--- стр. 1 ---
УТВЕРЖДЕНА
Приказом Росздравнадзора
от 2009 г. №
«УТВЕРЖДАЮ»
Генеральный директор Управляющей
компании ООО «Эйлитон»
по применению набора реагентов для количественного определения холестерина
липопротеинов низкой плотности в сыворотке и плазме крови человека
«ЛПНП-ХОЛЕСТЕРИН-UTS»
1. НАЗНАЧЕНИЕ
1.1. Набор реагентов ЛПНП-ХОЛЕСТЕРИН-UTS предназначен для количественного
определения содержания холестерина липопротеинов низкой плотности (ЛПНП-
холестерина) в сыворотке или плазме крови человека ферментативным методом в клинико-
диагностических и биохимических лабораториях.
1.2. Набор основан на прямом методе определения ЛПНП-холестерина, без стадий
осаждения и центрифугирования.
1.3. Набор рассчитан, в зависимости от варианта комплектации, на проведение 100 (комплект
1), 200 (комплект 2) или 300 (комплект 3)определений при расходе 0,3 мл реагента 1 на один
анализ.
2. ХАРАКТЕРИСТИКА НАБОРА
2Л. Принцип действия
Метод прямого определения ЛПНП-холестерина включает в себя две стадии.
1. Разрушение всех видов холестерина, кроме ЛПНП-холестерина в анализированном
образце с помощью следующих ферментативных реакции:
Эфиры _ холестерина + Н20 —*°™™ер°™стераза_ ^ Холестерин + Жирные _ кислоты
Холестерин + 0 2 * " p" da3a > 4 - Холестенон + Н20 2
1Н20 2 + ка" > 2 Н20 + 0 2
И. Измерение ЛПНП-холестерина с применением специфических поверхностоно-активных
веществ проводят по схеме реакций, представленных ниже:
Эфиры _ холестерина + Н20 — холест еР°лжтеРаза > Холестерин'+ Жирные _ кислоты
Холестерин + Ог — еР— даз° > 4 - Холестенон + Н20 2
1Н20 2 + N - Диметоксианилин + 4 - Аминоантипирин — пеР°ксидаза. . ..» Хинонимин + 4Н20
Концентрация ЛПНП-холестерина в анализируемом образце прямо пропорциональна
интенсивности образующей окраски хромогена при 600 нм.
2. Клиническая диагностика
2.1. ЛПНП участвуют в доставке холестерина в клетки организма. Часто ЛПНП-холестерин
называют «плохой холестерин», поскольку высокий уровень его содержания вызывает риск
сердечно-сосудистых заболеваний. Увеличение концентрации ЛПНП-холестерина в плазме
является показателем склонности к атеросклеротическим болезням, инфаркту миокарда,
инсульту.
2.2. Клинический диагноз не может быть поставлен по результатам одного анализа, он
должен объединять как клинические, так и лабораторные данные.
--- стр. 2 ---
2.3. Состав набора
I Компоненты и их концентрации в реакционной смеси:
Наименование Состав Концентрация
Р1
Ферментный раствор, pH
7,0
Буфер Гуда 50 ммоль/л
Холестериноксидаза 380 Е/л
Холестеринэстераза 380 Е/л
Каталаза 490 Е/л
1чЦ2-гидрокси-3-сульфопропил)-3-5-
диметоксианилин
0,45 ммоль/л
Р2
Ферментно-субстратный
раствор, pH 7,0
Буфер Гуда 50 ммоль/л
4-Аминоантипирин 1 ммоль/л
Пероксидаза 1000 Е/л
Калибратор ЛПНП-
холестерина
Лиофилизат
сыворотки человека
Точная концентрация
указана на этикетке
флакона
3. АНАЛИТИЧЕСКИЕ И ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
3.1. Набор обеспечивает линейную область определения концентрации ЛПНП-холестерина
от 0,07 до 12,5 ммоль/л, отклонение от линейности не превышает 5%. Чувствительность - не
более 0,07 ммоль/л, коэффициент вариации результатов определений - не более 2,5%.
3.2. Качество набора можно оценивать по отечественным или зарубежным контрольным
сывороткам, аттестованным данным методом.
3.3. Величины концентрации ЛПНП-холестерина в сыворотке или плазме взрослого
человека:
'
*
Степень риска ишемической
болезни сердца
Концентрация ЛПНП-
холестерина
Низкая <3,4 ммоль/л
Средняя 3,4 - 4,1 ммоль/л
Высокая >4,1 ммоль/л
Фактор пересчета: 1 ммоль/л = 1мг/мл х 0,02586.
3.4. Рекомендуется в каждой лаборатории уточнить диапазон значений нормальных величин
для обследуемого контингента людей.
4. МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ
4.1. Потенциальный риск применения набора - класс 2а.
4.2. Реагент 1 содержит N-диметоксианилин, реагент 2 содержит 4-аминоантипирин. Следует
избегать попадания реагентов на кожу и слизистые. В случае попадания их на кожу и
слизистые оболочки необходимо промыть поражённые участки большим количеством
проточной воды.
4.3. Набор содержит калибратор на основе человеческой сыворотки. Используемые
донорские сыворотки были предварительно проверены на отсутствие HbsAg и антител
против HIV 1+2 и HCV. Тем не менее, следует обращаться с калибратором с теми же мерами
предосторожности, как с образцами пациентов.
4.4. При работе с набором необходимо соблюдать «Правила устройства, техники
безопасности, производственной санитарии, противоэпидемического режима и личной
гигиены при работе в лабораториях (отделениях, отделах) санитарно-эпидемиологических
учреждений системы Министерства здравоохранения СССР» (Москва, 1981 г.).
4.5. При работе с набором следует надевать одноразовые резиновые или пластиковые
перчатки, т.к. образцы крови человека следует рассматривать как потенциально
2
--- стр. 3 ---
инфицированные, способные длительное время сохранять и передавать ВИЧ, вирусы
( гепатита или любой другой возбудитель вирусной инфекции.
5. ОБОРУДОВАНИЕ И РЕАГЕНТЫ
- Спектрофотометр, биохимический анализатор или фотоэлектроколориметр, длина волны
600 (530-630 нм),
- Термостатируемая при +37 °С кювета с длиной оптического пути 10 мм;
- Термостат, обеспечивающий температуру +37±0,5 °С;
- Секундомер;
- Пипетки, позволяющие отбирать объемы жидкости 4, 100, 300 и 1000 мкл;
- 0,9% раствор NaCl (физиологический раствор).
- Перчатки резиновые или пластиковые
6. АНАЛИЗИРУЕМЫЕ ОБРАЗЦЫ
6.1 Негемолизированная гепаринизированная сыворотка или плазма крови. Сыворотку или
плазму крови следует отделить от форменных элементов крови не позднее, чем через 1 час
(
после забора крови. Внимание! Анализ на ЛПНП-холестерин рекомендуется проводить
сразу после отбора крови.
6.2. Образцы сыворотки и плазмы крови стабильны при температуре +2-8 °С - не более 7
суток.
6.3. Замораживание и оттаивание образцов сыворотки и плазмы крови не рекомендуется.
7. ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА
7.1. Реагенты 1 и 2 готовы к использованию.
7.2. Калибратор: в содержимое флакона добавить 1 мл дистиллированной воды, закрыть
крышкой, перемешать до полного растворения, избегая вспенивания. Раствор калибратора
<
{
Примечание. При использовании автоматических или полуавтоматических биохимических
анализаторов количество реагентов и анализируемых образцов в зависимости от объема
используемой кюветы может быть пропорционально изменено (соотношение сыворотки или
плазмы крови к реагенту 1 составляет 4:300).
8. РЕГИСТРАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ
Измерить оптическую плотность анализируемого образца (Аф) и калибровочной пробы
(AK aJl) против холостой пробы в кювете с длиной оптического пути 10 мм при длине волны
600 (530-630) нм.
9. УЧЕТ РЕЗУЛЬТАТОВ РЕАКЦИИ
9.1. Концентрацию ЛПНП-холестерина в сыворотке или плазме крови (ммоль/л) определить
по формуле:
после приготовления стабилен 7 дней при 2-8 °С или 5 недель при -20 С.
7.3. Компоненты реакционной смеси отбирать в объемах, указанных в таблице:
Отмерить, мкл Анализируемый
образец
Калибровочная
проба
Холостая проба
Р1 300 300 300
Калибратор - 4 -
Сыворотка или плазма
крови
4 - -
Пробы перемешать и инкубировать при температуре +37 °С в течение 5 минут.
Добавить:
Р2 100 100 100
Пробы перемешать и инкубировать при температуре +37 °С в течение 5 минут.
3
■
--- стр. 4 ---
7
А.
С = кал
А,кал
где: С - концентрация ЛПНП-холестерина в анализируемом образце, ммоль/л;
Адбр оптическая плотность анализируемого образца, ед. опт. плотн.;
Акал - оптическая плотность калибровочной пробы, ед. опт. плотн.;
СК Ш 1 - концентрация холестерина в калибраторе (указана на этикетке флакона), ммоль/л.
9.2. Если концентрация холестерина в сыворотке или плазме крови выше 12,5 ммоль/л,
анализируемый образец следует развести в два раза 0,9% раствором NaCl, повторно повести
измерения согласно пп. 7-9 и полученный результат умножить на 2.
10.1. Набор реагентов «ЛПНП-ХОЛЕСТЕРИН - UTS» должен храниться в упаковке
предприятия-изготовителя при температуре +2-8 °С в течение всего срока годности.
Замораживание компонентов набора не допускается.
10.2. Срок годности набора 12 месяцев.
10.3. Реагент 1 и реагент 2 после вскрытия флакона могут храниться при температуре +2-8 °С
в течение 4 недель в темном месте, при условии достаточной герметичности флакона и
отсутствия загрязнений.
10.4. Калибратор после его приготовления может храниться при температуре +2-8 °С в
течение 7 дней, или в течение 5-и недель при минус 20 °С.
10.5. При помутнении и выпадении кристаллов реагенты непригодны к применению.
10.6. Для получения надежных результатов необходимо строгое соблюдение инструкции по
применению набора.
Руководитель отдела производства реагентов
Ю.УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ И ЭКСПЛУАТАЦИИ НАБОРА
О О О «эйлитон»«ЭИЛИ’
m J Нечаев В.Н.
E-mail: office@unimedao.ru
http://www.unimedao.ru
4