--- стр. 1 ---
УТВЕРЖДЕНА
Приказом Росздравнадзора
«УТВЕРЗДАЮ»
от 2009 г. №
®Й>-«ЭКОлаб»
tJyT. -Марданлы
2010 г.
ИНСТРУКЦИЯ
п о ПРИМЕНЕНИЮ НАБОРА РЕАГЕНТОВ ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ
АКТИВНОСТИ АЛЬФА-АМИЛАЗЫ В СЫВОРОТКЕ, ПЛАЗМЕ КРОВИ
И МОЧЕ
(«Альфа-Амилаза кинетика»)
1. Назначение
Набор предназначен для определения активности альфа-амилазы в сыворотке, плазме
крови и в моче в клинико-диагностических и биохимических лабораториях.
Набор рассчитан на проведение 100 определений при расходе 1,0 мл реагента на один
анализ.
2. Характеристика набора
2.1. Принцип действия
Альфа-амилаза гидролизует синтетический субстрат 2-хлор-4-нитрофенил-а-0-
мальто-триозид (CNPG3) с образованием 2-хлор-4-нитрофенола (CNP).
4-CNPG3 A .M W ta s a-> CNP + мальтотриозид
Скорость образования 2-хлор-4-нитрофенола пропорциональна активности альфа-
амилазы и измеряется фотометрически при длине волны 405 нм.
2.2. Состав набора
Реагент ~ субстратно-буферный раствор - 2 флакона (по 50 мл).
Концентрация компонентов в рабочем растворе:
• MES - 100 ммоль/л, pH 6,0;
• CNPG3 - 2,25 ммоль/л;
• натрия хлорид - 350 ммоль/л;
• кальция ацетат - 6 ммоль/л;
• калия тиоцианат - 900 ммоль/л;
• натрия азид - 0,95 г/л
3. Аналитические и диагностические характеристики набора
Линейность в диапазоне 25-1500 Е/л; отклонение - не более 5 %.
Чувствительность - не более 20 Е/л.
Коэффициент вариации результатов определения - не более 5 %.
Качество набора может быть проверено по отечественньли или зарубежным контроль
ным сывороткам, аттестованным данным методом.
Нормальные величины:
в сыворотке и плазме крови - до 90 Е/л;
в моче - до 450 Е/л;
Рекомендуется в каждой лаборатории уточнить диапазон значений нормальных величин.
--- стр. 2 ---
4. Меры предосторожности при работе с набором
Потенциальный риск применения набора - класс 1.
В состав набора входит калия тиоционат и азид натрия. При работе с реагентом сле
дует соблюдать осторожность и не допускать попадания на кожу и слизистые; при попада
нии немедленно промыть пораженное место большим количеством проточной воды. При по
падании внутрь следует выпить 0,5 л теплой воды и вызвать рвоту.
Меры предосторожности - соблюдение " Правил устройства, техники безопасности,
производственной санитарии, противоэпидемического режима и личной гигиены при работе
в лабораториях (отделениях, отделах) санитарно-эпидемиологических учреждений системы
Министерства здравоохранения СССР" (Москва, 1981 г.).
При работе с набором следует надевать одноразовые резиновые или пластиковые пер
чатки, так как образцы крови человека следует рассматривать как потенциально инфициро
ванные, способные длительное время сохранять и передавать ВИЧ, вирус гепатита или лю
бой другой возбудитель вирусной инфекции.
5. Оборудование, материалы и реагенты
• фотометрическое оборудование, длина волны 405 нм; термостатируемая кювета с
длинной оптического пути 1,0 см;
• 0,9 % раствор натрия хлористого (физиологический раствор);
• пипетки, позволяющие отбирать объем жидкости 10, 20 и 1000 мкл;
• перчатки резиновые или пластиковые.
6. Анализируемые пробы
Негемолизированная сыворотка или гепаринизированная плазма крови. Моча
7. Проведение анализа
7.1» Подготовка к анализу
Реагент готов к использованию.
После вскрытия реагент стабилен в течение 2 месяцев при хранении в плотно закры
том флаконе в темном месте при температуре (2-8) °С.
7.2. Проведение анализа
Перед проведением анализа реагент довести до температуры (37 ± 1)"С.
Раствор реагента и анализируемые пробы отмерить в количествах, указанных в таблице:
Таблица
Отмерить, мкл Опытная проба |
Раствор реагента 1000
Сыворотка (плазма) крови 20
Моча 10
Примечание. При использовании кюветы меньшего объема расход реагента может
быть уменьшен при сохранении указанных выше соотношений.
Перемешать и поместить в термостатируемое отделение прибора с температурой (37 ±
1) ”С. Через 1 мин измерить оптическую плотность пробы {Епр). Измерение оптической плот
ности повторить 3 раза с интервалом в 1 мин.
8. Регистрация результатов
Длина волны: 405 нм;
Длина оптического пути: 1,0 см;
Температура анализа: (37 ± 1) ^ ’С;
Измерение: относительно воздуха.
9. Учет результатов реакции
Рассчитать изменение оптической плотности в минуту ( /sE. ) для каждого определе
ния по формуле (1):
--- стр. 3 ---
А£, = А Е , = Е,-Е, (1),
где Е] - значение оптической плотности пробы после инкубации (задержка);
£ ^2,3,4 - значение оптической плотности пробы после 1, 2, 3 минуты реакции, соот
ветственно.
Рассчитать среднее арифметическое значение изменения оптической плотности в ми
нуту ( АЕ^^/ мин ) для анализируемой пробы по формуле (2):
п р
где А £,, AEj , А Е ^ - изменения оптической плотности проб в первую, вторую и
третью минуты реакции;
3 - количество минут, в течение которых проводилось измерение.
Рассчитать активность альфа-амилазы в сыворотке (плазме) крови (А, Е/л) по формуле (3):
А = АЕ„!мин X 3954пр (3),
Рассчитать активность альфа-амилазы в моче (А, Е/л) по формуле (4):
А = AE^^i мин X 7908пр (4),
3954, 7908 - факторы расчёта активности альфа-амилазы, Е/л.
10. Условия хранения и эксплуатации набора
Набор должен храниться в упаковке предприятия-изготовителя при температуре (2-8)
в течение всего срока годности. Допускается хранение при температуре до + 25 "С не бо
лее 5 сут.
Срок годности набора - 1 год.
После вскрытия реагент можно хранить при температуре (2-8) “С в плотно закрытом
флаконе не более двух месяцев..
При активности альфа-амилазы выше 1500 Е/л пробу следует развести физиологиче
ским раствором в 5 раз и полученный результат умножить на 5.
По вопросам, касающимся качества набора «Альфа-Амилаза кинетика» следует обра
щаться по адресу 142530, Московская обл., г, Электрогорск, ул. Будённого, д. 1, ЗАО «ЭКО-
лаб»; тел/факс (49643) 3-30-93, 3-30-85 - отдел сбыта.
Начальник лаборатории
биохимии ЗАО «ЭКОлаб»
СОГЛАСОВАНО:
П ^ ь н о г о
з'е-ичз^л *Зав. кафедрой клинической лаборатовн^й
диагностики ГОУ ДНО «РМАПО ^
д.м.н., профессор
Т. м. Сиренко
В. В. Долгов