--- стр. 1 ---
I «УТВЕРЖДАЮ»
Г енеральный директор
ИНСТРУКЦИЯ
по применению набора реагентов для иммунохемилюминесцентного
определения концентрации тиреотропного гормона в сыворотке (плазме) крови
для автоматических ИХЛА-анализаторов серии Ультима
(ТТГ-Ультима)
1. НАЗНАЧЕНИЕ
1.1. Набор реагентов для иммунохемилюминесцентного определения концентрации тирео
тропного гормона в сыворотке (плазме) крови для автоматических ИХЛА-анализаторов серии
Ультима (ТТГ-Ультима) (далее по тексту - набор) предназначен для количественного определения
тиреотропного гормона (ТТГ) в сыворотке (плазме) крови человека методом твердофазного имму
нохемилюминесцентного анализа (ИХЛА) с использованием анализаторов автоматических имму-
нохемилюминесцентных серии Ультима с принадлежностями.
Набор может быть использован при оценке состояния щитовидной железы и диагностике
^заболеваний щитовидной железы (гипотиреоз, гипертиреоз).
1.2. Набор выпускается в двух комплектациях, эквивалентных по назначению, свойствам и
функциональным характеристикам.
Комплект 1 рассчитан на проведение 100 определений, включая калибровочные и контроль
ные образцы.
Комплект 2 рассчитан на проведение 200 определений, включая калибровочные и контроль
ные образцы,
2. КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ТЕСТА
Тиреотропный гормон (ТТГ) или тиреотропин - гликопротеин (молекулярная масса около 30
кДа), синтезируемый базофильными клетками передней доли гипофиза и состоящий из двух субъ
единиц. Альфа-субъединица ТТГ является общей для лютеинизирующего гормона (ЛГ), фоллику-
Инструкция составлена сотрудниками АО «Вектор-Бест»: директором НИИ СД М.Ю. Ру
кавишниковым, нач. лаборатории иммунолюминесцентного анализа А.С. Сальниковым.
--- стр. 2 ---
^ лостимулирующего гормона (ФСГ) и хорионического гонадотропина человека (ХГЧ), бета-
субъединицы этих гликопротеинов являются гормоноспецифичными и придают иммунологиче
скую и биологическую специфичность/"-^
ТТГ, взаимодействуя со специфическими рецепторами на поверхности клеток щитовидной
железы, стимулирует синтез и секрецию тиреоидных гормонов тироксина (Т4) и трийодтиронина
(ТЗ)/ Синтез и секреция ТТГ стимулируется тиреотропин-рилизинг-гормоном (ТРГ), который вы-
>
рабатывается гипоталамусом в ответ на низкие уровни циркулирующих ТЗ и Т4/’^ Напротив, по
вышенные уровни ТЗ и Т4 посредством механизма отрицательной обратной связи подавляют вы
работку ТТГ.
Определение ТТГ служит в качестве базового анализа при диагностике функции щитовидной
железы. Даже незначительные изменения в концентрациях свободных тироидных гормонов при
водят к значительным резким изменениям в уровне ТТГ. Соответственно, ТТГ - это очень чув
ствительный и специфичный параметр оценки работы щитовидной железы, который особенно
* информативен для раннего обнаружения или исключения наличия нарушений взаимодействия
между гипоталамусом, гипофизом и щитовидной железой^"^-^
Современные анализы на ТТГ третьего поколения, обеспечивающие чувствительность 0,01-
0,02 мМЕ/л, позволяют использовать измерения ТТГ для дифференциации пациентов с истинным
гипертиреозом от пациентов с подавлением ТТГ, наблюдаемым при субклиническом гипертиреозе
и некоторых заболеваниях, не связанных с щитовидной железой.^'*
Дополнительное определение уровней тироксина (Т4) и трийодтиронина (ТЗ) повышает эф
фективность диагностики щитовидной железы.
3. ХАРАКТЕРИСТИКА НАБОРА
3.1. Принцип метода
^ Принцип метода заключается во взаимодействии ТТГ с моноклональными антителами, им
мобилизованными на поверхности магнитных микрочастиц. Комплекс «антиген-антитело» выяв
ляют с помощью акридинового конъюгата моноклональных антител к ТТГ. После промывки не-
связавшихся компонентов реакционной смеси и добавления пре-триггера и триггера происходит хе
милюминесцентная эмиссия, интенсивность которой пропорциональна концентрации ТТГ в образце.
Результаты ИХЛА регистрируются измерением интенсивности люминесценции в реакционной
кювете.
Концентрация ТТГ в анализируемых образцах определяется с помощью референсного ка
либровочного графика зависимости интенсивности хемилюминесценции от содержания ТТГ в ка-
' либровочных образцах, заранее определенной для данной конкретной серии набора и скорректи
рованной с учетом результатов постановки калибровочных образцов, входящих в состав набора.
--- стр. 3 ---
3.2. Состав набора
Таблица 1
Компонент набора (сокращение)
Описание
Количество
Комплект 1 Комплект 2
Картридж с двухмерными штрих-кодами с реагентами;
Магнитные микрочастицы с иммобилизованными
моноклональными антителами к ТТГ
Содержит РгоСИп 150 (0,05 %).
1 фл.,
2,5 мл
1 шт.
1 фл.,
4,5 мл
1 шт.
Конъюгат, концентрат
Конъюгат моноклональных антител к ТТГ с акридино
вым эфиром.
Содержит РгоСИп 150 (0,044 %), фенол (0,08 %).
1 фл.,
5,5 мл
1 фл.,
10,5 мл
Раствор для разведения конъюгата (РК)
Содержит РгоСИп 150 (0,044 %), фенол (0,08 Уо).
1 фл.,
5,5 мл
1 фл.,
10,5 мл
Калибровочный образец 1 (К1)*
Содержит известное количество ТТГ - 0,25 мМЕ/л.
\ Содержит РгоСИп 150 (0,044 %), фенол (0,166 Уо).
1 проб.,
1,0 мл
1 проб.,
1,0 мл
1
Калибровочный образец 2 (К2)^
Содержит известное количество ТТГ - 4,0 мМЕ/л.
Содержит РгоСИп 150 (0,044%), фенол (0,166 Уо).
1 проб.,
1,0 мл
1 проб.,
1,0 мл
Контролъный образец 1 (КО!)
Содержит количество ТТГ в указанных пределах^'^, мМЕ/л.
Содержит РгоСИп 150 (0,044 Уо), фенол (0,166 Уо).
1 проб.,
2,0 мл
1 проб.,
2,0 мл
Контролъный образец 2 (К02)
Содержит количество ТТГ в указанных пределах**, мМЕ/л.
Содержит РгоСИп 150 (0,044 Уо), фенол (0,166 %).
1 проб.,
2,0 мл
1 проб.,
2,0 мл
* аттестован относительно WHO International Standard Thyroid Stimulating Hormone, Human,
for immunoassay NIBSC code: 81/565; концентрации ТТГ в калибровочных образцах Kl, К2 могут
несколько отличаться от указанных, точные значения содержатся в соответствующем штрих-коде
на боковой этикетке коробки.
^ ** пределы концентрации контрольных образцов KOI и К02 содержатся в паспорте и соот
ветствующем штрих - коде на боковой этикетке коробки.
4. АНАЛИТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
4.1 .* Воспроизводимость — коэффициент вариации не превышает 8%.
I
4.1.1. Внутрипостановочная и межпостановочная воспроизводимость:
Для оценки воспроизводимости были исследованы четыре образца с разной концентрацией
тиреотропного гормона.
Воспроизводимость внутри постановки оценивалась по 21 повтору каждого образца. Вос
производимость между постановками оценивалась в течение 5 дней, по 3 постановки в день (три
серии наборов реагентов) с использованием 5 повторов каждого образца. Среднее значение кон
центрации ТТГ, стандартное отклонение, коэффициенты вариации при оценке воспроизводимости
приведены в Таблице 2.
--- стр. 4 ---
Таблица 2
№№
образца
Воспроизводимость
в пределах постановки п= 21 между постановками п= 75 (5хЗ><5)
Сер,
мМЕ/л
Стандартное
отклонение
Коэффициент
вариации,%
Сер,
мМЕ/л
Стандартное
отклонение
Коэффициент
вариации, %
1 0,344 0,075 2,6 0,341 0,010 2,9
2 2,954 0,062 2,1 2,917 0,113 3,9
3 13,434 0,309 2,3 13,388 0,393 2,9
4 44,288 1,240 2,8 44,027 1,193 2,6
♦
4.2* Линейность в диапазоне концентраций 0,25-100 мМЕ/л ТТГ - в пределах 90% - 110%.
4.3. * Тест на «открытие» - в пределах 90% - 110%,
4.4. * Аналитическая чувствительность - минимально определяемая концентрация ТТГ не
превышает 0,02 мМЕ/л,
4.5. Аналитическая специфичность: не обнаружено перекрестной реакции используемых мо
ноклональных антител с ЛГ (до 1000 мМЕ/мл), ФСГ (до 1000 мМЕ/мл) и ХГЧ (до 100000 мМЕ/мл).
4.6. «Хук»-эффект высоких концентраций не был обнаружен вплоть до концентрации 900
мМЕ/л ТТГ.
4.7. Концентрация ТТГ, измеренная в сыворотке (плазме) крови, взятой у 350 здоровых муж
чин и женщин в возрасте 20-50 лет, находилась в пределах от 0,3 до 4,0 мМЕ/л.
4.8. Рекомендуется в каждой лаборатории при использовании набора уточнить значения кон
центрации ТТГ, соответствующие нормальным у обследуемого контингента людей.
*по ГОСТ Р 51352-2013.
5. МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ
5.1. Потенциальный риск применения набора- класс 26 (приказ М3 РФ от 06.06.2012 № 4н).
5.2. Набор предназначен для профессионального применения в клинической лабораторной
диагностике обученным персоналом. Требования безопасности к медицинским лабораториям при
ведены в ГОСТ Р 52905-2007.
5.3. Некоторые компоненты содержат РгоСИп 150, фенол, в концентрациях, указанных в п.
3.2, «Состав набора».
Все компоненты набора, содержащие в своем составе материалы человеческого происхожде
ния, инактивированы.
5.4. При работе с исследуемыми и контрольными образцами следует соблюдать меры предо
сторожности, принятые при работе с потенциально инфекционным материалом.
5.5. При использовании набора образуются отходы классов А, Б, которые классифицируются
и уничтожаются (утилизируются) в соответствии с СанПиН 2.1.3684-21 «Санитарно-
4
--- стр. 6 ---
iмешать.
7.4. Образцы сыворотки (плазмы) крови, содержащие взвешенные частицы, необходимо очи
стить центрифугированием.
7.5. Образцы, содержащие гемоглобин в концентрации до 5 мг/мл, билирубин в концентра
ции до 0,4 мг/мл, триглицериды в концентрации до 40 мг/мл и общего белка в концентрации до 140
мг/мл пригодны для использования.
7.6. Объем образца должен быть достаточен для проведения иммунохемилюминесцентного ана
лиза с учетом «мертвого» объема, который составляет 200-400 мкл (см Руководство по эксплуатации
анализаторов автоматических иммунохемилюминесцентных серии Ультима с принадлежностями).
8. ОБРАЩЕНИЕ С РЕАГЕНТАМИ
Внимание! Тщательное соблюдение описанных ниже требований позволит избежать
искажения результатов ИХЛЛ,
8.1. Набор с реагентами хранить только в вертикальном положении!
8.2. Не извлекайте флаконы с реагентами из картриджа, в который они установлены, не пере
ставляйте флаконы из одного картриджа в другой.
8.3. Хранение картриджа с реагентами после вскрытия: на борту анализатора при температу
ре (2-8) °С в течение 28 дней (допускается хранение в холодильнике при температуре (2-8) °С) в пре
делах срока годности набора.
8.4. Пробирки с калибраторами К1, К2 и контрольными образцами KOI, К02 сразу после
проведения процедур калибровки и контроля необходимо извлечь из штатива для проб, закрыть и
хранить в холодильнике при температуре (2-8) °С до следующего использования. Срок хранения
калибраторов и контрольных образцов после первого вскрытия - не более 28 дней.
8.5. При постановке ИХЛА нельзя использовать компоненты из наборов разных серий,
ф 8,6. Нельзя использовать реагенты из наборов других фирм-производителей.
8.7. При дробном использовании набора нельзя использовать компоненты из разных наборов
даже одной серии или смешивать их при объединении остатков набора,
8.8. Магнитные микрочастицы с иммобилизованными моноклоналънъши антителами к ТТГ,
калибровочные образцы К1 и К2, контрольные образцы KOI и К02 готовы к использованию,
9. КАЛИБРОВКА И КОНТРОЛЬ
9.1. Калибровка* выполняется один раз для каждой серии реагентов с использованием ново
го набора реагентов и каждые 28 суток при использовании одной серии реагентов. Так же калиб
ровка может быть обновлена в любой момент по требованию (например, когда концентрация ТТГ
в контрольных образцах выходит за пределы установленного диапазона), после чего также прово
дится контроль**.
* Калибровка - коррекция референсного калибровочного графика зависимости интенсивно
сти люминесценции от содержания ТТГ в калибровочных образцах, заранее определенной для
6
--- стр. 7 ---
данной конкретной серии набора с учетом результатов постановки калибровочных образцов К1 и
К2, входящих в состав набора.
** Контроль — проверка соответствия вычисленных значений концентрации ТТГ в кон
трольных образцах KOI, К02 заданным диапазонам соответствующих концентраций.
9.2. После калибровки необходимо выполнить анализ контрольных образцов KOI, К02, вхо-
рщих в состав набора. Значения концентраций ТТГ в контрольных образцах KOI, К02 должны
соответствовать заданным диапазонам значений, указанным в штрих-коде контрольных образцов
н в паспорте на используемую серию набора. Только при соответствии значения концентраций
ТТГ в контрольных образцах КО 1, К02 заданным диапазонам значений можно анализировать ис
следуемые образцы.
9.3. В дальнейшем контроль с использованием KOI и К02 должен проводиться в начале
каждого 24-часового цикла использования теста. Если значение хотя бы одного из контрольных
образцов не соответствует заданному диапазону значений, необходимо повторить процедуру ка
либровки и контроля.
10. ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА
10.1. Подготовить анализатор автоматический иммунохемилюминесцентный серии Ультима
с принадлежностями (далее по тексту - анализатор) к работе в соответствии с Руководством по
эксплуатации анализатора.
10.2. Установить картридж с реагентами на борт анализатора.
Примечание: Открытие флаконов с реагентами в картридже осуществляется вручную. Переме
шивание микрочастиц перед использованием происходит автоматически.
10.3. Пробирки с калибровочными образцами К1, К2 и/или с контрольными образцами KOI,
К02, в случае использования, установить на борт анализатора в соответствии с Руководством по
^эксплуатации анализатора. Открытие пробирок осуществляется вручную.
10.4. Пробирки с исследуемыми образцами открыть и поместить на борт анализатора в соот
ветствии с Руководством по эксплуатации анализатора. Минимально требуемый объем образца
равен 50 мкл на одно измерение плюс «мертвый» объем (см п. 7.6.).
10.5. Идентификация исследуемых образцов, картриджа с реагентами, калибровочных и кон
трольных образцов осуществляется анализатором путем считывания соответствующих штрих
кодов. Допускается внесение информации об исследуемых образцах вручную. Необходимые для
проведения ИХЛА параметры считываются со штрих-кода картриджа с реагентами, штрих-кодов
калибровочных образцов К1, К2 и контрольных образцов KOI, К02 на боковой этикетке коробки.
10.6. Ввиду возможного испарения образцы и контроли на борту анализатора должны быть
исследованы в течение 2 часов.
10.7. Все дальнейшие манипуляции проводить в полном соответствии с Руководством по
эксплуатации анализатора.
7
--- стр. 8 ---
I 11. УЧЕТ РЕЗУЛЬТАТОВ
11.1. Анализатор автоматически рассчитывает концентрацию ТТГ в каждом образце (в
мМЕ/л) с помощью калибровочного графика зависимости интенсивности хемилюминесценции от
содержания ТТГ в калибровочных образцах.
11.2. Если концентрация ТТГ в анализируемых образцах сьшоротки (плазмы) крови превы
шает 100 мМЕ/л, результат обозначается « > 100»,
При необходимости допускается дополнительное разведение указанных образцов и проведе
ние повторного иммунохемилюминесцентного анализа:
- вставить картридж с разводящим раствором в соответствующее отделение анализатора, от
крытие флаконов с РР осуществляется вручную;
- идентификация картриджа с разводящим раствором осуществляется анализатором путем
считывания соответствующего штрих-кода;
- внести информацию об образцах с концентрацией ТТГ более 100 мМЕ/л вручную;
- дальнейшие процедуры разбавления, проведения ИХЛА, умножение полученного значения
концентрации ТТГ на фактор разведения происходят автоматически в соответствии с Руковод
ством по эксплуатации анализатора и необходимыми для проведения ИХЛА параметрами, кото
рые считываются со штрих-кода картриджа с реагентами.
11.3. Результаты анализа исследуемых образцов учитываются при положительном результате
контроля (п. 9.2.).
12. ОГРАНИЧЕНИЯ ТЕСТА
12.1. Для достижения заявленных характеристик теста необходимо строгое соблюдение ин
струкции,
12.2. Применение теста строго ограничено определением концентрации ТТГ в сыворотке или
^плазме крови человека. Характеристики теста в отношении проб другой природы не установлены.
13. УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ, ТРАНСПОРТИРОВАНИЯ И ПРИМЕНЕНИЯ НАБОРА
13.1. хранение набора в упаковке предприятия-изготовителя должно производиться в верти
кальном положении при температуре (2— 8) °С в течение всего срока годности в холодильных каме
рах или холодильниках, обеспечивающих регламентированный температурный режим с ежеднев
ной регистрацией температуры.
13.2. Транспортировать изделия следует транспортом всех видов в крытых транспортных
средствах в соответствии с правилами перевозок, действующими на транспорте данного вида, при
температуре (2-8) °С. Допускается транспортирование при температуре до 26 °С не более 10 суток.
13.3. Срок годности набора реагентов - 12 месяцев со дня выпуска. Не допускается примене
ние наборов по истечении срока их годности.
13.4. Для получения надёжных результатов необходимо строгое соблюдение инструкции по
8
--- стр. 9 ---
применению набора.
13.5. Набор предназначен для однократного применения.
14. ГАРАНТИЙНЫЕ ОБЯЗАТЕЛЬСТВА
14.1. Производитель гарантирует соответствие выпускаемых изделий требованиям норма
тивной и технической документации.
Безопасность и качество изделия гарантируются в течение всего срока годности,
14.2. Производитель отвечает за недостатки изделия, за исключением дефектов, возникших
вследствие нарушения правил пользования, условий транспортирования и хранения, либо дей
ствия третьих лиц, либо непреодолимой силы.
14.3. Производитель обязуется за свой счет заменить изделие, технические и функциональ
ные характеристики (потребительские свойства) которого не соответствуют нормативной и техни
ческой документации, если указанные недостатки явились следствием скрытого дефекта материа-
|лов или некачественного изготовления изделия производителем.
15. СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ.
:1. Chen IW, Sperling MI. Thyroxine. In: Kaplan LA, Pesce AJ, eds. Clinical Chemistry: Theory, Analysis,
and Correlation. 2nd ed. St. Louis: CV Mosby; 1989:956-9.
2. Femandez-Ulloa M, Maxon HR. Thyroid. In: Kaplan LA, Pesce AJ, eds. Clinical Chemistry: Theory,
Analysis, and Correlation. 2nd ed. St. Louis: CV Mosby; 1989:620-37.
3. Watts NB, Keffer JH. Practical Endocrine Diagnosis. 3rd ed. Philadelphia: Lea and Febiger; 1982:1-
27, 77-96.
4. Chattoraj SC, Watts NB. Endocrinology, In: Tietz NW, ed. Fundamentals of Clinical Chemistry. 3rd
ed. Philadelphia: WB Saunders; 1987:550-1.
5. Kronenberg HM, Melmed S, Polonsky KS, et al. Williams Textbook of Endocrinology. Saunders Else-
^vier, Philadelphia, 12th edition, 2011: 301-318.
6. Rees Smith B, Pyle GA, Petersen VB, Hall R. Interaction of Thyrotropin with the Human Thyrotropin
Receptor. J Endocrinol 1977; 75:391-400.
7. Sterling K, Lazarus JH. The Thyroid and Its Control. Aimu Rev Physiol 1977; 39:349-71.
8. Patel YC, Alford FP, Burger HG. The 24-Hour Plasma Thyrotropin Profile. Clin Sci 1972; 43:71-7.
9. Wu AHB. Tietz Clinical Guide To Laboratory Tests. Saunders Elsevier, Philadelphia, 4th edition,
2006: 1040-1043.
10. Surks MI, Chopra IJ, Mariash CN, et al. American Thyroid Association Guidelines for the Use of La
boratory Tests in Thyroid Disorders, JAMA 1990;263:1529-1532,
11. Keffer JH. Preanalytical Considerations in Testing Thyroid Function. Clin Chem 1996;42(1):125-135.
12. Ladenson PW. Optimal laboratory testing for diagnosis and monitoring of thyroid nodules, goiter and
thyroid cancer, Clin Chem 1996;42:(1): 183-187.
--- стр. 10 ---
■3. Nicoloff JT, Spencer CA. The use and misuse of the sensitive thyrotropin assays. J Clin Endocr Metab
1990;71:553-558.
[4. The National Academy of Clinical Biochemistry: Standards of Laboratory Practice. Laboratory Sup-
ort for the Diagnosis & Monitoring of Thyroid Disease. NACB, 1996.
15. Hay ID, Klee GG. Linking Medical Needs and Performance Goals: Clinical and Laboratory Perspec-
ives on Thyroid Disease. Clin Chem 1993; 39:1519-24.
Инструкция no применению и паспорт размещены на сайте http://www. vector-best, ru
По вопросам, касающимся качества набора «ТТГ-Ультима», следует обращаться в АО «Век-
ор-Бест» по адресу:
630559, Новосибирская область, р.п. Кольцово, а/я 121, тел, (383) 227-67-64
E-mail: vbobtk®,vector-best, ru
10