Набор реагентов для иммунохроматографического выявления липоарабиноманнового антигена микобактерий в биологических жидкостях "XEMATecт LAMAg" по ТУ 21.20.23-013-18619450-2022 — инструкция и характеристики
Открытые закупки, где изделие проходит ТЗ
Сейчас открытых закупок, где изделие полностью проходит ТЗ, нет; список обновляется каждый день.
Построчная сверка ТЗ с характеристиками этого изделия и все закупки под ваши товары — в кабинете, 7 дней бесплатно.
Попробовать бесплатно
Текст инструкции: технические характеристики
--- стр. 1 ---
УТВЕРЖДЕНА
npMKfMu Рос4дрввнад90ра
УТВЕРЖДАЮ
Дмрвгтор Ф«д(>рального
бюджетиого учреждения нау«и
•Цектрвльный научно-
•*ссла/){)цц|льс1а«а институт
•пирМ^моаПм» Федармьмой
стбы 'по к^ярру ■ сфере
оотоебителеи и
В>И Псироескии
2012 г.
ИНСТРУКЦИЯ
по применению набора реагентов
для обнаружения ДНК микобактерий туберкулеза
{Mycobacterium tuberculosis complex) в клиническом
материале, культурах микроорганизмов и объектах
окружающей среды методом полимеразной цепной реакции
(ПЦР) с гибридизационноч}шуоресцентнойдетех 1а«еА
«АмплиСонс* M7C-FL)»
АмплиСенс*
Mil
»«A«f>tn*no« бкоттноа учреждение нцш
■ ивитралмН1 Ht^Ho-HCcnteoMTMHaiei
имвтитут тийешалегии».
РевбмДоаи ♦ едерчи!, 111133,
город Ыооае. упща Ноеогирмесия. дм Эе т а
СОДЕРЖАНИЕ
..8
....3СПИСОК СОКРАЩЕНИИ.................................................................
НАЗНАЧЕНИЕ..,- .........................................................................................
ПРИНЦИП МЕТОДА...............................................................................-.....»
ФОРМАТЫ И ФОРМЫ ВЫПУСКА НАБОРА РЕЛгеНТОв ...........................................*
АНАЛИТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ...................................................— ....в
МЕРЫ ПРЕДОСТОРОИОЮСТИ........................................................................в
ДОПОЛНИТЕЛЬНЫЕ МАТЕРИАЛЫ И ОБОРУДОВАНИЕ...........T п; ".?
ВЗЯТИЕ, ТРАНСПОРТИРОвАНИЕ И ХРАНЕНИЕ ИССЛЕДУЕМОГО МАТЕРИАЛА. 12
ПОДГОТОВКА ИССЛЕДУЕМОГО МАТЕРИАЛА К ЭКСТРАКЦИИ ДНК .......
ФОРМАТ FEP ........................................................................
СОСТАВ................................- ..............-..........................
ПРОВЕДЕНИЕ ПЦР-ИССЛВДОаАНИЯ .......................
ЭКСТРАКЦИЯ ДНК из ИССЛЕДУЕМЫХ ОБРАЗЦОВ....
ПРОВЕДЕНИЕ АМПЛИФИКАЦИИ ...............
А Подготом* пробирок для аитшификации .............
ФЛУОРЕ с !5?ГГН а ! ! ^ ^ а м п л и ф и к а ц и и п о «КОНЕЧНО^
ТОЧКЕ» ................................................-...............................................................
ИНТЕРПРЕТА1^Я РЕЗУЛЬТАТОВ....................................................................
ФОРМАТ FRT........................................
СОСТАВ ............................................
ПРОВЕДЕНИЕ ПЦР-ИССЛЕДОвАНИЯ ........................-...................................
ЭКСТРАКЦИЯ ДНК ИЗ ИССЛЕДУЕМЫХ ОБРАЗЦОВ ...............................
ПРОВЕДЕНИЕ АМПЛИФИКАЦИИ С ДЕТЕКЦИЕЙ В РЕЖИмЕ «РЕАЛвпОГО
ВРЕМЕНИ».................................................................................................. „
А Подготова пробирок для юплификации..........................................................2/
В. Промдонив вмплификацим с двтоюрюй в режиме «реального аромени...., 2в
АНАЛИЗ И ИНТЕРПРЕТАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ.........................................................ЭО
СРОК ГОДНОСТИ. УСЛОВИЯ ТРАНСПОРТИРОВАНИЯ И ХРАНЕНИЯ ....................33
ПРИЛОЖЕНИЕ 1. Экстра10^4я ДНК ю образцов иссладуамого материала при
использомнии комплекта реагентов «ДИК-сорб-В* ....................................................^
ПРИЛОЖЕНИЕ г Э«стрв1ция ДНК из обраэмраиеспедуемого материала при
использовании комплекта раагаитоа «РИБО^рап* .....................................................Эб
ПРИЛОЖЕНИЕ 8. Экстраюри ДНК из образцов исследуемого материала при
использовании комплекта раагантоа «ДНК-»рб-С» ....................................................»
СИМВОЛЫ, ИСПОЛЬЗУЕМЫЕ В ПЕЧАТНОЙ ПРОДУКЦИИ -------------- А1
r t P Ферме 4: КЕД В97.ЯЕГ». КЁД Н-1074.2. Формат Форма 4: Р
КгДм.1074.1 Л
lR-BS7|RO.iQ.8C.DI»ei.
М 1803 13/СТр 2«>41
--- стр. 2 ---
н
f
полимеразной цепной реакции (ПЦР) с шбридизационно-
флуоресцентной детвк 1^Й включает в себя три этапа; 1)
экстракцию (выделение) тотальной ДНК из образцов клинического
материала, парафиновых блоков, культур микроорганизмов или
смывов с объектов окружающей среды, а также внутреннего
контрольного образца (ВКО STI-87), внесенного в тестируемый
образец в начале анализа; 2) одновременную амплификацию
фрагмента ДНК МТС, т.е. мико№ктерий туберкулеза, и фрагмента
ДНК ВКО; 3) гибридизационно-флуоресцентную детекцию, которая
производится либо непосредственно в ходе ПЦР с помощью
амллификатора с системой детекции флуоресцентного сигнала в
режиме «реального времени» (сармат FRT), либо после ее
завершения с помощью флуоресцентного ПЦР-детектора (формат
FEP).
Гибридизационнофлуоресцентная детекция специфической
мишени проводится по каналу FAM/Green (или аналогичному, в
зависимости от модели прибора), ВКО - по каналу JOE/Yellow/HEX
(или аналогичному, в зависимости от модели прибора).
«ПЦР-комплею» варианты FEP и FRT, входящие в состав
данного набора реагентов, содержат фермент UDG для снижения
риска контаминации продуктами амплификации в ПЦР-
лабораториях.
С целью оптимизации протоколов исследования микобактерий
туберкулеза возможно проведение единой процедуры экстракции
ДНК для последующего обнаружения, количественного
определения, дифференцирования до вида М. tuberculosis
complex и определения резистентности к противотуберкулезным
препаратам.
ФОРМАТЫ И ФОРМЫ ВЫПУСКА НАБОРА РЕАГЕНТОВ
Набор реагентов выпускается в 2 форматах.
Формат FEP
Набор реагентов выпускается в 5 формах комплектации;
Форма 1 включает комплекты реагентов «ДНК-сорб>В»
вариант 50, «ПЦР-комплект» вариант FEP.
Форма 2 включает комплекты реагентов
вариант 50, «ПЦР-комплект» вариант FEP.
Форма 3 включает комплекты реагентов
вариант 50, «ПЦР-комплект» вариант FEP.
«РИБО-лреп»
«ДНК-сорб-С»
Ф«Р1ИТ FIP Ф«рм 4: Р1Д ВбГ-FEP^, Н-1074-2. Форшт PUT Форма 4; Щ Д
Щ Дн.1074.1/Т/е{
R-B97(RG.iO 6C.DI96J.
|l603l3/erp 4м41
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
В настоящей инструкции применяются следующие
БАЛ ' • боонхо-алмеолярный лаваж
■5R5 ' • внутренний коктрольный обрами
BK08TI-87
. • внутренний контрольный обремц BTI (aoK-ioeted Inchiaten)
длиной 87 нуклеотидов дли наборов с гибридимционно-
‘1 Фпуорвсиаитной деташией
К- > • отрмиатальный контроль ПЦР
К* 1 • положительный контроль ПЦР
МБТ (МТС) 1 • микобактерии туберхулеи {KfycobacM um tubercuhaiM
loomoTex)
м.т. ,-uwpowbia тела
"СКб • етемиетмльны* ммгрель»мй оврмаеи
ок 1 - отриивтельный контроль еистрв1 иии
ПВБ 1 - лромыаные аош боожоа
! - положительный контрольный обоеэеи
ПЦР • ЛОЛИМФОМНМЯ и»пнм мыиий
ФБУН инии * вюджтю» учрряэдонно кауш «Црнтральнмй
Эпииаималогми 1 нвучмв-исспадомтрлюкий институт wuiAMmOflOrWM
РоспотмЛ^з^ Федеральной службы ло недеору ■ сфере мщиты прее
’**®”*^*®^ , сютребителей и бмгопелучия человека
FEP • Флуорееиентнея двтекиия по аконечной точке*
FRT : • Флуоресиентная датепыя а ражим ареального аоеыаж»‘-pgg • ФосФатно^олааой буфао
UDS • Феоиаит UDG - Фаомент уыиилЛНК-тлииоаилме >
НАЗНАЧЕНИЕ
Набор реагентов «АмплиСенс* MrC-fLi предназн№вн длв
обнаружения ДНК микобактерий туберкулеза -
Mycobecterium tuberculosis com plex (МТС}, вкпючаххций а себя
виды микобактерий разной стелеки вирулентности,
вызывающих туберкулез у человека (M.tubercufosis, M b o vis,
М .аМ сапит, M.m icroti, M.canettl, М.р1п1р9(Л1), в разньос видах
клинического материала, культурах микроорганизмов и
объектах окружающей среды методом полимеразной цепкой
реакции (ПЦР) с гибридиэационно-флуоресцентной детекцией.
ВНИМАНИЕ! Результаты ПЦР-исследования учитываются в
комплексной диагностике эаболевания\
ПРИНЦИП МЕТОДА
Обнаружение ДНК микобактерий туберкулеза (МБТ) -
Mycobacterium tuberculosis complex (МТб) - методом
в соо 1»втст1ии еДирбктиюй Е»роп»йеко№ <
Форм» FEP Форы* 4: ВвГ-РЕР. 4-1074-2; Формат PRT Форм* 4: M|lR-857(RO.iO.SC.OtPe).
^Шн.1074.1 /рЁЯ 1S0212/етр. Э И141
3
СИМВОЛЫ, ИСПОЛЬЗУЕМЫЕ В ПЕЧАТНОЙ ПРОДУКЦИИ
[ЙЁР] Номер в каталоге
А
Остороямо! Обратитесь
к сопроводительной
документации
ЕёЛКод партии
V
Максимальное число
теетоа
ГЩ
Ишелиедля In vtiro
диагностики Использовать до
|VBR| Дата изменения т
Обратитесь к
рукоЕОДСтау по
аяеплуетаиии
1
Офвничание
температуры
Не допускать
попадания солнечного
сеете
Г
Верхнее ограничение
температуры d]
Дате изготовления
ш|
Производитель
Формат FEP Форма 4: B57-FEP. Н-1074.2. Формат FRT Форма 4; R-B57<R0.i0.8C.DtM|.
РЁЛ Н-1074-1 / 18 02 12 /стр. 41 М 41
41
--- стр. 3 ---
ЭКСТРАКЦИЯ ДНК
Н Ф
9. Повторить процедуру отмывки раствором для отмывки 2,
отобрать надосадочную жидкость полностью.
Ю.Поместить пробирки в термостат при температуре 64 ‘С на
5-10 мин для подсушиваний сорбента универсального. При
этом крышки пробирок должны быть открыты.
11. в пробирки добавить по 100 мкл ТЕ*буфера для элюции
ДНК. Перемешать на вортексе. Поместить в термостат при
температуре 64 *С на 5-^ мин, периодически (1 раз в мин)
встряхивая на вортексе.
12. Проц 0нтрифугировать пробирки при 12 тыс g в течение
1 мин на микроцентрифуге. Надосадочная жидкость
содержит очищенную ДНК (проба ДНК). Образцы готовы к
постановке ПЦР.
Очищенную ДНК можно хранить в течение 1 недели при
температуре от 2 до 8 *С и в течение 1 года при
температуре не выше минус 16 *С.
Фор1ШТЕГ еорн14:I B5?.f ЕР: E Q Н-1074.Д; Аеры«т РЯТ Фарш 4:
РёЛм.10Т4.1/
чел к-вз7(яо.кО.зс.О(0в).
^150312/сгр 40И141
Форма 4 включает комплект реагентов сПЦР.комплект»
вариант FEP.
Форма б включает наборы реагентов оптом, расфасованные по
отдельным реагентам, с маркировкой реагентов на их оптовой
фасовке.
Формы комплектации 1,2 и 3 предназначены для проведения
полного ПЦР-исследования, включающего экстракцию ДНК и
амплификацию ДМК М Т С с гибридизационнофлуоресцентной
детекцией по «конечной точке».
Форма комплектации 4 предназначена для проведения
амплификации ДНК М Т С с гибридизационно-флуоресцентной
детекцией по «конечной точке». Для проведения полного ПЦР*
исследования необходимо использовать комплекты реагентов
для экстракции ДНК, рекомендованные ФБУН ЦНИИ
Эпидемиологии Роспотребнадзора.
Форма комплектации 5 предназначена для
производственных целей для последующей маркировки на
языке заказчика и комплектации по наборам.
ВНИМАНИЕ! Форма комплектации 5 используется только в
соответствии с регламентом, утвержденным ФБУН ЦНИИ
Эпидемиологии Роспотребнадзора.
Формат FRT
Набор реагентов выпускается в 5 формах комплектации:
Форма 1 включает комплекты реагентов «ДНК-сорб*6«
вариант 50. «ПЦР-комплакт» вариант FRT.
Форма 2 включает комплекты реагенл» «РИБО-прел»
вариант 50. «ПЦР>комплакт» вариант FRT.
Форма 3 включает комплекты реагентов «ДНК-сорб-С»
вариант 50, «ПЦР-комплект» вариант FRT.
Форма 4 включает комплект реагентов «ПЦР-хомллат
вариант FRT.
Форма 6 включает наборы реагентов оптом, расфасованные по
отдельным реагентам, с маркировкой реагентов на их оптовой
фасовке.
Формы комплектации 1, 2. 3 предназначены для проведения
полного ПЦР-исследования, включающего экстракцию ДНК и
амплификацию ДНК М Т С С гибридизационно-флуорвсцвнтной
детекцией в режиме «реального времени».
•орншт FCP Форм 4: В5Т#ЕР, Ц З Н.1074.3: Формт РЯТ Ферм* 4:
hgfl Н.1074.1 /
[р-Вв7(Пв.Ю.вС.ОСИ|.
1вв3.1г/егр. би*41
ЭКСТРАКЦИЯ ДНК
Форме комплектации 4 предназначена для проведения
амплификации ДНК М ТС с гибридизационнофлуоресцентной
детекцией в режиме «реального времени». Для проведения
полного ПЦР*исследования необходимо использовать
комплекты реагентов для экстракции ДНК, рекомендованные
ФВУН ЦНИИ Эпидемиолоти Роспотребнадзора.
Форма комплектации 5 предназначена для
производственных целей для последующей маркировки на
языке заказчика и комплектации по наборам.
ВНИМАНИЕ! Форма комплектации 5 используется только в
соответствии с регламентом, утвержденным ФБУН ЦНИИ
Эпидемиологии Роспотребнадзора.
АНАЛИТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
Вид клт1Кч«С1 юго. .
М«Т»|Ж«Л1
Т т Е П Г Г "
. Комплект
... .. 'АПЯ , , .
екстрйкции <.
ДИК .
1, АналитичфОиви .•<
Комплокт для : чуяотви^Сн'бв^Ь,
выплиФиииии' ' м.т./мН
и детвкции ' ¥ . t u b iz u lo ils
' (штамм H37Ra) 1
PBS-буфер, ысжрота.
бронхФ*алоФ»олярнмА
памк
аРИБОчтрап»
еПЦР-комплвки
Мри анты
F E Ph FRT
Sk IO*
Моча
«ПЦР имплвкт»
варийнты
РЕРиРЯТ
IxtO*
Сиыры е объФктм
офужаюцой срфды*
«ПЦР-яом1имкт»'
»йрийнты
РСРиРЯТ
i
2,5x10* копи й/мл
РВ8-5уфФр, мокрот»
•ДНК-еера-В»
яПЦР-КОМПЛФКП
ввриаиты
F E P m FRT
5x10*
Бронхоапмоолярный
ла»«ж, моча
«ПЦР'КОМги>»1 ст»
варианты
РЕРиРЯТ
1x10*
Сымаы е вбмктФ»
окружающой ер»ды*
аПЦР'кемплРкт»
варийнты
РЕРиРЯТ
2,5x10* копий/мл
10% ГОМОГФНЙТ рмных
видов тиной (легкие,
лимфвтмчесшо узлы, почки.
г>Фч»»*. моу. селезвми)
«ДНК-еор5-Ся
сПЦР<комплвкт>
варианты
FEP и FRT
1x10*
&
* Допусмвтвя прм4д«ни4 иссл«домн1и бм папа мстраяции ДНК при добаалании образца
сммаоа а обмстоа мружатчаА ерады напосрадетмпно а раакмиоиную сиась для
проаадамм ПЦР-иосладоаания.
Форм» FCP Ф«риа 4: В97-РСР. g ^ H>1074-2. Формат FRT Форма 4: g^R457(RG,0.8C 0861,
RlpjH.T074.1 1S.08 13/стр ви>41
а) Подготовить полипропиленовые пробирки типа
«Эппендорф» объемом 1.5 мл.
б) В пробирку отрицательного контроля экстракции (ОК)
внести 100 мкл ОКО, используя наконечники с фильтром.
в) Перенести из ступки в пробирки 20 мкл
гомогенизированного образца.
г) Инкубировать образцы при температуре 65 *С в течение
1 ч. периодически встряхивая на вортексе (не менее 5
раз).
д) Осадить нерастворенные частицы образцов
центрифугированием при 12 тыс g в течение 5 мин.
Надосадочную жидкость в объеме 350 мкл очень
аккуратно отобрать отдельными наконечниками с
фильтром и перенести в новые пробирки объемом
1,5 мл.
5. Тщательно ресуспендировать сорбент универсальный на
вортексе. В каждую пробирку отдельным наконечником
добавить по 26 мкл ресуспендированкого сорбента
универсального. Перемешать на вортексе, оставить в
штативе на 10~15 мин, перемешивая через каждые 2 мин.
6. Осадить сорбент универсальный в пробирках
центрифугированием при 5 тыс g в течение 1 мин. Удалить
надосадочную жидкость, используя вакуумный
отсасыватель и отдельный наконечник для каждого образца.
7. Добавить в образцы по 300 мкл раствора для отмывки 1,
перемешать на вортексе до полного ресуспекдирования
сорбента универсального. Осадить сорбент универсальный
центрифугированием при 5 тыс g на микроцентрифуге в
течение 1 мин. Уделить надосадочную жидкость, используя
вакуумный отсасыватель и отдельный наконечник для
каждого образца.
в. Добавить в образцы по 600 мкл раствора для отмывки 2,
перемешать на вортексе до полного ресуспендирования
сорбента универсального, процентрифугировать 1 мин при
Ютысд на микроцентрифуге. Отобрать надосадочную
жидкость, используя вакуумный отсасыватель и отдельный
наконечник для каждого образца.
Фо^ш FEP Форма 4; g ^ BS7.FEP: | I H-1074.Z Формат FRT Форма 4; j
g^H-T074.1/(
Я>М7(Р0.0.9С.01Вв)
MS(et2;crp.NM41
3
--- стр. 4 ---
ЖСТРАКЦИЯ ДНК
ПРИЛОЖЕНИЕ 3
Экстракция ДНК из образцов исследуемого материала при
использовании комплекта реагентов «ДНК-сорб‘Св
Порядок работы
1. Буфер для лизирующего реагента и раствор для
отмывки 1 (если они хранились при температуре от 2 до
8 *С) прогреть при температуре 60-65 *С до полного
растворения кристаллов.
В одноразовую пробирку объемом от 5 мл внести по
400 мкл буфера для лизирующего реагента, по 17 мкл
лизирующего реагента и по 10 мкл ВКО STI-87 на каждую
пробу соответственно (необходимо также учитывать пробу
отрицательного контроля экстракции), перемешать
липетировакием.
При использовании и&нтрифуги/воотекса сМультиспин MSC-
6ШЮ» или гомоганизатооа TissueLveer LT:
а) Подготовить полипропиленовые завинчивающиеся
конические пробирки с петлей объемом 2.0 мл или
свободностоящие объемом 2.0 мл. соответственно.
б) В пробирку отрицательного контроля экстракции (ОК)
внести 100 мкл ОКО, используя наконечники с фильтром.
в) Внести в каждую из подготовленных пробирок с
фрагментами ткани и шариками, а также в пробирку ОК.
по 425 мкл смеси отдельными наконечниками с
фильтром.
г) Поместить пробирки в ротор центрифуги/вортекса
«Мультиспин MSC-бООО» и установить следующий
режим:
kPm Vwtax
1000 hwd 14d
o.ot 20 ttoe
или в ротор гомогенизатора и установить режим: частота
50 Гц, время 2 мин.
Д) Перенести пробирки в термостат и провести
инкубирование образцов при температуре 65 *С в
течение 10 мин.
4. При использовании Фарфоровых ступок для гомогенизации
образца ткани:
Форыл FIP Форш 4: Й1П 9fl7-f ЕР. ^ЕР| Н.1074.2 Формт FRT Форш 4: Й Я R-B57(RO.tQ.SC 01вв|.
tREFiH.1074.1 /рея116oa.ia/cTp ми»41
Аналитическая специфичность
Аналитическая специфичность оценивалась как при
тестировании штаммов микобактерий входящих в группу
M.tub9rculo9l9 com plex, так и нетуберкулезных микобактерий, а
также штаммов микроорганизмов, вызывающих заболевания
сходных локализаций.
Для определения аналитической специфичности на штаммах
различных микроорганизмов (в концентрации на менее, чем
5x10” м.т^мл), тестировали 67 контрольных штаммов или
клинических изолятов. Из них 16 входили в состав группы
M .tuberculosis complex, 23 являлись нетуберкулезными
микобактериями, 28 принадлежали к другим родам и
семействам. Специфичность набора реагентов оценивалась по
отсутствию положительного результата амплификации ДНК
бактерий, не принадлежащих к M .tubeKulosis complex, а также
по наличию положительного результата у бактерий, входящих в
состав этой группы.
Перечень референтных штаммов и клинических изолятов:
- Микрбактерии. принадлежащие к группе Mycobacterium
tuberculosis complex: M .tuberculosis. M.bovis, M b o v ls B C G и
ДР.
~ Нетубеокулезные микобактерии: M.avlum, M.fortuUum,
M.gordonae. M .m tracellulara, M.kartsask, M.merintfm.
M .paratuberculosis, M.ptUei, M .scrofulacsum , M .sm eom aiis.
M. xenopi, M.ulcerans, М./еггве и др.
“ Бактерии, принадлежащие к д р у г и м родам и семействам:
B rucella abortus, B.m elftensls, B.ovis, B.suis; Cam pyiobBCter
jejuni; Chlam ydia suls; Cft/amyc<op/j//e abortua. C h .M s ;
CryptOGOCUSS neoform ans; Entarobactar doacaa, E.faeeaHa:
£/]terococcos faacatis; Escharichla eoH; Klebalalla pneum oniae;
L lsta iia m onocytogenes; M oraxalla catarrhalls; N eisseria
clnerea, N.elongata, N.flava, N.gonor, ^.mucosa, N .siccB,
N. subHava, N.pantoea aggtomerans: Pasteurella tuiaransis;
Proteus vulgaris, P.m irabllis; Pseudom onas aeruginosa;
Salm onella entaritidis, S.ti^ hl; Shigella flaxnerl, Sh.sonne;
Staphylococcus aureus, различные клинические иэоляты
S.aureus M RSA, S.faecalis, S.sapm phytlcus; S.Streptococcus
A, B, C, G, S.oralls, S.pneum onla.
Форшт FEP Форма 4: IREfI Вв7-РЕР, | }н-1074<г Формат PRT Форш 4; j
Fg^H-1074-1^
|R-K7<RO.O.$C.Ot»e).
415 03 12/erp 7и|4Т
ЭКСТРАКЦИЯ ДНК
.5
Результаты тестирования показали 100 % специфичность как
для набора реагентов в варианте FRT, так и в варианте ГЕР.
МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ
Работе должна проводиться в лаборатории, выполняющей
молекулярно-биологические (ПЦР) исследования клинического
материала на наличие возбудителей инфекционных болезней,
с соблюдением санитарно-эпидемических правил СП 1.3.2322-
08 «Безопасность работы с микроорганизмами lil-IV групп
патогенности (опасности) и возбудителями паразитарных
болезней», СанПиН 2.1.7.2790-10 «Санитарно-
эпидемиологические требования к обращению с медицинскими
отходами» и методических указаний МУ 1.3.2569-09
«Организация работы лабораторий, использующих методы
амплификации нуклеиновых кислот при работе с материалом,
содержащим микроорганизмы I-IV групп патогенности».
При работе в лабораториях противотуберкулезных
учреждений следует дополнительно руководствоваться
требованиями Приказа № 109 от 21 марта 2003 г. «О
совершенствовании противотуберкулезных мероприятий в
Российской Федерации» (Приложение №11).
При работе всегда следует выполнять следующие требования:
- Следует рассматривать исследуемые образцы как
инфекционно-опасные, организовывать работу и хранение в
соответствии с СП 1.3.2322-08 «Безопасность работы с
микроорганизмами IIMV групп патогенности (опасности) и
возбудителями паразитарных болезней».
- Инфицированный материал, а также одноразовая
пластиковая посуда, соприкасавшаяся с инфицированным
материалом, должна сбрасываться на 120 мин в специальный
контейнер, содержащий дезинфицирующий 0.2% раствор ДП-
21, на 180 мин в 0,3 % раствор жавелиона или использовать
другие хлорсодержащие дезинфицирующие средства.
• Убирать и дезинфицировать разлитые образцы или
реактивы, используя дезинфицирующие средства в
соответствии с СП 1.3.2322-08 «Безопасность работы с
микроорганизмами ill-IV групп патогенности (опасности) и
возбудителями паразитарных болезней».
• Лабораторный процесс должен быть однонаправленным.
FKP фбрм» 4: БбЛ M7.FBP; Н-1074-2. Ф ^ «т FRT Ферма 4; Щ Л R-BS7(RO.iQ.8C.CN90).
КЁЛн-1074.1/К>Ё415С2 12/СТр В«41
11.Центрифугировать при 12тьюд в течение 1-2 мин на
микроцентрифуге.
12.Осторожно, не захватывая осадок, отобрать надосадочную
жущкость, используя вакуумный отсасыватель и отдельный
наконечник для кахщого образца.
13. Добавить в пробирки по 200 мкл раствора для отмывки 4.
плотно закрыть крышки и осторожно промыть осадок,
переворачивая пробирки 3-5 раз.
14. Центрифугировать при 12 тыс g в течение 2 мин на
микроцентрифуге.
15.Осторожно, не захватывая осадок, отобрать надосадочную
жидкость, используя вакуумный отсасыватель и отдельный
наконечник для каждого образца.
16. Поместить пробирки в термостат при температуре 60 *С на
5 мин для подсушивания осадка (при этом крышки пробирок
должны быть открыты).
17. Добавить в пробирки по 100 мкл РНК-буфера. Перемешать
на вортексе. Поместить в термостат при температуре 60 *С
на 6 мин, периодически встряхивая на вортексе.
18. Центрифугировать пробирки при 12 тыс g в течение 1 мин
на микроцентрифуге. Надосадочная жидкость содержит
очищенные ДНК и РНК. Образцы готовы к постановке ПЦР.
Формат FEP Форма 4: HEF1 BS7-FCP. IREFI M-I0744i; ФорматГНТ Форма 4: |Rtpj R.M7(RO.iO.*C.O(M),
БеТ|м-К174-ирЕРи16021г/СТр Э7и»41
ч
--- стр. 13 ---
«СОГЛАСОВАНО»
Г енеральный^
ООО «ВЫМ1
Испол
АЮ»
рр ООО «ХЕМА»
острикинаЕ.С.
2023 г.
ИНСТРУКЦИЯ
по применению Набора реагентов для иммунохроматографического выявления
липоарабиноманнанового антигена микобактерий в биологических жидкостях
«ХЕМАТест LAMAg»
--- стр. 14 ---
0 1. ОБЩАЯ ИНФОРМАЦИЯ.
' 1.1. Описание назначения:
а) Набор реагентов для иммунохроматографического выявления липоарабиноманнанового
/ антигена микобактерий в биологических жидкостях «ХЕМАТест LAMAg» предназначен для
качественного выявления липоарабиноманнанового антигена микобактерий в спинномозговой
жидкости (СМЖ), моче и сыворотке крови методом иммунохроматографического анализа.
б) Функциональное назначение.
Выявление липоарабиноманнанового антигена микобактерий (ЛАМ) в биологических
жидкостях используется в качестве вспомогательного метода для быстрой предварительной
диагностики туберкулеза у пациентов с Т-клеточными иммунодефицитами.
в) Липоарабиноманнан является липогликаном и основным фактором вирулентности
бактерии рода Mycobacterium. Он является основным компонентом клеточной стенки, служит
модулем с иммунорегуляторным и противовоспалительным действием. Это позволяет бактерии
поддерживать выживание в человеческом резервуаре, подрывая устойчивость хозяина и
приобретенные иммунные реакции.
В клинической практике определение ЛАМ используется для диагностики выявления
активной формы туберкулеза при врожденном или приобретенном функциональном дефиците Т-
клеточной системы иммунитета - у ВИЧ-инфицированных или получающих иммуносупрессивную
терапию, и имеющих высокий риск развития или клинические симптомы туберкулеза, по месту
оказания помощи. На поздних стадиях, особенно в сочетании с ВИЧ, туберкулез переходит из
легочной фазы в фазу системного заражения, что усложняет клиническую картину и диагностику
заболевания. Отсутствие отделяемой мокроты у таких пациентов делает невозможной
традиционную диагностику туберкулеза. Известно, что бактериальные и грибковые инфекции
легких, которые перешли в системную инвазивную стадию, могут быть диагностированы путем
обнаружения их полисахаридных антигенов.
г) В качестве анализируемого образца используется спинномозговая жидкость (СМЖ), моча и
сыворотка крови.
д) Применение набора не зависит от популяционных и демографических аспектов.
1.2. Набор реагентов «ХЕМАТест LAMAg» предназначен для одноразового использования.
1.3. Область применения - клиническая лабораторная диагностика.
1.4. Набор реагентов «ХЕМАТест LAMAg» предназначен для диагностики ин витро.
2. ХАРАКТЕРИСТИКИ НАБОРА
2.1. Принцип работы Набора.
Определение основано на принципе иммунохроматографического анализа. Анализируемый
образец абсорбируется поглощающим участком на поверхность тест-полоски. Во время проведения
анализа антиген из образца связывается с антителами к ЛАМ, нанесенными на поверхность
--- стр. 15 ---
[енных микрочастиц, и с антителами к ЛАМ, нанесенными на поверхность тест-полоски. В
(зультате образуется комплекс, видимый в форме цветной линии.
2.2. В комплект поставки входят:
- Набор реагентов «ХЕМАТест LAMAg»
- паспорт (один на транспортную тару или групповую упаковку).
2.3. Состав Набора, описание компонентов:
Состав Описание, готовность компонентов
Наименования компонента Количество (объем)
Кассета
6 шт.
Кассета из белого пластика (с тест-полоской внутри),
прямоугольной формы с двумя отверстиями: для
нанесения исследуемого образца (маркировка «8»)
и тестовая зона (с маркировками «Т» и «С»), в
индивидуальной упаковке из полимерных материалов (с
основой из алюминиевой фольги) с осушителем (длина
12±1,0 см, ширина 7,0±1,0 см), готова к использованию
Буфер для обработки образца 1 шт. (3,0 мл) Флакон с прозрачной бесцветной жидкостью,
готов к использованию
Буфер для нейтрализации образца 1 шт. (0,5 мл) Флакон с прозрачной бесцветной жидкостью,
готов к использованию
Инструкция по применению 1 шт.
____________________1__________________________I__________________________
2.4. Одна кассета предназначена для проведения одного выявления ЛАМ в СМЖ, моче или
сыворотке крови человека.
3. АНАЛИТИЧЕСКИЕ И ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
3.1. Чувствительность (предел обнаружения).
Минимально достоверно определяемая концентрация ЛАМ:
- спинномозговая жидкость (СМЖ) - 1,0 нг/м л;
-моча-1,0 нг/м л;
- сыворотка крови -1,0 нг/мл.
3.2. Аналитическая специфичность.
Образцы сыворотки крови, СМЖ, мочи, полученные от пациентов с различными потенциально
интерферирующими инфекционными антигенами, были протестированы с помощью Набора
«ХЕМАТест LAMAg».
Ни одна из испытанных проб не показала наличие перекрёстной реактивности.
Предполагаемые влияющие факторы Перекрёстная реакция
Aspergillus отсутствует
Candida albicans отсутствует
Candida glabrata отсутствует
Candida krusei отсутствует
Candida tropicalis отсутствует
Cryptococcus neoformans отсутствует
Streptococcus pneumoniae отсутствует
Haemophilus influenzae отсутствует
Klebsiella pneumonia отсутствует
Pseudomonas aeruginosa отсутствует
Enterococcus faecalis отсутствует
Enterococcus faecium отсутствует
E.coli отсутствует
--- стр. 16 ---
3.3. Интерференция.
На результаты анализа не влияло наличие в сыворотке крови: гемоглобин (до 200 г/л),
/григлицериды (до 250 мг/дл), холестерин (до 220 мг/дл), билирубин (до 15 мг/дл), общий белок
(до 90 г/л); в СМЖ: хлориды (до 140 ммоль/л), эритроциты (до 30*10^л), глюкоза (до 3,9 ммоль/л),
белок (до 12 г/л), лейкоциты (до 12 г/л), цитоз (до 700 кл/мкл); в моче: мочевину (<500 ммоль/л),
уробилиноген (3,5 мкмоль/л), кетоновые тела (<16 ммоль/л), креатинин (<10 мг/дл), глюкозу (<250
ммоль/мл), нитриты (<0,3 мг/дл), лейкоциты (<500 лейкоцитов/мкл), pH в диапазоне (<9,5),
билирубин (<375 ммоль/мл), гемоглобин (<210 ммоль/мл), гаммаглобулин (<210 мкг/мл).
3.4. Время проведения анализа.
Общее время выявления липоарабиноманнанового антигена микобактерий методом
иммунохроматографического анализа с использованием Набора реагентов «ХЕМАТест LAMAg»
составляет 15-30 мин.
3.5. Объем исследуемого образца.
Для выявления липоарабиноманнанового антигена микобактерий методом
иммунохроматографического анализа с использованием Набора реагентов «ХЕМАТест LAMAg»
требуется не более 80 мкл исследуемого образца.
3.6. Клиническая проверка.
Для подтверждения диагностических характеристик было исследовано 898 образцов
биологической жидкости. По данным исследования диагностическая чувствительность 74,6% (ДИ
95%: 62,5% - 83,4%) с доверительной вероятностью 95%, диагностическая специфичность 80,1% (ДИ
95%: 66,8% - 94,9%) с доверительной вероятностью 95%.
4. МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ.
4.1. Потенциальный риск применения Набора - класс 26.
4.2. Для использования в диагностики т витро.
4.3. Все компоненты Набора являются нетоксичными.
4.4. Внимание! Использовать строго согласно Инструкции по применению. Не принимать
внутрь
4.5. К работе с материалом, микобактериями (III - IV группы), допускаются лаборатории,
имеющие специальное разрешение в соответствии с федеральными санитарными правилами,
нормами и гигиеническими нормативами, имеющих санитарно-эпидемиологическое заключение о
возможности проведения работ с микроорганизмами III группы патогенности в соответствии
с п. 319 СанПиН 3.3686-21 «Санитарно-эпидемиологические требования по профилактике
инфекционных болезней».
4.6. Все образцы, полученные для лабораторного исследования, следует считать потенциально
инфицированными, и при работе с ними должны учитываться требования СанПиН 3.3686-21
"Санитарно-эпидемиологические требования по профилактике инфекционных болезней", СанПиН
--- стр. 17 ---
(84-21 "Санитарно-эпидемиологические требования к содержанию территорий городских и
1ьских поселений, к водным объектам, питьевой воде и питьевому водоснабжению населения,
юсферному воздуху, почвам, жилым помещениям, эксплуатации производственных,
^щественных помещений, организации и проведению санитарнопротивоэпидемических
(профилактических) мероприятий".
4.7. При работе следует соблюдать требования ГОСТ Р 52905 (ISO 15190:2003) «Лаборатории
медицинские. Требования безопасности».
4.8. Лабораторное оборудование, в том числе пипетки, штативы, лабораторная посуда, халаты,
головные уборы, а также растворы реагентов должны быть строго стационарными. Запрещается их
перемещение из одного помещения в другое. Лабораторное оборудование и принадлежности,
которые используются при работе с Набором, должны быть соответствующим образом
маркированы и храниться отдельно.
4.9. Использовать и менять при каждой операции одноразовые наконечники для
автоматических или механических дозаторов с фильтром. Одноразовые пластиковые материалы
(пробирки, наконечники) необходимо сбрасывать в специальный контейнер, содержащий
дезинфицирующий раствор с последующей утилизацией (см. МУ-287-113 «Методические указания
по дезинфекции, предстерилизационной очистке и стерилизации изделий медицинского
назначения»).
4.10. Убирать и дезинфицировать разлитые образцы, используя дезинфицирующие средства в
соответствии с СанПиН 3,3686-21 «Санитарно-эпидемиологические требования по профилактике
инфекционных болезней».
4.11. Не использовать по истечении срока годности. Не использовать, если упаковка
повреждена или плохо запаяна. Перед применением убедиться в целостности компонентов Набора.
4.12. На результаты анализа с использованием Набора реагентов могут влиять такие факторы
как неточность выполнения анализа или отступление от инструкции.
4.13. Набор реагентов «ХЕМАТест LAMAg» не содержит лекарственных средств для
медицинского применения, материалов, которые являются канцерогенными, мутагенными или
токсичными, возможное выделение или вымывание которых приводит к сенсибилизации,
аллергической реакции или отрицательно влияет на репродуктивную функцию.
4.14. При использовании согласно инструкции по применению изделие является безопасным
(не несет физических, экологических и иных рисков).
4.15. Показания к применению медицинского изделия: применять в соответствии с
назначением.
4.16. Противопоказания к применению медицинского изделия: противопоказаний в рамках
установленного назначения не имеет. Не применять не по назначению.
--- стр. 20 ---
^Подготовленный образец использовать в анализе. Обработанные образцы не хранятся!
7.3. Приготовление анализируемых образцов мочи.
7.3.1. Отберите образец мочи в одноразовую или многоразовую стерильную пробирку с
^ялотно закрывающейся крышкой, тщательно перемешайте содержимое пробирки на вортексе.
Плотно закройте пробирку, чтобы предотвратить вскрытие при нагревании.
7.3.1.1. Вариант 1. Тепловой блок: нагреть центрифужную пробирку в течение 3 минут в
тепловом блоке при +100°С. Пробирки должны быть размещены в блоке только при достижении
заданной температуры.
7.3.1.2. Вариант 2. Водяная баня: нагреть пробирки в течение 3 минут при +100'’С. Пробирки
необходимо размещать на водяной бане только при достижении заданной температуры.
7.3.2. После тепловой обработки пробирки центрифугировать при 10 000 g в течение 10 mhhj’t
при температуре +20-25°С. Отобрать супернатант для анализа.
8. ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА.
8.1. Извлеките Кассету из упаковки и поместите ее на сухую горизонтальную плоскость
тестовой поверхностью вверх.
8.2. С помощью дозатора или одноразовой пластиковой пипетки внесите 80 мкл (3-4 капли)
тестируемого подготовленного образца в окошко для образца (S) Кассеты.
8.3. Во время проведения теста не трогайте и не перемещайте Кассету.
9. ИНТЕРПРЕТАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ.
ВНИМАНИЕ! Считывание результатов проводите через 15 минут после внесения
исследуемого образца, но не позднее 30 минут. Регистрация результатов анализа по истечении
более чем 30 минут недопустима, такие результаты являются недостоверными.
9.1. Отрицательный результат.
Присутствие в тестовой зоне одной окрашенной полосы
указывает на отрицательный результат. Это означает, что
или липоарабиноманнановый антиген микобактерий
отсутствует в образце, или его концентрация ниже
порогового значения.
Кассета
XEMfl
С - контрольная линия
Т- тестовая линия
9.2. Положительный результат.
Присутствие в тестовой зоне двух окрашенных полос Кассета
независимо от того, какая полоса появилась первой,
указывает на положительный результат. Это означает, что
содержание липоарабиноманнанового антигена
микобактерий равно или выше порогового значения.
C L
ХЕМР
О S
С - контрольная линия
Т-тестовая линия
--- стр. 21 ---
"9.3. Неправильный результат.
Отсутствие каких-либо видимых полос после проведения анализа указывает на неправильный
^зультат. Причиной может быть неправильное выполнение процедуры анализа или непригодность
у](ассеты для анализа. Рекомендуется протестировать образец пациента повторно используя новую
Кассету и тщательно соблюдая все описанные в инструкции условия.
9.4. Положительный результат анализа не может служить основанием для постановки
диагноза и должен использоваться в комплексе с клиническим наблюдением и другими методами
диагностики!
10. ОГРАНИЧЕНИЕ МЕТОДА
10.1. Несоблюдение процедур тестирования и интерпретации результатов может отрицательно
сказаться на процессе тестирования и (или) привести к получению недостоверных результатов.
10.2. Отрицательный результат тестирования не исключает инфицирования туберкулезом.
Получение отрицательного результата тестирования может свидетельствовать о том, что уровень
липоарабиноманнанового антигена микобактерий (ЛАМ) в образце ниже предела обнаружения или
указывать на то, что образцы были собраны неправильно.
10.3. Как положительный, так и отрицательный результат необходимо подтвердить другими
методами диагностики. Тест не может дифференцировать микобактерии туберкулеза от других
микобактерий. Тест не предоставляет данных о лекарственной чувствительности.
10.4. Выявление липоарабиноманнанового антигена микобактерий (ЛАМ) в СМЖ может быть
использовано для диагностики туберкулеза. Выявление ЛАМ в других биологических жидкостях
(моче и сыворотке крови) должно быть подтверждено последующим клиническим исследованием.
10.5. Набор реагентов «ХЕМАТест LAMAg» предназначен только для качественного
тестирования. Количественное содержание должно быть измерено с помощью других методов.
11. КОНТРОЛЬ КАЧЕСТВА
11.1. В качестве контроля результата анализа выступает присутствие контрольной полосы -
окрашенной линии, появляющейся на уровне маркировки «С» тестовой линии, - что указывает на
достаточный объем образца.
11.2. Контрольная полоса появляется во всех случаях правильного выполнения процедуры
анализа.
12. УСЛОВИЯ ТРАНСПОРТИРОВКИ,
ХРАНЕНИЯ И ЭКСПЛУАТАЦИИ НАБОРА.
Информация, об особенностях транспортирования должна учитываться всеми лицами,
участвующими в хранении, перевозке и утилизации (уничтожении) этого изделия.
12.1. Транспортирование.
12.1.1. Транспортирование Набора реагентов «ХЕМАТест LAMAg» должно производиться
всеми видами крытого транспорта в соответствии с требованиями и правилами, установленными на
данном виде транспорта, при температуре + 2-30°С.
9
--- стр. 22 ---
"\2.\2. Изделия, транспортированные с нарушением температурного режима, применению не
дежат.
12.1.3. Свойства компонентов Набора допускают его немедленное применение для анализа
яосле транспортирования.
12.2. Хранение.
12.2.1. Набор реагентов «ХЕМАТест LAMAg» должен храниться в оригинальной упаковке
предприятия-изготовителя при температуре +2-30°С в течение всего срока годности - 36 мес.
12.2.2. Не допускается замораживание целого Набора.
12.2.3. Кассета после вскрытия индивидуальной упаковки хранится 1 час при условии
соблюдения комнатной температуры (+18-25®С) и влажности не более 75%.
12.2.4. Буфер для обработки образца и Буфер для нейтрализации образца после вскрытия
хранить при температуре +2-30°С в течение всего срока годности.
12.2.5. Изделия, хранившиеся с нарушением регламентированного режима, применению не
подлежат.
12.3. Эксплуатация.
Потенциальный потребитель - Набор предназначен для использования персоналом клинико-
диагностических лабораторий не моложе 18 лет с высшим и средним медицинским, биологическим
образованием, прошедшим соответствующую профессиональную подготовку в области
используемых методов и методов безопасной работы с патогенными биологическими агентами I-IV
групп патогенности.
12.3.1. Набор должен применяться согласно Инструкции по применению.
12.3.2. После вскрытия индивидуальной непрозрачной упаковки с Кассетой, анализ должен
быть произведен в течение 1 часа при условии соблюдения комнатной температуры (+18-25®С) и
влажности не более 75%.
12.3.3. Все компоненты Набора реагентов «ХЕМАТест LAMAg» при соблюдении требований
данной Инструкции стабильны в течение всего срока годности.
12.3.4. Не используйте Набор с истекшим сроком годности. Срок годности Набора указан, на
внешней стороне упаковки.
12.3.5. Кассета предусматривает только однократное применение. Не используйте Кассету,
если упаковка повреждена.
12.3.6. Исключить прямое воздействие солнечных лучей на кассету во время проведения
исследования.
12.3.7. Неправильное обращение с образцами и изменение процедуры постановки анализа
могут повлиять на результаты. Для получения надежных результатов необходимо строгое
соблюдение Инструкции по применению Набора.
12.3.7. Не использовать компоненты набора повторно.
1 0