--- стр. 1 ---
s
«УТВЕРЖДАЮ»
Г енеральный директор
^тор-Бест»
М.Д. Хусаинов
2024 г.
ИНСТРУКЩ1Я
по применению набора реагентов для определения концентрации
конъюгированного билирубина в сыворотке и плазме крови
(Билирубин прямой)
1. НАЗНАЧЕНИЕ
1.1. Набор реагентов для определения концентрации конъюгированного билирубина в
сыворотке и плазме крови «Билирубин прямой» (далее по тексту набор) предназначен для
количественного определения концентрации конъюгированного билирубина в сыворотке и
плазме крови человека колориметрическим методом с диазотированной сулъфаниловой
кислотой.
1.2. Набор выпускается в шести вариантах комплектации:
Вариант
ком
плектации
Количество опре
делений, от
Расход Р1 на одно
определение, мл
Фасовка Используемый
анализатор
1 200 0,50 1x100 мл (Р1); 1x30 мл (Р2);
1x3,0 мл (РЗ); 1 фл.(К);
Любой
2 1000 0,50 2x250 мл (Р1); 2x75 мл (Р2);
2x7,5 мл (РЗ); 4 фл. (К);
Любой
3 700 0,16 4x40 мл(Р1); 4x10 мл (Р2);
4х1,0мл(РЗ);2фл. (К);
M1URA
(Миура)
4 3800 0,16 8x82 мл (Р1); 4x40 мл (Р2);
4x4,0 мл (РЗ); 4 фл. (К);
ILab Taurus
(Таурус)
5 1180 0,20 4x60 мл (Р1); 3x20 мл (Р2);
3x2,0 мл (РЗ); 2 фл. (К);
ВА400
6 760 0,16 4x36 (Р1); 4x10 мл (Р2);
4х1,0мл(РЗ);4фл. (К).
Aspect
(Аспект)
Количество определений зависит от объема фасовки (варианта комплектации) расхода
реагента 1 (Р1), реагента 2 (Р2) и реагента 3 (РЗ) на одно измерение и от технических
характеристик исполъзуемого биохимического анализатора при сохранении соотношения
образец : реагент!; реагент2: реагент 3.
Инструкция составлена сотрудниками АО «Вектор-Бест»: нач. отдела биохгшии, к.б.н. Г.Е.
Яковлевой и научным сотрудником, Н. С. Щербаковой.
--- стр. 2 ---
2. ХАРАКТЕРИСТИКА НАБОРА
2.1. Принцип действия
Метод определения основан на том, что при взаимодействии билирубина с
диазотированной сульфаниловой кислотой в кислой среде образуется азобилирубин красного
цвета, интенсивность окраски которого пропорциональна концентрации конъюгированного
билирубина в анализируемой пробе и измеряется фотометрически при длине волны 546 (520-
560) нм.
2.2. Состав набора
В состав набора входят:
- реагент 1 (Р1): раствор, содержащий натрий хлористый и ЭДТА; готовый к
использованию;
- реагент 2 (Р2): раствор, содержащий сульфаниловую кислоту и соляную кислоту;
- реагент 3 (РЗ): раствор натрия азотистокислого;
- калибратор (К): конъюгированный билирубин с концентрацией в диапазоне 40-
60 мкмоль/л, лиофилизированный.
Прослеживаемость аттестованного значения калибратора указана в паспорте.
Состав вариантов комплектации:
1) -реаген т 1 - 1 флакон (100 мл);
- реагент 2 - 1 флакон (30 мл);
- реагент 3 - 1 флакон (3,0 мл);
- калибратор - 1 флакон.
2) - реагент 1 - 2 флакона (по 250 мл);
- реагент 2 - 2 флакона (по 75 мл);
- реагент 3 - 2 флакона (по 7,5 мл);
- калибратор - 4 флакона.
3) - реагент 1 - 4 флакона (по 40 мл);
- реагент 2 - 4 флакона (по 10 мл);
- реагент 3 - 4 флакона (по 1,0 мл);
- калибратор - 2 флакона;
для автоматического анализатора M1URA.
4) - реагент 1 - 8 флаконов (по 82 мл);
- реагент 2 - 4 флакона (по 40 мл);
- реагент 3 - 4 флакона (по 4 мл);
- калибратор - 4 флакона;
для автоматического анализатора ILab Taurus.
5) - реагент 1 - 4 флакона (по 60 мл);
2
--- стр. 3 ---
ч |»
- реагент 2 - 3 флакона (по 20 мл);
- реагент 3 - 3 флакона (по 2,0 мл);
- калибратор - 2 флакона;
для автоматического анализатора ВА400.
6) - реагент 1 - 4 флакона (по 36 мл);
- реагент 2 - 4 флакона (по 10 мл);
- реагент 3 - 4 флакона (по 1,0 мл);
- калибратор - 4 флакона;
для автоматического анализатора Aspect.
3. АНАЛИТИЧЕСКИЕ И ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
3.1 .* Чувствительность - не более 2,0 мкмоль/л.
3.2. * Линейность в диапазоне концентраций конъюгированного билирубина
3,42-171 мкмоль/л - отклонение не более 7 %.
3.3. * Тест на «открытие» - отклонение не более 7 %.
3.4. * Коэффициент вариации результатов измерений - не более 5 %.
3.5. * Допустимый разброс результатов при параллельных определениях одной пробы
разными наборами одной серии - не более 7%.
3.6. Диапазон измерений - 2-171 мкмоль/л.
3.7. Нормальные величины концентрации конъюгированного билирубина в сыворотке и
плазме крови;
- н е более 5,1 мкмоль/л;
Рекомендуется в каждой лаборатории при использовании набора уточнить диапазон
нормальных величин концентрации конъюгированного билирубина у исследуемого контингента
людей.
3.8. Определению концентрации конъюгированного билирубина в сыворотке и
гепаринизированной плазме не мешают гемоглобин в концентрации не более 0,4 г/л и
триглицериды в концентрации не более 1,0 г/л.
*по ГОСТ Р 51352-2013.
4. МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ
4.1. Потенциальный риск применения набора - класс 2а (Приказ М3 РФ от 06.06.2012
№ 4н).
4.2. Набор реагентов предназначен для профессионального применения в клинической
лабораторной диагностике обученным персоналом.
4.3. Реагент 2 содержит соляную кислоту - 170 ммоль/л. Реагент 3 содержит раствор
натрия азотистокислого - 25 ммоль/л. При работе с этими реагентами следует избегать
разбрызгивания и попадания компонентов набора на кожу и слизистые; при попадании
3
--- стр. 4 ---
ч> немедленно промыть поражённое место большим количеством проточной воды.
4.4. При работе с исследуемыми образцами следует соблюдать меры предосторожности,
принятые при работе с потенциально инфекционным материалом. Требования безопасности к
медицинским лабораториям приведены в ГОСТ Р 52905-2007.
4.5. При использовании набора образуются отходы классов А и Б, которые классифици
руются и уничтожаются (утилизируются) в соответствии СанПиН 2.1.3684-21 «Санитарно-
эпидемиологические требования к содержанию территорий городских и сельских поселений, к
водным объектам, питьевой воде и питьевому водоснабжению, атмосферному воздуху, почвам,
жилым помещениям, эксплуатации производственных, общественных помещений, организации
и проведению санитарно-противоэпидемических (профилактических) мероприятий».
4.6. Дезинфекцию посуды и материалов, контактировавших с исследуемыми образцами,
следует проводить по МУ 287-113 «Методические указания по дезинфекции, предстерилизаци-
онной очистке и стерилизации изделий медицинского назначения».
5. ОБОРУДОВАНИЕ И МАТЕРИАЛЫ,
НЕОБХОДИМЫЕ ДЛЯ РАБОТБ1 С НАБОРОМ:
- биохимический анализатор (длина волны 546 (520-560) нм, кювета с длиной оптического
пути не менее 5 мм), поддерживающий температуру жидкости в кювете в процессе анализа
37±0,5 °С (для вариантов комплектации 1, 2);
- биохимический анализатор MIURA (для варианта комплектации 3);
- биохимический анализатор ILab Taurus (для варианта комплектации 4);
- биохимический анализатор ВА400* (для варианта комплектации 5);
- биохимический анализатор Aspect* (для варианта комплектации 6);
- дозаторы механические одноканальные со сменными наконечниками, позволяющие
отбирать объёмы жидкости 10-200, 200-1000 мкл; ?
- пробирки стеклянные вместимостью 10 мл (для вариантов комплектации 1, 2);
- перчатки медицинские диагностические одноразовые;
- таймер (для вариантов комплектации 1, 2);
- термостат (для вариантов комплектации 1,2);
- вода дистиллированная;
- дезинфицирующий раствор.
* Примечание. Допускается применение оборудования другого типа, по своим
характеристикам не уступающего рекомендуемому.
6. АНАЛИЗИРУЕМЫЕ ОБРАЗЦБ1
Негемолизированная сыворотка и гепаринизированная плазма крови человека.
Сыворотку и плазму необходимо защищать от воздействия света. Образцы сыворотки и
плазмы крови можно хранить при комнатной температуре от 18 до 26 °С не более 4 ч, при
4
--- стр. 5 ---
температуре от 2 до 8 °С не более 1 сут или при температуре минус 20 °С и ниже не более 2 нед.
Повторное замораживание образцов сыворотки и плазмы крови не допускается.
7. ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА И РЕГИСТРАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ
7.1. Приготовление диазореагента.
Перед использованием диазореагент готовить путем смешивания реагента 2 и реагента 3 в
соотношении 10:1.
Хранить диазореагент следует в закрытом виде при температуре от 2 до 8 °С не более
7 сут.
7.2. Приготовление калибратора.
Вьщержать флакон с калибратором при температуре от 18 до 25 °С в защищенном от света
месте в течение 30 мин, затем открыть, не допуская потери лиофилизированного материала.
Внести во флакон 1,0 мл дистиллированной воды. Аккуратно закрыть флакон и вьщержать его
10 мин для растворения лиофилизата. По истечении указанного времени содержимое
перемешать путем вращения флакона вручную, избегая образования пены.
Растворенный калибровочный образец конъюгированного билирубина неустойчив, его
необходимо хранить в защищенном от света месте при температуре от 2 до 8 °С не более 2 сут
или при температуре минус 20 °С и ниже не более 2 нед.
7.3. Реагент 1 готов к использованию.
Реагенты после вскрытия флаконов можно хранить в плотно закрытом виде при
температуре от 2 до 25 °С в течение всего срока годности.
7.4. Перед началом работы реагенты нагреть до температуры 37±0,5 °С. На протяжении
всего анализа поддерживать температуру пробы 37±0,5 °С.
7.5. Компоненты реакционной смеси отобрать в количествах, указанных в таблице.
Таблица
Отмерить, мкл Контрольная
(холостая) проба
Опытная проба Калибровочная проба
Реагент 1 500 500 500
Сыворотка (плазма)
крови
_ 50 —
Калибратор — — 50
Вода
дистиллированная
50 — —
Перемешать, вьщержать в течение 5 мин при температуре 37 °С и измерить оптическую
плотность опытной {Еюп) и калибровочной {Eik) проб при длине волны 546 (520-560) нм
против контрольной (холостой) пробы.
Диазореагент 125 125 125
Перемешать, вьщержать точно в течение 5 мин при 37 °С и измерить оптическую плотность
опытной (Е2 0п) и калибровочной (Е2к) проб против контрольной (холостой) пробы. Окраска
растворов неустойчива, поэтому измерение оптической плотности проводится точно в
указанное время.
Примечание. Расход реагента 1 (Р1) и реагента 2 (Р2) на одно измерение зависит от
5
--- стр. 6 ---
i
используемого биохимического анализатора, количество реагента 1, диазореагента и
анализируемого образца может быть пропорционально изменено (при сохранении соотношения
образец : реагент 1 : диазореагент- 2:20:5).
8. РАСЧЕТЫ
Рассчитать концентрацию конъюгированного билирубина (С, мкмоль/л) в сыворотке
(плазме) крови по формуле:
^ Е ,о « -0 ,8 1 х ^С = —------------------— X Ск ,
Е^к-^,Ъ\у~Е^к
где: Еюп и Eion - оптические плотности первого и второго измерения опытной пробы,
соответственно, ед. опт. плотн.;
EiK и EiK - оптические плотности первого и второго измерения калибровочной пробы,
соответственно, ед. опт. плотн.;
Ск - концентрация конъюгированного билирубина в калибраторе, мкмоль/л;
0,81 - коэффициент коррекции, учитывающий разбавление проб диазореагентом.
9. УСЛОВИЯ ТРАНСПОРТИРОВАНИЯ, ХРАНЕНИЯ
И ПРИМЕНЕНИЯ НАБОРА
9.1. Транспортировать изделия еледует транспортом всех видов в крытых транспортных
средствах в соответствии с правилами перевозок, действующими на транспорте данного вида,
при температуре от 2 до 8 °С. Допускаетея транспортирование при температуре от 18 до 25 °С
не более 10 суток.
9.2. Хранение набора в упаковке предприятия-изготовителя должно осуществляться при
температуре от 2 до 8 °С в течение всего срока годности в холодильных камерах или
холодильниках, обеспечивающих регламентированный температурный режим с ежедневной
регистрацией температуры. '
9.3. Срок годности набора - 24 месяца со дня выпуска. Не допускается применение
наборов по истечении срока их годности.
9.4. Реагенты после вскрытия флаконов можно хранить в плотно закрытом виде при
температуре от 2 до 25 °С в течение всего срока годности.
9.5. Диазореагент можно хранить в закрытом виде при температуре от 2 до 8 °С не более
7 сут.
9.6. Калибратор после растворения необходимо хранить в защищенном от света месте при
температуре от 2 до 8 °С не более 2 сут или при температуре минус 20 °С и ниже не более
2 нед.
9.7. Качество набора может проверяться по отечественным и зарубежным контрольным
сывороткам, аттестованным данным методом.
6
--- стр. 7 ---
9.8. Для отбора и добавления анализируемых проб и компонентов набора рекомендуется
использовать механические дозаторы со сменными наконечниками, аттестованные по значению
средней дозы и сходимости результатов дозирования.
Для калибровки можно использовать калибратор на основе сыворотки крови,
зарегистрированный в Российской Федерации, аттестованный данным методом относительно
сертифицированного референтного материала или референтного метода.
9.9. Для получения надежных результатов необходимо строгое соблюдение инструкции по
применению набора.
10. ГАРАНТИЙНЫЕ ОБЯЗАТЕЛЬСТВА
10.1. Производитель гарантирует соответствие выпускаемых изделий требованиям
нормативной и технической документации.
Безопасность и качество изделия гарантируются в течение всего срока годности.
10.2. Производитель отвечает за недостатки изделия, за исключением дефектов, возникших
вследствие нарушения правил пользования, условий транспортирования и хранения, либо
действия третьих лиц, либо непреодолимой силы.
10.3. Производитель обязуется за свой счет заменить изделие, технические и
функциональные характеристики (потребительские свойства) которого не соответствуют
нормативной и технической документации, если указанные недостатки явились следствием
скрытого дефекта материалов или некачественного изготовления изделия производителем.
По вопросам, касаюшимся качества набора «Билирубин прямой», следует обращаться в
АО «Вектор-Бест» по адресу:
630117, г. Новосибирск-117, а/я 492, тел. (383) 227-75-50, тел./факс (383) 252-51-77.
--- стр. 8 ---
ч ;
ГРАФИЧЕСКИЕ СИМВОЛЫ
Символ Наименование символа Символ Наименование символа
nJ
к. J
Изготовитель Дата изготовления
г ~1 Обратитесь к инструкции по при-
Код партии менению или к инструкции по
применению в электронном виде
IbefI Номер по каталогу Медицинское изделие для диагно
стики in vitro
А Оеторожно 'Я Использовать до
у :
Содержимого достаточно для
проведения п тестов :х :Температурный диапазон
J
Не допускать воздействия
солнечного света
Научный сотрудник отдела биохимии
АО «Вектор-Бест» / Н.С. Щербакова
Начальник отдела биохимии
АО «Вектор-Бест», к.б.н. Г.Е. Яковлева
«СОГЛАСОВАНО»
Проректор по научной работе
ФГБОУ ВО НЕМУ Минздрава России
Д.М .Н., профессор