Набор реагентов для количественного определения ДНК Ureaplasma parvum и Ureaplasma urealyticum в биологическом материале человека методом ПЦР с детекцией в режиме «реального времени» (Amplitech UP/UU (R)) по ТУ 20.59.52-057-19926214-2025 — инструкция и характеристики
Открытые закупки, где изделие проходит ТЗ
Сейчас открытых закупок, где изделие полностью проходит ТЗ, нет; список обновляется каждый день.
Построчная сверка ТЗ с характеристиками этого изделия и все закупки под ваши товары — в кабинете, 7 дней бесплатно.
Попробовать бесплатно
Текст инструкции: технические характеристики
УТВЕРЖДАЮ Генеральный директор ООО «Амплитек» _________________ А.В. Ходяков ____.____.2026 НАБОР РЕАГЕНТОВ ДЛЯ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ ДНК UREAPLASMA PARVUM И UREAPLASMA UREALYTICUM В БИОЛОГИЧЕСКОМ МАТЕРИАЛЕ ЧЕЛОВЕКА МЕТОДОМ ПЦР С ДЕТЕКЦИЕЙ В РЕЖИМЕ «РЕАЛЬНОГО ВРЕМЕНИ» (AMPLITECH UP/UU (R)) ПО ТУ 20.59.52-057-19926214-2025 Инструкция по применению версии 26.01.26 Лист утверждения Заместитель генерального директора по науке ООО «Амплитек» _________________ А.С. Коновалов 26.01.2026 Руководитель отдела разработки и адаптации продукции ООО «Амплитек» _________________ П.Г. Рыжих 26.01.2026 Amplitech UP/UU (R) Набор реагентов для количественного определения ДНК Ureaplasma parvum и Ureaplasma urealyticum в биологическом материале человека методом ПЦР с детекцией в режиме «реального времени» (Amplitech UP/UU (R)) по ТУ 20.59.52-057-19926214-2025 ИНСТРУКЦИЯ ПО ПРИМЕНЕНИЮ Р042-0 96 СОДЕРЖАНИЕ ВВЕДЕНИЕ ......................................................................................................................... 3 1 НАЗНАЧЕНИЕ .............................................................................................................. 4 2 ОБЛАСТЬ ПРИМЕНЕНИЯ ........................................................................................... 4 3 ПОКАЗАНИЯ К ПРИМЕНЕНИЮ ................................................................................. 4 4 ПРОТИВОПОКАЗАНИЯ К ПРИМЕНЕНИЮ ................................................................ 4 5 СОСТАВ ....................................................................................................................... 5 6 ПРИНЦИП МЕТОДА .................................................................................................... 5 6.1 Прослеживаемость значений положительного контроля ПК U ................................ 6 7 НЕОБХОДИМОЕ ОБОРУДОВАНИЕ И МАТЕРИАЛЫ ............................................... 6 8 РИСКИ ПРИМЕНЕНИЯ И МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ ...................................... 7 8.1 Потенциальный риск применения .............................................................................. 7 8.2. Прямой риск применения ........................................................................................... 7 8.3 Косвенный риск применения ....................................................................................... 7 8.4 Особые указания и меры предосторожности ............................................................ 7 9 ИССЛЕДУЕМЫЙ МАТЕРИАЛ ..................................................................................... 8 10 ПРОВЕДЕНИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ .............................................................................. 9 10.1 Автоматизированная экстракция ДНК и подготовка к проведению ПЦР с использованием автоматической станции «Amplitech E1». Проведение ПЦР и детекции .......................................................................................................................... 9 10.2 Экстракция ДНК и ручная подготовка к проведению ПЦР. Проведение ПЦР и детекции ........................................................................................................................ 11 11 УЧЁТ И ИНТЕРПРЕТАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ ............................................................ 12 12 ВОЗМОЖНЫЕ ОШИБКИ ........................................................................................... 13 13 КОНТРОЛЬ КАЧЕСТВА ............................................................................................. 14 13.1 Контроли, используемые в процессе исследования ...................................... 14 13.1.1 Отрицательный и положительный контроли ............................................... 14 13.1.2 Внутренний контроль ..................................................................................... 14 13.2 Мониторинг лаборатории на наличие контаминации ..................................... 14 13.3 Внутренний контроль качества лабораторных исследований ....................... 15 14 ФУНКЦИОНАЛЬНЫЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ НАБОРА ............................................... 15 14.1 Предел обнаружения ........................................................................................ 15 14.2 Диапазон измерения и предел измерения ...................................................... 15 14.3 Аналитическая специфичность ........................................................................ 15 14.4 Потенциально интерферирующие вещества .................................................. 16 14.5 Прецизионность измерения .............................................................................. 16 14.6 Правильность измерения .................................................................................. 16 14.7 Диагностическая специфичность ..................................................................... 17 14.8 Корреляция ........................................................................................................ 17 15 УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ, ТРАНСПОРТИРОВАНИЯ И ЭКСПЛУАТАЦИИ НАБОРА 18 15.1 Срок годности .................................................................................................... 18 15.2 Хранение ............................................................................................................ 18 15.3 Транспортирование ........................................................................................... 18 15.4 Эксплуатация ..................................................................................................... 18 16 ПЕРЕЧЕНЬ СОКРАЩЕНИЙ ...................................................................................... 19 17 БИБЛИОГРАФИЯ ....................................................................................................... 19 18 ПЕРЕЧЕНЬ ПРИМЕНЯЕМЫХ НАЦИОНАЛЬНЫХ СТАНДАРТОВ .......................... 19 19 ГАРАНТИИ ПРОИЗВОДИТЕЛЯ ................................................................................ 20 20 ТЕХНИЧЕСКАЯ ПОДДЕРЖКА .................................................................................. 20 21 СИМВОЛЫ, ИСПОЛЬЗУЕМЫЕ В ДОКУМЕНТАЦИИ ПРОИЗВОДИТЕЛЯ ............. 20 Amplitech UP/UU (R) Инструкция в.26.01.26 2 ВВЕДЕНИЕ 1. Настоящая инструкция по применению версии 26.01.26 распространяется на медицинское изделие «Набор реагентов для количественного определения ДНК Ureaplasma parvum и Ureaplasma urealyticum в биологическом материале человека методом ПЦР с детекцией в режиме «реального времени» (Amplitech UP/UU (R)) по ТУ 20.59.52-057-19926214-2025» (далее – набор). Краткое наименование набора: Amplitech UP/UU (R). Набор следует применять в соответствии с действующей версией инструкции по применению. Для удобства работы в лаборатории допускается использовать действующую версию краткого руководства по применению набора. 2. Условно-патогенные микоплазмы, включая Ureaplasma parvum и Ureaplasma urealyticum, могут встречаться в урогенитальном тракте в условиях нормы. Качественное детектирование ДНК данных микроорганизмов не всегда имеет клиническую значимость. Набор реагентов «Amplitech UP/UU (R)» предназначен для количественного определения ДНК Ureaplasma parvum и Ureaplasma urealyticum, что позволяет оценить бактериальную нагрузку. Методика включает определение концентраций микроорганизмов, что позволяет учитывать пороги клинической значимости, превышение которых может свидетельствовать о наличии патологического процесса. Таким образом, количественный подход обеспечивает более точную и информативную диагностику по сравнению с качественными методами. Amplitech UP/UU (R) Инструкция в.26.01.26 3 1 НАЗНАЧЕНИЕ Набор предназначен для количественного определения ДНК Ureaplasma parvum и Ureaplasma urealyticum в биологическом материале человека методом ПЦР с гибридизационно-флуоресцентной детекцией в режиме «реального времени». Материалом для проведения ПЦР-исследования служат образцы ДНК, экстрагированной из следующих видов биологического материала: • мазки со слизистой оболочки влагалища; • соскобы эпителия со слизистой оболочки цервикального канала, уретры; • моча (осадок первой порции утренней мочи). Набор предназначен для лабораторной диагностики in vitro (выявление и количественное определение U. parvum, U. urealyticum). Применение набора не зависит от популяционных и демографических аспектов. 2 ОБЛАСТЬ ПРИМЕНЕНИЯ Набор предназначен для применения в клинической лабораторной диагностике для исследования биологического материала, полученного от лиц с подозрением на наличие воспалительных инфекционных заболеваний мочеполовой системы. Отрицательные результаты исследования с помощью набора не исключают возможность инфицирования U. parvum и U. urealyticum и не должны использоваться в качестве единственной основы для принятия решения о лечении пациента. Результаты исследования должны сочетаться с клиническими наблюдениями, историей болезни и эпидемиологической информацией. Набор может применяться в клинико-диагностических лабораториях. 3 ПОКАЗАНИЯ К ПРИМЕНЕНИЮ Набор рекомендован для диагностики и контроля терапии инфекций, вызванных Ureaplasma parvum и Ureaplasma urealyticum. Результаты должны интерпретироваться совместно с клиническими данными. 4 ПРОТИВОПОКАЗАНИЯ К ПРИМЕНЕНИЮ Противопоказания к применению набора отсутствуют. Amplitech UP/UU (R) Инструкция в.26.01.26 4 5 СОСТАВ Состав набора1 указан в таблице 1. Таблица 1 Состав набора Номинальный Компонент Кол-во Внешний вид объём, мл Планшет со Смесью UP/UU (R) 96-луночный делимый планшет, заклеенный защитной плёнкой, с (Реакционная ПЦР-смесь со специфическими праймерами, флуоресцентно-мечеными ‒ 1 шт. реагентом в виде геля (от светло- зондами, термостабильной ДНК-полимеразой, розового до красного цвета) на дне дНТФ, солями) пробирок Плёнки для планшета ‒ 2 шт. Клейкие плёнки ОК 0,8 1 пробирка Прозрачная бесцветная жидкость (Буферный раствор) ПК U (Раствор, содержащий генно-инженерные 0,8 1 пробирка Прозрачная бесцветная жидкость конструкции с фрагментами ДНК выявляемых микроорганизмов) Краткое руководство ‒ 1 шт. В бумажном виде Комплект поставки включает: • набор реагентов, • инструкцию по применению и паспорт (количество печатных копий определяется договором поставки). Инструкция по применению и паспорт доступны для скачивания на сайте2: http://www.amplitech.ru/resources/ и http://www.amplitech.ru/quality/, соответственно. 6 ПРИНЦИП МЕТОДА Исследование с помощью набора проводится методом ПЦР с гибридизационно- флуоресцентной детекцией продуктов амплификации в режиме «реального времени». Детекция продуктов ПЦР и раздельное выявление ДНК U. parvum, U. urealyticum и внутреннего контроля (ВК) обеспечивается применением в реакционной смеси для ПЦР флуоресцентно-меченых олигонуклеотидов, сигналы от которых регистрируются по различным каналам флуоресцентной детекции (см. таблицу 2). Таблица 2 Каналы детекции мишеней Канал детекции сигнала Мишень Область амплификации от флуорофора FAM ДНК U. parvum UreC gene R6G3 ДНК U. urealyticum UreC gene Искусственно синтезированная Cy5 ДНК ВК последовательность 1 Набор упакован в коробку из картона. 2 В случае отсутствия доступа к Интернету обратитесь в службу технической поддержки по телефону (495) 374-13-46 для запроса о предоставлении бумажной версии инструкции и паспорта. 3 Сигнал от флуорофора R6G регистрируется по каналу детекции сигнала от аналогичных флуорофоров HEX и VIC. Amplitech UP/UU (R) Инструкция в.26.01.26 5 Линейная зависимость между исходной концентрацией ДНК-мишени в исследуемом образце и циклом начала экспоненциального увеличения флуоресцентного сигнала (пороговым циклом, Ct) позволяет определять концентрацию ДНК U. parvum и U. urealyticum в образце относительно положительного контроля ПК U (образца с известной концентрацией ДНК-мишеней), который проходит этапы экстракции ДНК и ПЦР одновременно с исследуемыми образцами. Определение концентрации ДНК производится в соответствии с заданными значениями концентраций ПК U и полученными значениями Ct для ПК U и исследуемых образцов. 6.1 Прослеживаемость значений положительного контроля ПК U Концентрация клонированных фрагментов ДНК U. parvum и U. urealyticum в ПК U составляет 5 lg ± 0,5 lg копий/мл. Концентрация определяется с помощью установленной производителем методики выполнения измерений на основе метода лимитирующих разведений [1, 2]. 7 НЕОБХОДИМОЕ ОБОРУДОВАНИЕ И МАТЕРИАЛЫ Для работы с набором требуются оборудование и материалы, указанные в таблице 3. Таблица 3 Оборудование и материалы, необходимые для работы с набором Необходимое оборудование и материалы в случае автоматизированной подготовки к ручной подготовки к проведению ПЦР проведению ПЦР • набор реагентов для экстракции ДНК: «ДНК- • набор реагентов для экстракции ДНК: «ДНК- 100 (R)» (форма выпуска 1) (ООО «Амплитек», РУ 100 (R)» (формы выпуска 1 и 2) (ООО № РЗН 2023/20090); «Амплитек», РУ № РЗН 2023/20090); • дополнительные материалы и оборудование • дополнительные материалы и оборудование для экстракции ДНК – согласно инструкции к для экстракции ДНК – согласно инструкции к набору реагентов для экстракции ДНК; набору реагентов для экстракции ДНК; • автоматическая станция пробоподготовки • ПЦР-бокс; «Amplitech E1» (ООО «Амплитек», Россия; РУ № • вортекс; РЗН 2022/16981); • дозаторы переменного объёма, механические • термоциклер для амплификации нуклеиновых или электронные, с возможностью дозирования кислот 1000, исполнения С1000 Touch в от 20 до 200 мкл; комплекте с модулем реакционным оптическим • штатив для ПЦР-планшетов; CFX96 (Bio-Rad Laboratories, Inc., США, РУ № • термоциклер для амплификации нуклеиновых ФСЗ 2008/03399); кислот 1000, исполнения С1000 Touch в • амплификатор детектирующий «ДТпрайм» комплекте с модулем реакционным оптическим (ООО «НПО ДНК-Технология», Россия, РУ № CFX96 (Bio-Rad Laboratories, Inc., США, РУ № ФСР 2011/10229); ФСЗ 2008/03399); • амплификатор нуклеиновых кислот Applied • амплификатор детектирующий «ДТпрайм» Biosystems QuantStudio 5 с гибридизационно- (ООО «НПО ДНК-Технология», Россия, РУ № флуоресцентной детекцией продуктов ПЦР в ФСР 2011/10229); режиме реального времени (Life Technologies • амплификатор нуклеиновых кислот Applied Holdings Pte. Ltd., Сингапур; РУ № РЗН Biosystems QuantStudio 5 с гибридизационно- 2019/8446); флуоресцентной детекцией продуктов ПЦР в • холодильник с камерой, поддерживающей режиме реального времени (Life Technologies температуру от 2 °С до 8 °С; Holdings Pte. Ltd., Сингапур; РУ № РЗН • ёмкость для сброса использованных 2019/8446); материалов; • холодильник с камерой, поддерживающей • перчатки медицинские, одноразовые, температуру от 2 °С до 8 °С; неопудренные. Amplitech UP/UU (R) Инструкция в.26.01.26 6 Необходимое оборудование и материалы в случае автоматизированной подготовки к ручной подготовки к проведению ПЦР проведению ПЦР • наконечники для дозаторов переменного объёма, с фильтром, объёмом до 20 мкл, одноразовые, свободные от ДНКаз; • ёмкость для сброса использованных материалов; • перчатки медицинские, одноразовые, неопудренные. 8 РИСКИ ПРИМЕНЕНИЯ И МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ Риски возникновения опасных последствий при использовании набора определены в соответствии с ГОСТ ISO 14971-2021. 8.1 Потенциальный риск применения Класс потенциального риска применения набора (согласно Приказу Министерства здравоохранения РФ № 4н от 06.06.2012) – 2б. 8.2. Прямой риск применения Работа с набором должна проводиться в лаборатории, использующей методы амплификации нуклеиновых кислот для исследования материала, с соблюдением требований ГОСТ Р ИСО 15190 «Лаборатории медицинские. Требования безопасности», МУ 1.3.2569-09 «Организация работы лабораторий, использующих методы амплификации нуклеиновых кислот при работе с материалом, содержащим микроорганизмы I–IV групп патогенности», СанПиН 3.3686-21 «Санитарно- эпидемиологические требования по профилактике инфекционных болезней». При обращении с реагентами необходимо соблюдать технику безопасности. При попадании реагентов на кожу или слизистые оболочки место контакта следует немедленно промыть водой и при необходимости обратиться к врачу. 8.3 Косвенный риск применения Косвенные риски связаны с возможностью получения недостоверных результатов, которые могут быть вызваны: • нарушением условий транспортировки и хранения набора; • использованием набора после истечения срока годности; • несоблюдением инструкции по применению. 8.4 Особые указания и меры предосторожности • К работе с набором допускается только персонал, обученный методам молекулярной диагностики и правилам работы в клинико-диагностической лаборатории в соответствии с СанПиН 3.3686-21 (раздел IV). • Рассматривать исследуемые образцы как инфекционно-опасные, организовывать работу и хранение в соответствии с СанПиН 3.3686-21. • Утилизировать реагенты и плёнки для планшета (использованные, неиспользованные, пришедшие в негодность в связи с истечением срока годности и/или несоблюдением регламентированного режима хранения, транспортирования и применения), внешнюю упаковку набора, эксплуатационную документацию в соответствии с требованиями СанПиН 2.1.3684-21 «Санитарно-эпидемиологические требования к содержанию территорий городских и сельских поселений, к водным Amplitech UP/UU (R) Инструкция в.26.01.26 7 объектам, питьевой воде и питьевому водоснабжению, атмосферному воздуху, почвам, жилым помещениям, эксплуатации производственных, общественных помещений, организации и проведению санитарно-противоэпидемических (профилактических) мероприятий» к утилизации медицинских отходов класса Г. • Не открывать пробирки с продуктами амплификации в процессе их сбора и утилизации. • Утилизировать биологический материал, а также расходные материалы и инструменты, загрязнённые биологическим материалом, в соответствии с требованиями СанПиН 2.1.3684-21 (медицинские отходы класса Б). • Не использовать набор, если нарушена внутренняя упаковка или внешний вид реагента не соответствует описанию, указанному в таблице 1. • Не использовать набор, если не соблюдались условия транспортирования и хранения согласно инструкции. • Не использовать набор по истечении срока годности. • Использовать отдельный для каждого образца/реагента одноразовый наконечник с фильтром. • Использовать защитную одежду в соответствии с МУ 1.3.2569-09. Все операции проводить только в одноразовых неопудренных перчатках для исключения контакта с организмом человека. • Не есть, не пить и не курить в процессе использования набора. Избегать контакта реагентов с кожей, глазами и слизистой оболочкой. Не глотать. Реагенты, входящие в состав набора, содержат натрия азид в концентрации не более 0,05 %, поэтому не классифицируются как опасные для здоровья человека и окружающей среды. При контакте немедленно промыть поражённое место большим количеством воды и при плохом самочувствии обратиться за медицинской помощью. При попадании внутрь рвоту не вызывать, прополоскать рот водой, обратиться к врачу при плохом самочувствии. Использование набора по назначению и соблюдение вышеперечисленных мер предосторожности исключает негативное воздействие на организм человека. 9 ИССЛЕДУЕМЫЙ МАТЕРИАЛ Набор предназначен для исследования только биологического материала, указанного в разделе 1. Взятие, предварительную обработку, транспортирование и хранение биологического материала следует проводить в соответствии с: • МУ 1.3.2569-09 «Организация работы лабораторий, использующих методы амплификации нуклеиновых кислот при работе с материалом, содержащим микроорганизмы I-IV групп патогенности»; • МУ 4.2.2039-05 «Техника сбора и транспортирования биоматериалов в микробиологические лаборатории»; • требованиями, перечисленными в таблицах 4 и 5. Таблица 4 Требования к взятию и предварительной обработке исследуемого материала Взятие мазков со слизистой оболочки влагалища Взятие материала провести с помощью стерильного одноразового универсального зонда (например, «Зонд тип Н1 тампон» или «Зонд тип Н2 тампон» (ООО «Медицинские изделия», Россия; РУ № РЗН 2018/7058)) в пробирку с транспортной средой, содержащей консервант и Amplitech UP/UU (R) Инструкция в.26.01.26 8 предназначенной для хранения и транспортирования данного вида биологического материала (например, «Транспортная среда с муколитиком (ТСМ)» (ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии Роспотребнадзора, Россия; РУ № ФСР 2009/05514) или аналогичная, зарегистрированная в РФ в установленном порядке). Взятие соскобов эпителия со слизистой оболочки цервикального канала Взятие материала провести с помощью стерильной одноразовой цервикальной цитощётки (например, «Зонд тип F3 комбинированный» (ООО «Медицинские изделия», Россия; РУ № РЗН 2018/7058)) или стерильного одноразового универсального зонда (например, «Зонд тип Н1 тампон» или «Зонд тип Н2 тампон» (ООО «Медицинские изделия», Россия; РУ № РЗН 2018/7058)) в пробирку с транспортной средой, содержащей консервант и предназначенной для хранения и транспортирования данного вида биологического материала (например, «Транспортная среда с муколитиком (ТСМ)» (ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии Роспотребнадзора, Россия; РУ № ФСР 2009/05514) или аналогичная, зарегистрированная в РФ в установленном порядке). Взятие соскобов эпителия со слизистой оболочки уретры Взятие материала провести с помощью стерильного одноразового универсального зонда (например, «Зонд тип Н1 тампон» или «Зонд тип Н2 тампон» (ООО «Медицинские изделия», Россия; РУ № РЗН 2018/7058)) в пробирку с транспортной средой, содержащей консервант и предназначенной для хранения и транспортирования данного вида биологического материала (например, «Транспортная среда с муколитиком (ТСМ)» (ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии Роспотребнадзора, Россия; РУ № ФСР 2009/05514) или аналогичная, зарегистрированная в РФ в установленном порядке). Взятие и предобработка мочи Отобрать первую порцию утренней мочи в количестве от 15 до 25 мл в специальную одноразовую ёмкость. Предобработка: Взболтать ёмкость с мочой. Перенести 1 мл мочи, используя наконечник с фильтром, в стерильную одноразовую пробирку. Центрифугировать 5 мин при 10000 х g. Не захватывая осадок, полностью удалить супернатант, используя вакуумный отсасыватель с колбой-ловушкой и отдельный наконечник без фильтра для каждого образца. При наличии большого количества солей ресуспендировать только верхний слой осадка солей в 1 мл физиологического раствора стерильного, затем снова концентрировать центрифугированием и удалить супернатант, не захватывая осадок. К осадку добавить 200 мкл физиологического раствора стерильного. Тщательно перемешать содержимое на вортексе. Таблица 5 Требования к условиям транспортирования и хранения исследуемого материала Условия транспортирования Условия хранения Исследуемые материалы, помещённые в транспортную среду Согласно требованиям, указанным в инструкции к используемой транспортной среде. Допускается однократное замораживание материала. Моча До и после предобработки: • при температуре от 2 °С до 8 °С не более суток; При температуре от 2 °С до 8 °С • при температуре минус 20 °С не более недели; • Допускается однократное замораживание материала. 10 ПРОВЕДЕНИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ 10.1 Автоматизированная экстракция ДНК и подготовка к проведению ПЦР с использованием автоматической станции «Amplitech E1». Проведение ПЦР и детекции ВНИМАНИЕ! Перед началом работы необходимо ознакомиться с руководством по эксплуатации автоматической станции «Amplitech E1». Amplitech UP/UU (R) Инструкция в.26.01.26 9 Экстракцию ДНК из исследуемого материала и контролей, а также внесение образцов экстрагированной ДНК в пробирки Планшета со Смесью UP/UU (R) провести с использованием автоматической станции «Amplitech E1» (ООО «Амплитек») согласно руководству по её эксплуатации и процедуре, указанной ниже. Для экстракции ДНК необходимо использовать форму выпуска 1 набора реагентов «ДНК- 100 (R)» (ООО «Амплитек»). 10.1.1 Перемешать содержимое пробирок с реагентами ОК и ПК U и осадить капли на вортексе. 10.1.2 Подготовить картридж с реагентами из набора «ДНК-100 (R)» и внести в него исследуемые образцы4 и контроли согласно инструкции по его применению. ВНИМАНИЕ! Каждая группа экстрагируемых образцов должна сопровождаться постановкой контролей ОК и ПК U не менее чем в одном повторе. 10.1.3 Установить на рабочий стол станции «Amplitech E1» картридж с внесёнными исследуемыми образцами и контролями, а также расходные материалы, входящие в состав набора «ДНК-100 (R)», согласно руководству по эксплуатации станции. 10.1.4 Отрезать от планшета необходимое количество пробирок со Смесью UP/UU (R) и снять с них защитную плёнку. 10.1.5 Установить отрезанные пробирки со Смесью UP/UU (R) на рабочий стол автоматической станции в адаптер для контейнеров для элюата. 10.1.6 Запустить выполнение следующих протоколов согласно руководству по эксплуатации станции «Amplitech E1»: а) протокола экстракции ДНК с использованием штрих-кода для протокола, указанного в кратком руководстве по применению набора «ДНК-100 (R)»; Примечание – В протоколе указать объём элюции 100 мкл. В случае одновременного запуска протоколов экстракции и подготовки к проведению ПЦР объём элюции не требует ручного ввода, так как уже включён в протокол подготовки к проведению ПЦР. б) используемого ряда картриджа набора «ДНК-100 (R)»; в) протокола подготовки к проведению ПЦР с использованием штрих-кода для протокола, указанного в кратком руководстве по применению набора «Amplitech UP/UU (R)». ВНИМАНИЕ! Запуск протокола необходимо провести в течение 30 минут после установки всех реагентов на рабочем столе станции. 10.1.7 После завершения протоколов вынуть адаптер с пробирками и заклеить их плёнкой, входящей в состав набора «Amplitech UP/UU (R)». Элюат, внесённый в пробирки, содержит полученную в процессе экстракции ДНК. ВНИМАНИЕ! Пробирки, заклеенные плёнкой, не переворачивать и не встряхивать, чтобы избежать разбрызгивания содержимого по стенкам пробирок и попадания его на защитную плёнку. Пробирки с реакционной смесью с внесенным элюатом не подлежат хранению. Необходимо незамедлительно произвести запуск реакции 4 Для образцов мочи необходимо провести предобработку согласно разделу 9. Amplitech UP/UU (R) Инструкция в.26.01.26 10 амплификации. 10.1.8 Запрограммировать амплификатор для проведения ПЦР и детекции флуоресцентного сигнала согласно инструкции по его применению по программе, указанной в таблице 6. Таблица 6 Программа ПЦР и детекции при подготовке к проведению ПЦР с использованием автоматической станции «Amplitech E1» Детекция по каналам для Количество Цикл Температура, °С Время флуорофоров циклов 1 50 15 мин – 1 2 95 2 мин – 1 95 10 с – 3 42 60 20 с FAM, R6G5, Cy5 Примечания 1) При программировании амплификатора указать объём реакции: 25 мкл. 2) При одновременном проведении в одном приборе тестов только для выявления ДНК допускается исключить из указанной программы цикл «50 °С – 15 мин» для экономии времени. 3) Детекция может назначаться по другим каналам, помимо указанных, при одновременном проведении в одном приборе нескольких тестов с использованием указанной программы. 10.1.9 Поместить пробирки с реакционной смесью и элюатом в амплификатор и запустить программу. 10.2 Экстракция ДНК и ручная подготовка к проведению ПЦР. Проведение ПЦР и детекции 10.2.1 Перемешать содержимое пробирок с реагентами ОК и ПК U и осадить капли на вортексе. 10.2.2 Провести экстракцию ДНК из исследуемого материала и контролей с использованием набора реагентов «ДНК-100 (R)» (ООО «Амплитек») согласно инструкции по его применению. Примечание – Элюцию провести в объёме 100 мкл. ВНИМАНИЕ! Каждая группа экстрагируемых образцов должна сопровождаться постановкой контролей ОК и ПК U не менее чем в одном повторе. 10.2.3 Отрезать от планшета необходимое количество пробирок со Смесью UP/UU (R). Снять с отрезанных пробирок защитную плёнку. 10.2.4 Для удобства внесения образцов ДНК рекомендуется установить отрезанные пробирки в штатив для ПЦР-планшетов. 10.2.5 Внести в подготовленные пробирки по 20 мкл образцов ДНК, полученных в результате экстракции из исследуемых образцов и контролей (ОК и ПК U). ВНИМАНИЕ! При внесении ДНК необходимо избегать попадания сорбента в реакционную смесь. 10.2.6 Перемешать содержимое пипетированием, не допуская образования пузырьков воздуха. 10.2.7 После внесения образцов ДНК заклеить пробирки плёнкой, входящей в состав набора «Amplitech UP/UU (R)». 5 Сигнал от флуорофора R6G регистрируется по каналу детекции сигнала от аналогичных флуорофоров HEX и VIC. Amplitech UP/UU (R) Инструкция в.26.01.26 11 ВНИМАНИЕ! Пробирки после внесения ДНК не переворачивать и не встряхивать, чтобы избежать разбрызгивания содержимого по стенкам пробирок и попадания его на защитную плёнку. Пробирки с реакционной смесью с внесенным элюатом не подлежат хранению. Необходимо незамедлительно произвести запуск реакции амплификации. 10.2.8 Запрограммировать амплификатор для проведения ПЦР и детекции флуоресцентного сигнала согласно инструкции по его применению по программе, указанной в таблице 7. Таблица 7 Программа ПЦР и детекции при ручной подготовке к проведению ПЦР Детекция по каналам для Количество Цикл Температура, °С Время флуорофоров циклов 1 50 15 мин – 1 2 95 15 мин – 1 95 10 с – 3 42 60 20 с FAM, R6G6, Cy5 Примечания 1) При программировании амплификатора указать объём реакции: 25 мкл. 2) При одновременном проведении в одном приборе тестов только для выявления ДНК допускается исключить из указанной программы цикл «50 °С – 15 мин» для экономии времени. 3) Детекция может назначаться по другим каналам, помимо указанных, при одновременном проведении в одном приборе нескольких тестов с использованием указанной программы. 10.2.9 Поместить пробирки с реакционной смесью и элюатом в амплификатор и запустить программу. 11 УЧЁТ И ИНТЕРПРЕТАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ 11.1 Учёт результатов осуществляется с помощью программного обеспечения используемого амплификатора согласно инструкции по его применению. Рекомендуется выставлять пороговую линию на уровне 10 % от разгорания положительного контроля. Кривые флуоресценции, пересекающие пороговую линию, должны иметь сигмообразную форму. 11.2 При наличии значения/значений Ct по каналам FAM/R6G рассчитать концентрацию ДНК выявленного возбудителя в геномных эквивалентах в одном миллилитре (ГЭ/мл) согласно формуле (1). 100000 С = (1) ДНК возб 2 ΔCt где С – концентрация ДНК выявленного возбудителя, ГЭ/мл; ДНК возб ΔCt – разность между значением Ct для исследуемого образца и значением Ct для ПК U по каналу FAM/R6G. Примечание – Коэффициент пересчёта концентрации ДНК U. parvum и U. urealyticum из копий/мл в ГЭ/мл равен 1. 6 Сигнал от флуорофора R6G регистрируется по каналу детекции сигнала от аналогичных флуорофоров HEX и VIC. Amplitech UP/UU (R) Инструкция в.26.01.26 12 11.3 Провести интерпретацию результатов для исследуемых образцов согласно таблице 8. Таблица 8 Интерпретация результатов для исследуемых образцов Результат Интерпретация По каналу Cy5 значение Ct определено не ДНК U. parvum, U. urealyticum в образце не больше граничного7. По каналам FAM, R6G выявлены. значения Ct отсутствуют. Рассчитано значение концентрации ДНК ДНК возбудителя в образце выявлена в возбудителя, укладывающееся в диапазон концентрации в пределах диапазона измерения набора. измерения набора. Рассчитано значение концентрации ДНК ДНК возбудителя в образце выявлена в возбудителя, не укладывающееся в концентрации вне пределов диапазона диапазон измерения набора. измерения набора. По каналу Cy5 значение Ct отсутствует или определено больше граничного. По каналам Невалидный результат FAM, R6G значения Ct отсутствуют. Клинически значимой является концентрация ДНК U. parvum/ U. urealyticum свыше 10 000 ГЭ/мл. Результат исследования считают достоверным, если получены валидные результаты для контролей в соответствии с таблицей 9. Таблица 9 Критерии оценки для контролей Контроль Норма По каналу Cy5 значение Ct определено не больше граничного7. По ОК каналам FAM, R6G значение Ct отсутствует. По каналам FAM, R6G, Cy5 значение Ct определено не больше ПК U граничного. 12 ВОЗМОЖНЫЕ ОШИБКИ Рекомендации по устранению возможных ошибок, получаемых для исследуемых образцов и контролей в процессе исследования с помощью набора, указаны в таблице 10. Таблица 10 Рекомендации по устранению ошибок Возможная причина Ошибка Рекомендации по устранению возникновения Для ПК значение Ct по каналу FAM и/или R6G Некорректное Повторить исследование для всех и/или Cy5 отсутствует или проведение экстракции образцов, начиная с этапа определено больше ДНК и/или ПЦР. экстракции ДНК. граничного7. Для ОК по каналу Cy5 Некорректное Повторить исследование для всех значение Ct отсутствует проведение экстракции образцов, начиная с этапа или определено больше ДНК и/или ПЦР. экстракции ДНК. граничного. 7 Граничные значения Ct указаны в кратком руководстве по применению набора. Amplitech UP/UU (R) Инструкция в.26.01.26 13 Возможная причина Ошибка Рекомендации по устранению возникновения Предпринять меры по выявлению Контаминация реагентов Для ОК по каналу FAM и ликвидации источника или исследуемых и/или R6G определено контаминации и повторить образцов продуктами значение Ct. исследование для всех образцов, амплификации. начиная с этапа экстракции ДНК. Невалидный результат Повторить исследование данного для исследуемого образца Некорректное исследуемого образца, начиная с (значение Ct по каналу Cy5 проведение экстракции этапа экстракции ДНК. В случае отсутствует или ДНК. воспроизводимого результата определено больше Наличие в образце рекомендуется повторное взятие и граничного, по каналам ингибиторов ПЦР. исследование биологического FAM, R6G значения Ct материала. отсутствуют). Проверить правильность Для исследуемого выбранного уровня пороговой образца/контролей линии или параметров расчёта определено значение Ct, базовой линии. Если результат при этом на графике Некорректный выбор получен при правильном уровне флуоресценции уровня пороговой линии пороговой линии (базовой линии), отсутствует участок или параметров расчёта требуется повторно провести характерного базовой линии. амплификацию и детекцию для экспоненциального Некорректное этого образца или, в случае подъёма (график проведение ПЦР. некорректного вида графика для представляет собой контроля, амплификацию и приблизительно прямую детекцию для всех исследуемых линию). образцов и контролей. 13 КОНТРОЛЬ КАЧЕСТВА 13.1 Контроли, используемые в процессе исследования Результаты исследования контролей должны соответствовать критериям оценки, указанным в разделе 11. 13.1.1 Отрицательный и положительный контроли Каждая группа экстрагируемых образцов должна включать контрольные образцы: • ОК для выявления контаминации в процессе проведения исследования; • ПК U для контроля корректного прохождения исследования, а также для количественного определения ДНК выявляемых с помощью набора микроорганизмов в биологическом материале человека. 13.1.2 Внутренний контроль Для контроля качества экстракции ДНК и оценки влияния ингибиторов на результаты амплификации используется экзогенный ВК, который добавляется на этапе экстракции ДНК в каждый исследуемый образец и контроли. Отсутствие результатов амплификации для ВК и одновременно для выявляемых микроорганизмов свидетельствует о присутствии ингибиторов ПЦР в образце или некорректном проведении экстракции ДНК. 13.2 Мониторинг лаборатории на наличие контаминации Для выявления возможной контаминации лаборатории продуктами амплификации, исследуемыми и контрольными образцами рекомендуется раз в месяц исследовать Amplitech UP/UU (R) Инструкция в.26.01.26 14 смывы с рабочих поверхностей лабораторной мебели, оборудования и поверхностей помещений согласно процедуре, указанной в МУ 1.3.2569-09. При обнаружении контаминации необходимо провести мероприятия по её устранению согласно указаниям, описанным в МУ 1.3.2569-09. 13.3 Внутренний контроль качества лабораторных исследований Рекомендуется проводить контроль качества выполнения исследований с использованием панелей контрольных образцов, предназначенных для проведения внутреннего и внешнего контролей качества лабораторных исследований по количественному определению ДНК выявляемых микроорганизмов, либо сравнительным исследованием с использованием зарегистрированных в РФ наборов реагентов для количественного определения ДНК выявляемых микроорганизмов в биологическом материале методом ПЦР. 14 ФУНКЦИОНАЛЬНЫЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ НАБОРА 14.1 Предел обнаружения Предел обнаружения набора указан в таблице 11. Таблица 11 Предел обнаружения Мишень Предел обнаружения, ГЭ/мл 95 %-ый ДИ, ГЭ/мл ДНК U. parvum 800 403 – 1300 ДНК U. urealyticum 800 348 – 1099 14.2 Диапазон измерения и предел измерения Диапазон измерения и предел измерения набора указаны в таблице 12. Таблица 12 Диапазон измерения и предел измерения Мишень Диапазон измерения, ГЭ/мл Предел измерения, ГЭ/мл ДНК U. parvum 3∙103 – 5∙108 3∙103 ДНК U. urealyticum 3∙103 – 5∙108 3∙103 Линейность измерения концентраций ДНК Ureaplasma parvum и Ureaplasma urealyticum сохраняется во всем диапазоне измерения. Предел измерения набора совпадает с нижней границей диапазона измерения набора. Коэффициент вариации (CV, %) не превышает 10% на нижней границе диапазона измерения и 2% на верхней границе диапазона измерения. 14.3 Аналитическая специфичность Аналитическая специфичность набора оценивалась при тестировании микроорганизмов, указанных в таблице 13, геномной ДНК человека, а также ДНК выявляемых микроорганизмов. ДНК микроорганизмов исследовалась в концентрации не менее 1∙106 копий/мл, геномная ДНК человека – в концентрации 1 мкг/мл. По итогам тестирования ложноположительных результатов выявлено не было. Amplitech UP/UU (R) Инструкция в.26.01.26 15 Таблица 13 Микроорганизмы, используемые для оценки аналитической специфичности Наименование Наименование Наименование Candida albicans Mycoplasma genitalium Treponema pallidum Chlamydia trachomatis Mycoplasma hominis Trichomonas vaginalis Gardnerella vaginalis Neisseria gonorrhoeae CMV Enterococcus faecium Staphylococcus aureus HSV 1 типа Escherichia coli Staphylococcus epidermidis HSV 2 типа Lactobacillus spp. Staphylococcus saprophyticus 14.4 Потенциально интерферирующие вещества Потенциально интерферирующие вещества (ингибиторы ПЦР) и их максимальные концентрации в образце, для которых оценивалось их ингибирующее влияние на ПЦР, перечислены в таблице 14. Таблица 14 Потенциально интерферирующие вещества Концентрация Обоснование Исследуемый Активный Тип интерфе- Интерферент вещества в исследованной материал компонент рента образце концентрации Мазки со слизистой Цельная − 5 % v/v оболочки кровь влагалища; Эндогенная соскобы эпителия Объём в субстанция со слизистых образце в Очищенный оболочек Муцин 150 мкг/мл условиях белок цервикального «наихудшего канала, уретры случая» Эндогенная Альбумин Белок 500 мг/л Моча (осадок субстанция первой порции) Антибиотик- Азитромицин Азитромицин 1 мг/мл азалид В результате испытаний подтверждено, что влияние исследованных потенциально интерферирующих веществ на ПЦР, проводимую с использованием набора «Amplitech UP/UU (R)», отсутствует. 14.5 Прецизионность измерения Коэффициент вариации повторяемости CV значений концентрации, п характеризующий внутрисерийную повторяемость измерений с использованием набора, не превышает 5 %. Коэффициент вариации воспроизводимости CV значений концентрации, в характеризующий межсерийную воспроизводимость измерений с использованием набора, не превышает 10 %. 14.6 Правильность измерения Систематическая погрешность, характеризующая правильность измерения с использованием набора, не превышает 15 %. Amplitech UP/UU (R) Инструкция в.26.01.26 16 14.7 Диагностическая специфичность Значения диагностической специфичности (ДС) набора с доверительной вероятностью 95 % указаны в таблице 15. Таблица 15 Диагностическая специфичность Количество Исследуемый материал Мишень ДС, % отрицательных образцов Мазки со слизистой ДНК U. parvum 47 93,8 – 100 оболочки влагалища ДНК U. urealyticum 49 94,1 – 100 Соскобы эпителия со ДНК U. parvum 47 93,8 – 100 слизистой оболочки цервикального канала ДНК U. urealyticum 46 93,7 – 100 Соскобы эпителия со ДНК U. parvum 50 94,2 – 100 слизистой оболочки уретры ДНК U. urealyticum 49 94,1 – 100 Моча (осадок первой ДНК U. parvum 49 94,1 – 100 порции) ДНК U. urealyticum 48 93,9 – 100 14.8 Корреляция Корреляция экспериментальных значений концентраций, полученных при исследовании образцов биологического материала с использованием набора реагентов «Amplitech UP/UU (R)» и референтного набора реагентов, представлена на рисунке 1. Рисунок 1 Amplitech UP/UU (R) Инструкция в.26.01.26 17 15 УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ, ТРАНСПОРТИРОВАНИЯ И ЭКСПЛУАТАЦИИ НАБОРА 15.1 Срок годности Срок годности набора составляет 12 месяцев от даты изготовления. После вскрытия реагенты ПК U и ОК использовать до истечения срока годности набора. Планшет со Смесью UP/UU (R) после снятия защитной плёнки хранить не более 30 минут. Не допускается смешивать компоненты наборов разных серий и использовать набор по истечении срока годности. 15.2 Хранение Набор в упаковке предприятия-изготовителя хранить при температуре от 2 °С до 8 °С и относительной влажности воздуха от 25 до 75 % в защищённом от солнечного света месте. Планшет со Смесью UP/UU (R) беречь от влаги. После транспортирования допускается хранить набор не более 5 суток при температуре от 8 °С до 25 °С. Реагенты после вскрытия хранить в тех же условиях, что и до вскрытия. 15.3 Транспортирование Набор транспортировать при температуре от 2 °С до 8 °С всеми видами крытых транспортных средств в термоконтейнерах с хладоэлементами или в авторефрижераторах. Допускается транспортировать набор при температуре от 8 °С до 25 °С не более 10 суток. 15.4 Эксплуатация Реагенты, входящие в состав набора, готовы к использованию. Повторное применение использованных для исследования реагентов не допускается. Исследование образцов с использованием набора должно проводиться при температуре от 18 °С до 25 °С и относительной влажности воздуха от 25 до 75 %. Amplitech UP/UU (R) Инструкция в.26.01.26 18 16 ПЕРЕЧЕНЬ СОКРАЩЕНИЙ В настоящей инструкции применены следующие сокращения: Ct − cycle threshold (пороговый цикл) в. − версия ВК − внутренний контроль ДИ − доверительный интервал ДНК − дезоксирибонуклеиновая кислота ДНКаза − дезоксирибонуклеаза ОК − отрицательный контроль ПК − положительный контроль ПЦР − полимеразная цепная реакция 17 БИБЛИОГРАФИЯ 1. Taswell C. Limiting dilution assays for the determination of immunocompetent cell frequencies // J. Immunology. – 1981. – Vol. 126. – P. 1614–1619. 2. Allen G. Rodrigo, Paul C. Goracke, Kiarash Rowhanian, James I. Mullins. Quantitation of target molecules from polymerase chain reaction-based limiting dilution assays // AIDS research and human retroviruses. – 1997. – Vol. 13 (9). – P. 737–742. 18 ПЕРЕЧЕНЬ ПРИМЕНЯЕМЫХ НАЦИОНАЛЬНЫХ СТАНДАРТОВ ГОСТ Р 51088-2013 Медицинские изделия для диагностики ин витро. Реагенты, наборы реагентов, тест-системы, контрольные материалы, питательные среды. Требования к изделиям и поддерживающей документации ГОСТ Р 51352-2013 Медицинские изделия для диагностики ин витро. Методы испытаний ГОСТ Р ИСО 18113-1-2024 Медицинские изделия для диагностики in vitro. Информация, предоставленная изготовителем (маркировка). Часть 1. Термины, определения и общие требования ГОСТ Р ИСО 18113-2-2024 Медицинские изделия для диагностики in vitro. Информация, предоставленная изготовителем (маркировка). Часть 2. Реагенты для диагностики in vitro для профессионального использования ГОСТ Р ИСО 23640-2015 Изделия медицинские для диагностики in vitro. Оценка стабильности реагентов для диагностики in vitro ГОСТ Р ИСО 15223-1-2023 Изделия медицинские. Символы, применяемые для передачи информации, предоставляемой изготовителем. Часть 1. Основные требования ГОСТ Р ИСО 17511-2022 Изделия медицинские для диагностики in vitro. Требования к установлению метрологической прослеживаемости значений, приписанных калибраторам, контрольным материалам и образцам биологического материала человека ГОСТ ISO 14971-2021 Изделия медицинские. Применение менеджмента риска к медицинским изделиям Amplitech UP/UU (R) Инструкция в.26.01.26 19 19 ГАРАНТИИ ПРОИЗВОДИТЕЛЯ Производитель гарантирует соответствие характеристик набора требованиям, указанным в технической и эксплуатационной документации, в течение указанного срока годности при соблюдении условий его транспортирования, хранения и применения. Рекламации на качество набора направлять в адрес производителя: ООО «Амплитек», 109235, Москва, ул. 1-я Курьяновская, д. 34, стр. 8, этаж 1 пом. II ком. 42, тел. (495) 374-13-46, e-mail: support@amplitech.ru. Сообщения о неблагоприятных событиях (инцидентах), возникших при работе с набором и не указанных в данной инструкции, следует направлять производителю по указанному выше адресу и в уполномоченный регуляторный орган согласно действующему законодательству. 20 ТЕХНИЧЕСКАЯ ПОДДЕРЖКА Консультацию по вопросам по работе с набором и его качеству можно получить по контактам, указанным на официальном сайте производителя: www.amplitech.ru. 21 СИМВОЛЫ, ИСПОЛЬЗУЕМЫЕ В ДОКУМЕНТАЦИИ ПРОИЗВОДИТЕЛЯ Изготовитель Код серии Дата изготовления Использовать до Медицинское изделие для Температурный диапазон диагностики in vitro Обратитесь к инструкции по Не допускать воздействия применению солнечного света Содержимого достаточно для Не допускать воздействия проведения <n> тестов влаги Номер по каталогу Диапазон влажности Общество с ограниченной ответственностью «Амплитек» (ООО «Амплитек»), Россия, 109235, Москва, ул. 1-я Курьяновская, д. 34, стр. 8, этаж 1 пом. II ком. 42 тел. (495) 374-13-46, www.amplitech.ru, e-mail: support@amplitech.ru Amplitech UP/UU (R) Инструкция в.26.01.26 20 Лист регистрации изменений Номера страниц Всего Изм. изменён- заменён- аннулиро- страниц в Номер документа Подпись Дата ных ных новых ванных документе Amplitech UP/UU (R) Инструкция 21 УТВЕРЖДАЮ Генеральный директор ООО «Амплитек» _________________ А.В. Ходяков ____.____.2025 НАБОР РЕАГЕНТОВ ДЛЯ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ ДНК UREAPLASMA PARVUM И UREAPLASMA UREALYTICUM В БИОЛОГИЧЕСКОМ МАТЕРИАЛЕ ЧЕЛОВЕКА МЕТОДОМ ПЦР С ДЕТЕКЦИЕЙ В РЕЖИМЕ «РЕАЛЬНОГО ВРЕМЕНИ» (AMPLITECH UP/UU (R)) ПО ТУ 20.59.52-057-19926214-2025 Краткое руководство версии 29.09.25 Лист утверждения СОГЛАСОВАНО Руководитель отдела разработки и адаптации продукции ООО «Амплитек» Заместитель генерального директора по науке ООО «Амплитек» _________________ П.Г. Рыжих _________________ А.С. Коновалов 29.09.2025 29.09.2025 ООО «Амплитек», Россия, 109235, Москва, ул. 1-я Курьяновская, д. 34, стр. 8, этаж 1 пом. II ком. 42 тел. (495) 374-13-46, www.amplitech.ru Amplitech UP/UU (R) Набор реагентов для количественного определения ДНК Ureaplasma parvum и Ureaplasma urealyticum в биологическом материале человека методом ПЦР с детекцией в режиме «реального времени» (Amplitech UP/UU (R)) по ТУ 20.59.52-057-19926214-2025 КРАТКОЕ РУКОВОДСТВО P042-0 хххх 96 ВНИМАНИЕ! Перед использованием набора необходимо ознакомиться с инструкцией по его применению. Инструкция по применению и паспорт размещены по адресам: http://www.amplitech.ru/resources/ и http://www.amplitech.ru/quality/ соответственно. РЕАГЕНТЫ Реагент Внешний вид Меры предосторожности Реагенты содержат азид натрия в концентрации не более 0,05 % Планшет со Гель от светло-розового до веществ, поэтому не классифицируются как опасные для здоровья Смесью UP/UU (R) красного цвета на дне пробирок человека и окружающей среды. При контакте немедленно промыть пораженное место большим количеством воды и при плохом ОК Прозрачная бесцветная самочувствии обратиться за медицинской помощью. При жидкость попадании внутрь рвоту не вызывать, прополоскать рот водой, ПК U обратиться к врачу при плохом самочувствии. Материалом для проведения ПЦР-исследования служат образцы ДНК, экстрагированной из следующих видов биологического материала: • мазки со слизистой оболочки влагалища; • соскобы эпителия со слизистой оболочки цервикального канала, уретры; • моча (осадок первой порции утренней мочи). Автоматизированная экстракция ДНК и подготовка к проведению ПЦР с использованием автоматической станции «Аmplitech Е1» ВНИМАНИЕ! Необходимо ознакомиться с руководством по эксплуатации станции «Amplitech E1» и кратким руководством к набору «ДНК-100 (R)». 1 Перемешать содержимое пробирок с реагентами ОК и ПК U и осадить капли на вортексе. 2 Подготовить картридж с реагентами из набора «ДНК-100 (R)» и внести в него исследуемые образцы1 и контроли согласно краткому руководству к набору «ДНК-100 (R)». ВНИМАНИЕ! Каждая группа экстрагируемых образцов должна сопровождаться постановкой контролей ОК и ПК U не менее чем в одном повторе. 3 Установить на рабочий стол станции «Amplitech E1» картридж с внесёнными исследуемыми образцами и контролями, а также расходные материалы, входящие в состав набора «ДНК-100 (R)», согласно руководству по эксплуатации станции. 4 Отрезать от планшета необходимое количество пробирок со Смесью UP/UU (R) и снять с них защитную плёнку. 5 Установить отрезанные пробирки со Смесью UP/UU (R) на рабочий стол автоматической станции в адаптер для контейнеров для элюата. 6 Запустить выполнение протокола, последовательно считав штрих-коды: а) протокола экстракции ДНК, указанного в кратком руководстве набора «ДНК-100 (R)»; б) используемого ряда картриджа набора «ДНК-100 (R)»; в) протокола подготовки к проведению ПЦР, указанного ниже. ВНИМАНИЕ! Запуск протокола провести в течение 30 минут после установки реагентов на рабочем столе станции. 1 Для образцов мочи провести предобработку согласно инструкции по применению набора для проведения экстракции. Amplitech UP/UU (R) КР в.29.09.25 1 | Цикл | Температура, °С | Время | | Детекция по каналам для | | | Количество | | | | | | | флуорофоров | | | циклов | | | 1 | 50 | 15 мин | – | | | 1 | | | | 2 | 95 | 2 мин | – | | | 1 | | | | 3 | 95 | 10 с | – | | | 42 | | | | | 60 | 20 с | FAM, R6G2, Cy5 | | | | | | | Цикл | Температура, °С | Время | | Детекция по каналам для | | | Количество | | | | | | | флуорофоров | | | циклов | | | 1 | 50 | 15 мин | – | | | 1 | | | | 2 | 95 | 15 мин | – | | | 1 | | | | 3 | 95 | 10 с | – | | | 42 | | | | | 60 | 20 с | FAM, R6G2, Cy5 | | | | | | 7 После завершения протоколов вынуть адаптер с пробирками и заклеить их плёнкой, входящей в состав набора «Amplitech UP/UU (R)». ВНИМАНИЕ! Пробирки, заклеенные плёнкой, не переворачивать и не встряхивать, чтобы избежать разбрызгивания содержимого по стенкам пробирок и попадания их на защитную плёнку. 8 Пробирки с реакционной смесью с внесенным элюатом не подлежат хранению. Необходимо незамедлительно произвести запуск реакции амплификации по следующей программе. Примечания 1) При программировании амплификатора указать объём реакции: 25 мкл. 2) При одновременном проведении в одном приборе тестов только для выявления ДНК допускается исключить из указанной программы цикл «50 °С – 15 мин» для экономии времени. 3) Детекция может назначаться по другим каналам, помимо указанных, при одновременном проведении в одном приборе нескольких тестов с использованием указанной программы. 9 Поместить пробирки с реакционной смесью и элюатом в амплификатор и запустить программу. Экстракция ДНК и ручная подготовка к проведению ПЦР 1 Провести экстракцию ДНК с использованием набора реагентов «ДНК-100 (R)» (ООО «Амплитек») согласно краткому руководству к набору. Примечание – Элюцию провести в объёме 100 мкл. ВНИМАНИЕ! Каждая группа экстрагируемых образцов должна сопровождаться постановкой контролей ОК и ПК U не менее чем в одном повторе. 2 Отрезать от планшета необходимое количество пробирок со Смесью UP/UU (R) и снять с них защитную плёнку. 3 Для удобства внесения образцов ДНК рекомендуется установить отрезанные пробирки в штатив для ПЦР-планшетов. 4 Внести в подготовленные пробирки по 20 мкл образцов ДНК, полученных в результате экстракции из исследуемых образцов и контролей (ОК и ПК U). ВНИМАНИЕ! При внесении ДНК необходимо избегать попадания сорбента в реакционную смесь. 5 Перемешать содержимое пипетированием, не допуская образования пузырьков воздуха. 6 После внесения образцов ДНК заклеить пробирки плёнкой, входящей в состав набора «Amplitech UP/UU (R)». ВНИМАНИЕ! Пробирки, заклеенные плёнкой, не переворачивать и не встряхивать, чтобы избежать разбрызгивания содержимого по стенкам пробирок и попадания их на защитную плёнку. 7 Пробирки с реакционной смесью с внесенным элюатом не подлежат хранению. Необходимо незамедлительно произвести запуск реакции амплификации по следующей программе Примечания 1) При программировании амплификатора указать объём реакции: 25 мкл. 2) При одновременном проведении в одном приборе тестов только для выявления ДНК допускается исключить из указанной программы цикл «50 °С – 15 мин» для экономии времени. 3) Детекция может назначаться по другим каналам, помимо указанных, при одновременном проведении в одном приборе нескольких тестов с использованием указанной программы. 2 Сигнал от флуорофора R6G регистрируется по каналу детекции сигнала от аналогичных флуорофоров HEX и VIC. Amplitech UP/UU (R) КР в.29.09.25 2 Учёт и интерпретация результатов 1 Результаты интерпретировать на основании наличия (отсутствия) Ct (кривых накопления флуоресцентного сигнала, пересекающих пороговую линию) по детектируемым каналам в соответствии с таблицей: Наличие Ct по каналу для FAM R6G3 Cy5 флуорофора Выявлена ДНК U. parvum U. urealyticum ВК Примечание – В случае отсутствия ДНК U. parvum и U. urealyticum в исследуемом образце необходимо проверить наличие Ct по каналу Cy5 со значением Ct ≤ 35. В противном случае результат считать невалидным. 2 Количественное определение ДНК выявляемых возбудителей рассчитать с помощью алгоритма, приведенного в инструкции к набору реагентов. 3 Результат исследования считают достоверным, если получены валидные результаты для контролей в соответствии с таблицей4, приведённой ниже: Граничное значение порогового цикла (Ct) по каналу для флуорофора Образец FAM R6G3 Cy5 ОК ‒ ‒ ≤ 35 ПК U ≤ 34 ≤ 35 ≤ 35 3 Сигнал от флуорофора R6G регистрируется по каналу детекции сигнала от аналогичных флуорофоров HEX и VIC. 4 Переменная информация, специфичная для лота, выделена цветом. Amplitech UP/UU (R) КР в.29.09.25 3 Лист регистрации изменений Номера страниц Всего Изм. изменён- заменён- аннулиро- страниц в Номер документа Подпись Дата ных ных новых ванных документе Amplitech UP/UU (R) КР 4 ООО «Амплитек», 7 После завершения протоколов вынуть адаптер с пробирками и заклеить их плёнкой, входящей в Россия, 109235, Москва. АМПЛИТЕК ул. 1-я Курьяновская, д. 34, стр. 8, этаж 1 пом. II ком. 42 состав набора «Amplitech UP/UU (R)». тел. (495) 374-13-46, www.amplitech.ru ВНИМАНИЕ! Пробирки, заклеенные плёнкой, не переворачивать и не встряхивать, чтобы избежать Amplitech UP/UU (R) разбрызгивания содержимого по стенкам пробирок и попадания их на защитную плёнку. 8 Пробирки с реакционной смесью с внесенным элюатом не подлежат хранению. Необходимо Набор реагентов для количественного определения ДНК Ureaplasma parvum и Ureaplasma urealyticum в незамедлительно произвести запуск реакции амплификации по следующей программе. биологическом материале человека методом ПЦР с детекцией в режиме «реального времени" Детекция по каналам для Количество (Amplitech UP/UU (R)) по ТУ 20 59 52-057-19926214-2025 Цикл Температура, °C Время флуорофоров циклов 1 50 15 мин — КРАТКОЕ РУКОВОДСТВО 2 95 2 мин — 1 |ref| Р042-0 LOT 1698 3 95 0с — 42 60 20 с FAM, R6G2, Су5 ВНИМАНИЕ! Перед использованием набора необходимо ознакомиться с инструкцией по его применению. Примечания Инструкция по применению и паспорт размещены по адресам: http://www.amplitech.ru/resources/ и http://www.amplitech.ru/quality/ 1) При программировании амплификатора указать объём реакции: 25 мкл. соответственно. 2) При одновременном проведении в одном приборе тестов только для выявления ДНК допускается РЕАГЕНТЫ исключить из указанной программы цикл «50 °C - 15 мин» для экономии времени. Реагент Внешний вид Меры предосторожности 3) Детекция может назначаться по другим каналам, помимо указанных, при одновременном проведении в Планшет со Гель от светло-розового до в Р е е щ аг е е с н т т в ы , п с о о э д т е о р м ж у а н т е а к з л и а д с с н и а ф тр и и ц я и р в у ю ко т н с ц я е к н а т к р о а п ц а и с и н н ы е е б д о л л я е з е д о 0 р ,0 о 5 в ь % я одном приборе нескольких тестов с использованием указанной программы. Смесью UP/UU (R) красного цвета на дне пробирок человека и окружающей среды. При контакте немедленно промыть 9 Поместить пробирки с реакционной смесью и элюатом в амплификатор и запустить программу. пораженное место большим количеством воды и при плохом ОК Прозрачная бесцветная самочувствии обратиться за медицинской помощью. При Экстракция ДНК и ручная подготовка к проведению ПЦР жидкость попадании внутрь рвоту не вызывать, прополоскать рот водой, 1 Провести экстракцию ДНК с использованием набора реагентов «ДНК-100 (R)» (ООО «Амплитек») ПК U обратиться к врачу при плохом самочувствии. согласно краткому руководству к набору. Материалом для проведения ПЦР-исследования служат образцы ДНК, экстрагированной из Примечание -Элюцию провести объёме 100 мкл. следующих видов биологического материала: ВНИМАНИЕ! Каждая группа экстрагируемых образцов должна сопровождаться постановкой контролей • мазки со слизистой оболочки влагалища; ОК и ПК U не менее чем в одном повторе. • соскобы эпителия со слизистой оболочки цервикального канала, уретры; 2 Отрезать от планшета необходимое количество пробирок со Смесью UP/UU (R) и снять с них • моча (осадок первой порции утренней мочи). защитную плёнку. Автоматизированная экстракция ДНК и подготовка к проведению ПЦР с 3 Для удобства внесения образцов ДНК рекомендуется установить отрезанные пробирки в штатив для использованием автоматической станции «Amplitech Е1» ПЦР-планшетов. ВНИМАНИЕ! Необходимо ознакомиться с руководством по эксплуатации станции «Amplitech Е1» и 4 Внести в подготовленные пробирки по 20 мкл образцов ДНК, полученных в результате экстракции кратким руководством к набору «ДНК-100 (R)». из исследуемых образцов и контролей (ОК и ПК U). 1 Перемешать содержимое пробирок с реагентами ОК и ПК U и осадить капли на вортексе. ВНИМАНИЕ! При внесении ДНК необходимо избегать попадания сорбента в реакционную смесь. 2 Подготовить картридже реагентами из набора «ДНК-100 (R)» и внести в него исследуемые образцы1 5 Перемешать содержимое пипетированием, не допуская образования пузырьков воздуха. и контроли согласно краткому руководству к набору «ДНК-100 (R)». 6 После внесения образцов ДНК заклеить пробирки плёнкой, входящей в состав набора «Amplitech ВНИМАНИЕ! Каждая группа экстрагируемых образцов должна сопровождаться постановкой контролей UP/UU (R)». ОК и ПК U не менее чем в одном повторе. ВНИМАНИЕ! Пробирки, заклеенные плёнкой, не переворачивать и не встряхивать, чтобы избежать 3 Установить на рабочий стол станции «Amplitech Е1» картридж с внесёнными исследуемыми разбрызгивания содержимого по стенкам пробирок и попадания их на защитную плёнку. образцами и контролями, а также расходные материалы, входящие в состав набора «ДНК-100 (R)», 7 Пробирки с реакционной смесью с внесенным элюатом не подлежат хранению. Необходимо согласно руководству по эксплуатации станции. незамедлительно произвести запуск реакции амплификации по следующей программе 4 Отрезать от планшета необходимое количество пробирок со Смесью UP/UU (R) и снять с них Детекция по каналам для Количество Цикл Температура, °C Время защитную плёнку. флуорофоров циклов 5 Установить отрезанные пробирки со Смесью UP/UU (R) на рабочий стол автоматической станции в 1 50 15 мин — 1 адаптер для контейнеров для элюата. 2 95 15 мин — 1 6 Запустить выполнение протокола, последовательно считав штрих-коды: 3 95 Юс — 42 60 20 с FAM, R6G2, Су5 а) протокола экстракции ДНК, указанного в кратком руководстве набора «ДНК-100 (R)»; б) используемого ряда картриджа набора «ДНК-100 (R)»; Примечания в) протокола подготовки к проведению ПЦР, указанного ниже. 1) При программировании амплификатора указать объём реакции: 25 мкл. 2) При одновременном проведении в одном приборе тестов только для выявления ДНК допускается исключить из указанной программы цикл «50 °C - 15 мин» для экономии времени. 3) Детекция может назначаться по другим каналам, помимо указанных, при одновременном проведении в одном приборе нескольких тестов с использованием указанной программы. ВНИМАНИЕ! Запуск протокола провести в течение 30 минут после установки реагентов на рабочем столе станции. 1 Для образцов мочи провести предобработку согласно инструкции по применению набора для проведения экстракции. 2 Сигнал от флуорофора R6G регистрируется по каналу детекции сигнала от аналогичных флуорофоров НЕХ и VIC. Amplitech UP/UU (R) КР в.29.09.25 Amplitech UP/UU (R) КР в.29.09.25 2 Учёт и интерпретация результатов 1 Результаты интерпретировать на основании наличия (отсутствия) Ct (кривых накопления флуоресцентного сигнала, пересекающих пороговую линию) по детектируемым каналам в соответствии с таблицей: Наличие Ct по каналу для FAM R6G3 Су5 флуорофора Выявлена ДНК U. parvum U. urealyticum ВК Примечание - В случае отсутствия ДНК U. parvum и U. urealyticum в исследуемом образце необходимо проверить наличие Ct по каналу Су5 со значением Ct 35. В противном случае результат считать невалидным. 2 Количественное определение ДНК выявляемых возбудителей рассчитать с помощью алгоритма, приведенного в инструкции к набору реагентов. 3 Результат исследования считают достоверным, если получены валидные результаты для контролей в соответствии с таблицей, приведённой ниже: Граничное значение порогового цикла (Ct) по каналу для флуорофора Образец FAM R6G3 Су5 ОК — 35 ПК U 34 35 35 3 Сигнал от флуорофора R6G регистрируется по каналу детекции сигнала от аналогичных флуорофоров НЕХ и VIC. Amplitech UP/UU (R) КР в.29.09.25 3 ООО «Амплитек», Россия, 109235, Москва, ул. 1-я Курьяновская, д. 34, стр. 8, этаж 1 пом. II ком. 42 тел. (495) 374-13-46, e-mail: support@amplitech.ru ПАСПОРТ № 1698-25 Amplitech UP/UU (R) Набор реагентов для количественного определения ДНК Ureaplasma parvum и Ureaplasma urealyticum в биологическом материале человека методом ПЦР с детекцией в режиме «реального времени» (Amplitech UP/UU (R)) по ТУ 20.59.52-057-19926214-2025 P042-0 1698 2025-10-07 2026-10-07 при температуре от 2 °С до 8 °С всеми видами крытых транспортных средств в термоконтейнерах Условия с хладоэлементами или в авторефрижераторах. Допускается транспортировать набор при транспортирования: температуре от 8 °С до 25 °С не более 10 суток. в упаковке предприятия-изготовителя хранить при температуре от 2 °С до 8 °С и относительной влажности воздуха от 25 до 75 % в защищённом от солнечного света месте. Планшет со Смесью Условия хранения: UP/UU (R) беречь от влаги. После транспортирования допускается хранить набор не более 5 суток при температуре от 8 °С до 25 °С. Контроль качества набора проведён по ТУ 20.59.52-057-19926214-2025. Состав набора и внешний вид компонентов Лот ком- Норма Результат понента наименование количество внешний вид контроля 96-луночный делимый планшет, заклеенный защитной плёнкой, с Планшет со Смесью 00001 1 шт. реагентом в виде геля (от светло- Соответствует UP/UU (R) розового до красного цвета) на дне пробирок 00110 Плёнки для планшета 2 шт. Клейкие плёнки Соответствует 00059 ОК 0,8 мл х 1 пробирка Прозрачная бесцветная жидкость Соответствует 00021 ПК U 0,8 мл х 1 пробирка Прозрачная бесцветная жидкость Соответствует – Краткое руководство 1 шт. В бумажном виде Соответствует Упаковка набора Показатель Норма Результат контроля Вид первичной и вторичной упаковки Соответствует требованиям ТУ Соответствует Отсутствие видимых дефектов Отсутствие дефектов Соответствует Маркировка набора Показатель Норма Результат контроля Наличие информации на внутренней упаковке Информация соответствует компонентов набора и внешней упаковке Соответствует требованиям ТУ. набора в соответствии с требованиями ТУ Функциональные характеристики набора Показатель Норма Результат контроля Предел обнаружения Выявление ДНК U. parvum, U. ДНК U. parvum, U. urealyticum обнаружены. Соответствует urealyticum в концентрации 800 ГЭ/мл. Валидность результатов тестирования Последовательность ВК1 обнаружена. Соответствует для исследуемых образцов 1 Реагент входит в состав набора реагентов для проведения экстракции ДНК. Показатель Норма Результат контроля Результаты соответствуют критериям Валидность результатов тестирования оценки, указанным в инструкции по Соответствует для контролей исследования (ОК, ПК) применению набора. Предел измерения Количественное определение ДНК U. Полученное расчётное значение parvum, U. urealyticum в концентрации2 концентрации ДНК U. parvum, U. urealyticum Соответствует 9 500 ГЭ/мл в диапазоне от 3 000 до 30 000 ГЭ/мл. Валидность результатов тестирования Последовательность ВК обнаружена. Соответствует для исследуемых образцов Результаты соответствуют критериям Валидность результатов тестирования оценки, указанным в инструкции по Соответствует для контролей исследования (ОК, ПК) применению набора. Заключение: Набор указанного лота соответствует требованиям ТУ 20.59.52-057-19926214-2025. Дата выдачи паспорта: 07.10.2025 Специалист ОКК, Позднякова О.Р. По приказу № 20251002/001 от 02.10.2025 г. 2 Нижняя граница диапазона измерения набора плюс 0,5 lg.