--- стр. 1 ---
УТВЕРЖДЕНА «УТВЕРЖДАЮ»
Приказом Роздравнадзора «Саньст-Петербургское
гествоиспытателей»
от 200 г. № _ _ _ _ _
А.П.Стрелков
ИН( ___
по применению набора реагентов для о^^оления содержания мочевины
в сьгаоротке, плазме крови и моче
КлиниТест-Мочевина
1. Назначение.
Набор предназначен для количественного определения мочевины в сыворотке, плазме
крови и моче человека в клинико-диагностических и биохимических лабораториях и в науч
но-исследовательской практике.
Набор рассчитан на проведение 100 или 500 определений при суммарном расходе 1,0 мл
реагентов на один анализ.
2. Характеристика набора.
2.1. Принцип действия.
Мочевина гидролизуется в присутствии уреазы с образованием иона аммония и СО 2.
Ионы аммония реагируют с альфа-кетоглутаратом и НАДИ в присутствии глутаматдегидро-
геназы (ГЛДГ) с образованием глутамата и N A D "^.
Мочевина + Н 2О + 2Н^
N H / + а>кетоглутарат + КАДН > Н2О + 'ЫАХ + L-глутамат
Концентрация КАД^ измеряется фотометрически при длине волны 340 нм в кювете с
длиной оптического пути 10 мм. Скорость окисления КАДИ в КАД"^ пропорциональна кон
центрации мочевины в пробе.
2.2. Состав набора:
- Реагент 1: трис-(оксиметил)аминометан, 0,08 моль/л, соляная кислота, 0,1 моль/л, уреа-
за, 10000 Е/л, альфа-кетоглутаровая кислота, 6 ммоль/л, натрия азид, 1 г/л - 1 флакон (80 мл)
или 4 флакона (100 мл);
- Реагент 2: глутаматдегидрогеназа, 1500 Е/л, НАДН, 0,32 ммоль/л, трис-
(оксиметил)аминометан, 0,08 моль/л, соляная кислота, 0,1 моль/л, натрия азид, 1 г/л ~ 1 фла
кон (20 мл) или 1 флакон (100 мл);
- Калибратор: мочевина, 8,33 ммоль/л, натрия азид, 1 г/л, - 1 флакон (5 мл).
3. Аналитические и диагностические характеристики набора.
Чувствительность - не более 1,0 ммоль/л.
Линейность. Набор обеспечивает линейность при определении содержания мочевины в
диапазоне от 2,0 до 33,3 ммоль/л с отклонением от линейности не более 5%.
Инструкция составлена старшим научным сотрудником НПЦ "Эко-Сервис" РОО СПбОЕ
С А.Коньковым и зав. каф. СПбГМУ д.м.н., профессором В.Л.Эмануэлем
--- стр. 2 ---
Коэффициент вариации - не более 5%.
Качество набора может проверяться по отечественным или зарубежным контрольным
сывороткам, аттестованным данным методом.
Содержание мочевины в норме составляет: в сыворотке и плазме крови - 2,5 ~ 8,3
ммоль/л; в моче - 330 > 580 ммоль/сут.
4. Меры предосторожности при работе с набором.
Меры предосторожности при работе с набором - соблюдение «Правил устройства, тех
ники безопасности, производственной санитарии, противоэпидемического режима и личной
гигиены при работе в лабораториях (отделениях, отделах) санитарно- эпидемиологических
учреждений системы Министерства здравоохранения СССР»(Москва, 1981 г.).
При работе с набором следует надевать одноразовые резиновые или пластиковые пер
чатки, так как образцы крови человека следует рассматривать как потенциально инфициро
ванные, способные длительное время сохранять и передавать ВИЧ, вирус гепатита или любой
другой возбудитель вирусной инфекции.
5. Оборудование, материалы и реагенты:
- биохимический анализатор, длина волны 340 нм (490-515 нм), кювета с длиной опти
ческого пути 10мм;
- пипетки, позволяющие отбирать объемы жидкостей 0,01 и 1,0 мл;
- пробирки вместимостью 5 -1 0 мл;
- вода дистиллированная;
- перчатки резиновые или пластиковые.
6. Анализируемые пробы.
Негемолизированная сыворотка или плазма крови и моча человека. Мочу перед опреде
лением следует развести дистиллированной водой в 50 раз.
7. Проведение анализа
7.1. Приготовление рабочего реагента.
Смешать необходимые количества реагентов 1 и 2 в соотношении 4:1. Рабочий реагент
стабилен при температуре 2-8° С не более 14 суток.
7.2. Проведение анализа.
Компоненты реакционной смеси отбирать в количествах, указанных в таблице .
Непосредственно перед измерением нагреть рабочий реагент до 37° С.
Внести Опытная проба Калибровочная проба
Сыворотка, плазма кров1
или разбавленная в 50 раз мо^ - 10 мкл
Калибратор 10 мкл -
Рабочий реагент 1000 мкл 1 О О О мкл
8. Регистрация результатов.
Перемешать и измерить оптическую плотность через 30 секунд (Ei) при длине волны
340 нм в кювете с длиной оптического пути 10 мм и затем еще ровно через 60 секунд (Е 2).
--- стр. 3 ---
9. Учет результатов реакции.
Концентрацию мочевины в анализируемом образце рассчитать по формуле:
С = ^ ^ х 8 , 3 3
где: и - разность оптических плотностей первого и второго измерений опыт
ных и калибровочных проб, ед.онт.пл.,
8,33 - концентрация мочевины в калибраторе, ммоль/л.
Содержание мочевины в суточной моче определить по формуле:
M = C x V ,
где: С - концентрация мочевины, ммоль/л;
V - количество мочи, собранной за сутки, л;
Условия хранения и эксплуатации набора.
Хранение набора можно производить при температуре +2-8° С в упаковке предприятия-
изготовителя в течение всего срока годности (12месяцев).
Реагенты 1 и 2 после вскрьп'ия флаконов могут храниться при температуре 2-8^С в тече
ние всего срока годности наборов при условии достаточной герметичности флаконов.
Калибратор после вскрытия флакона можно хранить при температуре 2-8^С не более 3
месяцев при условии достаточной герметичности флакона.
Для получения надежных результатов необходимо строгое соблюдение инструкции по
применению набора.
По вопросам, касающимся качества набора КлиниТест-Мочевина, следует обращаться в:
- РОО «Сант-Петербургское общество естествоиспытателей» по адресу: 199034, г.
Санкт-Петербург, Университетская набережная, 7/9, тел.: (812) 3289663, 4506779;
Старший научный сотрудник РОО СПбОЕ,
к.хф.н. С.А.Коньков
Заведующий кафедрой клинической
лабораторной диагностики СПбМГУ,
доктор медицинских наук, профессор ^ ^ В.Л.Эмануэль