--- стр. 1 ---
УТВЕРЖ ДЕНА «УТВЕРЖ ДАЮ »
Приказом Роздравнадзора «Санкт-Петербургское
гтвоиспытателей »
от 200 г. Х о
А.П.Стрелков
ИНСТРУКЦИЯ
по применению набора реагентов для определения активности
аспартатаминотрансферазы в сыворотке и плазме крови
КлиниТест-АСТ
1. Назначение.
Набор предназначен для количественного определения активности ACT в сыворотке и
плазме крови человека в клинико-диагностических и биохимических лабораториях и в на
учно-исследовательской практике.
Набор рассчитан на проведение 100 или 500 определений при суммарном расходе 1,0
мл реагентов на один анализ.
2. Характеристика набора.
2.1. Принцип действия.
ACT катализирует реакцию переаминирования между L-аспарагиновой кислотой и 2-
оксоглутаратом с образованием L-глутамата и оксалоацетата. В ходе последующей окисли-
тельно-восстановительной реакции между поксалоацетатом и КАДН, катализируемой ма-
латдегидрогеназой и лактатдегидрогеназой, в эквимолярных количествах получаются малат
и NA/f^. Концентрация NAД^ измеряется фотометрически при длине волны 340 нм в кювете
с длиной оптического пути 10 мм Скорость уменьшения концентрации NAflH прямо про
порциональна активности ACT.
2.2. Состав набора:
- Реагент 1 - триС“ (оксиметил)аминометан, 0,1 моль/л, натрия гидроокись, 0,1 моль/л,
малатдегидрогеназа, 800 Е/л, лактатдегидрогеназа, 600 Е/л, L-аспарагиновая кислота, 0,2
моль/л, натрия азид, 1 г/л - 1 флакон (80 мл) или 4 флакона (100 мл);
- Реагент 2 -ЫАДН, 0,18 ммоль/л, трис-(оксиметил)аминометан, 0,1 моль/л, альфа>
кетоглутаровая кислота, 15 ммоль/л, натрия азид, 1 г/л - 1 флакон (20 мл) или 1 флакон (100
мл).
Инструкция составлена старшим научным сотрудником РОО СПбОЕ С А . Коньковым
и зав. отд. лабораторной диагностики «ФГУ НИИ онкологии им. Н.Н. Петрова Росмедтех-
нологий», Д .М .Н ., В.К. Гуркало
--- стр. 2 ---
3. Аналитические и диагностические характеристики набора.
Чувствительность - не более 15 Е/л.
Линейность. Набор обеспечивает линейность при определении активности ACT в диа*
пазоне от 20 до 240 Е/л с отклонением от линейности не более 5%.
Коэффициент вариации - не более 5%.
Качество набора может проверяться по отечественным или зарубежным контрольным
сывороткам, аттестованным данным методом.
Активность ACT в норме составляет: в сыворотке и плазме крови - 6-40 Е/л.
4. Меры предосторожности при работе с набором.
Меры предосторожности при работе с набором - соблюдение «Правил устройства,
техники безопасности, производственной санитарии, противоэпидемического режима и
личной гигиены при работе в лабораториях (отделениях, отделах) санитарно- эпидемиоло
гических учреждений системы Министерства здравоохранения СССР»(Москва, 1981 г.).
При работе с набором следует надевать одноразовые резиновые или пластиковые пер
чатки, так как образцы крови человека следует рассматривать как потенциально инфициро
ванные, способные длительное время сохранять и передавать ВИЧ, вирус гепатита или лю
бой другой возбудитель вирусной инфекции.
5. Оборудование, материалы и реагенты:
- биохимический анализатор, длина волны 340 нм, кювета с длиной оптического пути
10 мм;
- пипетки, позволяющие отбирать объемы жидкостей 0,1 и 1,0 мл;
- пробирки вместимостью 5-10 мл;
- вода дистиллированная;
- перчатки резиновые или пластиковые.
6. Анализируемые пробы.
Негемолизированная сыворотка или плазма крови.
7. Проведение анализа
7.1. Приготовление рабочего реагента.
Смешать необходимые количества реагентов 1 и 2 в соотношении 4:1. Рабочий реагент
стабилен при температуре 2-8° С не более 14 суток.
7.2. Проведение анализа.
Компоненты реакционной смеси отбирать в количествах, указанных в табли-
це. Непосредственно перед измерением нагреть рабочий реагент до 37° С.
Таблица
Внести Опытная проба
Сьюоротка, плазма крови 100 мкл
Рабочий реагент 1000 мкл
8. Регистрация результатов.
Перемешать и измерить оптическую плотность через 60 секунд (Ei) при длине волны
340 нм в кювете с длиной оптического пути 10 мм и затем еще ровно через 60 секунд (Е 2).
--- стр. 3 ---
9. Учет результатов реакции.
Рассчитать разницу ДЕ = Е2-Н1.
Активность ACT в анализируемом образце рассчитагь по формуле:
А-АЕх 1746
где: ДЕ - изменение оптической плотности за одну мииугу, ед. о т , плоти.;
1746 - фактор пересчета ;угя выражения акгивности АС1' в 1г/л.
Условия хранения и эксплуатации набора.
Хранение набора можно производить при температуре +2-8'’ С в упаковке предпри
ятия-изготовителя в течение всего срока годности (12месяцев).
Реагенты 1 и 2 после вскрытия флаконов Moiyi храниться при температуре 2-8^С) в те
чение всего срока годности наборов при условии достаточной герметичности флаконов.
Для получения надежных результатов необходимо строгое соблюдение инструкции но
применению набора.
По вопросам, касающимся качества набора КлиниТест-АС1’ , следует обращаться в:
- РОО «Сант-Петербургское общество естествоиспытателей» по a;ipccy: 199034, г.
Санк'г-Петербург, Университггская набережная, 7/9, тел.: (812) 3289663, 4506779;
Старший научный сотрудник
РОО СПбОЕ
Заведующий отделением
лабораторной диа 1ностики «Ф1"У НИИ онкологии
им. Н.Н. Петрова Росмедтехнологий»,
доктор медицинских наук,
С.Л.Коньков
В.К. Гуркало