--- стр. 1 ---
«УТВЕРЖДАЮ»
Заместитель генерального директора
по научно-производственной деятель
ности федерального государственного
бюджетного учреждения «Центр стра
тегического планирования и управле
ния медико-биологическими рисками
здоровью» Федерального^ 4мм^^ио-
логического агентстра^^^!^^^ЖП»
ФМБА Росси!
« »
ИНСТРУКЦИЯ по ПРИМЕНЕНИЮ
комплект реагентов для экстракции РНК/ДНК
из биологического материала
«АмплиТест® Магно-Сорб-Комбо»
м1
ФГБУ «ЦСП» ФМБА России,
119121, Российская Федерация,
г. Москва, Погодинская ул., д.10 стр. 1 1У0
--- стр. 2 ---
СПИСОК СОКРАЩ ЕНИЙ.............................................................................................................3
НАЗНАЧЕНИЕ................................................................................................................................. 3
ОБЛАСТЬ ПРИМЕНЕНИЯ........................................................................................................... 3
ПРИНЦИП МЕТОДА......................................................................................................................4
СОСТАВ И КОМПЛЕКТНОСТЬ..................................................................................................5
АНАЛИТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ..................................................................................5
Интерферирующие вещества и ограничения по использованию проб
исследуемого материала............................................................................................................ 6
ВОСПРОИЗВОДИМОСТЬ........................................................................................................... 9
МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ И СВЕДЕНИЯ ОБ УТИЛИЗАЦИИ ............................11
ДОПОЛНИТЕЛЬНЫЕ МАТЕРИАЛЫ И ОБОРУДОВАНИЕ................................................14
ВЗЯТИЕ, ТРАНСПОРТИРОВАНИЕ И ХРАНЕНИЕ ИССЛЕДУЕМОГО
МАТЕРИАЛА................................................................................................................................. 17
ПОДГОТОВКА ИССЛЕДУЕМОГО МАТЕРИАЛА К ЭКСТРАКЦИИ РНК/ДНК ..............19
ЭКСТРАКЦИЯ РНК/ДНК ИЗ ИССЛЕДУЕМЫХ ОБРАЗЦОВ.............................................20
СРОК ГОДНОСТИ. УСЛОВИЯ ТРАНСПОРТИРОВАНИЯ И ХРАНЕНИЯ ...................25
ГАРАНТИЙНЫЕ ОБЯЗАТЕЛЬСТВА ИЗГОТОВИТЕЛЯ....................................................26
СИМВОЛЫ, ИСПОЛЬЗУЕМЫЕ В ПЕЧАТНОЙ ПРОДУКЦИИ..........................................27
ОГЛАВЛЕНИЕ
стр. 2 из 27
--- стр. 3 ---
т
список СОКРАЩЕНИИ
В настоящей инструкции применяются следующие сокра
щения и обозначения:
вко - внутренний контрольный образец
ДНК - дезоксирибонуклеиновая кислота
НК - нуклеиновая кислота (ДНК/РНК)
око - отрицательный контрольный образец
ОТ-ПЦР - обратная транскрипция и ПЦР-амплификация
пко - положительный контроль экстракции РНК/ДНК
пив - потенциально интерферирующие вещества
ПЦР - полимеразная цепная реакция
РНК - рибонуклеиновая кислота
РУ - регистрационное удостоверение
Ф ГБУ«цеп»
ФМБА России
- федеральное государственное бюджетное учреждение
«Центр стратегического планирования и управления медико
биологическими рисками здоровью» Федерального медико-био
логического агентства
НАЗНАЧЕНИЕ
Комплект реагентов для экстракции РНК/ДНК из биологи
ческого материала «АмплиТест® Магно-Сорб-Комбо», далее -
комплект реагентов «АмплиТест® Магно-Сорб-Комбо», пред
назначен для экстракции (выделения) тотальной РНК/ДНК из
биологического материала человека (мазков со слизистой
HOCO- и ротоглотки, мокроты, плазмы крови, фекалий, мочи) в
целях исследования полученных образцов методом амплифи
кации нуклеиновых кислот.
Функциональное назначение - вспомогательное средство в
диагностике.
Популяционные, демографические аспекты применения
медицинского изделия
Комплект реагентов используется для экстракции
РНК/ДНК из биологического материала, полученного от лиц
вне зависимости от популяционной, демографической принад
лежности к какой-либо расе или народности.
ОБЛАСТЬ ПРИМЕНЕНИЯ
Клиническая лабораторная диагностика.
СТр. 3 ИЗ 27
--- стр. 4 ---
N
ПОКАЗАНИЯ И ПРОТИВОПОКАЗАНИЯ К ПРИМЕНЕНИЮ
Комплект реагентов является вспомогательным сред
ством в клинической лабораторной диагностике и использу
ется на преаналитическом этапе анализа для экстракции то
тальной РНК/ДНК из биологического материала человека
(мазков со слизистой носо- и ротоглотки, мокроты, плазмы
крови, фекалий, мочи) с целью последующего исследования
методом амплификации нуклеиновых кислот.
Противопоказания к применению - нарушение целостности
упаковки, несоответствие внешнего вида реагента описанию,
несоблюдение условий транспортирования и хранения со
гласно инструкции, истекший срок годности.
ПОТЕНЦИАЛЬНЫЕ ПОЛЬЗОВАТЕЛИ
К работе с комплектом реагентов допускаются только ме
дицинские работники, обученные методам молекулярной диа
гностики и правилам работы в клинико-диагностической лабо
ратории в установленном порядке (СанПиН 3.3686-21 «Сани
тарно-эпидемиологические требования по профилактике ин
фекционных болезней»; МУ 1.3.2569-09 «Организация работы
лабораторий, использующих методы амплификации нуклеино
вых кислот при работе с материалом, содержащим микроорга
низмы I-IV групп патогенности»).
ПРИНЦИП МЕТОДА
Принцип действия основан на лизисе клеток и денатура
ции клеточных белков с помощью раствора для лизиса в при
сутствии частиц магнетизированной силики (магнитного сор
бента). Растворенная ДНК/РНК связывается с частицами сор
бента, в то время как другие компоненты лизированного био
логического материала остаются в растворе и удаляются при
осаждении сорбента с помощью магнитной силы и последую
щих отмывок.
При последующем добавлении к магнитному сорбенту
элюирующего буфера происходит переход НК в раствор с по
верхности сорбента, который затем отделяется от раствора
магнитной силой.
стр. 4 ИЗ 27
--- стр. 5 ---
4 ß
СОСТАВ И КОМПЛЕКТНОСТЬ
Комплект реагентов выпускается в одном варианте испол
нения.
Состав:
Таблица 1 - «АмплиТест® Магно-Сорб-Комбо» вариант
100 - комплект реагентов для экстракции РНК/ДНК из биологи
ческого материала - включает:
Реагент Описание Объем,
мл
Количе
ство
Лизирующий буфер
Комбо
Прозрачная жидкость
от бесцветного до
серо-голубого цвета^
50 1 флакон
Буфер ОТ Прозрачная
бесцветная жидкость 1 1 про
бирка
Магнитный сорбент Суспензия
коричневого цвета 1 2 про
бирки
Раствор для отмывки
Комбо-1
Прозрачная
бесцветная жидкость 70 1 флакон
Раствор для отмывки
Комбо-2
Прозрачная
бесцветная жидкость 50 1 флакон
Элюирующий буфер Прозрачная
бесцветная жидкость 10 1 флакон
Комплект реагентов рассчитан на выделение РНК/ДНК из
100 образцов, включая контроли.
Комплектность:
• Комплект реагентов «АмплиТест® Магно-Сорб-Комбо»:
• Инструкция по применению;
• Паспорт качества.
АНАЛИТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
Для данного комплекта реагентов применимы следующие
характеристики:
Эффективность экстракции не менее 50 %.
Эффективность экстракции РНК оценивали как соотноше
ние концентраций РНК SARS-CoV-2 в образцах, содержащих
инактивированный штамм «ГК2020/1» коронавируса SARS-
При хранении при температуре от 2 до 8°С возможно образование осадка в виде кристаллов.
стр. 5 из 27
--- стр. 6 ---
CoV-2 с концентрацией 3x1 O'* копий/мл, прошедших экстрак
цию испытуемым комплектом реагентов, и исходной концен
трации (до экстракции) РНК SARS-CoV-2 препарата штамма
3 x 1 копий/мл в указанных образцах*.
Эффективность экстракции ДНК оценивали как соотноше
ние концентраций ДНК в образцах, содержащих штамм
Staphylococcus aureus subsp. aureus «АТСС 6538» в концен
трации 2x10^ копий/мл, прошедших экстракцию испытуемым
комплектом реагентов, и исходной концентрации ДНК препа
рата штамма 2x10^ копий/мл в указанных образцах**.
Примечания:
* При анализе с помощью системы для проведения капель
ной цифровой ПЦР «QX200™ Droplet Digital™ PCR System» и
термоциклера для амплификации нуклеиновых кислот «С1000
Touch Thermal Cycler» производства «Био-Рад Лабораториз,
Инк.», США (Р.У. № ФСЗ 2008/03399).
** При анализе совместно с набором реагентов «Ампли-
Сенс® MRSA-CKpHH-THTp-FL»2
Интерферирующие вещества и ограничения по использо
ванию проб исследуемого материала
Для контроля процесса исследования клинического мате
риала методом амплификации нуклеиновых кислот рекомен
дуется использовать внутренний контрольный образец (ВКО).
Если он предусмотрен в наборе для амплификации нуклеино
вых кислот, ВКО добавляется в каждый исследуемый и кон
трольный образец согласно инструкции по применению
набора реагентов для проведения амплификации. ВКО прохо
дит все стадии экстракции совместно с анализируемыми об
разцами. Результаты исследования ВКО должны соответство
вать заданным критериям валидности, указанным в инструк
ции по применению набора для проведения амплификации. В
2 Набор реагентов для выявления и количественного олределения ДНК метициллин-чувствитель-
ного и метициллин-резистентного Staphylococcus aureus, метициллин-резистентных коагулазонега-
тивных Staphylococcus spp. в биологическом материале методом полимеразной цепной реакции
(ПЦР) с гибридизационно-флуоресцентной детекцией «АмплиСенс® МРЗА-скрин-титр-Р1» произ
водства ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии Роспотребнадзора, РФ (Р.У. № ФСР 2012/13998).
стр. 6 из 27
--- стр. 19 ---
оттянув кожную складку. Для анализа отбирают первую пор
цию утренней мочи в количестве 15-25 мл в специальную ем
кость из полипропилена для сбора биологического материала,
с завинчивающейся или плотно защелкивающейся крышкой.
В случае если сбор мочи осуществляется в емкость без ре
агентов для консервации и стабилизации, допускается хране
ние и транспортирование образцов мочи до проведения пре
добработки;
- при комнатной температуре - в течение 6 часов;
- при температуре от 2 до 8 °С - в течение 1 суток;
- при температуре от минус 24 до минус 16 °С - в течение
1 недели;
- при температуре не выше минус 68 °С - длительно.
При осуществлении сбора мочи в емкость с транспортной
средой или реагентами для консервации и стабилизации, хра
нение образцов мочи до проведения предобработки прово
дить согласно инструкции к используемой емкости для сбора.
Допускается лишь однократное замораживание-оттаива
ние материала.
ПОДГОТОВКА ИССЛЕДУЕМОГО МАТЕРИАЛА К ЭКСТРАК
ЦИИ РНК/ДНК
Мазки со слизистой носо- и ротоглотки
Содержимое закрытой пробирки перемешать на вортексе
и центрифугировать в течение 5 с при 5 тыс об/мин на микро
центрифуге для удаления капель с внутренней поверхности
крышки пробирки.
Мокрота
Вязкая по консистенции мокрота подлежит обработке реа
гентом «МУКОЛИЗИН». С целью снижения вязкости в емкость
с мокротой добавляется реагент «МУКОЛИЗИН» в соотноше
нии объемов 2:1 (ориентируясь по градуировке емкости). При
необходимости увеличивают объем реагент «МУКОЛИЗИН»
до соотношения 5:1. После инкубации при комнатной темпера
туре до просветления мокроты (не более 20 минут) мокроту
используют для экстракции НК. При необходимости повтор
ного проведения остаток мокроты замораживают.
стр. 19 ИЗ 27
--- стр. 20 ---
Фекалии
В микроцентрифужную пробирку (объемом 1,5 мл) вносят
0,9 мл фосфатного буфера (или стерильного физиологиче
ского раствора). В каждую пробирку отдельным наконечником
с фильтром (или одноразовыми лопатками) вносят 0,1 г (0,1
мл) фекалий и тщательно ресуспендируют на вортексе до об
разования гомогенной суспензии (10 %). Взвесь фекалий ин
тенсивно встряхивают на вортексе до образования суспензии.
Центрифугируют суспензии фекалий 5 мин при 7000 g (10
тыс об/мин на центрифуге «MiniSpin», Eppendorf). Супернатант
(осветленный экстракт фекалий) используют для экстракции
НК.
Плазма крови
Использовать без предварительной обработки. Хранить
плазму можно не более 3 сут при температуре от 2 до 8 °С и
длительно - при температуре не выше минус 68 °С.
Моча
Флакон с мочой взболтать. Перенести 1 мл мочи, исполь
зуя наконечник с фильтром, в стерильную одноразовую про
бирку объемом 1,5 мл. Центрифугировать 5 мин при 10 000 д.
При наличии большого количества солей ресуспендировать
осадок солей в объеме 1 мл физиологического раствора сте
рильного или транспортной среды и затем снова концентриро
вать. Используя вакуумный отсасыватель с колбой-ловушкой,
полностью удалить супернатант, используя для каждого об
разца отдельный наконечник без фильтра, не захватывая оса
док. К осадку добавить 200 мкл физиологического раствора
стерильного или транспортную среду в объеме, указанном в
инструкции по ее применению. Тщательно перемешать содер
жимое на вортексе.
ЭКСТРАКЦИЯ РНК/ДНК из ИССЛЕДУЕМЫХ ОБРАЗЦОВ
ВНИМАНИЕ! При работе с РНК/ДНК необходимо использовать
только одноразовые пластиковые расходные материалы, име
ющие специальную маркировку «RNase-free», «DNase-free».
стр. 20 из 27
--- стр. 21 ---
Методика ручной экстракции с использованием магнит
ного штатива
1. Лизирующий буфер Комбо (если он хранился при темпе
ратуре от 2 до 8 °С) прогреть при температуре 60 °С до
полного растворения кристаллов.
2. Отобрать необходимое количество одноразовых пробирок
на 1,5 мл с плотно закрывающимися крышками (включая
отрицательный и положительный контроли выделения).
Промаркировать пробирки.
3. Смешать в отдельной пробирке на 1,5 мл ВКО (если он
предусмотрен для проведения тестирования, согласно ин
струкции к используемому набору реагентов для амплифи
кации нуклеиновых кислот). Буфер СТ и Магнитный сор
бент из расчета на один образец 10 мкл ВКО, 10 мкл Бу
фера ОТ и 20 мкл Магнитного сорбента. При расчете
необходимо учитывать запас - рассчитывать на одну точку
больше.
4. Внести в пробирки по 40 мкл^° подготовленной смеси
ВКО, буфера ОТ и магнитного сорбента.
5. Добавить в пробирки 500 мкл Лизирующего буфера
Комбо.
6. Добавить в каждую пробирку с лизирующим буфером 100
мкл исследуемого образца и тщательно перемешать на
вортексе.
7. В пробирку отрицательного контроля (ОК) выделения вне
сти 100 мкл фосфатного буфера или стерильного физио
логического раствора или 100 мкл ОКО (если он преду
смотрен в комплектации набора для амплификации нукле
иновых кислот). В пробирку положительного контроля (ПК)
выделения внести ПКО (не более 100 мкл), если он преду
смотрен для проведения тестирования в комплектации
набора для амплификации нуклеиновых кислот.
8. Содержимое пробирок тщательно перемешать на вор
тексе.
9. Прогреть пробирки 5 мин при 60°С в термостате.
10. Кратким центрифугированием осадить капли и перенести
пробирки в магнитный штатив на 1 мин.
Если ВКО не предусмотрен для проведения тестирования, внести в пробирки по 30 мкл подготов
ленной смеси буфера СТ и магнитного сорбента.
стр. 21 из 27
--- стр. 25 ---
17. Для станций с магнитным штативом высушить магнетизи
рованную силику, оставив открытые пробирки на магнит
ном штативе в течение 5 минут. Для станций с магнит
ными стержнями высушить магнетизированную силику
оставив магнитные стержни с намагниченным сорбентом
на открытом воздухе в течение 5 минут.
18. Для станций с магнитным штативом добавить в пробирки
по 100 мкл Элюирующего буфера. Для станций с магнит
ными стержнями поместить магнитные стержни в лунки
планшета с элюирующим буфером.
19. Перемешивать содержимое пробирок или лунок планшета
с исследуемыми образцами при 60°С в течении 5 мин.
20. Для станций с магнитным штативом перенести раствор в
чистые пробирки, не вынимая пробирки с магнитным сор
бентом из магнитного штатива. Для станций с магнитными
стержнями удалить магнитный сорбент из лунок планшета
с помощью магнитных стержней.
21. Полученная жидкость содержит очищенные РНК и ДНК.
ВНИМАНИЕ! Очищенная РНК/ДНК может храниться при тем
пературе не выше минус 16 °С до 1 месяца и при температуре
не выше минус 68°С - год и более. Не рекомендуется хранить
очищенную РНК более 30 мин при температуре плюс 2-8 °С.
СРОК годности. УСЛОВИЯ ТРАНСПОРТИРОВАНИЯ и
ХРАНЕНИЯ
Срок годности. 12 месяцев. Комплект реагентов с истекшим
сроком годности применению не подлежит. Срок годности
вскрытых реагентов соответствует сроку годности, указанному
на этикетках для невскрытых реагентов.
Транспортирование. Комплект реагентов транспортировать
при температуре от 2 до 8 °С не более 5 сут в термоконтейне
рах, содержащих хладоэлементы, всеми видами крытых
транспортных средств.
Хранение. Комплект реагентов «АмплиТест® Магно-Сорб-
Комбо» хранить при температуре от плюс 2 до плюс 8 °С.
Холодильная камера должна обеспечивать регламентирован
ный температурный режим.
стр. 25 из 27
--- стр. 26 ---
г а р а н т и й н ы е о б я з а т е л ь с т в а и з г о т о в и т е л я
Изготовитель гарантирует соответствие основных пара
метров и характеристик комплекта реагентов требованиям,
указанным в технической и эксплуатационной документации, в
течение указанного срока годности при соблюдении всех усло
вий транспортирования, хранения и применения.
Медицинское изделие техническому обслуживанию и ре
монту не подлежит.
Рекламации на качество комплекта реагентов направлять
по адресу 119121, Российская Федерация, г. Москва, Погодин
ская улица, дом 10 стр.1, e-mail; promlab@cspfmba.ru .
При выявлении побочных действий, не указанных в ин
струкции по применению комплекта реагентов, нежелатель
ных реакций при его использовании, фактов и обстоятельств,
создающих угрозу жизни и здоровью граждан и медицинских
работников при применении и эксплуатации комплекта реаген
тов, рекомендуется направить сообщение по адресу, указан
ному выше, и в уполномоченную государственную регулирую
щую организацию (в РФ - Федеральная служба по надзору в
сфере здравоохранения) в соответствии с действующим зако
нодательством.
Руководитель
производственной лаборатории
Ж.Е.Тарасова
СТр. 26 ИЗ 27
--- стр. 27 ---
символы, ИСПОЛЬЗУЕМЫЕ В ПЕЧАТНОЙ ПРОДУКЦИИ
REF Номер по каталогу
А
Осторожно! Обратитесь
к инструкции по приме-
нению
Содержимого доста
точно для проведения п-LOT Код партии
V
Медицинское изделие
для диагностики in vitro
количества тестов
|lVD 2 Использовать до
■ ■
a s
Обратитесь к инструкции
по применениюVER Дата изменения
t
Температурный диапа
зон Дата изготовления
ыА
Изготовитель
f
Беречь от влаги
Знаки опасности
стр. 27 из 27