--- стр. 1 ---
J
Л-' 'с
О б щ е с т в о
) 1868
v£«oB^
«УТВЕРЖДАЮ»
Директор НГЩ «Эко-Сервис»
РОО «Санкт-Петербургское Общество
А.П. Стрелков
«14» сентября 2018 г.
ИНСТРУКЦИЯ
по применению набора реагентов для определения содержания
глюкозы в сыворотке, плазме, цельной крови и моче
(КлиниТ ест-Г люкоза)
ТУ 21.20.23.110-031-27511906-2016
Назначение
Набор предназначен для количественного определения глюкозы в сыворотке, плазме, цельной
крови и моче человека в клинико-диагностических и биохимических лабораториях и в научно-
исследовательской практике.
Принцип метода
Глюкоза окисляется кислородом воздуха в присутствии глюкозооксидазы с образованием эквимо
лярного количества перекиси водорода. Под действием пероксидазы перекись водорода окисляет 4-
аминоантипирин и натриевую соль п-фенолсульфокислоты с образованием окрашенного соединения,
интенсивность окраски которого пропорциональна содержанию глюкозы и определяется фотометриче
ски при длине волны 500 (490-540) нм.
Состав набора.
Набор выпускается в двух вариантах комплектации.
Комплектация 1. Набор реагентов для определения содержания глюкозы в еыворотке, плазме кро
ви и моче.
Реагент 1 (Р1): калий фосфорнокислый, 0,25 моль/л, натриевая соль п-фенолсульфокислоты,
0,02 моль/л, 4- аминоантипирин, 0,001 моль/л, глюкозооксидаза, 12000 ед/л, пероксидаза, 1000 ед/л.
Калибратор - глюкоза, 5,55 ммоль/л в 0,1% растворе бензойной кислоты.
Набор рассчитан на проведение от 100 до 1000 определений содержания глюкозы при расходе
1 мл реагента 1 на одно определение.
Фасовки:
1. Р1 1x100 мл + калибратор 1x5 мл
2. Р1 2x100 мл + калибратор 1x5 мл
3. Р1 4x100 мл-ь калибратор 1x5 мл
4. Р1 6x100 мл + калибратор 1x5 мл
5. Р1 1x250 мл + калибратор 1x5 мл
6. Р1 2x250 мл + калибратор 1x5 мл
7. Р1 4x250 мл-ь калибратор 1x10 мл
8. Р1 1x1000 мл + калибратор 1x10 мл
Комплектация 2. Набор реагентов для определения содержания глюкозы в сыворотке, плазме,
цельной крови и моче.
Реагент 1 (Р1); калий фосфорнокислый 0,25 моль/л, натриевая соль п-фенолсульфокислоты,
0,02 моль/л, 4- аминоантипирин, 0,001 моль/л, глюкозооксидаза, 12000 ед/л, пероксидаза, 1000 ед/л.
Реагент 2 (Р2); калий хлористый, 3,1 моль/л, калий фтористый 2-водный, 0,12 моль/л, калий щаве
левокислый 1-водный, 0,25 моль/л.
Калибратор - глюкоза, 5,55 ммоль/л в 0,1% растворе бензойной кислоты.
Набор рассчитан на проведение от 250 до 1000 определений содержания глюкозы при расходе
1 мл реагента 1 на одно определение.
--- стр. 2 ---
от
Фасовки:
1. Р1 4x100 мл + Р2 1x20 мл + калибратор 1x5 мл
2. Р1 1x250 мл + Р2 1x10 мл + калибратор 1x5 мл
3. Р1 2x250 мл + Р2 2x10 мл + калибратор 1x5 мл
4. Р1 4x250 мл + Р2 2x20 мл + калибратор 1x10 мл
5. Р1 1x1000 мл + Р2 1x40 мл + калибратор 1x10 мл
Аналитические характеристики набора
Чувствительность - не более 0,5 ммоль/л.
Линейность. Набор обеспечивает линейность при определении содержания глюкозы в диапазоне
ммоль/л до 22 ммоль/л с отклонением от линейности не более 5%.
Коэффициент вариации - не более 5%.
Контроль качества
Качество набора может проверяться по отечественным или зарубежным контрольным сывороткам
и контрольной моче, аттестованным данным методом.
Нормальные значения
Содержание глюкозы в норме составляет: в сыворотке крови - 3,3-6,4 ммоль/л; в плазме крови -
3,3-6,2 ммоль/л; в цельной крови - 3,3-5,55 ммоль/л; в моче - не более 0,5 ммоль/л. Рекомендуется в ка
ждой лаборатории уточнить диапазон значений нормальных величин для обследуемого контингента.
Интерференция
Аскорбиновая кислота до 0,15 г/л, билирубин до 0,04 г/л не влияют на точность анализа.
Вещества в моче, способные вмешиваться в пероксидазную реакцию, в частности, моче
вая и аскорбиновая кислоты и билирубин в концентрациях, превышающих физиологическую
норму, гемоглобин, тетрациклины, глутатион приводят к получению ложноотрицательных зна
чений.
Меры предосторожности при работе с набором
Потенциальный риск применения набора - класс 2а (Приказ Минздрава РФ от 06.06.2012 № 4н).
В реагенте 1 содержится токсичный компонент - азид натрия. При работе с ним следует соблю
дать осторожность и не допускать попадания на кожу и слизистые; при попадании немедленно промыть
пораженное место большим количеством проточной воды. При проглатывании следует выпить 0,5 л те
плой воды и вызвать рвоту.
Меры предосторожности при работе с набором - соблюдение «Правил устройства, техники безо
пасности, производственной санитарии, противоэпидемического режима и личной гигиены при работе в
лабораториях (отделениях, отделах) санитарно-эпидемиологических учреждений системы Министерства
здравоохранения СССР» (Москва, 1981 г.).
Во избежание возможного инфицирования при работе с образцами крови необходимо надевать
одноразовые резиновые или пластиковые перчатки, так как образцы крови человека следует рассматри
вать как потенциально инфицированные, способные длительное время сохранять и передавать ВИЧ, ви
рус гепатита или любой другой возбудитель инфекции.
Оборудование и материалы
- биохимический анализатор (фотометр) открытого или закрытого типа, с наливной или проточной
кюветой, длина волны 500 (490-540) нм;
- дозаторы, позволяющие отбирать объемы жидкостей от 0,01 мл до 1 мл;
- пробирки вместимостью 5-10 мл;
- термостат;
- секундомер;
- перчатки резиновые или пластиковые.
Анализируемые образцы
Негемолизированная сыворотка или плазма крови, цельная кровь, моча.
Для приготовления плазмы использовать антикоагулянты: гепарин или ЭДТУК.
Глюкоза стабильна в плотно закрытом сосуде:
в сыворотке (плазме) крови - 1 день при 18-25°С; 7 дней при 2-8“С, 1 месяц при -20°С;
в моче - 2 часа при 2-25°С; 2 дня при -20°С [1].
--- стр. 3 ---
Подготовка реагентов для анализа
Приготовление рабочего раствора реагента 2 для определения содержания глюкозы в цельной
крови
Содержимое флакона е реагентом 2 развести дистиллированной водой до 250 мл (фасовки 2, 3)
или до 500 мл (фасовки 1, 4), или до 1000 мл (фасовка 5). Полученный рабочий раствор реагента 2 мож
но хранить при температуре 2-8°С в течение всего срока годности набора при условии достаточной гер
метичности флаконов.
Реагент 1 и калибратор готовы к использованию.
Проведение анализа
Определение содержания глюкозы в сыворотке, плазме крови и моче.
Компоненты реакционной смеси отбирать в количествах, указанных в таблице.
Внести Опытная проба Калибровочная проба Холостая проба
Образец 0,01 мл - -
Калибратор - 0,01 мл -
Вода дистиллированная - - 0,01
Реагент 1 1,0 мл 1,0 мл 1,0 мл
Осторожно перемешать и инкубировать при температуре 37°С в течение 10 минут или при ком
натной температуре (18-25°С) в течение 30 минут. Измерить оптическую плотность опытной про
бы (Еобр) и калибровочной пробы (Екал.) против ХОЛОСТОЙ пробы в кювете с длиной оптического
пути 10 мм при длине волны 500 (490-540) нм. Окраска стабильна в течение 30 минут.
Определение содержания глюкозы в цельной крови.
Компоненты реакционной смеси отбирать в количествах, указанных в таблице.
Внести Опытная проба Калибровочная проба Холостая проба
Рабочий реактив
реагента 2
0,9 мл 0,9 мл
Цельная кровь 0,1 мл - -
Тщательно перемеш ать. Центрифугировать опытные пробы при 1000 об/мин. в течение 15 мин. Разбавить
калибратор глю козы рабочим раствором реагента 2 в 10 раз и внести в пробирки:
Супернатант 0,1 мл- - -
Калибратор, разбавленный
рабочим раствором реа
гента 2
- 0,1 мл -
Вода дистиллированная - - 0,1
Реагент 1 1,0 мл 1,0 мл 1,0 м л
Осторожно перемеш ать и инкубировать при температуре 37°С в течение 10 минут или при комнатной тем
пературе (18-25°С) в течение 30 минут. Измерить оптическую плотность опытной пробы (Еобр.) и калибро
вочной пробы (Екал ) против ХОЛОСТОЙ пробы в кю вете с длиной оптического пути 10 м м при длине волны
500 (490-540) нм. Окраска стабильна в течение 30 минут.
Расчёт
Содержание глюкозы в исследуемой пробе сыворотки, плазмы, цельной крови или мочи рассчи
тать по формуле:
Еобр.
С =------------• 5,55,
где: С - концентрация глюкозы в исследуемой пробе, ммоль/л,
Еобр - величина оптической плотности опытной пробы, ед.опт.плотн.;
Екал - величина оптической плотности калибратора, ед.опт.плотн.;
5,55 - концентрация глюкозы в калибраторе, ммоль/л.
Содержание глюкозы в суточной моче рассчитать по формуле:
А = С • V,
где: А - содержание глюкозы в моче, ммоль/сутки;
С - содержание глюкозы в анализируемой пробе мочи, ммоль/л,
V - количество суточной мочи, л.