--- стр. 1 ---
УТВЕРЖДЕНА
Приказом Росздравнадзора
от 2012 г. №
|л а б »
С. Г. Марданлы
2012 г.
ИНСТРУКЦИЯ
по ПРИМЕНЕНИЮ НАБОРА РЕАГЕНТОВ ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ
СОДЕРЖАНИЯ ХОЛЕСТЕРИНА В СЫВОРОТКЕ И ПЛАЗМЕ КРОВИ
ФЕРМЕНТАТИВНЫМ МЕТОДОМ
(«Холестерин-ЖС»)
1. Назначение
Набор предназначен для количественного определения содержания общего хо
лестерина в сыворотке и плазме крови человека в клинико-диагностических и биохи
мических лабораториях.
Набор выпускается в трех вариантах комплектации и рассчитан на проведение
150, 300 и 600 определений при расходе 1,0 мл рабочего раствора реагентов на один
анализ.
2. Характеристика
2.1. Принцип действия
При гидролизе эфиров холестерина холестеролэстеразой образуется свободный
холестерин. Образовавшийся и имеющийся в пробе свободный холестерин под дейст
вием холестеролоксидазы окисляется кислородом воздуха с образованием эквимоляр-
ного количества перекиси водорода. Под действием пероксидазы перекись водорода, 4-
аминоантипирин и фенол образуют окрашенный продукт, интенсивность окраски кото
рого пропорциональна содержанию холестерина в анализируемой пробе и определяется
фотометрически при длине волны 500 (490-520) нм.
2.2. Состав набора
• Реагент 1 - буферно-ферментный раствор - 2 флакона (по 50 мл) или 2 флако
на (по 100 мл) или 4 флакона (по 100 мл).
• Реагент 2 - раствор хромогена - 2 флакона (по 25 мл) или 2 флакона (по 50
мл) или 4 флакона (по 50 мл).
• Калибратор - калибровочный раствор холестерина, 5,0 ммоль/л - 1 флакон
(3,0 мл) или 1 флакон (3,0 мл) или 1 флакон (5,0 мл).
3. Аналитические и диагностические характеристики набора
Линейность в диапазоне концентраций от 1,5 ммоль/л до 20 ммоль/л; отклонение
- не более 5,0 % .
Чувствительность - не более 1,0 ммоль/л.
Коэффициент вариации результатов определения - не более 5,0 % .
Качество набора может быть проверено по отечественным и;ш зарубежным кон
трольным сывороткам, аттестованным данным методом.
Нормальные значения:
в сыворотке и плазме крови 2,9 - 5,2 ммоль/л.
--- стр. 2 ---
7
Рекомендуется в каждой лаборатории уточнить диапазон значений нормальных
^ л и ч и н .
4. Меры предосторожности при работе с набором
Потенциальный риск применения набора - класс 2а.
Реагенты 1,2 содержат ядовитое вещество - натрия азид. Реагент 1 содержит ток
сичное вещество - фенол. При работе с ними следует применять индивидуальные сред-
/ств а защиты. В случае попадания раствора на кожу и слизистые необходимо немедлен
но промыть пораженное место большим количеством проточной воды. При попадании
внутрь следует немедленно выпить 0,5 л теплой воды и вызвать рвоту.
Меры предосторожности - соблюдение «Правил устройства, техники безопасно
сти, производственной санитарии, противоэпидемического режима и личной гигиены
при работе в лабораториях (отделениях, отделах) санитарно-эпидемиологических уч
реждений системы Министерства здравоохранения СССР» (Москва, 1981 г.).
При работе с набором следует надевать одноразовые резиновые или пластико
вые перчатки, так как образцы крови человека следует рассматривать как потенциально
инфицированные, способные длительное время сохранять и передавать ВИЧ, вирус ге
патита или любой другой возбудитель вирусной инфекции.
5. Оборудование, материалы и реагенты
• фотометрическое оборудование, включая биохимические полуавтоматические
и автоматические анализаторы, длина волны 500 (490-520) нм, кювета с длиной опти
ческого пути 1,0 см;
• таймер;
• термостат, поддерживающий температуру (37±1) °С;
• пробирки вместимостью 10-12 мл;
• пипетки, позволяющие отбирать объемы жидкости 0,01 мл и 1,0 мл;
• вода дистиллированная;
• перчатки резиновые или пластиковые.
6. Анализируемые образцы
Негемолизированная сыворотка, гепаринизированная или ЭДТА плазма крови.
7. Подготовка к анализу
7.1. Приготовление рабочего раствора реагентов
Смешать Реагент 1 с Реагентом 2 в соотношении 2:1.
Рабочий раствор реагентов хранить при температуре (2-8) °С в темном месте в
плотно закрытом флаконе не более 1 месяца.
Внимание! Розовая окраска рабочего раствора реагентов с величиной оптиче
ской плотности до 0,2 ед. опт. пл., измеренной против воды дистиллированной при дли
не волны 500 нм в кювете с длиной оптического пути 1,0 см не влияет на правильность
определения холестерина в исследуемом образце.
Калибратор готов к применению. После вскрытия флакона хранить при темпера
туре (2-8) ” С в плотно закрытом флаконе не более 6 месяцев.
7.2. Проведение анализа
Компоненты и анализируемые пробы отмерить в количествах, указанных в таб
лице.
--- стр. 3 ---
Таблица
Отмерить, мл Контрольная
(холостая) проба
Калибровочная
проба
Опытная
проба
Рабочий раствор реагентов 1,0 1,0 1,0
Сыворотка (плазма) крови 0,01
Калибратор 0,01
Вода дистиллированная 0,01
Содержимое пробирок тщательно перемешать круговыми движениями, избегая
пенообразования, выдержать при температуре (37±1) °С в течение 5-10 мин. Раствор
следует предохранять от действия прямого света. Измерить оптическую плотность ка
либровочной (Ек) и опытной ( Е о п ) проб против контрольной (холостой) пробы при дли
не волны 500 (490-520) нм в кювете с длиной оптического пути 1,0 см. Окраска ста
бильна в течение 1 часа.
8. Регистрация результатов
Длина волны: 500 (490-520) нм;
Длина оптического пути: 1,0 см;
Температура анализа: (37±1) °С;
Измерение: против холостой пробы.
9. Учет результатов реакции
Содержание холестерина (С, ммоль/л) определить по формуле:
С = -^ х 5 ,0 ,
где: Еоп - оптическая плотность опытной пробы, ед. опт. пл.;
Ек - оптическая плотность калибровочной пробы, ед. опт. пл.;
5,0 - концентрация холестерина в калибраторе, ммоль/л.
10. Условия хранения и эксплуатации набора
Набор должен храниться в упаковке предприятия-изготовителя при температуре
(2-8) °С в течение всего срока годности. Допускается хранение наборов при температу
ре до 25 °С не более 5 суток.
Срок годности набора - 1 год.
Рабочий раствор реагентов хранить при температуре (2-8) “ С в темном месте в
плотно закрытом флаконе не более 1 месяца.
Калибратор после вскрытия флакона хранить при температуре (2-8) °С в плотно
закрытом флаконе не более 6 месяцев.
При содержании холестерина в исследуемом образце выше 20 ммоль/л, образец
необходимо развести физиологическим раствором, анализ повторить и полученный ре
зультат умножить на разведение.
Гемоглобин в концентрации до 2,0 г/л и билирубин до 85,5 мкмоль/л не влияют
на точность определения холестерина.
При подготовке посуды для анализа нельзя использовать моющие растворы, со
держащие перекись водорода и диэтиловый эфир.
Для получения надежных результатов необходимо строгое соблюдение инст
рукции по применению набора.
--- стр. 4 ---
• f
По вопросам, касающимся качества набора («Холестерин-ЖС») следует обра-
I щаться по адресу 142530, Московская обл., г. Электрогорск, ул. Буденного, д. 1, ЗАО
«ЭКОлаб»; тел/факс (49643) 3-30-93, 3-30-85 - отдел сбыта.
Начальник лаборатории
биохимии ЗАО «ЭКОлаб» Т. М. Сиренко
СОГЛАСОВАНО:
Зав. кафедрой клинической лабораторн
диагностики ГБОУ ДПО РМАПО
Минздравсоцразвития России,
д.м.н., профессор
П о д :
у д о с т о п ^ р я ю ;
^ С п е ц и а л 1 !с т 1
l l O A n H C t . .
В. В. Долгов
. Ж