--- стр. 1 ---
У Т В Е Р Ж Д Е Н А
Приказом Росздравнадзора
от 2011 г.№ ,-Пр/11
« У Т В Е Р Ж Д А Ю »
Генеральный директор Управляющей компании
«Юнимед-менеджмент»
А.Н.Шибанов
2011 г.
по прим енению Н абора реагентов для^^;ш|Ц№ 0^енного определения акти вн о сти
кр е а ти н к и н азы в сы во р о тке или плазме кр ови человека У Ф -к н н е т и ч е с к и м методом
« К Р Е А Т И Н К И Н А З А - U T S »
1. Н А З Н А Ч Е Н И Е
1.1. Набор реагентов « К Р Е А Т И Н К И Н А З А - U T S » предназначен для определения
активности общей креатинкиназы в сыворотке крови или плазме человека кинетическим
методом, рекомендованным Немецким обществом Клинической Химии (DGKC) и
Международной Федерацией Клинической Химии (IFCC) в клинико-диагностических и
биохимических лабораториях.
1.2. Набор рассчитан, в зависимости от варианта комплектации, на проведение 100 (комплект
А 1); 200 (комплект 2); 400 определений (комплект 3 ) или 500 определений (комплект 4) при
расходе 1,0 мл рабочего реагента на один анализ.
2. Х А Р А К Т Е Р И С Т И К А Н А Б О Р А
2.1. П р и н ц и п действия
Под действием находящегося в анализируемом образце фермента креатинкиназы
происходит перенос фосфатной группы с креатинфосфата на АДФ. Затем в ходе
последовательных ферментативных реакций НАДФ восстанавливается до НАДФН.
Увеличение концентрации НАДФН пропорционально, таким образом, исходной активности
креатинкиназы в пробе и измеряется фотометрически при длине волны 340 нм.
2.2. Д и агно сти ческая значи м о сть
Креатинкиназа - фермент, состоящий из изоферментов, присутствующих в мыщцах (М) и
клетках мозга (В), В сыворотке фермент существует в виде димеров ММ, MB, ВВ.
Повышенные значения креатинкиназы наблюдаются при повреждениях сердечной мышцы и
болезнях скелетных мышц. Определение креатинкиназы, особенно в сочетании с
определением димера МВ-фракции, применяется для диагностики инфаркта миокарда.
^ 2.3. С о ста в набора
Ч Р К о м п о н ен ты и их состав:
Н аим енование С о став К онц ентрац и я
Реагент 1 (Р 1 ) имидазол 125 ммоль/л
буферно Д-глюкоза 25 ммоль/л
субстратный N - ацетил-Ь’ Цистеин 25 ммоль/л
раствор магния ацетат 12,5 ммоль/л
НАДФ 2,5 ммоль/л
ЭДТА 2 ммоль/л
гексокиназа 6800 Е/л
Реагент 2 (Р 2) АДФ 15,2 ммоль/л
ферментно- АМФ 25 ммоль/л
кофакторный диаденозин пентафосфат 108 ммоль/л
раствор глюкозо-6-фосфат-дегидрогеназу, 8800 Е/л
креатинфосфат 250 ммоль/л
3. А Н А Л И Т И Ч Е С К И Е И Д И А Г Н О С Т И Ч Е С К И Е Х А Р А К Т Е Р И С Т И К И
3.1. Набор обеспечивает линейную область определения активности креатинкиназы от 1 0
Е/л до 2000 Е/л, отклонение от линейности не превышает 5%.
3.2. Чувствительность - не более 10 Е/л.
--- стр. 2 ---
3.3. Воспроизводимость: коэффициент вариации результатов определений - не более 5%.
3.4. Качество набора можно оценивать по отечественным или зарубежным контрольным
сывороткам, а т т е с т о в а н н ы е п о з н а ч е н и ю а к т и в н о с т и к р е а т и н к и н а з ы м е т о д о м
I F C C / D G K C
3.4. Для калибровки автоматизированных фотометрических систем рекомендуется
использовать сывороточные калибраторы, а т т е с т о в а н н ы е п о з н а ч е н и ю а к т и в н о с т и
к р е а т и н к и н а з ы м е т о д о м I F C C /D G K C ,
3.5. Нормальные величины активности креатинкиназы в сыворотке или плазме взрослого
человека составляют не более 170-195 Е/л.
3.6. Рекомендуется в каждой лаборатории уточнить диапазон значений нормальных
величин для обследуемого контингента людей.
4. М Е Р Ы П Р Е Д О С Т О Р О Ж Н О С Т И
4.1. Потенциальный риск применения набора - класс 1 (ГОСТ Р 51609-2000).
4.2. При работе с набором необходимо соблюдать «Правила устройства, техники
безопасности, производственной санитарии, противоэпидемического режима и личной
гигиены при работе в лабораториях (отделениях, отделах) санитарно-эпидемиологических
учреждений системы Министерства здравоохранения СССР» (Москва, 1981 г.).
4.3. При работе с набором следует надевать одноразовые резиновые или пластиковые
перчатки, т.к. образцы крови человека следует рассматривать как потенциально
инфицированные, способные длительное время сохранять и передавать ВИЧ, вирусы
гепатита или любой другой возбудитель вирусной инфекции.
5. О Б О Р У Д О В А Н И Е И Р Е А Г Е Н Т Ы
- Спектрофотометр, программируемый фотометр или анализатор, длина волны 340 нм,
термостатируемая при 25, 30 или 37^ (±0,5 * ^ С ) кювета с длиной оптического пути 10 мм*
- Термостат или водяная баня, обеспечивающие температуру 25, 30 или +37^ (±0,5 ^С)
- Секундомер
- Пипетки, позволяющие отбирать объемы жидкости 20, 40 и 1 О О О мкл
- Цилиндры мерные объемом 25 и 100 мл
- Колба коническая вместимостью не менее 150 мл
- 0,9% раствор NaCl (физиологический раствор)
- Вода дистиллированная или деионизованная.
- Перчатки резиновые или пластиковые,
^Вним ание: при использовании кювет с длиной оптического пути, отличной от 10 мм,
требуется перерасчет фактора набора. При использовании биохимического анализатора с
ненормированной длиной оптического пути требуется калибровка по сывороточным
калибраторам, аттестованным по значению активности креатинкиназы методом IFCC/DGKC.
6. А Н А Л И З И Р У Е М Ы Е О Б Р А З Ц Ы
6.1. Негемолизированная сыворотка или гепаринизированная плазма крови.
6.2. Сыворотку или плазму крови следует отделить от форменных элементов крови не
позднее, чем через 1 час после забора крови.
6.3. Образцы сыворотки и плазмы крови стабильны при температуре +2-8 ^С не более 2
дней, или I месяца при -20 ® С .
7. П Р О В Е Д Е Н И Е А Н А Л И З А
7.1. Приготовление рабочего реагента: смещать в колбе конической 4 объема Реагента 1 и
1 объем Реагента 2, отмеренные мерными цилиндрами. Раствор рабочего реагента стабилен
14 дней при температуре 2-8 ^С или 2 суток при 18-25 ^С.
7.2. Раствор рабочего реагента прогреть до выбранной температуры (25, 30 или 37 ^С).
7.3. Компоненты реакционной смеси отбирать в объемах, указанных в таблице:
Наименование Объем, мкл
25-30 ^ * С 37 ‘ ’С
Рабочий реагент 1000 1000
Сыворотка или плазма крови 40 20
7.4. Пробы перемещать и инкубировать при выбранной температуре в течение 2 минут.
--- стр. 3 ---
Примечания. При использовании автоматических или полуавтоматических биохимических
анализаторов количество реагентов и анализируемых образцов в зависимости от объема
используемой кюветы может быть пропорционально изменено (соотношение сыворотки или
плазмы крови к рабочему реагенту составляет 1:25 при 25-30 и 1 ; 50 при 37 ^С).
8. ПРОВЕДЕНИЕ ИЗМ ЕРЕНИЙ
8.1. Измерить оптическую плотность анализируемого образца (Do) при выбранной
температуре, при длине волны 340 нм против дистиллированной воды или воздуха.
8.2. Повторить измерения оптической плотности пробы не менее 3 раз с интервалом 1
минута (Di, D 2 и D 3).
9. УЧЕТ РЕЗУЛЬТАТОВ РЕАКЦИИ
9.1. Рассчитать среднее изменение оптической плотности пробы в минуту (AD);
A D = l ( D i - D o ) + (D2 - D j ) + ( D s - D : ) ] / 3
9.2. Активность креатинкиназы в сьгеоротке или плазме крови А (Е/л) рассчитать по
формуле:
A ^ F x A D
где F - фактор пересчета для выражения активности креатинкиназы в Е/л, равный:
п р и 2 5 - 3 0 “с - 4 8 5 0 ;
п р и 3 7 ' ' с - 9 5 0 0 .
9.3. Если вычисленное значение ДО превышает величину 0,21 ед. опт. плотн,/мин, развести
исследуемый образец физиологическим раствором в 10 раз, повторить анализ, а результат
определения умножить на 10.
Ю.УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ И ЭКСПЛУАТАЦИИ НАБОРА
10.1. Набор реагентов «КРЕАТИНКИНАЗ А-UTS» должен храниться в упаковке
предприятия-изготовителя при температуре +2-8 в течение всего срока годности.
Замораживание компонентов набора не допускается.
10.2. Срок годности набора 18 месяцев.
10.3. Реагенты 1 и 2 после вскрытия флаконов могут храниться при температуре 2-8 ® С в
плотно закрытых флаконах в темном месте в течение всего срока годности набора.
10.4. Рабочий реагент можно хранить в плотно закрытом флаконе при температуре 2-8 ^С не
более 14 суток или при комнатной температуре (18-25 * ^ С ) не более 2 суток.
10.5. Оптическая плотность рабочего реагента при 340 нм должна составлять не более 0,5 ед,
опт. плотн. (при использовании кювет с длиной оптического пути 10 мм).
10.6. Для получения надежных результатов необходимо строгое соблюдение инструкции по
применению набора.
По вопросам, касающимся качества набора «КРЕАТИНКИНАЗА-UTS» следует обращаться
в ЗАО «А/О ЮНИМЕД» по адресу: 129301, Москва, ул. Касаткина, За; Тел. (495) 734-91-31,
8-800-333-91-31.
Факс: (495) 564-86-41; E-mail: office@unimedao.ru: http://www.unimedao.ru
Руководитель отдела производства реагентов ООО «ЭЙЛИТОН»
_______________к.б.н. Нечаев В.Н.
« » ф 2011 г
ОВАНО»
клинической лабораторной диагностики
осздравнадзора»
д.м.н., профессор Долгов В.В.
2011 г