предпочтительна
гистологическая (допускается цитологическая) верификация диагноза.
Согласно клиническим рекомендациям МЗ РФ «Злокачественное
новообразование бронхов и легкого», ID 30_5; 2025 г., при выявлении
неплоскоклеточного (в том числе, диморфного) НМРЛ рекомендовано
проведение молекулярно-генетических и ИГХ исследований
(гистологический или цитологический материал) на наличие активирующих
мутаций и экспрессии PD-L1 (только ИГХ) в зависимости от стадии:
• при неоперабельной III стадии и IV стадии – «обязательный объем
тестирования» [транслокации ALK (молекулярно-генетическое исследование
транслокаций гена ALK), транслокации ROS1 (молекулярно-генетическое
исследование транслокаций гена ROS1); при отсутствии перечисленных
8
активирующих мутаций «возможный объем тестирования»
[транслокации RET (молекулярно-генетическое исследование мутаций в гене
RET в биопсийном (операционном) материале, молекулярно-генетическое
исследование мутаций в гене RET в крови), транслокации генов
семейства NTRK].
Слияния (перестройки) генов ALK, ROS1, NTRK1-3 и RET являются
важными онкогенными факторами в небольших группах НМРЛ. Для каждой
мишени доступно несколько ингибиторов тирозинкиназы (TKI). Кроме того,
слияния NRG1 являются потенциально перспективной мишенью при НМРЛ.
Онкогенные белки слияния приводят к конститутивной активации киназы и
могут повышать уровень белка гена слияния, что позволяет проводить
скрининг опухолей на наличие некоторых из этих слияний методом
иммуногистохимии (ИГХ). Положительный результат ИГХ на киназу
анапластической лимфомы (ALK) с использованием соответствующим
образом валидированного анализа может быть использован для назначения
ингибиторов ALK. Случаи, положительные по ИГХ на ROS1 или
нейротрофическую тирозин-рецепторную киназу (NTRK), должны быть
подтверждены молекулярным методом; это также может быть
предпочтительным методом для случаев с положительным результатом ИГХ
на ALK. Слияния генов можно обнаружить с помощью определения точек
разрыва методом FISH или мультиплексных ПЦР-анализов с обратной
транскрипцией, причем последний метод требует индивидуальной реакции
для каждого потенциального гена слияния, что усложняет данный подход.
ДНК-зонды предназначены для качественной детекции точек разрыва
при хромосомных аберрациях специфической нуклеотидной
последовательности генов NTRK1 в регионе 1q23 хромосомы 1, NTRK2 в
регионе 9q21 хромосомы 9, NTRK3 в регионе 15q25 хромосомы 15, 6q (ROS1)
в регионе 6q22 хромосомы 6, ALK в регионе 2p23 хромосомы 2, RET в регионе
10q11 хромосомы 10, ассоциированных с немелкоклеточным раком легкого, в
9
образцах тканей человека, фиксированных формалином и залитых в парафин
блоках (FFPE), методом флуоресцентной гибридизации in situ (FISH) с целью
диагностики немелкоклеточного рака легкого.
8. Принцип метода
Принцип действия изделия основан на методе флуоресцентной
гибридизации in situ (FISH - fluorescence in situ hybridization).
ДНК-зонд представляет собой нуклеотидную последовательность
ограниченного размера, комплементарную определенному участку ДНК и
меченную флуоресцеином. Связываясь с соответствующими
последовательностями ДНК в исследуемом образце, ДНК-зонд позволяет
выявить наличие этих последовательностей. Результаты исследования
наблюдают и регистрируют при помощи флуоресцентного микроскопа.
В составе каждого ДНК-зонда есть два дифференциально меченных
локус-специфичных ДНК-зонда, один из которых соответствует 5′-концевой
последовательности целевого гена и последовательности смежных генов,
другой соответствует - 3′-концевой последовательности целевого гена и
нижележащей последовательности соседнего гена. Два ДНК-зонда
предназначены для распознавания последовательностей по обе стороны от
точки разрыва гена.
При отсутствии перестройки гена под флуоресцентным микроскопом
отображаются слитые зеленый и оранжевый сигналы. Сигналы либо
перекрываются, либо расположены близко друг к другу. Когда происходит
хромосомная аберрация с образованием точки разрыва гена, зеленый и
оранжевый сигналы "прерываются" и проявляются как сигналы,
расположенные далеко друг от друга.
10
9. Ограничения метода
− Результаты исследования не являются основанием для постановки
диагноза и должны интерпретироваться в свете клинической картины
пациента совместно с результатами других исследований.
− Процесс забора биоматериала у пациента, его обработка, хранение
и транспортирование могут повлиять на результаты анализа и должны
осуществляться специально обученным медицинским персоналом.
− Эффективность изделия была исследована только при
использовании образцов тканей человека, фиксированных формалином и
залитых в парафин блоках (FFPE).
10. Меры предосторожности
− Потенциальный риск применения изделия - класс 2б (согласно
Приказу Министерства здравоохранения РФ №4н от 06.06.2012 г.).
− Для диагностики in vitro.
− Для однократного применения.
− В состав ДНК-зондов входит формамид в концентрации 50%.
Краткая характеристика опасности:
• H351 Предполагается, что данное вещество вызывает
онкологические заболевания;
• H360D Может отрицательно повлиять на плод;
• H373 Может поражать органы (кровь) в результате многократного
или продолжительного воздействия при проглатывании;
Предупреждения:
• P202 Перед использованием ознакомиться с инструкциями по
технике безопасности;
• P260 Не вдыхать газ/пары/пыль/аэрозоли;
• P280 Надевайте защитные перчатки/ защитную одежду/ защитные
очки/ щиток для защиты лица;
11
• P308 + P313 При подозрении на возможность воздействия
обратиться за медицинской помощью;
• P405 Хранить в недоступном для посторонних месте;
• P501 Удалить содержимое/ контейнер на утвержденных станциях
утилизации отходов.
• При попадании в глаза: Промыть глаза большим количеством
воды не менее 15 минут. Снять контактные линзы, если это легко сделать.
Проконсультироваться с врачом.
• При попадании на кожу: Промыть большим количеством воды
не менее 15 минут. Снять загрязненную одежду, проконсультироваться с
врачом.
• При проглатывании: Немедленно выпить по меньшей мере 2
стакана воды. Обратиться к врачу.
• При вдыхании: Обеспечить приток свежего воздуха и
проконсультироваться с врачом. В случае потери сознания, положить
пациента на бок в стабильном положении для транспортировки.
− Работу с ДНК-зондами, ксилолом и флуоресцентным красителем
DAPI проводить в вытяжном шкафу по причине их токсичности и
канцерогенности.
− При возникновении сложностей в подсчете гибридизационных
сигналов в клинических образцах, и недостаточном количестве образца для
проведения повторного исследования, результат признается невалидным.
− Соблюдайте обычные меры предосторожности, необходимые для
обращения со всеми лабораторными реагентами.
− При работе с изделием и клиническими образцами надевайте
защитную одежду и одноразовые перчатки. После проведения процедуры
анализа тщательно вымойте руки.
12
11. Работа с изделием
− Для получения достоверных результатов необходимо строго
следовать инструкции по применению.
− Изделие не следует использовать по истечении указанного срока
годности.
− Изделие готово к использованию.
− Результаты анализа должны интерпретироваться специалистом,
различающим желтый, оранжевый и зеленый цвета.
12. Стабильность, условия хранения, использования и
транспортировки
Условия хранения
Изделие должно храниться в упаковке изготовителя при температуре от
-25 до -15 °С, срок годности – 12 месяцев. Допускается 10 циклов
замораживания-оттаивания.
После вскрытия упаковки допускается хранение в темном месте в
закрытой упаковке при температуре от +2 до +8 °C в течение 24 часов, при
температуре от -25 до -15 °С до конца срока годности.
Хранение изделий должно осуществляться в морозильных и
холодильных камерах, обеспечивающих регламентированный температурный
режим с ежедневной регистрацией температуры. Изделия, хранившиеся с
нарушением регламентированного режима, применению не подлежат.
Стабильность
В невскрытом виде при температуре от -25 до -15 °С стабильность
изделия составляет 12 месяцев;
После вскрытия упаковки при температуре от +2 до +8 °C стабильность
изделия составляет 24 часа, при температуре от -25 до -15 °С – до конца срока
годности.
Условия использования
13
Перед использованием разморозить ДНК-зонды при комнатной
температуре в течение 5 минут, перемешать на вортексе и отцентрифугировать
пробирку в течение 2-3 секунд на настольной микроцентрифуге.
Условия транспортировки
Транспортирование изделий до конечного потребителя на всех этапах
может производиться всеми видами транспорта (воздушный, водный,
железнодорожный, автомобильный) в крытых транспортных средствах в
соответствии с правилами перевозок, действующими на транспорте данного
вида, при температуре от -25 до -15 °С с соблюдением холодовой цепи в
течение 10 дней. Не подвергать воздействию тепла, влаги, прямых солнечных
лучей. Транспортирование изделий должно осуществляться в
термоконтейнерах одноразового пользования с сухим льдом, или в
термоконтейнерах многократного применения с автоматически
поддерживаемой температурой или в авторефрижераторах с использованием
термоиндикаторов. Изделия, транспортированные с нарушением
температурного режима, применению не подлежат.
13. Оборудование и материалы, не входящие в комплект
поставки, но необходимые для проведения анализа
− Флуоресцентный микроскоп с необходимым набором фильтров
(оранжевый – 547/565 нм, зеленый – 495/517 нм, для флуоресцентного
красителя DAPI – 367/452 нм);
− Программируемый термостат для гибридизации;
− Вытяжной шкаф;
− Встряхиватель (вортекс);
− Настольная микроцентрифуга;
− Воздушный термостат;
− Водяная баня;
− Дозаторы пипеточные одноканальные;
− Наконечники для дозаторов;
14
− Пинцет;
− Таймер;
− Мерный цилиндр вместимостью 1000 мл;
− Холодильник с морозильной камерой;
− Ксилен;
− Абсолютный этиловый спирт;
− «Реагенты для иммуногистохимических исследований: 54. Набор
аксессуаров для ФИШ анализа для гистологии 20 тестов, Histology FISH
Accessory Kit 20 tests», ф. «Agilent Technologies Singapore (International) Pte.
Ltd.», Сингапур (РУ № ФСЗ 2007/00210);
− Флуоресцентный краситель DAPI (4’, 6-диамидин-2-фенилиндол);
− Резиновый клей для герметизации покровных стекол;
− Деионизированная вода;
− Предметные стекла, позитивно заряженные;
− Покровные стекла размером 22 x 22 мм;
− Образцы биоматериала с известным положительным и
отрицательным результатом детекции точек разрыва гена;
− Средства индивидуальной защиты: защитная одежда и
одноразовые перчатки.
В процессе клинических испытаний в РФ функциональные
характеристики изделия были валидированы с использованием следующих
изделий:
- «Микроскоп для лабораторных исследований Axio Imager со
штативами: А2, D2, Z2 с принадлежностями», ф. "Карл Цейсс Микроскопи
ГмбХ", Германия (РУ № ФСЗ 2009/04802).
- «Системы окраски иммуногистохимических и иммуноцитохимических
препаратов универсальные Autostainer, Autostainer Plus с принадлежностями:
15. Гибридайзер для предварительной обработки предметных стекол
(денатурации и гибридизации in situ) Hybridizer for slide pretreatment
15
(denaturation and hybridization in situ)», ф. "Дако Денмарк А/С", Дания (РУ №
ФСЗ 2007/00214).
- «Бокс абактериальной воздушной среды для защиты оператора при
работе с патогенными агентами и микроорганизмами, передающимися
воздушно-капельным путем БАВ-"Ламинар.-с." по ТУ 9443-001-51495026-
2002», ф. ЗАО "Ламинарные системы", Россия (РУ № ФСР 2010/07112).
- «Вортекс персональный V-1 plus», ф. SIA "Biosan", Латвия (РУ № ФСЗ
2011/09797).
- «Лабораторные микроцентрифуги MiniSpin с принадлежностями,
вариант исполнения: 2. MiniSpin Plus», ф. "Эппендорф Мануфэктуринг
Корпорэйшн", США (РУ № ФСЗ 2012/13316).
- «Суховоздушные шкафы-стерилизаторы BINDER с естественной
конвекцией: 1. Модель Е28 в составе», ф. "Биндер ГмбХ", Германия (РУ №
ФСЗ 2010/08132).
- «Баня-термостат водяная WB-4MS», ф. SIA "Biosan", Латвия (РУ №
ФСЗ 2011/09793).
- «Изделия медицинские полимерные для лабораторных исследований:
12. Наконечники для дозаторов в штативе и без штатива», ф. "Гуанчжоу Джэт
Био-Филтрэйшн Ко., Лтд.", Китай (РУ № ФСЗ 2012/12495).
- Флуоресцентный краситель DAPI (4', 6-диамидин-2-фенилиндол), ф.
"Креатек Биотехнолоджи Б.В.", Нидерланды (РУ № ФСЗ 2012/13468).
- «Изделия медицинские для лабораторных исследований стеклянные
«APEXLAB»: 16. Стекло предметное, покровное, часовое», ф. "Янченг Хуида
Медикл Инструментс Ко., Лтд.", Китай (РУ № ФСЗ 2011/10371).
- «Стекла для микроскопических исследований предметные и
покровные: 10. Покровные стекла - Micro Coverglass: 10.1 Покровные стекла
18х18мм-1.0 - 1818-1.0 Micro Coverglass, 10.3 Покровные стекла 22х22мм-1.0
- 2222-1.0 Micro Coverglass», ф. "Лейка Биосистемс Ричмонд, Инк.", США (РУ
№ РЗН 2013/1157).
16
- «Дозаторы пипеточные Eppendorf Research® Plus, вариант исполнения:
1. Дозаторы механические переменного объема одноканальные», ф.
"Эппендорф АГ", Германия (РУ № ФСЗ 2011/11028).
14. Требования к исследуемым образцам биоматериала
В исследование берутся образцы тканей человека (биопсийный или
операционный материал), фиксированные в формалине и залитые в парафин.
Первичная обработка материала должна проводиться в соответствии с
действующим законодательством.
Толщина парафинового среза может повлиять на результаты
эксперимента. Рекомендуемая толщина среза составляет от 3 до 5 мкм и
зависит от структуры исследуемой ткани.
Образцы тканей человека, фиксированных формалином и залитых в
парафин блоках (FFPE), можно хранить до исследования в течение 5 лет при
комнатной температуре.
15. Процедура анализа
1. Предварительная обработка исследуемых образцов биоматериала
1.1. Подготовка срезов: поместить на чистые предметные стекла
подготовленные срезы тканей человека, зафиксированные в нейтральном
формалине и залитые парафином.
1.2. Нагревание срезов: поместить срезы в термостат и инкубировать в
течение 2-16 часов при температуре +65 °C или в течение 30 минут при
температуре +80 °C для старых образцов.
1.3. Депарафинизация: погрузить срезы ткани в ксилол на 10 минут для
депарафинизации, повторить еще один раз, а затем немедленно погрузить в
абсолютный этиловый спирт на 5 минут.
1.4. Регидратация: при комнатной температуре погрузить срезы ткани в
абсолютный этиловый спирт, раствор этилового спирта 85%, раствор
этилового спирта 70% на 3 минуты (время пребывания в каждом растворе),
17
затем немедленно погрузить в деионизированную воду на 3 минуты. Достать
срезы и высушить их естественным путем.
1.5. Обработка водой: замочить срезы тканей в деионизированной воде
при температуре +100°C на водяной бане на 20-40 минут, затем высушить
естественным путем.
1.6. Этап предгибридизационной обработки: дальнейшую
подготовительную обработку проводить в соответствии с инструкцией
производителя на изделие «Реагенты для иммуногистохимических
исследований: 54. Набор аксессуаров для ФИШ анализа для гистологии 20
тестов, Histology FISH Accessory Kit 20 tests», ф. «Agilent Technologies
Singapore (International) Pte. Ltd.», Сингапур (РУ № ФСЗ 2007/00210).
1.7. Дегидратация: поместить срезы тканей в раствор этилового спирта
70%, раствор этилового спирта 85%, абсолютный этиловый спирт
(пребывание в каждом растворе- 2 минуты), а затем высушить естественным
путем.
2. Денатурация и гибридизация
Следующие операции следует выполнять в темной комнате.
2.1. Нанести 10 мкл ДНК-зонда в область гибридизации и немедленно
накрыть покровным стеклом; равномерно распределить ДНК-зонд под
предметным стеклом, избегая образования пузырьков, и заклеить края
резиновым клеем.
2.2. Поместить предметные стекла в программируемый термостат для
гибридизации, денатурировать при температуре +83-88 °C в течение 2-5 минут
(термостат должен быть предварительно нагрет до +83-88 °C) и
гибридизировать при температуре +42-45 °C в течение 2-16 часов.
3. Промывка
Следующие операции следует выполнять в темной комнате.
18
3.1. Достать предметные стекла из программируемого термостата для
гибридизации, снять резиновый клей с покровного стекла пинцетом, избегая
смещения покровного стекла.
3.2 Отмывку остатков негибридизовавшейся пробы проводить
отмывочными растворами согласно инструкции «Реагенты для
иммуногистохимических исследований: 54. Набор аксессуаров для ФИШ
анализа для гистологии 20 тестов, Histology FISH Accessory Kit 20 tests», ф.
«Agilent Technologies Singapore (International) Pte. Ltd.», Сингапур (РУ № ФСЗ
2007/00210).
4. Контрастное окрашивание
Следующие операции следует выполнять в темной комнате.
4.1. Нанести 10-15 мкл флуоресцентного красителя DAPI в область
гибридизации на предметном стекле, немедленно накрыть покровным стеклом
и поместить в темное место на 10-20 минут, а затем провести наблюдение при
помощи флуоресцентного микроскопа с использованием подходящих
фильтров.
4.2. Предметные стекла после гибридизации и окрашивания можно
хранить в темном месте при температуре от -25 до -15 °С в течение 6 месяцев.
5. Оценка результатов FISH
Поместить предметные стекла с окрашенными срезами под
флуоресцентный микроскоп и просмотреть сначала под объективом с малым
увеличением (10×) для определения области охвата клеток; затем под
объективом с увеличением (40×) для определения равномерности
распределения клеток; затем под объективом с увеличением (60×, 100×) для
определения однородности размера ядер, целостности ядерных границ,
однородности окрашивания красителем DAPI, отсутствия перекрытия ядер,
четкости сигнала клеток. Выбрать случайным образом не менее 50
опухолевых клеток и подсчитать оранжевые и зеленые сигналы в ядрах.
19
16. Учет и интерпретация результатов
Одиночный оранжевый сигнал
Одиночный зеленый сигнал
• Соседние или слитые оранжевый и зеленый сигналы, дающие
желтый сигнал
Подсчитать количество клеток с положительным и отрицательным
результатом. Рассчитать значение соотношения (соотношение = количество
клеток с положительным результатом/ общее количество подсчитанных
клеток × 100%).
Гибридизация считается успешной, когда более 75% ядер клеток в ткани
показывают двухцветный сигнал.
Неуспешная гибридизация может быть обусловлена следующими
причинами:
1. Недостаточное количество опухолевого субстрата.
2. Менее 75% ядер клеток в ткани показывают двухцветный сигнал.
3. Более 10% сигналов флуоресценции находится за пределами ядра.
4. Трудно различить структуру ядра.
5. Очень сильная аутофлуоресценция.
16.1. Учет и интерпретация результатов
16.1.1 Интерпретация сигнала в гене NTRK1 (1q23), NTRK2 (9q21),
NTRK3 (15q25), RET (10q11)
Отрицательный результат: 2 слитых оранжевых и зеленых
сигнала.
Положительный результат: 1 слитый набор оранжевого и
зеленого сигналов, 1 оранжевый сигнал, 1 зеленый сигнал.
16.1.2 Интерпретация сигнала в гене 6q (ROS1) (6q22)
20
| Проблема | Причина | Способ решения |
| Слишком сильный фон | Неполная отмывка после гибридизации | Строго следовать процедуре отмывки |
| | Неверный выбор фильтров для флуоресцентного микроскопа | Замена фильтров |
| | Неправильные условия гибридизации | Строго следовать процедуре проведения гибридизации |
Отрицательный результат: 2 слитых оранжевых и зеленых
сигнала.
Положительный результат: 1 слитый набор оранжевого и
зеленого сигналов, 1 оранжевый сигнал, 1 зеленый сигнал.
Положительный результат: 1 слитый набор оранжевого и
зеленого сигналов, 1 зеленый сигнал.
16.1.3 Интерпретация сигнала в гене ALK (2p23)
Отрицательный результат: 2 слитых оранжевых и зеленых
сигнала.
Отрицательный результат: сигналы накладываются друг на
друга, образуя желтый сигнал, либо находятся на расстоянии
менее двух диаметров сигнала друг от друга.
Отрицательный результат: 1 слитый набор оранжевого и
зеленого сигналов, 1 зеленый сигнал.
Положительный результат: >1 пары разделенных сигналов.
Положительный результат: 1 слитый набор оранжевого и
зеленого сигналов, 1 оранжевый сигнал, 1 зеленый сигнал.
Положительный результат: 1 слитый набор оранжевого и
зеленого сигналов, 1 оранжевый сигнал.
Положительный результат: 1 слитый набор оранжевого и
зеленого сигналов наряду с разделенными сигналами и 1
оранжевым сигналом.
16.1.4 Возможные проблемы и способы их решения
21
| | Неправильные условия отмывки | Строго следовать процедуре отмывки |
| | Неверная концентрация промывочного раствора | Строго следовать процедуре подготовки вспомогательных реагентов |
| | Неправильная процедура окрашивания | Строго следовать процедуре окрашивания |
| Слабое окрашивание | Краситель DAPI с истекшим сроком годности или неправильно хранившийся | Замена красителя |
| | Избыточное освещение | Регулировка освещения |
| Отсутствие сигнала или слабый сигнал | Неполная денатурация образца | Строго следовать процедуре денатурации |
| | Неперемешанный перед использованием ДНК- зонд | Перед использованием перемешать ДНК- зонд на вортексе и отцентрифугировать каждую пробирку в течение 2-3 секунд на настольной микроцентрифуге |
| | Реакционная смесь высыхает слишком быстро на предметном стекле | Строго следовать процедуре анализа |
| | Образование пузырьков под покровным стеклом во время гибридизации | Удалить пузырьки воздуха из-под покровного стекла аккуратным нажатием |
| | Неправильные условия гибридизации | Строго следовать процедуре проведения гибридизации |
| | Неправильные условия отмывки | Строго следовать процедуре отмывки |
| | Неправильное хранение ДНК-зонда или предметного стекла с образцом | Соблюдать рекомендованные условия хранения ДНК-зонда и предметного стекла с образцом |
| | Неправильное использование красителя DAPI | Строго следовать процедуре окрашивания |
| | Неверный выбор фильтров для флуоресцентного микроскопа | Замена фильтров |
17. Контроль качества
В качестве контроля рекомендуется использовать образцы биоматериала
с известным положительным и отрицательным результатом детекции точек
разрыва гена. Если контрольные образцы не дают ожидаемый результат,
результаты исследования образцов пациентов должны считаться
недействительными. В данном случае исследование необходимо повторить.
22
При повторном несоответствии необходимо использовать ДНК-зонд другой
серии.
18. Утилизация
Утилизация изделия должна производиться в соответствии с нормами и
правилами, действующими на момент утилизации.
Отходы, образующиеся в результате использования изделия, а также
неиспользованные изделия, потерявшие свои потребительские свойства, или
изделия с истекшим сроком годности подлежат утилизации или уничтожению
в соответствии с СанПиН 2.1.3684-21 как отходы класса Б (эпидемиологически
опасные отходы).
Упаковочные материалы и сопроводительная документация подлежат
утилизации в соответствии с СанПиН 2.1.3684-21 как отходы класса А
(эпидемиологически безопасные отходы).
19. Функциональные характеристики
20.1. Аналитическая чувствительность при исследовании
стандартных образцов тканей человека с известным положительным
результатом детекции точек разрыва генов NTRK1 (1q23), NTRK2 (9q21),
NTRK3 (15q25), 6q (ROS1) (6q22), ALK (2p23), RET (10q11) составляет 100 %.
20.2. Аналитическая специфичность при исследовании стандартных
образцов тканей человека с известным отрицательным результатом детекции
точек разрыва генов NTRK1 (1q23), NTRK2 (9q21), NTRK3 (15q25), 6q (ROS1)
(6q22), ALK (2p23), RET (10q11) составляет 100 %.
20.3. Точность (прецизионность)
Внутрисерийная, межсерийная и межлабораторная воспроизводимость
результатов исследования (согласованность результатов анализа) при
исследовании стандартных образцов тканей человека с известным
положительным и отрицательным результатом детекции точек разрыва генов
23
| Диагноз пациента | Количество пациентов | Диагностическая чувствительность в отношении гена … |
| Немелкоклеточный рак легкого | 25 | NTRK1 (1q23): 100% (ДИ95%: 86,28 – 100%) |
| Немелкоклеточный рак легкого | 25 | NTRK2 (9q21): 100% (ДИ95%: 86,28 – 100%) |
| Немелкоклеточный рак легкого | 25 | NTRK3 (15q25): 100% (ДИ95%: 86,28 – 100%) |
| Немелкоклеточный рак легкого | 25 | 6q (ROS1) (6q22): 100% (ДИ95%: 86,28 – 100%) |
| Немелкоклеточный рак легкого | 25 | ALK (2p23): 100% (ДИ95%: 86,28 – 100%) |
| Немелкоклеточный рак легкого | 25 | RET (10q11): 100% (ДИ95%: 86,28 – 100%) |
NTRK1 (1q23), NTRK2 (9q21), NTRK3 (15q25), 6q (ROS1) (6q22), ALK (2p23),
RET (10q11) составляют 100%.
20.4. Диагностическая чувствительность при исследовании образцов
тканей пациентов с подтвержденным злокачественным новообразованием
составляет:
*ДИ95%: доверительный интервал с достоверностью 95%.
По результатам клинических испытаний в РФ было установлено:
24
| Диагноз пациента | Количество пациентов | Диагностическая чувствительность в отношении гена … |
| Немелкоклеточный рак легкого | 5 | NTRK1 (1q23): 100% (CI : 47,82- 0,05 100%) |
| Немелкоклеточный рак легкого | 5 | NTRK2 (9q21): 100% (CI :47,82- 0,05 100%) |
| Немелкоклеточный рак легкого | 5 | NTRK3 (15q25): 100% (CI : 47,82- 0,05 100%) |
| Немелкоклеточный рак легкого | 5 | 6q (ROS1) (6q22): 100% (CI :47,82- 0,05 100%) |
| Немелкоклеточный рак легкого | 15 | ALK (2p23): 100% (CI : 86,28-100%) 0,05 |
| Немелкоклеточный рак легкого | 5 | RET (10q11): 100% (CI :47,82-100%) 0,05 |
| Общая диагностическая чувствительность: | | 100% (CI : 91,19 -100%) 0,05 |
| Диагноз пациента | Количество пациентов | Диагностическая специфичность в отношении гена … |
| Не имеет хромосомных аберраций в данных генах | 25 | NTRK1 (1q23): 100% (ДИ95%: 86,28 – 100%) |
| | | NTRK2 (9q21): 100% (ДИ95%: 86,28 – 100%) |
| | | NTRK3 (15q25): 100% (ДИ95%: 86,28 – 100%) |
| | | 6q (ROS1) (6q22): 100% (ДИ95%: 86,28 – 100%) |
| | | ALK (2p23): 100% (ДИ95%: 86,28 – 100%) |
| | | RET (10q11): 100% (ДИ95%: 86,28 – 100%) |
| Диагноз пациента | Количество пациентов | Диагностическая специфичность в отношении гена … |
| Не имеет хромосомных аберраций в данных генах | 25 | NTRK1 (1q23): 100% (CI : 86,28-100%) 0,05 |
| | | NTRK2 (9q21): 100% (CI : 86,28-100%) 0,05 |
| | | NTRK3 (15q25): 100% (CI : 86,28-100%) 0,05 |
| | | 6q (ROS1) (6q22): 100% (CI : 86,28-100%) 0,05 |
| | | ALK (2p23): 100% (CI : 86,28-100%) 0,05 |
| | | RET (10q11): 100% (CI : 86,28-100%) 0,05 |
*CI : доверительный интервал с достоверностью 95%.
0,05
20.5. Диагностическая специфичность при исследовании образцов
нормальных тканей составляет:
*ДИ95%: доверительный интервал с достоверностью 95%.
По результатам клинических испытаний в РФ было установлено:
*CI : доверительный интервал с достоверностью 95%.
0,05
20. Гарантийные обязательства
Предприятие-изготовитель гарантирует стабильность и соответствие
изделия требованиям Технической документации при соблюдении условий
25
| Международный стандарт | Национальный стандарт |
| ISO 13485:2016 Medical devices - Quality management systems -Requirements for regulatory purposes | ГОСТ ISO 13485-2017 Изделия медицинские. Системы менеджмента качества. Требования для целей регулирования |
| EN ISO 14971:2019 Medical devices. Application of risk management to medical devices | ГОСТ ISO 14971-2021 Изделия медицинские. Применение менеджмента риска к медицинским изделиям |
| EN ISO 18113-1:2022 In vitro diagnostic medical devices — Information supplied by | ГОСТ Р ИСО 18113-1-2024 Медицинские изделия для диагностики in vitro. |
транспортирования, хранения и использования в течение всего срока
годности.
Срок годности изделия – 12 месяцев.
Изделие не подлежит ремонту и техническому обслуживанию.
Рекламации следует направлять уполномоченному представителю
производителя: Общество с ограниченной ответственностью «Вирхов
Гистология» (ООО «Вирхов»). Адрес: 108834, г. Москва, вн. тер. г.
муниципальный округ коммунарка, п. Коммунарка, ул. Потаповская Роща, д.
12, к. 2, помещ. 4П. Тел.: +7 (916) 468-54-71. Электронная почта:
info@вирхов.рф
21. Сведения о производителе медицинского изделия
Wuhan HealthCare Biotechnology Co., Ltd. (Ухань ХелфКеа
Байатекнолоджи., Лтд.). Адрес: Building #8 Optics Valley Precision Medicine
Industry Раrk Phase 1 #9 Gaokeyuan 3rd. Road East Lake High-Tech Zоnе 430206
Wuhan City. Hubei Province. PEOPLE'S REPUBLIC OF CHINA (Здание № 8,
Оптикс Вэли Присижн Медсин Индастри Парк Фейз 1, № 9 Гаокеюань 3 Роуд,
Зона высоких технологий Ист Лейк, 430206 город Ухань, провинция Хубэй,
КИТАЙСКАЯ НАРОДНАЯ РЕСПУБЛИКА). Тел.: +86(027)8757 0662.
Электронная почта: cs@healthcare-bio.com
Адрес места производства совпадает с адресом производителя.
22. Перечень применяемых стандартов
26
| the manufacturer (labelling) — Part 1: Terms, definitions, and general requirements | Информация, предоставляемая изготовителем (маркировка) |
| ISO 18113-2:2022 In vitro diagnostic medical devices — Information supplied by the manufacturer (labelling) — Part 2: In vitro diagnostic reagents for professional use | ГОСТ Р ИСО 18113-2-2024 Медицинские изделия для диагностики ин витро. Информация, предоставляемая изготовителем (маркировка). Часть 2. Реагенты для диагностики ин витро для профессионального применения |
| EN ISO 15223-1:2021 Medical devices. Symbols to be used with information to be supplied by the manufacturer. Part 1: General requirements | ГОСТ Р ИСО 15223-1-2023 Изделия медицинские. Символы, применяемые для передачи информации, предоставляемой изготовителем. Часть 1. Основные требования |
| EN ISO 23640:2015 In vitro diagnostic medical devices - Evaluation of stability of in vitro diagnostic reagents | ГОСТ Р ИСО 23640-2015 Изделия медицинские для диагностики in vitro. Оценка стабильности реагентов для диагностики in vitro |
| - | ГОСТ Р 51088-2013 Медицинские изделия для диагностики ин витро. Реагенты, наборы реагентов, тест-системы, контрольные материалы, питательные среды. Требования к изделиям и поддерживающей документации |
| - | ГОСТ Р 51352-2013 Медицинские изделия для диагностики ин витро. Методы испытаний |
| EN 13612:2002 Performance evaluation of in vitro diagnostic medical devices | ГОСТ Р ЕН 13612-2010 Оценка функциональных характеристик медицинских изделий для диагностики in vitro. |
23. Расшифровка графических символов и надписей
Символ / надпись Расшифровка
Медицинское изделие для диагностики in vitro
Изготовитель
Температурный диапазон (от -25 до -15°С)
Дата изготовления
Использовать до
Номер по каталогу
27
Код партии (номер серии)
Запрет на повторное применение
Обратитесь к инструкции по применению или к
инструкции по применению в электронном виде
Не допускать воздействия солнечного света
Не допускать воздействия влаги
Верх
Хрупкое, обращаться осторожно
Пиктограмма опасности СГС «08: Опасность для
здоровья»
Осторожно
Логотип изготовителя
24. Литературные ссылки
1) Weier HU, et al. Rapid physical mapping of the human trk
protooncogene (NTRK1) to human chromosome 1q21-q22 by P1 clone selection,
fluorescence in situ hybridization (FISH), and computer-assisted microscopy.
Genomics. 1995 Mar 20;26(2):390-3.
2) Nakagawara, A, et al. Cloning and chromosomal localization of the
human TRK-B tyrosine kinase receptor gene (NTRK2). Genomics 1995 Jan
20;25(2):538-46.
3) J H von der Thüsen, et al. ETV6-NTRK3 translocation-associated low-
grade mucinous bronchial adenocarcinoma: A novel bronchial salivary gland-type
non-small cell lung cancer subtype. Lung Cancer. 2021 Jun:156:72-75.
28