--- стр. 1 ---
«УТВЕРЖДАЮ»
Генеральный директор
ИНСТРУКЦИЯ
по применению набора реагентов для вьщеления нуклеиновых кислот из образцов сьгооротки
и плазмы крови
«РеалБест ЭкстраМаг»
(вариант 500)
1. НАЗНАЧЕНИЕ
1.1. Набор реагентов для вьщеления нуклеиновых кислот из образцов сыворотки и
плазмы крови «РеалБест ЭкстраМаг» предназначен для вьщеления нуклеиновых кислот (ДНК
и РНК) из образцов сьгооротки и плазмы крови (включая минипулы) как ручным способом,
так и с использованием процессора магнитных частиц для очистки нуклеиновых кислот
«KingFisher Flex» («Thermo Fisher Scientific», Финляндия) или «RealFly» (АО «Вектор-Бест-
Балтика», Россия). Допускается адаптация других станций для автоматического вьщеления
нуклеиновых кислот для работы с набором.
1.2. Набор применяется с наборами для качественного и количественного определения
нуклеиновых кислот серии «РеалБест».
1.3. Вариант 500 набора рассчитан на вьщеление нуклеиновых кислот из 96 образцов,
включая контрольные образцы, объемом 500 мкл.
2. ХАРАКТЕРИСТИКА НАБОРА
2.1. Принцип метода.
Принцип действия набора «РеалБест ЭкстраМаг» заключается в температурной
обработке образца многокомпонентным лизирующим раствором, который разрушает
комплексы нуклеиновых кислот с белками, и последующей сорбции нуклеиновых кислот на
поверхности магнитных частиц. Далее проводятся серии отмывок, в ходе которых
нуклеиновые кислоты остаются сорбированными на поверхности магнитных частиц, и
элюция, в процессе которой нуклеиновые кислоты переходят с поверхности частиц в
Инструкция составлена сотрудниками АО «Вектор-Бест»: директором
по производству Ткачевым В.К и нач. отделения производства ПЦР наборов Трухиной А.В.
--- стр. 2 ---
элюирующий раствор. После этого проба готова к постановке ПЦР/ОТ-ПЦР.
Эффективность пробоподготовки в каждом исследуемом образце оценивается с помощью
внутреннего контрольного образца (ВКО), входящего в состав набора и проходящего все
стадии пробоподготовки и следующих за ней ПЦР или ОТ-ПЦР вместе с выделяемыми
нуклеиновыми кислотами. Положительный контрольный образец (ПКО) входит в состав ПЦР-
наборов серии «РеалБест». ПКО проходит процедуру вьщеления наравне с биологическими
пробами и отрицательным контрольным образцом (ОКО).
2.2. Состав набора:
Компонент набора (сокращение)
Описание.
Количество
Лизирующий раствор (ЛР)
Жидкость от бесцветного до жёлтого цвета, допускается наличие осадка,
исчезающего при нагревании, содержит гуанидин тиоцианат (57,3 %)
_______
4 флакона
по 16 мл
Раствор для отмывки № 1 (РО1)
Жидкость от бесцветного до жёлтого цвета, допускается наличие осадка,
исчезающего при нагревании, содержит гуанидин тиоцианат (57,3 %) _______
4 флакона
по 16 мл
Раствор для отмывки № 2 (Р02)
Бесцветная жидкость
4 флакона
по 56 мл
Элюирующий раствор (ЭР)
Бесцветная жидкость, содержит натрия азид (0,05%)
4 флакона
по 10 мл
Сорбент (суспензия магнитных частиц)
Содержит натрия азид (0,05%)
4 флакона
по 1,6 мл
Отрицательный контрольный образец (ОКО)
Жидкость желтого цвета, содержит натрия азид (0,05%)
2 флакона
по 12 мл
Внутренний контрольный образец (ВКО)
Бесцветная жидкость, содержит натрия азид (0,05%)
2 флакона
по 1 мл
в комплект поставки входят:
- набор реагентов;
- инструкция по применению и паспорт (количество копий определяется в договоре на по
ставку продукции).
Инструкция по применению и паспорт размещены на сайте http://www.vector-best.ru.
2.3. Условия применения.
Набор применяется с наборами для качественного и количественного определения нук
леиновых кислот серии «РеалБест».
Набор рассчитан на проведение выделения нуклеиновых кислот из 96 образцов объёмом
500 мкл, включая контрольные.
Показания к применению. Набор предназначен для выделения нуклеиновых кислот
(ДНК и РНК) из образцов сыворотки и плазмы крови (включая минипулы) как ручным спосо
бом, так и с использованием процессора магнитных частиц для очистки нуклеиновых кислот
--- стр. 3 ---
«KingFisher Flex» («Thermo Fisher Scientific», Финляндия) или «RealFly» (AO «Вектор-Бест-Бал-
тика»). Допускается адаптация других станций для автоматического выделения нуклеиновых
кислот для работы с набором.
Противопоказания. Противопоказаний к применению нет (не применимо).
3. ТЕХНИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
3.1. Эффективность выделения РНК. Эффективность выделения РНК контролируется по
четырем образцам с содержанием 50 копий/мл РНК BTG, приготовленным из стандартного об
разца предприятия СОН РНК BTG (СОН 05-2-519), как процентное содержание образцов, опре
деленных набором «РеалБест РНК BFG» (АО «Вектор-Бест») как положительные.
3.2. Эффективность вьщеления ДНК. Эффективность выделения ДНК контролируется по
четырем образцам с содержанием 100 копий/мл ДНК Parvovirus В19, приготовленным из стан
дартного образца предприятия СОН ДНК Parvovirus В19 (СОН 05-2-462), как процентное со
держание образцов, определенных набором «РеалБест ДНК Parvovirus В19» (АО «Вектор-
Бест») как положительные.
3.3. Влияние потенциальных интерферирующих веществ. Повышенное содержание общего
белка (до 120 мг/мл), альбумина (до 60 мг/мл), триглицеридов (до 37 мМ), билирубина (до 342
мкМ), гемоглобина (до 2 мг/мл) и ДНК человека (до 2 мкг/мл) в образцах сыворотки или плазмы
не оказывает влияния на эффективность выделения нуклеиновых кислот.
3,4. - Эффективность выделения ДНК/РНК, определенная на 137 клинических образцах
сыворотки (плазмы) крови, составила 100 % (интервал 97,3 % - 100 %, с доверительной веро
ятностью 95 %).
4. МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ
4.1. Потенциальный риск применения набора - класс 26 (Приказ М3 РФ от 06.06.2012
№ 4н).
4.2. При работе с набором следует соблюдать требования законодательства в сфере са
нитарно-эпидемиологического благополучия. Набор предназначен для профессионального
применения в клинической лабораторной диагностике. К работе с набором допускается только
специально обученный персонал с высшим или средним медицинским, или биологическим обра
зованием, прошедший подготовку на лицензированных курсах первичной специализации по ра
боте с патогенными для человека микроорганизмами и получивший дополнительное специальное
образование на курсах повышения квалификации по молекулярно-биологическим методам диа
гностики (например, врач клинической лабораторной диагностики, медицинский лаборатор
ный техник (фельдшер-лаборант), иной специалист).
--- стр. 4 ---
4.3. ОКО, ВКО, сорбент и элюирующий раствор содержат натрия азид, лизирующий
раствор и раствор для отмывки №1 содержат гуанидина тиоцианат в концентрациях, указан
ных в п. 2.2 «Состав набора». При работе с указанными растворами следует надевать одно
разовые медицинские перчатки, избегать попадания их компонентов на кожу и слизистые;
при попадании немедленно промыть поражённое место большим количеством проточной
воды.
4.4. Для предотвращения контаминации необходимо территориально разделять этапы
вьщеления ДНК/РНК и постановки ПЦР/ОТ-ПЦР согласно МУ 1.3. 2569-09 «Организация ра
боты лабораторий, использующих методы амплификации нуклеиновых кислот при работе с
материалом, содержащим микроорганизмы I-IV групп патогенности».
4.5. При работе с набором необходимо надевать одноразовые медицинские перчатки,
использовать только одноразовые наконечники с фильтром для дозаторов.
4.6. Каждое рабочее место должно быть снабжено собственным набором дозаторов пе
ременного объема, необходимыми вспомогательными материалами и оборудованием. Запре
щается их перемещение между рабочими местами.
4.7. Не допускается использование одних и тех же наконечников при добавлении раз
ных образцов и реагентов.
4.8. После окончания работ для дезинфекции и предотвращения контаминации все рабочие
поверхности и оборудование следует подвергнуть действию бактерицидных УФ ламп в течение 1
часа. Затем обработать регламентированными санитарными правилами дезинфицирующими сред
ствами {такими, как: 0,8%раствор «Дезомакс-Иннова»; 1%раствор «Диабак»; 0,5%раствор «Ли-
зафин»; 1% раствор «Мистраль»; Р/о раствор «Велтолен»).
4.9. Все использованные одноразовые материалы подвергать обработке дезинфициру
ющими средствами с последующей утилизацией (см. МУ 287-113 «Методические указания по
дезинфекции, предстерилизационной очистке и стерилизации изделий медицинского назначе
ния»).
4.10. При использовании набора образуются отходы классов А и Б, которые классифици
руются и уничтожаются (утилизируются) в соответствии с СанПиН 2.1.3684-21 «Санитарно-эпи
демиологические требования к содержанию территорий городских и сельских поселений, к
водным объектам, питьевой воде и питьевому водоснабжению, атмосферному воздуху, поч
вам, жилым помещениям, эксплуатации производственных, общественных помещений, орга
низации и проведению санитарно-противоэпидемических (профилактических) мероприятий».
5. ОБОРУДОВАНИЕ И МАТЕРИАЛЫ
-ПЦР-бокс (например, бокс абактериальной воздушной среды типа БАВп-01-"Лами-
нар-С", ЗАО «Ламинарные системы», Россия, РУ № ФСР 2010/07111);
--- стр. 9 ---
7.8. Коротким центрифугированием сбросить капли со стенок пробирок.
7.9. Перенести пробирки в магнитный штатив и выдержать 2 минуты.
7.10. Из каждой пробирки с помощью медицинского отсасывателя максимально полно
удалить надосадочную жидкость, используя отдельный наконечник (без фильтра) и не
прикасаясь к осадку магнитных частиц.
7.11. В каждую пробирку внести по 500 мкл раствора для отмывки № 1, перемешать на
вортексе 5-10 секунд. Коротким центрифугированием сбросить капли со стенок пробирок.
7.12. Перенести пробирки в магнитный штатив и выдержать 2 минуты.
7.13. Из каждой пробирки с помощью медицинского отсасывателя максимально полно
удалить надосадочную жидкость, используя отдельный наконечник (без фильтра) и не
прикасаясь к осадку магнитных частиц.
7.14. В каждую пробирку внести по 1 мл раствора для отмывки №2, перемешать на
вортексе 5-10 секунд. Коротким центрифугированием сбросить капли со стенок пробирок.
7.15. Перенести пробирки в магнитный штатив и вьщержать 2 минуты.
7.16. Из каждой пробирки с помощью медицинского отсасывателя максимально полно
удалить надосадочную жидкость, используя отдельный наконечник (без фильтра) и не
прикасаясь к осадку магнитных частиц.
7.17. Повторить процедуру отмывки раствором для отмывки № 2 с п.7.14, по п.7.16.
7.18. В каждую пробирку внести по 200 мкл элюирующего раствора, не задевая стенок. При
касании стенки или жидкости в пробирке наконечник необходимо сменить!
7.19. Аккуратно встряхнуть пробирки до достижения содержимым состояния
гомогенной суспензии (не допуская попадания капель на крышку), переместить пробирки в
термошейкер и инкубировать с частотой вращения 1300 об/мин при 90 °С в течение 5 минут.
7.20. Коротким центрифугированием сбросить капли со стенок пробирок.
7.21. Перенести пробирки в магнитный штатив и выдержать 10 минут.
7.22. Образцы из пробирок, находящихся в магнитном штативе, раскапать в реакционные
смеси для ПЦР- и/или ОТ-ПЦР-анализа (согласно инструкции по применению набора для
выявления НК).
Внимание! Рекомендуется проводить раскапывание выделенной НК в реакционные
смеси для ПЦР- и/или ОТ-ПЦР-анализа сразу после окончания процедуры пробоподготовки.
При необходимости выделенную НК хранить при температуре (2-8) °С не более, чем
24 часа.
8. ВЫДЕЛЕНИЕ НК С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ KINGFISHER FLEX или REALFLY
8.1. Промаркировать 6 глубоколуночных планшетов: ГР, ЛР, Р01, ЭР - по 1 планшету;
--- стр. 10 ---
f
P02 - 2 планшета. Один комплект планшетов позволяет провести выделение НК из 96 об
разцов, включая контроли. При внесении реагентов и образцов ориентировать планшеты сле
дует таким образом, чтобы лунка А1 находилась слева сверху.
8.2. Составить схему размещения контрольных и исследуемых образцов в глубоколу
ночном планшете на трафарете (Таблица 1). Перечень и требуемое количество контрольных
образцов указано в инструкции к набору для ПЦР (ОТ-ПЦР).
Таблица 1.
Пример схемы размещения контрольных и исследуемых образцов.
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12
ОКО №4 №12
спко №5 ...
пко №6
пко №7
пко №8
№1 №9
№2 №10
№3 №11
А
В
С
D
Е
F
G
Н
8.3. В глубоколуночный планшет ГР поместить насадку на магнитную головку.
8.4. Внести в соответствующие лунки планшетов растворы в соответствии с таблицей 2.
Для внесения растворов использовать многоканальный электронный дозатор и ванночки для
реагентов. Раствор для отмывки №2 и элюирующий раствор могут быть также внесены с по
мощью микропланшетного раскапывателя.
Таблица 2.
Раствор Объем раствора
на лунку, мкл
Маркировка
планшета
Раствор для отмывки JV b 1 500 Р01
Раствор для отмывки № 2 1000 Р02
Раствор для отмывки ЛЬ 2 1000 Р02
Элюирующий раствор 200 ЭР
8.5. Во флакон с лизирующим раствором добавить 350 мкл ВКО.
8.6. Тщательно перемешать на вортексе содержимое флакона с сорбентом и перенести
все содержимое (1,6 мл) во флакон с лизирующим раствором с ВКО.
Внимание! Лизирующый раствор после вскрытия и добавления ВКО и сорбента хране
нию не подлежит.
8.7. Аккуратно перемешать флакон с лизирующим раствором с ВКО и сорбентом пере
ворачиванием 8-10 раз, избегая образования пены и внести в лунки глубоколуночного план
шета ЛР по 550 мкл лизирующего раствора с ВКО и сорбентом. Для внесения раствора
10
--- стр. 11 ---
использовать многоканальный электронный дозатор и ванночку для реагентов.
Внимание! В процессе розлива лизирующего раствора с ВКО и сорбентом необходимо
следить, чтобы суспензия оставалась однородной. Необходимо придерживаться следующего
правила: с момента последнего перемешивания лизирующего раствора с ВКО и сорбентом
должно проходить не более 1 минуты; если за это время процесс розлива лизирующего рас
твора с ВКО и сорбентом не был завершён, следует аккуратно перемешать суспензию пипе-
тированием, после чего продолжить розлив.
8.8. В лунку глубоколуночного планшета ЛР, обозначенную в таблице 1 как «ОКО»,
внести 500 мкл ОКО, используя наконечники с аэрозольным барьером.
8.9. В лунку глубоколуночного планшета ЛР, обозначенную в таблице 1 как «СПКО»,
внести 100 мкл СПКО и 400 мкл ОКО, используя наконечники с аэрозольным барьером.
В лунку глубоколуночного планшета ЛР, обозначенную в таблице 1 как «ПКО» (KOI,
К02 при необходимости) внести 30 мкл ПКО (KOI, К02) и 470 мкл ОКО, используя нако
нечники с аэрозольным барьером.
8.10. В остальные лунки глубоколуночного планшета ЛР внести по 500 мкл
исследуемых образцов согласно таблице 1, используя наконечники с аэрозольным
барьером.
8.11. Включить процессор «KingFisher Flex» («RealFly») и персональный компьютер,
управляющий процессором.
8.12. Запустить на персональном компьютере программное обеспечение «KingFisher
Flex» («RealFly») и выбрать протокол выделения НК «РеалБест ЭкстраМаг 500».
Подробная инструкция по запуску протокола выделения с использованием программ
ного обеспечения приведена на сайте https://vector-best.ru/.
8.13. По запросу программного обеспечения процессора «KingFisher Flex» («RealFly»)
установить глубоколуночные планшеты в прибор: ГР, ЭР, Р02, Р02, Р01, ЛР. После
установки планшета ЛР запустится процесс выделения НК.
8.14. По окончании протокола выделения НК прибор подаст звуковой сигнал.
8.15. Образцы, находящиеся в глубоколуночном планшете ЭР, раскапать в
реакционные смеси для ПЦР- и/или ОТ-ПЦР-анализа (согласно инструкции по применению
набора для выявления НК).
Внимание! Рекомендуется проводить раскапывание выделенной НК в реакционные
смеси для ПЦР- и/или ОТ-ПЦР-анализа сразу после окончания процедуры пробоподготовки.
При необходимости выделенную НК хранить при температуре (2-8) °С не более, чем 24
часа.
11
--- стр. 12 ---
9. УСЛОВИЯ ТРАНСПОРТИРОВАНИЯ, ХРАНЕНИЯ И ПРИМЕНЕНИЯ НАБОРА
9.1. Транспортировать изделия следует транспортом всех видов в крытых транспортных
средствах в соответствии с правилами перевозок, действующими на транспорте данного вида,
при температуре (2-8) °С. Допускается транспортирование при температуре до 26 °С не более
10 суток.
9.2. Хранение набора реагентов в упаковке предприятия-изготовителя должно осуществ
ляться при температуре (2-8) °С в течение всего срока годности в холодильных камерах или
холодильниках, обеспечивающих регламентированный температурный режим с ежедневной
регистрацией температуры.
9.3. При дробном использовании вскрытые компоненты набора следует хранить не более
1 месяца при температуре (2-8) °С. Допускается хранение лизирующего раствора и раствора
для отмывки № 1 при температуре (18-26) °С в течение 7 суток.
9.4. Срок годности набора - 18 месяцев со дня выпуска. Не допускается применение
наборов по истечении срока их годности.
9.5. Для получения надёжных результатов необходимо строгое соблюдение данной ин
струкции по применению набора.
9.6. Изделие не требует технического обслуживания и не подлежит ремонту.
10. ГАРАНТИЙНЫЕ ОБЯЗАТЕЛЬСТВА
10.1. Производитель гарантирует соответствие выпускаемых изделий требованиям нор
мативной и технической документации.
Безопасность и качество изделия гарантируются в течение всего срока годности.
10.2. Производитель отвечает за недостатки изделия, за исключением дефектов, возник
ших вследствие нарушения правил пользования, условий транспортирования и хранения, либо
действия третьих лиц, либо непреодолимой силы.
10.3. Производитель обязуется за свой счет заменить изделие, технические и функцио
нальные характеристики (потребительские свойства) которого не соответствуют нормативной
и технической документации, если указанные недостатки явились следствием скрытого де
фекта материалов или некачественного изготовления изделия производителем.
Инструкция по применению и паспорт размещены на сайте http://www.vector-best.ru.
По вопросам, касающимся качества набора «РеалБест ЭкстраМаг», следует обращаться в
АО «Вектор-Бест» по адресу:
630117, г. Новосибирск-117, а/я 492,
тел. (383) 252-51-62,227-60-30; тел./факс (383), 252-51-81, 252-51-77.
E-mail; plkobtk@vector-best.ru
Консультацию специалиста по работе с набором можно получить по тел.: (383) 252-51-75.
12
--- стр. 13 ---
ГРАФИЧЕСКИЕ СИМВОЛЫ
Символ Описание Символ Описание
REF Номер по каталогу
А
Осторожно!
V
Содержимого достаточно
для проведения п тестов IVD Медицинское изделие
для диагностики in vitro
LOT Код партии Температурный диапазон
d
Изготовитель Дата изготовления
Использовать до,
Обратитесь к инструкции
по применению или к ин
струкции по применению
в электронном виде _____
YYYY-MM-
DD
YYYY-MM
Дата в формате
Год-Месяц-День
Год-Месяц
Начальник отделения
производства ПЦР-наборов
АО «Вектор-Бест»
Директор по производству
АО «Вектор-Бест»
Проректор по научной работе
ФГБОУ ВО НГМУ Минздрава России
Д.М .Н., профессор
м.п.
CL "tri А.В. Трухина
13
--- стр. 14 ---
о, пронумеровано и
печатью листов.
Щ С^)05]^^Учет договоров НИР ФГБОУ ВО МЩУ
;1Г^;|^драва России -//1.
Захарова Л .н /^1
ал
--- стр. 15 ---
«УТВЕРЖДАЮ»
Г енеральный директор
ор-Бест»
М.Д. Хусаинов
2024 г.
ИНСТРУКЦИЯ
по применению набора реагентов для вьщеления нуклеиновых кислот из образцов сыворотки
и плазмы крови
«РеалБест ЭкстраМаг»
(вариант 1000)
1. НАЗНАЧЕНИЕ
1.1. Набор реагентов для вьщеления нуклеиновых кислот из образцов сыворотки и
плазмы крови «РеалБест ЭкстраМаг» предназначен для вьщеления нуклеиновых кислот (ДНК
и РНК) из образцов сыворотки и плазмы крови (включая минипулы) как ручным способом,
так и с использованием процессора магнитных частиц для очистки нуклеиновых кислот
«KingFisher Flex» («Thermo Fisher Scientific», Финляндия) или «RealFly» (АО «Вектор-Бест-
Балтика», Россия).. Допускается адаптация других станций для автоматического вьщеления
нуклеиновых кислот для работы с набором.
1.2. Набор применяется с наборами для качественного и количественного определения
нуклеиновых кислот серии «РеалБест».
1.3. Вариант 1000 набора рассчитан на вьщеление нуклеиновых кислот из 96 образцов,
включая контрольные образцы, объемом 1000 мкл.
2. ХАРАКТЕРИСТИКА НАБОРА
2.1. Принцип метода.
Принцип действия набора «РеалБест ЭкстраМаг» заключается в температурной
обработке образца многокомпонентным лизирующим раствором, который разрушает
комплексы нуклеиновых кислот с белками, и последующей сорбции нуклеиновых кислот на
поверхности магнитных частиц. Далее проводятся серии отмывок, в ходе которых
нуклеиновые кислоты остаются сорбированными на поверхности магнитных частиц, и
элюция, в процессе которой нуклеиновые кислоты переходят с поверхности частиц в
Инструкция составлена сотрудниками АО «Вектор-Бест»: директором
по производству Ткачевым В.К. и нач. отделения производства ПЦР наборов Трухиной Л.В.
--- стр. 16 ---
элюирующий раствор. После этого проба готова к постановке ПЦР/ОТ-ПЦР.
Эффективность пробоподготовки в каждом исследуемом образце оценивается с помощью
внутреннего контрольного образца (ВКО), входящего в состав набора и проходящего все
стадии пробоподготовки и следующих за ней ПЦР или ОТ-ПЦР вместе с выделяемыми
нуклеиновыми кислотами. Положительный контрольный образец (ПКО) входит в состав ПЦР-
наборов серии «РеалБест». ПКО проходит процедуру выделения наравне с биологическими
пробами и отрицательным контрольным образцом (ОКО).
2.2. Состав набора:
Компонент набора (сокращение)
Описание.
Количество
Лизирующий раствор (ЛР)
Жидкость от бесцветного до жёлтого цвета, допускается наличие осадка,
исчезающего при нагревании, содержит гуанидин тиоцианат (57,3 %)
4 флакона
по 28 мл
Раствор для отмывки № 1 (Р01)
Жидкость от бесцветного до жёлтого цвета, допускается наличие осадка,
исчезающего при нагревании, содержит гуанидин тиоцианат (57,3 %)
4 флакона
по 16 мл
Раствор для отмывки № 2 (Р02)
Бесцветная жидкость
4 флакона
по 56 мл
Элюирующий раствор (ЭР)
Бесцветная жидкость, содержит натрия азид (0,05%)
4 флакона
по 10 мл
Сорбент (суспензия магнитных частиц)
Содержит натрия азид (0,05%)
4 флакона
по 3 мл
Отрицательный контрольный образец (ОКО)
Жидкость желтого цвета, содержит натрия азид (0,05%)
2 флакона
по 12 мл
Внутренний контрольный образец (ВКО)
Бесцветная жидкость, содержит натрия азид (0,05%)
2 флакона
по 1 мл
в комплект поставки входят:
- набор реагентов;
- инструкция по применению и паспорт (количество копий определяется в договоре на по
ставку продукции).
Инструкция по применению и паспорт размещены на сайте http://www.vector-best.ru.
2.3. Условия применения.
Набор применяется с наборами для качественного и количественного определения нук
леиновых кислот серии «РеалБест».
Набор рассчитан на проведение выделения нуклеиновых кислот из 96 образцов объёмом
1000 мкл, включая контрольные.
--- стр. 17 ---
Показания к применению. Набор предназначен для выделения нуклеиновых кислот
(ДНК и РНК) из образцов сыворотки и плазмы крови (включая минипулы) как ручным спосо
бом, так и с использованием процессора магнитных частиц для очистки нуклеиновых кислот
«KingFisher Flex» («Thermo Fisher Scientific», Финляндия) или «RealFly» (АО «Вектор-Бест-Бал-
тика»). Допускается адаптация других станций для автоматического вьщеления нуклеиновых
кислот для работы с набором.
Противопоказания. Противопоказаний к применению нет (не применимо).
3. ТЕХНИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
3.1. Эффективность вьщеления РНК. Эффективность вьщеления РНК контролируется по
четырем образцам с содержанием 50 копий/мл РНК ВГО, приготовленным из стандартного об
разца предприятия СОП РНК ВГО (СОП 05-2-519), как процентное содержание образцов, опре
деленных набором «РеалБест РНК ВГО» (АО «Вектор-Бест») как положительные.
3.2. Эффективность вьщеления ДНК. Эффективность вьщеления ДНК контролируется по
четырем образцам с содержанием 100 копий/мл ДНК Parvovirus В19, приготовленным из стан
дартного образца предприятия СОП ДНК Parvovirus В19 (СОП 05-2-462), как процентное со
держание образцов, определенных набором «РеалБест ДНК Parvovirus В19» (АО «Вектор-
Бест») как положительные.
3.3. Влияние потенциальных интерферирующих веществ. Повышенное содержание общего
белка (до 120 мг/мл), альбумина (до 60 мг/мл), триглицеридов (до 37 мМ), билирубина (до 342
мкМ), гемоглобина (до 2 мг/мл) и ДНК человека (до 2 мкг/мл) в образцах сыворотки или плазмы
не оказывает влияния на эффективность вьщеления нуклеиновых кислот.
3.4. - Эффективность вьщеления ДНК/РНК, определенная на 137 клинических образцах
сыворотки (плазмы) крови, составила 100 % (интервал 97,3 % - 100 %, с доверительной веро
ятностью 95 %).
4. МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ
4.1. Потенциальный риск применения набора - класс 26 (Приказ М3 РФ от 06.06.2012
№ 4н).
4.2. При работе с набором следует соблюдать требования законодательства в сфере са
нитарно-эпидемиологического благополучия. Набор предназначен для профессионального
применения в клинической лабораторной диагностике. К работе с набором допускается только
специально обученный персонал с высшим или средним медицинским, или биологическим обра
зованием, прошедший подготовку на лицензированных курсах первичной специализации по ра
боте с патогенными для человека микроорганизмами и получивший дополнительное специальное
--- стр. 18 ---
образование на курсах повышения квалификации по молекулярно-биологическим методам диа
гностики (например, врач клинической лабораторной диагностики, медицинский лаборатор
ный техник (фельдшер-лаборант), иной специалист).
4.3. ОКО, ВКО, сорбент и элюирующий раствор содержат натрия азид, лизирующий
раствор и раствор для отмывки №1 содержат гуанидина тиоцианат в концентрациях, указан
ных в п. 2.2 «Состав набора». При работе с указанными растворами следует надевать одно
разовые медицинские перчатки, избегать попадания их компонентов на кожу и слизистые;
при попадании немедленно промыть поражённое место большим количеством проточной
воды.
4.4. Для предотвращения контаминации необходимо территориально разделять этапы
вьщеления ДНК/РНК и постановки ПЦР/ОТ-ПЦР согласно МУ 1.3. 2569-09 «Организация ра
боты лабораторий, использующих методы амплификации нуклеиновых кислот при работе с
материалом, содержащим микроорганизмы I-IV групп патогенности».
4.5. При работе с набором необходимо надевать одноразовые медицинские перчатки,
использовать только одноразовые наконечники с фильтром для дозаторов.
4.6. Каждое рабочее место должно быть снабжено собственным набором дозаторов пе
ременного объема, необходимыми вспомогательными материалами и оборудованием. Запре
щается их перемещение между рабочими местами.
4.7. Не допускается использование одних и тех же наконечников при добавлении раз
ных образцов и реагентов.
4.8. После окончания работ для дезинфекции и предотвращения контаминации все рабочие
поверхности и оборудование следует подвергнуть действию бактерицидных УФ ламп в течение 1
часа. Затем обработать регламентированными санитарными правилами дезинфицирующими сред
ствами (/макгшк как: 0,8%раствор «Дезомакс-Иннова»; 1%раствор «Диабак»; 0,5%раствор «Ли-
зафин»; 1%)раствор «Мистраль»; 1%раствор «Велтолен»).
4.9. Все использованные одноразовые материалы подвергать обработке дезинфициру
ющими средствами с последующей утилизацией (см. МУ 287-113 «Методические указания по
дезинфекции, предстерилизационной очистке и стерилизации изделий медицинского назначе
ния»).
4.10. При использовании набора образуются отходы классов А и Б, которые классифици
руются и уничтожаются (утилизируются) в соответствии с СанПиН 2.1.3684-21 «Санитарно-эпи
демиологические требования к содержанию территорий городских и сельских поселений, к
водным объектам, питьевой воде и питьевому водоснабжению, атмосферному воздуху, поч
вам, жилым помещениям, эксплуатации производственных, общественных помещений, орга
низации и проведению санитарно-противоэпидемических (профилактических) мероприятий».
--- стр. 21 ---
Хранить образцы сыворотки или плазмы при температуре (18-26) °С до 2 часов; при тем
пературе (2-8) °С не более 5 суток**; при температуре, не превышающей минус 18 °С***, не
более 1 года. Не рекомендуется более чем однократное замораживание-оттаивание проб.
Образцы сыворотки или плазмы крови, находящиеся в заморозке во вторичных пробир
ках, перед использованием необходимо разморозить и перемешать на вортексе 3 раза по 2-3
сек, после чего центрифугировать при температуре (18-26) °С при 2000 х g в течение 5 минут.
Для проведения анализа требуется 1 мл сыворотки или плазмы крови (допускается выделение
из меньшего объёма).
* Для некоторых исследований рекомендуемое время, в течение которого следует вы
полнить центрифугирование для получения сыворотки или плазмы, может составлять менее
6 часов. Необходимо соблюдать требования соответствующих стандартов для исследова
ний такого рода.
**Для некоторых исследований рекомендуемая максимальная продолжительность вре
менного хранения образца сыворотки или плазмы перед проведением анализа при темпера
туре (2-8) °С может составлять менее 5 суток. Необходимо соблюдать требования соот
ветствующих стандартов для исследований такого рода.
*** Для некоторых исследований рекомендуемая максимальная температура хранения
образца сыворотки или плазмы может быть ниже минус 18°С. Необходимо соблюдать тре
бования соответствующих стандартов для исследований такого рода.
6.2. Подготовка контрольных образцов и ГРС.
Подготовить необходимые контрольные и калибровочные (при необходимости) образцы
и готовые реакционные смеси (ГРС), входящие в состав наборов для выявления нуклеиновых
кислот серии «РеалБест», в соответствии с инструкцией к данным наборам.
6.3. Подготовка компонентов набора.
Перед началом работы извлечь набор реагентов из холодильника, вскрыть упаковку. Все
компоненты, за исключением лизирующего раствора и раствора для отмывки № 1, вьщержать
при температуре (18-26) °С не менее 30 минут.
Флаконы с лизирующим раствором и раствором для отмывки № 1 прогреть при темпе
ратуре (50-60) °С для растворения осадка в течение 30 мин, содержимое флаконов аккуратно
перемешать переворачиванием 10-15 раз, избегая образования пены.
При дробном использовании лизирующий раствор и раствор для отмывки № 1 после про
гревания допускается хранить при температуре (18-26) °С в течение 7 суток. В этом случае
они не будут требовать повторного прогревания перед использованием.
7. ВЫДЕЛЕНИЕ НК РУЧНЫМ СПОСОБОМ
7.1. Отобрать и подписать необходимое для работы количество пробирок объёмом 2 мл
--- стр. 22 ---
в расчете по две пробирки на каждый исследуемый и контрольный образец. Перечень и коли
чество контрольных образцов указаны в инструкции к набору для ПЦР.
Пояснение. Если выделение НК проводится из 12 образцов, включая контроли, то по
требуется 24 пробирки объёмом 2 мл и один термошейкер. Если выделение проводится из
24 образцов, включая контроли, то потребуется 48 пробирок объёмом 2 мл и два термо-
шейкера.
Внимание! Процедура выделения НК из 1 мл образца предполагает первоначальное
разделение образца на две части по 0,5 мл, при этом указанные две части одного образца
проходят стадию лизиса в двух разных пробирках. В связи с этим для каждого контрольного
и исследуемого образца требуется пара пробирок с одинаковой маркировкой, и каждый об
разец (как контрольный, так и исследуемый) должен быть добавлен в пару пробирок (см. п.
7.4, 7.5и7.б).
12, При выделении НК из 24 образцов:
Для проведения процедуры выделения из 24 образцов, включая контроли, понадобится
по одному флакону каждого компонента из набора.
7.2.1. Во флакон с лизирующим раствором добавить 300 мкл ВКО.
7.2.2. Тщательно перемешать на вортексе содержимое флакона с сорбентом и перене
сти все содержимое (3 мл) во флакон с лизирующим раствором с ВКО.
Внимание! Лизирующий раствор после вскрытия и добавления ВКО и сорбента хране
нию не подлежит.
7.2.3. Аккуратно перемешать флакон с лизирующим раствором с ВКО и сорбентом пе
реворачиванием 8-10 раз, избегая образования пены, и внести в подготовленные (п. 7.1) про
бирки по 550 мкл лизирующего раствора с ВКО и сорбентом.
Внимание! В процессе розлива лизирующего раствора с ВКО и сорбентом необходимо
следить, чтобы суспензия оставалась однородной. Необходимо придерживаться следующего
правила: с момента последнего перемешивания лизирующего раствора с ВКО и сорбентом
должно проходить не более 1 минуты; если за это время процесс розлива лизирующего рас
твора с ВКО и сорбентом не был завершён, следует закрыть флакон крышкой и аккуратно
перемешать смесь переворачиванием, после чего продолжить розлив.
13. При выделении НК менее чем из 24 образцов:
7.3.1. Внести в подготовленные пробирки (п. 7.1) по 500 мкл лизирующего раствора.
7.3.2. Во флакон с сорбентом добавить 300 мкл ВКО, тщательно перемешать на вор
тексе и добавить по 60 мкл готовой смеси в каждую пробирку с предварительно внесенным
лизирующим раствором.
Внимание! В процессе розлива сорбента с ВКО необходимо следить, чтобы суспензия
--- стр. 23 ---
оставалась однородной. Необходимо придерживаться следующего правша: с момента по
следнего перемешивания сорбента с ВКО должно проходить не более 1 минуты; если за это
время процесс розлива не был завершён, следует закрыть флакон и тщательно перемешать
суспензию на вортексе, после чего продолжить розлив.
Внимание! Сорбент после вскрытия и добавления ВКО можно хранить при темпера
туре (2-8) °С не более 7 суток.
1Л. В пару пробирок для ОКО внести 500 мкл ОКО, используя наконечник с аэрозоль
ным барьером.
7.5. В пару пробирок для СПКО (если входит в состав набора для выявления НК) вне
сти по 50 мкл СПКО и 450 мкл ОКО, используя наконечники с аэрозольным барьером.
В пару пробирок для ПКО (KOI, К02 при необходимости) внести по 15 мкл ПКО
(KOI, К02) и 485 мкл ОКО, используя наконечники с аэрозольным барьером.
7.6. В остальные пары пробирок внести по 500 мкл исследуемых образцов, используя
наконечники с аэрозольным барьером.
7.7. Пробирки перенести в термошейкер и инкубировать при 60 °С с частотой вращения
1300 об/мин в течение 15 минут.
7.8. По окончании инкубации извлечь пробирки из термошейкера (термошейкеров), ко
ротким центрифугированием сбросить капли со стенок пробирок и расставить пробирки в маг
нитный и немагнитный штативы в соответствии со схемой:
Магнитный
штатив
ПКО ОКО №1 №2 №3 №4 №5 №6 №7 №8 №9 №10
№11 №12 №13 №14 №15 №16 №17 №18 №19 №20 №21 №22
Штатив для про
бирок
(немагнитный)
ПКО ОКО т 1 №2 №3 №4 №5 №6 №7 №8 №9 то
№11 Ко 12 №13 №14 №15 №16 №17 №18 №19 то №21 №22
7.9. Выставить температуру одного из термошейкеров 90 °С.
7.10. Пробирки в штативах выдержать 2 минуты.
7.11. Из каждой пробирки, находящейся в магнитном штативе, с помощью
медицинского отсасывателя максимально полно удалить надосадочную жидкость, используя
отдельный наконечник (без фильтра) и не прикасаясь к осадку магнитных частиц.
7.12. Содержимое каждой пробирки, находящейся в немагнитном штативе, аккуратно
--- стр. 25 ---
Внимание! Рекомендуется проводить раскапывание выделенной НК в реакционные
смеси для ПЦР- и/или ОТ-ПЦР-анализа сразу после окончания процедуры пробоподготовки.
При необходимости выделенную НК хранить при температуре (2-8) °С не более, чем 24
часа.
8. ВЫДЕЛЕНИЕ НК С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ
АВТОМАТИЧЕСКОЙ СТАНЦИИ KINGFISHER FLEX или REALFLY
8.1. Промаркировать 7 глубоколуночных планшетов: ГР, Р01, ЭР - по 1 планшету; ЛР,
Р02 - по 2 планшета. Один комплект планшетов позволяет провести выделение НК из 96
образцов, включая контроли. При внесении реагентов и образцов ориентировать планшеты
следует таким образом, чтобы лунка А1 находилась слева сверху.
Внимание! Процедура выделения НК из 1 мл образца предполагает первоначальное раз
деление образца на две части по 0,5 мл, при этом указанные две части одного образца прохо
дят стадию лизиса в идентичных лунках (например, в лунках D3) двух различных планшетов
ЛР, В связи с этим лизирующий раствор, а также контрольные и анализируемые образцы
должны быть внесены в лунки двух планшетов ЛР (см. п. 8.7, 8.8, 8.9 и 8.10).
8.2. Составить схему размещения контрольных и исследуемых образцов в глубоколу
ночном планшете на трафарете (Таблица 1). Перечень и требуемое количество контрольных
образцов указано в инструкции к набору дляТИДР (ОТ-ПЦР).
Таблица 1.
Пример схемы размещения контрольных и исследуемых образцов.
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 И 12
ОКО №4 №12
спко № 5 ...
пко №6
пко № 7
пко №8
№1 №9
№2 №10
№3 №11
А
В
С
D
Е
F
G
Н
8.3. В глубоколуночный планшет ГР поместить насадку на магнитную головку.
8.4. Внести в соответствующие лунки планшетов растворы в соответствии с таблицей 2.
Для внесения растворов использовать многоканальный электронный дозатор и ванночки для
реагентов. Раствор для отмывки №2 и элюирующий раствор могут быть также внесены с по
мощью микропланшетного раскапывателя.
I I
--- стр. 26 ---
1
Раствор Объем раствора
на лунку, мкл
Маркировка
планшета
Раствор для отмывки № 1 500 Р01
Раствор для отмывки № 2 1000 Р02
Раствор для отмывки № 2 1000 Р02
Элюирующий раствор 200 ЭР
Таблица 2.
8.5. Во флакон с лизирующим раствором добавить 300 мкл ВКО.
8.6. Тщательно перемешать на вортексе содержимое флакона с сорбентом и перенести
все содержимое (3 мл) во флакон с лизирующим раствором с ВКО.
Внимание! Лизирующий раствор после вскрытия и добавления ВКО и сорбента хране
нию не подлежит.
8.7. Аккуратно перемешать флакон с лизирующим раствором с ВКО и сорбентом пере
ворачиванием 8-10 раз, избегая образования пены и внести в лунки глубоколуночного план
шета ЛР по 550 мкл лизирующего раствора с ВКО и сорбентом. Для внесения раствора
использовать многоканальный электронный дозатор и ванночку для реагентов.
Внимание! В процессе розлива лизирующего раствора с ВКО и сорбентом необходимо
следить, чтобы суспензия оставалась однородной. Необходимо придерживаться следующего
правила: с момента последнего перемешивания лизирующего раствора с ВКО и сорбентом
должно проходить не более 1 минуты; если за это время процесс розлива лизирующего рас
твора с ВКО и сорбентом не был завершён, следует аккуратно перемешать суспензию пипе-
тированием, после чего продолжить розлив.
8.8. В лунки двух глубоколуночных планшетов ЛР, обозначенные в таблице 1 как
«ОКО», внести по 500 мкл ОКО, используя наконечники с аэрозольным барьером.
8.9. В лунки двух глубоколуночных планшетов ЛР, обозначенные в таблице 1 как
«СПКО», внести по 50 мкл СПКО и 450 мкл ОКО, используя наконечники с аэрозольным
барьером.
В лунки двух глубоколуночных планшетов ЛР, обозначенные в таблице 1 как «ПКО»
(KOI, К02 при необходимости) внести по 15 мкл ПКО (KOI, К02) и 485 мкл ОКО, исполь
зуя наконечники с аэрозольным барьером.
8.10. В остальные лунки двух глубоколуночных планшетов ЛР внести по 500 мкл
исследуемых образцов согласно таблице 1, используя наконечники с аэрозольным
барьером.
8.11. Включить процессор «KingFisher Flex» (RealFly) и персональный компьютер,
управляющий процессором.
8.12. Запустить на персональном компьютере программное обеспечение для
«KingFisher Flex» («RealFly») и выбрать протокол выделения НК «РеалБест ЭкстраМаг
12
--- стр. 27 ---
Подробная инструкция по запуску протокола выделения с использованием программ
ного обеспечения приведена на сайте https://vector-best.ru/.
8.13. По запросу программного обеспечения процессора «KingFisher Flex» («RealFly»)
установить глубоколуночные планшеты в прибор: ГР, ЭР, Р02, Р02, Р01, ЛР, ЛР. После
установки второго планшета ЛР запустится процесс выделения НК.
8.14. По окончании протокола выделения НК прибор подаст звуковой сигнал.
8.15. Образцы, находящиеся в глубоколуночном планшете ЭР, раскапать в
реакционные смеси для ПЦР- и/или ОТ-ПЦР-анализа (согласно инструкции по применению
набора для выявления НК).
Внимание! Рекомендуется проводить раскапывание выделенной НК в реакционные
смеси для ПЦР- и/или ОТ-ПЦР-анализа сразу после окончания процедуры пробоподготовки.
При необходимости выделенную НК хранить при температуре (2-8) °С не более, чем 24
часа.
9. УСЛОВИЯ ТРАНСПОРТИРОВАНИЯ, ХРАНЕНИЯ И ПРИМЕНЕНИЯ НАБОРА
9.1. Транспортировать изделия следует транспортом всех видов в крытых транспортных
средствах в соответствии с правилами перевозок, действующими на транспорте данного вида,
при температуре (2-8) °С. Допускается транспортирование при температуре до 26 °С не более
10 суток.
9.2. Хранение набора реагентов в упаковке предприятия-изготовителя должно осуществ
ляться при температуре (2-8) °С в течение всего срока годности в холодильных камерах или
холодильниках, обеспечивающих регламентированный температурный режим с ежедневной
регистрацией температуры.
9.3. При дробном использовании вскрытые компоненты набора следует хранить не более
1 месяца при температуре (2-8) °С. Допускается хранение лизирующего раствора и раствора
для отмывки № 1 при температуре (18-26) °С в течение 7 суток.
9.4. Срок годности набора - 18 месяцев со дня выпуска. Не допускается применение
наборов по истечении срока их годности.
9.5. Для получения надёжных результатов необходимо строгое соблюдение данной ин
струкции по применению набора.
9.6. Изделие не требует технического обслуживания и не подлежит ремонту.
10. ГАРАНТИЙНЫЕ ОБЯЗАТЕЛЬСТВА
10.1, Производитель гарантирует соответствие выпускаемых изделий требованиям нор
мативной и технической документации.
Безопасность и качество изделия гарантируются в течение всего срока годности.
1000».
13
--- стр. 28 ---
10.2. Производитель отвечает за недостатки изделия, за исключением дефектов, возник
ших вследствие нарушения правил пользования, условий транспортирования и хранения, либо
действия третьих лиц, либо непреодолимой силы.
10.3. Производитель обязуется за свой счет заменить изделие, технические и функцио
нальные характеристики (потребительские свойства) которого не соответствуют нормативной
и технической документации, если указанные недостатки явились следствием скрытого де
фекта материалов или некачественного изготовления изделия производителем.
Инструкция по применению и паспорт размещены на сайте http://www.vector-best.ru.
По вопросам, касающимся качества набора «РеалБест ЭкстраМаг», следует обращаться в
АО «Вектор-Бест» по адресу:
630117, г. Новосибирск-117, а/я 492,
тел. (383) 252-51-62, 227-60-30; тел./факс (383), 252-51-81, 252-51-77.
E-mail: plkobtk@vector-best.ru
Консультацию специалиста по работе с набором можно получить по тел.: (383) 252-51-75.
14
--- стр. 29 ---
ГРАФИЧЕСКИЕ СИМВОЛЫ
Символ Описание Символ Описание
REF Номер по каталогу
А
Осторожно!
Содержимого достаточно
для проведения п тестов IVD
Медицинское изделие
для диагностики in vitro
LOT Код партии
Г
Температурный диапазон
d
Изготовитель Дата изготовления
Использовать до.
Обратитесь к инструкции
по применению или к ин
струкции по применению
в электронном виде
_____
YYYY-MM-
DD
YYYY-MM
Дата в формате
Год-Месяц-День
Год-Месяц
Начальник отделения
производства ПЦР-наборов
АО «Вектор-Бест»
Директор по производству
АО «Вектор-Бест»
Проректор по научной работе
ФГБОУ ВО НГМУ Минздрава России
д.м.н., профессор
м.п.
А.В. Трухина
В.К. Ткачев
Т.Н. Поспелова
15