Тестовые картриджи и триггерный раствор для анализаторов функции тромбоцитов серии INNOVANCE PFA — инструкция и характеристики
Открытые закупки, где изделие проходит ТЗ
Сейчас открытых закупок, где изделие полностью проходит ТЗ, нет; список обновляется каждый день.
Построчная сверка ТЗ с характеристиками этого изделия и все закупки под ваши товары — в кабинете, 7 дней бесплатно.
Попробовать бесплатно
Текст инструкции: технические характеристики
--- стр. 2 --- 1. Инструкция на Тестовый картридж с коллагеном и эпинефрином (Dade®PFA Collagen/EPI (Col/EPI) Test Cartridge) и Тестовый картридж с коллагеном и АДФ (Dade® PFA Collagen/ADP Test Cartridge) стр. 3. 2. Тестовый картридж P2Y (INNOVANCE® PFA P2Y Test cartridge) стр. 15 3. Триггерный раствор (Dade® PFA Trigger Solution) стр. 24 4. Расшифровка символов стр. 25 Содержание: Завод-производитель: Siemens Healthcare Diagnostics Products GmbH. (Сименс Хеалскеа Диагностике Продактс ГмбХ) Emil-von-Behring-Strasse 76, 35041, Marburg, Germany --- стр. 3 --- Кассета для анализа Dade® PFA Collagen/EPI и кассета для анализа Dade® PFA Collagen/ADP IK A C C E TA I IKACCETAI[ в ш Е з а а 01|1НйИМИи1 pMinifM — информация, обновленная по сравнению с версией, выпущенной в июле 2010 года Назначение прибора Вспомогательное устройство, используемое при определении дисфункции тромбоцитов в обработанной цитратами цельной человеческой крови с использованием системы PFA-100® и системы INNOVANCE® PFA-200.____________________________________________________________________________________ Резюме и пояснения Система PFA состоит из прибора и кассеты для анализа, в которой процесс адгезии и агрегирования тромбоцитов после повреждения сосуда воспроизводится в режиме in vitro . Нарушение функции тромбо цитов, определяемое при помощи систем PFA, может быть приобретенным, врожденным или вызванным действием веществ, ингибирующих активность тромбоцитов. Чаще всего нарушение функции тромбоци тов связывают с уремией, болезнью фон Виллебранда (VWD) и воздействием таких веществ, как ацетил салициловая кислота (ASA, например, аспирин®). Кассеты для анализов PFA Collagen/EPI (Col/EPI) представляют собой основные кассеты для определения дисфункции тромбоцитов, вызванной врожденными дефектами, синдромом VWD или воздействием инги биторов активности тромбоцитов. Кассета Collagen/ADP (Col/ADP) предназначена для определения того, не вызван ли аномальный результат, полученный при проведении анализа Col/EPI, воздействием ASA или препаратов, содержащих ASA. Принцип работы метода Устройства серии PFA позволяют быстро оценивать функцию тромбоцитов на небольших по объему об разцах цельной крови, обработанной цитратами; в основу анализа положен метод, описанный авторами Крацер (Kratzer) и Борн (Вогп)“ . Одноразовые аналитические кассеты PFA состоят из большого количест ва встроенных узлов, включая капилляры, емкость для образца и биохимически активную мембрану с центральным круглым отверстием. Обработанная цитратом цельная кровь забирается из емкости для образца по капиллярам и проходит через отверстие, таким образом, тромбоциты подвергаются воздейст вию значительной силы поперечного сопротивления потоку. Мембрана кассеты покрыта коллагеном, су- бэндотелиальным белком, который, как считают, является первоначальной матрицей, к которой прикреп ляются тромбоциты. Полагают, что прикрепление тромбоцитов к коллагену запускает первоначальный физический стимул для активации тромбоцитов. Кроме того, мембрану покрывают либо эпинефрином (адреналином), либо АДФ, которые являются другими физиологически активными веществами, исполь зуемыми помимо коллагена в агрегометрических анализах для активирования тромбоцитов. Перед нача лом анализа PFA мембрану смачивают, распыляя «пусковой раствор». В ходе анализа тромбоциты при липают к покрытой коллагеном мембране. Затем, как и в агрегометрических анализах^, тромбоциты акти вируются, и, контактируя с физиологически активными веществами, такими как АДФ или элинефрин, вы пускают содержимое гранул. Высвобождение содержимого гранул приводит к тому, что тромбоциты сли паются друг с другом, образуя агрегаты. В качестве меры функциональной активности тромбоцитов в системе PFA процесс агрегирования приводит к образованию тромба в отверстии; отверстие постепенно уменьшается и, в конце концов, совершенно прекращается ток крови через кассет/. В оптической агрего- метрии функция тромбоцитов оценивается по образованию агрегата и связанному с этим изменению све- топропускания. Системы PFA определяют время с момента начала анализа до полного перекрывания отверстия и выда ют результат в виде времени закрытия (СТ). Параметр СТ является индикатором функционирования тромбоцитов в анализируемом образце цельной крови. На образование тромбоцитарного сгустка в систе мах PFA влияет малое количество и/или активность тромбоцитов в образце, пониженное содержание фактора фон Виллебранда в плазме и, кроме того, снижение гематокрита в процессе протекания образца через кассету®. B4170G20C0506(214)SD/ST 2 Издано в сентябре 2010 года --- стр. 4 --- Реагенты Символ Предоставленные материалы В4170-20 КАССЕТА! ICOL l IePII 20 X кассет Dade® PFA Collagen/EPI Символ Предоставленные материалы В4170-21 KACCETAI ICOLlIaDPI 20 х кассет Dade® PFA Collagen/ADP Примечание. Реагенты продаются отдельно. Состав Кассета Dade® PFA Collagen/EPI: аналитическая кассета, содержащая мембрану, покрытую 2 мкг конско го коллагена типа I и 10 мкг эпинефрина битартрата. Кассета Dade® PFA Collagen/ADP: аналитическая кассета, содержащая мембрану, покрытую 2 мкг кон ского коллагена типа I и 50 мкг аденозин-5-дифосфата (АДФ). Предупреждения и предостережения 1. Для использования в диагностике in vitro. 2 . С о всеми образцами крови и ее компонентов следует обращаться так, как если бы они были заразны ми. Все образцы крови должны обрабатываться в соответствии с опытом надлежащей лабораторной практики и с использованием соответствующих мер предосторожности. 3. При загрузке в устройство подачи и выгрузке из него кассет, заполненных кровью, следует надевать средства защиты. 4. Запрещается разбирать аналитическую кассету. 5. При вынимании кассеты из устройства подачи есть риск контакта с капельками крови. Подготовка кассеты к анализу (a) Упаковка с кассетами должна прогреться до температуры от +16 до +26 “С, и только затем ее можно открывать. Это занимает около 15 минут. Вынув кассету, немедленно снова герметично закройте упа ковку. (b) Снимите и выбросьте полоску из фольги, которая находится в верхней части кассеты. Она служит защитой только от попадания пыли и мелких частиц. Ни на качество работы кассеты, ни на стабиль ность реагентов внутри нее неплотное прилегание этой фольги не повлияет. Примечание. Не пользуйтесь аналитической кассетой, если заметно, что верхняя за1цитная фольга повреждена, или если она отсутствует. Выбросьте ее в соответствующий мусоросборник. (c) Поместите аналитическую кассету (одну или несколько) в рабочую кассету системы PFA и нажмите, чтобы аналитические кассеты плотно встали на свои места. (См. рисунок в разделе «Введение» соот ветствующего руководства по эксплуатации/инструкции.) Стабильность и хранение Аналитические кассеты в невскрытой упаковке стабильны при температуре от +2 до +8 °С до истечения срока годности, указанного на этикетке. В случае открытия упаковки аналитические кассеты стабильны на протяжении 3 месяцев при температуре от +2 до +8 °С. Кассеты, хранящиеся при температуре от +16 до +26 ° во вскрытой или невскрытой упаковке стабильны в течение 4 часов. Необходимые, но отсутствующие материалы 1. Система PFA-100® или система INNOVANCE® PFA-200. 2. Пусковой раствор Dade® PFA, В4170-50. 3. Вакуумированные пробирки для сбора крови или шприцы, содержащие 3,8% (0,129 М) или 3,2% (0,105 М) раствор цитрата натрия с буфером (1 часть антикоагулянта на 9 частей фови). 4. Автоматические пипетки, способные отмерять до 800 мкл раствора. B4170G20C0506 (214)SD/ST 3 Издано в сентябре 2010 года --- стр. 5 --- Образцы Сбор образцов и обращение с ними Все анализы на функциональные качества тромбоцитов сильно зависят от правильного метода взятия образца крови. Венепункцию следует выполнять иглой калибра 21G или более крупной (20G или 19G). Кровь отбирают непосредственно в вакуумированную пластиковую пробирку или пробирку из стекла с силиконовым покрытием, или в шприц, содержащий 3,8 % (0,129 М) или 3,2 % (0,105 М) буферизиро ванного раствора цитрата натрия (1 часть антикоагулянта на 9 частей крови). Использование цитрата натрия без добавки буфера в качестве антикоагулянта не рекомендуется. Важно! После взятия образца перемешайте его и антикоагулянт, осторожно переворачивая пробирку вручную 3 или 4 раза. Если в процессе взятия образца вена спалась или ток крови прерывался, выбросьте такой образец. Не используйте гемолизированные образцы крови. Образцы следует поставить на хране ние; если их не перемещать с места на место, то при температуре от +16 до +26 °С они стабильны в тече ние 4 часов. Для аналитической кассеты Col/EPI рекомендуется выдержать кровь после сбора не менее чем 10 минут, прежде чем приступать к анализу. Метод отбора образца (способ венепункции и концен трация цитрата) должны быть одинаковы для всех образцов. Процедура Подробнее см. в инструкции/руководстве по эксплуатации для системы PFA. Не было обнаружено никакой значимой разницы между однократным и двукратным определением в отношении референтного диапазо на, диагностической чувствительности и специфичности, а также диагностической точности результатов. Таким образом, на системе PFA можно выполнять как однократные, так и двукратные определения. Ин формация об однократном анализе приводится в разделе «Клинические характеристики» данной инструк ции по использованию. При выполнении двукратного анализа в отчет включается среднее значение по двум результатам (вклю чая отклоняющиеся, один выше и один ниже установленного лабораторией порогового значения), если только не имеют места следующие обстоятельства: (1) в одной позиции отверстие не закрылось, а в другой наблюдалось измеримое время СТ в пределах референтного диапазона, установленного для данной лаборатории, или (2) СТ по одному из положений было равно или превысило удвоенное (2 х) значение для времени, полу ченного в другом положении. Образцы, у которых при повторном анализе повторяются описанные здесь результаты, следует переде лать ещё раз, если со времени взятия исходного образца прошло не более 4 часов. Если образец старше четырех часов, анализ нужно повторить, взяв для этого свежий образец. Лаборатории могут установить дополнительные индивидуальные критерии для повторного анализа. Если повторные анализы не снима ют вопрос расхождения в результатах, свяжитесь с компанией Сименс Хелскеа Диагностике для получе ния помощи. Загрузка образца Следующие действия должны выполняться последовательно без пауз между ними: (a) 3-4 раза осторожно переверните пробирку вручную и перемешайте образец. Положив рабочую кассету с заправленными в нее аналитическими кассетами на плоскую поверхность, отберите пипеткой 800 мкл крови и влейте пробу в меньшее по размеру отверстие (отверстие емкости для образца) на ана литической кассете, осторожно выпуская кровь вдоль одной из внутренних поверхностей. Тем самым уменьшается возможность попадания в емкость с образцом пузырьков воздуха. Примечание. Системы PFA не могут обнаруживать пузырьки воздуха в кассете для анализов. (b) Вставьте рабочую кассету с зафуженными в нее аналитическими кассетами в инкубационный отсек (отсеки) устройства, при этом она должна быть заподлицо с поверхностью устройства подачи проб. Не надавливайте на отверстие емкости для образца. (c) Начните анализ. Уничтожение использованной кассеты для анализов Осторожно выньте кассету из устройства подачи образцов. Придерживая рабочую кассету одной рукой, выньте из нее аналитическую кассету или кассеты, осторожно потянув за нижнюю часть в сторону до тех пор, пока она не отщелкнется. Аналитические кассеты выбросьте в соответствующую емкость для биоло гически опасных отходов. Контроль качества Система В начале каждой смены выполняйте пункт «Самотестирование» в разделе «Меню технического обслужи вания». Подробнее см. в инструкции/руководстве по эксплуатации для системы PFA. B4170G20C0506(214)SD/ST 4 Издано в сентябре 2010 года Г --- стр. 6 --- Кассеты В рамках системы контроля качества рекомендуется анализировать образец от контрольного донора два жды при каждой новой поставке аналитических кассет, или в том случае, когда учреждение решит прове рить качество работы системы. Кассеты будут считаться полностью функциональными в том случае, если среднее время СТ попадает в референтный диапазон, установленный для данной лаборатории. Если среднее значение СТ выходит за пределы референтного диапазона, повторите процедуру, взяв образец у второго участника контрольной группы доноров для данной лаборатории. Если среднее значение СТ в обоих образцах выходит за пределы референтного диапазона, свяжитесь компанией Сименс. Если для второго донора параметр СТ будет находиться в пределах референтного диапазона, то следует прове рить состояние функции тромбоцитов у первого донора или выяснить, не принимал ли он какие-либо ле карства. Для целей проверки КК рекомендуется подобрать контрольную группу доноров. Значение пара метра СТ для доноров, допущенных в эту группу, должно демонстрировать приемлемую воспроизводи мость и значения, близкие к середине референтного диапазона для данной лаборатории. Следующая процедура является примером того, как отбирать доноров в контрольную группу: 1. Каждый из доноров не должен иметь каких-либо известных заболеваний, влияющих на функцию тром боцитов, и не должен принимать лекарства, оказывающие такое влияние. 2. Образцы от каждого потенциального донора анализируют дважды с применением только кассеты Col/EPI. 3. Донора можно считать прошедшим отбор, если среднее по двум распечатанным результатам значе ние времени закрытия для него составляет 102 - 146 секунд, а коэффициент вариации не превышает 15% или равен ему. (Примечание. Этот диапазон был определен по среднему значению СТ ± 22 се кунды для образцов фови, собранных с использованием 3,8%-ного буферизованного раствора цитра та натрия у 127 очевидно здоровых взрослых лиц в мультицентровом исследовании, проводившемся в Германии, см. также «Ожидаемые значения».) Примечание. Может потребоваться изменение приемлемого диапазона в зависимости от среднего значения СТ, установленного отдельными лабораториями для здоровых взрослых. Лабораториям рекомендуется проводить процедуру контроля качества таким образом, чтобы она соот ветствовала установленным программам контроля качества и отвечала требованиями местного и/или федерального законодательства или требованиям акфедитации. Результаты Результат анализа PFA выдается в виде параметра СТ в секундах (с). Анализ с помощью PFA указывает на функциональное состояние тромбоцитов. Значение времени СТ, превышающее установленный для данной лаборатории порог, может означать необходимость в проведении дополнительных диагностиче ских анализов. Результаты следует всегда оценивать в сочетании с клинической историей, проявлениями заболевания и другими результатами лабораторных анализов (например, с временем остановки кровоте чения, результатами общего анализа крови или с результатами афегометрии). В тех случаях, когда результаты, полученные методом PFA, расходятся с результатами клинического об следования, необходимо выполнить дополнительные анализы. Ниже показаны примерные результаты метода PFA для нормальных (здоровых) доноров и для лиц с разного рода расстройствами функции тромбоцитов; Нормальные (п = 176) ASA* (п = 120) VWD (п = 28) Тромбастения Гланцманна (N =4) Col/EPI нормальное аномальное аномальное аномальное Col/ADP нормальное нормальное аномальное аномальное * См. таблицу в разделе «Дисфункция тромбоцитов, вызванная приемом ASA». Ограничения процедуры 1. Наличие в образце микротромбов или мелких частиц, попавших туда из окружающей среды, может отрицательно сказаться на результатах анализа или даже привести к отмене процедуры из-за обнару жения препятствия току крови. 2. Образцы крови с высокой скоростью оседания частиц могут слегка осесть за то время, что они нахо дятся в положении В, ожидая, пока выполняется анализ кассеты, находящейся в положении А. В этом случае гемодинамика образца может измениться, а это скажется на результате анализа. Поэтому бы стро оседающую кровь рекомендуется анализировать однократно. Чтобы получить для такого образца двойной результат, анализ следует вести параллельно на двух образцах. 3. Известно, что многие лекарства способны воздействовать на функцию тромбоцитов. Поэтому следует проанализировать историю приема пациентом медицинских препаратов. B4170G20C0506(214)SD/ST 5 Издано в сентябре 2010 года 6 --- стр. 7 --- 5. Значение СТ, превышающее установленный для данной лаборатории порог, может быть вызвано низ ким уровнем гематокрита (менее 35%) и/или аномально низким количеством тромбоцитов (менее 150 000/мкл). Для образцов с гематокритом выше 50% или количеством тромбоцитов свыше 500 000/мкл оценки времени СТ не проводилось^. Известно, что определенные жирные кислоты и липиды, обнару живаемые в различных продуктах питания, способны подавлять функцию тромбоцитов, и врачи могут рекомендовать пациентам воздержаться от приема жирной пищи перед анализом. Для систем PFA не устанавливались показатели качества работы, относящиеся к другим инигибрую- щим активность тромбоцитов агентам, кроме ASA. 6. В патологических образцах с пограничной дисфункцией тромбоцитов, вызванной аспирином, при не- __гкппьту яняпи.чях Ч М М П WtntH П О Ж Т Ь С Я ВеСЬМЯ птпмия^рм»г.д ГрЧр1ЬТЗТЫ 7. Результаты проверки всегда следует истолковывать с учетом медицинской истории пациента, клини ческой картины заболевания и других фактов. Мешающие вещества 1. На результаты анализа может повлиять гемолиз. Лизис эритроцитов, на который указывает наличие свободного гемоглобина, может повлиять на параметр СТ PFA по двум причинам: 1) путем уменьшения гематофита и 2) за счет выброса АДФ. Поэтому использовать гемолизированную кровь для анализа PFA не рекомендуется. 2. Широко известно, что некоторые жирные кислоты и липшы, обнаруживаемые в различных продуктах питания, способны ингибировать функцию тромбоцитов”’ , для определения которой разработана сис тема PFA. Нейтральные липиды, такие как холестерин, в целом не влияют на функцию тромбоцитов’ . 3. Ингибиторы функции эритроцитов, такие как ASA и антагонисты анти-гликопротеина 1 1 Ь /1 1 1 а , непосред ственно влияют на работу тромбоцитов. Ожидаемые значения Для определения референтных диапазонов для аналитических кассет Col/EPI и Col/ADP в случае исполь зования 3,8%-ного и 3,2% буферизованного раствора цитрата натрия были проанализированы образцы соответственно от 127 и 309 очевидно здоровых лиц, не имевших ранее зарегистрированных случаев или лабораторных анализов, указывавших бы на наличие у них дисфункции тромбоцитов, вызванной вн^рен- цццц лИфвммч ч оибоииов. наличием VWD или нгипийгтвием ингиИитт|Т1|М1И!1ДРР"^"ИТ*'" ■ Антикоагулянт Количество доноров (п) Тип кассеты Среднее значение [с]” Референтный диапазон [с]° (5" - 95" процентили) 3,8 % (0,129 М) цитрат натрия 127 Col/EPI 124 84-160 Col/ADP 89 68-121 3,2 % (0,105 М) цитрат натрия 309 Col/EPI 110 82-150 Col/ADP 78 62-100 ’ на основании двукратных определений Разница в составе донорской популяции может привести к получению результатов, отличных от указан ных здесь. Каждая лаборатория должна самостоятельно установить для себя диапазон ожидаемых зна- чений tcM. паи— ИИИИ CLSI С28-АЗ ДИН пппщ п и 1 '°___________________________ Отдельные показатели работы Пофешность Исследование погрешности было проведено для того, чтобы охарактеризовать вариабельность систем PFA. Образцы для данного исследования отбирались в вакуумированные пробирки, содержащие 3,8%- ный (0,129 М) буферизованный раствор цитрата натрия. Исследование выполнялось на трех партиях кассет каждого типа. Кровь отбиралась у лиц с нормальной функцией тромбоцитов в три отдельных дня на протяжении восьми дней. Шесть повторных проб от каждо го участника исследования анализировались ежедневно с помощью кассет обоих типов из трех отдельных партий для каждого типа на установке PFA-100®. Были получены следующие результаты: Col/EPI [%] Col/ADP [%] Коэффициент вариации 12,4 12,7 внутри одной партии (8,8-14,0) (10,9-15,9) Коэффициент вариации 0.6 4,0 между партиями (0,0 -1,1) (0,0-7,4) B4170G20C0506(214)SD/ST 6 Издано в сентябре 2010 года --- стр. 8 --- Кроме того, данные, собранные в ходе многоцентрового исследования, были проанализированы на ва риабельность в связи с положением в устройстве во время анализа. Эти данные представляют результа ты от 176 участников с нормальной функцией тромбоцитов при анализе в положении А и В. Расчетный коэффициент вариации при двойном определении для кассет Col/EPI составил 13,5%, для кассет Col/ADP — 10,0%. По отдельным учреждениям-участникам значения CV для кассет Со1/ЕР1 располагались в диа пазоне от 10,4% до 17,4%, а для кассет Col/ADP - в диапазоне от 7,7% до 11,2%. Для тех образцов, у ко торых СТ было близко к верхнему пределу референтного диапазона, CV для двойного определения со ставил 13,7% для кассет Со1/ЕР1 и 10,0% для кассет Col/ADP. Клинические характеристики Всего в этом многоцентровом исследовании были дважды проанализированы 328 образцов с использова нием системы PFA-100®. Популяция включала образцы от 176 лиц с нормальной функцией тромбоцитов и от 152 с нарушениями функции тромбоцитов. 115 человек, прошедших анализ и отбор в группу с нор мальной функцией тромбоцитов, были проанализированы после приема ими ацетилсалициловой кислоты и также записаны в фуппу лиц с дисфункцией тромбоцитов. Группа из 176 лиц с нормальной функцией тромбоцитов на 61% состояла из женщин и на 39% из мужчин, все участники были в возрасте от 18 до 57 лет. Группа из 152 лиц с дисфункцией тромбоцитов на 66% состояла из женщин и на 34% из мужчин, воз раст участников составлял от 16 до 66 лет. Состояние функции тромбоцитов (PFS) для каждого образца определялось на основании комплексного анализа функции тромбоцитов (протромбиновое время, АЧТВ, агрегометрия тромбоцитов, время остановки кровотечения, общий анализ крови, включая количество тромбоцитов, фибриноген, фактор VIII;C, активность фактора фон Виллебранда, антиген к фактору вон Виллебранда и определение мультимеров), а также на основании истории заболевания. Дополнительные образцы, для которых результаты комплексного анализа для определения функции тромбоцитов могли быть истолкованы двояко двумя разными людьми — либо как нормальные, либо как аномальные, класси фицировались как не позволяющие сделать заключение о PFS. Такие образцы (п=26) были исключены из исследования. Примечание. К числу расстройств функции тромбоцитов, исследованной с помощью устройства PFA-100®, относятся только расстройства, вызываемые приемом ацетилсалициловой кислоты, а также расстройства этой функции у пациентов, имеющих в анамнезе или по данным лабораторных анализов тробмастению Гланцманна или VWD. Не исследовались пациенты, принимающие оральные контрацепти вы , пациенты с отклонениями в работе фактора коагуляции и пациенты с тромбоцитопенией. В группу аномалий вошли пациенты с (а) VWD (п = 28), (Ь) дисфункцией в результате приема ASA (п = 120) и (с) с тромбастенией Гланцманна (п = 4). Клинические показания для включения в исследование с помощью системы PFA-100® основывались на установленном пороговом значении СТ, равном 170 се кундам. Этот порог был установлен по данным предыдущих исследований с учетом некоторого перекры вания нормального и аномального диапазонов значений СТ. Соответствие между категоризацией для участия в исследовании с помощью системы PFA-100® и состоянием функции тромбоцитов для 328 об разцов представлена ниже: Сравнение результатов, полученных с помощью системы PFA-100®, и показателя состояния функции тромбоцитов (PFS) PFS Нормальный [п] PFS Аномальный [п] Col/EPI PFA Нормальный 156 6 Col/EPI PFA Аномальный 20 146 По данным из приведенной выше таблицы общая диагностическая чувствительность и специфичность составили соответственно 96,1% и 88,6%. Для каждого из учреждений, участвовавших в исследовании, были рассчитаны индивидуальные значения диагностической чувствительности и специфичности, диапа зоны которых составили соответственно от 86,7% до 100,0% и от 79,3% до 100%. В дополнение к расчетам по двуфатным определениям, был проведен расчет диагностической чувстви тельности и специфичности для системы PFA-100® по однофатным определениям. Результаты пред ставлены в таблице ниже. Они показывают, что однократное проведение анализа не ухудшает клиниче ских показателей качества работы системы PFA-100®. B4170G20C0506 (214) SD/ST 7 Издано в сентябре 2010 года --- стр. 9 --- Диагностическая чувствительность Г% ] Диагностическая специфичность [%] Диагностическая точность Однократные определения в положении А 96,1 86,4 0,969 Положение В 96,7 86,9 0,980 Двукратные определения 96,1 88,6 0,979 Доверительный интервал 91,6-98,5 83,0 - 92,9 0,961 - 0,997 Приведенные выше данные отражают клинические показатели работы системы PFA-100® с аналитиче скими кассетами Col/EPI при использовании порога в 170 секунд. На рисунке внизу отображена наблю даемая диатостическая чувствительность и специфичность при применении к одной и той же популяции разных пороговых значений. Для каждой лаборатории рекомендуется установить собственное пороговое значение, исходя из популяции и внутренних процедур, характерных для данного учреждения. Чувствительность и специфичность системы PFA-100® при разных значениях порогового времени % PFA-100® пороговое значение Чувствительность — *— Специфичность Соответствие между данными, полученными на системе PFA-100® и методом агрегометрии, приведены в таблице ниже. Из таблицы исключены 5 случаев, когда по данным агрегометрии нельзя было сделать вывод о состоянии функции тромбоцитов. В целом доля совпадений, выраженная в процентах, между результатами метода PFA-100® и афегометрии поданным этой таблицы составила 90,1%: Агрегометрия Нормальный Аномальный результат [п] результат [п] Col/EPI PFA Нормальный 145 12 Col/EPI PFA Аномальный 20 146 B4170G20C0506(214)SD/ST 8 Издано в сентябре 2010 года --- стр. 10 --- Дисфункция тромбоцитов, вызванная ASA Для оценки нарушения функции тромбоцитов, вызванной употреблением ацетилсалициловой кислоты, здоровым пациентам с нормальной функцией тромбоцитов давали ASA, после чего отбирали у них образ цы крови с использованием 3,8%-ного (0,129 М) буферизованного раствора цитрата натрия и анализиро вали на устройстве PFA-100® с использованием аналитических кассет Col/EPI и кассет Col/ADP. Всего были дважды проанализированы 120 образцов в промежутке от 2 до 30 часов после принятия 325 мг ASA. Результаты оказались таковы: Со1/ЕР1 нормальное СТ< 170 с С о1/ЕР1 аномальное СТ> 170 с Col/ADP нормальный результат PFA C T<114c ______И ______ 87 Col/ADP Аномальный результат PFA С Т>114с ______И ______ 1 27 Система PFA-100® определила наличие дисфункции тромбоцитов в 95% из 120 случаев приема ASA, на что указывает количество аномальных результатов, полученных с помощью аналитической кассеты Со1/ЕР1. В 72,5% случаев из этих 120 аномальный результат по С о1/ЕР1 сочетался с нормальным резуль татом по Col/ADP. Разница в характере популяций, дозировке ASA, промежутке, проходящем от употреб ления ASA до анализа и в характере антикоагулянта, использованного при отборе пробы, может привести к тому, что результаты будут отличаться от указанных в данном документе. Исследование у детей и младенцев В одном исследовании” представлены данные применения системы PFA-100® в качестве количественно го метода обследования с целью определить наличие VWD, врожденных и приобретенных нарушений функции тромбоцитов у детей. 52 ребенка в возрасте от 1 до 17 лет были обследованы на наличие у них потенциальных геморрагических заболеваний путем стандартного определения времени коагуляции, аг- регометрии тромбоцитов, времени остановки кровотечения и количественного определения содержания фактора фон Виллебранда. 19 из них был поставлен диагноз дисфункции тромбоцитов (у 5 из-за прини маемых лекарств, у 2 была выявлена тромбастения Гланцманна и у 12 — VWD). Результаты анализов с помощью системы PFA-100® для этих пациентов приведены ниже. и расстройство функции тромбоцитов, и VWO Только VWD Реагент Чувствительность специфичность Эффективность Чувствительность Эффективность Col/EPI 100 % (19/19) 97 % (32/33) 98 % (51/52) 100 % (12/12) 98 % (44/45) (95 % ДИ) (85-100% ) (84-100% ) (90-100 %) (78 -100 %) (88-100% ) Col/ADP' 87% (13/15) 80% (12/15) 83 % (25/30) 80% (8/10) 80 % (20/25) (95 % ДИ) (60 - 98 %) (52 - 96 %) (65 - 94 %) (44 - 97 %) (59 - 93 %) В связи с недостаточным количеством образцов для установления значения при использовании кассет Col/ADP использовались только 32 пациента. Имеются также данные из отдельного исследования’^ , в котором анализы проводились на образцах, взя тых у детей, которым ранее был поставлен диагноз VWD. Результаты исследования были получены для 33 детей в возрасте от 2 до 18 лет с хорошо характеризуемым VWD (21 с определенным 1 типом, 9 с ти пом 2 и 3 с типом 3). Из этих детей у 28 были аномальные показатели СТ при использовании кассеты Со1/ЕР1 и у 29 — при использовании кассеты Col/ADP. У четырех детей с определенным 1 типом VWD в день проведения анализа с помощью системы PFA-100® были обнаружены нормальные результаты по СТ на кассетах обоих типов, а также нормальные уровни антигена VWF (VWF:Ag) и нормальная актив ность VWF-кофактора ристоцетина (VWF;RCo). В исследование не включались дети, получающие лече ние ингибиторами функции тромбоцитов и те, у которых имелись внутренние дефекты тромбоцитов. В дополнительном исследовании с помощью PFA-100® показатели СТ для 52 детей в возрасте от 1 года до 15 лет, направленных для проведения тестирования на аллергию, но в остальном в целом здоровых и не принимающих лекарственных средств, угнетающих функцию тромбоцитов, сравнивались с СТ 20 здоровых взрослых'^. Средние значения СТ не показали какого-либо существенного различия между дет ской и взрослой группами. B4170G20C0506(214)SD/ST 9 Издано в сентябре 2010 года --- стр. 11 --- Исследования при лечении кровотечений Хотя показатели работы систем PFA при оценке терапевтического эффекта десмопрессина ацетата (1-деамино-80-аргинина вазопрессин, DDAVP) не были полностью определены, такие исследования прово дились для разных комбинаций пациентов. Данные нескольких исследований с помощью системы PFA-100® позволяют предположить, что время СТ как для аналитических кассет Col/EPI, так и для кассет Col/ADP из меримо уменьшается после вливания DDAVP. Меньшее значение СТ означает улучшение функции тромбо цитов и может указывать на уменьшение кровотечения и меньшую потребность в переливаниях. Представлены данные одного исследования” 23 пациентов с VWD 1 типа. В начале исследования у всех пациентов отмечалось увеличенное значение СТ. 30 минут спустя после вливания DDAVP значения СТ воз вращались в пределы референтного диапазона лаборатории. Сводные данные по результатам для этих пациентов показаны на рисунке ниже. Эти данные обратно коррелируют с результатами количественного определения содержания VWFiRCo. Когда значения параметра VWFiRCo были ниже порога для данной лаборатории, СТ увеличивались, а после вливания DDAVP оба значения возвращались к норме. DDAVP стимулирует выделение эндотелием высокомолекулярных мультимеров VWF, что улучшает работу тромбо цитов в условиях сильного сопротивления потоку, как это происходит в аналитической среде систем PFA. Данные по 23 пациентам с WVD 1 типа до и после вливания DDAVP. Время СТ в секундах (с) измерялось аналитическими кассетами С о1/ЕР1 и Col/ADP до вливания ODAVP и 30 минут спустя. Также измерялся параметр VWF:RCo. В одном проспективном исследовании'° оценивалось ухудшение первичного гемостаза у 5649 пациентов, подвергшихся плановой хирургической операции. Процедуры включали вмешательства на сосудах, грудной кпетке, ортопедические, гинекологические, урологические, отоларингологические операции и операции в челюстно-лицевом отделе черепа. До операции пациенты заполняли анкету, чтобы можно бы ло узнать, были ли у них ранее кровотечения. Им также проводились предоперационные анализы на гемостаз, включая определение количества тромбоцитов, протромбинового времени, активированного частичного тромбопла- стинового времени, времени окончания кровотечения, количественно определялось содержание VWF^g, а также СТ при помощи кассет С о1/Е Р1 и Col/ADP. Из 628 пациентов с наличием в анамнезе фовотечений 256 имели отклонение как минимум по одному из гемостатических анализов. Из этих 256 пациентов у 252 значение СТ, определенное с использованием кассет Со1/ЕР1 и Col/ADP, превышало нормальные; кровь при этом отбиралась с использованием 3,2%-ного буферизованного раствора цитрата натрия. Пациенты с СТ выше референтного диапазона имели следующие заболевания: 54 — VWD, 87 принимали ASA, у 113 наблюдались другие врожденные или приобретенные нарушения первичного гемостаза. В таблице ниже показано преобладание пациентов, реагирующих на введение DDAVP, по данным опре деления с помощью системы PFA-100®’*. Определение улучшения функции тромбоцитов после лечения DDAVP Расстройство функции тромбоцитов Всего" [п] Пациенты, реатруюицие на лечение* [п] Col/EPI (СТ<150 с) Col/ADP (СТ<100 с) ASA 87 79 41 VWD' 54 50 41 Другое 113 100 88 Пациенты, получающие DDAVP. Пациенты, у которы х изначально увеличенное СТ, определенное методом PFA-100®, было приведено в норму после вливания DDAVP. Референтные диапазоны составили 82 -150 с (С о1/Е Р 1) и 62 -100 с (Col/ADP). Среди больны х с VWD бы ло 40 человек с 1 типом, 12 с возможным 1 типом и 2 человека с типом 2а. Двое больны х с возможны м типом 1 не бы ли вы явлены ни с помощью кассеты С о 1/Е Р 1, ни с помощью кассеты Col/ADP. B4170G20C0506 (214) SD/ST 1 0 Издано в сентябре 2010 года I L --- стр. 12 --- Клинические показатели для 628 пациентов, имевших до операции случаи кровотечения в анамнезе, как они были определены в данном исследовании, показаны в таблице ниже. Клинические характеристики для кассет Col/EPI и Col/ADP метода PFA при определении дефектов первичного гемостаза Чувствительность gl%] специфичность [%] PPV [%] NPV [%] Col/EPI 90,8 86.6 81,8 93,4 Col/ADP . 47J 93.5 77,3 79,4 “ Чувствительность, специфичность, положительное (PPV) и отрицательное прогностические значения (NPV) были определены по данным анализа ROC, как показано на рисунке ниже. Значения были полу чены с использованием референтных интервалов, установленных исследователями, которые отлича ются от тех, что приведены в разделе «Ожидаемые значения». С п е ц и ф и ч н о с т ь Рабочая характеристика приемника (ROC) для СЕ, определенных методом PFA Col/EPI у пациентов с наличием кровотечений в анамнезе и нарушениями функции тромбоцитов по результатам всех лабора торных данных (за исключением результатов, полученных на системе PFA-100®) и на основании истории приема соответствующих медицинских препаратов. 250 пациентам, у которых до операции были выявлены повышенные значения СТ по Col/EPI, было назна чено лечение DDAVP до операции, после чего их кровь снова была проанализирована с помощью кассет Col/EPI. У 229 (91,6%) пациентов показатель СТ по Col/EPI вернулся в пределы референтного диапазона для данной лаборатории. После лечения DDAVP потребность в переливании крови для этих пациентов не отличалась значительным образом от потребностей остальных 5393 пациентов, не имевших в анамнезе кровотечений и обладавших нормальным первичным гемостазом. В сходном исследовании’* 5102 пациен тов у 317 до операции были выявлены отклонения в гемостазе, причем у 311 наблюдались увеличенные значения СТ при анализе с помощью кассеты Col/EPI. Никому из этих пациентов до операции DDAVP не назначался. Частота переливаний фови, связанных с проведением операции, у этих пациентов быпа зна чительно выше (р < 0,001) у этих пациентов, чем у тех (п = 4785), у которых СТ по Col/EPI до операции был в предепах ожидаемых значений. Клинические характеристики для СТ, определенного с помощью системы PFA-100® и кассет Col/EPI и Col/ADP, показаны в таблице ниже’" . Чувствительность [%] Специфичность Г % 1 PPV [%] NPV [%] Col/EPI 33.9 99,3 91.7 89.6 Col/ADP 19,9 99.4 86.5 86,6 Значения были получены с использованием референтных интервалов, установленных исследователями, которые отличаются от тех. что приведены в разделе «Ожидаемые значения». B4170G20C0506 (214) SD/ST 1 1 Издано в сентябре 2010 года --- стр. 13 --- Предоперационная коррекция увеличенных значений СТ в результате лечения DDAVP, в особенности при определении этого параметра с помощью кассеты Col/EPI, может стать источником полезной информации при организации переливания крови для пациентов, подвергающихся разного рода плановым операциям. Dade, INNOVANCE и PFA-100 — торговые марки компании Сименс Хелскеа Диагностике. Аспирин — торговая марка компании БАЙЕР. Си м енс Х е лске а Диагностике Продукте ГмбХ Э м и л ь ‘ф о н-Беринг-Ш тр . 76 350 4 1 М арбург/Германия С € B4170G20C0506 (214) SD/ST 1 2 Издано в сентябре 2010 года /i --- стр. 14 --- Б и б л и о г р а ф и я 1 . Bick R. Platelet function defects: a clinical review. Semin Thromb Hemost 1992;18:167-85. 2. Kratzer MAA, Bom GVR Sim ulation of prim ary haem ostasis in vitro . Haenrostasis 1985;5:357-62. 3. Kratzer MAA, Bellucci S, Caen JP. Detection of abnormal platelet function w ^ ith an in vitro model of primary hemostasis. Haemostasis 1985;15:363-70. 4. Bom GVR. Aggregation of blood platelets by adenosine diphosphate and its reversal. Nature 1962;194:927-9. 5. Kundu SK, Meiimann EJ, Sio R, et al. Characterization of an in vitro platelet function analyzer, PFA-100. Clin AppI Thromb Hemost 1996;2:241-9. 6. MacIntyre DE, Hoover RL, Smith M, et al. Inhibition of platelet function by cis-unsaturated fatty acids. Blood 1984;63:848-57. 7. Driss F, Vericel E, Lagarde M, et al. Inhibition of platelet aggregation and thromboxane synthesis after intake of small amount of icosapentaenoic acid. Thromb Res 1984;36:389-96. 8. Schick PK. Megakaryoryte and platelet lipids. In: Colman RW, Hirsh J, Marden VJ, Salzman EW, eds. Hemosta sis and Thrombosis; Basic Principles and Clinical Practice, 3rd ed., Philadelphia: JB Lippincott Co., 1994:574-89. 9. Вбск M, de Haan J, Beck KH, et al. Standardisation of the PFA-100® Platelet Function Test in 105 mmol/L buff ered citrate: effect of gender, smoking, and oral contraceptives. Br J Haematol 1999;106:898-904. 10. Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI). Defning, establishing, and verifying reference intervals in the с 1 1 п ю а 1 laboratory; approved guideline - third edition. CLSI document C28-A3 (ISBN 1-56238-€82-4).CLSI, 940 West Valley Road, Suite 1400, Wayne, PA 19087-1898 USA, 2008 . 11. Cariappa R. Hilhite TR, Parvin CA, Luchtman-Jones L. Comparison of PFA-100 and bleeding time testing in pediatric patients with suspected hemorrhagic problems. J Pediatr Hematol Oncol 2003;25:474-9. 12 Dean JA, Blanchette VS, Carcao MD, et al. von Willebrand disease in a pediatric-based population - Com parison of type 1 diagnostic criteria and use of the PFA-100® and von Willebrand factor/collagen-binding as say. Thromb Haemost 2000;84:401-9. 13. Lippi G, Manzato F, Franchini M, et al. Establishment of reference values for the PFA-100 platelet function analyzer in pediatrics. Clin Exp Med 2001; 1:69-70. 14 . Fressinaud E, Veyradier A, Sigaud M, et al. Therapeutic monitoring of von Willebrand disease: interest and limitsof a platelet function analyzer at high shear rates. Brit J Haematol 1999;106:777-83. 15. Koscielny J. Ziemer S. Radtke H, et al. A practical concept for preoperative identifcation of patients with im paired primary hemostasis. Clin AppI Thromb Hemo 2004;10:195-204. 16. Koscielny J, von Tempelhoff G-F, Ziemer S, et al. A practical concept for preoperative management of pa tients with impaired primary hemostasis. Clin AppI Thromb Hemo 2004;10:155-66. B4170G20C0506 (214) SD/ST 13 Издано в сентябре 2010 года --- стр. 15 --- INNOVANCE® PFA P2Y СМкЩЩЙМММр^ЙЯММ — информация, обновленная по сравнению с версией, выпущенной в декабре 2009 года Назначение прибора INNOVANCE® PFA P2Y представляет собой кассету с реагентами дня гроведения анализа с помощью сис темы PFA-100® и системы INNOVANCE® PFA-200, которая предназначена для определения наличия блока ды рецептора тромбоцитов P2Y12 у пациентов, получающих лечение антагонистами рецептора P2Y12. Для использования в клинической лаборатории с образцами человеческой крови, обработанными цитратами. Резюме и пояснения Система PFA состоит из прибора и кассеты для анализа, в которой процесс адгезии и агрегирования тром боцитов после повреждения сосуда воспроизводится в режиме in vitro-. М ет од INNOVANCE® PFA P2Y используется для определения факта дисфункции тромбоцитов, вызванной блокадой рецептора P2Y12. Принцип работы метода Системы PFA в сочетании с методом INNOVANCE® PFA P2Y могут обнаруживать блокаду АДФ-рецептора в небольших по объему образцах цельной крови, обработанной антикоагулянтом. INNOVANCE® PFA P2Y — это одноразовая кассета для анализа, предназначенная для работы с системой PFA; она состоит из большого количества встроенных узлов, включая капилляры, емкость для образца и биохимически активную мембрану с круговы м отверстием в центре. Обработанная цитратом цельная кровь забирается из емкости для образца по капиллярам и проходит через отверстие, таким образом, тромбоциты подвергаются действию значительной силы поперечного сопротивления потоку. Мембрана покрыта АДФ, физиологическим активным в отношении рецептора веществом, которое активирует тромбоциты посредством рецепторов, чувствительных к АДФ (глав ны м образом, P2Y1 и P2Y12). Чтобы повы сить качество диагностики, мембрана дополнительно покрыта каль цием в ионной форме и простагландином Е1 (PGE1). Перед началом анализа PFA на поверхность мембраны наносится «пусковой раствор», который растворяет три реагента: АДФ, кальций и PGE1. Во время анализа тромбоциты налипают на мембрану в условиях значительного сопротивления потоку. Затем, благодаря взаи модействию с мембраной и растворенными реагентами, они активируются, выпускают содержимое фанул и начинают собираться в агрегаты. Процесс агрегирования тромбоцитов ведет к тому, что в отверстии образу ется тромб, тем самым постепенно уменьшая, и, наконец, полностью прекращая поток крови. Системы PFA определяют время с момента начала анализа до полного перекрывания отверстия и выда ют результат в виде времени закрьп-ия (СТ). Параметр СТ является индикатором функционирования тромбоцитов в анализируемом образце цельной фови. На образование тромбоцитарного сгустка в систе мах PFA влияет малое количество и/или активность тромбоцитов в образце, пониженное содержание фактора фон Виллебранда в плазме и, кроме того, снижение гематокрита в процессе протекания образца через кассету. Реагенты Символ Предоставленные материалы ^ В 4 1 70-22 КАССЕТА 20| X аналитических кассет INNOVANCE® PFA P2Y Состав INNOVANCE® PFA P2Y: 20 мкг аденозин-5-дифосфата (АДФ), 5 нг простагландина Е1 (PGE1) и 125 м ю - кальция в ионной форме (в виде 431 мкг кальция дихлорида дигидрата (CaCh х 2 Н2О)). Предупреждения и предостережения 1. Для использования в диагностике in vitro. 2 . Со всеми образцами крови и ее компонентов следует обращаться так, как если бы они были заразны ми. Все образцы крови должны обрабатываться в соответствии с опытом надлежащей лабораторной практики и с использованием соответствующих мер предосторожности. 3. При зафузке в устройство подачи и выгрузке из него кассет, заполненных кровью, следует надевать средства защиты. 4. Запрещается разбирать кассету. 5. При вынимании кассеты из устройства подачи есть риск контакта с капельками крови. B4170G22C0502 (1199) SD/ST 2 Издано в сентябре 2010 года --- стр. 16 --- Подготовка кассеты к анализу (a) Упаковка с аналитическими кассетами должна прогреться до температуры от +15 до +25 °С, и только затем ее можно открывать. Это занимает около 15 минут. Вынув кассету, немедленно снова герметич но закройте упаковку. (b) Снимите и выбросьте полоску из фольги, которая находится в верхней части кассеты. Она служит защитой только от попадания пыли и мелких частиц. Ни на качество работы кассеты, ни на стабиль ность реагентов внутри нее неплотное прилегание этой фольги не повлияет. Примечание. Не пользуйтесь аналитической кассетой, если заметно, что верхняя за1цитная фоль га повреждена, или если она отсутствует. Выбросьте ее в соответствующий мусоросборник. (c) Поместите аналитическую кассету в систему PFA в положение А и протолкните, чтобы она прочно встала на место. (См. рисунок в разделе «Введение» соответствующего руководства по эксплуата ции/инструкции.) Стабильность и хранение Кассета INNOVANCE® PFAP2Y в неоткрытой упаковке стабильна при температуре от +2 до +8 °С до истечения срока годности, напечатанного на этикетке. После вскрытия упаковки аналитические кассеты стабильны в течение 3 месяцев при температуре от +2 до +8 °С. После того, как снят верхний слой фоль ги, кассета стабильна в течение 12 часов при температуре от +15 до +25 °С. Необходимые, но отсутствующие материалы 1. Система PFA-100® с программны м обеспечением версии 3.0 или вы ш е, или система INNOVANCE® PFA-200. 2. Пусковой раствор Dade® PFA, [N fi] В4170-50. 3. Вакуумированные пробирки для сбора крови или шприцы, содержащие 3,8%-ный (0,129 М) или 3,2%- ный (0,105 М) раствор цитрата натрия с буфером (1 часть антикоагулянта на 9 частей крови). 4. Автоматические пипетки, способные отмерять до 800 мкл раствора. Подробнее см. в инструкции/руководстве по эксплуатации для системы PFA. Образцы Сбор образцов и обращение с ними Все анализы на функциональные качества тромбоцитов сильно зависят от правильного метода взятия образца крови. Венепункцию следует выполнять иглой калибра 21G или более крупной (20G или 19G). Кровь отбирают непосредственно в вакуумированную пластиковую пробирку или пробирку из стекла с силиконовым по крытием, или в шприц, содержащий 3,8%-ный (0,129 М) или 3,2%-ный (0,105 М) буферизированный рас твор цитрата натрия (1 часть антикоагулянта на 9 частей крови). Использование цитрата натрия без добавки буфера в качестве антикоагулянта не рекомендуется. Важно! После взятия образца перемешайте его и антикоагулянт, осторожно переворачивая пробирку вручную 3 или 4 раза. Если в процессе взятия образца вена спалась или ток крови прерывался, выбросьте такой образец. Образцы следует поставить на хранение; если их не перемещать с места на место, то при температуре от +15 до +25 °С они стабильны в течение 4 часов. Метод отбора образца (способ вене пункции и концентрация цитрата) должны быть одинаковы для всех образцов. Процедура Загрузка образца Следующие действия должны выполняться последовательно без пауз между ними: (a) 3-4 раза осторожно переверните пробирку вручную и перемешайте образец. Положив рабочую кассету прибора с заправленной в нее аналитической кассетой на плоскую поверхность, отберите пипеткой 800 мкл крови и влейте пробу в меньшее по размеру отверстие (отверстие емкости для образца) на аналитической кассете, осторожно выпуская кровь вдоль одной из внутренних поверхностей. Тем са мым уменьшается возможность попадания в емкость с образцом пузырьков воздуха. Примечание. Системы PFA не могут обнаруживать пузырьки воздуха в кассете для анализов. (b) Вставьте рабочую кассету с заправленной в нее аналитической кассетой в положение А инкубацион ного отсека устройства PFA, при этом рабочая кассета должна быть заподлицо с поверхностью уст ройства подачи проб. Не надавливайте на отверстие емкости для образца. (c) Начните анализ. B4170G22C0502 (1199) SD/ST 3 Издано в сентябре 2010 года и --- стр. 17 --- Процедура анализа Анализ с помощью кассеты INNOVANCE® PFA P2Y выполняется исключительно в положении А системы PFA. Положение В использовать запрещается! • Проведите однократный анализ при помощи кассеты INNOVANCE® PFA P2Y в положении А в системе PFA. Если время закрытия отверстия в кассете INNOVANCE® PFA P2Y, полученное в этом первоначальном анализе, превышает пороговое значение, то считается, что блокада рецепторов P2Y12 тромбоцитов продемонстрирована (также см. раздел «Офаничения процедуры»). Если время закрытия отверстия в кассете INNOVANCE® PFA P2Y, полученное при первоначальном анализе, ниже или равно пороговому значению, повторите анализ с тем же самым образом крови в положении А устройства PFA, соблюдая инструкции, содержащиеся в подпункте «Загрузка образца». Если время закрытия отверстия в кассете INNOVANCE® PFA P2Y, полученное в повторном анализе, превышает пороговое значение, то считается, что блокада рецепторов P2Y12 тромбоцитов продемон стрирована (также см. раздел «Ограничения процедуры»). Если при повторном анализе время закрытия отверстия кассеты INNOVANCE® PFA P2Y снова будет меньше или равно пороговой величине, то считается, что блокада рецепторов P2Y12 не обнаруживается. Вся процедура анализа в целом описывается следующей блок-схемой: Уничтожение использованной кассеты для анализов Осторожно выньте кассету из устройства подачи образцов. Придерживая кассету одной рукой, выньте из нее часть с реагентами, осторожно потянув ее нижнюю часть в сторону до тех пор, пока она не отщелкнется. Кас сету с реагентами выбросьте в соответствующую емкость для биологически опасных отходов. Контроль качества Система В начале каждой смены выполняйте пункт «Самотестирование» в разделе «Меню технического обслу живания». См. соответствующие инструкции/руководства по эксплуатации систем PFA. Кассета Общие показатели качества работы Для целей проверки КК 1 уровня рекомендуется подобрать контрольную группу доноров. Для отбора лиц в такую группу можно использовать аналитическую кассету Dade® PFA Collagen/EPI (Col/EPI). До норы системы КК, прошедшие отбор, должны иметь время закрытия отверстия в кассете Col/EPI вблизи среднего значения в референтном диапазоне, установленном лабораторией, и их результаты должны отличаться приемлемой воспроизводимостью. В4170G22C0502 (1199) SD/ST 4 Издано в сентябре 2010 года --- стр. 18 --- Следующая процедура является примером того, как отбирать доноров в контрольную группу. 1. Каждый из доноров не должен иметь каких-либо известных заболеваний, влияющих на функцию тром боцитов, и не должен принимать лекарства, оказывающие такое влияние. 2. Образец крови, взятый от каждого из доноров, стабилизируется 3,8%-ным раствором цитрата натрия и анализируется только при помощи кассеты Col/EPI дважды. 3. Донора можно считать прошедшим отбор, если среднее по двум распечатанным результатам значе ние времени закрытия для него составляет 102 - 146 секунд, а коэффициент вариации не превышает 15% или равен ему. (Примечание. Этот диапазон был определен по среднему значению параметра СТ ± 22 секунды для образцов крови, собранных в пробирки с 3,8% раствором цитрата натрия, взятых у 127 очевидно здоровых взрослых в многоцентровом исследовании, которое проводилось в Герма нии, (см. также раздел «Ожидаемые значения» в инструкции по использованию, прилагаемой к кассе там «Dade® PFA Collagen/EPI и Dade® PFA Collagen/ADP».) Примечание. Может потребоваться изменение приемлемого диапазона в зависимости от среднего значе ния СТ, установленного отдельными лабораториями для здоровых взрослых. Лабораториям рекоменду ется проводить процедуру контроля качества таким образом, чтобы она соответствовала установленным программам контроля качества и отвечала требованиями местного и/или федерального законодательства или требованиям аккредитации. В рамках регулярного контроля качества отбирайте образец цельной крови у одного из представитепей кон трольной фуппы доноров раз в неделю в период проведения таких анализов или в любое время, когда уч реждение решит проверить качество работы указанной системы. Анализируйте этот образец дважды мето дом INNOVANCE® PFA P2Y в положении А на системе PFA. Кассета и метод INNOVANCE® PFA P2Y счита ются полностью функциональными, если оба значения СТ будут меньше или равны пороговому значению. Если одно или оба значения СТ превышают пороговую величину, повторите анализ с образцом, взятым у второго донора из контрольной группы лаборатории. Если и в этом случае одно или два значения СТ будут превышать пороговую величину, обратитесь за помощью в компанию Сименс Хелскеа Диагностике. Если оба результата пробы, взятой от второго донора, будут меньше или равны пороговому значению параметра СТ, то следует предположить, что у первого донора имело место нарушение функции тромбо цитов или же он принимал какие-либо препараты, воздействующие на эту функцию. Такого донора следу ет исключить из контрольной фуппы для проверки метода INNOVANCE® PFA P2Y. Результаты Результаты метода INNOVANCE® PFA P2Y в системах PFA выдаются в виде параметра «время закры тия» (СТ) в секундах. После проведения анализа методом INNOVANCE® PFA P2Y полученное значение СТ указывает на то, имеются ли в исследуемом образце тромбоциты с блокированными рецепторами P2Y12. В целом, получаемые по методу INNOVANCE® PFA P2Y значения времени закрытия S 106 секунд считаются «нормальными», а те, что превышают 106 секунд — «аномальными». Появление у пациентов, получающих антиагрегантную терапию, результатов по методу INNOVANCE® PFA P2Y, превышающих пороговое значение, может указывать на необходимость дальнейших диагностических исследований. Результаты следует всегда оценивать в сочетании с клинической историей, проявлениями забо левания и другими результатами лабораторных анализов (например, с данными общего анализа крови или с результатами агрегометрии). В тех случаях, когда результаты, полученные методом INNOVANCE® PFA P2Y, расходятся с результатами клинического обследования, необходимо выпопнить дополнительные анализы. Ограничения процедуры 1. Наличие в образце микротромбов или мелких частиц, попавших туда из окружающей среды, может отрицательно сказаться на результатах анализа или даже привести к отмене процедуры из-за обнару жения препятствия току крови. 2. Значение СТ выше пороговой величины также может означать, что снижение функциональной способ ности тромбоцитов обусловлено аномально низким гематокритом (менее 28%) и/или аномально низким количеством тромбоцитов (менее 93 000/мкл). Для образцов с гематокритом выше 50% или количест вом тромбоцитов свыше 390 000/мкл оценки времени СТ не проводилось. 3. Для оценки состояния функции тромбоцитов у пациентов с врожденными расстройствами первичного гемостаза, такими как недостаточность фактора фон Виллебранда (VWD) или с тяжелыми врожденны ми расстройствами тромбоцитарной функции, такими как тромбастения Гланцманна и синдром Берна- ра-Сулье, метод INNOVANCE® PFA P2Y не применялся. Метод INNOVANCE® PFA P2Y не предназна чен для использования у пациентов с этими типами врожденных заболеваний. 4. Качественные характеристики метода INNOVANCE® PFA P2Y не были установлены для других ве ществ, воздействующих на первичный гемостаз или функциональные свойства тромбоцитов, за исклю чением антагонистов рецепторов P2Y12 и ацетилсалициловой кислоты (ASA). 5. Метод INNOVANCE® PFA P2Y генерирует результаты, основываясь на блокаде рецепторов P2Y12 тромбоцитов. Корреляции с клиническими результатами лечения не устанавливались. B4170G22C0502 (1199) SD/ST 5 Издано в сентябре 2010 года Л --- стр. 19 --- 6. Результаты проверки всегда следует истолковывать с учетом медицинской истории пациента, клини ческой картины заболевания и других фактов. Мешаю1цие вещества 1. На результаты анализа может повлиять гемолиз. Лизис эритроцитов, на который указывает наличие свободного гемоглобина, может повлиять на параметр СТ PFA по двум причинам: 1) путем уменьшения гематокрита и 2) за счет выброса АДФ. Поэтому использовать гемолизированную кровь для анализа PFA не рекомендуется. 2. Известно, что определенные жирные 1«слоты и липиды, присутствующие в различных продуктах пита ния, подавляют функцию тромбоцитов . Нейтральные липиды, такие как холестерин, в целом не влия ют на функцию тромбоцитов 3. Хотя такие оценки не проводились, хорошо известно, что антагонисты рецепторов GPIIb/llla, а также десмопрессина ацетат (1-деамино-8-0-аргинина вазопрессин, DDAVP) оказывают на принцип действия метода PFA мешающее влияние при использовании аналитических кассет данного типа.° ^ 4. Исследование воздействия друшх классов обы чно используемы х веществ и препаратов на время закр ь ггу1Я отверстия в кассетах INNOVANCE® PFA P2Y бы ло проведено с использованием терапевтически обоснованны х концентраций этих веществ и препаратов (этанол, каптоприл, лцдокаин, гепарин, варфарин, флуоксетин, кате- хин, альфа-токоферол, цилостазол, дипиридамол, пропанолол, теофиллин, дилтиазем, гидрохлоротиазид, бе- таметазон, ибупрофен, ацетаминофен, правастатин, стрептокиназа, L-тироксин и нитроглицерин). Из этих пре паратов только теофиллин и стрептокиназа продемонстрировали мешающее влияние на время закрьпия от верстия по методу INNOVANCE® PFA P2Y, выражавшееся в его значительном увеличении. При наличии стрептокиназы метод INNOVANCE® PFA P2Y использовать нельзя. Теофиллин влияет на результаты метода INNOVANCE® PFA P2Y при концентрации в крови, превышающей 5 мг/мл. Ни один из других исследованны х препаратов не оказал воздействия на время закрытия отверстия в кассете INNOVANCE® PFA P2Y. Ожидаемые значения Клинические исследования с участием лиц, принимавших ASA — до и после приема 134 очевидно здоровых человека, не имевших ранее случаев или лабораторных признаков дисфункции тромбоцитов, вызванной внутренними дефектами этих клеток, синдромом VWD или воздействием ингиби торов функции тромбоцитов, были включены в это одноцентровое клиническое исследование. Определя лось время закрытия для образцов крови, собранных в пробирки с 3,2%-ным и 3,8%-ным раствором цит рата натрия с добавлением буфера; образцы отбирались до приема 300 мг аспирина и 24 часа спустя, после чего значения СТ сравнивались и оценивалось воздействие аспирина. Непараметрический статистический анализ показал наличие лишь статистически значимого, но клиниче ски пренебрежимо малого воздействия приема 300 мг аспирина на время закрытия в методе INNOVANCE® PFA P2Y для образцов крови, собранных с применением 3,2%-ного и 3,8%-ного буферизо ванного раствора цитрата натрия. Клинически исследования употребления клопидофела (до и после приема) у пациентов с сердечно-сосудистыми заболеваниями В этом многоцентровом клиническом исследовании участвовали пациенты с сердечноч;осудистыми заболевания ми, которы е не принимали ранее клопидогрел, но теперь он бы л им прописан. У этих лиц не бы ло ранее зарегист рированных случаев или лабораторных признаков дисфункции тромбоцитов, вы званной вро>кденны м и дефектами тромбоцитов, синдромом VWD или воздействием других ингибирующих препаратов, кроме ASA. Те из пациентов, которы е получили ударную дозу клопедогрела, составляющую 600 мг, прошли анализ по методу INNOVANCE® PFA P2Y в период от 6 до 24 часов после приема клолидогрела. Кроме того, изучались пациенты с сердечно сосудисты ми заболеваниями, получавшие по 75 м г клолидогрела на протяжении не менее чем 7 дней. Определение пороговой величины В исследование по определению пороговой величины были включены 122 пациента. Пороговое значение было получено отдельными вычислениями 95%-ногопроцентиля для времени закрытия для тех пациен тов, которые получали ударные дозы клопидогрела, при этом для определения использовались образцы крови, взятые от них до приема дозы с использованием 3,2%-ного и 3,8%-ного буферизованного раствора цитрата натрия. Не было выявлено статистического отличия между 95-ными процентилями для времени закрытия при использовании 3,2%-ного и 3,8%-ного раствора цитрата натрия. Поэтому в качестве порого вого значения были выбраны величины, попадающие в 95%-ный процентиль времени закрытия для 122 пациентов с сердечно-сосудистыми заболеваниями, чью кровь отбирали с использованием 3,8%-ного раствора цитрата натрия при анализе методом INNOVANCE® PFA P2Y: 106 с Анализ 95% -НОГО процентиля времени закрытия по образцам, взятым у 134 очевидно здоровых лиц до и после приема ими 300 мг ASA с применением 3,2%-ного и 3,8%-ного раствора цитрата натрия также не показал существенных статистических отличий от определенной ранее пороговой величины. Таким образом, пороговое значение справедливо для: • образцов, отбираемых с применением как 3,2%-ного, так и 3,8%-ного буферизованного раствора цит рата натрия; • лиц. не принимающих ASA, и принимающих это вещество; • очевидно здоровых лиц и пациентов с сердечно-сосудистыми заболеваниями. B4170G22C0502 (1199) SD/ST 6 Издано в сентябре 2010 года --- стр. 20 --- Отдельные показатели работы Прецизионность Внутрисерийный коэффициент вариации Для определения воспроизводимости (внутрисерийной) было рассчитано, что коэффициент вариации (CV) для двух последовательных измерений с помощью кассеты INNOVANCE® PFA P2Y в положении А на системе PFA-100® был равен 10,0% (среднее значение CV для 525 последовательных измерений). Межсерийный коэффициент вариации Образцы, взятые у 20 очевидно здоровых добровольцев с использованием 3,2%-ного буферизованного раствора цитрата натрия, были дважды проанализированы с помощью кассеты INNOVANCE® PFA P2Y в положении А установки PFA-100® 30 минут спустя (1 серия) и 240 минут спустя (2 серия) после вене пункции. Среднее значение по этим двум сериям было использовано для расчета среднего коэффициента вариации между двумя сериями, который составил 7,7%. Определение наличия блокады рецептора P2Y12 с использованием 3,2%-ного буфери зованного раствора цитрата натрия Анализ образцов, взятых у пациентов в срок от 6 до 24 часов после ударной дозы в 600 мг клопидогрела, и образцов, взятых у пациентов, получавших 75 мг клопидогрела на протяжении не менее чем 7 дней, проводился отдельно. Наличие или отсутствие блокады рецептора P2Y12 определялось по ранее опре деленной пороговой величине и алгоритму анализа для метода INNOVANCE® PFA P2Y. N INNOVANCE® PFA P2Y ОТ < 106 с (нормальное) INNOVANCE* PFA P2Y СТ > 106 С (аномальное) Пациенты в срок от 6 до 24 часов после ударной дозы клопидогрела, рав ной 600 мг 87 26 (29,9 %) 61 (70,1 %) Пациенты, получающие 75 мг клопидогрела в день (> 7 дней) 67 24 (35,8 %) 43 (64,2 %) Определение наличия блокады рецептора P2Y12 с использованием 3,8 %-ного буфери зованного раствора цитрата натрия Анализ образцов, взятых у пациентов в срок от 6 до 24 часов после ударной дозы в 600 мг клопидогрела, и образцов, взятых у пациентов, получавших 75 мг клопидогрела на протяжении не менее чем 7 дней, проводился отдельно. Наличие или отсутствие блокады рецептора P2Y12 определялось по ранее опре деленной пороговой величине и алгоритму анализа для метода INNOVANCE®PFA P2Y. N INNOVANCE® PFA P2Y СТ < 106 С (нормальное) INNOVANCE* PFA P2Y СТ > 106 с (аномальное) Пациенты в срок от 6 до 24 часов после ударной дозы клопидофела, рав ной 600 мг 84 15(17,9 %) 69 (82,1 %) Пациенты, получающие 75 мг клопидофела в день (> 7 дней) 65 12(18,5 %) 63 (81,5%) Распределение времени закрытия отверстия для метода INNOVANCE® PFA P2Y для одного и того же пациента до и после приема клопидогрела показано на следующих гистограммах (линия означает порого вое значение). B4170G22C0502(1199)SD/ST 7 Издано в сентябре 2010 года --- стр. 21 --- 3,2% -ный буф еризованный раствор цитрата натрия Д о клопидогрела П о сл е клопидогрела (п = 10 9) (п = 109) 3,6% -ный буферизованный раствор цитрата натрия Д о клопидогрела П о сл е клопидогрела (п = 1 0 9 ) (п = 109) Диагностическая специфичность Специфичность метода INNOVANCE® PFA P2Y на основании определенного порогового значения опре деляемого параметра и рекомендованного алгоритма проведения анализа была определена по результа там анализа образцов, взятых у пациентов, не принимавших клопидогрел, и у очевидно здоровых лиц 24 часа спустя после приема ими 300 мг ASA: 3,2%-ный буферизованный раствор цитрата натрия 3,8 %-ный буферизованный раствор цитрата натрия Специфичность (пациен ты) 93,7 % (N = 95) 87,5 % (N = 80) Специфичность (здоро вые участники) 98,6 % (N = 134) 91,8% (N = 134) Исследование соответствия Результаты, полученные от 112 пациентов 6 или 24 часа спустя после приема ударной дозы клопидофела > 300 мг или от пациентов, получавших по 75 мг клопидофела в течение не менее чем 7 дней, были ис пользованы для статистического анализа соответствия между методом INNOVANCE® PFA P2Y и методом агрегометрии цельной крови (WBA) с использованием 10 мкМ АДФ. Используя содержащееся в инструкции-вкладыше к препарату PLAVIX® заявление об эффективности препарата в качестве рекомендации, наличие блокады рецепторов P2Y12 у пациентов, принимавших ударную дозу клопидогрела (300 или 600 мг) за 6 или 24 часа до количественного анализа, или у пациен тов, принимавших по 75 мг клопидогрела на протяжении не менее чем 7 дней, по методу WBA определя лось как уменьшение записываемого агрегационного сигнала более чем на 40%. Для тех же образцов при анализе методом INNOVANCE® PFA P2Y для определения факта наличия блокады рецепторов P2Y ис пользовалось ранее установленное значение пороговой величины, равное 106 с, и алгоритм выполнения анализа INNOVANCE® PFA P2Y. В4170G22C0502 (1199) SD/ST 8 Издано в сентябре 2010 года --- стр. 22 --- в следующей ниже попарной таблице показаны расчеты, проделанные по результатам для обоих методов определения блокады рецепторов P2Y: А jS S( В g Q Q I | е 5 ' ^ i INNOVANCE® PFA P2Y л в Нет Да Нет 30 9 39 Да 16 57 73 46 66 112 Применение согласительной статистики к указанной выше попарной таблице позволяет вычислить коэф фициент каппа, равный 0,53, что указывает на умеренную согласованность обоих методов’^ . Dade, INNOVANCE и PFA-100 — торговые марки компании Сименс Хелскеа Диагностике. Plavix — торговая марка компании Санофи-Авенсис Бристоль Майерс Сквибб. С и м енс Х е лске а Диагностике Продукте ГмбХ Э м и ль-ф о н-Б ер и нг-Ш тр . 76 350 4 1 М арбург/Германия у у у у у у .? (^ т ? п ? .9 9 т ^ < Д й я п 9 ? ^ < с 5 С € B4170G22C0502 (1199) SD/ST 9 Издано в сентябре 2010 года --- стр. 23 --- Б и б л и о г р а ф и я 1 . Kratzer МАА, Born GVR. Simulation of primary hemostasis in vitro. Haemostasis 1985; 5:357-62. 2. Kratzer MAA, Beiiuccl S, Caen JP. Detection of abnormal platelet function with an in vitro model of primary hemostasis. Haemostasis 1985;15:363-70. 3. Bom GVR. Aggregation of blood platelets by adenosine diphosphate and its reversal. Nature 1962;194:927-9. 4. Kundu SK, Heilmann EJ, Slo R, etal.. Characterization of an in vitro platelet function analyzer, PFA. Clinical Appli cations In Thrombosis/Hemostasis 1996;2:241-9. 5. MacIntyre DE, Hoover RL, Smith M. et al. Inhibition of platelet function by cis-unsaturated fatty acids. Blood 1984;63:848-57. 6. Driss F, Vericel E, LagardeM.etal. Inhibition of platelet aggregation and thromboxane synthesis after intake of sm all amount of icosapentaenoic acid. Thromb Res 1984;36:389-96. 7. Schick PK. Megakaryoryte and platelet lipids. In: Cdman RW, Hirsh J, Marden VJ, Salz-man, EW. eds. He mostasis and Thrombosis; Basic Principles and Clinical Practice, 3rd ed. Philadelphia: JB Lippincott Co, 1994:574-89. 8. Stegnar M, Mojca Bozic M, Sollner M, et al. Utility of PFA closure time vs. optical aggre-gometry In assessing the effcacy of platelet membrane glycoprotein llb/llla antagonists in vitro. Clin Chem Lab Med 2007;45:1542-8. 9. Fressinaud E. Veyradier A, Sigaud M. et al. Therapeutic monitoring of von Willebrand disease: interest and limits of a platelet function analyzer at high shear rates. Brit J Haematol 1999;106:777-83. 10. Kosdelny J, Ziemer S, Radtke H, et ai. A practkal concept for pfeoperative k Jen tifcatio n of patients with im paired prim ary hemostasis. Clin AppI Thrombosis/Hemostasis 2004;10:195-204. 11 . PLAVIX® prescribing information. Revised version May 2009, Bristol-Myers Squibb/Sanofi Pharmaceuticals Partnership. 12 Landis JR, Koch GG. The measurement of observer agreenfient for categorical data. Bbmetrics 1977; 33:159-74. B4170G22C0502 (1199) SD/ST 10 Издано в сентябре 2010 года Л --- стр. 24 --- S I E M E N S Dade® Пусковой раствор для IPFAIPFATRIGGERI Предполагаемое использование Вспом огательное средство д ля определения н али чи я д исф ункции тромбоцитов в обрабо танной цитратами цельной человеческой крови Реагенты П р а д о с т а м м н н ы # м а т е р и а л ы iP F A r m iG G E ^ 0 В 4 1 7 О -5 О 3 X 1 1 мл. P F A I t R IG G E R I. D a d e * Пусковой раствор д л я P F A С о с т а в D ad e ® Пусковой раствор д л я P F A : изотонический ф изиоло гический раствор (0 ,9 % ) П р ед уп р еж д е н и я и п р е д о с т а р е ю н и я Д л я использования в диагностике in vitro. С п б м л ь и о с т ъ и х р ан е н и е С таб ильно сть пои тем пературе от * 1 6 до *26 X : см . срок }фанения на этикетке. С таб ильно сть в устройстве: 60 дней. Пусковой раствор D ad e O P F A с л е д уе т выбросить как непригсдны й, если он помутнел или в нем присутствует осадок. Н е о б х о д и м ы е , н о о т с у т с т в у ю щ и е м а т е р и а л ы С и сте м а P F A Д о по лнительн ы е и расходные м атериалы , описанны е в руководстве / инструкции по эксплуа тации систем ы P FA. Процедура Пусковой раствор D a d e * P F A можно испо льзо вать вне зависим ости от типа а н а л и т т е с к и х кассет и номера партии Б оле е подробную инф орм ацию отно сительно принципов аналитиче ской процедуры, требуемых д ополн ите льны х м атериалах, расчете результатов анали за, внутреннем контроле качества и конкретных характеристиках качества работы анализов моямо найти в Инструкциях по эксплуатации аналитически х кассет и в соответствую щ ей инструкции/руководству по эксплуатации систем ы P FA . Dade является торговой маркой кампании С и м е н с Х е л ск е а Диагностике J C m m b h c Х в л с м а Д и а г н о с т и с с Г ^ ю д у к т с Г м б Х Э м и л ь ч )> о н .е « р м -Щ т р 7 в 3 5 0 4 1 М а р е у р г /Г « р ш п < я . r - iii* Си м енс Х е л ск е а Диагностике Инк.. Дистрибью тор в С Ш А ^ С€ И здано в (ж тя б р * 2010 года B4170G50E0501 (1176)FB 1 --- стр. 25 --- Расшифровка символов ИР П сстт-ш -оо ■ Не использовать повторно Срок годности Пакетная обработка |R EF| Номер по каталогу Внимание, обратитесь к сопроводительным документам m l Изготовитель Ik IrepI Уполномоченный представитель в Европе i с и А С € Содержит достаточное количество реагентов для <п> анализов Медицинское устройство для диагностики In V itro Температура См. инструкцию по пользованию Нестерильно Символ СЕ Содержание Объем восстановленного раствора Уровень 2 0 0 6 -0 9 E F IG S P 02010 С и м е н с Х е л с к е а Д и а гн о с т и к е П р о д у к т е Г м б Х . В с е п р а в а з а щ и щ е н ы B4170G50E0501 (1176)FB 2 г