Реагенты in-vitro для исследования специфических белков плазмы крови - антисыворотки в наборах и отдельных упаковках — инструкция и характеристики
Открытые закупки, где изделие проходит ТЗ
Сейчас открытых закупок, где изделие полностью проходит ТЗ, нет; список обновляется каждый день.
Построчная сверка ТЗ с характеристиками этого изделия и все закупки под ваши товары — в кабинете, 7 дней бесплатно.
Попробовать бесплатно
Текст инструкции: технические характеристики
--- стр. 1 ---
УТВЕРЖДАЮ
директор
ООО «Эко-мед-с М»
Ворошилов Н.А.
:<01» февраля 2010 г.
ИНСТРУКЦИЯ
п о ПРИМЕНЕЬШЮ
Реагенты in-vitro для исследования
специфических белков плазмы крови.
Антисыворотки.
1. НАЗНАЧЕНИЕ
2. ОСНОВНЫЕ ТЕХНИЧЕСЮ1Е ХАРАКТЕРИСТИКИ
3. ПРОТИВОПОКАЗАНИЯ К ПРИМЕНЕНИЮ
4. ПОДГОТОВКА К РАБОТЕ ИЗДЕЛИЯ
5. ПОРЯДОК РАБОТЫ ИЗДЕЛИЯ
6 ПРАВИЛА ХРАНЕНИЯ И ИСПОЛЬЗОВАНИЯ
2010
--- стр. 2 ---
SIEMENS
A n tis e r a to H u m a n C 1q , C 3 A c tiv a to r , C 5 и Ig D /S c iia in
А н т и сы в о р о т к а к ч е л о в е ч е с к о м у C 1q
А н т и сы в о р о т к а к ч е л о в е ч е с к о м у С З -А к т и в а т о р у
А н т и сы в о р о т к а к ч е л о в е ч е с к о м у С 5
А н т и сы в о р о т к а к ч е л о в е ч е с к о м у I g D
Предполагаемое использование
Реагенты для in vitro диагностики для количественного определения C1q, СЗ
активатора, С5 и IgD в сыворотке человеческой крови, гепаринизированной и
E D TA плазме при помощи имуннохимической преципитации геля.
Конспект и пояснения
[Изменения в белковом составе плазмы (диспротеинемия) часто являются
следствием заболеваний, частично из-за нарушения синтеза белка или его
метаболизма, частично из-за прочих нарушений. Качественное определение
белка в плазме позволяет выявить индикаторы, необходимые ^ я
диагностики, а также предоставляет информацию по течению болезни ’ .
Основа методики
Белки, содержащиеся в жидкостях человеческого тела, образуют
нерастворимые иммунопреципитаты в ходе имуннохимической реакции со
Р
специфическими антителами. Процесс протекает в жидкостях,
преимущественно в гелевой среде, таких как агар или агароза.
Реагенты
Предоставляемые материалы
Иммунная сыворотка дл я человеческого C1q (кролик), код O T N T или
Иммунная сыворотка для челов. СЗ Активатора (кролик), код O TN S или
Иммунная сыворотка дл я человеческого С5 (кролик), код OSFZ или
Иммунная сыворотка д л я человеческого lgD/6-цепи (кролик), код O TN D по
одной пробирке по 1 мл в каждой
Состав
Иммунная сыворотка - это жидкая иммунная сыворотка животных,
получаемая при вакцинации кроликов высоко очищенными человеческими
C1q, СЗ Активатором, С5 или иммуноглобулином класса D (IgO). В основном,
монослецифическая иммунная сыворотка к человеческим C lq , 03
Активатором, С5 и |дО/бч 1епи содержит одинаковый набор антител вне
зависимости от партии (максимальный диапазон расхождения ± 20 % ). Титры
антител (Т ) вычисляются при помощи одинарной радиальной
иммунодиффузии со стандартными подготовительными процедурами от
Siemens Healthcare Diagnostics Products GmbH и напечатаны на этикетках
пробирок. Титры показывают сколько единиц антигена осаждаются 1 мл
ка)кдой из иммунных сывороток в агарозном геле. Определение титра
иммунной сыворотки к человеческому 1дО/бч4епи в мг/мл не представляется
возможным, поэтому титр приводится в ед/мл (ед = единица, 100 ед
соответствует содержанию соответствующего белка а 1 мл пула сыворотки
здорового взрослого человека).
Консервант
Иммунная сыворотка д л я человеческого C lq , СЗ Активатора. С5 и lgD/6-цепи:
азид натрия < 1 г/л
»
Предупреж дения и меры преоосторожности
1. Только для in vitro диагностики.
2. Содержит азид натрия (< 0,1 % ) в качестве консерванта. Азид натрия может
вступать в реакцию с медными или свинцовыми трубами сливной системы
и образовывать вз[швоопасиые соединения. Утилизация должна
проводиться в соответствии с региональными нормами и стандартами.
Подготовка реагентов
Иммунная сыворотка обычно используется в неразбавленном состюшии. В
случае очень низкой концентрации выявляемого белка в плаэие, допускается
разводить иммунную сыворотку (чтобы исключить превышение котдалрации
антител).
Хранение и устойчивость
Устойчивость при от *2 д о *а °С:
Срок годности указан на этикетке.
Устойчивость после о ткр ы т и я:
Четыре недели, если плотно закрыть сразу после использования во
избежание загрязнения (например, микроорганизмами) и хранить при
температуре от +2 до +8 °С. Во время хранения, в иммунной сыворотке может
образоваться осадок или наблюдаться помутн«<ие, однако, они не вызваны
зафязнениеи ржггвора микроорганизмами и не сказываются на его
активности. В л о д с ^ ы х случаях, иммунную сыворотку необходимо
отфильтровать перед использованием. Д ля данной [дали подойбут
одноразовые фильтры с (нзиером пор около 0,45 и т . Не за«к 1ражива(№
реактивы.
Пробы
Подходящими являются образцы с ы в с ^ к и , гепаринизированной или ЕО ТА -
гаазмы ч е «1Ю «а. либо свикие ()фаненив не богив а д » « й при те ««р а ту р е от
*2 д о *й ’ С), либо 8 замороженной т д а - Для имяуннЫ) сы воротт к
чеяоюнескому C lq . Е О ТА плазму вонускается исгюльзсмать то лы » с двойной
г диффузией. Образцы сыворотки и плааиы могут храниться вр четырес
недель при температуре -20 ’ С, в случае, если (»т & ю и шисфояюми •
течение 24 часов гасле сбора и повторню! згаиороай отсутетвсяала. Дамш е
обрая{ы можно использовать как в разведенном, так и в концентрированном
; виде, в зависимосга от требуемого результата. Гиперпипемические или
: гемолитические образцы могут усложнить процесс оценки
I Процедура
Двойная диф ф узия обеспечивает качественное выявление или
идентификацию конкретных белков в сыворотке или плазме крови. В основном
используется процедура Охтерлони (Ouchterlony) в агаровом или агарозном
геле®. Если при двойной диффузии Охтерлони с иммунной сывороткой к
человеческому C lq образуются нехарактерные двойные преципитаты,
исследование необходимо повторить с теплой иммунной сывороткой (30 минут
при +56 ”С).
При иммуноэлектрофорезе анализируемый материал разделяется в гелевой
среде посредством злекгрофореза и последующей двойной диффузии° При
проведении более точного двухмерного иммуноэлектрофореза Кларка (С1аг1<е)
и Фримана (Freeman) анализируемый материал разделяется электрофорезом в
гелевой среде в два этапа: первый этап - обычный электрофорез, а второй
этап проводится под углом к первому, в геле, содержащем антитела (второе
измерение)®.
Анализ рекомендуется проводить параллельно с оса)КДением сыворотки
человеческой крови, чтобы использовать последнюю в качестве контроля при
различных процедурах качественного выявления.
Титры антител иммунной сыворотки (максимальный диапазон расхождения
± 2 0 % ) .
Белок Титр антител иммунной сыворотки
мг/мл
C lq 4.0
СЗ активатор 0,6
С5 0,75
IgD 800 ед/мл*
(в соответствии со смесью в обычной сыворотке, 100 ед соответствуют
содержанию белка в 1 мл нормального смешанного пула сыворотки
человека)
Офаничения анализа
Концентрации триглицерида д о 30 г/л и свободного гемоглобина до 20 г/л не
оказывают воздействия на измерения.
Присутствие детергента в больших концентрациях может предотвратить
образование иммунопреципитатов и привести к неверным результатам.
Некоторые физиологические условия необходимо ус(кднять перед анализом,
например, уровень pH должно составлять от 6,5 до 9,0, а концентрация солей:
от 0,05 до 0,25 моль/л.
При обработке специально изготовленных фракций белков сыворотки к|юеи, в
которых концентрация редких белков значительно увеличена при помощи
специальных условий обработки, не всегда возможно исключить проведдение
дополнительных реакций с подо&4ыми белками. Подобные «неошцифические»
реакции проявляются очень слабо и не сжашвают влияния на исследование.
Полученные результаты анализов всегда должны интерпретироваться
соааестно с историей болеа<и, клинической картиной п31М№ нта, а тас же с
результатами других медицинских обследований.
Особые рабочие характеристики
Спещафичность
Перекрестная реакционная способность д л я используемых антител не
выявлена.
Список литературы
1. Thomas L, Clinical Laboratory Diagnostics. FrankfurtMain: TH-Books
VeriagsgeseOschaftmbH, 1998.
2. Ritzmanr» SE, Daniels JO . eds. Serum Protein Abrronnalities. DiagnosSc and
Clinical Aspeds. New York: Alan R. Liss. 1гю .. 1982.
3. Ritzmarm SE, ed. Protein Abnormafflies. New York: AJan R. Uss. Inc., 1982 (Vol.
1), 1982 (Vrt. 2), 1983 (Vol. 3).
4. Putnam F W ed. The Plasma Proteire. New York: Academic Press, 1975 (Vol. 1.
Vol. 2), 1977 (Vol. 3), 1984 (Vol. 4).
5. Sdmndc HG, StOriko К Becker W . Qualitative PlasmaproteitT-Bestimmung dteich
tamunprazqiiMon. hi: Behtingwerke AG, Ffankfart. ed, tabwatoriunrabtater.
1971; 3:1-63.
6. Clarke HG, Freeman T . Quantitative fmmunoefectrof*iwesis of human senun
(TOtens. Clin S d - 1968; 35:403-13.
l4>ata8(«V(Ri»>; Sientens H ^M ica re O ia v w rtc s Produce G n M
Етй-von-B eW n»^. те 35041
Марбу^хГврмамв»
^ w ,S i « i » w > i s .o o i n < d i a « w « g t i < »
1 > с я п ц м Ноябрь, а »
С €
--- стр. 3 ---
г
SIEMENS
N иммунная сыворотка к фибронектину человека
(N Antiserum to Human Fibronectin)
Предполагаемое использование и применение
Реагент д ля in vitro диагностики д ля количественного определения
фиброне(сгина в плазме крови человека при помощи Нефелометров Behring.
Конспект и пояснения
Пониженная концентрация фибронектима в плазме может быть следствием
шока, тяжелых инфекций вроде сепсиса, цирроза печени, недоедания, ожогов,
диссеминированной вн/трисосудистой коагуляции (ДВК), острого панкреатита,
а также после трави или крупных операций. Относителы^ое падение
концентрации фибронектина в плазме спужит индикатором тяжелой формы, а
увеличение - принято считать хорошим знаком. Концентрация фибронектина
в плазме может использоваться для мониторинга состояния питания’ .
Повышенный уровень концентрации фибронектина в плазме крови
беременных женщин указывает на вероятность преэкламлсии’ . Анализ
фибронектина в асцитической жидкости используется для определения
причин асцита: злокачественных или доврокачественных.
Основа методики
При иммунохимических реакциях фибронектин, содержащийся в плазме
человеческой крови, формирует иммунные комплексы со специфическими
антителами. Это приводит к рассеиванию проходящего через образец света.
Интенсивность рассеивания света зависит от концентрации соответствующего
белка в пробе. Оценка выполняется путем сравнения со стандартной
заданной концентрацией.
' Реагенты
Предоставляем ы е материалы :
N Иммунная сыворотка д л я человеческого фибронектина (М Antiserum 1о
Human FitmnecSn). код O U N D 1 пробирка с 2 мл реагента.
Состав
N Иммунная сыворотка к фибронектину - жидкая животная сыворотка,
получаемая при вакцинации кроликов высоко очищенным человеческим
фибронектином. При помощи специальной процедуры из иммунной сыворотки
удаляются неустойчивые составляющие. Большая часть микроорганизмов
удаляется путем фильтрации и добавления азида соды в качестве
консерванта {< 1 г/л).
После твердофазной иммуносорбции очищенная иммунная сыворотка
проверяется и корректируется особым образом для достижения
максимального соответствия требованиям Нес{^ометров Behring. Титр
антител (Т ) определяется при помощи радиальной иммунодиффузии и
наносится на этикетки пробирок. Ти тр отражает количество антигена в мг,
которые будут осажены в агарозном геле при добавлении 1 мг
соответствующей иммунной сыворотки.
Предупреждения и меры предосторожности
1. Только д л я in vitro диагностики.
2. С реагентами, содержшцими а ж д натрия, необходшю обращаться с
осторожностью: не вдыхать и не допускать контакта с кожей или
слизистыми оболочками. Азид натрия вступая в контакт с тяжелыми
металлами, такими как медь и свинец, может оС^шовывать
Подготовка реагентов
N Им 1^нна я сыворотка готова к использованию, догюлнитепьиая подгхгтовка
|ме требуется.
рХранеиие и усто йчиво сть
Хранить при температуре от 2 до 8 *С. Срок гопности указан на этикетке.
Поспе открывания иммунную сыворотку необходимо иаюльзовать в течение 4
неяель, в случае, если пробирш >фанятся плотно зацмтыми (реэтювой
пробкой и накручивающейся «рьшигай) при температуре от +2 до +8Ч: и
загрязнение (например, м 1«росч)ганитам и) исхпочено. Не используйте
оставшийся объем иммумюй сыаоротки, если гфобцма была оставлена
олф ьпой в нефелометре свьш к 5 дней приблизительно по 8 часов в деж> или
сопоставимый промежуток времени. Реагоггы не следует заюраживать.
Во время xpateram, в N Иммунное сыворолю может образоваться o o viM или
наблюдаться помутнение, однако, они не вызваны загрязнением раствора
микроорганизмами и не сказываются на активности реагента. В подобных
случаях, иммунную сыворотку необходимо отфильтровать перед
испольэовшием. Д ля данной цепи подойдут опнораэсаые фильтры с
размером пор около 0,45 «нм.
Необходимые до п о лн и те льн ы е материалы, не входящие в комплект
, Н е ф о л о ш е т рн
i N Белкэвый стандарт P Y 91 Protein Standanl PY) (челов.), код О иЮ
: Н П-БегковьЛ ю н тр о !» P Y <ЫП'Prolem Coi*(ri P Y ) (>«яов.). код OV\SY
i N Буфер реавом (N Reac«(M ВиЯе^, код 0 (Я №
; N Раэ&витег» (N ШиеМ). код 0Ш 1Г
Раоиздные матв(ма(Ш и оборудовате, а т с а ш в руксяодстве по
нефелометру.
Пробы
Дг1я анашза на фибронектин дси^скается использоваться как ЕОТА, так и
цитратную плазму. Цитратная плазма в среднем разбавляется на при
добавлении цитрапюго раствора. Гел^ммизированная плазма для анализа
<на фибронеспм не подходит.
Дпя иеспадований иокшьцйге наиболее caemie образчм плазмы
(находящиеся на ц ж юнии м — еимум 8 дней при температуре от «2 до *6 *).
Образцы могут храниться до 1 ro «« при температуре нике -20 ч :, в случав,
если от> выпи заморсмены в течение 24 часов поспе сбора н на подвершмсь
повторной заморош. Вьюжо лмпаиичеате или заморвменные пробы,
мутные поспе опаива е т , слепуег поместить в цект|Мфугу (10 минут
Ириблизителыю на 15 ООО X в) до анализа.
Методика
Примечания по процедуре:
1. Обращайтесь к соответствующему руководству по нефелометру д л я
подробных инструкций.
, 2. Не используйте реагенты с истекшим сроком годности.
3. Перед использованием реагентов в системах BN/BN 100, подождите пока
они достигнут комнатной температуры (от 15 до +25 "С). Однако, в сисгтеме
BN II допускается сразу использовал» образцы, хранимые при температуре
+2..+В "С.
Протокол испытания д л я нефелометров Behring
Протоколы испытаний приведены в руководстве к соответствукн 1|ему
нефелометру и программном обеспечении прибора.
Все действия выполняются системой автоматически.
Подготовка референсной кривой
Референсные ц тв ы е строятся при помощи мультиточечной калибровки.
Расчет производится автоматическими сериями разбавления N Белювого
стандарта PY (N Protein Standard PY) с N Разбавителем (N IMuent).
Срок использования референсной кривой
Рефереж»ую кривую мсякно мэтользовать до тех пор. гюка точность
контршгей. например, д ля № Т Белкового контроля PY, остается в пределах
соответствующего доверительного интервала. Новая референсная кршая
создается при tw n w ^ смене партии иммутюй сыворолм.
Исследование проб:
Образцы автоматически разбгеляются в соотношении 1:20 при помощи N
Разбавителя и измеряются. Для результатов, находящихся вне диапазона
измерений, исследование можно повторить с более высокой или более н и з п ^
степенью разбавления проб.
Программное обеспечение BNA и BN И позволяют производить повторное
измерение с щ ф т разбавлением прсб (см. инструкцию д л я
Нефелометрического анализатора Behring или Нефелометр II о т Behiiig,
соответственно).
Внутренний контроль качества
В целях контроля качества анализа следует исследовать № Т Белковый
стандарт PY (№ Г Protein Control PY) после первого использования пробирки с
реагентом, а так же с кажпой серией неизвестных проб. Контрольные пробы
исследуются и оцениваются так же. как и тестируемые образцы. Заданные
значения дл я фибронектина человека даны в Таблице прщисанных значений.
Интервал доверия для НЛГ Белкового контроля PY равен приписанному
значению ±15 % .
Результаты
Результаты оцениваются автоматически гфи помощи логит-лог функции.
Огран№миия и интерференция
Мутные пробы и содержащиеся в них частицы могут повлиять ю результаты
анализа Поэтому частицы. явл)вощиеся ре^л>татом денатура 1^ и белков,
следует удалять перед а на тзо м путем центрифупфовамш. По пр ичтим
технического и производственного хараюера и/или из-за использования
старых образцов результаты, полученные д л я контрольных образцов и
образцов межлабораторных исследований могут различаться в зависимое™
от используемого метода анализа. Поэтому монет понадобиться оценка
данных резултатов в отношении целеилс значений. х ч »к т^ )н ы х д л я метода.
Эталонный интервал
Нюнеспедующий этапюшый и н т^ я а л подходит для гцюб («гтратной плазмы
Белок 2.5-97,5 прочентипь |
Фибронектин 0 .И - 0,4 Г# Л 1
Тем не менее, рекомендуется д л я каждой лаборатории создать собствеиньй
эталонный интервал, так как на подобные д ш м ю влияет множество
различных факторов и интервалы мосут различаться в зюисимости от
конкретной ю учаемой попутяцин.
рабочие характеристики
Ч ув п а и п п ы п с ть и J
Чувствительность анализа устанавливается нижним пределом референсной
кривой и зависит от юиценпш лт фибронектина в N Бвиовом с ш у ^ г г е PY.
Стандартные диапазоны и зм ерент д ля нефелометров Behring приведены а
руководстве по эксллуатгщии соответствующего прибора.
Спв 1К1фичиоеть
I N Иммунная сыасфотка специфична к 4>|(Н»некгияу.
Точность и вослроизводимостъ результатов
Следующие «оэф ф«;иенты вариации (C V ) были гюпуче»^ с использованием
N Иммунжй сыворшш к чеповечеекому фибронекгану (N А|Ш$егшп to Ншпап
R ira n e c № )H a H «г т р е В Ы и й т д :
Вапок ^ • у т р к т а п ю а C V p ^
(n=3Q)
CpeidHee
т т щ /т ш т т ш
(n=tO)
Среднее C V
Фибронектин 0.22 1.8 0,22 1.5
--- стр. 4 ---
SIEMENS
реагенты для выявления
А н т и с т р е п т о к о к к о в о й Д Н К а з ы В .
Область применения
Выявление антистрвптоижковой дезоксирибонуклеазы В (аншстрвтокоюювая В, анги-
ДНКаза В) 8 сьворотке путем ингибиции ферментативного расщепления ДНК.
Реагенты
С остав
Субстрат ДНК (топуидииовый синий), лиофилиэат, состоящий из раавора
дезоксирибонуклеиновой кислоты, содержащей метахромалмеший краситель -кислоты,
толуидиновый синий.
Стрелтоиошовая ДНКаза В, лиофилизат, препарат.
фильтрованием культуры со стрептококками фуппы А. Активность используемого
раствора составляет приблизительно 10 ел/мл (1). Препарат ДНКазы В при помощи
биохимические процессов отделен о т стрептококковых дезоксирибонуклеаз А, D и С.
Стандартаая сы воротка антистрвпто
сыворотка крови ч
всех при
1ДН К| 1 В: жидкая, стабилизированная
показывающая титр анти-ДНКазы В (при условии выполнения
т с т п п ^ ) _в 300 «дАил (ед единица, величина, определяемая
внутренним стандартом Behring Diagnostics).
Консервант: азид натрия (< 1 |Ул).
Буферный раствор имидаэопа pH 7,в: содержит имидаэол (17 г/л), бычий альбумин (2
г/л), СаСЬ X гНаО (1.47 т/л) и MgSOf х 7HJ3 (0.6 г/л). Консервант: азид натрия (< 1 г#л).
Реагант прецнгапамии ДНК-толуидинового синего: сспержит гидроксид натрия (100
г/л). В ходе работы с ДНК-толуи I синим обратите внимание: данный реаганг
оказывает сильный каустический эффект на кожу и глаза: после контакта вещества с
кожей или глазами смойте большим количеством воды, в качестве меры
пред осторожностм надевайте защитную одежду, перчатш и очки произееденные из
материалов, устойчивых к щелочи. Небольшое количество реагента следует удалять
смывая его водой, перед удалением большого количества необходимо произвести
нейтрализацию разбавленной кислотой.
П усть» бутыли следует промывать водой перед утилизацией.
Прадупр« » д и1ия и меры предосторожности
1. Только для in уйгодиапюстики.
2. Содержит азид натрия. Рекомендуется работать с вещесгеом аккуратно:
Не глотайте и не допускайте соприкосновений с кожей или слизистыми оболочами.
Азид натрия может образовывать взрывчатые азиды, если содержит тяжелые
металлы, такие как мель или саинец.
3. Каждый образец донорской крови, используемьй при производстве стандартной
сыворотки, проверяется на поверхностный антиген гепал*га В, анти-HCV. анти-НП/1 и
анти-Н1\/2 методами, утвержденными Управлением по коктропо за продуктами и
лекарствами ((M IA). Только образцы с отрицательными результатами используются
для производства.
Тем не менее, пока отсутствие возбудителей инфекции не будет подтверждено, со
асами анализами, взятыми у человека, следует обращаться с допкной осторожность»,
соблюдая рекомендации для работы с биологически опасными веществами (1).
Хранение и устойчивость
ОМЛ-То1ш#пв Ыие substFBle (субстрат ДНК-толуцдиновый синий). Streptococcal DNase В
(Стрептококковая ДНКаза В), Andstreptococcal DNase В Standard senm (Стандартная
сыаоролга атистрептокоповой ДНКазы В), DNA-Toluidlne Ыие Precipitation reagent
(реагент преципитации ДИК тол. сии.) и Imidazole ВиЯег solution (буферный раствор
имидаэопа) pH 7,8допусхаетсяиспользовап> до даты, указанной на этикетке, при условии
хранения от +2 д о +8*С.
Методика
l^ w tm y p *
№пй«и<фер1влаг>енс1орвт|вппен«|{и(лр<помси»1а<1иареп1скшясйдеааофибсчкпвешв
и с с а и п и в а 1 л в п н 1 о к » п я а с а Д Н К т а |у и 1 > м > * ^ а н й р е е |« п м п р а |п т ^
П П с щ а о а п р а ш в т
Д [ > у а в е ю 1 и а ( > и а в ы а 1 п н е н 1 ы и > д р ) п к » < б о р о в п п ю 8 а у щ в в м м м в р г я р в м
а ю о > и а в и г я Л 1 ь т » о б | 1 |» « а м а с 1 » « 1 птт1 » 1 1 й1.1. В с а и тл а ф и п а а г<9б а р в я Д Н й1
I Затаи tM wocHO пофяаяе q fii^ ia r до пол
на а л ц ю о ом горасдорв
Е с т гугвмтряон р а с т р te гв |;г« н оспш Л сячб а рвгм ш ю ра а вор нь пщаи
нафева АО м « м1 в о п |и о й п р о б и т П ах» онпа1ав« я я о |а |м ва й т« м п ф а ч|ы (o r-Иб до
-ь25ЧЯрваворвнрйС)|бсц9ЮквкиаоплвЕнм№!1вор1«бЯ||М1Ю1П9Еев№в1«а*м
8 ч а а т г ^ у а т м < ч ]а в и я г 1 м -я г с р е с ш с р с а а е 1 с я у а а й 1 ш |в т » а м м 1 н
1.2. Полностью растворите лйофюиэованную стретокоповую ДН1^зу В в 3 мл воды.
Раствор готов к использованию и его необкщимо использовать в течении 48 часовс
ГЧм условии хранения при температуре -2 0 4 : рвмеленным на части допускается
использоввтьдо4наяель. Не эамсракивать повторно.
1 .3 Ста1« а р т н ю сьво р опа янтистрептоковювой ДНКазы В пш ]ва к использовамео. В
тем пвриурной 1« 1 Т 1 ГТИВПЦ1 М нео«8хвдимостн нет. При усяовии хранения стандартной
сы воропи по частям при тенперапуре-20*С , она стабильная в тачании 4 иадель. Не
ямораживать повторна
1.4. Б уф а р ш й р кп о р и м а м а эо п а pH 7,8 и реагент лрвмилигациифж-тш^нииноаый
а м и й ге ш ы к испа гм о вам ю .
♦sex.
оИраааца и ор опшв течении 30 мжввсдиноаавю п ри
2.2. Псмпловьте по два разбавления инакшаированной гьдоропм и стандарл<
сыеоропм. А Разбавление сыворотки А (стандартной или а т ш т р у ш о й ) 1-м
например, 20 мкл сыворотки * 1,0 мл буферного раствора имгздазопа pH 7,8.
Возьмите 0,9 мл разбавления сыворотки А (1+S0) и разбавьте 1+75 добавив 0^25
буферного раствора имидаэопа pH ^ 8 .
2.3. Разметьте тш рациоты й ппаншат в соответствии с рисунком, приеоденным н м
При необхспимости, протрите планшет, чтобы его увлажнить и предотцнгт»
статтеский разряд.
2.4. Поместита по 50 мкл разбаеления А (1 -г- SO) сы воропт пациента а первые ячей
родов А - G и по 50 м кп Раствора В (1 ♦ 75) сыворотки пациента во вторые ячей
этих рядов. Введите 50 мкл стандартной сыаорогпм с раэбавпанивм А (1 *90)
ячейку 1 ряда Н. и 50 мкл стандартной сыворотки с разбавлением В (1 + 7 5 ) в ячей
2.
2.5. При помощи пипепи п ом естит по 50 мкл сыаоропш пациента с разбаеленим 1+7:
ячейки 12 рядов А - G в качестве «онтропя. Затем воеоа пустые ячейки поместите!
25 мкп буферного раствора имидаэопа pH 7.8. а 50 мкп а ячейку 12 ряда Н Д 1
контроля субстрата.
2.6. Полготоаьте серию разбавлений сыворопо! пациента от 1:51 до 1:1600 пут*
последовательного переноса ло 25 ш л . после чего реэбаеьте стеидаршую сыворот
до 1:1200.
3 .1 .1Чюцвял>а
3.1. в каждую ячейку (на считая контрольных для (^бстрата и сыворопи) добавьте п о :
мкл раствора страгтжокю вой ДНКазы В. смешайте (например, микромиковром)
оставьте ппаншет накрытым на 15 мин при комнатной температуре (+15 ..+25 "С).
3.2. Затем помесште по 50 мкл раствора ДНК-топуидина синего во все ячейки (в к л с к
контрольные для фермента, субстрата и сыаоролм), тщательно пврвмешайт
накройте и поместите в инкубатор при температуре+37% на 30 минут.
3 3 . Затем пипетеой добавьте по 50 мкп реагента преципитации ДО (-топущ ина синего
каждую ячейку, и поместите ппаншег в микромиксер приблизительно на 30 сакунд.
3 4 . Можно улучшить считывание разупьтагов либо оставив пластину на 15 мин лр
+37*С в инкубаторе или водяной бане, либо цбнтрифупфуя ппаспм ы (ок. 1 минут
при2000хд ). Сразу поспе этого необходимо считать результаты.
Для того, чтобы СЧИТВП1 результаты, поместите ппенш вг на пспсвечивваыут
поверхность или на зеркало для чтения. При использовании зеркала осввтит
пластину сверху источником рассеян о то света (например, полоркив лист бумаги н
пластины). Также достаточно лепю произвести считывание реэуп»тагав, есп
поместил» пластину на белую поверхность. Проверьте шаги ре д л
стандартной и анализируемой сыворопм, в которых до сих пор не обраэоаалс
фиолетоеонфасный осадок, и вычислите концентрацию ««тистрептокшноеой ^рнказ)
в в сыворолп лвцивнта. Умножьте коэффициент разбавпем н сыворотки пациент,
на юм^ентрацию анл+ДМ(азы В в стацдартной сыворотке (300 адАпп). и раадепип
на коэффициент разбавления станяарпюй сывсуюпи.
Например, красноватая стандартная сьасропш в шюйкв Не 5 (1ДПО). К>иенсватая
сыворопа пациента в ячейка N» 7 (1:40Щ.
400x300 ,
Результаты еладуатститывать сразу из табтщ м внизу (окру т е н ь ю значош я):
Станй.
сыворотка
Сыворотю naipieHra
Ячейка
Nb
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11
3 150 225 300 4S0 600 900 1200 1800 2400 3600 4 0 0
4 100 150 200 300 400 600 800 1200 1600 2400 3200
5 75 112 150 225 300 450 600 900 1200 1800 2400
6 50 75 100 ISO 200 300 400 600 800 1200 1600
7 37 56 75 112 150 225 300 450 600 900 1200
8 25 37 SO 75 100 150 200 300 400 600 800
5.1.
Образцы сыворолги, заф« роорсаш змами, гееюи»
и высоко ш пемпческие для данного теста не подходят. Допускается использовать в
тесте (м пем тескую сы воропу после ее « и с т ки при лом ои^ Липоклина (Ljpodeati).
реагента для очистки t^ iH o ft шворопе*. Топью с использованием «yScrpaia ф4К-
вога синего мовит быть получен проаранный гоееогенный о » » “
1 Й0 пиления,
г н ы й
Если я е данный раствор на удаеля достичь даяе после >
данный раствор слеоуат утилимровать. В случае уоны м ой I
контроль Цювт ссявржать фиолепгевмрасиьй осадок. В субстратв и сьасроппнам
■онтропа должны нахоюоьея юеаоганные растворы красноватого цвета. В а « ч а1«
если в контрольных растворах результат иной, ДВНМ1Й тает вца> евпь эапрвщ авкх
Конспект и 1юясмеиия
Змачмюсть выявления антж зрастгаповпнй ф Ж азы В аавю чаатся в т«щ чтобы
под твам ип. TBi^uiae наличие или напм не в гфошлоее с т р а т т о о п в о й инфаецин
(ревеитнзм , тоюттт. гпан врую ю ф р и г и T.n.J.
п я м свсириЯонрвм азу В
О (3.4Х В случае ко и ш х инф ао^гй уаагвмениа »m |B i
н а Ь н п а а п я р т т < т т а всеЩа
анпю рвптококковой ® е(ааы В (4).
Ш а-титра в 200 принииавтся аа варпм й продел нормального диапазона (5^
Список литературы
1. B iosaM yinM > crcM ologica(an(fB iaiie< icatlalxn(arias,U .aD epB rtnnentafH eeahariit
Human Senioas. W a M igton 1983 (HHS P ubtcaton No. (СОС) 93-8395)
2. M . KUnilz, J. Gen, Ptiyaol. 33, 349(1950)
3 M .M cC a rty.J еч>.М а11Яв1543(1»)9)
4. E TiBBleranclK MefMan. ZDt. B akt H yg, I. АЫ. O ri» A 2 a ib 48(1974)
& E L K49*»,& P .A n tG ny,S .& C » M pn n n,E .M L > ^» o ub a n i(W in n an ia karJ.elin kivBBt
41^1405 (tSTO)
6 E M A y o u b a n d tW .M ta m a n ia ln r.P e iM n c a % S 3 ? {1 9 e 2 )
7. a KMn, C. BakaranHW. A n a s, AppL М о т е т » .9 Ю (1 в 7 1 )
8. E riealerand l.2aC B eM ri.A <zlLLati.1«2e7(t973)
Sim ens Heattxs№ OiagnosScs ProdtKts GmbH
ErnMran-BehmfhStr. 76 36041
Мярбур|Л‘«рианм
mbi
Г^пм энм ипль:
Акетрибы апфвСШ А: Siemens Inc.
Kirfaapi.№te714CUM.