--- стр. 1 ---
Приказом Росздравнадзора Президент ЗАО «ЭКОлаб»
С. Г. Марданлы
от ________ 2009 г. № ________ • и
« У) ‘ 2009 г.
У Т В Е Р Ж Д Е Н А « У Т В Е Р Ж Д А Ю »
И Н С Т Р У К Ц И Я
п о П Р И М Е Н Е Н И Ю Н А Б О Р А Р Е А Г Е Н Т О В Д Л Я
О П Р Е Д Е Л Е Н И Я А К Т И В Н О С Т И Щ Е Л О Ч Н О Й Ф О С Ф А Т А З Ы
В С Ы В О Р О Т К Е К Р О В И
( « Щ Ф - к и н е т и к а » )
1. Н азначение
Набор предназначен для количественного определения активности щелочной
фосфатазы (Щ Ф) в сыворотке крови в клинико-диагностических и биохимических ла
бораториях.
Набор выпускается в двух вариантах комплектации и рассчитан на проведение
80 и 180 определений при расходе 1,0 мл рабочего раствора реагентов на один анализ.
2. Характеристика
2Л . П ринцип действия
Кинетическое спектрофотометрическое определение активности Щ Ф основано
на регистрации увеличения оптической плотности опытного образца при 405 нм в ре
зультате протекания следующей реакции:
ДЭА, M g'"
п-нитрофенилфосфат - ь Н2О
---------^ н-нитрофенол + фосфат
ЩФ, pH 9 ,8
Скорость образования окрашенного п-нитрофенола пропорциональна активно
сти ЩФ.
2.2. Состав набора
• Реагент 1 - диэтаноламиновый буферный раствор (диэтано л амин, 1 моль/л;
магний хлористый 6-водный, 0,5 ммоль/; кислота янтарная, 0,05 моль/л; натрий хлори
стый, 0,086 моль/л), pH 9,8 - 4 флакона (по 20 мл) - комплект 1 и 2 флакона (по 90 мл)
- комплект 2.
• Реагент 2 — п-нитрофенилфосфат - субстрат - 4 флакона (по 0,3 ммоль) —
комплект 1 и 6 флаконов (по 0,45 ммоль) — комплект 2.
3. А налитические и диагностические характеристики набора
Линейность в диапазоне от 50 Е/л до 1000 Е/л; отклонение - не более 5 %.
Чувствительность - не более 40 Е/л.
--- стр. 2 ---
Коэффициент вариации результатов определения - не более 5 %.
Качество набора может быть проверено по отечественным или зарубежным кон
трольным сывороткам, аттестованным данным методом.
Н о р м а л ь н ы е з н а ч е н и я с о д е р ж а н и я щ е л о ч н о й ф о с ф а т а з ы :
• в сыворотке крови:
взрослые - 70 - 306 Е/л;
дети - 210 - 900 Е/л.
Рекомендуется в каждой лаборатории определить диапазон нормальных вели
чин для обследуемого контингента.
4. Меры предосторожности при работе с набором
Потенциальный риск применения набора - класс 2а.
Реагент 2 - п-нитрофенилфосфат - токсичное вещество. При работе с ним следу
ет соблюдать осторожность и не допускать попадания на кожу и слизистые; при попа
дании немедленно промыть пораженное место большим количеством проточной воды.
При проглатывании следует выпить 0,5 л теплой воды и вызвать рвоту.
Меры предосторожности - соблюдение «Правил устройства, техники безопасно
сти, производственной санитарии, противоэпидемического режима и личной гигиены
при работе в лабораториях (отделениях, отделах) санитарно-эпидемиологических уч
реждений системы Министерства здравоохранения СССР» (Москва, 1981 г.).
При работе с набором следует надевать одноразовые резиновые или пластико
вые перчатки, так как образцы крови человека следует рассматривать как потенциально
инфицированные, способные длительное время сохранять и передавать ВИЧ, вирус ге
патита или любой другой возбудитель вирусной инфекции.
5. Оборудование, материалы и реагенты
• Фотометрическое оборудование, длина волны 405 нм, термостатируемая кю
вета с длиной оптического пути 1,0 см;
• таймер;
• пипетки позволяющие отбирать объемы жидкости 1000 мкл и 20 мкл;
• вода дистиллированная;
• 0,9 % раствор натрия хлористого (физиологический раствор);
• перчатки резиновые или пластиковые.
6. Анализируемые образцы
Негемолизированная сыворотка крови. Плазму использовать нежелательно, так
как мтюгие антикоагулянты мещают определению ЩФ.
Сыворотку крови можно хранить при комнатной температуре 6 час. и при тем
пературе (2-8) °С в течение 5 сут.
7. Проведение анализа
7. 1. Приготовление рабочего раствора реагентов
Комплект 1
К содержимому одного флакона с реагентом 2 добавить содержимое одного
флакона с реагентом 1, растворить при перемешивании.
Комплект 2
К содержимому одного флакона с реагентом 2 добавить 30 мл реагента 1, рас
творить при перемешивании.
Рабочий раствор реагентов можно хранить при температуре (2-8) °С в плотно за
крытом флаконе не более 10 сут. или 3 мес.- ниже О '^С.
--- стр. 3 ---
7.2. Проведение анализа
11срсд проведением анализа рабочий раствор реагентов довести до температуры
(37± 1)"С.
Рабочий раствор реагентов и анализируемые пробы отмерить в количествах,
указанных в таблице.
Таблица
Отмерить, мкл
Рабочий раствор реагентов
Опытная проба
1000
Сыворотка крови 20
Примечание. При использовании кюветы меньшего объема расход реагента
может быть уменьшен при сохранении указанных выше соотношений.
Перемешать и поместить в термостатируемое отделение при температуре (37 ±
1) "С. Через 1 мин измерить оптическую плотность пробы (Е„р). Измерение оптической
плотности повторить 3 раза с интервалом в 1 мин.
8. Регистрация результатов
Длина волны: 405 нм;
Длина оптического пути: 1,0 см;
Температура анализа: (37 ± 1)
Измерение: относительно воздуха.
9. Учет результатов реакции
Рассчитать изменение оптической плотности в минуту { А Е ^ ) для каждого опре
деления по формуле (1):
А£, = Е ,- Е,. = Е у - Е ,. АЕ, = Е ,- Е^ (1).
где Е] - значение оптической плотности пробы после инкубации (задержка);
Е2.3.4 - значение оптической плотности пробы после 1, 2, 3 минуты реакции,
соответственно.
Рассчитать среднее арифметическое значение изменения оптической плотности
в минуту ( / мин) для анализируемой пробы по формуле (2):
АЕ / мин =---------— (2),
где А/?,, A Ej, АЕ. - изменения оптической плотности проб в первую, вторую и
третью минуты реакции;
3 “ количество минут, в течение которых проводилось измерение.
Рассчитать ак гивность ЩФ (А, Е/л) по формуле (3):
А = АЁ,,^/мин X 2757 (3),
где 2757 - фактор расчёта активности Щ Ф. Е/л.
Примечание. I Е/л = 16,67 н.моль/с х л (Катал).
--- стр. 4 ---
10. Условия хранения и эксплуатации набора
Набор должен храниться в упаковке предприятия-изготовителя при температуре
(2-8) °С в течение всего срока годности. Допускается хранение при температуре до + 25
не более 20 сут.
Срок годности набора - 2 года.
Реагенты 1 и 2 после вскрытия флаконов можно хранить при температуре (2-8)
°С в темном месте в плотно закрытых флаконах в течение всего срока годности.
Рабочий раствор реагентов можно хранить при температуре (2-8) в плотно
закрытом флаконе не более 10 сут. или 3 мес,- ниже О °С.
При активности щелочной фосфатазы вьппе 1000 Е/л пробу следует развести
физиологическим раствором в 5 раз и полученный результат умножить на 5.
По вопросам, касающимся качества набора «ЩФ - кинетика» следует
обращаться по адресу 142530, Московская обл., г. Электрогорск, ул. Будённого, д. 1,
ЗАО «ЭКОлаб»; тел/факс (49643) 3-30-93, 3-30-85 - отдел сбыта.
Начальник лаборатории
биохимии ЗАО «ЭКОлаб» Т. М. Сиренко
СОГЛАСОВАНО:
Зав. кафедрой клинической лабораторной
диагностики ГОУ ДПО РМАПО Росздрава
Д .М .Н ., профессор В. В. Долгов
П о д п и С о
В
удостоверяю: специалист п о
кадровой работе ГОУ ДПО
РМАГДРоишГава ^
^ / М с ^ а Ьподпи