=== файл: Инструкция_руководство__db332855_I.pdf ===
--- стр. 3 ---
HMTase
гомоцистеин + SAM * SAH + Met
SAHase
SAH ---------------------► Hey + Ado
аденозин деаминаза
Ado ^ инозин + аммиак
глутамат дегидрогеназа
аммиак + NADH + 2-оксоглутарат ------------------------------► глутамат + NAD+ + Н2О
Реагенты
Готовы к использованию
R1: 4x17,2 мл
R2: 4x4,2 мл
SR: 4x3,4 мл
Активные компаненты:
S-аденозилметионин (SAM)
NADH
ТСЕР
2-оксоглутарат
Глутамат дегидрогеназа
SAH гидролаза
Аденозин деаминаза
Гомоцистеин метилтрансфераза 5,0 KU/л
Меры предосторожности и предупреждения
Только для in vitro диагностики
Соблюдайте обычные меры предосторожности необходимые для работы со всеми
лабораторными реагентами.
Любой остаток реагента должен быть удалён после рекомендуемого срока использования
его на борту анализатора (см. ниже).
Утилизация использованных материалов должна проводиться в соответствии с местными
правилами ликвидации отходов.
Хранение и стабильность реагентов
Хранение при 2-8°С См срок годности на упаковке
В приборе при использовании
холодильника анализатора 30 дней
Не замораживать
Реагент должен быть чистым. Реагент, который стал мутным или оптическая плотность на
длине волны 340 нм менее 0,5, необходимо забраковать.
Сбор и подготовка образцов
Сыворотка, плазма: гепариновая плазма
Очень важно центрифугировать образцы крови сразу же после сбора образца для
отделения плазмы от клеток крови. Если незамедлительное центрифугирование не
возможно, собранные образцы крови должны быть помещены в лед и
отцентрифугированы в течение часа. Сильно гемолизированые, мутные или липемичные
образцы не рекомендуются к использованию для определения гомоцистеина.
0,1 ммоль
0,2 ммоль
0,5 ммоль
5.0 ммоль
10 KU/л
3.0 KU/л
5.0 KU/л
--- стр. 4 ---
Используя образцы проб в первичных пробирках, следуйте инструкциям изготовителя.
Стабильность в сыворотке/плазме 4 дня при 15-25°С
несколько недель при 2-8°С
несколько месяцев или лет при (-15)-(-
25)°С
Центрифугируйте образцы до выполнения исследования.
Протокол измерения
Для оптимального проведения исследования следуйте указаниям данного документа.
Ознакомьтесь с инструкцией оператора для анализатора, указанного в инструкции.
Использование протокола измерения, не подтвержденного Roche, не гарантирует
корректного результата и должно определяться потребителем.
Протокол измерения для плазмы/сыворотки cobas с 111 system
Режим измерения
Режим расчёта
Направление реакции
Длины волн А/В
Точки измерения: первая/последняя
Единицы измерения
Последовательность дозирования
Параметры дозирования
Плазма/сыворотка
И1
Я 2
Образец
БЫ
Общий объём
Калибровка
Калибратор
Оптическая плотность
Кинетика
Уменьшение
340/378 нм
126/33
мкмоль/л
R1/R2-S-SR
Дилюент (Н20 )
150 мкл
23,25 мкл
12,0 мкл
15,5 мкл
200,75 мкл
HCY Calibrator Kit
Для разведения серии с фактором 1.0, 2.0, 4.0, 8.0 и 18.0
используйте дилюент NaCl 9%
Режим калибровки Logit/log5
Интервал калибровки Каждый лот, каждые 7 дней, по результатам контроля качества.
Контроль качества
Плазма/сыворотка
Для контроля качества могут быть использованы как контрольные материалы, указанные в
разделе "Информация о реагентах", так и другие пригодные контрольные материалы.
Контрольные интервалы должны быть приемлемыми для каждой лаборатории, а
полученные величины должны находиться в определенных пределах. Каждая лаборатория
должна установить поправочные коэффициенты, если лабораторные величины находятся
за пределами интервалов.
Пересчёт
Анализатор cobas с 111 автоматически вычисляет концентрацию аналита в каждом
образце.
Факторы, влияющие на результаты
Критерий: Восстановление в пределах ±10% от начального значения гомоцистеина
Иктеричность Не оказывает значимого влияния до значения
концентрации 40 мг/дл для конъюгированного и
неконъюгированного билирубина.
--- стр. 5 ---
Не оказывает значимого влияния до значения
концентрации 500 мг/дл гемоглобина.
Не оказывает значимого влияния до значения
концентрации 1000 мг/дл триглицерида.
Следующие вещества, обычно присутствующие в
сыворотке, служат причиной 10% отклонения, когда
определяются в установленных концентрациях:
500 О^моль/л NH4CI, 1 ммоль/л NaPi, 1 ммоль/л NaF,
0,5 ммоль/л глутатион, 10 ммоль/л аскорбиновая
кислота, 1 ммоль/л L-цитеин, 20 Ojмоль/л S-
аденозилметионин (SAM), 100 Oj моль/л аденозин, 100
Oj моль/л цистатионин.
Пациенты, принимающие метотрексат, карбамазепин,
фенитоин, азотистую кислоту, антиконвульсанты, или
6-азуридин триаценат, могут иметь завышенный
уровень гомоцистеина, по причине влияния на
метаболизм гомоцистеина.
Добавление 3-деазаденозина задерживает синтез
гомоцистеина в эритроцитах.
Не требует специальной промывки
Измеряемый интервал
Сыворотка, плазма 2,8 - 50 мкмоль/л
Фактор разведения 2
Нижний предел обнаружения 2,8 мкмоль/л
Предел обнаружения представляет самый низкий измеренный уровень аналита, который
отличается от нуля. Вычисляется как величина, лежащая в трёх стандартных отклонениях
выше нулевого образца.
Ожидаемые результаты
Сыворотка/плазма
женщины 5-12 мкмоль/л
мужчины 5-15 мколь/л
Каждая лаборатория должна учитывать возможное несоответствие ожидаемых
значений и значений, измеренных в популяции обследованных пациентов, и, если
необходимо, устанавливать свои собственные пределы
В диагностических целях значения, полученные при тестировании, всегда должны быть
оценены в связи с историей болезни пациента, клиническими обследованиями и другими
анализами.
Точность определения
Воспроизводимость результатов была определена следующим образом: один образец
сыворотки содержал 15,6 мкмоль/л гомоцистеина и два контрольных материала
содержащих 7,0 и 29,0 мкмоль/л гомоцистеина были протестированы 12 раз в течение 1
дня (п=12). Для определения неточности между днями, образцы, приведенные выше,
были протестированы 2 раза в день в течение 5 дней (п=30).
Были получены следующие результата:
Гемолиз
Липемия
Лекарственные препараты
Дополнительная промывка
--- стр. 8 ---
______cobas с systems
Кобас с системы ______cob as с ^_
Информация о реагентах
Э т а н о л ( Е Т О Н 2 )
Этанол cobas с 111 2x50 тестов Номер по каталогу 05401623190
Аммиак/этанол/С02 калибратор 2x4 мл Номер по каталогу 20751995190
Код 688
Аммиак/этанол/С02 контроль норма 5x4 мл Номер по каталогу 20752401190
Код 100
Аммиак/этанол/С02 контроль паталогия 5x4 мл Номер по каталогу 20753009190
Код 101
Предписание для использования
Набор реагентов для количественного определения in vitro концентрации этанола в сыворотке,
плазме и моче на анализаторе cobas с 111.
Теоретическое обоснование
Определение этилового спирта один из самых распространненых анализов, необходимых в
судебной и клинической токсикологической лаборатории. Оно используется для диагностики и
лечении алкогольной интоксикации и отравлениях.
Первоначальные методики для определения алкоголя использовали дистилляцию, аэрацию или
диффузию для выделения алкоголя из плазмы. Дистиллированный алкоголь измерялся
окислением с помощью сильного окислителя. Однако у этого метода не было специфичности,
так как другие окисляемые соединения могли также быть продистиллированы и реагировать в
реакционной смеси. Наряду со многими допустимыми методами, включая газовую
хроматографию и осмометрические методы, ферментативная методика, основанная на работах
Buher и Redetzki, специфична и проста в выполнении.
Принцип метода
Ферментативный метод с алкоголь дегидрогеназой.
Этиловый спирт и NAD при участии алкоголь дегидрогеназы (ADH) превращаются в ходе
реакции в ацетальдегид и NADH.
этиловый спирт + NAD+ ADH ацетальдегид + NADH + И 1 -
-------------------->
Формирование в ходе реакции NADH измеряется фотометрически. Изменение оптической
плотности прямо пропорционально концентрации этилового спирта.
Реагенты
Готовы к использованию.
R1 Буфер, консерванты
SR NAD (дрожжи): >3 ммоль/л; ADH (дрожжи): >617 мккат/л (37 Е/мл);
стабилизаторы, консерванты
Меры предосторожности и предупреждения
Только для in vitro диагностики
Соблюдайте обычные меры предосторожности необходимые для работы со всеми
лабораторными реагентами.
Любой остаток реагента должен быть удалён после рекомендуемого срока использования его на
борту анализатора (см. ниже).
Утилизация использованных материалов должна проводиться в соответствии с местными
правилами ликвидации отходов.
Хранение и стабильность реагентов
Хранение при 2-8°С Смотрите срок годности на упаковке
1
--- стр. 9 ---
В приборе при использовании холодильника 4 недели
анализатора
Сбор и подготовка образцов
Не используйте спирт или другие быстро испаряющиеся дезинфецирующие вещества в месте
венепункции. Используйте водный раствор Zephiran (хлорид бензалкониума), водный раствор
Merthiolate (тимеросал) или иодин повидона.
Для сбора и подготовки используйте только подходящие пробирки. После тестирования были
признаны подходящими указанные ниже виды материала для исследования.
Сыворотка
Плазма. Li-гепариновая и Кг-EDTA плазма
Моча Любые образцы мочи можно использовать
Используя образцы проб в первичных пробирках, следуйте инструкциям изготовителя.
Центрифугируйте образцы до выполнения исследования.
Стабильность
2 дня при 15-25°С
2 недели при 2-8°С
4 недели при (-15)-(-25)°С
30 дней при 2-8°С
4 недели при (-15)-(-25)°С
Протокол измерения
Для оптимального проведения исследования следуйте указаниям данного документа.
Ознакомьтесь с инструкцией оператора для анализатора, указанного в инструкции.
Использование протокола измерения, не подтвержденного Roche, не гарантирует корректного
результата и должно определяться потребителем.
Важно: не оставляйте пробирки с образцами открытыми дольше чем на 5 минут. Результаты
могут стать неверными, вследствие испарения спирта.
При использовании Ammonia/Ethanol/C02 калибратора не оставляейте флакон открытым более
чем на 30 минут при температуре 15-25°С.
При использовании Ammonia/Ethanol/C02 контроля не оставляейте флакон открытым более чем
на 1 час при температуре 15-25°С.
Протокол измерения для сыворотки, плазмы и мочи cobas с 111 system
Сыворотка/плазма
Моча
Режим измерения
Режим расчёта
Направление реакции
Длины волн А/В
Точки измерения: первая/последняя
Единицы измерения
Последовательность дозирования
Параметры дозирования
R1
Образец
SR
Общий объём
Калибровка
Калибратор
Оптическая плотность
Кинетика
Возрастание
340/659 нм
23/29
ммоль/л (г/л, мг/дл)
R1-S-SR
50 мкл
4 мкл
50 мкл
120 мкл
Дшпоент (НгО)
16 мкл
Режим калибровки
Аммиак/Этанол/СОг калибратор
В качестве нулевого калибратора используйте деионизированную
воду
Линейная регрессия
2
--- стр. 10 ---
Интервал калибровки Каждый лот, по результатам контроля качества.
Стандартизация: метод стандартизован по отношению к первичному стандарту (NIST).
Контроль качества
Сыворотка/плазма/моча
Для контроля качества могут быть использованы как контрольные материалы, указанные в
разделе "Информация о реагентах", так и другие пригодные контрольные материалы.
Контрольные интервалы должны быть приемлемыми для каждой лаборатории, а полученные
величины должны находиться в определенных пределах. Каждая лаборатория должна
установить поправочные коэффициенты, если лабораторные величины находятся за пределами
интервалов.
Пересчёт
Анализатор cobas с 111 автоматически вычисляет концентрацию аналита в каждом образце.
Факторы пересчёта: ммоль/л х 0,04608 = г/л
ммоль/л х 4,608 = мг/дл
г/л х 21,7 = ммоль/л
г/л х 100 = мг/дл
Факторы, влияющие на результаты
Критерий: Восстановление в пределах ±10% от начального значения этанола 21,7 ммоль/л (0,99
г/л, 100 мг/дл)
Сыворотка/плазма
Иктеричность Не оказывает значимого влияния до значения 60 индекса I для
конъюгированного и неконъюгированного билирубина (приблизительное
значение конъюгированного и неконъюгированного билирубина: 1026
мкмоль/л (60 мг/дл)).
Гемолиз Не оказывает значимого влияния до значения индекса Н 800
(приблизительная концентрация гемоглобина: 497 мкмоль/л (800 мг/дл).
Липемия Не оказывает значимого влияния до значения 2000 индекса L. Имеется
низкая корреляция между индексом L (характеризующим мутность) и
концентрацией триглицеридов.
Медицинские Не оказывает значимого влияния
препараты
В очень редких случаях моноклональная гаммопатия может провести к неправильным
результатам.
Моча
Гипохлориды могут оказывать влияние.
Важно: Другие похожие спиртовые реагенты могут давать ложно завышенный результат в
образцах, содержащих высокий уровень лактат дегидрогеназы и лактата, особенно в образцах,
взятых посмертно.
Медицинские Не оказывает значимого влияния
препараты
Дополнительная промывка
Не известно никаких влияний, требующих дополнительной промывки.
Измеряемый интервал
Сыворотка/плазма/моча 1,2 -1 0 8 ммоль/л (0,10 - 4,98 г/л, 10,1-498 мг/дл)
Не используйте автоматический реанализ. Для реанализа используйте свежие образы.
Расширенный диапазон измерения (расчетный)
Фактор разведения 3 (рекомендуемый)
Нижний предел обнаружения 2,2 ммоль/л (0,10 г/л, 10,1 мг/дл)
3
--- стр. 14 ---
Д-димер (D-DI)
cobas с systems
Кобас с системы ______cob as с 1 1 1______
Информация о реагентах
Tina-quant Д-Димер 4x50 тестов Номер по каталогу 05077753190
cobas с 111
Д-димер калибратор и 1x0,5 мл Номер по каталогу 11556495216 Код 680
нулевой стандарт 1x2,5 мл
Д-димер контроль 1/П 2x0,5 мл Номер по каталогу 11556509216
Код 200/201
NaCl дилюент 9% 6 x 2 2 мл Номер по каталогу 04774230190
Код 951
Предписание для использования
Набор реагентов для количественного иммунологического определения in vitro продуктов
деградации фибрина (Д-димер и Х-олигомеры) в плазме на анализаторе cobas с 111.
Теоретическое обоснование
Тромбин превращает фибриноген в растворимый фибрин, расщепляя фибринопептиды А и В.
Фибриновые мономеры полимеризируются спонтанно. Активный фактор ХШ соединяет два Д-
зоны и образует цельный фибриновый сгусток. Образуется новый плазмин-устойчивый
антигенный детерминант (Д-димер). Таким образом формируются фрагменты, содержащие Д-
димер, путем разложения фибрина плазмином.
Большая часть продуктов разложения фибрина содержит высокомолекулярные Х-олигомеры. Tina
quant набор для определения Д-димера имеет сильное сродство к высокомолекулярным
продуктам разложения. Только in vitro или в течение лизисной терапии имеет место полное
разложение до молекул Д-димеров.
Д-димер очень чувствительный маркер активности коагуляции. При значениях Д-димера ниже
нижней границы нормы, глубокий венозный тромбоз (DVT) нижних конечностей и эмболия
легочной артерии (РЕ) исключается с высокой долей вероятности.
В случае обширного внутрисосудистого свертывания крови (Е>1С)/туберкулезной коагулопатии
продукты деградации фибрина служат чувствительными маркерами. Мониторинг продуктов
фибрин специфичного разложения можно использовать при:
• подтверждении или опровержении предварительного диагноза
• оценки потенциального риска для пациентов с обширным внутрисосудистым
свертыванием крови
• контроле лечения
Кроме DVT, РЕ и DIC, Д-димер отражает другие причины, связанные с образованием
фибринового сгустка, такие как травма, осложенения при беременности, злокачественные
болезни или сосудистые аномалии. Увеличение уровня Д-димеров в следствии этого можно
интерпретировать в контексте возможных основных болезней и симптомов.
Принцип метода
Иммунотурбидиметрический метод с латексным усилением.
Латексные частицы одинакового размера покрыты моноклональными антителами (F(ab ’)2
фрагменты) к эпитопу Д-димера. Комплекс антиген-антитело образуется добавлением образца,
содержащего Д-димер, и ведет к увеличению оптической плотности реакционной смеси.
Изменение оптической плотности во времени зависит от концентрации эпитопов Д-димеров в
образце. Преципитат определяется иммунотурбидиметрически.
Реагенты
Готовы к использованию.
Реагент R2 необходимо помешивать каждый день во избежание выпадения осадка. Это
осуществляется полуавтоматически анализатором после считывания баркода.
R1 ТРИС/НС1 буфф: 370 ммоль/л, pH: 8,2; NaCl: 267 ммоль/л
1
--- стр. 15 ---
R2 Латексные частицы, покрытые моноклональными анти-человеческими
антителами к Д-димеру (мышь): 0,15%
Меры предосторожности и предупреждения
Только для in vitro диагностики
Соблюдайте обычные меры предосторожности необходимые для работы со всеми лабораторными
реагентами.
Утилизация использованных материалов должна проводиться в соответствии с местными
правилами ликвидации отходов.
Хранение и стабильность реагентов
Д-Димер
Хранение при 2-8°С Смотрите срок годности на упаковке
В приборе при использовании холодильника 4 недели
анализатора
Сбор и подготовка образцов
Для сбора и подготовки используйте только подходящие пробирки. После тестирования были
признаны подходящими указанные ниже виды материала для исследования.
Плазма. Цитратная плазма. Для сбора венозной крови используйте стандартные
пробирки для clotting тестов; используйте стерильный 0,11 молярный раствор
цитрата натрия. Придерживайтесь точно соотношению 1 часть цитрата
натрия на 9 частей крови. Сразу же после сбора крови, тщательно
перемешайте образец, избегая вспенивания.
Li-гепариновая плазма. В отличие от использования цитратных пробирок,
образцы не разодятся в гепариновых пробирках. Поэтому значение Д-
димерав гепариновой плазме в среднем на 19% выше измерительного
диапазона. Однако, используя подходящие значения калибратора и контроля,
получаются результаты идентичные значениям в образцах с обоими видами
материалов
Используя образцы проб в первичных пробирках, следуйте инструкциям изготовителя.
Разморозьте замороженные образы полностью при 37°С и тщательно перемешайте. Оставьте при
комнатной температуре на 15 минут перед использованием, затем сразу проводите исследование.
Повтороной заморозке образцы для коагуляционного анализа не подлежат.
Используйте не разведенные образцы.
Центрифугируйте образцы до выполнения исследования.
Стабильность
Плазма 8 часов при 15 - 20°С
4 дня при 2 - 8°С
6 месяцев при (-15)-(-25)°С
Протокол измерения
Для оптимального проведения исследования следуйте указаниям данного документа
Ознакомьтесь с инструкцией оператора для анализатора, указанного в инструкции.
Использование протокола измерения, не подтвержденного Roche, не гарантирует корректного
результата и должно определяться потребителем.
Протокол измерения для плазмы cobas с 111 system
Режим измерения Оптическая плотность
Режим расчёта Конечная точка
Направление реакции Возрастание
Длины волн А/В 659 нм
Точки измерения: первая/последняя 7/19
Единицы измерения мкг РЕ11а )/мл
Последовательность дозирования R1-R2-S
г) Фибриноген эквивалентная единица.
Параметры дозирования
Дилюент (НгО)
2
--- стр. 16 ---
R1
R2
Образец
Общий объём
Калибровка
Калибратор
90 мкл
90мкл
5 мкл
195 мкл
10 мкл
Режим калибровки
Интервал калибровки
Д-димер калибратор
Д-димер калибратор в ручную разводится с нулевым стандартом.
Ознакомтесь с инструкцией к калибратору для разведения калибратора
Logit/Log4
Каждый лот, каждые 6 месяцев при использовании одного и того же лота
реагента, по данным контроля качества.
Калибратор должен быть размещен в обозначенных позициях на
анализаторе: в первой позиции калибратор с самой высокой
концентрацией и с самой низкой в последней позиции.
Стандартизация: метод стандартизован по отношению к ассерахромному Д-димера методу.
Контроль качества
Плазма
Для контроля качества могут быть использованы как контрольные материалы, указанные в
разделе "Информация о реагентах", так и другие пригодные контрольные материалы.
Контрольные интервалы должны быть приемлемыми для каждой лаборатории, а полученные
величины должны находиться в определенных пределах. Каждая лаборатория должна установить
поправочные коэффициенты, если лабораторные величины находятся за пределами интервалов.
Пересчёт
Анализатор cobas с 111 автоматически вычисляет концентрацию аналита в каждом образце.
Факторы пересчёта: мк FEU/мл = мг FEU/л
мк FEU/мл * 1000 = нг FEU/мл
Факторы, влияющие на результаты
Критерий: Восстановление в пределах ±10% от начального значения.
Плазма
Не оказывает значимого влияния.
Не оказывает значимого влияния до значения индекса Н 300 (приблизительная
концентрация гемоглобина 186 мкмоль/л (300 мг/дл).
Не оказывает значимого влияния до значения 350 индекса L. Имеется низкая
корреляция между индексом L (характеризующим мутность) и концентрацией
триглицеридов.
Не оказывают значимого влияния.
Иктеричность
Гемолиз
Липемия
Лекарственные
препараты
Другое Высокая концентрация Д-фрагментов, которые могут возникнуть при лизисной
терапии, приводят к угнетению измерения.
В очень редких случаях моноклональная гаммопатия может провести к
неправильным результатам.
Дополнительная промывка
Неизвестно никаких влияний, требующих дополнительной промывки.
Измеряемый интервал
Плазма 0,1- 9,0 мг РЕШмл
Расширенный диапазон измерения (расчетный)
Фактор разведения 6 (рекомендуемый)
Нижний предел обнаружения 0,1 мг РЕи/мл
Предел обнаружения представляет самый низкий измеренный уровень аналита, который
отличается от нуля. Вычисляется как величина, лежащая в трёх стандартных отклонениях выше
нулевого образца
3
--- стр. 22 ---
i
ИНСТРУКЦИЯ
по применению изделия медицинского назначения:
Липаза (Lipase (colorimetric) cobas с system (UPC))
--- стр. 23 ---
Л и п а за (Колориметрический метод)
LIPASE (LIPC)
Информация о реагентах
Липаза Cobas с 111 2x50 тестов Номер по каталогу 05401704190
Калибратор CFAS. 12x3 мл Номер по каталогу 10759350190 Код 401
Контроль норма PNU. 20x5 мл Номер по каталогу 10171743122 Код 300
Контроль патология PPU 20x5 мл Номер по каталогу 10171778122 Код 30
Предписание для использования
Набор реагентов “ Липаза (колориметрический тест) ” содержит
диагностическую систему реагентов in vitro, предназначенную для
использования на анализаторах cobas с 111 с целью количественного
определения каталитической активности липазы
(триацилглицеролацилгидролаза КФ 3.1.1.3) в сыворотке и плазме
Теоретическое обоснование
Липазы - гликопротеины с молекулярным весом 47 000 Д. Они определяются
как гидролазы триглицеридов, которые катализируют расщепление
триглицеридов до диглицеридов с последующим образованием моноглицеридов
и жирных кислот. Наряду с а-амилазой определение активности липаз
поджелудочной железы в течение многих лет неоспоримо считается наиболее
важным параметром клинической химии для дифференциального диагноза
заболеваний поджелудочной железы. Определение активности липазы находит
все большее международное признание в силу своей специфичности и
быстроты ответа. После острых панкреатитов активность липазы увеличивается
в течение 4-8 часов и достигает максимума к 24 часам, а снижается через 8 -1 4
дней. Однако не существует корреляций между активностью липазы сыворотки
и степенью повреждения поджелудочной железы. Существует много методов
для определения активности липазы, в которых ее оценивают либо по убыли
субстрата турбидиметрически или нефелометрически, либо по продуктам
реакции.
Этот метод основан на расщеплении липазой специфического хромогенного
субстрата - эфира 1,2-О-дилаурил-рак-глицеро-З глутаровой кислоты -(6-
метил-резоруфин), эмульгированного желчными кислотами. Активность
фермента поджелудочной железы определяется только в комбинации с
желчными кислотами и колипазой.
Метод
Колориметрическое определение ферментативной активности с
использованием в качестве субстрата эфира 1,2-О-дилаурил-рак-глицеро-З
глутаровой кислоты -{6-метил-резоруфина).
Принцип метода
В результате каталитического действия липазы в щелочной среде
хромогенный субстрат липазы - эфир 1,2-О-дилаурил-рак-глицеро-З глутаровой
кислоты -(6-метил-резоруфин) расщепляется с образованием 1,2-О-дилаурил-
рак-глицероля и нестабильного интермедиата, эфира глутаровой кислоты -(6-
метил-резоруфина). Последнее соединение спонтанно распадается в щелочной
среде с образованием глутаровой кислоты и метилрезоруфина. Добавление
детергента и колипазы увеличивает специфичность определения липазы
поджелудочной железы. Фактически, в отсутствии колипазы активность липазы
не определяется. Колипаза активирует только липазу поджелудочной железы, и
не действует на другие ферменты сыворотки. Высокое количество холатов
1
--- стр. 24 ---
лишает все другие эстеразы сыворотки возможности реагировать с
хромогенным субстратом вследствие формирования отрицательного
поверхностного заряда.
Эфир 1,2-О-дилаурил-рак-глицеро-З глутаровой кислоты-(6-метил-резоруфин)
— » 1,2-О-дилаурил-рак-глицероля + эфира глутаровой кислоты -(6-метил-
резоруфнна) -» глутаровая кислота + метил-резоруфин
Интенсивность красного окрашивания прямо пропорциональна
каталитической активности липазы. Она определяется по увеличению
поглощения при 583 нм.
Реагенты
К1 Буфер, колипаза и холат в виале А ( жидкость) .
К2=БК Хромогенный субстрат в виале С (жидкость).
Активные инградиенты:
Компоненты
В1СШ
Колипаза ( из поджелудочной
железы свиньи)
Хлорид кальция
Тартратовый буфер
Дезоксихолат натрия
Эфир 1,2-О-дилаурил-рак-
глицеро-З глутаровой кислоты
-(6-метил-резоруфин)
Т ауродезоксихолат
Концентрации
R1 SR
50
>1
10
1,6
10
0,27
8,8
Тест
27 ммоль/л;
>0,53 ммоль/л;
5,3 ммоль/л;
3,2 ммоль/л;
0,85 ммоль/л;
0,09 ммоль/л;
2,8 ммоль/л;
pH 8,0 4,0 7,9
Реагент SR содержит нереакционноспособный детергент и стабилизаторы.
Пожалуйста, смотрите на маркировку емкостей с реагентами.
Меры предосторожности и предупреждения
Только для in vitro диагностики
Обращайте внимание на все предостережения и предупреждения на упаковке
Хранение и стабильность реагентов
На полке при 2-8°С Смотри срок годности упаковке
В приборе при использовании (10-15°С) 4 недели;
Сбор и подготовка образцов
Сыворотка, плазма.
Единственным приемлемым антикоагулянтом является Li-гепарин.
Са-связывающие антикоагулянты такие, как ЭДТА, цитрат и флуорид влияют на
определение и не должны использоваться.
Сбор и подготовка образцов
Сыворотка, плазма без гемолиза.
Единственный приемлемый антикоагулянт - гепарин.
Следует избегать использования антикоагулянтов флюорида и иодоацетата
вследствие присущей им гемолитической активности. Цитрат натрия и ЭДТА
подавляют активность фермента и тоже не могут быть использованы.
2
--- стр. 25 ---
1 неделя при 15-25 °С
Стабильность: 1 неделя при 2-8 °С
1 год при -20 °С
Факторы, влияющие на результаты
Сыворотка, плазма
Гемолиз
Желтуха
Липидемия
Антикоагулянты
Определение калибраторов
Калибратор
Интервал калибровки
Определение контролей
Ряд сравнения
Пределы для патологии
Интервал для контроля
Последовательность контроля
Контроль после калибратора
Ожидаемые уровни (норма)
Взрослые 1 3 -6 0 Е д ./л (0,22 - 1,00 мккат/л);
Чтобы сравнить полученные данные со стандартным рядом сравнения для
липазы, активность которой измерена турбидиметрическим методом,
умножьте полученные результаты (в Ед./л, или в мккат/ л) на фактор 3,2,
чтобы получить приближенные значения. Рекомендуется каждой лаборатории
установить и ориентироваться на свои собственные стандартные ряды.
Уровни активности, указанные здесь, должны быть использованы как
ориентировочные.
В диагностических целях значения, полученные при тестировании, всегда
должны быть оценены в связи с историей болезни пациента, клиническими
обследованиями и другими анализами.
Аналитическая чувствительность ( нижний предел определения)
3,0 Е д/л ( 0,05 мккат/л)
Нижний предел определения представляет собой минимально измеряемую
активность липазы, отличную от нуля. Он считается по трем стандартным
отклонениям 30 реплик нулевого образца
Нет значимого влияния
Нет значимого влияния.
Нет значимого влияния.
ЭДТА, цитрат и флуорид
должны быть исключены.
калибратор ф.а.с.
Используйте деионизованную воду как
нулевой калибратор ( автоматичесая функция
анализатора).
Каждый лот
Точное значение нормы Ед. плюс или точное
значение нормы Ед.
Точное значение при патологии Ед. плюс
или точное значение при патологии Ед.
Рекомендован 24 часа
Определяется пользователем
Рекомендован
3
--- стр. 30 ---
2
Обращение с реактивами
Реагенты готовы к использованию.
Хранение и стабильность
Невскрытый флакон при 2 - 8°С: См. срок годности на флаконе
После вскрытия при 2 - 8°С: 84 дней
Сбор и Сыворотка:
подготовка Плазма: L i-гепарированная, К 2-/К3-ЭД ТА плазма
образцов Центрифугируйте образцы, содержащие включения перед проведением теста.
Стабильность 11 дней при 15-25°С
2 месяца при 2-8°С
3 года при (-15)-(-25)°С
Процедура проведения анализа
Для оптимального проведения анализа важно следовать указаниям по работе с используемым анализатором и
проверить, имеется ли в системе достаточный запас аналитических материалов и других расходных
материалов.
Калибровка
Калибратор Roche/Hitachi 902/Modular D:
SI: 0,9% NaCl
S2-5: Preciset Serum Proteins
Roche/Hitachi 912/917/Modular P:
SI: 0,9% NaCl
S2-5: Cfas Proteins
Умножьте лот-специфичное значение для Cfas Proteins калибратора на фактор, приведенный ниже, для
определения стандартных концентраций для 6-точечной калибровочной кривой
S2: 0,10 S4: 1,00 S 6: 4,00
S3: 0,40 S5: 2,00
Интервал калибровки После смены лота реагента, по запросу процедуры контроля качества.
Метод был стандартизован по отношению к внутреннему методу C R M 470.
Контроль качества
Для контроля качества могут быть использованы как контрольные материалы, указанные в разделе
"Информация о реагентах", так и другие пригодные контрольные материалы. Контрольные интервалы должны
быть приемлемыми для каждой лаборатории, а полученные величины должны находиться в определенных
пределах. Каждая лаборатория должна установить поправочные коэффициенты, если лабораторные величины
находятся за пределами интервалов.
Расчет результатов
Анализатор автоматически вычисляет результаты концентрации СРБ в каждом образце.
Факторы пересчета: мг/л х 9,52 = нмоль/л мг/дл х 95,2 нмоль/л
мг/л х 0,1 = мг/дл мг/дл х 10 = мг/л
мг/дл х 0,01 = г/л г/л х 100 = мг/дл
О граничения - интерференция
Воспроизводимость в пределах ±10% от начального значения
Иктеричность Не оказывает значимого влияния до значения 60 индекса I для
конъюгированного и неконъюгированного билирубина
(приблизительное значение конъюгированного и
неконъюгированного билирубина — 1026 мкмоль/л (60мг/дл)) .
Гемолиз Не оказывает значимого влияния до значения 1000 индекса Н
(приблизительное значение концентрации гемоглобина: 1000 мг/дл,
10000 мг/л, или 621 мкмоль/л)
Липемия Не оказывает значимого влияния до значения 1000 индекса L.
Имеется низкая корреляция между индексом L (характеризующим
мутность) и концентрацией триглицеридов.
Ревматоидный фактор Не оказывает значительного влияния до значения 1200 Е/мл
Эффект высокой дозы Не оказывает значительного влияния до значения концентрации
СРБ до 1200 мг/л (11424 нмоль/л)
Лекарственные препараты При приеме лекарств в терапевтической дозе влияния не
обнаружено.
Другие Очень редкие случаи гаммапатий, в частности, макроглобулинемия
Вальденстрема (типа IgM) могут вызвать получение недостоверных
стр. 2 ■ » 6 H itach i C R P L doc
--- стр. 31 ---
3
результатов
Измеряемый интервал 0,3 - 350 мг/л (2,9 - 3333 нмоль/л)
Если полученная концентрация гаптоглобинов выходит за эти
пределы, в ручную разведите образец 1+1 0,9% №С1. Результат
умножьте на фактор 2.
Ожидаемые результаты
Взрослые < 5 мг/л (<47,6 нмоль/л)
В каждой лаборатории необходимо исследовать допустимость перенесения ожидаемых (нормативных)
результатов на популяцию собственных пациентов и, в случае необходимости, определить свои собственные
нормативные диапазоны.
Результаты, полученные с использованием данного или любого другого диагностического набора, следует
использовать и интерпретировать только в контексте общей клинической картины и результатов других
диагностических исследований
Аналитические характеристики
Точность Воспроизводимость была определена с использованием образцов человеческой
сыворотки и контролей (п-число исследованных образцов). Были получены
следующие данные:
Внутри серии (п=21) Между сериями (п=21)
Образец Среднее,
мг/л
SD, мг/л c v ,% Среднее, мг/л SD, мг/л c v ,%
Control Level 1 3,6 0,03 0,85 3,1 0.08 2,7
Control Level 2 42,2 0,26 0,61 41,4 0,86 2,1
Аналитическая чувствительность (нижний предел определения): 0,2 мг/л (1,9 нмоль/л)
Предел обнаружения представляет собой самую малую концентрацию СРБ, которая может быть обнаружена
как отличная от нуля. Она вычислена как концентрация, лежащая на 3 стандартных отклонения выше низкого
стандарта (низкий стандарт СРБ + 3 SD, воспроизводимость в пределах серии, п = 21).
М етод сравнения Сравнение между Roche Tina-quant C-reactive Protein Gen.3 на анализаторе
Roche/Hitachi 917 (у) с Roche Tina-quant CR P (Latex) на анализаторе Roche/Hitachi
917 (х) дало следующую корреляцию в человеческой сыворотке (мг/л)
С ы в о р о т к а (п = 6 7 )
Passing/Bablok
у= 1.020х-0,0003
п=0,9946
Концентрация проб: 0,22 - 197мг/л
Библиография
1. G reiling Н , Gressner A M , eds. Lehrbuch der Klinischen Chemie und Pathobiochemie, 3rd ed. Stuttgart/New York:
Schattauer, 1995: 234— 236.
2. Thomas L , Labor und Diagnose, 7. Auflage, TH-Books Verlagsgesellschaft mbH, Frankfurt/Main, 2008: 1010-1021.
3. Burtis C A , Ashwood ER , eds. Tietz Fundamentals of C linical Chemistry, 5th ed., W .B. Saunders Company,
Philadelphia, 2001: 332-333.
4. Thomas L , Messenger M . Pathobiochemie und Labordiagnostik der Entzündung. Lab med 1993; 17: 179-194.
5. Young В, Gleeson M , Cripps AW . C-reactive protein: A critical review. Pathology 1991; 23: 118-124.
6. Wasunna A , W hitelaw A , Gallimore R, Hawkins PN, Pepys M B . C-reactive protein and bacterial infection in preterm
infants. Eur J Pediatr 1990; 149:424-427.
7. Vergis N, Should C R P be used as a marker of infection in patients with liver cirrhosis? C lin Lab Int 2007; 6:12-13.
8. Mackenzie I, Woodhouse J. C-reactive protein concentrations during bacteraemia: a comparison between patients
w ith and without live r dysfunction. Intensive Care Medicine 2006; 32:1344-1351.
9. Price CP, T rull A K , Berry D, Gorman EG. Development and validation of a particle-enhanced turbidimetric
immunoassay for C-reactive protein. J Immunol Methods 1987;99:205-211.
10. Eda S, Kaufmann J, Roos W, Pohl S. Development of a new microparticle-enhanced turbidimetric assay for C-
reactive protein with superior features in analytical sensitivity and dynamic range. J C lin Lab Anal 1998;12:137-144.
11. Use o f Anticoagulants in Diagnostic Laboratory Investigations. W HO Publication W HO/DIL/LAB/99.1. Rev. 2.
Jan. 2002.
Линейная регрессия
y=1.029x- 0,5043
r=0.9998
crp . 3 *•* 6 H itach i C R F L .d o c
--- стр. 32 ---
4
12. Baudner S, Bienvenu J, Blirup-Jensen S, Carlstrom A , Johnson A M , M ilford-W ard A , Ritchie R , Svendsen PJ,
W hicher JT. The certification o f a matrix reference material for immunochemical measurement o f 14 human serum
proteins, CRM 470, Report E U R 15243 EN, 1993:1-186.
13. G lic k M R , Ryder KW , Jackson SA. Graphical comparisons of interferences in clinical chemistry instrumentation.
C lin Chem 1986;32:470-474.
14. Breuer J. Report on the Symposium “Drug effects in clinical chemistry methods”, Eur J C lin Chem C lin Biochem
1996;34:385-386.
15. Sonntag O, Scholer A. Drug interference in clinical chemistry: recommendation o f drugs and their concentrations to
be used in drug interference studies. Ann C lin Biochem 2001: 38: 376-385.
16. Dati F, Schumann G, Thomas L et al. Consensus of a group of professional societies and diagnostic companies on
guidelines for interim reference ranges for 14 proteins in serum based on the standardization against the
IFC C /B C R /C A P reference material (CR M 470). Eur J C lin Chem C lin Biochem 1996;34:517-520.
17. Bablok W et al. A general regression procedure for method transformation. J C lin Chem C lin Biochem
1988;26:783-790.
Парам етры настройки
Для анализаторов Roche/Hitachi 904, 911, 912, 917 и Modular введение параметров аппликации осуществляется
через аппликационную дискету, баркоды.
Roche/Hitachi 902
No. <Chemistry>
1 Test Name CRPL3
2 Assay Code (Mthd) 2 Point End
з Assay Code (2. Test) 0
4 Reaction Time 10
5 Assay Point 1 20
6 Assay Point 2 29
7 [Assay Point 3 21
8 Assay Point 4 23
9 Wavelength (SUB) 800
10 Wavelength (MAIN) 570
И Sample Volume 3.0
12 R1 Volume 250
13 R1 Pos. ....
14 R1 Bottle Size Small
15 R2 Volume 0
16 R2 Pos. 0 i
I7 R2 Bottle Size Small |
f I» R3 Volume 120 j
19 R3 Pos. j .... !
20 R3 Bottle Size Small |
21 Calib. Type (Type) Spline I
22 Calib. Type (Wght) 0
стр . 4 *з 6 H itach i C R P L .d o c
--- стр. 33 ---
5
23 Calib. Cone. 1 0.00
24 Calib. Pos. 1
25 Calib. Cone. 2
26 Calib. Pos. 2 | ....
| 27 Calib. Cone. 3
28 Calib. Pos. 3
| 29 ¡Calib. Cone. 4
30 Calib. Pos. 4
31 Calib. Cone. 5 |
32 Calib. Pos. 5
33 Calib. Cone. 6
34 Calib. Pos. 6
35 SI ABS 0
36 K Factor o
37 |K2 Factor 1000
38 K3 Factor 1000
39 K4 Factor 1000
40 K5 Factor 1000
1 41 A Factor 0
42 B Factor 0
43 C Factor 0
44 SD Limit 999
45 Duplicate Limit 100
46 Sens. Limit 5050
47 SI Abs. Limit (L) -32000
48 |S1 Abs. Limit (H) 32000
49 Abs. Limit 32000
50 Abs. lim it (D/I) Increase
51 Prozone Limit 63
52 Proz. Limit (Upp/Low) D
53 Prozone (Endpoint) 29
54 Expect. Value (L)
55 Expect. Value (H)
56 Instr. Fact, (a) 1.0
57 Instr. Fact, (b) 0.0 |
58 Key setting j
crp. 5 « 6 H itad riC R P L .d oc
--- стр. 35 ---
ИНСТРУКЦИЯ
по применению изделия медицинского назначения:
К о н т р о л ь ЛПНП (sdLDL Control Set)
--- стр. 36 ---
Х О Л Е С Т Е Р И Н Л И П О П Р О Т Е И Д О В н и з к о й п л о т н о с т и
Информация О рбаГбНТаХ Может использоваться для анализаторов:
LDL-Cholesterol plus 2nd generationR1 Cat. No. 05230438190
R2 Cat No. 05230446190
К алибратор C.f.a.s. Lipids 3 x 1 мл Cat No. 12172623 122
К о н тр о л ь Precinorm® L 4 x 3 мл Cat No. 10781827 122
К о н тр о л ь Precipath® HDL/LDL-C 4 x 3 мл Cat No. 11778552 122
NaCl Diluent 9% 6 x 22 мл Cat No. 04489357 190
System-Ю 07 6869 3
Н азначение теста
LD L-cholesterol 2nd generation содержит систему реагентов для количественного определения in vitro
концентрации холестерина липопротеидов низкой плотности (Х С Л П Н П , LD L-Cholesterol) в сыворотке и
плазме, предназначенную для использования в системах с Roche/Hitachi.______________________________
Клиническое значение _______________________________________________________________________
Липопротеиды низкой плотности (LD L) играют ключевую роль в возникновении и распространении
атеросклероза, и, конкретно, при коронарном атеросклерозе. Л П Н П образуются от V L D L (липопротеидов
очень низкой плотности с богатым содержанием триглицеридов) под действием различных
липолитических ферментов и синтезируются печенью.
Элиминация Л П Н П из плазмы происходит главным образом паренхимальными клетками печени и через
специфические рецепторы ЛПНП. Повышенная концентрация Л П Н П в крови и увеличение времени их
существования связывается с увеличением их биологической модификации при деструкции
эндотелиальной функции и более высоким захватом холестерина Л П Н П моноцит/макрофагальной
системой, также как и гладкомышечными клетками сосудистой стенки. Основной холестерин,
откладываемый в атеросклеротических бляшках, происходит из ЛПНП. Концентрация холестерина Л П Н П
является наиболее сильным клиническим предиктором среди всех одиночных параметров, используемых
при оценке коронарного атеросклероза. Следовательно, терапия, направленная на снижение концентрации
липидов, первоначально нацелена на снижение холестерина Л ПНП. Эффективная терапия выражается в
улучшении функции эндотелия, профилактике атеросклероза и уменьшении его прогрессирования, а также
профилактике разрыва бляшки.
Для определения холестерина ЛПНП доступны различные методы, такие как ультрацентрифугирование -
референтный метод, электрофоретическое разделение липопротеидов и методы преципитации. При
использовании преципитации осаждают аполипопротеиды В, содержащие холестерин Л П Н П , например, с
использованием поливинил сульфата, декстран сульфата или полицикличных анионов. Концентрация
Л П Н П обычно вычисляется как разность между общим холестерином и холестерином Л П О Н П и
холестерином Л П В П в супернатанте после осаждения с поливинил сульфатом и декстран сульфатом.
Научно-исследовательские клиники по изучению липидов рекомендуют комбинацию
ультрацентрифугирования и методов преципитации, использующих полианионы в присутствие
двухвалентных катионов. Тем не менее, методы осаждения, трудоемкие, не подлежат автоматизации и
подверженные влиянию гиперлипидемической сыворотки, особенно при высокой концентрации свободных
жирных кислот. Более современный метод основан на определении холестерина Л П Н П после
иммуноадсорбции и центрифугирования.
Этот автоматизированный метод для прямого определения холестерина Л П Н П имеет преимущество
селективным мицелярным растворением холестерина Л П Н П с помощью неионного детергента и
взаимодействием сахарозного компонента и липопротеидов (ЛПОНП и хиломикронов). Когда детергент
включается в ферментативный метод для определения холестерина (холестерин эстеразная, холестерин
оксидазная фазы реакции), относительная реактивность холестерина увеличивается по липопротеидам в
следующем порядке: Л П В П < хиломикроны < Л П О Н П < Л ПНП. В присутствии Mg++ сахарозный
компонент значительно снижает ферментативную реакцию определения холестерина в Л П О Н П и
хиломикронах. Комбинация сахарозного состава с детергеном обуславливает выборочное определение
холестерина Л П Н П в сыворотке. Результаты в пробах, полученных не натощак немного ниже, чем
результаты после голодания. Этот прямой метод отвечает целям N C E P 1995 <4% общего C V , смещение
<4% против референтного метода и <12% общей аналитической ошибки.
2006-06, VI En#sh 1/3 cotmcsydems
--- стр. 37 ---
Вычисление концентрации холестерина ЛП НП обычно производят согласно формуле Фридевальд.
Формула основана на 2-х определениях холестерина, 1-ом определении триглицеридов, а также этапа
осаждения при определении Л П ВП и базируется на том, что существует прямая зависимость между
холестерином Л П О Н П и триглицеридами в образцах крови, полученных после ночного голодания. Даже в
присутствии небольших количеств хиломикронов или патологических липопротеидов, формула приводит к
получению ложно заниженных концентраций ЛП НП . По этой причине существует необходимость
простого и надежного метода для определения холестерина Л П Н П без любых подготовительных шагов
или вычислений.
П р и н ц и п теста
Гомогенный энзиматический колориметрический метод.
Detafgs*
LDL-chdestefd esters ---------------- ^ Cholesterol + free fatty
+ H 2O Chatestaol w to s e 5K^S (selective m ceto ry
sdubiizabon)
Эфиры холестерина Л П Н П расщепляются количественно холестеринэстеразой до холестерина и
свободных жирных кислот.
СНсМегд! с иИв зй
ИХ_-СЬо1ейегЫ + Ог
---------------Д4-сКо1ейепоое + НгОг
В присутствии кислорода, холестерин окисляется холестериноксидазой до Д4-холестенона и перекиси
водорода.
2 ФОг + 4-amho*rtnrrine +
HSDA'+HzO + H*
Purple-blue pigment
t 5 H2O (Abs. max =
585 ran)
•Н ЭО А = З о й ш п М -{ 2 -» ¥ < * « у -3 -г1 * [П * |у ))-3 ,5 -* п е # > ш гу а п й Г 1 в
В присутствии пероксидазы, перекись водорода генерирует реакцию с 4-аминоантипирином и Н Б Б А с
формированием комплекса фиолетово-синего цвета. Интенсивность формирования окрашенного
комплекса прямо пропорциональна концентрации холестерина и изменяется фотометрически.
____________
Реагенты (рабочие растворы)
R I M O P S буффер: 20,1 ммоль/л, pH 6,5; HSDA: 0,96 ммоль/л; аскорбат оксидаза:
>50 мккат/л; пероксидаза: >167 мккат/л; консерванта
R2 M O P S буфер: 20,1 ммоль/л, pH 6,8; M gS04-7H20: 8,11 ммоль/л; 4-аминоантипирин: 2,46 ммоль/л;
холестеринэстераза: >50 мккат/л; холестериноксидаза: >33,3 мккат/л; пероксидаза: >334 мккат/л; детергент;
консерванты.
Готовы к использованию.
Хранение и стабильность
Ц > Ь _С
Хранение при 2-8°С «на полке»
На борту холодильника анализатора
№С19%
Хранение при 2-8°С «на полке»
На борту холодильника анализатора
До указанного на кассете срока годности
12 недель
До указанного на кассете срока годности
__________12 недель
Сбор и подготовка материала для исследования
Для сбора и подготовки используйте только подходящие пробирки. После тестирования были признаны
подходящими указанные ниже виды материала для исследования.
С ы в о р о т к а .
П л а з м а : Ы-гепарин. Использование Э Д Т А приводит к более низким результатам.
М огут быть использованы образцы, взятые у пациентов как после ночного голодания, так и без него.
Используя образцы проб в первичных пробирках, следуйте инструкциям изготовителя пробирок.
С т а б и л ь н о с т ь:
7 дней при 2-8°С
30 дней при -70°С
сыворотка/плазма
Адап тац ия д л я плазм ы и сыворотки COBAS С 501 system
Способ вычисления 2-точечное
Направление реакции Увеличение оптической плотности
Длины волн 700/600 нм
Точки расчета первая/последняя 10/10-47
Единицы измерения ммоль/л (мг/дл, г/л)
cotrascsydens 2/3 20064В, V ! English
--- стр. 40 ---
<УТВЕР
Дире! Диагностики
Москва»
Нестеров
< 1 0 » апреля 2009г.
ИНСТРУКЦИЯ
по применению изделия медицинского назначения:
ЛПНП. R1 (LDL-Cholesterol. no pretreatment (LDL-C plus 2n d generation)
Roche/Hitachi)
ЛПНП. R2 (LDL-Cholesterol. no pretreatment (LDL-C plus 2n d generation)
Roche/Hitachi)
ЛПНП (sdLDL Pretreatment kit)
--- стр. 41 ---
г
ХОЛЕСТЕРИН ЛИПОПРОТЕИДОВ НИЗКОЙ ПЛОТНОСТИ
Информация О реагентах М ож ет и сп ол ь зов а ть ся д л я а н ал и затор ов :
LDL-Cholesterol plus 2nd generation R1 Cat. No. 05230438190
R2 Cat. No. 05230446190
Калибратор C.f.a.s. lipids 3 x 1 мл Cat No. 12172623 122
К онтроль PrecinormOL 4x3 мл Cat No. 10781827 122
К онтроль Precipath® HDIVLDL-C 4 x 3 мл Cat. No. 11778552 122
NaCl Diluent 9 % 6x22 мл Cat No. 04489357 190
System-ID 07 6869 3
Назначение теста
LD L-cholesterol 2nd generation содержит систему реагентов для количественного определения in vitro
концентрации холестерина липопротеидов низкой плотности (Х С ЛПНП, LDL-Cholesterol) в сыворотке и
плазме, предназначенную для использования в системах с Roche/Hitachi.
______________________________
Клиническое значение _______________________________________________________________________
Липопротеиды низкой плотности (LD L) играют ключевую роль в возникновении и распространении
атеросклероза, и, конкретно, при коронарном атеросклерозе. Л П Н П образуются от V L D L (липопротеидов
очень низкой плотности с богатым содержанием триглицеридов) под действием различных
липолигических ферментов и синтезируются печенью.
Элиминация Л П Н П из плазмы происходит главным образом паренхимальными клетками печени и через
специфические рецепторы ЛПНП. Повышенная концентрация Л П Н П в крови и увеличение времени их
существования связывается с увеличением их биологической модификации при деструкции
эндотелиальной функции и более высоким захватом холестерина Л П Н П моноцит/макрофагальной
системой, также как и гладкомышечными клетками сосудистой стенки. Основной холестерин,
откладываемый в атеросклеротических бляшках, происходит из ЛПНП. Концентрация холестерина ЛП Н П
является наиболее сильным клиническим предиктором среди всех одиночных параметров, используемых
при оценке коронарного атеросклероза. Следовательно, терапия, направленная на снижение концентрации
липидов, первоначально нацелена на снижение холестерина ЛПН П. Эффективная терапия выражается в
улучшении функции эндотелия, профилактике атеросклероза и уменьшении его прогрессирования, а также
профилактике разрыва бляшки.
Для определения холестерина ЛП Н П доступны различные методы, такие как ультрацентрифугирование -
референтный метод, электрофоретическое разделение липопротеидов и методы преципитации. При
использовании преципитации осаждают аполипопротеиды В , содержащие холестерин Л П Н П , например, с
использованием поливинил сульфата, декстран сульфата или полицикличных анионов. Концентрация
Л П Н П обычно вычисляется как разность между общим холестерином и холестерином Л П О Н П и
холестерином Л П В П в супернатанте после осаждения с поливинил сульфатом и декстран сульфатом.
Научно-исследовательские клиники по изучению липидов рекомендуют комбинацию
ультрацентрифугирования и методов преципитации, использующих полианионы в присутствие
двухвалентных катионов. Тем не менее, методы осаждения, трудоемкие, не подлежат автоматизации и
подверженные влиянию гиперлипидемической сыворотки, особенно при высокой концентрации свободных
жирных кислот. Более современный метод основан на определении холестерина Л П Н П после
иммуноадсорбции и центрифугирования.
Этот автоматизированный метод для прямого определения холестерина Л П Н П имеет преимущество
селективным мицелярным растворением холестерина Л П Н П с помощью неионного детергента и
взаимодействием сахарозного компонента и липопротеидов (ЛПОНП и хиломикронов). Когда детергент
включается в ферментативный метод для определения холестерина (холестерин эстеразная, холестерин
оксидазная фазы реакции), относительная реактивность холестерина увеличивается по липопротеидам в
следующем порядке: Л П В П < хиломикроны < Л П О Н П < Л П Н П . В присутствии M g-н- сахарозный
компонент значительно снижает ферментативную реакцию определения холестерина в Л П О НП и
хиломикронах. Комбинация сахарозного состава с детергеном обуславливает выборочное определение
холестерина Л П Н П в сыворотке. Результаты в пробах, полученных не натощак немного ниже, чем
результаты после голодания. Этот прямой метод отвечает целям N C E P 1995 <4% общего C V , смещение
<4% против референтного метода и <12% общей аналитической ошибки.
2 0 0 & 0 6 , V1 E n ÿsh 1/3 cobas с systens
--- стр. 42 ---
Вычисление концентрации холестерина Л П Н П обычно производят согласно формуле Фридевальд.
Формула основана на 2-х определениях холестерина, 1-ом определении триглицеридов, а также этапа
осаждения при определении Л П ВП и базируется на том, что существует прямая зависимость между
холестерином Л П О Н П и триглицеридами в образцах крови, полученных после ночного голодания. Даже в
присутствии небольших количеств хиломикронов или патологических липопротеидов, формула приводит к
получению ложно заниженных концентраций ЛПНП. По этой причине существует необходимость
простого и надежного метода для определения холестерина Л П Н П без любых подготовительных шагов
или вычислений.
П ри нцип теста
Гомогенный энзиматический колориметрический метод.
Datagert
LDL-cholestero) esters
--------------->
+ Chctestere) ederace
Cholesterol + free fatty
acids (selective miceiary
sdubfcation)
Эфиры холестерина Л П Н П расщепляются количественно холестеринэстеразой до холестерина и
свободных жирных кислот.
О ХЙЙШ * 0 0 1 * 1 5 6
ШЬСМе&его! + ■ Ог ---------------Д*-сЬЫейепопе -I- Н2О2
В присутствии кислорода, холестерин окисляется холестериноксидазой до Д4 -холестенона и перекиси
водорода.
2 Н г О г + 4 -a m in o a íitip y n n e *
HSDA* + НгО + Н*
Purpíe-blue pigment
+ 5 HjO (Abe. max =
585 nm)
* НЯЖ = Зо&т
В присутствии пероксидазы, перекись водорода генерирует реакцию с 4-аминоантипирином и 1ВШ А с
формированием комплекса фиолетово-синего цвета. Интенсивность формирования окрашенного
комплекса прямо пропорциональна концентрации холестерина и изменяется фотометрически.____________
Реагенты (рабочие растворы)
R1 M O PS буффер: 20,1 ммоль/л, pH 6,5; HSDA: 0,96 ммоль/л; аскорбат оксидаза:
>50 мккат/л; пероксидаза: >167 мккат/л; консерванты
R2 M O PS буфер: 20,1 ммоль/л, pH 6,8; M gS04-7H20: 8,11 ммоль/л; 4-аминоантипирин: 2,46 ммоль/л;
холестеринэстераза: >50 мккат/л; холестериноксидаза: >33,3 мккат/л; пероксидаза; >334 мккат/л; детергент;
консерванты.
Готовы к использованию.
Хранение и стабильность
Ц ) Ь _ С
Хранение при 2-8°С «на полке»
На борту холодильника анализатора
№С19%
Хранение при 2-8°С «на полке»
На борту холодильника анализатора
До указанного на кассете срока годности
12 недель
До указанного на кассете срока годности
12 недель
Сбор и подготовка материала для исследования
Для сбора и подготовки используйте только подходящие пробирки. После тестирования были признаны
подходящими указанные ниже виды материала для исследования.
С ы в о р о т к а .
П л а з м а: 1л-гепарин. Использование ЭД ТА приводит к более низким результатам.
М огут быть использованы образцы, взятые у пациентов как после ночного голодания, так и без него.
Используя образцы проб в первичных пробирках, следуйте инструкциям изготовителя пробирок.
С т а б и л ь н о с т ь :
7 дней при 2-8°С
30 дней при -70°С
сыворотка/плазма
Адаптац ия для плазмы и сыворотки COBAS С 501 system
Способ вычисления 2-точечное
Направление реакции Увеличение оптической плотности
Длины волн 700/600 нм
Точки расчета первая/последняя 10/10-47
Единицы измерения ммоль/л (мг/дл, г/л)
co b a s с sy stem s 2/3 2 D 0 6 -0 6 . V i Е п д » ь п
--- стр. 45 ---
Директо]/отделения^агностики
' ЗАОхРош-Москва»
«УТВЕРЖДАЮ»
О.В. Нестеров
МО» апреля 2009г.
ИНСТРУКЦИЯ
по применению изделия медицинского назначения:
Липопротеиды низкой плотности (LDL Cholesterol plus 2nd generation cobas с
system)
--- стр. 46 ---
Холестерин липопротеидов низкой плотности плюс вер.2 (LDL_C)
______cobas с systems
Кобас с системы _____
Информация о реагентах
2x50 тестов
cobas с 1 1 1
LDL-холестерин плюс вер.2
Cobas с 111
Калибратор липидов CFAS Lipids 3 х 1мл
Контроль норма Precinorm L 4x3 мл
Контроль патология Precipath 4x3 мл
HDL/LDL-C
Клинер
Номер по каталогу 05401682190
Номер по каталогу 12172623122
Код 424
Номер по каталогу 10781827 122
Код 304
Номер по каталогу 11778552 122
Код 319
Номер по каталогу 04774248 190
Код 947
NaCl 9%
Предписание для использования
Набор реагентов для количественного определения in vitro концентрации холестерина
липопротеидов низкой плотности в сыворотке и плазме на установках cobas с 111.
Теоретическое обоснование
Липопротеиды низкой плотности (LDL) играют ключевую роль в возникновении и
распространении атеросклероза, и, конкретно, при коронарном атеросклерозе. ЛПНП
образуются от VLDL (липопротеидов очень низкой плотности с богатым содержанием
триглицеридов) под действием различных липолитических ферментов и
синтезируются печенью.
Элиминация ЛПНП из плазмы происходит главным образом паренхимальными
клетками печени и через специфические рецепторы ЛПНП. Повышенная
концентрация ЛПНП в крови и увеличение времени их существования связывается с
увеличением их биологической модификации при деструкции эндотелиальной
функции и более высоким захватом холестерина ЛПНП моноцит/макрофагальной
системой, также как и гладкомышечными клетками сосудистой стенки. Основной
холестерин, откладываемый в атеросклеротических бляшках, происходит из ЛПНП.
Концентрация холестерина ЛПНП является наиболее сильным клиническим
предиктором среди всех одиночных параметров, используемых при оценке
коронарного атеросклероза. Следовательно, терапия, направленная на снижение
концентрации липидов, первоначально нацелена на снижение холестерина ЛПНП.
Эффективная терапия выражается в улучшении функции эндотелия, профилактике
атеросклероза и уменьшении его прогрессирования, а также профилактике разрыва
бляшки.
Для определения холестерина ЛПНП доступны различные методы, такие как
ультрацентрифугирование - референтный метод, электрофоретическое разделение
липопротеидов и методы преципитации. При использовании преципитации осаждают
аполипопротеиды В, содержащие холестерин ЛПНП, например, с использованием
поливинил сульфата, декстран сульфата или полицикличных анионов. Концентрация
ЛПНП обычно вычисляется как разность между общим холестерином и холестерином
ЛПОНП и холестерином ЛПВП в супернатанте после о с а ж д е н и я с поливинил
сульфатом и декстран сульфатом.
--- стр. 47 ---
Научно-исследовательские клиники по изучению липидов рекомендуют комбинацию
ультрацентрифугирования и методов преципитации, использующих полианионы в
присутствие двухвалентных катионов.
Тем не менее, методы осаждения, трудоемкие, не подлежат автоматизации и
подверженные влиянию гиперлипидемической сыворотки, особенно при высокой
концентрации свободных жирных кислот. Более современный метод основан на
определении холестерина ЛПНП после иммуноадсорбции и центрифугирования.
Вычисление концентрации холестерина ЛПНП обычно производят согласно формуле
Фридевальд. Формула основана на 2-х определениях холестерина, 1-ом определении
триглицеридов, а также этапа осаждения при определении ЛПВП и базируется на том,
что существует прямая зависимость между холестерином ЛПОНП и триглицеридами в
образцах крови, полученных после ночного голодания. Даже в присутствии
небольших количеств хиломикронов или патологических липопротеидов, формула
приводит к получению ложно заниженных концентраций ЛПНП. По этой причине
существует необходимость простого и надежного метода для определения
холестерина ЛПНП без любых подготовительных шагов или вычислений.
Этот автоматизированный метод для прямого определения холестерина ЛПНП имеет
преимущество селективным мицелярным растворением холестерина ЛПНП с
помощью неионного детергента и взаимодействием сахарозного компонента и
липопротеидов (ЛПОНП и хиломикронов). Когда детергент включается в
ферментативный метод для определения холестерина (холестерин эстеразная,
холестерин оксидазная фазы реакции), относительная реактивность холестерина
увеличивается по липопротеидам в следующем порядке: ЛПВП < хиломикроны <
ЛПОНП < ЛПНП. В присутствии Mg++ сахарозный компонент значительно снижает
ферментативную реакцию определения холестерина в ЛПОНП и хиломикронах.
Комбинация сахарозного состава с детергеном обуславливает выборочное
определение холестерина ЛПНП в сыворотке. Результаты в пробах, полученных не
натощак немного ниже, чем результаты после голодания.
Принцип метода
Гомогенный энзцматический колориметрический метод.
эфиры холестерина ЛПНП + НгО холестерин холестерин + свободные
эстераза жирные кислоты
>
детергент
Эфиры холестерина ЛПНП расщепляются количественно холестеринэстеразой до
холестерина и свободных жирных кислот.
холестерин ЛПНП + Ог холестерин Д 4-холестенол + Н 2О2
оксидаза
>
В присутствии кислорода, холестерин окисляется холестериноксидазой до Д4-
холестенона и перекиси водорода
2НгОг +4-аминоантшшрин + HSDA + Н + ПОД 5НгОг + пурпурно-синий
НгО -----> комплекс (мах.абс.585 нм)
*HSDA = Sodium l^24nydrai(y-3-sdfopfopy!>-3.&<irn^hoxyar4ne
В присутствии пероксидазы (ПОД) образовавшаяся перекись водорода реагирует с 4-
амино-антипирином и HSDA с формированием пурпурно-синей окраски.
Интенсивность формирования окрашенного комплекса прямо пропорциональна
концентрации холестерина и определяется фотометрически.
Реагенты
Готовы к использованию.
R1 MOPS буффер 20,1 ммоль/л, pH 6,5; HSDA 0,% ммоль/л; аскорбат
оксидаза>50 мккат/л; пероксидаза >167 мккат/л; консерванты
--- стр. 48 ---
SR MOPS буфер: 20,1 ммоль/л, pH 6,8; MgS04-7H20: 8,11 ммоль/л;
4-аминоантипирин: 2,46 ммоль/л; холестеринэстераза: >50
мккат/л; холестериноксидаза: >33,3 мккат/л; пероксидаза: >334
мккат/л; детергент; консерванты.
Меры предосторожности и предупреждения
Только для in vitro диагностики
Соблюдайте обычные меры предосторожности необходимые для работы со всеми
лабораторными реагентами. Утилизация использованных материалов должна
проводиться в соответствии с местными правилами ликвидации отходов.
Хранение и стабильность реагентов
Хранение при 2-8°С Смотрите срок годности на упаковке
В приборе при использовании холодильника 3 недели
анализатора
Сбор и подготовка образцов
Для сбора и подготовки используйте только подходящие пробирки. После
тестирования были признаны подходящими указанные ниже виды материала для
исследования.
Сыворотка.
Плазма. Li-гепариновая плазма. Использование ЭДТА в качестве
антикоагулянта может привести к занижению результата.
Используя образцы проб в первичных пробирках, следуйте инструкциям изготовителя.
Могут анализироваться образцы, полученные как натощак, так и после приёма пищи.
Центрифугируйте образцы до выполнения исследования.
Стабильность
Сыворотка/плазма 7 дней при 2-8°С
3 месяца при -70°С
Не используйте образцы, которые хранились при -20°С. Замораживание
рекомендуется только при -70°С.
Протокол измерения
Для оптимального проведения исследования следуйте указаниям данного документа.
Ознакомьтесь с инструкцией оператора для анализатора, указанного в инструкции.
Использование протокола измерения, не подтвержденного Roche, не гарантирует
корректного результата и должно определяться потребителем.
Протокол измерения для сыворотки и плазмы cobas с 111 system
Режим измерения
Режим расчёта
Направление реакции
Длины волн А/В
Точки измерения: первая/последняя
Единицы измерения
Последовательность дозирования
Параметры дозирования
R1
Образец
SR
Общий объём
Калибровка
Калибратор
Адсорбция
Конечная точка
Возрастание
583/659 нм
16/37
ммоль/л
R1-S-SR
150 мкл
2 мкл
50 мкл
209 мкл
Дилюент (НгО)
7 мкл
Режим калибровки
CFAS Lipids
В качестве нулевого калибратора используйте
деионизированную воду
Линейная регрессия
--- стр. 49 ---
Интервал калибровки Каждый лот, по данным контроля качества
Стандартизация: метод стандартизирован по методу бета квантификации по
рекомендации Cholesterol Method Certification Protocol LDL для производителей.
Контроль качества
Для контроля качества могут быть использованы как контрольные материалы,
указанные в разделе "Информация о реагентах", так и другие пригодные контрольные
материалы. Контрольные интервалы должны быть приемлемыми для каждой
лаборатории, а полученные величины должны находиться в определенных пределах.
Каждая лаборатория должна установить поправочные коэффициенты, если
лабораторные величины находятся за пределами интервалов.
Контрольные материалы предназначены для использования только для оценки
точности и правильности. Лабораторная панель стандартизации (LSP) Национальной
Образовательной Холестериновой Программы (National Cholesterol Education Program
- NCEP) рекомендует использовать контрольные материалы двух уровней, один -
нормальном диапазоне (0,9-1,7 ммоль/л или 35-65 мг/дл) и один в концентрации,
близкой к «зоне принятия решения» (<0,9 ммоль/л или <35 мг/дл).
Пересчёт
Анализатор cobas с 111 автоматически вычисляет концентрацию аналита в каждом
образце.
Факторы пересчёта: ммоль/л х 38,66 = мг/дл
ммоль/л х 0,3866 = г/л
мг/дл х 0,0259 = ммоль/л
Факторы, влияющие на результаты
Критерий: Восстановление в пределах ±10% от начального значения ХС ЛПНП в
концентрации 4,0 ммоль/л (154 мг/дл).
Иктеричность Не оказывает значимого влияния до значения 40 индекса I для
конъюгированного и 60 для неконъюгированного билирубина
(приблизительное значение конъюгированного билирубина 684
мкмоль/л (40 мг/дл) и неконъюгированного билирубина 1026
мкмоль/л (60 мг/дл).
Гемолиз Не оказывает значимого влияния до значения индекса Н 980
(приблизительная концентрация гемоглобина 608 мкмоль/л (980
мг/дл).
Липемия Не оказывает значимого влияния до значения 300 индекса L.
Имеется низкая корреляция между индексом L (характеризующим
мутность) и концентрацией триглицеридов.
Лекарственные Никакого влияния лекарственных препаратов не было обнаружено
препараты при использовании общей лекарственной панели.
Другое В редких случаях гаммапатий, конкретно при IgM типе
(Вальденстрёма, макрогробулинемия) результаты могут искажаться.
Для диагностических целей, результаты должны всегда оцениваться в комплексе с
историей болезни, клиническим обследованием и другими данными пациента
Дополнительная промывка
Дополнительный цикл промывки (EWC), рекомендуется после R1 для
предотвращения эффекта переноса в HDLC3.
Utilities / Configuration / Extra Wash Setting:
Active On
Action After
Trigger Bottle Code 059
Pipetting Type Reagent 1
Cleaner-Bottle Code 947
--- стр. 55 ---
RI Реагент с антителами
MES (2-морфолиноэтан сернистая кислота) буфер 0,025 моль/л;
TRIS (Трис(гидроксиметил)-аминометан) буфер 0,015 моль/л, pH
6,2; антитела HbAlc > 0,5 мг/мл; стабилизаторы; консерванты
(жидкость).
R2=SR Реагент с полигаптенами
MES буфер 0,025 моль/л; TRIS буфер 0,015 моль/л, pH 6,2; HbAlc
полигаптен > 8 мкг/мл; стабилизаторы, консерванты (жидкость).
Меры предосторожности и предупреждения
Только для in vitro диагностики
Соблюдайте обычные меры предосторожности необходимые для работы со всеми
лабораторными реагентами. Утилизация использованных материалов должна
проводиться в соответствии с местными правилами ликвидации отходов.
Хранение и стабильность реагентов
HbAlc
Хранение при 2-8°С Смотрите срок годности на упаковке
В приборе при использовании холодильника 4 недели
анализатора
Гемолизирующий реагент вер.2 Смотрите срок годности на упаковке
Кат. номер 05007232 (концентрированный)
Хранение при 2-8°С
В приборе при использовании холодильника 5 дней
анализатора
Хранение реагента при температуре ниже 3°С может привести к помутнению
раствора. Это не влияет на работу реагента и является обратимым при более высоких
температурах. Таким образом, рекомендуется выдержать реагент перед
использованием при комнатной температуре около 10 минут и тщательно перемешать.
Сбор и подготовка образцов
Для сбора и подготовки используйте только подходящие пробирки. После
тестирования были признаны подходящими указанные ниже виды материала для
исследования.
Может быть использована венозная или капиллярная кровь с антикоагулянтами: Li-
гепарин, К2-ЭДТА и КЗ-ЭДТА.
Материалы, используемые для производства первичных пробирок, могут содержать
вещества, которые могут влиять на результаты теста, поэтому, используя образцы
проб в первичных пробирках, следуйте инструкциям изготовителя пробирок.
Допускается только однократное замораживание. Тщательно перемешайте образец
после размораживания.
Стабильность 3 дня при 15-25°С
7 дней при 2-8°С
6 месяцев при (-15)-(-25)°С
Приготовление гемолизата вручную
1. Перед использованием доведите образец крови и гемолизирующий реагент для
Tina-quant H bAlc (Кат. номер 11488457) до комнатной температуры.
2. Осторожно перемешайте образец непосредственно перед дозированием, чтобы
гарантировать гомогенную смесь эритроцитов. Избегайте образования пены.
3. Разбавьте образец Гемолизирующим реагентом Tina-quant HbAlc в соотношении
1:101 (1+100) используя одну из следующих схем дотирования:
Гемолизирующий реагент 500 мкл 1000 мкл 2000 мкл
Tina-quant H bA lc
Образец 5 мкл 10 мкл 20 мкл
(пациент или контроль)
--- стр. 56 ---
4. Мягко перемешайте вручную, смешивая или используйте аппарат для
перемешивания крови.
5. Гемолизат можно использовать после того, как раствор поменяет цвет с красного
на коричневато-зеленый (приблизительно за 1-2 мин).
Стабильность 4 часа при 15-25°С
24 часа при 2-8°С
6 месяцев при (-15)-(-25)°С
Протокол измерения
Для оптимального проведения исследования следуйте указаниям данного документа.
Ознакомьтесь с инструкцией оператора для анализатора, указанного в инструкции.
Использование протокола измерения, не подтвержденного Roche, не гарантирует
корректного результата и должно определяться потребителем.
Протокол измерения для сыворотки и плазмы cobas с 111 system для Hb
Режим измерения
Режим расчёта
Направление реакции
Длины волн А/В
Точки измерения: первая/последняя
Единицы измерения
Последовательность дозирования
Параметры дозирования для НЬ
R l
Образец
Общий объём
Адсорбция
Кинетика
Возрастание
378/659 нм
6/16
г/дл
R1-S
120 мкл
6 мкл
126 мкл
Дилюент (НгО)
0 мкл
Протокол измерения для сыворотки и плазмы cobas с 111 system для H bAlc
Режим измерения Адсорбция
Режим расчёта Кинетика
Направление реакции Возрастание
Длины волн А/В 378/659 нм
Точки измерения: первая/последняя 6/16
Единицы измерения г/дл
Последовательность дозирования R1-S
Параметры дозирования для H bAlc
R1 120 мкл
Образец 6 мкл
SR 24 мкл
Общий объём 150 мкл
Калибровка НЬ
Калибратор CFAS HbAlc
Калибровка H bA lc
Калибратор
Разведение калибратора
Дилюент (НгО)
0 мкл
0 мкл
CFAS HbAlc
1:1,1:1,67,1:2,1:5,1:25,1:100 выполняется
анализатором автоматически
Г емолизирующий реагент (Hemolyzing Reagent Gen.2)
Каждый лот, каждые 14 дней, по данным контроля
качества
Стандартизация: Метод стандартизирован относительно рекомендованного
референтного метода одобренного IFCC для определения HbAlc в крови человека
Результат так же может быть переведён в значения, основанные на рекомендациях
DCCT/NGSP.
Дилюент для калибратора
Интервал калибровки
--- стр. 57 ---
Контроль качества
Для контроля качества могут быть использованы как контрольные материалы,
указанные в разделе "Информация о реагентах", так и другие пригодные контрольные
материалы. Контрольные интервалы должны быть приемлемыми для каждой
лаборатории, а полученные величины должны находиться в определенных пределах.
Каждая лаборатория должна установить поправочные коэффициенты, если
лабораторные величины находятся за пределами интервалов.
Примечание: Обрабатывать контроли необходимо так же как образцы! Значения
H bA lc в контролях указаны только для HbAlc (%). Никаких результатов для НЬ и
концентрации H bAlc не предусмотрено. Как следствие, контрольные материалы для
H bA lc исследуются как образцы, и их результаты не могут быть включены в
Программу Контроля Качества cobas с 111.
Пересчёт
Анализатор cobas с 111 автоматически вычисляет соотношение между A le и НЬ в
каждом образце.
Факторы, влияющие на результаты
1. Для диагностических целей результаты HbAlc (%) должны оцениваться в
комплексе с другими диагностическими процедурами и клиническими данными.
2. Тест разработан только для точного и воспроизводимого измерения HbAlc (%).
Результаты общего НЬ и концентрации HbAlc в индивидуальных образцах не должны
использоваться.
3. Тест не предназначается для установления диагноза сахарного диабета или для
ежедневной оценки глюкозы, и не должен использоваться в качестве замены
ежедневному самоконтролю уровня глюкозы в крови или моче.
4. Исходя из принципа метода, необходимо внимательно подходить к интерпретации
любого результата HbAlc у пациентов с различными вариантами НЬ. Патологические
гемоглобины могут определять период полужизни эритроцитов или уровень
гликозилирования in vivo. В этих случаях даже аналитически правильные результаты
не отражают уровень гликемии, который соответствует гликемии у пациентов с
нормальным гемоглобином.
5. Любая причина, приводящая к сокращению срока жизни эритроцитов, снижает
связывание эритроцитов и глюкозы с последующим уменьшением HbAlc (%), даже в
тех случаях, когда средний уровень глюкозы в крови увеличен. Причинами
уменьшения срока жизни эритроцитов могут быть гемолитическая анемия или другие
гемолитическими болезнями, гомозиготы при серповидно-клеточной анемии,
беременностью, недавняя значительная или хроническая кровопотеря и т.д. Данное
предупреждение должно использоваться при интерпретации результатов HbAlc у
пациентов с этими состояниями.
6. Гликозилированный HbF не обнаруживается этим тестом, так как не содержит
гликозилированную p-цепь, которая характеризует HbAlc. Тем не менее, HbF
измеряется в пуле общего НЬ и как, следствие, в образцах, содержащих высокие
концентрации HbF (>10%) значение HbAlc может оказаться ниже ожидаемого.
Критерий: Восстановление в пределах ±10% от начального значения.
Иктеричность Не оказывает значимого влияния.
Липемия Не оказывает значимого влияния до значения триглицеридов 800
мг/дл.
Гликемия Не оказывает значимого влияния до значения глюкозы 55,5 ммоль/л
(1000 мг/дл). Не требуется голодания перед взятием образца.
Ревматоидный Не оказывает значимого влияния до значения ревматоидного
фактор фактора 750 МЕ/мл.
--- стр. 69 ---
Fe3+ аскорбат Fe2 +
--------------------->
Fe2 + + феррозин ------------------> окрашенный комплекс
В кислой среде происходит диссоциация комплекса трансферрин-железо с
высвобождением ионов железа. Липемичные образцы проясняют с помощью
детергента. Абсорбат восстанавливает Fe3+ до Fe2+ ионов, которые реагируют с
феррозином и образуют окрашенный комплекс.
Интенсивность формирования цветности хромогена прямо пропорциональна
концентрации железа и измеряется фотометрически.
Реагенты
Готовы к использованию.
R1 Лимонная кислота: 200 ммоль/л, тиомочевина: 115 ммоль/л,
детергент
SR аскорбат натрия: 150 ммоль/л; феррозин: 6 ммоль/л; консерванты
Меры предосторожности и предупреждения
Только для in vitro диагностики
Соблюдайте обычные меры предосторожности необходимые для работы со всеми
лабораторными реагентами.
Любой остаток реагента должен быть удалён после рекомендуемого срока
использования его на борту анализатора (см. ниже).
Утилизация использованных материалов должна проводиться в соответствии с
местными правилами ликвидации отходов.
Хранение и стабильность реагентов
Хранение при 2-8°С Смотрите срок годности на упаковке
В приборе при использовании холодильника 4 недели
анализатора
При удалении реагента из анализатора в течении использования, немедленно
помещайте его в холодильник (2-8°С).
Не встряхивайте реагент для избежания вспенивания.
Избегайте действия прямого солнечного света.
Сбор и подготовка образцов
Для сбора и подготовки используйте только подходящие пробирки. После
тестирования были признаны подходящими указанные ниже виды материала для
исследования.
Сыворотка не гемолизированная
Плазма. не гемолизированная. Li-гепариновая. Не используйте ЭДТА или
оксалат.
Отделите сыворотку и плазму от сгустков и клеток не позже чем через час.
Используя образцы проб в первичных пробирках, следуйте инструкциям изготовителя.
Центрифугируйте образцы до выполнения исследования.
Стабильность
Сыворотка/плазма 7 дней при 15 - 25°С
3 недели при 2 - 8°С
несколько лет при (-15)-(-25)°С
Протокол измерения
Для оптимального проведения исследования следуйте указаниям данного документа.
Ознакомьтесь с инструкцией оператора для анализатора, указанного в инструкции.
Использование протокола измерения, не подтвержденного Roche, не гарантирует
корректного результата и должно определяться потребителем.
2
--- стр. 70 ---
Протокол измерения для плазмы cobas с 111 system
Режим измерения
Режим расчёта
Направление реакции
Длины волн А/В
Точки измерения: первая/последняя
Единицы измерения
Последовательность дозирования
Параметры дозирования
Сыворотка/плазма
Ш
Образец
БЯ
Общий объём
Калибровка
Калибратор СБАБ
Оптическая плотность
Конечная точка
Возрастание
552/659 нм
26/30
мкмоль/л
R1-S-SR
100 мкл
8,5 мкл
20 мкл
160 мкл
Дилюент (НгО)
11,5 мкл
20 мкл
Режим калибровки
Интервал калибровки
В качестве нулевого калибратора используйте
деионизированную воду
Линейная регрессия
Каждый лот, после 28 дней на борту, по результатам контроля
качества.
Стандартизация: метод стандартизован по отношению к первичному стандарту (SRM
937).
Контроль качества
Для контроля качества могут быть использованы как контрольные материалы,
указанные в разделе "Информация о реагентах", так и другие пригодные контрольные
материалы. Контрольные интервалы должны быть приемлемыми для каждой
лаборатории, а полученные величины должны находиться в определенных пределах.
Каждая лаборатория должна установить поправочные коэффициенты, если
лабораторные величины находятся за пределами интервалов.
Пересчёт
Анализатор cobas с 111 автоматически вычисляет концентрацию аналита в каждом
образце.
Факторы пересчёта: мкмоль/л х 5,59 = мкг/дл
мкмоль/л х 0,0559= мг/л
мкг/дл х 0,179 = мкмоль/д
мкг/дл х 0,010 = мг/л
Факторы, влияющие на результаты
Критерий: Восстановление в пределах ±10% от начального значения железа 26,9
мкмоль/л (150 мкг/дл) в сыворотке.
Сыворотка/гтазма
Иктеричность Не оказывает значимого влияния до значения 60 индекса I для
конъюгированного и неконъюгированного билирубина
(приблизительное значение концентрации конъюгированного и
неконъюгированного билирубина: 1026 мкмоль/л (60 мг/дл)).
3
--- стр. 71 ---
Гемолиз Не оказывает значимого влияния до значения индекса Н 900
(приблизительная концентрация гемоглобина: 559 мкмоль/л (900
мг/дл). Концентрация гемоглобина выше допустимой приводит к
завышенным значениям концентрации железа, из-за наличия в
образце гемоглобинсвязанного железа.
Липемия Не оказывает значимого влияния до значения 2000 индекса Ь.
Имеется низкая корреляция между индексом Ь (характеризующим
мутность) и концентрацией триглицеридов.
Лекарственные Не оказывают влияния. Содержащееся в лекарственных препаратах
препараты железо не может участвовать в тесте из-за низкого содержания.
Другое В очень редких случаях моноклональная гаммопатия может
провести к неправильным результатам.
Дополнительная промывка
Не известно никаких влияний, требующих дополнительной промывки.
Измеряемый интервал
Сыворотка/плазма 1,0-179 мкмоль/л (5,59-1000 мкг/дл, 0,06-10,0 мг/л)
Расширенный диапазон измерения (расчетный)
Фактор разведения 5
Нижний предел обнаружения 1 мкмоль/л (5,59 мкг/дл, 0,06 мг/л)
Предел обнаружения представляет самый низкий измеренный уровень аналита,
который отличается от нуля. Вычисляется как величина, лежащая в трёх стандартных
отклонениях выше нулевого образца.
Ожидаемые значения
Сыворотка/плазма
женщины 6,6 - 26 мкмоль/л (37-145 мкг/дл, 0,37-1,45
мг/л)
мужчины 11 - 28 мкмоль/л (59-158 мкг/дл, 0,59-1,58 мг/л)
Уровень железа в сыворотке/плазме зависит от диеты и индивидуальной суточной
вариации.
Каждая лаборатория должна исследовать приемлемость ожидаемых значений для
популяции своего региона, и если необходимо определить свои значения. Результаты,
полученные в разных лабораториях, могут отличаться. В диагностических целях
значения, полученные при тестировании, всегда должны оцениваться в учётом
истории болезни пациента, клиническими обследованиями и другими анализами.
Точность
Воспроизводимость определялась, используя пробы людей и контроля по
внутреннему протоколу (внутри серии п = 21; общее п = 30). Были получены
следующие результаты:
Сыворотка/плазма
Внутри серии Среднее мкмоль/л (мкг/дл)
SD мкмоль/л (мкг/дл) cv %
Ргесшогт и 25,6(143) 0,37(2,07) 1,45
Ргес1райх и 35,8 (200) 0,41 (2,29) 1,13
Сыворотка 1 19,4 (108) 0,27 (1,51) 1,39
Сыворотка 2 90,1 (504) 0,43 (2,40) 0,48
Всего Среднее мкмоль/л (мкг/дл) SD мкмоль/л (мкг/дл) c v %
Ргесшогт и 20,4(114) 0,527 (2,95) 2,58
РгеараШ и 31,3 (175) 0,742 (4,15) 2 38
Сыворотка 3 24,0 (134) 0,604(3,38) 2,52
Сыворотка 4 87,0 (486) 0,766 (4,28) 0,88
4
--- стр. 80 ---
Обращение с реактивами
Реагенты готовы к использованию.
Замечание: Со временем возможно незначительное изменение цвета или появление осадка во флаконе R2. Это
не влияет на результаты
Хранение и стабильность
Невскрытый флакон при 2 - 8°С: См. срок годности на флаконе
После вскрытия при 2 - 8°С: 35 дней
Сбор и Сыворотка: калий ЭДТА или литий гепариновая плазма. Не используйте пуповинную
подготовка кровь.
образцов Центрифугируйте образцы, содержащие включения перед проведением теста.
Проводите исследования немедленно.
Берегите образцы от света.
Процедура проведения анализа
Для оптимального проведения анализа важно следовать указаниям по работе с используемым анализатором и
проверить, имеется ли в системе достаточный запас аналитических материалов и других расходных
материалов.
Калибровка
Калибратор CFAS
Интервал калибровки Каждые 7 дней, после смены флаконов, после смены
лота реагента, по запросу процедуры контроля
качества.
Метод был стандартизован по отношению к методу Doumas.
Контроль качества
Для контроля качества могут быть использованы как контрольные материалы, указанные в разделе
"Информация о реагентах", так и другие пригодные контрольные материалы. Контрольные интервалы должны
быть приемлемыми для каждой лаборатории, а полученные величины должны находиться в определенных
пределах. Каждая лаборатория должна установить поправочные коэффициенты, если лабораторные величины
находятся за пределами интервалов.
Расчет результатов
Анализатор автоматически вычисляет результаты концентрации общего билирубина в каждом образце.
Факторы пересчета: мг/длх 17.1 = мкмоль/л
Ограничения - интерференция
Для образцов с содержанием билирубина до 4 мг/дл: воспроизводимость в пределах tí),4 мг/дл (6,8 мкмоль/л)
Для образцов с содержанием билирубина более 4 мг/дл: воспроизводимость в пределах ±10% от начального
значения
Гемолиз Не оказывает значимого влияния до значения 1000 индекса Н
(приблизительное значение концентрации гемоглобина: 1000 мг/дл,
10000 мг/л, или 621 мкмоль/л)
Липемия Не оказывает значимого влияния до значения 1000 индекса L.
Имеется низкая корреляция между индексом L (характеризующим
мутность) и концентрацией триглицеридов.
Антикоагулянты Неполностью гепаринизированн ые пробирки могут завышать
результаты. Перепроверяйте результаты определения общего
билирубина у новорожденных в гепариновых образах в зоне выбора
метода лечения.
Индикан Не оказывает значимого влияния до значений выше 10 мг/дл или
100 мг/л
Другие Очень редкие случаи гаммапатий, в частности, макроглобулинемия
Вальденстрема (типа IgM) могут вызвать получение недостоверных
результатов
Перенос Для исключения загрязнения зонда после определения общего
билирубина, перед определением кальция используйте функцию
Evation с SMS/Acid Wash на анализаторах Roche/Hitachi
902/904/911/912/917/Modular P.
Измеряемый интервал Сыворотка: 0,1 - 35,0 мг/дл (1,71 - 598,5 мкмоль/л)
Если полученная концентрация гагггоглобинов выходит за эти
пределы, в ручную разведите образец 1+1 0,9% NaCl. Результат
c i f 2 п 5 HitachiTBIU.doc
--- стр. 81 ---
3
умножьте на фактор 2.
Выше 1,0 мг/дл (17,1 мкмоль/л)
1.0 - 6,0 мг/дл (17,1 -102,6 мкмоль/л)
6.0 - 8,0 мг/дл (102,6 - 136,8 мкмоль/л)
10,0-15,0 мг/дл (171 - 256,5 мкмоль/л)
Ожидаемые результаты
Взрослые и дети
Новорожденные
(преждевременные роды)
24 часа
48 часов
3-5 дней
Новорожденные
(рожденные в срок)
24 часа 2,0 - 6,0 мг/дл (34,2 - 102,6 мкмоль/л)
48 часов 6,0 - 7,0 мг/дл (102,6 - 119,7 мкмоль/л)
3-5 дней 4,0 - 12,0 мг/дл (68,4 - 205,2 мкмоль/л)
В каждой лаборатории необходимо исследовать допустимость перенесения ожидаемых (нормативных)
результатов на популяцию собственных пациентов и, в случае необходимости, определить свои собственные
нормативные диапазоны.
Результаты, полученные с использованием данного или любого другого диагностического набора, следует
использовать и интерпретировать только в контексте общей клинической картины и результатов других
диагностических исследований
Аналитические характеристики
Точность Воспроизводимость была определена с использованием образцов человеческой
сыворотки и контролей (п-число исследованных образцов). Были получены
следующие данные:
Внутри серии (n=21) Между сериями (п=10)
Образец Среднее CV, % Среднее CV,%
Мг/дл Мкмоль/л Мг/дл Мкмоль/л
Precitrol-N 0,87 14,9 3,1 0,86 14,7 2,2
Control
Precitrol-A 4,34 74,2 0,84 4,42 75,6 0,45
Control
Аналитическая чувствительность (нижний предел определения): 0,1 мг/дл (1,71 мкмоль/л)
Предел обнаружения представляет собой самую малую концентрацию общего билирубина, которая может быть
обнаружена как отличная от нуля. Она вычислена как концентрация, лежащая на 3 стандартных отклонения
выше низкого стандарта (низкий стандарт общего бипирубна + 3 SD, воспроизводимость в пределах серии, п =
21).
Метод сравнения Уровень общего билирубина для образцов человеческой сыворотки, полученный на
анализаторе Hitachi 911 (х) с использованием данного набора сравнили с уровнем,
полученным с использованием другого метода определения общего билирубина (у).
Была получена следующая корреляция (мг/дл):
Сыворотка/плазма (п=80)
Passing/Bablok
у=1.044х-0,035
п=0,970
Концентрация проб: 0,10 — 7,65 мг/дл
у=1.050х
г=0.998
Линейная регрессия
-0,056
Библиография
lJEhrlichP. Charite Ann 1883;8:140.
2.Malloy HT, Evelyn KA. J Biol Chem 1937;119:148.
3.Jendrassik L, Grof P. Biochem Z 1938;297:81.
4.Wahlefeld AW, et al. Scand J Clin Lab Invest 1972;29:Supplement 126.
5.Tietz NW. Clinical Guide to Laboratory Tests. 3rd ed. Philadelphia, Pa: WB Saunders Co 1995:88.
6.Sherlock S. Liver Disease. 1951 Churchill, London.
7-Meites S. Pediatric Clinical Chemistry: A Survey of Normals, Methods, ami Instrumentation, with Commentary.
Washington, DC 1977:48.
8.Bablok W et al. A general regression procedure for method transformation. J Clin Chem Clin Biochem 1988;26:783-
790.
стр. 3 »3 5 Hitachi TBilJ.doc
--- стр. 82 ---
4
Параметры настройки
Для анализаторов Roche/Hitachi 904, 911, 912, 917 и Modular введение параметров аппликации осуществляется
через аппликационную дискету, баркоды.
Roche/Hitachi 902
No. <Chemistry> |
1 Test Name TBILI
2 Assay Code (Mthd) 2 Point End
3 Assay Code (2. Test) ¡0
4 Reaction Time 5
5 Assay Point 1 4
6 Assay Point 2 15
7 Assay Point 3 0
8 Assay Point 4 0
9 Wavelength (SUB) 600
10 Wavelength (MAIN) 546
11 Sample Volume 4.0
12 R1 Volume 250
13 R1 Pos.
14 R1 Bottle Size Large
15 R2 Volume 65
>16 R2 Pos. Í
17 R2 Bottle Size Small
18 R3 Volume o
19 R3 Pos. 0
20 R3 Bottle Size Small
21 Calib. Type (Type) Linear
22 Calib. Type (Wght) jO
23 Calib. Cone. 1 0.00
24 Calib. Pos. 1
25 Calib. Cone. 2 1 ....
26 Calib. Pos. 2
27 Calib. Cone. 3 o 1
28 Calib. Pos. 3 0 j
29 Calib. Cone. 4 0
30 Calib. Pos. 4 0
31 Calib. Cone. 5 0
32 1 Calib. Pos. 5 0
стр. 4 ю 5 Hitachi TBIU-doc
--- стр. 83 ---
5
33 Calib. Cone. 6 F “ “
34 Calib. Pos. 6 w ~ ~ ~
35 SI ABS 0
36 К Factor 10000
37 K2 Factor 10000
¡38 КЗ Factor 10000
39 K4 Factor Toooo
40 K5 Factor 10000
41 A Factor 0
42 В Factor 0
43 С Factor ¡0
44 SD Limit 0.1
|45 Duplicate Limit 30
¡46 Sens. Limit 229
(47 S 1 Abs. Limit (L) -32000
¡48 SI Abs. Limit (H) 32000
49 Abs. Limit 0
¡50 Abs. Limit (D/I) Increase
(51 Prozone Limit 32000
¡52 Proz. Limit (Upp/Low) Upper
¡53 Prozone (Endpoint) 35
¡54 (Expect. Value (L)
55 Expect. Value (H)
56 Instr. Fact, (a) 1.0
|57 Instr. Fact, (b) 0.0
58 Key setting j
Данные, вводимые оператором.
Roche Diagnostics
Редакция: 2009
tq k S n S Hitachi ТВ ПЛ.йос
--- стр. 85 ---
Ревматоидный фактор
Информация о реагентах
• Обозначены Roche/Hitachi анализаторы, на которых
___________ ____________________________________________ данный набор может использоваться
Кат.№ Флакон Объем 902 912 917 Mod
Р
ular
D
03004902122 1
2
6x19 мл
6x7 мл • • • •
03004953122 1
2
6x56 мл
6x20 мл • •
Калибратор Preciset RF 5x1.0 мл Кат.№ 12172828322
Контроль Control Set RF 2 х 1.0 мл Level I Кат.№ 03005496122
2х 1.0 мл Level П
Дилюент NaCl 9%
Назначение Предназначен для количественного определения ревматоидного фактора в сыворотке и
набора плазме человека иммунотурбидиметрическим методом на автоматических
биохимических анализаторах Roche/Hitachi.
Клиническое значение и физиологическая функция
Ревматоидные факторы являются гетерогенной группой аутоантител, направленных против антигенных
детерминант в Fe-части молекулы IgG. Они необходимы в диагностике ревматоидных артритов, но могут
обнаруживаться и при других инфекционных ревматоидных артритах и других различных не ревматоидных
артритах. Они также могут определяться у здоровых людей, возраст которых более 60 лет. Несмотря на эти
ограничения, определение ревматоидного фактора является диагностическим признаком для
классифицирования ревматоидных артритов. Аутоантитела появляются для всех классов иммуноглобулинов,
хотя обычные методы ограничены определением ревматоидного фактора для IgM.
Классическим методом для количественного определения ревматоидного фактора является агглютинация с
IgG-сенсибилизированными овечьими эритроцитами или латексными частицами.
Заслуживают особого внимания проблемы этих полуколичественных методов такие как низкая точность и
воспроизводимость между лабораториями, а также трудности стандартизации. Поэтому были разработаны
такие новые методы как нефелометрия, турбидиметрия, ферментно-иммунологические методы и
радиоиммуноанализ. Roche RF метод основан на принципе иммунологической агглютинации с латексным
усилением.
Принцип метода
Им мунотурбидиметрический метод (латексное усиление)
Связанные с латексом, активированные теплом IgG (антитела) реагируют с антителами к ревматоидному
фактору в образце, что приводит к формированию комплекса антиген/антитело, которой, при последующей
агглютинации, определяется турбидиметрически.
Реактивы жидкие, готовые к употреблению
R1 Глициновый буфер: 170 ммоль/л; pH: 8,0; полиэтиленгликоль 0,05%; бычий сывороточный
альбумин; консерванты и стабилизаторы
R2 Латексные частицы покрытые человеческим IgG; глициновый буфер: 170 ммоль/л; pH: 7,3;
консерванты
Меры безопасности
Предназначается для диагностики in vitro.
Принимайте обычные меры безопасности, требуемые для обращения со всеми лабораторными реактивами.
Обращение с реактивами
Реагенты готовы к использованию.
Хранение и стабильность
Невскрытый флакон при 2 - 8°С: См. срок годности на флаконе
После вскрытия при 2 - 8°С: 90 дней
Сбор и Сыворотка:
подготовка Плазма: Li/Na-гепарированная, Na 2-K2-/K3-3flTА плазма
образцов Центрифугируйте образцы, содержащие включения перед проведением теста.
--- стр. 86 ---
Стабильность 24 часа при 15-25°С
3 дня при 2-8°С
4 недели при (-15)-(-25)°С
Не замораживать повторно
Процедура проведения анализа
Для оптимального проведения анализа важно следовать указаниям по работе с используемым анализатором и
проверить, имеется ли в системе достаточный запас аналитических материалов и других расходных
материалов.
Калибровка
Калибратор S1: 0,9% Nad
S2-5: Preciset RF
Интервал калибровки После смены лота реагента, по запросу процедуры контроля качества.
Метод был стандартизован с использованием WHO стандарта 64/2
Контроль качества
Для контроля качества могут быть использованы как контрольные материалы, указанные в разделе
"Информация о реагентах", так и другие пригодные контрольные материалы. Контрольные интервалы должны
быть приемлемыми для каждой лаборатории, а полученные величины должны находиться в определенных
пределах. Каждая лаборатория должна установить поправочные коэффициенты, если лабораторные величины
находятся за пределами интервалов.
Расчет результатов
Анализатор автоматически вычисляет результаты концентрации ревматоидного фактора в каждом образце.
Ограничения - интерференция
Воспроизводимость в пределах ±10% от начального значения
Истеричность Не оказывает значимого влияния до значения 60 индекса I для
конъюгированного и неконъюгированного билирубина
(приблизительное значение конъюгированного и
неконъюгированного билирубина -1026 мкмоль/л (60мг/дл)).
Гемолиз Не оказывает значимого влияния до значения 1000 индекса Н
(приблизительное значение концентрации гемоглобина: 1000 мг/дл,
10000 мг/л, или 621 мкмоль/л)
Липемия Не оказывает значимого влияния до значения 500 индекса L.
Имеется низкая корреляция между индексом L (характеризующим
мутность) и концентрацией триглицеридов.
Эффект высокой дозы Не оказывает значительного влияния до значения активности
ревматоидного фактора до 6000 Е/мл
Другие Очень редкие случаи гаммапатий, в частности, макроглобулинемия
Вальденстрема (типа IgM) могут вызвать получение недостоверных
результатов
Измеряемый интервал 7-130 Е/мл
Roche/Hitachi 902:
Если полученная концентрация ревматоидного фактора выходит за
эти пределы, в ручную разведите образец 1+1 0,9% NaCl. Результат
умножьте на фактор 2.
Roche/Hitachi 904/911/912/917/Modular Р:
Расширенный диапазон при разведении: 7 - 650 Е/мл
Ожидаемые результаты
Взрослые < 14 Е/л
В каждой лаборатории необходимо исследовать допустимость перенесения ожидаемых (нормативных)
результатов на популяцию собственных пациентов и, в случае необходимости, определить свои собственные
нормативные диапазоны.
Результаты, полученные с использованием данного или любого другого диагностического набора, следует
использовать и интерпретировать только в контексте общей клинической картины и результатов других
диагностических исследований
Аналитические характеристики
Точность Воспроизводимость была определена с использованием образцов человеческой
сыворотки и контролей (п-число исследованных образцов). Были получены
следующие данные:
Внутри серии (п=21) Между сериями (п=21)
--- стр. 87 ---
3
Образец Среднее,
Е/мл
SD, Е/мл cv,% Среднее,
Е/мл
SD, Е/мл CV,%
Control Level 1 22.0 0.19 0.86 20.0 1.07 5.33
Control Level 2 49.3 0.26 0.52 48.2 1.01 2.10
Сыворотка 1 18.1 0.27 1.48 17.5 0.81 4.66
Сыворотка 2 55.2 0.25 0.46 57.7 1.43 2.48
Аналитическая чувствительность (нижний предел определения): 6.6 Е/мл
Предел обнаружения представляет собой самую малую концентрацию ревматоидного фактора, которая может
быть обнаружена как отличная от нуля. Она вычислена как концентрация, лежащая на 3 стандартных
отклонения выше низкого стандарта (низкий стандарт СРБ + 3 SD, воспроизводимость в пределах серии, п =
21).
Метод сравнения Сравнение между Roche Tina-quant RF П (у) с иммунотурбидиметрическим RF
Roche Cobas Integra (х) дало следующую корреляцию в человеческой сыворотке
(Е/мл)
Сыворотка (п=50)
Passing/Bablok
у=1.097х - 2.69
п=0,958
SD (md 95)=3.01
Концентрация проб: 2,1 - 115,9 Е/мл
Б и б л и о гр а ф и я
1. Borque L, Barozzi D, Ferrari L et al. The Determination of Rheumatoid Factors by an Immunoturbidimetric Assay on
Boehringer Mannheim/Hitachi Analysis Systems. Klin Lab 1994;40:445-453.
2. Arnett FC, Edworthy SM, Bloch DA et al. The American Rheumatism Association 1987 revised criteria for the
classification of rheumatoid arthritis. Arthritis Rheum 1988;31:315-324.
3. Bartfield H. Distribution of rheumatoid factor activity in non-rheumatoid states. Ann NY Acad Sci 1969;168:30-40.
4. Waaler E. On the occurrence of a factor in human serum activating the specific agglutination of sheep blood
corpuscles. Acta Pathol Microbiol Scand 1940;17:172-178.
5. Moore TL, Domer RN. Rheumatoid factors. Clin Biochem 1993; 26:75-84.
6. Roberts-Thomson PJ, McEvoy R, Langhans T, Bradley J. Ann Rheum Dis 1985;44:379-383.
7. Borque L, Yago M, Mar C, Rodriques C. Clin Chem 1986; 32:124— 129.
8. Bampton JL, Cawston ТЕ, Kyle MV, Hazeleman BL. Ann Rheum Dis 1985;44:379-383.
9. Koopman WJ, Schrohenloker RE. Arthritis Rheum 1980; 23:302-308.
10. Jaspers JP, Van Oers RJM, Leerkes B. Nine Rheumatoid Factor Assays Compared. J Clin Chem Clin Biochem
1988;26:863-871.
11. Occupational Safety and Health Standards: bloodbome pathogens. 29 CFR 1910.1030. Fed. Register July 1,
2001;17:260-273.
12. Directive 2000/54/EC. Official Journal of the European Communities No. L262 from October 17,2000.
13. Guder WG, Narayanan S, Wisser H, Zawta B. The Quality of Diagnostic Samples. Brochure in: Samples: From the
Patient to the Laboratory, 2nd edition, Darmstadt: GIT-Verlag, 2001.
14. Data on file at Roche Diagnostics.
15. Glick MR, Ryder KW, Jackson SA. Graphical Comparisons of Interferences in Clinical Chemistry Instrumentation.
Clin Chem 1986;32:470-474.
16. Reference Ranges for Adults and Children, Pre-Analytical Considerations. Heil W, Koberstein R, Zawta В
(published by Roche 2004).
17. Bablok W et al. A General Regression Procedure for Method Transformation. J О in Chem Clin Biochem
1988;26:783-790.
Параметры настройки
Для анализаторов Roche/Hitachi 904, 911, 912, 917 и Modular введение параметров аппликации осуществляется
через аппликационную дискету, баркоды.
Линейная регрессия
у=1.075х - 2,45
г=0.9998
Sy .x.=l,58
--- стр. 88 ---
4
Roche/Hitachi 902
No. <Chemistry> 1
1 Test Name RF2 i
2 Assay Code (Mthd) 2 Point End
3 Assay Code (2. Test) o
4 Reaction Time 10 |
5 Assay Point 1 19
|6 Assay Point 2 28 ; j
7 Assay Point 3 0 j ;
8 Assay Point 4 0 i i
9 Wavelength (SUB) 800 ! ;
10 Wavelength (MAIN) 570
In Sample Volume 8.0
12 R1 Volume 240
13 R1 Pos. !
14 R1 Bottle Size Small j
15 R2 Volume 0
16 R2Pos. 0 !
17 R2 Bottle Size Small
18 R3 Volume 80
19 R3 Pos.
20 R3 Bottle Size Small
21 Calib. Type (Type) Logit-Log4 | !
22 Calib. Type (Wght) 0 H
23 Calib. Cone. 1 i
24 Calib. Pos. 1
25 Calib. Cone. 2 .... j !
26 Calib. Pos. 2
27 Calib. Cone. 3 | .... |
28 Calib. Pos. 3 j
29 Calib. Cone. 4 ! j
30 Calib. Pos. 4 î ;
31 Calib. Cone. 5
32 Calib. Pos. 5 .... j
33 Calib. Cone. 6 j .... 1
34 j Calib. Pos. 6 .... i
--- стр. 98 ---
С-РЕАКТИВНЫЙ БЕЛОК, латексный
Информация о реагентах
Набор (кассета) CRPL3 300 тестов
Калибратор CFAS Proteins 5 х 1.0 мл
Контроль Precinorm Protein 3 х 1.0 мл
Precipath Protein 3 х 1.0 мл
или CRP Т Control N 5 х 0.5 мл
Растворитель NaCl 9% 6 х 22 мл
Кат.№ 04956737190
Кат.№ 1355279
Кат.№ 0557897
Кат.№ 1333127
Кат.№ 20766321
Кат.№ 20756350
Количество
тестов
Назначение
набора
300 тестов в наборе (кассете)
Набор (кассета) Кобас Интегра С-реактивный белок (латексный) «CRPL2» содержит
систему реагентов для диагностики in vitro, предназначенную для использования на
Кобас Интегра для количественного иммунологического определения человеческого С-
реактивного белка в сыворотке и плазме (тест CRPL2, 0-293 для Ингегра-400; 0-393 для
Интегра400/800).
Клиническое значение и физиологическая функция
Большинство процессов, повреждающих ткани, таких как инфекции, воспалительные заболевания и
злокачественные новообразования сопровождаются выраженным острофазным ответом с повышением уровня
С-реактивного белка и других острофазных реактантов (а1-антитрипсин, а1-кислый гликопротеин,
гаптоглобин, фракции комплемента СЗс, С4). Повышение уровня С-реактивного белка является
неспецифической реакцией и происходит еще до развития клинических проявлений заболеваний, включая
подъем температуры. В норме у здоровых людей концентрация С-реактивного белка не превышает 5 мг/л.
После начала острофазного ответа концентрация СРБ быстро увеличивается. Изменения концентрации СРБ
обнаруживаются через 6-8 часов и достигают пиковых значений через 24-48 часов. Уровень СРБ соответствует
тяжести и остроте состояния пациента, а также прогнозе заболевания. Концентрации СРБ, в 1000 раз
превышающие нормальные значения, наблюдаются при инфаркте миокарда, травмах, хирургических
операциях, злокачественных новообразованиях. Физиологической функцией СРБ является активация систему
комплемента по классическому пути. Период полураспада белка составляет 12-24 часа, благодаря чему СРБ
является идеальным маркером для клинического мониторинга антибактериальной терапии,
противовоспалительной терапии, развития и течения интеркуррентных заболеваний. Так, динамическое
количественное определение СРБ в послеоперационном периоде может свидетельствовать либо о нормальном
процессе выздоровления (снижение уровня СРБ), либо выявить наличие осложнений (сохранение высокого
уровня).
Вследствие быстрого ответа на любые изменения в активности заболевания, определение СРБ может
полностью заменить широко используемый, но менее лабильный тест СОЭ. Кроме того, уровень СРБ в отличие
от СОЭ не зависит от пола, времени суток, количества и морфологии эритроцитов, белкового состава плазмы.
Принцип метода'( ЗА5
Усиленное латексными микрочастицами иммунотурбидиметрическое определение. Человеческий С-
реактивный белок образует преципитат с латексными частицами, с закрепленными на них моноклональными
антителами к СРБ человека. Преципитат определяется турбидиметрически при 552 нм.
Реактивы 2 (жидкие, готовые к употреблению).
R1 TRIS-буфер с бычьим сывороточным альбумином и иммуноглобулинами мыши,
стабилизированными 0.09% раствором азида натрия во флаконах А и В.
R2=SR Латексные частицы, покрытые мышиными антителами к СРБ в глициновом буфере,
стабилизированном 0.09% раствором азида натрия во флаконе С.
Информацию об объеме реагентов в кассете смотрите на этикетке.
стр. 1 и» 5 CRPL3.doc
--- стр. 99 ---
Меры безопасности
Предназначается для диагностики in vitro.
Принимайте обычные меры безопасности, требуемые для обращения со всеми лабораторными реактивами.
Обращение с реактивами
Реагенты готовы к использованию.
Хранение и стабильность
Невскрытый при 2 - 8°С:
После вскрытия при 10-15°С:
См. срок годности на кассете
12 недель
Сбор и
подготовка
образцов
Хранение и
стабильность
образцов 6
Сыворотка или плазма (для получения плазмы использовать только Кг., К3-ЭДТА;
литиевый, натриевый, Щ -гепярин, флюорид и цитрат)).
Сыворотка должна быть немедленно отделена от сгустка и быстро
проанализирована.
3 дня при 20-25°С
8 дня при 4 - 8 °С
более 3 лет замороженными при -20 °С. Избегайте повторного замораживания и
оттаивания.
Образцы, содержащие преципитаты (мутные) следует предварительно
центрифугировать.
Необходимые (но не предоставляемые материалы)
NaCl 9.0% (в 10 раз более концентрированный изотонический солевой раствор) дня последующего
автоматического разбавления.
Используют готовый 9.0% раствор NaCl Кат.№ 20756350 или готовят 9.0% раствор, используя коммерческий
хлорид натрия в таблетках или в виде концентрированного солевого раствора.
9.0% раствор NaCl помещают в пробирки для растворителя, находящиеся в предварительно определенных
местах в штативе (Rack) CAL/QC.
Процедура проведения анализа
Для оптимального проведения анализа важно следовать указаниям по работе с используемым анализатором и
проверить, имеется ли в системе достаточный запас аналитических материалов и других расходных
материалов.
Аппликация для сыворотки и плазмы
Метод измерения
Метод расчета абсорбции
Тип реакции
Направление реакции
Длина волны
Точки расчета первая/последняя
Диапазон измерения
с постразведением
Эффект прозоны
Проверка избытка антигена
Фактор предраз ведения
Фактор постразведения
Фактор постконцентрации
Единица измерения
Интегра 400
Абсорбция
Кинетический
Ш-Б-БЯ
С увеличением
552 нм
35/48
0-200 мг/л (0-20 мг/100мл)
0-2000 мг/л (0-200 м г/100мл)
> 3100 г/л (> 310 мг/ЮОмл)
нет
нет
Рекомендован 10
нет
мг/л
Интегра 700/800
Абсорбция
Кинетический
С увеличением
552 нм
46/69
0-200 мг/л (0-20 мг/100мл)
0-2000 мг/л (0-200 мг/100мл)
> 3100 г/л (> 310 м г/100мл)
нет
нет
Рекомендован 10
Нет
мг/л
стр. 2 «з 5 CRPL3-dec
--- стр. 100 ---
П а р а м е т р ы п и п е т и р о в а н и я ( И н т е г р а 4 0 0 / 7 0 0 / 8 0 0 )
R1
Образец
SR
Общин объем
Калибровка
82 мкл
2.5 мкл
28 мкл
204.5 мкл
Калибратор
Коэффициент разведения калибратора
Метод калибровки
Количество повторов в точках измерения
Интервал калибровки
Дилюент (Н20)
48 мкл
30 мкл
14 мкл
CFAS Proteins
1:0.5,1:1,1:1.5 1:2, 1:10 и 0 мг/л (Интегра-400)
1:0.5, 1:0.74, 1:1, 1:2.86, 1:10 и 0 мг/л (Интегра-
700/800)
Разведение автоматически выполняется анализатором.
В качестве нулевого калибратора используется вода,
поступающая в систему.
Линейная интерполяция.
Рекомендуется 2 измерения в каждой точке
Каждый лот
Введите обозначенные во вкладыше, полученном вместе с упаковкой калибратора CFAS Proteins,
концентрации 6 калибраторов для С-реактивного белка, индивидуальные для каждого лота.
Метод был стандартизован по отношению к Референсным материалам IFCC/BCR/CAP (CRM-470) для 14
сывороточных белков.7
Контроль качества
Контрольные материалы 1 уровень (норма)
2 уровень (патология)
Интервал
Последовательность контроля
Контроль после новой калибровки
Precinorm Protein или CRP Т Control N
Precipath Protein
Каждые 24 часа
Определяется оператором
Рекомендуется
Расчет результатов
Кобас Интегра автоматически вычисляет результаты концентрации С-реактивного белка в каждом образце.
Процедура проведения анализа
Для оптимального проведения анализа важно следовать указаниям по работе с используемым анализатором и
проверить, имеется ли в системе достаточный запас аналитических материалов и других расходных
материалов.
Ограничения — интерференция
Воспроизводимость в пределах 10% от начальной величины
Гемолиз
Желтуха
Липемия
Ревматоидный фактор
Другие
нет значительного влияния,
нет значительного влияния.
нет значительного влияния до уровня триглицеридов 7.5г/л.
Мутные образцы с абсорбцией, свыше 0.1, распознаются проверкой
«High Activity», выполняемой анализатором. Корректные
результаты могут быть получены после разведения образца,
нет значительного влияния.
Очень редко, моноклональные гаммапатии могут привести к
ложным концентрациям СРБ вследствие образования мутности или
прямого взаимодействия моноклональных антител образца с тест-
системой.
Ожидаемые
результаты
В з р о с л ы е < 5 м г / л ( < 0 . 5 м г / 1 0 0 м л )
стр. 3 ш з 5 ( Э Т Ш к
--- стр. 101 ---
4
Новорожденные9 0 день < 0.6 мг/л (<0.06 мг/100мл)
1 день < 3.2 мг/л (<0.32 мг/100мл)
1 неделя < 1.6 мг/л (<0.16 мг/100мл)
В каждой лаборатории необходимо исследовать допустимость перенесения ожидаемых (нормативных)
результатов на популяцию собственных пациентов и, в случае необходимости, определить свои собственные
нормативные диапазоны.
Результаты, полученные с использованием данного или любого другого диагностического набора, следует
использовать и интерпретировать только в контексте общей клинической картины и результатов других
диагностических исследований
Аналитические характеристики
Точность Воспроизводимость была определена с использованием образцов человеческой
сыворотки и контролей (п-число исследованных образцов). Были получены
следующие данные
Уровень 1 Уровень 2
Среднее 6.2 мг/л 142 мг/л
(0.62 мг/100мл) (14.2 мг/100мл)
CV внутри серии (n=20) 1.8 % 1.5 %
CV день за днем (n=20) 2.9% 2.7%
Аналитическая чувствительность (нижний предел определения)
0.71 мг/л (0.071мг/100мл)
Предел обнаружения представляет собой самую малую концентрацию С-реактивного белка, которая может
бьггь обнаружена как отличная от нуля. Она вычислена как концентрация, лежащая на 3 стандартных
отклонения выше нулевого образца (сыворотка с нулевой концентрацией С-реактивного белка + 3 ББ,
воспроизводимость в пределах серии, п = 30).
Характерное представление данных
Метод сравнения Уровень С-реактивный белка для образцов человеческой сыворотки, полученный на
Кобас Интегра-400 с использованием данного набора (кассеты) “С-реактивный
белок, латексный” сравнили со значениями, полученными с использованием
реагентов для определения С-реактивного белка на автоматизированной системе
Кобас Интегра 700 и альтернативной коммерческой системе. Измерения
проводились в двух параллельных пробах, (п - численность исследованных
образцов)
Кобас Интегра 700 Альтернативная система
п 140 140
Коэффициент корреляции г = 0,999 г = 0,998
Линейная регрессия у = 1.02х-0.39 мг/л у = 0.98х + 1.07 мг/л
РаБвт^аЫ ок у = 1.02х - 0.01 мг/л у = 0.99х + 0.8 мг/л
Концентрации образцов находились приблизительно между 0.56 - 357 мг/л (0.056 - 35.7мг/100мл)
Библиография
1. Pepys MB, Baltz МС. Acute phase proteins with special reference to C-reactive protein and related proteins
(pentaxins) and serum amyloid A protein. Adv Immunol. 1983;34:141-212.
2. Bowman BH. In: Hepatic Plasma Proteins. San Diego: Academic Press; 1993:47-95.
стр. 4 ш з 5 CRPL3.doc
--- стр. 102 ---
5
3. Senju O, Takagi Y, Gomi K, Ishii N, Mochizukj S, Ishii N et al. The quantitative determination of CRP by latex
agglutination photometric assay. Jap J Clin Lab Automation. 1983;8:161-165.
4. Price CP, Trull AK, Berry D, Gorman EG. Development and validation of a particle-enhanced turbidimetric
immunoassay for C-reactive protein.
5. J. Immunol Methods. 1987;99:205-211.
6. Eda S, Kaufmann J, Roos W, Pohl S. Development of a New Microparticle-Enhanced Turbidimetric Assay for
C-reactive Protein with Superior Features in Analytical Sensitivity and Dynamic Range. J Clin Lab Anal.
1998;12:137-144.
7. Guder WG, Narayanan S, Wisser H, Zawta B. List of Analytes; Pre-analytical Variables. Brochure in: Samples:
From the Patient to the Laboratory. Darmstadt GIT Verlag, 1996.
8. Johnson AM. A new international reference preparation for proteins in human serum. Arch Pathol Lab Med.
1993;117:29-31.
9. Schumann G, Dati F. Vorläufige Referenzbereiche für 14 Proteine im Serum (für Erwachsene) nach
Standardisierung immunchemischer Methoden unter Bezug auf das internationale Referenzmaterial CRM 470.
Lab Med. 1995;19: 401-403.
10. Kindmark CO. The concentration of C-reactive protein in sera from healthy individuals. Scand J Clin Lab
Invest. 1972;29:407-411.
R o c h e D ia g n o s tic s
Редакция: апрель 2002, версия 1.2
с г р ь З « 5 C RPO doc
--- стр. 104 ---
■ f
Цистатин С (CYSC)
Информация о реагентах
Цистатин С
C.f.a.s. Cystatin С
Cystatin С Set
NaCl Diluent 9%
Предписание для использования
Набор реагентов для количественного определения in vitro концентрации цистатина С в сыворотке и
плазме на анализаторах Roche/Hitachi cobas с.
Теоретическое обоснование
Почечная недостаточность является всемирной проблемой, которая заключается в значительном риске
кардиоваскулярных заболеваний и смерти. В данном руководстве хроническую почечную
недостаточность определяем как повреждение почек или уровень клубочковой фильтрации менее 60
мл/мин на 1,73 м2 в течении Зх и более месяцев, безотносительно к причине. Уровень клубочковой
фильтрации наиболее часто используемый критерий в оценке функций почек.
Креатинин в сыворотке общий маркер оценки уровня клубочковой фильтрации. Однако, он далек от
совершенства, так как значительно изменяется от таких факторов, как мышечная масса, диета, пол,
возраст и канальцевой секреции.
Измерения клиренса креатинина в сыворотке и уровня креатинина в моче испытывают такие же
проблемы.
Цистатин С продуцируется ядросодержащими клетками на постоянном уровне и уровень выработки у
человека постоянен в течении всей жизни. Полностью выводится из кровообращения с помощью
клубочковой фильтрации. Поэтому концентрация цистатина С в сыворотке не зависит от мышечной
массы и пола в возрасте от 1 до 50 лет. Вследствие этого цистатин С в сыворотке и плазмы
представляется более чувствительным маркером уровня клубочковой фильтрации, и в некоторых
исследованиях цистатин С предлагается в качестве более совершенного маркера, чем креатинин в
сыворотке, для оценки уровня клубочковой фильтрации. Кроме того в последнее время цистатин С
обсуждается в литературе как прогностический маркер для острой сердечной недостаточности.
Как в случае с креатинином для цистатина С было опубликовано несколько уравнений прогноза для
расчета уровня клубочковой фильтрации у взрослых и детей. Отметим, что эти формулы были
установлены с различными методами анализа цистатина С (усиленный частицами нефелометрический
иммунохимический анализ PENI А или усиленный частицами турбидиметрический иммунохимический
анализ PENIA) и возможно обнаружение неточность в результатах уровня клубочковой фильтрации,
если используется формула не соответствующая методике измерения. Для расчета уровня клубочковой
фильтрации (GFR) для значения цистатина С, измеренного тестами Roche, рекомендуется следующее
уравнение прогноза, которое использует только концентрацию в единицах измерения мг/л и
допубертантного фактора:
G F R (m^ m h h/1 ,73 м 2 )=------------------------— х 1,384’
CystatinC(mg / L)
* для детей <14 лет
Принцип метода
Иммунотурбидиметрический метод (латексное усиление).
Цистатин С, содержащийся в человеческом образце сыворотки/плазмы, агглютинирует с латексными
частицами, покрытых антителами к цистатину С. Образовавшиеся комплексы определяются
турбидиметрически на длине волны 546 нм.
Реагенты
Готовы к использованию.
Перед установкой на борт анализатора встряхните cobas с pack
Roche/Hitachi cobas с systems
cobas с 501 cobas с 311
225 тестов Номер по каталогу 04975723190
4x1 мл Номер по каталогу 04975901190
2x4x1 мл Номер по каталогу 04975936190
50 мл Номер по каталогу 04489357190
1
--- стр. 105 ---
R1 Раствор полиметров в соляном растворе, консерванты, стабилизаторы
R2 Латексные частицы,покрытые антителами к цистатину С (кролик), в
глициновом буфере, консерванты, стабилизаторы
Меры предосторожности и предупреждения
Только для in vitro диагностики
Соблюдайте обычные меры предосторожности необходимые для работы со всеми лабораторными
реагентами.
Инструкция по безопастности доступна для профессионального использования по запросу.
Утилизация использованных материалов должна проводиться в соответствии с местными правилами
ликвидации отходов.
Хранение и стабильность реагентов
Хранение при 2-8°С Смотрите срок годности на упаковке
В приборе при использовании холодильника анализатора 8 недель (12 недель для NaCl Diluent 9%)
Сбор и подготовка образцов
Для сбора и подготовки используйте только подходящие пробирки. После тестирования были
признаны подходящими указанные ниже виды материала для исследования.
Сыворотка
Плазма. Li-гепариновая
Используя образцы проб в первичных пробирках, следуйте инструкциям изготовителя.
Центрифугируйте образцы до выполнения исследования.
Стабильность
Сыворотка/плазма 7 дней при 2 - 8°С
6 месяцев при (-15)-(-25)°С
Протокол измерения
Для оптимального проведения исследования следуйте указаниям данного документа. Ознакомьтесь с
инструкцией оператора для анализатора, указанного в инструкции.
Использование протокола измерения, не подтвержденного Roche, не гарантирует корректного
результата и должно определяться потребителем.
Протокол измерения для сыворотки и плазмы cobas с 311 system
Режим измерения 2 Point end
Время реакции/точки измерения: 10/8 -57
Направление реакции Уменьшение
Длины волн А/В 700/546 нм
Единицы измерения мг/л
Параметры дозирования
Сывортка/тазма Дилюент (НгО)
R1 154 мкл
Образец 15 мкл 75 мкл
R2 34 мкл 20 мкл
Протокол измерения для сыворотки и плазмы cobas с 501 system
Режим измерения 2 Point end
Время реакции/точки измерения: 10/13-70
Направление реакции Уменьшение
Длины волн А/В 700/546 нм
Единицы измерения Мг/л
Параметры дозирования
Сывортка/тазма Дилюент (НгО)
R1 154 мкл
Образец 15 мкл 75 мкл
R2 34 мкл 20 мкл
Калибровка
2
--- стр. 106 ---
Калибратор S 1 -6: C.f.s.a Cystatin С
Умножьте лот-специфичное значение C.f.a.s. Cystatin С на фактор
приведенный ниже и определенный для стандартных концентраций
6 точечной калибровочной кривой:
S1: 0.055 S4: 0.428
S2: 0.107 S5: 0.608
S3: 0,250 S6: 1
Режим калибровки Spline
Интервал калибровки Каждый лот, каждые 90 дней, по результатам контроля качества.
Стандартизация: данный метод был стандартизирован против локального референсного материала,
приготовленного из рекомбинантного человеческого цистатина С. Концентрация цистатина С в
референсном материале устанавливается определением сухой массы, как описано в стандарте Bilrup-
Jensen.
Контроль качества
Сыворотка/плазма
Для контроля качества могут быть использованы как контрольные материалы, указанные в разделе
"Информация о реагентах", так и другие пригодные контрольные материалы. Контрольные интервалы
должны быть приемлемыми для каждой лаборатории, а полученные величины должны находиться в
определенных пределах. Каждая лаборатория должна установить поправочные коэффициенты, если
лабораторные величины находятся за пределами интервалов.
Пересчёт
Анализаторы Roche/Hitachi cobas с автоматически вычисляет концентрацию аналита в каждом образце.
Факторы, влияющие на результаты
Критерий: восстановление в пределах ±10% от начального значения.
Иктеричность Не оказывает значимого влияния до значения 60 индекса I для
конъюгированного и неконъюгированного билирубина
(приблизительное значение конъюгированного и неконъюгированного
билирубина - 1026 мкмоль/л (60мг/дл)) .
Гемолиз Не оказывает значимого влияния до значения 700 индекса Н
(приблизительная концентрация гемоглобина 435 мкмоль/л (700 мг/дл).
Липемия Не оказывает значимого влияния до значения 1000 индекса L. Имеется
низкая корреляция между индексом L (характеризующим мутность) и
концентрацией триглицеридов.
Ревматоидный фактор Не оказывает значимого влияния до значения 1200 Е/мл
Лекарственные препараты Не оказывают значимого влияния
В очень редких случаях гаммопатия, в частности тип IgM (макроглобулинемия Валдерпггрома), может
провести к неправильным результатам.
Эффект кривой высокой дозы наблюдается при концентрациях цистатина С выше 20 мг/л.
Измеряемый интервал
Сыворотка/плазма 0.4 - 8.0 мг/л
С помощью повторного измерения с разведением возможно измерить более высокие концентрации в
исследуемом образце.
Разведение образца: 1:1.5
Результат измерения разведенного образца автоматически умножается на фактор, равный 1.5.
Нижний предел обнаружения 0.3 мг/л (0,1мг/дл)
Предел обнаружения представляет самый низкий измеренный уровень аналита, который отличается от
нуля. Вычисляется как величина, лежащая в трёх стандартных отклонениях выше самого
низкоконцентрированного стандарта.
Ожидаемые значения
Взрослые (20 - 70 лет) 0.47 -1 .0 9 мг/л
3
--- стр. 114 ---
Моча: используется случайная или суточная моча. Не используйте консерванты.
Спинно-мозговая жидкость: Не требует специаольных добавак. Содержание крови в
спинномозговой жидкости делает неверными значения белка.
Центрифугируйте образцы, содержащие включения перед проведением теста. Не
отцентрифугированные образцы могут давать завышенные результаты.
Моча:
24 часа при 15-25°С
7 дней при 2-8°С
4 недели при (-15)-(-25)°С
Спинномозговая жидкость:
24 часа при 15-25°С
6 дней при 2-8°С
Более года при (-15)-(-25)°С
Процедура проведения анализа
Для оптимального проведения анализа важно следовать указаниям по работе с используемым анализатором и
проверить, имеется ли в системе достаточный запас аналитических материалов и других расходных
материалов.
Калибровка
Калибратор ЯосЬе/ШасЫ 902
81:0,9% №С1
52-5: СХа-в. ШС
Для аппликации вышеупомянутого анализатора, С.ГалРиС калибратор
требуется вручную развести:___________________________________________
Уровень Предразведе
ние
Калибратор+
NaCl
Мкл C.f.a.s.
Proteins
Urine/CSF
Мкл 0,9%
NaCl
Фактор
пересчета
S2 1+39 50 1950 0,025
S3 1+19 50 950 0,050
S4 1+7 50 350 0,125
S5 1+3 100 300 0,250
S6 Не
разводится
200 0 1,00
Сбор и
подготовка
образцов
С табильность
Умножьте лот-специфичное значение C,f.a.s. PUC на фактор приведенный выше
для определения стандартной коцентрации 6 точечной калибровочной кривой.
Roche/Hitachi 904/911/912/917/Modular Р
S1:0,9% NaCl
S2-5: C.f.a.s. PUC
Умножьте лот-специфичное значение C.f.a.s. PUC на фактор приведенный ниже
для определения стандартной коцентрации 6 точечной калибровочной кривой.
S2:0,025 S5: 0,250
S3: 0,050 S 6: 1,0
S4:0,125
Интервал калибровки После смены лота реагента, после смены флакона реагента, каждые 7 дней, по
запросу процедуры контроля качества.
Метод был стандартизован против первичного стандарта, отнесенного к NIST
Контроль качества
Для контроля качества могут быть использованы как контрольные материалы, указанные в разделе
"Информация о реагентах", так и другие пригодные контрольные материалы. Контрольные интервалы должны
быть приемлемыми для каждой лаборатории, а полученные величины должны находиться в определенных
пределах. Каждая лаборатория должна установить поправочные коэффициенты, если лабораторные величины
находятся за пределами интервалов.
Расчет результатов
Анализатор автоматически вычисляет результаты концентрации белка в каждом образце:
Фактор пересчета: мг/л х 0,1 = мг/дп
Мг/л х 0,001 = г/л
Для расчета выделенного белка в суточной мочи:
Мг/л х общий обхем (литров за 24 часа) = мг/день
--- стр. 115 ---
Ограничения - интерференция
Воспроизводимость в пределах ±
Иктеричность
Гемолиз
Липемия
Не оказывают значимого влияния
Лекарственные препараты
Другие
Измеряемый интервал
Ожидаемые результаты
Моча
от начального значения
Не оказывает значимого влияния до значения конъюгированного
билирубина 615 мкмоль/л (36мг/дл)).
Не оказывает значимого влияния
Не оказывает значимого влияния до значения 500 индекса L.
Имеется низкая корреляция между индексом L (характеризующим
мутность) и концентрацией триглицеридов.
Аскорбиновая кислота, фосфор, цитрат натрия, хлорпромазин,
гентамицина сульфат, креатинин, мочевина, кофеин, кальций,
оксалат натрия, глюкоза, магний, цефазолин натрия, L-Dopa и
мочевая кислота
Терапевтические концентрации добесилата кальция, levodopa и
phenazopyridine оказывают влияние на метод
Очень редкие случаи гаммапатий, в частности, макроглобулинемия
Вальденстрема (типа IgM) могут вызвать получение недостоверных
результатов
40 - 2000 мг/л (4 - 200 мг/дл; 0,04 - 2 г/л
Roche/Hitachi 904/911/912:
Если полученная концентрация белка выходит за эти пределы,
разведите образец 1+1 0,9% NaCl. Результат умножьте на фактор 2.
Roche/Hitachi 917/Modular Р:
Если полученная концентрация белка выходит за эти пределы,
разведите образец 2+1 0,9% NaCl. Результат умножьте на фактор 3.
Спинномозговая
жидкость
В каждой лаборатории
Суточная: <140 мг/сутки
Случайная: <150 мг/л
По Тицу: 150 - 450 мг/л
По Томасу: 200 - 400 мг/л
необходимо исследовать допустимость перенесения ожидаемых (нормативных)
результатов на популяцию собственных пациентов и, в случае необходимости, определить свои собственные
нормативные диапазоны.
Результаты, полученные с использованием данного или любого другого диагностического набора, следует
использовать и интерпретировать только в контексте общей клинической картины и результатов других
диагностических исследований
Аналитические характеристики
Точность Воспроизводимость была определена с использованием образцов человеческой мочи
и контролей (п-число исследованных образцов). Были получены следующие данные:
Моча Внутри серии (п=21) Между сериями (п=10)
Образец Среднее,
мг/л
SD, мг/л CV, % Среднее, мг/л SD, мг/л CV, %
Control Level 1 217 4,2 1,9 345 6,0 1,7
Control Level 2 673 6,6 1,0 1144 13,0 1,1
Моча 1 100 5,2 5,2 120 4,6 3,8
Спинномозговая Внутри серии (п=21) Между сериями (п=10)
жидкость
Образец Среднее,
мг/л
SD, мг/л CV,% Среднее, мг/л SD, мг/л CV, %
Control Level 1 231 2,0 0,9 293 3,0 1,0
Control Level 2 536 3,6 0,7 902 5,6 0,6
Аналитическая чувствительность (нижний предел определения): 40 мг/л
Предел обнаружения представляет собой самую малую концентрацию общего белка, которая может быть
обнаружена как отличная от нуля. Она вычислена как концентрация, лежащая на 3 стандартных отклонения
выше низкого стандарта (низкий стандарт белка + 3 SD, воспроизводимость в пределах серии, п = 21).
Метод сравнения Сравнение между Roche U/CSF Protein аппликацией ACN 078 (у) и аппликацией
CAN 078 (х) дало следующую корреляцию в человеческой сыворотке (мг/л)
--- стр. 116 ---
4
Развт^аЫ ок
у=0,894х - 3,87
п=0,991
Концентрация проб: 41 - 1783 мг/л
Спинномозговая жидкость (п=86)
Раввйщ/ВаЫок
у=0,928х + 19,1
п=0,972
Концентрация проб: 40 - 935 мг/л
М оча (п=86)
Линейная регрессия
Y=0,891x-0,797
г= 1,000
Линейная регрессия
Y=0,929x +18,1
г=0,999
Библиография
1. Tietz NW. Fundamentals of Clinical Chemistry. 3rd ed. Philadelphia, Pa: WB Saunders Co; 1987:336.
2. Boege F. Bence Jones-Proteine. J Lab Med 1999;23:477-482.
3. Iwata J, Nishikaze O. New micro-turbidimetric method for determination of protein in cerebrospinal fluid and urine.
ClinChem 1979;25/7:1317-1319.
4. Luxton RW, Patel P, Keir G, Thompson EJ. A micro-method for measuring total protein in cerebrospinal fluid by
using benzethonium chloride in microtiter plate wells. Clin Chem 1989;35/8:1731-1734.
5. Hohnadel DC, Koller A. Urine protein total. In: Pesce AJ, Kaplan LA (editors). Methods in Clinical Chemistry. St.
Louis: The C.W. Mosby Co.,1987:35-45.
6. Koumantakis G, Wyndham L. Fluorescein Interference with Urinary Creatinine and Protein Measurements. Clin
Chem 1991;37/10:1799.
7. Use of Anticoagulants in Diagnostic Laboratory Investigations. WHO Publication WHO/DIL/Lab/99.1 Rev.2. Jan.
2002.
8. Standard Reference Materials from NERL, traceable to NIST (National Institute of Standards and Technology).
9. Glick MR, Ryder KW, Jackson SA. Graphical Comparisons of Interferences in Clinical Chemistry Instrumentation.
ClinChem 1986;32:470-475.
10. Junge W, Wilke B, Halabi A, Jarausch J, Klein G. Reference Intervals for Total Protein in Collected and Random
Urine using the Benzethonium Chloride Method. Clin Chem 2006;52:A157 [Abstract].
11. Tietz NW. Fundamentals of Clinical Chemistry. 3rd ed. Philadelphia, Pa: WB Saunders Co; 1995:520.
12. Thomas L. Labor und Diagnose. 6th ed.: TH Books-Verlagsgesellschaft mbH, Frankfurt/Main 2005:930-934.
13. Passing H, Bablok W et al. A General Regression Procedure for Method Transformation. J Clin Chem Clin
Biochem 1988;26:783-790.
П арам етры настройки
Для анализаторов Roche/Hitachi 904, 911, 912, 917 и Modular введение параметров аппликации осуществляется
через аппликационную дискету, баркоды.
Roche/Hitachi 902
No.
!1 !
1 Test Name UCSF2
2 Assay Code (Mthd) 2 point end
3 |Assay Code (2. Test) 0 j
4 [Reaction Time 10
5 Assay Point 1 17 j
6 Assay Point 2 35
7 Assay Point 3 0 j
8 ¡Assay Point 4
--- стр. 117 ---
5
1 9 [Wavelength (SUB) 700
10 ¡Wavelength (MAIN) 505
11 Sample Volume 15 i
12 R1 Volume 250
13 R1 Pos. I
14 R1 Bottle Size Small
15 R2 Volume 0
16 R2 Pos. 0
17 R2 Bottle Size Small
18 R3 Volume 100
19 R3 Pos. 0
20 R3 Bottle Size Small >
21 Calib. Type (Type) Logit-log (4) 1
22 Calib. Type (Wght) 0
23 Calib. Cone. 1 0
24 Calib. Pos. 1
25 Calib. Cone. 2
....
26 Calib. Pos. 2 > i
27 Calib. Cone. 3 i
28 Calib. Pos. 3 ; I
29 Calib. Cone. 4 : :
30 Calib. Pos. 4
31 Calib. Cone. 5 I !
32 ¡Calib. Pos. 5 j
33 Calib. Cone. 6
34 Calib. Pos. 6
35 SI ABS 0
36 K Factor 10000 j
37 K2 Factor 10000 j
38 K3 Factor 10000
39 K4 Factor 10000
40 K5 Factor 10000
41 A Factor o ;
42 |B Factor 0
43 ¡C Factor 0
44 SD Limit 80
45 Duplicate Limit 200 j