Набор реагентов для выявления и количественного определения ДНК Neisseria meningitidis, Haemophilus influenzae и Streptococcus pneumoniae методом полимеразной цепной реакции с детекцией в режиме «реального времени» «АмплиПрайм® N. meningitidis / H. influenzae / S. pneumoniae» по ТУ 20.59.52-273-09286667-2025 — инструкция и характеристики
Открытые закупки, где изделие проходит ТЗ
Сейчас 1 закупка, где это изделие полностью проходит по требованиям хотя бы в одной позиции.
| Закупка | Окончание подачи | Нач. цена |
|---|---|---|
| Поставка наборов реагентов для амплификатора ПЦР
№ 0387200009126004750 · БЮДЖЕТНОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ ХАНТЫ-МАНСИЙСКОГО АВТОНОМНОГО ОКРУГА - ЮГРЫ "УРАЙСКАЯ ГОРОДСКАЯ КЛИНИЧЕСКАЯ БОЛЬНИЦА" · Ханты-Мансийский автономный округ — Югра |
12.11.2026 | 2 002 316 ₽ |
Построчная сверка ТЗ с характеристиками этого изделия и все закупки под ваши товары — в кабинете, 7 дней бесплатно.
Попробовать бесплатно
Текст инструкции: технические характеристики
| | АмплиПрайм® | | meningitidis | / H. influenzae | | ИНСТРУК | ЦИЯ ПО ПРИМ | | ООО «НекстБио», Россия, 1 | 11394, | | г. Москва, ул. Полимерная, | д. 8, стр. 2, | | тел. (495) 620-08-73, е-mail: | info@nextbio.ru | Набор реагентов для выявления и количественного определения ДНК Neisseria meningitidis, Haemophilus influenzae и Streptococcus pneumoniae методом полимеразной цепной реакции с детекцией в режиме «реального времени» «АмплиПрайм® N. meningitidis / H. influenzae / S. pneumoniae» по ТУ 20.59.52-273-09286667-2025 N. / S. pneumoniae МЕНЕНИЮ | СП | ИСОК | СОКРА | ЩЕНИЙ И ОБОЗНАЧЕНИЙ .................................................................................................... | .. 3 | | НА | ИМЕ | НОВАНИ | Е ИЗДЕЛИЯ ........................................................................................................................... | .. 3 | | ВВ | ЕДЕН | ИЕ ........ | ................................................................................................................................................ | .. 5 | | 1. | НА | ЗНАЧЕН | ИЕ........................................................................................................................................... | .. 6 | | 2. | ХА | РАКТЕР | ИСТИКИ НАБОРА.................................................................................................................... | .. 6 | | | 2.1. | Формы | выпуска и состав набора ...................................................................................................... | .. 6 | | | 2.2. | Принци | п метода ................................................................................................................................ | .. 8 | | | 2.3. | Просле | живаемость значений положительного контрольного образца КО N.men/H.inf/S.pne . | .. 9 | | | 2.4. | Техниче | ское обслуживание и ремонт ............................................................................................. | .. 9 | | 3. | КО | НТРОЛЬ | КАЧЕСТВА ............................................................................................................................. | 10 | | | 3.1. | Внутрен | ний контроль качества ........................................................................................................ | 10 | | 4. | ОГ | РАНИЧЕ | НИЯ МЕТОДИКИ ИССЛЕДОВАНИЯ ...................................................................................... | 11 | | 5. | М | ЕРЫ ПРЕ | ДОСТОРОЖНОСТИ И ПРЕДУПРЕЖДЕНИЯ ........................................................................... | 12 | | 6. | ДО | ПОЛНИ | ТЕЛЬНОЕ ОБОРУДОВАНИЕ И МАТЕРИАЛЫ ........................................................................ | 13 | | | 6.1. | Взятие | исследуемого материала ..................................................................................................... | 13 | | | 6.2. | Предва | рительная подготовка исследуемого материала ............................................................... | 14 | | | 6.3. | Экстрак | ция ДНК из исследуемых образцов .................................................................................... | 14 | | | 6.4. | Амплиф | икация, детекция продуктов амплификации, анализ и интерпретация результатов ... | 15 | | 7. | ИС | СЛЕДУЕ | МЫЙ МАТЕРИАЛ .................................................................................................................. | 17 | | | 7.1. | Цельна | я кровь .................................................................................................................................... | 17 | | | 7.2. | Ликвор | ................................................................................................................................................ | 17 | | | 7.3. | Мазки с | о слизистой носоглотки ....................................................................................................... | 18 | | | 7.4. | Культур | ы микроорганизмов ............................................................................................................. | 18 | | 8. | ПР | ОВЕДЕН | ИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ ............................................................................................................. | 19 | | | 8.1. | Экстрак | ция ДНК из исследуемого материала ................................................................................. | 19 | | | 8.2. | Подгото | вка реагентов для амплификации ...................................................................................... | 19 | | | 8.3. | Внесени | е проб ДНК, проведение амплификации и детекции ...................................................... | 20 | | | 8.4. | Анализ | и вычисление результатов ................................................................................................... | 21 | | | 8.5. | Интерп | ретация результатов ............................................................................................................. | 22 | | | 8.6. | Возмож | ные ошибки и рекомендации по их решению .................................................................. | 24 | | | 8.7. | Диагнос | тическое значение полученного результата ..................................................................... | 24 | | 9. | ФУ | НКЦИО | НАЛЬНЫЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ НАБОРА................................................................................. | 25 | | | 9.1. | Предел | обнаружения ........................................................................................................................ | 25 | | | 9.2. | Линейн | ый диапазон измерения и предел измерения .................................................................. | 26 | | | 9.3. | Аналити | ческая специфичность ......................................................................................................... | 26 | | | 9.4. | Правил | ьность измерения ................................................................................................................. | 27 | | | 9.5. | Воспро | изводимость и повторяемость измерения ......................................................................... | 28 | | | 9.6. | Диагнос | тическая специфичность и диагностическая чувствительность ...................................... | 28 | | | 9.7. | Оценка | влияния интерферирующих веществ ................................................................................. | 29 | | 10. | | УСЛОВИ | Я ХРАНЕНИЯ, ТРАНСПОРТИРОВАНИЯ И ПРИМЕНЕНИЯ НАБОРА ..................................... | 31 | | | 10.1. | Срок го | дности .................................................................................................................................... | 31 | | | 10.2. | Транспо | ртирование ........................................................................................................................... | 31 | | | 10.3. | Хранен | ие ............................................................................................................................................ | 31 | | 11. | | ГАРАНТ | ИИ ПРОИЗВОДИТЕЛЯ ............................................................................................................ | 31 | | 12. | | СИМВО | ЛЫ, ИСПОЛЬЗУЕМЫЕ В ДОКУМЕНТАЦИИ ПРОИЗВОДИТЕЛЯ ............................................ | 32 | | 13. | | ПЕРЕЧЕ | НЬ ПРИМЕНЯЕМОЙ НОРМАТИВНОЙ ДОКУМЕНТАЦИИ ..................................................... | 33 | | Вер | сия 1 | 3.04.26- | 2 | 2 | ОГЛАВЛЕНИЕ СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ И ОБОЗНАЧЕНИЙ Ct Cycle threshold (пороговый цикл) ВБМ внебольничный бактериальный менингит ВКО внутренний контрольный образец ВОЗ Всемирная организация здравоохранения ГБМ гнойный бактериальный менингит ГЭ геномный эквивалент ГЭБ гематоэнцефалический барьер ДНК дезоксирибонуклеиновая кислота ДНКаза дезоксирибонуклеаза дНТФ дезоксирибонуклеотидтрифосфаты ЕРУЛ Единый реестр учета лицензий KО положительный контрольный образец ПЦР К- отрицательный контрольный образец ПЦР ОКО отрицательный контрольный образец экстракции ПЦР полимеразная цепная реакция РУ регистрационное удостоверение ТУ технические условия УДГ урацил-ДНК-гликозилаза ЭДТА этилендиаминтетрауксусная кислота НАИМЕНОВАНИЕ ИЗДЕЛИЯ Набор реагентов для выявления и количественного определения ДНК Neisseria meningitidis, Haemophilus influenzae и Streptococcus pneumoniae методом полимеразной цепной реакции с детекцией в режиме «реального времени» «АмплиПрайм® N. meningitidis / H. influenzae / S. pneumoniae» по ТУ 20.59.52-273-09286667-2025, в вариантах исполнения: Форма выпуска 1: Состав: 1) ПЦР-смесь N.men/H.inf/S.pne – 0,01 мл × 100 пробирок, 2) ПЦР-буфер-K – 1,20 мл × 1 пробирка, 3) КО N.men/H.inf/S.pne – 0,26 мл × 1 пробирка, 4) ВКО-FL – 1,10 мл × 1 пробирка, 5) ОКО – 1,10 мл × 1 пробирка, 6) К- – 0,26 мл × 1 пробирка, 7) Инструкция по применению набора в электронном виде по адресу: nextbio.ru, 8) Краткое руководство по применению набора в бумажном виде, 9) Комплект вкладышей к набору в бумажном виде, 10) Паспорт качества в электронном виде по адресу: nextbio.ru. Версия 13.04.26-2 3 Форма выпуска 2: Состав: 1) ПЦР-смесь N.men/H.inf/S.pne – 1,20 мл × 1 пробирка, 2) ПЦР-буфер-H – 0,65 мл × 1 пробирка, 3) КО N.men/H.inf/S.pne – 0,26 мл × 1 пробирка, 4) ВКО-FL – 1,10 мл × 1 пробирка, 5) ОКО – 1,10 мл × 1 пробирка, 6) К- – 0,26 мл × 1 пробирка, 7) Инструкция по применению набора в электронном виде по адресу: nextbio.ru, 8) Краткое руководство по применению набора в бумажном виде, 9) Комплект вкладышей к набору в бумажном виде, 10) Паспорт качества в электронном виде по адресу: nextbio.ru. Форма выпуска 3: Состав: 1) ПЦР-смесь N.men/H.inf/S.pne – 0,01 мл × 100 пробирок (12,5 стрипов по 8 пробирок), 2) ПЦР-буфер-K – 1,20 мл × 1 пробирка, 3) КО N.men/H.inf/S.pne – 0,26 мл × 1 пробирка, 4) ВКО-FL – 1,10 мл × 1 пробирка, 5) ОКО – 1,10 мл × 1 пробирка, 6) К- – 0,26 мл × 1 пробирка, 7) Инструкция по применению набора в электронном виде по адресу: nextbio.ru, 8) Краткое руководство по применению набора в бумажном виде, 9) Комплект вкладышей к набору в бумажном виде, 10) Паспорт качества в электронном виде по адресу: nextbio.ru. Далее по тексту употребляется краткое наименование: Набор реагентов «АмплиПрайм® N. meningitidis / H. influenzae / S. pneumoniae», а также сокращение Набор реагентов. Версия 13.04.26-2 4 ВВЕДЕНИЕ Гнойный бактериальный менингит (ГБМ) - тяжёлое заболевание, вызываемое различными видами патогенных и условно патогенных бактерий, характеризующееся проникновением возбудителей через гематоэнцефалический барьер (ГЭБ) с развитием воспаления в менингеальной оболочке и возможным вовлечением в воспалительный процесс паренхимы и желудочков мозга. Главными этиологическими агентами ГБМ у детей и взрослых являются менингококк (Neisseria meningitidis), пневмококк (Streptococcus pneumoniae) и гемофильная палочка (Haemophilus influenzae) [1]. По данным Всемирной организации здравоохранения (ВОЗ) ежегодно в мире регистрируется около 1 млн случаев ГБМ, из которых 200 тыс. случаев заканчиваются летально. Различные исследования оценивали роль молекулярно-генетических методов (прежде всего, полимеразной цепной реакции – ПЦР) в этиологической диагностике ВБМ (внебольничный бактериальный менингит). Чувствительность ПЦР ликвора в них для S. pneumoniae составляла 79 – 100%, для N. meningitidis – 91 – 100%, для H. influenzae – 67 – 100%, а специфичность – 95 – 100% для всех микроорганизмов [3]. Ценность ПЦР ликвора и крови особенно значима для этиологической расшифровки диагноза у пациентов, начавших получать антибактериальную терапию до выполнения люмбальной пункции, так как и гемокультура, и бактериологический посев ликвора в этих случаях малорезультативны. Для получения положительного результата ПЦР не требуется сохранение жизнеспособного возбудителя в организме и биологическом образце, достаточно лишь наличие его генетического материала, что позволяет использовать молекулярно-генетические методы для уточнения этиологии процесса даже у лиц, получавших антибактериальную терапию в течение нескольких дней до выполнения люмбальной пункции [2]. Список литературы 1. Венгеров Ю.Я., Ченцов В.Б., Нагибина М.В. и др. Современные принципы диагностики и лечения больных бактериальными гнойными менингитами // Consilium Medicum. 2010, № 12(4). С. 54–67. 2. Соловей Н.В., Карпов И.А., Давыдов А.В. и др. Диагностика, терапия и профилактика внебольничного бактериального менингита: обзор практических рекомендаций Европейского общества по клинической микробиологии и инфекционным болезням и специализированных научных обществ Великобритании // Клиническая микробиология и антимикробная химиотерапия. 2017, №19(2) С. 102-115. 3. Brouwer M., Thwaites G., Tunkel A., van de Beek D. Dilemmas in the diagnosis of acute community- acquired bacterial meningitis // Lancet. 2012, №380(9854), P. 1684-1692. Версия 13.04.26-2 5 1. НАЗНАЧЕНИЕ 1.1. Набор реагентов «АмплиПрайм® N. meningitidis / H. influenzae / S. pneumoniae» предназначен для выявления и количественного определения ДНК основных возбудителей бактериального менингита (Neisseria meningitidis, Haemophilus influenzae и Streptococcus pneumoniae) в биологическом материале (цельная кровь, ликвор, мазки со слизистой носоглотки, культуры микроорганизмов) методом ПЦР с гибридизационно-флуоресцентной детекцией продуктов амплификации в режиме «реального времени». 1.2. Материалом для проведения ПЦР служат пробы ДНК, экстрагированные из исследуемого материала с помощью наборов реагентов, рекомендованных в разделе инструкции «Дополнительное оборудование и материалы». 1.3. Функциональное назначение: Набор реагентов предназначен для диагностики in vitro (выявление и количественное определение ДНК основных возбудителей бактериального менингита (Neisseria meningitidis, Haemophilus influenzae и Streptococcus pneumoniae) в биологическом материале человека). 1.4. Показания к проведению исследования: Набор предназначен для скринингового исследования биологического материала, полученного от лиц с подозрением на гнойный бактериальный менингит вне зависимости от формы и стадии заболевания или с соответствующим диагнозом, а также для мониторинга терапии. Результаты ПЦР-исследования учитываются в комплексной диагностике заболевания. 1.5. Применение набора реагентов не зависит от популяционных и демографических аспектов. 1.6. Потенциальные пользователи: Набор реагентов должен использоваться только квалифицированным, обученным (в области клинической лабораторной диагностики) персоналом (врачи клинической лаборатории и медицинские лабораторные техники, обученные молекулярным биологическим методикам). 2. ХАРАКТЕРИСТИКИ НАБОРА 2.1. Формы выпуска и состав набора Набор реагентов выпускается в трех формах (состав набора указан в таблице 1). Все формы предназначены для проведения амплификации ДНК c гибридизационно-флуоресцентной детекцией продуктов амплификации в режиме «реального времени». Для проведения полного исследования необходимо использовать наборы реагентов для экстракции ДНК, рекомендованные в разделе «Дополнительное оборудование и материалы». Форма выпуска 1 включает смесь для проведения ПЦР, раскапанную под прослойку парафина по пробиркам объемом 0,2 мл. Форма предназначена для применения совместно с амплификаторами планшетного и роторного типа и рассчитана на проведение исследования 100 образцов, включая контроли. Объем положительного контрольного образца рассчитан не более чем на 23 постановки. Форма выпуска 2 включает смесь для проведения ПЦР в пробирке объемом 1,5 или 2 мл для дозирования в любые типы пробирок. Форма предназначена для применения совместно с амплификаторами планшетного и роторного типа и рассчитана на проведение исследования 100 образцов, включая контроли. Форма может быть использована как для ручной раскапки, так и совместно с автоматическими станциями для приготовления и дозирования реакционных смесей. Объем положительного контрольного образца рассчитан не более чем на 23 постановки. Версия 13.04.26-2 6 | Компонент | | | Объем, | | Количество | Описание | | | | | | мл | | | | | | Форма выпуска 1 | | | | | | | | | ПЦР-смесь N.men/H.inf/S.pne | | 0,01 | | | 100 пробирок | Буферный раствор со специфическими праймерами, флуоресцентно-мечеными зондами и дНТФ. Прозрачная жидкость, раскапана в пробирки под парафин белого цвета. | | | ПЦР-буфер-К | | 1,20 | | | 1 пробирка | Буферный раствор с термостабильной ДНК- полимеразой Taq, сульфатом магния и урацил-ДНК- гликозилазой. Прозрачная жидкость красного цвета. | | | КО N.men/H.inf/S.pne | | 0,26 | | | 1 пробирка | Положительный контрольный образец. Прозрачная жидкость. | | | ВКО-FL | | 1,10 | | | 1 пробирка | Внутренний контрольный образец. Прозрачная жидкость. | | | ОКО | | 1,10 | | | 1 пробирка | Отрицательный контрольный образец. Прозрачная жидкость. | | | К- | | 0,26 | | | 1 пробирка | Отрицательный контрольный образец. Прозрачная жидкость. | | | Инструкция по применению набора | | - | | | - | в электронном виде1 по адресу: nextbio.ru | | | Краткое руководство по применению набора | | - | | | 1 шт. | в бумажном виде | | | Комплект вкладышей к набору | | - | | | 1 комплект | в бумажном виде | | | Паспорт качества | | - | | | - | в электронном виде по адресу: nextbio.ru | | | | Форма выпуска 2 | | | | | | | | ПЦР-смесь N.men/H.inf/S.pne | | 1,20 | | | 1 пробирка | Буферный раствор со специфическими праймерами, флуоресцентно-мечеными зондами и дНТФ. Прозрачная жидкость. | | | ПЦР-буфер-Н | | 0,65 | | | 1 пробирка | Буферный раствор с термостабильной ДНК- полимеразой Taq, сульфатом магния и урацил-ДНК- гликозилазой. Прозрачная жидкость. | | | КО N.men/H.inf/S.pne | | 0,26 | | | 1 пробирка | Положительный контрольный образец. Прозрачная жидкость. | | | ВКО-FL | | 1,10 | | | 1 пробирка | Внутренний контрольный образец. Прозрачная жидкость. | | | ОКО | | 1,10 | | | 1 пробирка | Отрицательный контрольный образец. Прозрачная жидкость. | | | К- | | 0,26 | | | 1 пробирка | Отрицательный контрольный образец. Прозрачная жидкость. | | | Инструкция по применению набора | | - | | | - | в электронном виде1 по адресу: nextbio.ru | | | Краткое руководство по применению набора | | - | | | 1 шт. | в бумажном виде | | | Комплект вкладышей к набору | | - | | | 1 комплект | в бумажном виде | | | Паспорт качества | | - | | | - | в электронном виде по адресу: nextbio.ru | | Форма выпуска 3 включает смесь для проведения ПЦР, раскапанную под прослойку парафина по стрипованным (12,5 стрипов по 8 пробирок) пробиркам объемом 0,2 мл. Форма предназначена для применения совместно с амплификаторами планшетного типа и рассчитана на проведение исследования 100 образцов, включая контроли. Объем положительного контрольного образца рассчитан не более чем на 23 постановки. Таблица 1 Состав набора 1 Печатная версия инструкции доступна по запросу по телефону (495) 620-08-73. Версия 13.04.26-2 7 | Компонент | | Объем, | | Количество | Описание | | | | мл | | | | | Форма выпуска 3 | | | | | | | ПЦР-смесь N.men/H.inf/S.pne | 0,01 | | | 100 пробирок (12,5 стрипов по 8 пробирок)2 | Буферный раствор со специфическими праймерами, флуоресцентно-мечеными зондами и дНТФ. Прозрачная жидкость, раскапана в стрипованные пробирки под парафин белого цвета. | | ПЦР-буфер-К | 1,20 | | | 1 пробирка | Буферный раствор с термостабильной ДНК- полимеразой Taq, сульфатом магния и урацил-ДНК- гликозилазой. Прозрачная жидкость красного цвета. | | КО N.men/H.inf/S.pne | 0,26 | | | 1 пробирка | Положительный контрольный образец. Прозрачная жидкость. | | ВКО-FL | 1,10 | | | 1 пробирка | Внутренний контрольный образец. Прозрачная жидкость. | | ОКО | 1,10 | | | 1 пробирка | Отрицательный контрольный образец. Прозрачная жидкость. | | К- | 0,26 | | | 1 пробирка | Отрицательный контрольный образец. Прозрачная жидкость. | | Инструкция по применению набора | - | | | - | в электронном виде3 по адресу: nextbio.ru | | Краткое руководство по применению набора | - | | | 1 шт. | в бумажном виде | | Комплект вкладышей к набору | - | | | 1 комплект | в бумажном виде | | Паспорт качества | - | | | - | в электронном виде по адресу: nextbio.ru | 2.2. Принцип метода Принцип тестирования основан на проведении одновременной реакции амплификации участков ДНК выявляемых микроорганизмов (Neisseria meningitidis, Haemophilus influenzae и Streptococcus pneumoniae) и искусственно синтезированной последовательности ДНК ВКО при помощи специфичных к этим участкам праймеров и фермента Taq-полимеразы. Детекция продуктов амплификации происходит путем измерения флуоресцентного сигнала в режиме «реального времени» за счет использования в составе реакционной смеси флуоресцентно-меченых олигонуклеотидов (зондов). Зонды гибридизуются с комплементарным участком амплифицируемой ДНК-мишени, в результате чего происходит нарастание интенсивности флуоресценции. Это позволяет регистрировать накопление специфического продукта амплификации путем измерения интенсивности флуоресцентного сигнала с помощью амплификатора с системой детекции флуоресцентного сигнала в режиме «реального времени». Количественное определение ДНК выявляемых микроорганизмов основывается на существовании линейной зависимости между исходной концентрацией мишени в исследуемом образце и циклом начала экспоненциального увеличения флуоресцентного сигнала (пороговый цикл, Cycle threshold, Ct). При проведении количественного теста, амплификация ДНК из исследуемых образцов проводится одновременно с положительным контрольным образцом КО N.men/H.inf/S.pne с известной концентрацией мишеней. Расчет концентрации мишеней в исследуемых образцах производится согласно формуле, представленной в разделе «Анализ и вычисление результатов» данной инструкции. Концентрация ДНК выявляемых микроорганизмов определяется в виде количества геномных эквивалентов клеток микроорганизмов в 1 мл биологического образца (ГЭ/мл). 2 Пробирки с голубым парафином не используются. 3 Печатная версия инструкции доступна по запросу по телефону (495) 620-08-73. Версия 13.04.26-2 8 | | Канал для | | FAM | R6G4 | ROX | Cy5 | | | флуорофора | | | | | | | ДНК-мишень | | | ДНК ВКО-FL (экзогенный ВКО) | ДНК Haemophilus influenzae | ДНК Streptococcus pneumoniae | ДНК Neisseria meningitidis | | Область амплификации | | | Искусственно синтезированная последовательность | siaT gene | Spn9802 | ctrA | Набор реагентов содержит систему защиты от контаминации ампликонами за счет применения фермента урацил-ДНК-гликозилазы (УДГ) и трифосфата дезоксиуридина. Фермент УДГ распознает и катализирует разрушение цепей ДНК, содержащих дезоксиуридин, но не ДНК, содержащей дезокситимидин. Дезоксиуридин отсутствует в природной ДНК, но всегда присутствует в ампликонах, поскольку трифосфат дезоксиуридина входит в состав смеси дНТФ в реагентах для амплификации. Дезоксиуридин делает контаминирующие ампликоны восприимчивыми к разрушению ферментом УДГ до начала амплификации ДНК-мишени, и, следовательно, они не могут быть в дальнейшем амплифицированы. Фермент УДГ термолабилен и инактивируется при нагревании выше 50 °C и поэтому не разрушает ампликоны мишени, нарабатываемые в процессе ПЦР. На этапе амплификации одновременно в одной пробирке проводятся 4 реакции – амплификация участков ДНК Neisseria meningitidis, Haemophilus influenzae и Streptococcus pneumoniae и последовательности ВКО-FL. Результаты амплификации регистрируются по четырем различным каналам флуоресцентной детекции (см. таблицу 2): Таблица 2 Соответствие ДНК-мишеней и каналов флуоресцентной детекции 2.3. Прослеживаемость значений положительного контрольного образца КО N.men/H.inf/S.pne Измерение значения концентрации положительного контрольного образца (КО N.men/H.inf/S.pne) производится относительно рабочих калибраторов производства ООО «НекстБио». Концентрацию рабочих калибраторов определяют стандартизированной методикой прямого измерения концентрации контрольных образцов на основе генно-модифицированных конструкций с использованием спектрофотометра. Коэффициент вариации измерений аттестованного значения концентрации КО N.men/H.inf/S.pne составляет не более 10% (с уровнем доверительной вероятности 95%). 2.4. Техническое обслуживание и ремонт Набор не подлежит техническому обслуживанию и ремонту. 4 Детекция сигнала для флуорофора R6G осуществляется по каналу детекции для аналогичных флуорофоров HEX, JOE, Yellow и VIC. Версия 13.04.26-2 9 3. КОНТРОЛЬ КАЧЕСТВА 3.1. Внутренний контроль качества 3.1.1. Контроль ингибирования Для контроля всех этапов исследования, эффективности экстракции ДНК и оценки влияния ингибиторов ПЦР предусмотрено использование экзогенного ВКО (ВКО-FL), который добавляется в каждый исследуемый и отрицательный контрольный образец (ОКО) на этапе экстракции. Результаты исследования ВКО-FL должны соответствовать заданным критериям валидности для положительных и отрицательных исследуемых образцов, указанным в разделе «Интерпретация результатов». Если в исследуемых образцах, отрицательных на наличие ДНК Neisseria meningitidis, Haemophilus influenzae и Streptococcus pneumoniae, не обнаружена ДНК ВКО-FL, то результаты исследования данных образцов считаются недостоверными, требуется повторить их анализ, начиная с этапа экстракции. В исследуемых образцах, в которых обнаружена ДНК выявляемых микроорганизмов, допускается наличие или отсутствие ДНК ВКО-FL. 3.1.2. Отрицательный и положительный контроли исследования Для оценки качества получаемых результатов каждая группа экстрагируемых образцов должна включать отрицательный контрольный образец экстракции (ОКО). Каждая индивидуальная постановка ПЦР должна включать отрицательный контрольный образец ПЦР (К-) и положительный контрольный образец ПЦР (КО N.men/H.inf/S.pne). Результаты для контрольных образцов должны соответствовать заданным критериям валидности, указанным в разделе «Интерпретация результатов». Отрицательный контрольный образец (ОКО) тестируется, начиная с этапа экстракции, и позволяет контролировать возможную контаминацию другими образцами или ампликонами. В пробирке с отрицательным контролем не должны детектироваться ДНК Neisseria meningitidis, Haemophilus influenzae и Streptococcus pneumoniae. В случае несоответствия результата, полученного для контрольного образца, заданным критериям валидности, положительные результаты для исследуемых образцов в постановке считаются недостоверными, необходимо предпринять меры по выявлению и ликвидации источника контаминации и повторить исследование всех исследуемых образцов, в которых обнаружены ДНК Neisseria meningitidis, Haemophilus influenzae и Streptococcus pneumoniae, и контроля, начиная с этапа экстракции. Отрицательный контрольный образец ПЦР (К-) тестируется, начиная с этапа ПЦР, и позволяет дополнительно контролировать возможную контаминацию другими образцами или ампликонами. В пробирке с отрицательным контрольным образцом не должны детектироваться ДНК Neisseria meningitidis, Haemophilus influenzae и Streptococcus pneumoniae и ВКО. В случае несоответствия результата, полученного для контрольного образца, заданным критериям валидности, положительные результаты для исследуемых образцов в постановке считаются недостоверными, необходимо предпринять меры по выявлению и ликвидации источника контаминации и повторить исследование всех образцов, в которых обнаружены ДНК Neisseria meningitidis, Haemophilus influenzae и Streptococcus pneumoniae и ВКО-FL, начиная с этапа ПЦР. В качестве контрольного образца ПЦР используется реагент КО N.men/H.inf/S.pne, входящий в состав набора. В случае несоответствия результатов для положительного контрольного образца заданным критериям валидности, результаты для всех образцов в постановке считаются недостоверными, требуется повторить исследование всех исследуемых и контрольных образцов, начиная с этапа ПЦР. Версия 13.04.26-2 10 3.1.3. Мониторинг лаборатории на наличие контаминации Рекомендуется раз в месяц проводить мониторинг лаборатории на контаминацию продуктами амплификации, исследуемыми образцами, положительными контрольными образцами. Оценка наличия/отсутствия контаминации проводится путем исследования смывов с различных объектов: пипеток, рабочих поверхностей лабораторной мебели, оборудования и поверхностей помещений. Взятие и исследование смывов следует проводить согласно процедуре, описанной в МУ 1.3.2569-09 «Организация работы лабораторий, использующих методы амплификации нуклеиновых кислот при работе с материалом, содержащим микроорганизмы I-IV групп патогенности». При обнаружении контаминации необходимо провести обработку лаборатории моющими и дезинфицирующими растворами согласно указаниям, описанным в МУ 1.3.2569-09. Также для предотвращения контаминации лаборатории или в качестве мер по деконтаминации рабочих зон рекомендуется использовать раствор для дезактивации нуклеиновых кислот, например, «Олигатор» производства ООО «НекстБио», Россия. 4. ОГРАНИЧЕНИЯ МЕТОДИКИ ИССЛЕДОВАНИЯ 4.1. Набор применяется только для диагностики in vitro. 4.2. Набор предназначен для работы только с исследуемым материалом, указанным в разделе «Назначение». Исследование других видов биологического материала может привести к получению недостоверных результатов. 4.3. Непригодными для исследования являются образцы цельной крови, взятые в пробирки с гепарином в качестве антикоагулянта и образцы цельной крови, содержащие кровяной сгусток или подвергшиеся заморозке. 4.4. Получение достоверных результатов обеспечивается выполнением требований, предъявляемых к взятию, транспортированию, подготовке и хранению образцов исследуемого материала (см. раздел «Исследуемый материал»). 4.5. С помощью набора возможно ПЦР-исследование только проб ДНК, экстрагированных из исследуемого материала совместно с внутренним контрольным образцом – ВКО-FL. Без использования ВКО-FL невозможно провести оценку валидности постановки. 4.6. Набор предназначен для профессионального применения в клинической лабораторной диагностике. Набор должен использоваться только квалифицированным, обученным (в области клинической лабораторной диагностики) персоналом (врачи клинической лаборатории и медицинские лабораторные техники, обученные молекулярным биологическим методикам). 4.7. При работе с набором следует использовать только амплификаторы с системой детекции флуоресцентного сигнала, характеристики которых удовлетворяют требованиям, указанным в разделе «Дополнительное оборудование и материалы». 4.8. Применять набор реагентов строго по назначению согласно инструкции по применению. 4.9. Не применять набор при нарушении целостности упаковки и с истекшим сроком годности. Версия 13.04.26-2 11 5. МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ И ПРЕДУПРЕЖДЕНИЯ 5.1. Работа должна проводиться в лаборатории, выполняющей молекулярно-биологические (ПЦР) исследования биологического материала на наличие возбудителей инфекционных болезней, с соблюдением СанПиН 3.3686-21 «Санитарно-эпидемиологические требования по профилактике инфекционных болезней», СанПиН 2.1.3684-21 «Санитарно-эпидемиологические требования к содержанию территорий городских и сельских поселений, к водным объектам, питьевой воде и питьевому водоснабжению, атмосферному воздуху, почвам, жилым помещениям, эксплуатации производственных, общественных помещений, организации и проведению санитарно- противоэпидемических (профилактических) мероприятий» и методических указаний МУ 1.3.2569-09 «Организация работы лабораторий, использующих методы амплификации нуклеиновых кислот при работе с материалом, содержащим микроорганизмы I–IV групп патогенности». 5.2. При работе необходимо всегда выполнять следующие требования: - Применять набор строго по назначению в соответствии с данной инструкцией. Отклонение от прописанных процедур и порядка действий может привести к получению недостоверных результатов анализа. - Лабораторный процесс должен быть однонаправленным. Анализ следует проводить в отдельных помещениях (зонах) в соответствии с МУ 1.3.2569-09. Не возвращать образцы, оборудование и реагенты в зону, в которой была проведена предыдущая стадия процесса. - Рассматривать исследуемые образцы как инфекционно-опасные, организовывать работу и хранение в соответствии с СанПиН 3.3686-21. - Убирать и дезинфицировать разлитые образцы или реагенты, используя дезинфицирующие средства в соответствии с СанПиН 3.3686-21. - Удалять неиспользованные реагенты, реагенты с истекшим сроком годности, а также использованные реагенты, упаковку5, биологический материал6, включая материалы, инструменты и предметы, загрязненные биологическим материалом, в соответствии с требованиями СанПиН 2.1.3684-21. ВНИМАНИЕ! При удалении отходов после амплификации (пробирок, содержащих продукты ПЦР) недопустимо открывание пробирок и разбрызгивание содержимого, поскольку это может привести к контаминации продуктами ПЦР лабораторной зоны, оборудования и реагентов. - Использовать и менять при каждой операции одноразовые наконечники для автоматических дозаторов с фильтром. Одноразовую пластиковую посуду (пробирки, наконечники) необходимо сбрасывать в специальный контейнер, содержащий дезинфицирующее средство, которое может быть использовано для обеззараживания медицинских отходов. - Набор предназначен для однократного применения для проведения ПЦР-исследования указанного количества образцов (см. раздел «Формы выпуска и состав набора»). - К работе с набором допускается только персонал, обученный методам молекулярной диагностики и правилам работы в клинико-диагностической лаборатории в установленном порядке (в соответствии с требованиями СанПиН 3.3686-21). 5 Неиспользованные реагенты, реагенты с истекшим сроком годности, использованные реагенты, упаковка относятся к классу опасности медицинских отходов Г. 6 Биологический материал, включая инструменты и предметы, загрязненные материалом, относятся к классу опасности медицинских отходов Б. Версия 13.04.26-2 12 - Не использовать набор, если нарушена внутренняя упаковка или внешний вид реагента не соответствует описанию. - Не использовать набор, если не соблюдались условия транспортирования и хранения согласно инструкции. - Не смешивать реагенты разных партий. - Не использовать набор по истечении срока годности. - Использовать одноразовые неопудренные перчатки, лабораторные халаты, защищать глаза во время работы с образцами и реагентами. Тщательно вымыть руки по окончании работы. Все операции проводятся только в перчатках для исключения контакта с организмом человека. - Не есть, не пить и не курить в процессе использования набора. Избегать контакта реагентов с кожей, глазами и слизистой оболочкой. Не глотать. - При контакте немедленно промыть пораженное место большим количеством воды и при плохом самочувствии обратиться за медицинской помощью. При попадании внутрь рвоту не вызывать, прополоскать рот водой, обратиться к врачу при плохом самочувствии. 5.3. При использовании по назначению и соблюдении вышеперечисленных мер предосторожности набор безопасен. Реагенты набора содержат натрия азид в концентрации не более 0,1% и соответственно не классифицируются как опасные и не требуют соблюдения специальных мер предосторожности, кроме указанных в данном разделе. 5.4. Специфические воздействия набора на организм человека: - Канцерогенный эффект отсутствует. - Мутагенное действие отсутствует. - Репродуктивная токсичность отсутствует. 6. ДОПОЛНИТЕЛЬНОЕ ОБОРУДОВАНИЕ И МАТЕРИАЛЫ 6.1. Взятие исследуемого материала 6.1.1. Транспортная среда для взятия, транспортировки и хранения мазков со слизистой носоглотки, содержащая раствор фосфатного буфера с добавлением консерванта (например, «Транспортная среда для хранения и транспортировки респираторных мазков «АмплиПрайм ТСР», ООО «НекстБио», Россия, РУ № ФСР 2012/14200, или «Транспортная среда универсальная «АмплиПрайм® ТСУ» по ТУ 21.20.23-126-09286667-2021», ООО «НекстБио», Россия, РУ № РЗН 2025/25081, или другая, зарегистрированная в установленном порядке на территории РФ). 6.1.2. Зонд-тампон для взятия биологического материала (мазки со слизистой носоглотки) однократного применения, стерильный (например, тампон-зонд МиниМед стерильный ТУ 32.50.50- 034-29508133-2020, ООО «МиниМед», Россия, РУ № РЗН 2021/15079 или другие, зарегистрированные в установленном порядке на территории РФ). Рабочая часть зонда может отламываться по имеющейся насечке. 6.1.3. Вакуумные пробирки для взятия крови с антикоагулянтом (раствором ЭДТА или цитратом натрия) (например, Система вакуумного забора крови Vacuette с принадлежностями, «Грейнер Био- Уан ГмбХ», Австрия, РУ № ФСЗ 2011/09314 или другие, зарегистрированные в установленном порядке на территории РФ). Версия 13.04.26-2 13 6.1.4. Двухсторонняя игла для взятия крови в вакуумную пробирку, одноразовая, стерильная (например, Система вакуумного забора крови Vacuette с принадлежностями, «Грейнер Био-Уан ГмбХ», Австрия, РУ № ФСЗ 2011/09314 или другие, зарегистрированные в установленном порядке на территории РФ). 6.1.5. Игла для забора ликвора, одноразовая, стерильная (например, игла для спинномозговой пункции по ТУ 9432-004-12616389-2010, ЗАО «НПП «МЕДИКОН», Россия, РУ № ФСР 2010/08838 или другие, зарегистрированные в установленном порядке на территории РФ). 6.1.6. Емкость для взятия, транспортировки и хранения ликвора (объемом до 2 мл), однократного применения, стерильная, с завинчивающейся или плотно защелкивающейся крышкой, изготовленная из полипропилена (например, изделия медицинские полимерные для лабораторных исследований in vitro, «Эксиджен, Инк.», США, РУ № ФСЗ 2012/11892 или другие, зарегистрированные в установленном порядке на территории РФ). 6.1.7. Бактериологическая петля, шпатель или пастеровская пипетка (например, петля микробиологическая и бактериологическая полимерная однократного применения стерильная по ТУ 32.50.50-010-72241324-2023, ООО «СибАкадемТехнологии», Россия, РУ № РЗН 2024/23086, или шпатель микробиологический полимерный однократного применения стерильный по ТУ 32.50.50-011- 72241324-2023, ООО «СибАкадемТехнологии», Россия, РУ № РЗН 2024/23059, или другие, зарегистрированные в установленном порядке на территории РФ). 6.1.8. Одноразовые полипропиленовые завинчивающиеся пробирки и крышки к ним или плотно закрывающиеся пробирки объемом 1,5 или 2,0 мл (например, изделия медицинские полимерные для лабораторных исследований in vitro, «Эксиджен, Инк.», США, РУ № ФСЗ 2012/11892 или другие, зарегистрированные в установленном порядке на территории РФ). 6.1.9. Стерильный физиологический раствор для взятия, транспортировки культуры микроорганизмов. 6.2. Предварительная подготовка исследуемого материала 6.2.1. Одноразовые полипропиленовые завинчивающиеся пробирки и крышки к ним или плотно закрывающиеся пробирки объемом 1,5 или 2 мл (например, изделия медицинские полимерные для лабораторных исследований in vitro, «Эксиджен, Инк.», США, РУ № ФСЗ 2012/11892 или другие, зарегистрированные в установленном порядке на территории РФ). 6.2.2. Микроцентрифуга для пробирок типа «Эппендорф» объемом 1,5 мл с ускорением не менее 12 000 g (например, лабораторные микроцентрифуги MiniSpin с принадлежностями, «Эппендорф Мануфэктуринг Корпорэйшн», США, РУ № ФСЗ 2012/13316 или другие, зарегистрированные в установленном порядке на территории РФ). 6.3. Экстракция ДНК из исследуемых образцов 6.3.1. Набор реагентов для экстракции нуклеиновых кислот, зарегистрированный в РФ и соответствующий следующим требованиям: - набор позволяет выделять ДНК из биологического материала (цельная кровь, ликвор, мазки со слизистой носоглотки, культуры микроорганизмов) для последующего исследования методом полимеразной цепной реакции; - набор позволяет исследовать образцы объемом не менее 100 мкл; - набор позволяет проводить элюцию очищенной ДНК в объеме не менее 50 мкл. Версия 13.04.26-2 14 В ходе проведения испытаний валидацию прошел комплект реагентов для экстракции РНК/ДНК из клинического материала «АмплиПрайм РИБО-преп» по ТУ 9398-005-09286667-2012 (ООО «НекстБио», Россия, РУ № ФСР 2012/14017), набор реагентов для экстракции ДНК/РНК из биологического материала «МагноПрайм ЮНИ» по ТУ 21.20.23-024-09286667-2018 (ООО «НекстБио, Россия, РУ № РЗН 2019/8955), набор реагентов для экстракции ДНК/РНК из биологического материала «МагноПрайм® ФАСТ-Р» по ТУ 21.20.23-088-09286667-2020 (ООО «НекстБио», Россия, РУ № РЗН 2020/12971). Таблица 3 Рекомендуемые наборы для экстракции НК Биоматериал Набор для экстракции Цельная кровь, ликвор, мазки со слизистой МагноПрайм ЮНИ, АмплиПрайм РИБО-преп носоглотки, культуры микроорганизмов Мазки со слизистой носоглотки МагноПрайм® ФАСТ-Р 6.3.2. Дополнительные материалы и оборудование, необходимые для экстракции ДНК, – согласно инструкции к набору реагентов для экстракции НК. 6.4. Амплификация, детекция продуктов амплификации, анализ и интерпретация результатов 6.4.1. Одноразовые полипропиленовые пробирки, свободные от ДНКаз/РНКаз (например, изделия медицинские полимерные для лабораторных исследований in vitro, «Эксиджен, Инк.», США, РУ № ФСЗ 2012/11892 или другие, зарегистрированные в установленном порядке на территории РФ), следующих видов (при использовании формы выпуска 2): - Завинчивающиеся пробирки и крышки к ним или плотно закрывающиеся пробирки объемом 1,5 – 2,0 мл – для приготовления реакционной смеси; - Тонкостенные пробирки для ПЦР объемом 0,2 мл с выпуклой или плоской оптически прозрачной крышкой или пробирки объемом 0,2 мл в стрипах по 8 шт. с прозрачными крышками – для проведения ПЦР при использовании прибора планшетного типа; - Тонкостенные пробирки для ПЦР объемом 0,2 мл с плоской крышкой или пробирки для ПЦР объемом 0,1 мл в стрипах по 4 шт. с крышками – для проведения ПЦР при использовании прибора роторного типа. 6.4.2. Одноразовые наконечники, свободные от ДНКаз, для дозаторов переменного объема с фильтром до 100 мкл мкл (например, наконечники универсальные пластиковые в штативах и без штативов для лабораторных дозаторов и роботизированных систем, «Эксиджен, Инк.», США, РУ № ФСЗ 2012/12077 или другие, зарегистрированные в установленном порядке на территории РФ). 6.4.3. Штативы для пробирок объемом 0,2 мл или 0,1 мл (в соответствии с используемыми пробирками для ПЦР) (например, штатив для загрузки 0,1 мл пробирок, «КИАГЕН ГмбХ», Германия, РУ № ФСЗ 2010/07595 или другие, зарегистрированные в установленном порядке на территории РФ). 6.4.4. Бокс абактериальной воздушной среды (ПЦР-бокс) (например, бокс абактериальной воздушной среды для защиты оператора при работе с патогенными агентами и микроорганизмами, передающимися воздушно-капельным путем БАВп-01-«Ламинар-С.» по ТУ 9443-003-51495026-2004, ЗАО «Ламинарные системы», Россия, РУ № ФСР 2010/07111 или другие, зарегистрированные в установленном порядке на территории РФ). Версия 13.04.26-2 15 | Канал для флуорофора | Длины волн, нм | | | | | | Возбуждения | | Детекции | | | | Минимум | Максимум | Минимум | Максимум | | FAM | 450 | 470 | 510 | 530 | | R6G | 515 | 532 | 545 | 580 | | ROX | 565 | 585 | 605 | 650 | | Cy5 | 620 | 640 | 660 | 690 | 6.4.5. Центрифуга-вортекс (например, встряхиватель лабораторный медицинский «ДТспин» по ТУ 32.50.50-003-96301278-2024, ООО «НПО ДНК-Технология», Россия, РУ № РЗН 2024/24070 или другие, зарегистрированные в установленном порядке на территории РФ). 6.4.6. Автоматические дозаторы переменного объема (например, дозаторы пипеточные, одно- и многоканальные, «Лайт» по ТУ 9443-007-33189998-2007, АО «Термо Фишер Сайентифик», Россия, РУ № ФСР 2007/01095 или другие, зарегистрированные в установленном порядке на территории РФ). 6.4.7. Станция автоматическая с модулем для приготовления и дозирования реакционных смесей и комплект расходных материалов к ней согласно инструкции Производителя, - при использовании формы выпуска 2 в случае приготовления реакционных смесей с использованием автоматической станции (например, Станция дозирующая автоматическая Microlab STARlet с принадлежностями, «Гамильтон Бонадуц AГ», Швейцария, РУ № РЗН 2018/6981 или другие, зарегистрированные в установленном порядке на территории РФ). 6.4.8. Программируемый амплификатор с системой детекции флуоресцентного сигнала в режиме «реального времени» роторного либо планшетного типа, зарегистрированные в РФ и соответствующие следующим требованиям: - наличие независимых каналов флуоресцентной детекции для флуорофоров FAM, R6G, ROX и Cy5 со следующими характеристиками: Таблица 4 Требуемые характеристики каналов флуоресцентной детекции - для приборов планшетного типа верхняя граница температурного диапазона не менее 99 °С; - точность поддержания температуры ≤ ±0,5 °С; - скорость нагрева не менее 1,5 °С/сек; - скорость охлаждения не менее 1 °С/сек. В ходе проведения испытаний валидацию прошли следующие программируемые амплификаторы с системой детекции флуоресцентного сигнала в режиме «реального времени»: прибор для проведения полимеразной цепной реакции в режиме реального времени Rotor-Gene Q, с принадлежностями («КИАГЕН ГмбХ», Германия, РУ № ФСЗ 2010/07595), термоциклер для амплификации нуклеиновых кислот 1000, с принадлежностями, исполнения С1000 Touch в комплекте с модулем CFX96 («Био-Рад Лабораториез, Инк.», США, РУ № ФСЗ 2008/03399), амплификатор детектирующий «ДТпрайм» по ТУ 9443-004-96301278-2010, модификация 5М1 (ООО «НПО ДНК- Технология», Россия, РУ № ФСР 2011/10229), система Lepgen-96 для ПЦР-диагностики в реальном времени («Бейджин Лепу Медикал Технолоджи Ко., Лтд.», Китай, РУ № РЗН 2023/21155)., амплификатор нуклеиновых кислот термоциклический с детекцией в режиме реального времени серии МА («Сучжоу Молэррэй Ко., Лтд.», Китай, РУ № РЗН 2025/24998), амплификатор нуклеиновых кислот термоциклический с детекцией в режиме реального времени серии МА («Цзянсукью-Эррей Ко., Лтд.», Китай, РУ № РЗН 2025/24997). Версия 13.04.26-2 16 Использование других программируемых амплификаторов, не указанных в списке выше, требует дополнительного согласования с Производителем набора реагентов. 6.4.9. Холодильник, поддерживающий температурный режим от 2 до 8 °С (например, холодильник комбинированный лабораторный ХЛ-250 «POZIS» по ТУ 9452-203-07503307-2012, АО «ПОЗиС», Россия, РУ № РЗН 2016/4043 или другие, зарегистрированные в установленном порядке на территории РФ). 6.4.10. Отдельный халат, шапочки, обувь и одноразовые перчатки в соответствии с МУ 1.3.2569-09 (например, перчатки ARCHDALE нитриловые диагностические (смотровые) нестерильные неопудренные, текстурированные с полимерным покрытием TurboMAX, «Инновейтив Гловс Ко., Лтд.», Таиланд, РУ № РЗН 2017/6199 или другие, зарегистрированные в установленном порядке на территории РФ). 6.4.11. Емкость для сброса наконечников (например, контейнеры для сбора острого инструментария и органических отходов класса Б, В одноразовые МП-01, МП-02 по ТУ 9398-002- 84354588-2009, ООО «МедПак», Россия, РУ № ФСР 2009/06509 или другие, зарегистрированные в установленном порядке на территории РФ). 7. ИССЛЕДУЕМЫЙ МАТЕРИАЛ Материалом для исследования служат: - цельная кровь; - ликвор; - мазки со слизистой носоглотки; - культуры микроорганизмов. Взятие, предварительную обработку, транспортирование и хранение исследуемого биологического материала следует проводить в соответствии с нижеперечисленными требованиями, несоблюдение которых может привести к получению некорректных результатов исследования. 7.1. Цельная кровь Взятие крови проводится натощак или через 3 часа после приема пищи в пробирку с антикоагулянтом (раствором ЭДТА или цитрата натрия). ВНИМАНИЕ! Недопустимо использовать гепарин в качестве антикоагулянта. Для тщательного перемешивания крови с антикоагулянтом необходимо несколько раз перевернуть пробирку. Допускается хранение и транспортирование образцов цельной крови до проведения ПЦР-исследования: - при температуре от 18 до 25 °С – в течение 2 часов с момента получения материала; - при температуре от 2 до 8 °С – в течение 3 суток с момента получения материала. ВНИМАНИЕ! Недопустимо замораживание образцов цельной крови. 7.2. Ликвор Ликвор собирают с помощью одноразовых игл в одноразовые стерильные пробирки объемом 1,5 или 2,0 мл в количестве не менее 1,0 мл. Версия 13.04.26-2 17 Допускается хранение и транспортирование образцов ликвора до проведения ПЦР-исследования: - при температуре от 2 до 8 °С – в течение 1 суток; - при температуре от минус 24 до минус 16 °С – в течение 3 месяцев; - при температуре не выше минус 68 °С – длительно. Допускается только однократное замораживание-оттаивание материала. 7.3. Мазки со слизистой носоглотки Взятие материала провести из полости носа с помощью одноразового стерильного зонда-тампона в пробирку с транспортной средой в соответствии с инструкцией по применению зонда. Биологический материал, помещенный в транспортную среду, хранить и транспортировать согласно следующим требованиям: - при комнатной температуре (до 25 °С) – в течение 6 часов; - при температуре от 2 до 8 °С – в течение 3 суток; - при температуре от минус 24 до минус 16 °С – в течение 1 месяца; - при температуре не выше минус 68 °С – длительно; либо согласно инструкции к используемой транспортной среде. Допускается лишь однократное замораживание-оттаивание материала. 7.4. Культуры микроорганизмов 7.4.1. Взятие материала Культуру, выращенную на жидкой питательной среде, тщательно перемешивают и отбирают в объеме 1 мл в стерильную полипропиленовую пробирку. Культуру, выращенную на плотной питательной среде, отбирают с помощью стерильной микробиологической петли или шпателя в полипропиленовую пробирку объемом 1,5 мл, содержащую транспортную среду или стерильный физиологический раствор в объеме 0,5 мл, тщательно перемешивают. ВНИМАНИЕ! Требуется предобработка материала. Образцы исследуемого материала хранят при следующих условиях: - при температуре 18 - 25 °С – в течение 24 часов; - при температуре 2 – 8 °С – в течение 7 суток; - при температуре от минус 24 до минус 16 °С – в течение 12 месяцев; - при температуре не выше минус 68 °С – длительно. Допускается лишь однократное замораживание-оттаивание материала. 7.4.2. Подготовка материала к исследованию При исследовании культуры микроорганизмов, выращенной на жидкой питательной среде: Пробирку с исследуемым материалом центрифугировать при 12 000 g в течение 10 минут. Удалить супернатант, оставив 100 - 200 мкл надосадочной жидкости и осадок. Полученную пробу тщательно перемешать на вортексе и осадить капли со стенок пробирки и внутренней части крышки центрифугированием в течение 3 – 5 с. Версия 13.04.26-2 18 При исследовании культуры микроорганизмов, выращенной на плотной питательной среде: Содержимое пробирки центрифугировать при 12 000 g в течение 60 с. Перенести 5 мкл осадка в пробирку с 95 мкл стерильного физиологического раствора. Полученную пробу тщательно перемешать на вортексе и осадить капли со стенок пробирки и внутренней части крышки центрифугированием в течение 3 – 5 с. ВНИМАНИЕ! Несоблюдение требований может привести к получению некорректных результатов исследования. 8. ПРОВЕДЕНИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ Исследование должно проводиться при нормальных показателях микроклимата клинико- диагностической лаборатории7: - температура окружающего воздуха от 20 до 28 °С; - относительная влажность 40 – 75%. 8.1. Экстракция ДНК из исследуемого материала Для экстракции ДНК использовать наборы реагентов, рекомендованные Производителем в разделе «Дополнительное оборудование и материалы». Порядок работы с наборами для экстракции ДНК смотрите в инструкции по их применению. ВНИМАНИЕ! Каждая группа экстрагируемых образцов должна сопровождаться постановкой отрицательного контроля (ОКО) в одном повторе. В процессе экстракции ДНК использовать следующие объемы реагентов и исследуемых образцов: - объем реагента ВКО-FL – 10 мкл в пробирку для ОКО, а также в каждую пробирку с исследуемыми образцами; - объем исследуемого образца – 100 мкл в пробирки для исследуемых образцов; - объем реагента ОКО – 100 мкл в пробирку для ОКО; - объем реагента, используемого для элюции ДНК, – 50 – 90 мкл (при использовании комплекта реагентов «АмплиПрайм РИБО-преп») или 100 мкл (при использовании наборов реагентов «МагноПрайм ЮНИ» или «МагноПрайм® ФАСТ-Р»). 8.2. Подготовка реагентов для амплификации 8.2.1. При использовании формы выпуска 2 ВНИМАНИЕ! Компоненты реакционной смеси следует смешивать непосредственно перед проведением ПЦР. ВНИМАНИЕ! В случае приготовления реакционной смеси с помощью автоматической станции следуйте указаниям инструкции по ее использованию. 8.2.1.1. Рассчитать объемы ПЦР-смеси N.men/H.inf/S.pne и ПЦР-буфера-H, требующиеся для приготовления реакционной смеси (см. таблицу 5). Смесь готовить на общее число исследуемых и контрольных образцов плюс запас не менее чем на одну реакцию. 7 Указаны допустимые нормы температуры и относительной влажности воздуха в рабочей зоне производственных помещений в соответствии с требованиями ГОСТ 12.1.005-88 «Система стандартов безопасности труда. Общие санитарно-гигиенические требования к воздуху рабочей зоны». Версия 13.04.26-2 19 Таблица 5 Расчет объемов компонентов для одной реакционной смеси Реагент Объем, мкл Обозначения ПЦР-смесь N.men/H.inf/S.pne 10,0*(N+1) N – количество амплифицируемых образцов, включая контроли ПЦР-буфер-Н 5,0*(N+1) 8.2.1.2. Перед смешиванием реагентов перемешать содержимое пробирок с ПЦР-смесью N.men/H.inf/S.pne и ПЦР-буфером-H на вортексе, осадить капли кратким центрифугированием. 8.2.1.3. Приготовить реакционную смесь в отдельной пробирке, добавив компоненты в объемах, рассчитанных в п. 8.2.1.1. Перемешать смесь на вортексе и осадить капли кратким центрифугированием. 8.2.1.4. Отобрать необходимое количество пробирок или стрипов для амплификации ДНК исследуемых и контрольных образцов. Выбор пробирок для амплификации зависит от используемого амплификатора с системой детекции в режиме «реального времени». 8.2.1.5. Внести в пробирки по 15 мкл приготовленной реакционной смеси. ВНИМАНИЕ! Неиспользованные остатки реакционной смеси хранению не подлежат. 8.2.2. При использовании форм выпуска 1 и 3 8.2.2.1. Отобрать необходимое количество пробирок или стрипов с ПЦР-смесью N.men/H.inf/S.pne для амплификации ДНК исследуемых и контрольных образцов. 8.2.2.2. Убедиться, что парафин полностью покрывает раствор на дне пробирок. В противном случае, не использовать данные пробирки. 8.2.2.3. Перемешать содержимое пробирки с ПЦР-буфером-К на вортексе, осадить капли кратким центрифугированием. 8.2.2.4. На поверхность парафина внести по 10 мкл ПЦР-буфера-K, при этом он не должен проваливаться под прослойку парафина и смешиваться с ПЦР-смесью. 8.3. Внесение проб ДНК, проведение амплификации и детекции ВНИМАНИЕ! При добавлении проб ДНК, экстрагированных с помощью наборов реагентов для проведения экстракции методом сорбции на силикагеле или магнитной сепарации, необходимо избегать попадания сорбента в реакционную смесь. ВНИМАНИЕ! При ручном анализе программирование и запуск амплификатора проводить согласно инструкции по его применению. Рекомендуемые параметры для программирования амплификаторов указаны во вкладыше, прилагаемом к набору. При использовании программного обеспечения FRT Manager программирование амплификатора устанавливается автоматически. 8.3.1. Внести в подготовленные пробирки с реакционной смесью по 10 мкл проб ДНК, полученных в результате экстракции. 8.3.2. Внести в подготовленные пробирки с реакционной смесью контрольные образцы: а) положительный контроль ПЦР – в одну пробирку для образца КО внести 10 мкл КО N.men/H.inf/S.pne. б) отрицательный контроль экстракции – в одну пробирку для образца ОКО внести 10 мкл пробы, экстрагированной из ОКО. Версия 13.04.26-2 20 | Цикл | Температура, °С | Время | | Детекция по каналам для | | | Количество | | | | | | | флуорофоров | | | циклов | | | 1 | 50 | 15 мин | – | | | 1 | | | | 2 | 95 | 15 мин | – | | | 1 | | | | 3 | 95 | 10 с | – | | | 45 | | | | | 60 | 20 с | FAM, R6G, ROX, Cy5 | | | | | | в) отрицательный контроль ПЦР – в одну пробирку для образца К- внести 10 мкл реагента К-. 8.3.3. Запрограммировать амплификатор с системой детекции в режиме «реального времени» для выполнения единой программы амплификации и детекции флуоресцентного сигнала (см. таблицу 6). Таблица 6 Единая программа амплификации и детекции флуоресцентного сигнала Примечание - С использованием единой программы можно одновременно проводить в одном приборе любое сочетание тестов, включая тесты с обратной транскрипцией и амплификацией. При одновременном проведении нескольких тестов детекция флуоресцентного сигнала назначается и по другим используемым каналам, помимо указанных в таблице. В случае если в одном приборе одновременно проводятся тесты только для выявления ДНК, можно удалить из данной программы первый шаг обратной транскрипции (50 °С – 15 мин) для экономии времени. 8.3.4. Перед постановкой в амплификатор планшетного типа осадить капли со стенок пробирок кратким центрифугированием. 8.3.5. Установить пробирки или стрипы в ячейки реакционного модуля прибора. 8.3.6. Запустить выполнение программы амплификации с детекцией флуоресцентного сигнала. 8.3.7. Прибор проводит регистрацию флуоресцентного сигнала автоматически в режиме «реального времени». 8.4. Анализ и вычисление результатов ВНИМАНИЕ! При ручном анализе обработку данных (флуоресцентных кривых), полученных в программном обеспечении прибора, используемого для проведения ПЦР c детекцией в режиме «реального времени», проводить согласно инструкции по его применению. Рекомендуемые параметры для обработки данных указаны во вкладыше, прилагаемом к набору. ВНИМАНИЕ! Количественный анализ результатов возможно проводить только в автоматическом режиме с использованием программного обеспечения FRT Manager (ООО «ИЛС», Россия, РУ № РЗН 2019/8870) согласно руководству пользователя, выбрав методику, указанную во вкладыше, прилагаемом к набору. Руководство пользователя размещено на официальном сайте ООО «ИЛС» по адресу: https://www.interlabservice.ru/service/frt/. Обработка и расчет результатов происходит на основании наличия (или отсутствия) пересечения кривой флуоресценции S-образной (сигмообразной) формы с установленной на соответствующем уровне пороговой линией, что определяет наличие (или отсутствие) для данной пробы ДНК значения порогового цикла (Сt) в соответствующей графе таблицы результатов. Параметры обработки флуоресцентных кривых зависят от используемой модели амплификатора (см. вкладыш к набору и инструкцию по применению амплификатора). Кривые накопления флуоресцентного сигнала анализируются по четырем каналам детекции (см. таблицу 7). Версия 13.04.26-2 21 | | Канал для | | FAM | R6G8 | ROX | Cy5 | | | флуорофора | | | | | | | Продукт амплификации | | | ДНК ВКО-FL (экзогенный ВКО) | ДНК Haemophilus influenzae | ДНК Streptococcus pneumoniae | ДНК Neisseria meningitidis | Таблица 7 Детекция флуоресцентного сигнала На основании полученных значений порогового цикла (Сt) и заданного значения концентрации для КО N.men/H.inf/S.pne при помощи формулы, представленной ниже, происходит определение концентрации мишени в исследуемых образцах. Концентрация ДНК Neisseria meningitidis, Haemophilus influenzae и Streptococcus pneumoniae определяется в виде количества геномных эквивалентов клеток микроорганизмов в 1 мл биологического образца (ГЭ/мл). Расчет концентрации тестируемых образцов проводится по формуле: 𝐶 = 𝐶 ∗2 (𝐶𝑡(КО) −𝐶𝑡(обр) ) , (обр) (КО) где 𝐶 – расчетное значение концентрации ДНК выявляемых микроорганизмов (ГЭ/мл) для (обр) каждого тестируемого образца; 𝐶 - концентрация КО N.men/H.inf/S.pne (ГЭ/мл), указана во вкладыше к набору реагентов; (КО) 𝐶 – значение Сt образца КО N.men/H.inf/S.pne по каналам R6G, ROX, Cy5; 𝑡(КО) 𝐶 – значение Ct тестируемого образца по каналам R6G, ROX, Cy5. 𝑡(обр) 8.5. Интерпретация результатов Интерпретацию результатов проводят в двух вариантах: - в качественном формате вручную в соответствии с таблицей 8 и вкладышем, прилагаемым к набору. Результат исследования считают достоверным, если результаты, полученные для контрольных образцов, соответствуют критериям валидности, указанным в таблице 10; - в качественном и количественном формате в автоматическом режиме с использованием программного обеспечения FRT Manager (ООО «ИЛС», Россия, РУ № РЗН 2019/8870) согласно руководству пользователя, выбрав методику, указанную во вкладыше, прилагаемом к набору. Руководство пользователя размещено на официальном сайте ООО «ИЛС» по адресу: https://www.interlabservice.ru/service/frt/. Используемые в программном обеспечении алгоритм интерпретации результатов для исследуемых образцов и критерии валидности результатов, полученных для контролей, представлены в таблицах 9 и 10 соответственно. 8 Детекция сигнала для флуорофора R6G осуществляется по каналу детекции для аналогичных флуорофоров HEX, JOE, Yellow и VIC. Версия 13.04.26-2 22 | Результат | Интерпретация | | Значение Ct по каналам для флуорофоров FAM, R6G, ROX и Cy5 не определено или определено выше граничного9. | Невалидный! Сбой ВКО! Требуется повторить анализ | | Значение Ct по каналу для флуорофора R6G и/или ROX, и/или Cy5 определено не выше граничного. При этом кривая флуоресценции данной пробы по данному каналу пересекает пороговую линию на участке характерного экспоненциального подъема флуоресценции. Значение Ct по каналу для флуорофора FAM не учитывается. | ДНК Haemophilus influenzae и/или ДНК Streptococcus pneumoniae, и/или ДНК Neisseria meningitidis обнаружена | | Значение Ct по каналу для флуорофора R6G и/или ROX, и/или Cy5 не определено или определено выше граничного, а по каналу для флуорофора FAM определено не выше граничного. | ДНК Haemophilus influenzae и/или ДНК Streptococcus pneumoniae, и/или ДНК Neisseria meningitidis не обнаружена | | Результат | Интерпретация | | Значение Ct по каналам для флуорофоров FAM, R6G, ROX и Cy5 не определено или определено выше граничного9. | Невалидный! Сбой ВКО! Требуется повторить анализ | | Рассчитанное значение концентрации ДНК по каналу для флуорофора R6G и/или ROX, и/или Cy5 меньше нижнего предела линейного диапазона измерения набора, при этом значение Ct по каналу для флуорофора FAM не определено или определено выше граничного. | | | Рассчитанное значение концентрации ДНК по каналу для флуорофора R6G и/или ROX, и/или Cy5 меньше нижнего предела линейного диапазона измерения набора, при этом значение Ct по каналу для флуорофора FAM определено не выше граничного. | ДНК Haemophilus influenzae и/или ДНК Streptococcus pneumoniae, и/или ДНК Neisseria meningitidis обнаружена в концентрации менее 5×103 ГЭ/мл | | Рассчитанное значение концентрации ДНК по каналу для флуорофора R6G и/или ROX, и/или Cy5 находится в пределах линейного диапазона измерения набора. Значение Ct по каналу для флуорофора FAM не учитывается. | ДНК Haemophilus influenzae и/или ДНК Streptococcus pneumoniae, и/или ДНК Neisseria meningitidis обнаружена в концентрации Х×10y ГЭ/мл | | Рассчитанное значение концентрации ДНК по каналу для флуорофора R6G и/или ROX, и/или Cy5 выше верхнего предела линейного диапазона измерения набора. Значение Ct по каналу для флуорофора FAM не учитывается. | ДНК Haemophilus influenzae и/или ДНК Streptococcus pneumoniae, и/или ДНК Neisseria meningitidis обнаружена в концентрации более 1×108 ГЭ/мл | | Значение Ct по каналу для флуорофора R6G и/или ROX, и/или Cy5 не определено или определено выше граничного, а по каналу для флуорофора FAM определено не выше граничного. | ДНК Haemophilus influenzae и/или ДНК Streptococcus pneumoniae, и/или ДНК Neisseria meningitidis не обнаружена | Таблица 8 Интерпретация результатов для исследуемых образцов при проведении качественного анализа Таблица 9 Интерпретация результатов для исследуемых образцов при проведении количественного анализа 9 Граничные значения Ct указаны во вкладыше, прилагаемом к набору. Версия 13.04.26-2 23 | Контроль | Результаты амплификации по каналу для флуорофора | | | | | | FAM | R6G | ROX | Cy5 | | ОКО (отрицательный контроль экстракции) | Определено значение Ct не выше граничного10 | Значение Ct отсутствует | | | | К- (отрицательный контроль ПЦР) | Значение Ct отсутствует | | | | | КО N.men/H.inf/S.pne (положительный контроль ПЦР) | Значение Ct отсутствует | Определено значение Ct не выше граничного | | | Таблица 10 Критерии валидности для контрольных образцов 8.6. Возможные ошибки и рекомендации по их решению 8.6.1. Для отрицательного контрольного образца (ОКО) по каналам для флуорофоров R6G и/или ROX, и/или Cy5 определено значение порогового цикла (Ct). Вероятна контаминация лаборатории продуктами амплификации или контаминация реагентов или исследуемых образцов на каком-либо этапе исследования. Необходимо предпринять меры по выявлению и ликвидации источника контаминации и повторить исследование для всех образцов, в которых обнаружена ДНК Neisseria meningitidis, Haemophilus influenzae и Streptococcus pneumoniae, начиная с этапа экстракции ДНК. 8.6.2. Для отрицательного контроля ПЦР (К-) по каналам для флуорофоров FAM и/или R6G, и/или ROX, и/или Cy5 определено значение порогового цикла (Ct). Вероятна контаминация лаборатории продуктами амплификации или контаминация реагентов или исследуемых образцов на каком-либо этапе ПЦР исследования. Необходимо предпринять меры по выявлению и ликвидации источника контаминации и повторить ПЦР-исследование для всех исследуемых образцов. 8.6.3. Для контрольного образца (КО N.men/H.inf/S.pne) значение Ct отсутствует или определено больше граничного по каналам для флуорофоров R6G и/или ROX, и/или Cy5. Требуется повторное исследование всех образцов, начиная с этапа ПЦР. 8.6.4. В случае получения невалидных результатов, которые могут свидетельствовать о некачественном проведении экстракции нуклеиновых кислот или наличии ингибиторов, требуется повторно провести исследование данного образца, начиная с этапа экстракции ДНК. В случае воспроизводимого результата рекомендуется повторно провести взятие, предварительную подготовку и исследование образца. 8.6.5. Для исследуемого образца определено значение порогового цикла, при этом на графике флуоресценции отсутствует участок характерного экспоненциального подъема (график представляет собой приблизительно прямую линию). Необходимо проверить правильность выбранного уровня пороговой линии или параметров расчета базовой линии. Если результат получен при правильном уровне пороговой линии (базовой линии), требуется повторно провести амплификацию и детекцию для этого образца. 8.7. Диагностическое значение полученного результата ПЦР-исследование является одним из методов всестороннего обследования пациента, на основании которых лечащий врач устанавливает диагноз и выбирает мероприятия по лечению пациента. Результаты, полученные при использовании набора, следует рассматривать и интерпретировать в сочетании с данными других клинических и лабораторных исследований. 10 Граничные значения Ct указаны во вкладыше, прилагаемом к набору. Версия 13.04.26-2 24 9. ФУНКЦИОНАЛЬНЫЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ НАБОРА 9.1. Предел обнаружения11 Предел обнаружения набора «АмплиПрайм® N. meningitidis / H. influenzae / S. pneumoniae» был определен с использованием пробит-анализа с 95%-ой доверительной вероятностью (см. таблицу 11). Значения характеристик, указанные в таблице 12, достигаются при соблюдении правил, указанных в разделе «Исследуемый материал». Таблица 11 Предел обнаружения набора Предел 95%-ый Набор для обнаружения доверительный Биоматериал Микроорганизм экстракции по Probit 95%, интервал, ГЭ/мл ГЭ/мл Haemophilus influenzae 934-1187 АмплиПрайм Streptococcus pneumoniae 896-1160 РИБО-преп Neisseria meningitidis 894-1190 Цельная кровь 1000 Haemophilus influenzae 914-1167 МагноПрайм ЮНИ Streptococcus pneumoniae 917-1158 Neisseria meningitidis 915-1166 Haemophilus influenzae 874-1118 АмплиПрайм Streptococcus pneumoniae 935-1187 РИБО-преп Neisseria meningitidis 900-1164 Ликвор 1000 Haemophilus influenzae 897-1138 МагноПрайм ЮНИ Streptococcus pneumoniae 907-1149 Neisseria meningitidis 886-1128 Haemophilus influenzae 915-1166 АмплиПрайм Streptococcus pneumoniae 934-1187 РИБО-преп Neisseria meningitidis 933-1195 Haemophilus influenzae 912-1174 Мазки со слизистой МагноПрайм ЮНИ Streptococcus pneumoniae 1000 897-1138 носоглотки Neisseria meningitidis 898-1138 Haemophilus influenzae 907-1149 МагноПрайм® ФАСТ-Р Streptococcus pneumoniae 944-1195 Neisseria meningitidis 915-1167 Haemophilus influenzae 901-1164 АмплиПрайм Streptococcus pneumoniae 886-1128 РИБО-преп Neisseria meningitidis 874-1118 Культуры 1000 микроорганизмов Haemophilus influenzae 912-1173 МагноПрайм ЮНИ Streptococcus pneumoniae 952-1228 Neisseria meningitidis 900-1165 11 Предел обнаружения – 95%-ое положительное пороговое значение концентрации (концентрация ДНК выявляемого возбудителя, при которой 95% тестов дают положительный результат). Версия 13.04.26-2 25 | Микроорганизм | Линейный диапазон измерения, ГЭ/мл | | Haemophilus influenzae | 5×103 – 1×108 | | Streptococcus pneumoniae | 5×103 – 1×108 | | Neisseria meningitidis | 5×103 – 1×108 | 9.2. Линейный диапазон измерения и предел измерения Диапазон, в котором набор «АмплиПрайм® N. meningitidis / H. influenzae / S. pneumoniae» дает линейный ответ, приведен в таблице 12. Предел измерения набора является нижним пределом линейного диапазона измерения набора. Указанные значения характеристики достигаются при соблюдении правил, указанных в разделе «Исследуемый материал». Таблица 12 Линейный диапазон измерения набора 9.3. Аналитическая специфичность Набор реагентов «АмплиПрайм® N. meningitidis / H. influenzae / S. pneumoniae» обнаруживает только фрагмент ДНК Neisseria meningitidis, Streptococcus pneumoniae и Haemophilus influenzae. Аналитическая специфичность набора оценивалась тестированием ДНК штаммов микроорганизмов (см. таблицу 13) и геномной ДНК человека. ДНК штаммов микроорганизмов в концентрации не менее 1×106 копий/мл и геномную ДНК человека в концентрации 5×106 кл/мл вносили в образцы биологического материала, не содержащие ДНК Neisseria meningitidis, Streptococcus pneumoniae и Haemophilus influenzae. Таблица 13 Штаммы микроорганизмов, используемые для оценки аналитической специфичности При тестировании образцов ДНК вышеперечисленных штаммов микроорганизмов и геномной ДНК человека с использованием набора перекрестных реакций выявлено не было. Версия 13.04.26-2 26 9.4. Правильность измерения Правильность измерения с помощью набора «АмплиПрайм® N. meningitidis / H. influenzae / S. pneumoniae» была определена путем тестирования стандартного образца предприятия в 120 повторах для каждого вида биоматериала (см. таблицу 14). Таблица 14 Правильность измерения Среднее Установленное Систематическая Набор для значение значение погрешность (B) Микроорганизм экстракции измерения, концентрации, log % log log 10 10 10 Цельная кровь Haemophilus influenzae 5,61 0,09 1,5 МагноПрайм Streptococcus pneumoniae 5,61 0,09 1,5 ЮНИ Neisseria meningitidis 5,61 0,09 1,6 5,70 Haemophilus influenzae 5,61 0,09 1,6 АмплиПрайм Streptococcus pneumoniae 5,61 0,09 1,5 РИБО-преп Neisseria meningitidis 5,61 0,09 1,7 Ликвор Haemophilus influenzae 5,62 0,08 1,4 МагноПрайм Streptococcus pneumoniae 5,61 0,09 1,6 ЮНИ Neisseria meningitidis 5,61 0,09 1,6 5,70 Haemophilus influenzae 5,61 0,09 1,5 АмплиПрайм Streptococcus pneumoniae 5,61 0,09 1,6 РИБО-преп Neisseria meningitidis 5,61 0,09 1,6 Мазки со слизистой носоглотки Haemophilus influenzae 5,61 0,09 1,5 МагноПрайм Streptococcus pneumoniae 5,61 0,09 1,6 ЮНИ Neisseria meningitidis 5,61 0,09 1,6 Haemophilus influenzae 5,62 0,08 1,4 АмплиПрайм Streptococcus pneumoniae 5,62 5,70 0,08 1,4 РИБО-преп Neisseria meningitidis 5,61 0,09 1,5 Haemophilus influenzae 5,62 0,08 1,5 МагноПрайм® Streptococcus pneumoniae 5,61 0,09 1,5 ФАСТ-Р Neisseria meningitidis 5,63 0,07 1,3 Культуры микроорганизмов Haemophilus influenzae 5,61 0,09 1,5 МагноПрайм Streptococcus pneumoniae 5,62 0,08 1,5 ЮНИ Neisseria meningitidis 5,62 0,08 1,5 5,70 Haemophilus influenzae 5,62 0,08 1,5 АмплиПрайм Streptococcus pneumoniae 5,61 0,09 1,6 РИБО-преп Neisseria meningitidis 5,61 0,09 1,5 Версия 13.04.26-2 27 | Исследуемые образцы | | | | Результаты тестирования | | | | | | | | | | | Вид био- материала | Возбудитель | Коли- чество | Образцы | Наборы сравнения | | Тестируемый набор «АмплиПрайм® | | | | | | | | | | | | | | | N. meningitidis / H. influenzae / | | | | | | | | | | | | | | | S. pneumoniae» | | | | | | | | | | | | | | | Форма | | | Форма | | | Форма | | | | | | | | | выпуска 1 | | | выпуска 2 | | | выпуска 3 | | | Цельная кровь | Haemophilus influenzae | 310 | Положительные | 93 | 93 | | | 93 | | | 93 | | | | | | | Отрицательные | 217 | 217 | | | 217 | | | 217 | | | | | Streptococcus pneumoniae | | Положительные | 95 | 95 | | | 95 | | | 95 | | | | | | | Отрицательные | 215 | 215 | | | 215 | | | 215 | | | | | Neisseria meningitidis | | Положительные | 54 | 54 | | | 54 | | | 54 | | | | | | | Отрицательные | 256 | 256 | | | 256 | | | 256 | | | | Ликвор | Haemophilus influenzae | 226 | Положительные | 35 | 35 | | | 35 | | | 35 | | | | | | | Отрицательные | 191 | 191 | | | 191 | | | 191 | | | | | Streptococcus pneumoniae | | Положительные | 34 | 34 | | | 34 | | | 34 | | | | | | | Отрицательные | 192 | 192 | | | 192 | | | 192 | | | | | Neisseria meningitidis | | Положительные | 36 | 36 | | | 36 | | | 36 | | | | | | | Отрицательные | 190 | 190 | | | 190 | | | 190 | | | | Мазки со слизистой носоглотки | Haemophilus influenzae | 325 | Положительные | 97 | 97 | | | 97 | | | 97 | | | | | | | Отрицательные | 228 | 228 | | | 228 | | | 228 | | | | | Streptococcus pneumoniae | | Положительные | 98 | 98 | | | 98 | | | 98 | | | | | | | Отрицательные | 227 | 227 | | | 227 | | | 227 | | | | | Neisseria meningitidis | | Положительные | 96 | 96 | | | 96 | | | 96 | | | | | | | Отрицательные | 229 | 229 | | | 229 | | | 229 | | | 9.5. Воспроизводимость и повторяемость измерения Воспроизводимость и повторяемость результатов с использованием набора оценивали путем тестирования отрицательных и положительных образцов биоматериала (цельная кровь, ликвор, мазки со слизистой носоглотки, культуры микроорганизмов). Каждый образец проходил все этапы исследования (экстракцию ДНК, амплификацию ДНК и детекцию результатов). При оценке повторяемости и воспроизводимости коэффициент вариации, рассчитанный по результатам определения концентрации для ДНК выявляемого микроорганизма, не превышал 5% и 10% соответственно. 9.6. Диагностическая специфичность и диагностическая чувствительность Для определения диагностической специфичности и диагностической чувствительности набора «АмплиПрайм® N. meningitidis / H. influenzae / S. pneumoniae» были использованы образцы каждого вида биоматериала, предусмотренного назначением набора реагентов, в количестве, указанном в таблице 15. В качестве наборов сравнения использовались наборы реагентов для выявления ДНК Haemophilus influenzae, Streptococcus pneumoniae, Neisseria meningitidis, зарегистрированные в Российской Федерации в установленном порядке. Таблица 15 Результаты тестирования образцов биологического материала с помощью набора реагентов «АмплиПрайм® N. meningitidis / H. influenzae / S. pneumoniae» Версия 13.04.26-2 28 | Тип образцов | Возбудитель | | Диагностическая | | | Диагностическая | | | | | | чувствительность | | | специфичность | | | Цельная кровь | Haemophilus influenzae | 100% (96,11% - 100%) | | | 100% (98,31% - 100%) | | | | | Streptococcus pneumoniae | 100% (96,19% - 100%) | | | 100% (98,30% - 100%) | | | | | Neisseria meningitidis | 100% (93,40% - 100%) | | | 100% (98,57% - 100%) | | | | Ликвор | Haemophilus influenzae | 100% (90,00% - 100%) | | | 100% (98,09% - 100%) | | | | | Streptococcus pneumoniae | 100% (89,72% - 100%) | | | 100% (98,10% - 100%) | | | | | Neisseria meningitidis | 100% (90,26% - 100%) | | | 100% (98,08% - 100%) | | | | Мазки со слизистой носоглотки | Haemophilus influenzae | 100% (96,27% - 100%) | | | 100% (98,40% - 100%) | | | | | Streptococcus pneumoniae | 100% (96,31% - 100%) | | | 100% (98,39% - 100%) | | | | | Neisseria meningitidis | 100% (96,23% - 100%) | | | 100% (98,40% - 100%) | | | | Культуры микроорганизмов | Haemophilus influenzae | 100% (96,38% - 100%) | | | 100% (98,30% - 100%) | | | | | Streptococcus pneumoniae | 100% (96,41% - 100%) | | | 100% (98,29% - 100%) | | | | | Neisseria meningitidis | 100% (96,34% - 100%) | | | 100% (98,31% - 100%) | | | Исследуемые образцы Результаты тестирования Тестируемый набор «АмплиПрайм® N. meningitidis / H. influenzae / Вид био- Коли- Наборы Возбудитель Образцы S. pneumoniae» материала чество сравнения Форма Форма Форма выпуска 1 выпуска 2 выпуска 3 Haemophilus Положительные 100 100 100 100 influenzae Отрицательные 215 215 215 215 Культуры Streptococcus Положительные 101 101 101 101 микроорга 315 низмов pneumoniae Отрицательные 214 214 214 214 Neisseria Положительные 99 99 99 99 meningitidis Отрицательные 216 216 216 216 Значения диагностической специфичности и диагностической чувствительности набора «АмплиПрайм® N. meningitidis / H. influenzae / S. pneumoniae» с доверительной вероятностью 95%, рассчитанные, исходя из полученных данных, приведены в таблице 16. Таблица 16 Диагностические характеристики набора реагентов «АмплиПрайм® N. meningitidis / H. influenzae / S. pneumoniae» 9.7. Оценка влияния интерферирующих веществ Влияние интерферирующих веществ, потенциально содержащихся или присутствующих в исследуемом биоматериале, на эффективность ПЦР при использовании набора «АмплиПрайм® N. meningitidis / H. influenzae / S. pneumoniae» отсутствует. Не выявлено ингибирование реакции амплификации при добавлении к образцам биоматериала на этапе экстракции интерферирующих веществ, представленных в таблице 17, в максимально возможной концентрации. Отсутствие влияния интерферирующих веществ для образцов мазков со слизистой носоглотки (муцин, гемоглобин, ксилометазолин) было показано в испытаниях набора «АмплиПрайм® Flu A/B» (РУ № РЗН 2023/20948) совместно с комплектом для экстракции «АмплиПрайм РИБО-преп» (РУ № ФСР 2012/14017) и «АмплиПрайм® ОРВИ-комплекс» (РУ № РЗН 2023/19344) совместно с набором для экстракции «МагноПрайм® ФАСТ-Р» (РУ № РЗН 2020/12971). Версия 13.04.26-2 29 Влияние интерферирующих веществ для образцов ликвора (гемоглобин) было показано в испытаниях набора «АмплиПрайм® EBV / CMV / HHV6» (РУ № РЗН 2021/15314) совместно с комплектом для экстракции «АмплиПрайм РИБО-преп» (РУ № ФСР 2012/14017). Влияние интерферирующих веществ для образцов цельной крови (гемоглобин, билирубин, холестерин, триглицериды, альбумин) было показано в испытаниях набора «АмплиПрайм® HHV6A / HHV6B» (РУ № РЗН 2024/22336) совместно с набором для экстракции «МагноПрайм ЮНИ» (РУ № РЗН 2019/8955). Таблица 17 Интерферирующие вещества, использованные при тестировании набора «АмплиПрайм® N. meningitidis / H. influenzae / S. pneumoniae» Биоматериал Интерферент Концентрация интерферента в образце гемоглобин 200 мг/мл билирубин 0,2 мг/мл холестерин 2,5 мг/мл Цельная кровь триглицериды 5 мг/мл цефотаксим 0,1 мг/мл ампициллин 0,05 мг/мл альбумин 50 мг/мл Ликвор гемоглобин 200 мг/мл гемоглобин 200 мг/мл Мазки со слизистой муцин 2,3 мг/мл носоглотки ксилометазолин 0,01% гемоглобин 200 мг/мл Культуры микроорганизмов агар Хоттингера 5% Также не выявлено ингибирование реакции амплификации при добавлении к образцам биоматериала ДНК человека в концентрации 1,0×108 копий/мл. Версия 13.04.26-2 30 10. УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ, ТРАНСПОРТИРОВАНИЯ И ПРИМЕНЕНИЯ НАБОРА 10.1. Срок годности Срок годности набора составляет 12 месяцев от даты изготовления. После вскрытия реагенты использовать до истечения срока годности набора. Набор с истекшим сроком годности применению не подлежит. 10.2. Транспортирование Набор транспортировать при температуре от 2 до 8 °С в течение 3 месяцев всеми видами крытых транспортных средств в термоконтейнерах с хладоэлементами или в авторефрижераторах. Не допускается замораживание реагентов. Допускается транспортирование при температуре от 8 до 25 °С не более 3 суток. Набор, транспортированный с нарушением указанного температурного режима, применению не подлежит. 10.3. Хранение Набор хранить при температуре от 2 до 8 °С в защищенном от света месте в течение всего срока годности набора. Не допускается замораживание реагентов. Реагенты после вскрытия хранить в тех же условиях, что и реагенты до вскрытия. Невскрытые и вскрытые реагенты стабильны в течение срока годности, указанного на этикетке, при соблюдении указанных условий хранения. Набор, хранившийся с нарушением указанного режима хранения, применению не подлежит. ВНИМАНИЕ! Реакционная смесь, приготовленная из ПЦР-смеси N.men/H.inf/S.pne и ПЦР-буфера-Н, входящих в состав формы выпуска 2, хранению не подлежит. 11. ГАРАНТИИ ПРОИЗВОДИТЕЛЯ Производитель гарантирует соответствие характеристик набора требованиям, указанным в технической и эксплуатационной документации, в течение указанного срока годности при соблюдении всех условий транспортирования, хранения и применения. Рекламации на качество набора «АмплиПрайм® N. meningitidis / H. influenzae / S. pneumoniae» направлять в адрес производителя ООО «НекстБио»: 111394, г. Москва, ул. Полимерная, 8 стр. 2, тел. (495) 620-08-73, e-mail: info@nextbio.ru. При выявлении нежелательных реакций при использовании набора, фактов и обстоятельств, создающих угрозу жизни и здоровью граждан и медицинских работников при обращении и эксплуатации набора, рекомендуется направить сообщение по адресу, указанному выше, и в уполномоченную государственную регулирующую организацию (в Российской Федерации – Федеральная служба по надзору в сфере здравоохранения) в соответствии с действующим законодательством. Консультацию по работе с набором, а также по вопросам, касающимся качества набора, можно получить по контактам, указанным по адресу: nextbio.ru. Версия 13.04.26-2 31 12. СИМВОЛЫ, ИСПОЛЬЗУЕМЫЕ В ДОКУМЕНТАЦИИ ПРОИЗВОДИТЕЛЯ Номер по каталогу Изготовитель Номер партии Дата изготовления Содержимого достаточно для Использовать до проведения <n> тестов Обратитесь к инструкции по применению или к Температурный инструкции по применению в диапазон электронном виде Не допускать Осторожно воздействия солнечного света Медицинское изделие для диагностики in vitro Версия 13.04.26-2 32 13. ПЕРЕЧЕНЬ ПРИМЕНЯЕМОЙ НОРМАТИВНОЙ ДОКУМЕНТАЦИИ - ГОСТ 12.1.005-88 «Система стандартов безопасности труда. Общие санитарно-гигиенические требования к воздуху рабочей зоны» - ГОСТ 14261-77 «Кислота соляная особой чистоты. Технические условия» - ГОСТ Р 51088-2013 «Медицинские изделия для диагностики ин витро. Реагенты, наборы реагентов, тест-системы, контрольные материалы, питательные среды. Требования к изделиям и поддерживающей документации» - ГОСТ Р ИСО 18113-1-2024 «Медицинские изделия для диагностики in vitro. Информация, предоставленная изготовителем (маркировка). Часть 1. Термины, определения и общие требования» - ГОСТ Р ИСО 18113-2-2024 «Медицинские изделия для диагностики in vitro. Информация, предоставленная изготовителем (маркировка). Часть 2. Реагенты для диагностики in vitro для профессионального использования» - ГОСТ Р ИСО 15223-1-2023 «Изделия медицинские. Символы, применяемые для передачи информации, предоставляемой изготовителем. Часть 1. Основные требования» - ГОСТ 14192-96 «Маркировка грузов» - СанПиН 3.3686-21 «Санитарно-эпидемиологические требования по профилактике инфекционных болезней» - СанПиН 2.1.3684-21 «Санитарно-эпидемиологические требования к содержанию территорий городских и сельских поселений, к водным объектам, питьевой воде и питьевому водоснабжению, атмосферному воздуху, почвам, жилым помещениям, эксплуатации производственных, общественных помещений, организации и проведению санитарно-противоэпидемических (профилактических) мероприятий» - МУ 1.3.2569-09 «Организация работы лабораторий, использующих методы амплификации нуклеиновых кислот при работе с материалом, содержащим микроорганизмы I–IV групп патогенности» - Приказ МЗ РФ № 4н от 06.06.2012 «Об утверждении номенклатурной классификации медицинских изделий» - Приказ Минздрава России от 30.08.2021 № 885н «Об утверждении Порядка проведения оценки соответствия медицинских изделий в форме технических испытаний, токсикологических исследований, клинических испытаний в целях государственной регистрации медицинских изделий» - Постановление Правительства РФ от 30 ноября 2024 г. № 1684 «Об утверждении Правил государственной регистрации медицинских изделий» - ГОСТ Р 15.301-2016 «Система разработки и постановки продукции на производство. Продукция производственно-технического назначения. Порядок разработки и постановки продукции на производство» - ГОСТ Р 51352-2013 «Медицинские изделия для диагностики ин витро. Методы испытаний» - ГОСТ Р ЕН 13612-2010 «Оценка функциональных характеристик медицинских изделий для диагностики in vitro» - ГОСТ Р ИСО 23640-2015 «Изделия медицинские для диагностики in vitro. Оценка стабильности реагентов для диагностики in vitro» Версия 13.04.26-2 33 - ГОСТ 15.309-98 «Система разработки и постановки продукции на производство. Испытания и приемка выпускаемой продукции. Основные положения» Примечание – Указанные выше нормативные документы были действующими на момент утверждения инструкции по применению. В дальнейшем, при пользовании документом, целесообразно проверить действие ссылочных нормативных документов на текущий момент. Если ссылочный документ заменен или изменен, то при применении настоящего документа следует пользоваться замененным (измененным) документом. Версия 13.04.26-2 34 УТВЕРЖДАЮ НАБОР РЕАГЕНТОВ ДЛЯ ВЫЯВЛЕНИЯ И КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ ДНК NEISSERIA MENINGITIDIS, HAEMOPHILUS INFLUENZAE И STREPTOCOCCUS PNEUMONIAE МЕТОДОМ ПОЛИМЕРАЗНОЙ ЦЕПНОЙ РЕАКЦИИ С ДЕТЕКЦИЕЙ В РЕЖИМЕ «РЕАЛЬНОГО ВРЕМЕНИ» «АМ ПЛ И ПРАЙМ® N. MENINGITIDIS / Н. INFLUENZAE / S. PNEUMONIAE» ПО ТУ 20.59.52-273-09286667-2025 Форма выпуска 1 Форма выпуска 2 Форма выпуска 3 Краткое руководство по применению версии 13.04.26-2 Лист утверждения | Компонент | Описание | | Объем, | | Количество | | | | | мл | | | | ПЦР-смесь N.men/H.inf/ S.pne | Прозрачная жидкость, раскапана под парафин белого цвета | 0,01 | | | 100 пробирок | | ПЦР-буфер-K | Прозрачная жидкость красного цвета | 1,20 | | | 1 пробирка | | КО N.men/H.inf/ S.pne | Прозрачная жидкость | 0,26 | | | 1 пробирка | | ВКО-FL | Прозрачная жидкость | 1,10 | | | 1 пробирка | | ОКО | Прозрачная жидкость | 1,10 | | | 1 пробирка | | K- | Прозрачная жидкость | 0,26 | | | 1 пробирка | | Инструкция по применению набора | в электронном виде1 по адресу: nextbio.ru | – | | | – | | Краткое руководство по применению набора | в бумажном виде | – | | | 1 шт. | | Комплект вкладышей к набору | в бумажном виде | – | | | 1 комплект | | Паспорт качества | в электронном виде по адресу: nextbio.ru | – | | | – | | Набор реагентов рассчитан на проведение исследования 100 образцов, включая контроли. | | | | | | ВНИМАНИЕ! Перед использованием набора реагентов необходимо ознакомиться с инструкцией по его применению. Инструкция размещена в электронном виде по адресу nextbio.ru (для ее получения необходим доступ в интернет). Печатная версия инструкции доступна по запросу по телефону Краткое руководство (495) 620-08-73. по применению набора реагентов для выявления и количественного определения ДНК Neisseria meningitidis, Haemophilus influenzae и Streptococcus pneumoniae методом полимеразной цепной реакции с детекцией в режиме «реального времени» МАТЕРИАЛ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ «АмплиПрайм® N. meningitidis / H. influenzae / ✓ цельная кровь; S. pneumoniae» ✓ ликвор; по ТУ 20.59.52-273-09286667-2025 ✓ мазки со слизистой носоглотки; АмплиПрайм N. meningitidis / ✓ культуры микроорганизмов. H. influenzae / S. pneumoniae Форма выпуска 1 Р2214-41 ООО «НекстБио», Россия, 111394, г. Москва, ул. Полимерная, д. 8, стр. 2 тел. (495) 620-08-73, е-mail: info@nextbio.ru СОСТАВ ХРАНЕНИЕ Условия хранения набора Набор хранить при температуре от 2 до 8 °С в защищенном от света месте в течение всего срока годности набора. Не допускается замораживание реагентов. Реагенты после вскрытия хранить в тех же условиях, что и реагенты до вскрытия. Невскрытые и вскрытые реагенты стабильны в течение срока годности, указанного на этикетке, при соблюдении указанных условий хранения. Набор, хранившийся с нарушением указанного режима хранения, применению не подлежит. 1 Печатная версия инструкции доступна по запросу по телефону (495) 620-08-73. Версия 13.04.26-2 1 | | Добавляемый реагент / образец | | | | | Внести по 10 мкл | | | | ПЦР-буфер-К | | в пробирки с ПЦР-смесью N.men/H.inf/S.pne на поверхность парафина ВНИМАНИЕ! ПЦР-буфер-К не должен проваливаться под парафин. | | | | Внести по 10 мкл | | | | | ВНИМАНИЕ! Избегать попадания сорбента в реакционную смесь. | | | | Пробы ДНК, экстрагированной из исследуемого образца | | в пробирки для исследуемых образцов | | | Пробы, экстрагированной из ОКО | | в пробирку для образца ОКО (отрицательного контроля экстракции) | | | Реагент К- | | в пробирку для образца К- (отрицательного контроля ПЦР) | | | КО N.men/H.inf/S.pne | | в пробирку для образца КО N.men/H.inf/S.pne | | | Цикл | Температура, °С | Время | | Детекция по каналам для | | | Количество | | | | | | | флуорофоров | | | циклов | | | 1 | 50 | 15 мин | – | | | 1 | | | | 2 | 95 | 15 мин | – | | | 1 | | | | 3 | 95 | 10 с | – | | | 45 | | | | | 60 | 20 с | FAM, R6G3, ROX, Cy5 | | | | | | ЭКСТРАКЦИЯ ДНК ИЗ ИССЛЕДУЕМОГО МАТЕРИАЛА Для экстракции ДНК использовать наборы реагентов, рекомендованные Производителем в инструкции по применению набора «АмплиПрайм® N. meningitidis / H. influenzae / S. pneumoniae». Порядок работы с наборами для экстракции ДНК смотрите в инструкции по их применению. Объемы реагентов и исследуемых образцов, используемые при экстракции ДНК с помощью рекомендуемых наборов реагентов, указаны в таблице ниже. Добавляемый реагент / образец ВКО-FL 10 мкл в каждую пробирку Исследуемые образцы 100 мкл в пробирки для исследуемых образцов ОКО 100 мкл в пробирку для ОКО (отрицательного контроля экстракции) Реагент для элюции ДНК 50 - 1002 мкл в каждую пробирку АМПЛИФИКАЦИЯ С ДЕТЕКЦИЕЙ В РЕЖИМЕ «РЕАЛЬНОГО ВРЕМЕНИ» ВНИМАНИЕ! Для внесения в пробирки реагентов, проб ДНК и контрольных образцов использовать одноразовые наконечники с фильтрами. 1. Отобрать необходимое количество пробирок с ПЦР-смесью N.men/H.inf/S.pne для амплификации ДНК исследуемых и контрольных образцов. 2. Внести в подготовленные пробирки ПЦР-буфер-К и образцы согласно таблице: 3. При ручном анализе запрограммировать амплификатор с системой детекции в режиме «реального времени» согласно инструкции по его применению для выполнения следующей программы: Единая программа амплификации и детекции флуоресцентного сигнала Примечания: 1) Рекомендуемые параметры для программирования амплификаторов указаны во вкладыше, прилагаемом к набору. 2) В случае, если в одном приборе одновременно проводятся тесты только для выявления ДНК, можно удалить из указанной программы первый шаг (50 °С – 15 мин) для экономии времени. 2 50-90 мкл при использовании комплекта реагентов «АмплиПрайм РИБО-преп», 100 мкл при использовании наборов реагентов «МагноПрайм ЮНИ» или «МагноПрайм® ФАСТ-Р». 3 Детекция сигнала для флуорофора R6G осуществляется по каналу детекции для аналогичных флуорофоров HEX, JOE, Yellow, VIC. Версия 13.04.26-2 2 ВНИМАНИЕ! При использовании программного обеспечения FRT Manager программирование амплификатора устанавливается автоматически. 4. Перед постановкой в амплификатор планшетного типа осадить капли со стенок пробирок кратким центрифугированием. 5. Установить пробирки в ячейки реакционного модуля прибора. 6. Запустить выполнение программы амплификации с детекцией флуоресцентного сигнала. 7. Прибор проводит регистрацию флуоресцентного сигнала автоматически в режиме «реального времени». АНАЛИЗ, ВЫЧИСЛЕНИЕ И ИНТЕРПРЕТАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ ВНИМАНИЕ! При ручном анализе обработку данных (флуоресцентных кривых), полученных в программном обеспечении прибора, используемого для проведения ПЦР c детекцией в режиме «реального времени», проводить согласно инструкции по его применению. Рекомендуемые параметры для обработки данных указаны во вкладыше, прилагаемом к набору. Анализ, вычисление и интерпретацию результатов можно проводить: - в качественном и количественном формате в автоматическом режиме с использованием программного обеспечения FRT Manager (ООО «ИЛС», Россия) согласно руководству пользователя, выбрав методику, указанную во вкладыше, прилагаемом к набору. Руководство пользователя размещено на официальном сайте ООО «ИЛС» по адресу: https://www.interlabservice.ru/service/frt/; - в качественном формате в ручном режиме с помощью программного обеспечения прибора, используемого для проведения ПЦР c детекцией в режиме «реального времени», согласно инструкции по его применению и инструкции к набору. Версия 13.04.26-2 3 Лист регистрации изменений Номера листов Всего Номер Изменения Изм. изменен заменен аннулиро листов в извещения об Дата новых внес ных ных ванных документе изменении 09286667.097. 1 ‒ 1 - 3 4 ‒ 4 Павленко С.В. 13.04.2026 4/4-2026 Версия 13.04.26-2 4 | Компонент | Описание | | Объем, | | Количество | | | | | мл | | | | ПЦР-смесь N.men/H.inf/S.pne | Прозрачная жидкость | 1,20 | | | 1 пробирка | | ПЦР-буфер-Н | Прозрачная жидкость | 0,65 | | | 1 пробирка | | КО N.men/H.inf/S.pne | Прозрачная жидкость | 0,26 | | | 1 пробирка | | ВКО-FL | Прозрачная жидкость | 1,10 | | | 1 пробирка | | ОКО | Прозрачная жидкость | 1,10 | | | 1 пробирка | | K- | Прозрачная жидкость | 0,26 | | | 1 пробирка | | Инструкция по применению набора | в электронном виде1 по адресу: nextbio.ru | – | | | – | | Краткое руководство по применению набора | в бумажном виде | – | | | 1 шт. | | Комплект вкладышей к набору | в бумажном виде | – | | | 1 комплект | | Паспорт качества | в электронном виде по адресу: nextbio.ru | – | | | – | | Набор реагентов рассчитан на проведение исследования 100 образцов, включая контроли. | | | | | | ВНИМАНИЕ! Перед использованием набора реагентов необходимо ознакомиться с инструкцией по его применению. Инструкция размещена в электронном виде по адресу: nextbio.ru (для ее получения необходим доступ в интернет). Печатная версия инструкции доступна по запросу по телефону Краткое руководство (495) 620-08-73. по применению набора реагентов для выявления и количественного определения ДНК Neisseria meningitidis, Haemophilus influenzae и Streptococcus pneumoniae методом полимеразной цепной реакции с детекцией в режиме «реального времени» МАТЕРИАЛ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ «АмплиПрайм® N. meningitidis / H. influenzae / ✓ цельная кровь; S. pneumoniae» ✓ ликвор; по ТУ 20.59.52-273-09286667-2025 ✓ мазки со слизистой носоглотки; АмплиПрайм N. meningitidis / ✓ культуры микроорганизмов. H. influenzae / S. pneumoniae Форма выпуска 2 2214-42 ООО «НекстБио», Россия, 111394, г. Москва, ул. Полимерная, д. 8, стр. 2 тел. (495) 620-08-73, е-mail: info@nextbio.ru СОСТАВ ХРАНЕНИЕ Условия хранения набора Набор хранить при температуре от 2 до 8 °С в защищенном от света месте в течение всего срока годности набора. Не допускается замораживание реагентов. Реагенты вскрытия хранить в тех же условиях, что и реагенты до после вскрытия. Невскрытые и вскрытые реагенты стабильны в течение срока годности, указанного на этикетке, при соблюдении указанных условий хранения. Набор, хранившийся с нарушением указанного режима хранения, применению не подлежит. ВНИМАНИЕ! Реакционная смесь, приготовленная из ПЦР-смеси N.men/H.inf/S.pne и ПЦР-буфера-Н, входящих в состав формы выпуска 2, хранению не подлежит. 1 Печатная версия инструкции доступна по запросу по телефону (495) 620-08-73. Версия 13.04.26-2 1 | | Добавляемый реагент / образец | | | | | Внести по 15 мкл | | | | Приготовленной реакционной смеси | | в пробирки для исследуемых и контрольных образцов | | | | Внести по 10 мкл | | | | | ВНИМАНИЕ! Избегать попадания сорбента в реакционную смесь. | | | | Пробы ДНК, экстрагированной из исследуемого образца | | в пробирки для исследуемых образцов | | | Пробы, экстрагированной из ОКО | | в пробирку для образца ОКО (отрицательного контроля экстракции) | | | Реагент К- | | в пробирку для образца К- (отрицательного контроля ПЦР) | | | КО N.men/H.inf/S.pne | | в пробирку для образца КО N.men/H.inf/S.pne | | ЭКСТРАКЦИЯ ДНК ИЗ ИССЛЕДУЕМОГО МАТЕРИАЛА Для экстракции ДНК использовать наборы реагентов, рекомендованные Производителем в инструкции по применению набора «АмплиПрайм® N. meningitidis / H. influenzae / S. pneumoniae». Порядок работы с наборами для экстракции ДНК смотрите в инструкции по их применению. Объемы реагентов и исследуемых образцов, используемые при экстракции ДНК с помощью рекомендуемых наборов реагентов, указаны в таблице ниже. Добавляемый реагент / образец ВКО-FL 10 мкл в каждую пробирку Исследуемые образцы 100 мкл в пробирки для исследуемых образцов ОКО 100 мкл в пробирку для ОКО (отрицательного контроля экстракции) Реагент для элюции ДНК 50 - 1002 мкл в каждую пробирку АМПЛИФИКАЦИЯ С ДЕТЕКЦИЕЙ В РЕЖИМЕ «РЕАЛЬНОГО ВРЕМЕНИ» ВНИМАНИЕ! Для внесения в пробирки реагентов, проб ДНК и контрольных образцов использовать одноразовые наконечники с фильтрами. 1. Рассчитать объемы реагентов, необходимые для приготовления реакционной смеси, согласно таблице: Компонент реакционной смеси Объем, мкл Обозначения ПЦР-смесь N.men/H.inf/S.pne 10,0*(N+1) N – количество амплифицируемых образцов, ПЦР-буфер-Н 5,0*(N+1) включая контроли ВНИМАНИЕ! Компоненты реакционной смеси следует смешивать непосредственно перед проведением ПЦР. ВНИМАНИЕ! В случае приготовления реакционной смеси с помощью автоматической станции следуйте указаниям инструкции по ее использованию. 2. Перед смешиванием реагентов перемешать содержимое пробирок с ПЦР-смесью N.men/H.inf/S.pne и ПЦР-буфером-Н на вортексе, осадить капли кратким центрифугированием. 3. Приготовить реакционную смесь в отдельной пробирке, добавив компоненты в объемах, рассчитанных в п. 1. Перемешать смесь на вортексе и осадить капли кратким центрифугированием. 4. Отобрать необходимое количество пробирок или стрипов для амплификации ДНК исследуемых и контрольных образцов. Выбор пробирок для амплификации зависит от используемого амплификатора с системой детекции в режиме «реального времени». 5. Внести в подготовленные пробирки реакционную смесь и образцы согласно таблице: ВНИМАНИЕ! Неиспользованные остатки реакционной смеси хранению не подлежат. 2 50-90 мкл при использовании комплекта реагентов «АмплиПрайм РИБО-преп», 100 мкл при использовании наборов реагентов «МагноПрайм ЮНИ» или «МагноПрайм® ФАСТ-Р». Версия 13.04.26-2 2 | Цикл | Температура, °С | Время | | Детекция по каналам для | | | Количество | | | | | | | флуорофоров | | | циклов | | | 1 | 50 | 15 мин | – | | | 1 | | | | 2 | 95 | 15 мин | – | | | 1 | | | | 3 | 95 | 10 с | – | | | 45 | | | | | 60 | 20 с | FAM, R6G3, ROX, Cy5 | | | | | | 6. При ручном анализе запрограммировать амплификатор с системой детекции в режиме «реального времени» согласно инструкции по его применению для выполнения следующей программы: Единая программа амплификации и детекции флуоресцентного сигнала Примечания: 1) Рекомендуемые параметры для программирования амплификаторов указаны во вкладыше, прилагаемом к набору. 2) В случае, если в одном приборе одновременно проводятся тесты только для выявления ДНК, можно удалить из указанной программы первый шаг (50 °С – 15 мин) для экономии времени. ВНИМАНИЕ! При использовании программного обеспечения FRT Manager программирование амплификатора устанавливается автоматически. 7. Перед постановкой в амплификатор планшетного типа осадить капли со стенок пробирок кратким центрифугированием. 8. Установить пробирки или стрипы в ячейки реакционного модуля прибора. 9. Запустить выполнение программы амплификации с детекцией флуоресцентного сигнала. 10. Прибор проводит регистрацию флуоресцентного сигнала автоматически в режиме «реального времени». АНАЛИЗ, ВЫЧИСЛЕНИЕ И ИНТЕРПРЕТАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ ВНИМАНИЕ! При ручном анализе обработку данных (флуоресцентных кривых), полученных в программном обеспечении прибора, используемого для проведения ПЦР c детекцией в режиме «реального времени», проводить согласно инструкции по его применению. Рекомендуемые параметры для обработки данных указаны во вкладыше, прилагаемом к набору. Анализ, вычисление и интерпретацию результатов можно проводить: - в качественном и количественном формате в автоматическом режиме с использованием программного обеспечения FRT Manager (ООО «ИЛС», Россия) согласно руководству пользователя, выбрав методику, указанную во вкладыше, прилагаемом к набору. Руководство пользователя размещено на официальном сайте ООО «ИЛС» по адресу: https://www.interlabservice.ru/service/frt/; - в качественном формате в ручном режиме с помощью программного обеспечения прибора, используемого для проведения ПЦР c детекцией в режиме «реального времени», согласно инструкции по его применению и инструкции к набору. 3 Детекция сигнала для флуорофора R6G осуществляется по каналу детекции для аналогичных флуорофоров HEX, JOE, Yellow, VIC. Версия 13.04.26-2 3 Лист регистрации изменений Номера листов Всего Номер Изменения Изм. изменен заменен аннулиро листов в извещения об Дата новых внес ных ных ванных документе изменении 09286667.097. 1 ‒ 1 - 3 4 ‒ 4 Павленко С.В. 13.04.2026 4/4-2026 Версия 13.04.26-2 4 | Компонент | Описание | | Объем, | | Количество | | | | | мл | | | | ПЦР-смесь N.men/H.inf/ S.pne | Прозрачная жидкость, раскапана под парафин белого цвета | 0,01 | | | 100 пробирок (12,5 стрипов по 8 пробирок)1 | | ПЦР-буфер-K | Прозрачная жидкость красного цвета | 1,20 | | | 1 пробирка | | КО N.men/ H.inf/S.pne | Прозрачная жидкость | 0,26 | | | 1 пробирка | | ВКО-FL | Прозрачная жидкость | 1,10 | | | 1 пробирка | | ОКО | Прозрачная жидкость | 1,10 | | | 1 пробирка | | K- | Прозрачная жидкость | 0,26 | | | 1 пробирка | | Инструкция по применению набора | в электронном виде2 по адресу: nextbio.ru | – | | | – | | Краткое руководство по применению набора | в бумажном виде | – | | | 1 шт. | | Комплект вкладышей к набору | в бумажном виде | – | | | 1 комплект | | Паспорт качества | в электронном виде по адресу: nextbio.ru | – | | | – | | Набор реагентов рассчитан на проведение исследования 100 образцов, включая контроли. | | | | | | ВНИМАНИЕ! Перед использованием набора реагентов необходимо ознакомиться с инструкцией по его применению. Инструкция размещена в электронном виде по адресу: nextbio.ru (для ее получения необходим доступ в интернет). Печатная версия инструкции доступна по запросу по телефону Краткое руководство (495) 620-08-73. по применению набора реагентов для выявления и количественного определения ДНК Neisseria meningitidis, Haemophilus influenzae и Streptococcus pneumoniae методом полимеразной цепной реакции с детекцией в режиме «реального времени» МАТЕРИАЛ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ «АмплиПрайм® N. meningitidis / H. influenzae / ✓ цельная кровь; S. pneumoniae» ✓ ликвор; по ТУ 20.59.52-273-09286667-2025 ✓ мазки со слизистой носоглотки; АмплиПрайм N. meningitidis / ✓ культуры микроорганизмов. H. influenzae / S. pneumoniae Форма выпуска 3 Р2214-43 ООО «НекстБио», Россия, 111394, г. Москва, ул. Полимерная, д. 8, стр. 2 тел. (495) 620-08-73, е-mail: info@nextbio.ru СОСТАВ ХРАНЕНИЕ Условия хранения набора Набор хранить при температуре от 2 до 8 °С в защищенном от света месте в течение всего срока годности набора. Не допускается замораживание реагентов. Реагенты после вскрытия хранить в тех же условиях, что и реагенты до вскрытия. Невскрытые и вскрытые реагенты стабильны в течение срока годности, указанного на этикетке, при соблюдении указанных условий хранения. Набор, хранившийся с нарушением указанного режима хранения, применению не подлежит. 1 Пробирки с голубым парафином не используются. 2 Печатная версия инструкции доступна по запросу по телефону (495) 620-08-73. Версия 13.04.26-2 1 | | Добавляемый реагент / образец | | | | | Внести по 10 мкл | | | | ПЦР-буфер-К | | в пробирки с ПЦР-смесью N.men/H.inf/S.pne на поверхность парафина ВНИМАНИЕ! ПЦР-буфер-К не должен проваливаться под парафин. | | | | Внести по 10 мкл | | | | | ВНИМАНИЕ! Избегать попадания сорбента в реакционную смесь. | | | | Пробы ДНК, экстрагированной из исследуемого образца | | в пробирки для исследуемых образцов | | | Пробы, экстрагированной из ОКО | | в пробирку для образца ОКО (отрицательного контроля экстракции) | | | Реагент К- | | в пробирку для образца К- (отрицательного контроля ПЦР) | | | КО N.men/H.inf/S.pne | | в пробирку для образца КО N.men/H.inf/S.pne | | | Цикл | Температура, °С | Время | | Детекция по каналам для | | | Количество | | | | | | | флуорофоров | | | циклов | | | 1 | 50 | 15 мин | – | | | 1 | | | | 2 | 95 | 15 мин | – | | | 1 | | | | 3 | 95 | 10 с | – | | | 45 | | | | | 60 | 20 с | FAM, R6G4, ROX, Cy5 | | | | | | ЭКСТРАКЦИЯ ДНК ИЗ ИССЛЕДУЕМОГО МАТЕРИАЛА Для экстракции ДНК использовать наборы реагентов, рекомендованные Производителем в инструкции по применению набора «АмплиПрайм® N. meningitidis / H. influenzae / S. pneumoniae». Порядок работы с наборами для экстракции ДНК смотрите в инструкции по их применению. Объемы реагентов и исследуемых образцов, используемые при экстракции ДНК с помощью рекомендуемых наборов реагентов, указаны в таблице ниже. Добавляемый реагент / образец ВКО-FL 10 мкл в каждую пробирку Исследуемые образцы 100 мкл в пробирки для исследуемых образцов ОКО 100 мкл в пробирку для ОКО (отрицательного контроля экстракции) Реагент для элюции ДНК 50 - 1003 мкл в каждую пробирку АМПЛИФИКАЦИЯ С ДЕТЕКЦИЕЙ В РЕЖИМЕ «РЕАЛЬНОГО ВРЕМЕНИ» ВНИМАНИЕ! Для внесения в пробирки реагентов, проб ДНК и контрольных образцов использовать одноразовые наконечники с фильтрами. 1. Отобрать необходимое количество стрипов с ПЦР-смесью N.men/H.inf/S.pne для амплификации ДНК исследуемых и контрольных образцов. 2. Внести в подготовленные пробирки ПЦР-буфер-К и образцы согласно таблице: 3. При ручном анализе запрограммировать амплификатор с системой детекции в режиме «реального времени» согласно инструкции по его применению для выполнения следующей программы: Единая программа амплификации и детекции флуоресцентного сигнала Примечания: 1) Рекомендуемые параметры для программирования амплификаторов указаны во вкладыше, прилагаемом к набору. 2) В случае, если в одном приборе одновременно проводятся тесты только для выявления ДНК, можно удалить из указанной программы первый шаг (50 °С – 15 мин) для экономии времени. 3 50-90 мкл при использовании комплекта реагентов «АмплиПрайм РИБО-преп», 100 мкл при использовании наборов реагентов «МагноПрайм ЮНИ» или «МагноПрайм® ФАСТ-Р». 4 Детекция сигнала для флуорофора R6G осуществляется по каналу детекции для аналогичных флуорофоров HEX, JOE, Yellow, VIC. Версия 13.04.26-2 2 ВНИМАНИЕ! При использовании программного обеспечения FRT Manager программирование амплификатора устанавливается автоматически. 4. Перед постановкой в амплификатор планшетного типа осадить капли со стенок пробирок кратким центрифугированием. 5. Установить стрипы в ячейки реакционного модуля прибора. 6. Запустить выполнение программы амплификации с детекцией флуоресцентного сигнала. 7. Прибор проводит регистрацию флуоресцентного сигнала автоматически в режиме «реального времени». АНАЛИЗ, ВЫЧИСЛЕНИЕ И ИНТЕРПРЕТАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ ВНИМАНИЕ! При ручном анализе обработку данных (флуоресцентных кривых), полученных в программном обеспечении прибора, используемого для проведения ПЦР c детекцией в режиме «реального времени», проводить согласно инструкции по его применению. Рекомендуемые параметры для обработки данных указаны во вкладыше, прилагаемом к набору. Анализ, вычисление и интерпретацию результатов можно проводить: - в качественном и количественном формате в автоматическом режиме с использованием программного обеспечения FRT Manager (ООО «ИЛС», Россия) согласно руководству пользователя, выбрав методику, указанную во вкладыше, прилагаемом к набору. Руководство пользователя размещено на официальном сайте ООО «ИЛС» по адресу: https://www.interlabservice.ru/service/frt/; - в качественном формате в ручном режиме с помощью программного обеспечения прибора, используемого для проведения ПЦР c детекцией в режиме «реального времени», согласно инструкции по его применению и инструкции к набору. Версия 13.04.26-2 3 Лист регистрации изменений Номера листов Всего Номер Изменения Изм. изменен заменен аннулиро листов в извещения об Дата новых внес ных ных ванных документе изменении 09286667.097. 1 ‒ 1 - 3 4 ‒ 4 Павленко С.В. 13.04.2026 4/4-2026 Версия 13.04.26-2 4 | РЕАГЕНТОВ ДЛЯ ВЫ | ЯВЛЕНИЯ И КОЛИЧЕСТВЕНН | | EISSERIA MENINGITID | IS, HAEMOPHILUS INFLUENZA | | PNEUMONIAE МЕТО | ДОМ ПОЛИМЕРАЗНОЙ ЦЕПН | | С ДЕТЕКЦИЕЙ | В РЕЖИМЕ « РЕАЛЬНОГО ВР | | ПЛИПРАЙМ® N. ME | NINGITIDIS / Н. INFLUENZAE / | | ПО ТУ | 20.59.52-273-09286667-2025 | | | Комплект вкладышей | УТВЕРЖДАЮ НАБОР НОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ ДНК NE AE И STREPTOCOCCUS НОЙ РЕАКЦИИ ЕМЕНИ» « АМ / S. PNEUMONIAE» Лист утверждения | Канал | Calibrate/Gain Optimisation…/ Опт.уровня сигн. | Threshold/ Порог | More Settings/ | | Slope | | Динамический фон | Исключить циклы | | | | | Outlier Removal/ | | Correct/ | | | | | | | | Устранение | | Коррект. | | | | | | | | выбросов | | уклона | | | | | | от 5 Fl до 10 Fl | 0,05 | 10-20% | включена | | | включен | | | | от 5 Fl до 10 Fl | 0,07 | 5-15% | включена | | | включен | | | | от 5 Fl до 10 Fl | 0,05 | 10-20% | включена | | | включен | | | | от 5 Fl до 10 Fl | 0,07 | 5-15% | включена | | | включен | | ООО «НекстБио», Россия,111394, г. Москва, ул. Полимерная, д. 8, стр. 2, тел. (495) 620-08-73, e-mail: info@nextbio.ru ВКЛАДЫШ1 АмплиПрайм® N. meningitidis / H. influenzae / S. pneumoniae Набор реагентов для выявления и количественного определения ДНК Neisseria meningitidis, Haemophilus influenzae и Streptococcus pneumoniae методом полимеразной цепной реакции с детекцией в режиме «реального времени» «АмплиПрайм® N. meningitidis / H. influenzae / S. pneumoniae» по ТУ 20.59.52-273-09286667-2025 ФОРМА ВЫПУСКА Х X X 1. РЕКОМЕНДУЕМЫЕ НАСТРОЙКИ ДЛЯ ПРИБОРОВ РОТОРНОГО ТИПА При запуске прибора в окне «Автооптимизация уровня сигнала» активировать функцию «Выполнить оптимизацию при первом шаге детекции». 2. РЕКОМЕНДУЕМЫЕ НАСТРОЙКИ ДЛЯ ПРИБОРОВ ПЛАНШЕТНОГО ТИПА 2.1. Общие настройки Канал Threshold / Порог Исключить циклы Пороговая линия для канала устанавливается на уровне, соответствующем 10-20% от FAM максимального уровня флуоресценции, полученного для контрольного образца «ОКО» от 1 до 5 в последнем цикле амплификации. R6G Пороговая линия для каждого канала устанавливается на уровне, соответствующем ROX 10-20% от максимального уровня флуоресценции, полученного для контрольного от 1 до 5 образца «КО N.men/H.inf/S.pne» в последнем цикле амплификации. Cy5 2.2. Настройки для прибора «CFX96» Параметр Шаг этапа циклирования Ramp Rate 95 °С 2,5 °С/sec Step Options 60 °С 2,5 °С/sec 2.3. Настройки для прибора «Lepgen-96» Перекрытие сигнала относительно канала Перекрываемый канал FAM R6G ROX Cy5 FAM 0 0 0 0 R6G 0 0 0 0 ROX 0 0 0 0 Cy5 0 0 0 0 2.4. Настройки для прибора «ДТпрайм» Критерий положительного Метод Тип анализа Каналы результата ПЦР Ct (Cp) Пороговый (Ct) FAM, R6G, ROX, Cy5 70% для всех каналов 1 Информация, представленная во вкладыше, является переменной и меняется в зависимости от партии набора. 2 Детекция сигнала для флуорофора R6G осуществляется по каналу детекции для аналогичных флуорофоров HEX, JOE и VIC. | | Канал | | | Настройка Crosstallk Setting МА-3200Q | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | 1 | | | 1 - 2* | | 0 | | -3* | | 0 | | -4* | | 0 | | -5* | | 0 | | -6* | | | | | 2 | | | 2 - 1* | | 0 | | -3* | | 0 | | -4* | | 0 | | -5* | | 0 | | -6* | | | | | 3 | | | 3 - 1* | | 0 | | -2* | | 0 | | -4* | | 0 | | -5* | | 0 | | -6* | | | | | 4 | | | 4 - 1* | | 0 | | -2* | | 0 | | -3* | | 0 | | -5* | | 0 | | -6* | | | | | 5 | | | 5 - 1* | | 0 | | -2* | | 0 | | -3* | | 0 | | -4* | | 0 | | -6* | | | | | - | | | 6 - 1* | | 0 | | -2* | | 0 | | -3* | | 0 | | -4* | | 0 | | -5* | | | | | Канал | | | Настройка Crosstallk Setting МА-1640Q | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | 1 | | | 1 - 2* | | 0 | | -3* | | 0 | | -4* | | 0 | | -5* | | 0 | | -6* | | | | | 2 | | | 2 - 1* | | 0,05 | | -3* | | 0 | | -4* | | 0 | | -5* | | 0 | | -6* | | | | | 3 | | | 3 - 1* | | 0 | | -2* | | 0 | | -4* | | 0 | | -5* | | 0 | | -6* | | | | | 4 | | | 4 - 1* | | 0 | | -2* | | 0 | | -3* | | 0 | | -5* | | 0 | | -6* | | | | | 5 | | | 5 - 1* | | 0 | | -2* | | 0 | | -3* | | 0 | | -4* | | 0 | | -6* | | | | | - | | | 6 - 1* | | 0 | | -2* | | 0 | | -3* | | 0 | | -4* | | 0 | | -5* | | | | | Канал | | | Настройка Crosstallk Setting МА-688 | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | 1 | | | 1= 1 - 2* | | 0 | | -3* | | 0 | | -4* | | 0 | | -5* | | 0 | | - | | | | | 2 | | | 2= 2 - 1* | | 0 | | -3* | | 0 | | -4* | | 0 | | -5* | | 0 | | - | | | | | 3 | | | 3= 3 - 1* | | 0 | | -2* | | 0 | | -4* | | 0 | | -5* | | 0 | | - | | | | | 4 | | | 4= 4 - 1* | | 0 | | -2* | | 0 | | -3* | | 0 | | -5* | | 0 | | - | | | | | 5 | | | 5= 5 - 1* | | 0 | | -2* | | 0 | | -3* | | 0 | | -4* | | 0 | | - | | | | | Канал | | | Настройка Crosstallk Setting МА-9600P | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | 1 | | | 1= 1 - 2* | | 0 | | -3* | | 0 | | -4* | | 0 | | - | | - | | - | | | | | 2 | | | 2= 2 - 1* | | 0 | | -3* | | 0 | | -4* | | 0 | | - | | - | | - | | | | | 3 | | | 3= 3 - 1* | | 0 | | -2* | | 0 | | -4* | | 0 | | - | | - | | - | | | | | 4 | | | 4= 4 - 2* | | 0 | | -3* | | 0 | | -5* | | 0 | | - | | - | | - | | | | | 5 | | | 5= 5 - 2* | | 0 | | -3* | | 0 | | -4* | | 0 | | - | | - | | - | | | | | Канал | | | Настройка Crosstallk Setting МА-5000 | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | | 1 | | | 1= 1 - 2* | | 0 | | -3* | | 0 | | -4* | | 0 | | - | | - | | - | | | | | 2 | | | 2= 2 - 1* | | 0 | | -3* | | 0,1 | | -4* | | 0 | | - | | - | | - | | | | | 3 | | | 3= 3 - 1* | | 0 | | -2* | | 0 | | -4* | | 0 | | - | | - | | - | | | | | 4 | | | 4= 4 - 2* | | 0 | | -3* | | 0 | | -5* | | 0 | | - | | - | | - | | | | | 5 | | | 5= 5 - 2* | | 0 | | -3* | | 0 | | -4* | | 0 | | - | | - | | - | | | 2.5. Настройки для приборов серии «МА» 3. ХАРАКТЕРИСТИКА КАЛИБРАТОРОВ Значения концентрации по каналу для флуорофора, ГЭ/мл Калибратор R6G ROX Cy5 КО N.men/H.inf/S.pne 100000 ± 10000 100000 ± 10000 100000 ± 10000 4. ГРАНИЧНЫЕ ЗНАЧЕНИЯ ПОРОГОВОГО ЦИКЛА (Сt) Канал для флуорофора / Граничное значение Сt Образец мишень Прибор роторного типа Прибор планшетного типа FAM / ДНК ВКО-FL ≤ 29,0 ≤ 32,0 R6G / ДНК Haemophilus ≤ 42,0 ≤ 42,0 influenzae Исследуемые образцы ROX / ДНК Streptococcus ≤ 42,0 ≤ 42,0 pneumoniae Cy5 / ДНК Neisseria ≤ 42,0 ≤ 42,0 meningitidis ОКО FAM ≤ 29,0 ≤ 32,0 R6G ≤ 29,0 ≤ 32,0 КО ROX ≤ 32,0 ≤ 34,0 N.men/H.inf/S.pne Cy5 ≤ 29,0 ≤ 32,0 ВКЛАДЫШ1 для автоматической обработки результатов к набору «АмплиПрайм® N. meningitidis / H. influenzae / S. pneumoniae» Группа совместимости: Х Кат. №: Х Партия: Х Срок годности до: ГГГГ-ММ-ДД Методика: Х Группа совместимости: Х Прибор: Х Штрих-коды: Поле для штрих-кода 1 Информация, представленная во вкладыше, является переменной и меняется в зависимости от партии набора. | | | УТВЕРЖД | АЮ | | | | Генераль | ный | | | | ООО « Не | кет | | | / | №Ь БИ | ” О | | РЕАГЕНТОВ ДЛЯ ВЫЯ | ВЛЕНИЯ | | Е | | EISSERIA MENINGITIDIS, | HAEMO | PHILUS I | NF | | PNEUMONIAE МЕТОДО | М ПОЛ | ИМЕРАЗ | НО | | С ДЕТЕКЦИЕЙ В | РЕЖИМ | Е « РЕАЛЬ | НО | | ПЛИПРАЙМ® N. MENI | NGITIDI | S / Н. INF | LUE | | ПО ТУ 20 | .59.52-2 | 73-0928 | 666 | | | Форма | выпуска | 1 | | | Форма | выпуска | 2 | | | Форма | выпуска | 3 | I директор тБи^^ М. Е. Сенина Ш НАБОР СТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ ДНК NE LUENZAE И STREPTOCOCCUS Й ЦЕПНОЙ РЕАКЦИИ ОГО ВРЕМЕНИ» « АМ ENZAE / S. PNEUMONIAE'» 67-2025 Шаблон паспорта качества Лист утверждения | Показатель | Норма | | Результаты | | | | | | контроля | | | Предел обнаружения | | | | | | Выявление ДНК Neisseria meningitidis, Haemophilus influenzae и Streptococcus pneumoniae при исследовании разведения стандартных образцов предприятия «СОП 266-22 ДНК H.inf», «СОП 526-22 ДНК S.pne», «СОП 765-24 ДНК N. meningitidis» до концентрации 1×103 копий/мл | ДНК Neisseria meningitidis, Haemophilus influenzae, Streptococcus pneumoniae обнаружена. | соответствует | | | | Предел измерения | | | | | | Количественное определение ДНК Neisseria meningitidis, Haemophilus influenzae и Streptococcus pneumoniae при исследовании разведения стандартных образцов предприятия «СОП 266-22 ДНК H.inf», «СОП 526-22 ДНК S.pne», «СОП 765-24 ДНК N. meningitidis» до концентрации 5×103 копий/мл | Получен количественный результат, укладывающийся в диапазон 1,6×103 – 1,6×104 ГЭ/мл. | соответствует | | | ООО «НекстБио», Россия,111394, г. Москва, ул. Полимерная, д. 8, стр. 2, тел. (495) 620-08-73, e-mail: info@nextbio.ru ПАСПОРТ КАЧЕСТВА № номер лота/Р2214-41 АмплиПрайм® N. meningitidis / H. influenzae / S. pneumoniae х Набор реагентов для выявления и количественного определения ДНК Neisseria meningitidis, Haemophilus influenzae и Streptococcus pneumoniae методом полимеразной цепной реакции с детекцией в режиме «реального времени» гггг-мм-дд «АмплиПрайм® N. meningitidis / H. influenzae / S. pneumoniae» по ТУ 20.59.52-273-09286667-2025 ФОРМА ВЫПУСКА 1 гггг-мм-дд Контроль качества проведен по ТУ 20.59.52-273-09286667-2025. 1. УПАКОВКА И МАРКИРОВКА НАБОРА Упаковка и маркировка набора указанной партии соответствуют требованиям ТУ 20.59.52-273-09286667-2025. 2. СОСТАВ НАБОРА И ВНЕШНИЙ ВИД КОМПОНЕНТОВ Результаты Компонент Норма контроля 100 пробирок. Прозрачная жидкость, раскапана под парафин ПЦР-смесь N.men/H.inf/S.pne соответствует белого цвета. ПЦР-буфер-K 1 пробирка. Прозрачная жидкость красного цвета. соответствует КО N.men/H.inf/S.pne 1 пробирка. Прозрачная жидкость. соответствует ВКО-FL 1 пробирка. Прозрачная жидкость. соответствует ОКО 1 пробирка. Прозрачная жидкость. соответствует К- 1 пробирка. Прозрачная жидкость. соответствует Инструкция по применению набора в электронном виде по адресу: nextbio.ru соответствует Краткое руководство по применению 1 шт., в бумажном виде соответствует набора Комплект вкладышей к набору 1 комплект, в бумажном виде соответствует Паспорт качества в электронном виде по адресу: nextbio.ru соответствует 3. ФУНКЦИОНАЛЬНЫЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ НАБОРА Результаты тестирования исследуемых образцов и контролей исследования соответствуют критериям валидности, указанным в инструкции по применению набора. 4. УСЛОВИЯ ТРАНСПОРТИРОВАНИЯ И ХРАНЕНИЯ Условия транспортирования Условия хранения Набор хранить при температуре от 2 до 8 °С в защищенном Набор транспортировать при температуре от 2 до 8 °С в течение от света месте в течение всего срока годности набора. 3 месяцев всеми видами крытых транспортных средств в Не допускается замораживание реагентов. термоконтейнерах с хладоэлементами или в авторефрижераторах. Реагенты после вскрытия хранить в тех же условиях, что и Не допускается замораживание реагентов. реагенты до вскрытия. Невскрытые и вскрытые реагенты Допускается транспортирование при температуре от 8 до 25 °С стабильны в течение срока годности, указанного на не более 3 суток. этикетке, при соблюдении указанных условий хранения. Набор, транспортированный с нарушением указанного Набор, хранившийся с нарушением указанного режима температурного режима, применению не подлежит. хранения, применению не подлежит. Дата выдачи паспорта ХХ.ХХ.ХХ Должность печать подразделения подпись (расшифровка) Лист регистрации изменений Номера листов Всего Номер Изменения Изм. изменен заменен аннулиро листов в извещения об Дата новых внес ных ных ванных документе изменении 09286667.097. Павленко 1 ‒ 1 - 2 3 ‒ 3 13.04.2026 4/4-2026 С.В. | Показатель | Норма | | Результаты | | | | | | контроля | | | Предел обнаружения | | | | | | Выявление ДНК Neisseria meningitidis, Haemophilus influenzae и Streptococcus pneumoniae при исследовании разведения стандартных образцов предприятия «СОП 266-22 ДНК H.inf», «СОП 526-22 ДНК S.pne», «СОП 765-24 ДНК N. meningitidis» до концентрации 1×103 копий/мл | ДНК Neisseria meningitidis, Haemophilus influenzae, Streptococcus pneumoniae обнаружена. | соответствует | | | | Предел измерения | | | | | | Количественное определение ДНК Neisseria meningitidis, Haemophilus influenzae и Streptococcus pneumoniae при исследовании разведения стандартных образцов предприятия «СОП 266-22 ДНК H.inf», «СОП 526-22 ДНК S.pne», «СОП 765-24 ДНК N. meningitidis» до концентрации 5×103 копий/мл | Получен количественный результат, укладывающийся в диапазон 1,6×103 – 1,6×104 ГЭ/мл. | соответствует | | | ООО «НекстБио», Россия,111394, г. Москва, ул. Полимерная, д. 8, стр. 2, тел. (495) 620-08-73, e-mail: info@nextbio.ru ПАСПОРТ КАЧЕСТВА № номер лота/2214-42 АмплиПрайм® N. meningitidis / H. influenzae / S. pneumoniae х Набор реагентов для выявления и количественного определения ДНК Neisseria meningitidis, Haemophilus influenzae и Streptococcus pneumoniae методом полимеразной цепной реакции с детекцией в режиме «реального времени» гггг-мм-дд «АмплиПрайм® N. meningitidis / H. influenzae / S. pneumoniae» по ТУ 20.59.52-273-09286667-2025 ФОРМА ВЫПУСКА 2 гггг-мм-дд Контроль качества проведен по ТУ 20.59.52-273-09286667-2025. 1. УПАКОВКА И МАРКИРОВКА НАБОРА Упаковка и маркировка набора указанной партии соответствуют требованиям ТУ 20.59.52-273-09286667-2025. 2. СОСТАВ НАБОРА И ВНЕШНИЙ ВИД КОМПОНЕНТОВ Результаты Компонент Норма контроля ПЦР-смесь N.men/H.inf/S.pne 1 пробирка. Прозрачная жидкость. соответствует ПЦР-буфер-Н 1 пробирка. Прозрачная жидкость. соответствует КО N.men/H.inf/S.pne 1 пробирка. Прозрачная жидкость. соответствует ВКО-FL 1 пробирка. Прозрачная жидкость. соответствует ОКО 1 пробирка. Прозрачная жидкость. соответствует К- 1 пробирка. Прозрачная жидкость. соответствует Инструкция по применению набора в электронном виде по адресу: nextbio.ru соответствует Краткое руководство по применению 1 шт., в бумажном виде соответствует набора Комплект вкладышей к набору 1 комплект, в бумажном виде соответствует Паспорт качества в электронном виде по адресу: nextbio.ru соответствует 3. ФУНКЦИОНАЛЬНЫЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ НАБОРА Результаты тестирования исследуемых образцов и контролей исследования соответствуют критериям валидности, указанным в инструкции по применению набора. 4. УСЛОВИЯ ТРАНСПОРТИРОВАНИЯ И ХРАНЕНИЯ Условия транспортирования Условия хранения Набор хранить при температуре от 2 до 8 °С в защищенном от света месте в течение всего срока годности набора. Не допускается Набор транспортировать при температуре от 2 до 8 °С в замораживание реагентов. течение 3 месяцев всеми видами крытых транспортных Реагенты после вскрытия хранить в тех же условиях, что и реагенты средств в термоконтейнерах с хладоэлементами или в до вскрытия. Невскрытые и вскрытые реагенты стабильны в авторефрижераторах. Не допускается замораживание течение срока годности, указанного на этикетке, при соблюдении реагентов. указанных условий хранения. Допускается транспортирование при температуре от 8 до Набор, хранившийся с нарушением указанного режима хранения, 25 °С не более 3 суток. применению не подлежит. Набор, транспортированный с нарушением указанного ВНИМАНИЕ! Реакционная смесь, приготовленная из температурного режима, применению не подлежит. ПЦР-смеси N.men/H.inf/S.pne и ПЦР-буфера-Н, входящих в состав формы выпуска 2, хранению не подлежит. Дата выдачи паспорта ХХ.ХХ.ХХ Должность печать подразделения подпись (расшифровка) Лист регистрации изменений Номера листов Всего Номер Изменения Изм. изменен заменен аннулиро листов в извещения об Дата новых внес ных ных ванных документе изменении 09286667.097. Павленко 1 ‒ 1 - 2 3 ‒ 3 13.04.2026 4/4-2026 С.В. | Показатель | Норма | | Результаты | | | | | | контроля | | | Предел обнаружения | | | | | | Выявление ДНК Neisseria meningitidis, Haemophilus influenzae и Streptococcus pneumoniae при исследовании разведения стандартных образцов предприятия «СОП 266-22 ДНК H.inf», «СОП 526-22 ДНК S.pne», «СОП 765-24 ДНК N. meningitidis» до концентрации 1×103 копий/мл | ДНК Neisseria meningitidis, Haemophilus influenzae, Streptococcus pneumoniae обнаружена. | соответствует | | | | Предел измерения | | | | | | Количественное определение ДНК Neisseria meningitidis, Haemophilus influenzae и Streptococcus pneumoniae при исследовании разведения стандартных образцов предприятия «СОП 266-22 ДНК H.inf», «СОП 526-22 ДНК S.pne», «СОП 765-24 ДНК N. meningitidis» до концентрации 5×103 копий/мл | Получен количественный результат, укладывающийся в диапазон 1,6×103 – 1,6×104 ГЭ/мл. | соответствует | | | ООО «НекстБио», Россия,111394, г. Москва, ул. Полимерная, д. 8, стр. 2, тел. (495) 620-08-73, e-mail: info@nextbio.ru ПАСПОРТ КАЧЕСТВА № номер лота/Р2214-43 АмплиПрайм® N. meningitidis / H. influenzae / S. pneumoniae х Набор реагентов для выявления и количественного определения ДНК Neisseria meningitidis, Haemophilus influenzae и Streptococcus pneumoniae гггг-мм-дд методом полимеразной цепной реакции с детекцией в режиме «реального времени» «АмплиПрайм® N. meningitidis / H. influenzae / S. pneumoniae» по ТУ 20.59.52-273-09286667-2025 ФОРМА ВЫПУСКА 3 гггг-мм-дд Контроль качества проведен по ТУ 20.59.52-273-09286667-2025. 1. УПАКОВКА И МАРКИРОВКА НАБОРА Упаковка и маркировка набора указанной партии соответствуют требованиям ТУ 20.59.52-273-09286667-2025. 2. СОСТАВ НАБОРА И ВНЕШНИЙ ВИД КОМПОНЕНТОВ Результаты Компонент Норма контроля 100 пробирок (12,5 стрипов по 8 пробирок). Прозрачная жидкость, ПЦР-смесь N.men/H.inf/S.pne соответствует раскапана под парафин белого цвета. ПЦР-буфер-K 1 пробирка. Прозрачная жидкость красного цвета. соответствует КО N.men/H.inf/S.pne 1 пробирка. Прозрачная жидкость. соответствует ВКО-FL 1 пробирка. Прозрачная жидкость. соответствует ОКО 1 пробирка. Прозрачная жидкость. соответствует К- 1 пробирка. Прозрачная жидкость. соответствует Инструкция по применению набора в электронном виде по адресу: nextbio.ru соответствует Краткое руководство по применению 1 шт., в бумажном виде соответствует набора Комплект вкладышей к набору 1 комплект, в бумажном виде соответствует Паспорт качества в электронном виде по адресу: nextbio.ru соответствует 3. ФУНКЦИОНАЛЬНЫЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ НАБОРА Результаты тестирования исследуемых образцов и контролей исследования соответствуют критериям валидности, указанным в инструкции по применению набора. 4. УСЛОВИЯ ТРАНСПОРТИРОВАНИЯ И ХРАНЕНИЯ Условия транспортирования Условия хранения Набор хранить при температуре от 2 до 8 °С в защищенном Набор транспортировать при температуре от 2 до 8 °С в течение от света месте в течение всего срока годности набора. 3 месяцев всеми видами крытых транспортных средств в Не допускается замораживание реагентов. термоконтейнерах с хладоэлементами или в авторефрижераторах. Реагенты после вскрытия хранить в тех же условиях, что и Не допускается замораживание реагентов. реагенты до вскрытия. Невскрытые и вскрытые реагенты Допускается транспортирование при температуре от 8 до 25 °С стабильны в течение срока годности, указанного на не более 3 суток. этикетке, при соблюдении указанных условий хранения. Набор, транспортированный с нарушением указанного Набор, хранившийся с нарушением указанного режима температурного режима, применению не подлежит. хранения, применению не подлежит. Дата выдачи паспорта ХХ.ХХ.ХХ Должность печать подразделения подпись (расшифровка)