--- стр. 1 ---
от
УТВЕРЖДЕНА
Приказом Росздравнадзора
2010 г. № Щ ) С. Г. Марданлы
2010 г.
ИНСТРУКЦИЯ
ПО ПРИМЕНЕНИЮ НАБОРА РЕАГЕНТОВ ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ
ГЛЮ КОЗЫ В КРОВИ ГЛЮ КОЗООКСИДАЗНЫМ МЕТОДОМ
(«Г люкоза»)
1. Назначение
Набор предназначен для количественного определения концентрации глюкозы в
цельной крови, сыворотке и плазме крови человека в клинико-диагностических и био
химических лабораториях.
Набор рассчитан на проведение 500 определений при расходе 1,0 мл рабочего
раствора реагентов на один анализ.
2. Характеристика
2.1. Принцип действия
При окислении глюкозы в присутствии глюкозооксидазы образуется эквимоляр-
ное количество перекиси водорода; при участии пероксидазы в присутствии фенольно
го реагента перекись водорода окисляет 4-аминоантипирин в окраш енный продукт, ин
тенсивность окраски которого пропорциональна содержанию глюкозы в анализируе
мой пробе и определяется фотометрически при длине волны 500 (490-540) нм.
2.2. Состав набора
• Реагент 1- фосфатный буферный раствор - 2 флакона (по 250 мл).
• Реагент 2 - смесь ферментов, лиофилизат - 2 флакона.
• Реагент 3 - антикоагулянт - 1 флакон (2,25 г).
• Калибратор - калибровочный раствор глюкозы, 10 ммоль/л - 1 флакон (5,0
мл).
3. Аналитические и диагностические характеристики набора
Линейность в диапазоне концентраций от 1,5 ммоль/л до 30 ммоль/л; отклонение
- не более 5,0 %.
Чувствительность - не более 1,0 ммоль/л.
Коэффициент вариации результатов определения - не более 5,0 %.
Качество набора может быть проверено по отечественным или зарубежным кон
трольным сывороткам, аттестованным данным методом.
Нормальные значения:
в цельной капиллярной крови -3,3-5,5 ммоль/л;
в сыворотке и плазме крови - 3,9-6,4 ммоль/л.
Рекомендуется в каждой лаборатории уточнить диапазон значений нормальных
величин.
--- стр. 2 ---
»
4. Меры предосторожности при работе с набором
Потенциальный риск применения набора - класс 1.
Реагент 1 содержит фенол. При работе с ним следует применять индивидуаль
ные средства защиты. В случае попадания раствора на кожу и слизистые необходимо
немедленно промыть пораженное место большим количеством проточной воды. При
попадании внутрь следует немедленно выпить 0,5 л теплой воды и вызвать рвоту.
М еры предосторожности - соблю дение «Правил устройства, техники безопасно
сти, производственной санитарии, противоэпидемического режима и личной гигиены
при работе в лабораториях (отделениях, отделах) санитарно-эпидемиологических уч
реждений системы М инистерства здравоохранения СССР» (М осква, 1981 г.).
При работе с набором следует надевать одноразовые резиновые или пластико
вые перчатки, так как образцы крови человека следует рассматривать как потенциально
инфицированные, способные длительное время сохранять и передавать ВИЧ, вирус ге
патита или любой другой возбудитель вирусной инфекции.
5. Оборудование, материалы и реагенты
• любое фотометрическое оборудование, включая биохимические полуавтома
тические и автоматические анализаторы, длина волны 500 (490-540) нм, кю вета с дли
ной оптического пути 1,0 см;
• таймер;
* • термостат, поддерживающ ий температуру (37+1) °С;
• центрифуга, обеспечивающ ая скорость вращ ения 3000 об/мин;
• пипетки, позволяющие отбирать объемы жидкости 0,01 мл, 0,05 мл, 0,1 мл,
0,45 мл и 1,0 мл;
• цилиндр вместимостью 250 мл;
< • вода дистиллированная;
• перчатки резиновые или пластиковые,
6. А нализируем ы е образцы
Цельная кровь, негемолизированная сыворотка, гепаринизированная или ЭДТА
плазма крови.
7. Проведение анализа
7.1. Приготовление рабочего раствора реагентов
Растворить содержимое одного флакона с реагентом 2 в реагенте 1, перемешать
круговыми движениями, избегая пенообразования.
Рабочий раствор реагентов хранить при температуре (2-8) °С в темном месте в
плотно закрытом флаконе не более 1 месяца.
Внимание! Розовая окраска рабочего раствора реагентов с величиной оптиче
ской плотности до 0,1 ед. опт. пл., измеренной против воды дистиллированной при
длине волны 500 нм в кювете с длиной оптического пути 1,0 см не влияет на правиль
ность определения глюкозы в исследуемом образце.
7.1.1. Приготовление раствора реагента 3
Растворить содержимое флакона с реагентом 3 в 250 мл воды дистиллирован
ной.
Раствор реагента 3 хранить при температуре (2-8) °С в плотно закрытом флаконе
не более 3 месяцев.
Калибратор готов к применению. После вскрытия флакона хранить при темпера
туре (2-8)°С в плотно закрытом флаконе не более 6 месяцев.
2
--- стр. 3 ---
7.2. Проведение анализа
7.2.1. Определение глюкозы в сыворотке (плазме) крови
Компоненты и анализируемые пробы отмерить в количествах, указанных в таб
3
лице 1.
Таблица 1
Отмерить, мл Опытная проба Калибровочная
проба
Контрольная
(холостая) проба
Рабочий раствор
реагентов 1,0 к о 1 1,0
Сыворотка (плазма) крови 0,01 - -
Калибратор - 0,01 -
Вода дистиллированная - - 0,01
Примечание: При работе на полуавтоматических или автоматических биохими
ческих анализаторах количество реагента и анализируемого образца в зависимости от
объема используемой кюветы может быть пропорционально изменено (соотнош ение
сыворотки или плазмы крови к рабочему раствору реагентов должно быть 1:100).
Содержимое пробирок перемешать круговыми движениями, избегая пенообра-
зования, выдержать при температуре (37+1) °С в течение 20 мин. Раствор следует пре
дохранять от действия прямого света. И змерить оптическую плотность опытной ( Ео п ) и
калибровочной ( Ек ) проб против контрольной (холостой) пробы при длине волны 500
(490-540) нм в кювете с длиной оптического пути 1,0 см. Окраска стабильна в течение 1
часа.
7.2.2. Определение глюкозы в цельной крови
Компоненты и анализируемые пробы отмерить в количествах, указанных в таб
лице 2.
Таблица 2
Отмерить, мл Опытная проба Калибровочная
проба
Контрольная
(холостая) проба
Раствор реагента 3 0,45 0,45 0,1
Цельная кровь 0,05 - -
Калибратор - 0,05 -
П еремеш ать и центрифугировать опытную пробу при комнатной температуре
(18-25) °С в течение 10 мин при 3000 об/мин
Надосадочная жидкость 0,1 0,1 -
Рабочий раствор
реагентов 1,0 1,0 1,0
Примечание: Далее провести определение так, как при анализе сыворотки
(плазмы) крови.
8. Регистрация результатов
Длина волны: 500 (490-540) нм;
Длина оптического пути: 1,0 см;
Температура анализа: (37+1) °С;
Измерение: против холостой пробы.
9. Учет результатов реакции
Содержание глюкозы (С, ммоль/л) определить по формуле:
С = — X 10,
я..
--- стр. 4 ---
где: Ео п - оптическая плотность опытной пробы, ед. опт. пл.;
Ек - оптическая плотность калибровочной пробы, ед. опт. пл.;
10 - концентрация глюкозы в калибраторе, ммоль/л.
10. Условия хранения и эксплуатации набора
Набор должен храниться в упаковке предприятия-изготовителя при температуре
(2-8) °С в течение всего срока годности. Допускается хранение наборов при температу
ре до 25 °С не более 5 суток.
Срок годности набора - 1 год.
Рабочий раствор реагентов хранить при температуре (2-8) °С в темном месте в
плотно закрытом флаконе не более 1 месяца.
Раствор реагента 3 хранить при температуре (2-8) °С в плотно закрытом флаконе
не более 3 месяцев.
Калибратор после вскрытия флакона хранить при температуре (2-8)°С в плотно
закрытом флаконе не более 6 месяцев.
При содержании глюкозы в исследуемом образце выше 30 ммоль/л, образец не
обходимо развести физиологическим раствором, анализ повторить и полученный ре
зультат умножить на разведение.
Для получения надежных результатов необходимо строгое соблюдение инст
рукции по применению набора.
По вопросам, касающимся качества набора («Глюкоза») следует обращ аться по
адресу 142530, М осковская обл., г. Электрогорск, ул. Буденного, д. 1, ЗАО «ЭКОлаб»;
тел/факс (49643) 3-30-93, 3-30-85 - отдел сбыта.
Начальник лаборатории
биохимии ЗАО «ЭКОлаб» Т. М. Сиренко
СОГЛАСОВАНО:
Зав. Кафедрой клинической лабораторной
диагностики ГОУ ДПО РМАПО
Р осздравн адзора^^м л^.дщ ф ессор В. В. Долгов