Набор реагентов для выявления анеуплоидий 13, 18, 21 хромосом человека методом анализа нуклеиновых кислот с детекцией результата методом капиллярного электрофореза (IVD-TEST AnPol) по ТУ 21.20.23-001-24952610-2020 — инструкция и характеристики
Открытые закупки, где изделие проходит ТЗ
Сейчас открытых закупок, где изделие полностью проходит ТЗ, нет; список обновляется каждый день.
Построчная сверка ТЗ с характеристиками этого изделия и все закупки под ваши товары — в кабинете, 7 дней бесплатно.
Попробовать бесплатно
Текст инструкции: технические характеристики
--- стр. 1 --- УТВЕРЖДАЮ енеральный директор ‘ 000«АЙВИДИЗ» _______Орехов В.А. «02» января 2023 г. ИНСТРУКЦИЯ по применению Набора реагентов для выявления анеуплоидий 13, 18, 21 хромоеом человека методом анализа нуклеиновых киелот е детекцией результата методом капиллярного электрофореза (IVD- TEST AnPol) по ТУ 21.20.23-001 -24952610-2020 IVDIZ mJ ООО «ли в и д и з ». Российская Федерация, 115201, город Москва, I I I . Каширское, д. 22кЗстр2, этаж 6, пом. 20 IVD V E R 102 .01 .23 . стр. I из 24 --- стр. 2 --- | ^ о г л а в л е н и р: 1. ИЛЗНЛЧЕИИН...........................................................................................................................................3 2. ОБЛАСТЬ ПРИМЕНЕНИЯ НАБОРА ........................................................ 5 3. ПРЕДНАЗНАЧЕННЫЙ ПОЛЬЗОВАТЕЛЬ НАБОРА.....................................................................5 4. ПРИНЦИП МЕТОДА...............................................................................................................................5 4. ВАРИАНТЫ ИСПОЛНЕНИЯ И СОСТАВ НАБОРА......................................................................8 5. АНАЛИТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ НАБОРА.....................................................................8 5.1. Аналитическая чувствительность (предел обнаружения) ...........................................................8 6. ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ НАБОРА................................................................ 9 7. МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ........................................................................................................10 7.1. Требования безопасности при работе с набором.........................................................................10 7.2. Требования охраны окружающей среды.......................................................................................10 8. МАТЕРИАЛЫ И ОБОРУДОВАНИЕ.................................................................................................11 9. АНАЛИЗИРУЕМЫЕ ОБРАЗЦЫ И ПРОБОПОДГОТОВКА........................................................11 9.1. Материал для исследования..............................................................................................................11 9.2. Предварительная обработка клинического материала...............................................................12 9.3. Интерферирующие вещества и ограничения, связанные с пробой ........................................12 10. ПРОВЕДЕНИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ.................................................................................................12 10.1. Постановка реакции амплификации исследуемых локусов ДНК .........................................13 10.2. Проведение амплификации исследуемых локусов ДНК.........................................................13 10.3. Проведение капиллярного электрофореза.................................................................................13 11. АНАЛИЗ И ИНТЕРПРЕТАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ........................................................................17 11.1. Детекция результатов........................................................................................................................17 11.2. Интерпретация результатов............................................................................................................17 12. СРОК ГОДНОСТИ. УСЛОВШ1 ТРАНСПОРТИРОВАНИЯ И ХРАПЕНИЯ ........................21 12.1. Условия храпения..............................................................................................................................21 12.2. Транспортирование...........................................................................................................................21 13. БЕЗОПАСНАЯ УТИЛИЗАЦИЯ........................................................................................................21 14. ГАРАНТИЙНЫЕ ОБЯЗАТЕЛЬСТВА ПРОИЗВОДИТЕЛЯ ......................................................21 15. ИНФОРМАЦИЯ О ПРОИЗВОДИТЕЛЕ..........................................................................................22 16. ПЕРЕЧЕНЬ НОРМАТИВНЫХ ДОКУМЕНТОВ..........................................................................23 VKRI02.01.23. стр. 2 из 24 --- стр. 3 --- :Г1ИС0К СОКРАЩЕНИИ в настоящей инструкции применяются следующие сокращения и обозначения: НЦР - полимеразная ценная реакция дик - дезоксирибонуклеиновая кислота мкл - микролитр мл - миллилитр 1. НАЗНАЧЕНИЕ Набор реагентов IVD-TEST AnPol предназначен для выявления анеуплоидий 13, 18, 21 хромосом человека, приводящих к развитию еиндромов Дауна, Эдвардса, Шерешсвского- Гсрнсра, Натау, Клянфсльтсра, в образцах амниотической жидкости методом анализа нуклеиновых кислот с детекцией результата методом капиллярного электрофореза. Набор предназначен для использования совместно с медицинским изделием «Анализатор Генетический Applied Biosystems 3500, с принадлежностями (Регистрационное удостоверение № ФСЗ 2010/07007). Функциональное назначение. Функциональное назначение - Набор реагентов IVD-TEST AnPol предназначен для выявления частых анеуплоидий человека (анеуплоидий но хромосомам 13, 18, 21 и половым хромосомам). Полученные результаты не являются основанием для постановки диагноза, а используются только в сочетании с другими лабораторными показателями и диагностической информацией. Научная обоснованность определяемых мутаций Набор реагентов IVD-TESr AnPol предназначен для выявления наиболее частых анеуплоидий человека. Анеуилоидия — явление, при котором клетки организма содержат измененное число хромосом, не кратное гаплоидному набору. В норме в большинстве ююток человека содержитея 46 хромосом, которые представляют собой диплоидный набор (22 пары аутосом и две половые хромосомы). При ансунлоидии в клетках может присутствовать дополнительная хромоеома (трисомия) или отсутствовать одна хромосома (моносомия). Основной механизм возникновения анеуплоидий - неправильное расхождение гомологичных хромосом в мейозе, в результате чего в одну половую клетку нона; 1ают две гомологичные хромосомы (это приводит к трисомии зиготы), а в другую - ни одной (это приводит к моносомии зиготы). Анеуилоидия лежит в основе ряда хромосомных болезней человека. У живорожденных чаще всего встречаются трисомии но 8, 9, 13, 18, 21 и 22 аутосомам. При возникновении трисомии или моносомии по другим аутосомам эмбрион оказывается нежизнеспособным и гибнет на ранних сроках внутриутробного развития. К ансунлоидиям относят также аномалии по числу половых хромосом — нолисомии но Х-хромосомс у мужчин и женщин, моносомия но Х-хромосоме у женщин, дисом^ия но У-хромосоме у мужчин. Наиболее часто встречаются синдром Дауна (трисомия но хромосоме 21), синдром Эдвардса (трисомия но хромосоме 18), синдром Патау (фисомия но хромосоме 13), синдром Шсрстевского-Тсрнсра (моносомия но хромосоме X у женщин) и синдром Кляйпфельтера (дисомия но Х-хромосоме у мужчин). Кроме того, у человека может наблюдаться увеличение полного набора хромосом (полиплоидия), в частности тринлоидия и тсфаилоидия. Однако полиплоидии, как правило, нс совместимы с жизнью и встречаются у абортусов и мертворожденных. VER 102.01.23. стр. 3 из 24 --- стр. 6 --- i:S'r AnPol содержат флуоресцентную метку, обеспечивающую возможность последующей оптической регистрации сигнала амплификации исследуемых молекулярных мишеней. Полученные флуоресцентно меченные ИЦР продукты анализируются, методом капиллярного электрофореза и подвергаются разделению но длине фрагмента в акриламидном геле. Разделение продуктов ПЦР и детекция флуоресцентного сигнала производится в автоматическом режиме с использованием Анализатора генетического Applied Biosyslems 3500, с нрина;;лежностями (РУ № ФСЗ 2010/07007). Анализ полученных данных проводится в соответствии с Руководством для экспериментов по фрагментпому анализу GcncMappcr (на бумажном носителе или компакт-диске) для Анализатора генетического Applied Biosyslems 3500, с принадлежностями (Регистрационное удостоверение № ФСЗ 2010/07007). Проводится идентификация исследуемых маркеров но распределению длин амнлифицированных фрагментов и использованному флуоресцентному красителю, а также анализ соотношения уровня сигнала полученных аллелей ПЦР продуктов. Исследуемые Sd’R маркеры представляют собой область коротких повторов геномной ДНК, в норме встречающиеся в геноме человека в варианте 1-2 аллельных локусов с равным соотношением сигнала представленных аллельных вариантов. Однако, в результате нарушения механизмов расхождения хромосом в процессе мейоза, возможно: 1) Увеличение количества аллельных вариантов одного маркера до 3 и более в случае нолисомии но одной из хромосом. 2) Непропорциональное увеличение уровня сигнала одного из аллельных вариантов маркера в случае нолисомии но одной из хромосом. 3) Наличие всегда только одного аллеля но маркерам с данной хромосомы в случае моносомии но ней. 4) Полное отсутствие сигнала амплификации одного из исследуемых маркеров в результате делении или отсутствия данной хромосомы в геноме. Количество повторов и размер амнлифицируемых фрагментов для каждого из маркеров, входящих в набор IVD-TKST AnPol, известны и могут быть определены методом капиллярного электрофореза (Таблица 3). Определение длины амнлифицированного фрагмента происходит при сравнении относительной подвижности исследуемого фрагмента в полиакриламидном геле с подвижностью фрагментов размерного стандарта известной длины. Размерный стандарт S550, входящий в состав набора IVD-T17ST AnPol, представляет собой совокупность охарактеризованных синтетических олигонуююотидов заведомо известной длины. Ниже приводится пример электрофореграммы с сигналами фрагментов стандарта S550 в канале детекции Orange. Обозначения 26 фрагментов ДНК приводятся в соответствии с их размером в нуклеотидных основаниях: 60, 70, 80, 90, 100, 120, 140, 160, 180, 200, 220, 230, 240, 260, 280, 300, 320, 340, 360, 380, 400, 420, 440, 450, 500, 550. Рисунок 1. Элсктрофореграмма размерного стандарта S550. VER 102.01.23. стр. 6 из 24 --- стр. 7 --- Относительная длина детектируемых фрагментов ДНК в парах нуклеотидов g i ё I0 I ii 1 S 0) % I2J 1*0 1 « leo гос гге г * : г«с г м » о зго з*о зео м о *ос *гз * м *st *ос • J__L _ ... .11 .) * а_ _ jL 120 1*0 160 16С гос 22С г*о гео г м joo э?о з*э эбо *СС *20 4*0 *50 48С МС 120 1*3 163 1$С 200 22С 2*0 2«С 2(0 300 320 3*0 360 ЗМ *0С *20 **4 <6С *СС 120 1*0 1«3 10С 200 220 2*0 260 230 ! 00 320 3*0 360 too *33 **0 *60 <60 <ОС Рисунок 2. Элсктрофорсграмма ПЦР-нродуктов, полученных при исследовании ДНК человека с использованием набора IVD-TRST ЛпРо1, вариант нормы. 'Габлица 3. Характеристики анализируемых маркеров ДИК человека. Маркер Диапазон длины амнлифицирусмого фрагмент а (нар нуклеотидов) Канал детек11ии DXS6803 100-150 Blue D21S1435 160-200 E31ue D21S1I 220-285 Blue DXS9896 300-365 Blue DI3S634 375-430 Blue D18S535 440-500 Blue DXSI187 100-190 Green D21S1446 200-240 Green XHPR'I' 245-310 Green D18S386 330-405 Green D13S305 420-480 Green AMEL 100-114 Yellow 4SII 115-129 Yellow ТЛР1. 130-149 Yellow ZI'XY 150-170 Yellow D18S978 173-235 Yellow SRY 241-252 Yellow D13S800 270-323 Yellow D18S390 330-425 Yellow D13S628 427-483 Yellow VER 102.01.23. стр. 7 из 24 --- стр. 8 --- DXS8378 110-170 Red D21S1409 180-256 Red D13S252 260-325 Red D21S1442 ‘ 328-386 Red DI8S819 390-485 Red 4. ВАРИАНТЫ ИСПОЛНЕНИЯ И СОСТАВ НАБОРА Набор реагентов выпускается в 1 варианте исполнения. 11абор рассчитан на проведение исследования 100 образцов, включая контрольные образцы В состав набора входят следующие комплекты: 1) «Комплект для амплификации», включающий: - Реакционная смесь - 1 пробирка (500 мкл) - Раствор активатора - 1 пробирка (500 мюх) - Деионизованная вода - 1 пробирка (1700 мкл) 2) «Комплект контрольных образцов», включающий: - Отрицательный контроль - 1 пробирка (1700 мкл) - Положительный контроль - 1 пробирка (20 мкл) 3) «Комплект для электрофореза», включаюпщй: - Размерный стандарт S550 ~ 1 пробирка (120 мкл) В состав комплектаций набора входят готовые к применению реагенты. Реакционная смесь и Раствор активагора содержат все необходимые компоненты для проведения ПЦР: • раствор дШ Ф; • раствор специфичных флуоресцентно меченых праймеров; ПЦР-буфер; • Taq-нолимсразу; Контрольный образец «Положительный контроль» представляет собой раствор ДПК человека в концентрации 10 нг/мкл раствора, содержащий исследуемые полиморфные маркеры в варианте нормы. Контрольный образец «Отрицательный кошроль» представляет собой дсиони:юванную воду, нс содержащую ДПК человека. Размерный стандарт S550 представляет собой смесь охарактеризованных но молекулярной массе флуоресцентно меченых фрагментов ДПК, используемых в качестве стандарта для определения размера амнлифицированных ПЦР-нродуктов при проведении фрагментного анализа методом капиллярного электрофореза. 5. АНАЛИТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ НАБОРА * 5.1. Аналитическая чувс 1вителыюс гь (предел обнаружения) Аналитическая чувствительность набора TVD-TESl' AnPol / Предел обнаружения анеунлоидий 13, 18, 21 хромосом человека, ответственных за развитие синдромов Дауна, Эдвардса, Шерешсвского- Гсрнсра, Патау, Клянфсльтсра, в геномной ДНК человека составляет не менее 10 нг аутосомной ДПК человека. Концентрация целевой ДПК в исследуемом препарате должна быть не менее 0.7 нг/мкл. VER 102.01.23. стр. 8 из 24 --- стр. 9 --- / f .2. Аналитическая специфичность Специфичность определяется олигопуклсотидпыми затравками (праймерами), подобранными к целевым нуклеотидным последовательностям исследуемых локусов, что исключает псрскрсстпыс реакции с другими участками генома человека. Оценка аналитической специфичности набора реагентов проведена в ходе испытаний посредством добавления в реакцию препаратов геномной ДНК человека, содержащих известные аллельные варианты всех исследуемых маркеров. Результаты перекрестных реакций при исследовании различных аллельных вариантов в исследуемых образцах ДНК зарегистрированы не были. Полученные в ходе иенглтаний результаты исследования специфичны и соответствуют ожидаемым в 100% проведенных исследований. 5.3. Повторяемость Повторяемость результатов исследования составляет 100%. с использованием набора IVD-TEST ЛпРо1 6. ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ НАБОРА Валидация реагентов, входящих в состав набора, проведена в рамках клинических испытаний на 61 образце ДНК человека, полученной из амниотической жидкости. В качестве метода сравнения для всех образцов проведено предварительное цитогенетическое исследование кариотипа в югетках исследуемого материала. Диагностическая чувствительность выявления анеуплоидий 13, 18, 21 хромосом человека с использованием набора IVD-THST AnPol составляет 100% (95% ДИ: 93,6-100%), с доверительной вероятностью 95 %). Диа 1’ностичсская специфичность выявления анеуплоидий 13, 18, 21 хромосом человека с использованием набора IVD-TEST ЛпРо1 составляет 100% (95% ДИ: 82,9-100%) с доверительной вероятностью 95 %). Воспроизводимость результатов исследования с использованием набора IVD-TEST AnPol составляет 100% и подтвсрж; 1сна в ходе проведения клинических испытаний на разных сериях набора (внутриссрийная, межссрийная и внутриностановочная воспроизводимость). Правилыюсгь результатов исследования с использованием набора IVD-TEST AnPol подтверждена с использованием цигогснстичсского исследования кариотипа в клегках исследуемого материала. Показатели диагностических характеристик для отдельных видов анеуплоидий Выявленный клинический вариант Количество положительны X образцов Диагностическая чувствительность Диагносгическа я специфичность Вариант нормы 16 100% (95% ДИ:82,9-100%) 100% (95% ДИ:93,9-100%) Синдром Дауна 20 100%(95% ДИ:86,М00%) 100% (95% ДИ:92,9-100%) Синдром Натау* 3 100% (95% ДИ:36,8-100%) 100% (95% ДИ:94,9-100%) Синдром Эдвардса 9 100% (95% ДИ:72,7-100%) 100% (95% ДИ:94Д-100%) Синдром Кляйнфсльтсра 7 100% (95% ДИ:65,2-100%) 100% (95% ДИ:94,6-100%) Синдром Шсрсшсвского- Тсрнсра 6 100% (95% ДИ:60,7-100%) 100% (95% ДИ:94,7-100%) *)Для корректной статистической обработки недостаточно образцов сданной формой патологии. VER 102.01.23. стр. 9 из 24 --- стр. 10 --- Потенциальный риск применения набора - класс 26. 7.1. Требования безопасности при рабозс с набором Работа должна проводиться в лаборатории, выполняющей молекулярно-биологические (11ЦР) исследования клинического материала на наличие возбудителей инфекционных болезней, с соблюдением санитарно-эпидемических правил СанПи! I 3.3686-21 «Санитарно- эпидемиологические требования но профилактике инфекционных болезней», СанИиН 2.1.3684-21 «Санитарно-эпидемиологические требования к содержанию территорий городских и сельских поселений, к водным объектам, питьевой воде и питьевому водоснабжению населения, атмосферному воздуху, почвам, жилым помещениям, эксплуатации производственных, общественных помещений, организации и проведению санитарно-нротивоэнидсмических (профилактических) мероприятий» и методических указаний МУ 1.3.2569-09 «Организация работы лабораторий, использующих методы амплификации нуклеиновых кислот при работе с материалом, содержащим микроорганизмы I-IV групп патогенности». При работе всегда следует выполнять следующие требования: • Следует рассматривать исследуемые образцы как инфскционно-онасные, организовывать работу и хранение в соответствии с СанИиП 3.3686-21 «Санитарно- эпидемиологические требования по профилактике инфекционных болезней». • Убирать и дезинфицировать разлитые образцы или реактивы, используя дезинфицирующие средства в соответствии СанПиП 3.3686-21 «Санитарпо- энидсмиологичсскис требования по профилактике инфекционных болезней». • Удалять неиспользованные реактивы в соответствии с требованиями СанИиН 2.1.3684- 21 «Санитарно-эпидемиологические требования к содержанию территорий городских и сельских поселений, к водным объектам, питьевой воде и питьевому водоснабжению населения, атмосферному воздуху, почвам, жилым помещениям, эксплуатации производственных, общественных помещений, организации и проведению санитарно противоэпидемических (профилактических) мероприятий». ВНИМАНИЕ! При удалении пробирок, содержащих продукты ПЦР, недопустимо их открывание и разбрызгивание содержимого, поскольку это может привести к контаминации продуктами 1ЩР лабораторной зоны, оборудования и реагентов. • Применять набор строго по назначению, согласно данной инструкции. • Допускать к работе с набором только специально обученный персонал с высшим или средним медицинским или биологическим (ветеринарным) образованием, прошедшим подготовку на лицензированных курсах первичной специализации по работе с микроорганизмами III-IV групп патогенности и получившим донолнитслыюс специальное образование па курсах повышения квалификации по молекулярно- биологическим методам диагностики. • Не использовать набор но истечении срока годности. 7.2. Требования охраны окружающей среды Набор реагентов нс содержит веществ и материалов, требующих обеспечения специальных мер безопасности, и не представляет опасности для людей в течение всего срока годности. В том числе в случае отклонений в функционировании медицинского изделия, включая определяемые по внешним признакам. Набор реагентов не требует специальных мер безопасности при воздействии таких предсказуемых факторов, как впепшие элскгромагнитные поля, электростатические разряды, излучение (электромагнитное, ионизирующее, иное), атмосферное давление и его перепады, влажность и температура воздуха. I МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ VKR 102.01.23. стр. 1 о из 24 --- стр. 13 --- ^ Проведение фрагментного анализа полученных ГЩР продуктов методом капиллярного электрофореза. - Анализ и интерпретация результатов. ЮЛ. Постановка реакции амилифика 1Ц1и исследуемых локусов ДНК Для проведения этана амплификации используются препараты ДНК в деионизованной воде, экезрагированные из 100 мкл амниотической жидкости согласно рекомендациям, приведенным в пункте 9.2 настоящей Инструкции но применению. Для внесения в пробирки реагентов, проб ДНК и контрольных образцов используются одноразовые наконечники с фильтрами. Общий объем реакционной смеси - 25 мкл, включая объем пробы ДНК - 15 мкл. 1) Приготовить реакционную смесь в отдельной пробирке на 1,5 мл для необходимого количества исследований из расчета 5 мкл Реакционной смеси и 5 мкл Раствора активатора на одну пробу. Смесь необходимо приготовить на необходимое количество образцов с учетом обязательного исследования Положительного Контроля и Отрицательного Контроля (Количество исследуемых образцов + 2). После приготовления реакционной смеси тщательно переметать ее на вортексе и осадить капли с крышки пробирки. 2) Внести в каждую пробирку но 10 мкл готовой реакционной смеси. 3) В пробирки с реакционной смесью, используя наконечники е фильтром, внести до 15 мкл исследуемого препарата ДНК (в зависимости от концентрации исследуемого препарата) и довести Деионизованной водой до общего объема 25 мкл. I [ри постановке реакции с контрольными образцами (Положительный контроль и Отрицательный кошроль) внести в пробирки с реакционной смесью 14 мкл Деионизованной воды и 1 мкл раетвора исследуемого Контрольного образца. 4) Осторожно перемешать нииетированием. 10.2. Проведение амплификации исследуемых локусов ДПК 1. Запрограммировать амнлификатор для выполнения соответствующей программы амплификации (ем. табл. 5). Шаг программы Температура. °С Время инкубации, сек. Количество циклов 1 95 120 1 2 95 30 3 64 120 23 4 72 85 5 68 15 мин 1 6 15 00 1 2. Ус'гановить пробирки в ячейки реакционного модуля прибора. 3. Запустить выполнение программы амплификации. 4. По окончании выполнения программы приступить к этапу проведения капиллярного электрофореза полученных ПЦР продуктов. 10.3. Проведение каииллирпш о электрофореза Фрагмептпый анализ полученных ГЩР продуктов проводится в соответствии с Руководством для экспериментов но фрагмептному анализу GeneMapper для Анализатора Генетического Applied Biosyslcms 3500, с припадлежпоетями (Регистрационное удостоверение № ФСЗ 2010/07007). VKR 102.01.23. стр. 13 из 24 --- стр. 14 --- 1. предварительная настройка прибора Предварительная настройка Анализатора Генетического Applied Biosyslcms 3500, с принадлежностями (Регистрационное удостоверение № ФСЗ 2010/07007) включает создание пользовательских протоколов для проведения исследования (Instrument Protocol)'. 1,1 Создание Instrument Protocol Перейти в раздел Library в программе Data Collcclion Software. В разделе Analyze, выбрать вкладку Instrument Protocols. В открывшемся меню нажать кнопку Create (откроется диаюговос окно создания нового Instrument Protocol). В появившемся окне указать параметры нового Instrument Protocol: Application Type HID Run Module например “IIID36_POP4” (выбрать протокол, соответствующий параметрам системы) Protocol Name IVDIZ ,.® (30RDIZ • £ditlnttrum«nt Protccol GORDtZ Sntup nn ln*!trumnnt Prntnrnl -pplic»ticn T%p* HlC' D.eS«t: |0ORDE Incirument Prctc<cl Preptrtit: • PiioMcJuif H1D36.POP4 Detciipticn 0.«n T«mp«r»tuie >‘Ci: W Run Timt isec.i: Cipillsr. Len 9th Run vcllage'I Vciti 13.0 PrePun Titn« 130 Disable Marne Filter Instrument Prctc<ol Setup Help Q Pci men ь • i i * Pun Modules fers eapiUar grecnl a ailable in the list PiePun Voltage ||•'^cU5l 15 Injection Voltage Volts1.3 Injection Tin>e isec,): 15 Data Dele;'sec.r 1 ^ Advanced Optlortt Fcllcv'.ing . alues are not recommended to be changed. Vcltage Tolerance •! Voltsi 0.'^ Voltage » of Steps •nl i; First Read Cut Time imsi IW Second Peed Cut Time ims'. 160 Normalisation Target 3300.0 Mcrmalicaticn Factor Thiesheld I.lira, 0.3 Voltage Step Inter.al'.sec.I 15 Mcrmali:alicn Factor Threshold Ma« 3.0 rppl>'tP‘‘Fsac I I Sav e to Library Рекомендуемые параметры электрофореза: 1 lapaMcrp Значение Oven femperature 60 PrcRun Voltage 15 PrcRun Time 180 Injection Voltage 1.2 Injection Time 15 Data Delay Time 1 Run Voltage 13.0 Run'I'imc 1600 Нажать кнопку Save. ' При первичном использовании прибора требуется проведение спектральной калибровки Анализатора по каналам Blue, Green. Yellow, Red. Orange в соответствии с Руководством для экспериментов по фрагментному анализу GeneMapper для Анализатора Генетического Applied Biosystems 3500, с принадлежностями (Регистрационное удостоверение № ФСЗ 2010/07007) VKR 102.01.23. стр. 14 из 24 --- стр. 15 --- ^ зависимости от состояния используемого прибора параметр Injeelion Time может быть скорректирован пользователем ;с) 1я достижения оптимальной амплитуды флуоресцентного сигнала. Параметр Run Time также может быть скорректирован пользователем в случае, если рекомендуемое время фореза являетея избыточным (все фрагменты размерного стандарта детектируются существенно раньше отведенного времени) или недоетаточпым (не все фрагменты размерного стандарта детектируются за отведенное время). Оптимальное время фореза в наибольшей степени завиеит от текущего еоетояния капилляров и полимера в генетическом анализаторе и может меняться со временем. 1.2 Создание Assay Перейти в раздел Library в программе Data Collection Software. В разделе Manage, выбрать вкладку Assays. В открывшемся меню нажать кнопку Create (огкростся диалоговое окно создания нового Assay). В появившемся окне указать параметры нового Assay: Assay Name Application Type Instrument Protocol IVDIZ HID IVDIZ Нажать кнопку Save. 1.3 Создание Si/e Standard Перейти в раздел Library в программе Data Colleetion Software. В разделе Analyze, выбрать вкладку Size Standards. В открывшемся меню нажать кнопку Create (откроется диалоговое окно еоздания нового Size Standard). В ноявившемея окне указать параметры нового Size Standard: ■ ti;« Jtind ircl Ccscnpticn. I C e Ccicr jOunge » cTfs-jf! S;'>. itefitc t. ; fntti ГК' 5i:« $t«nd<fd definfiien >€.g. 11-'), ^5' CutfcM f :« ;Hnd*'d delmit'cn Ш Т')Л «лI'M Jl.'O .O 1J0.3 1«.0 1 . Ч 1 . ) .'))5 'e O .')I K iO .') 1 з;о,о ■ w o.o 1360.0 ! 380.0 ^4'».0 'i.\i.O 4JO.O i»0 Нажать кнопку Save. 1.4 Создание QC Protocol Перейти в раздел Library в программе Data Collection Software. VKRi02.01.23. CTp. 15 из 24 --- стр. 16 --- W разделе Analyze, выбрать вкла; 1ку QC Protocols. В открывшемся меню нажать кнопку Create (откроется диалоговое окно еоздания нового QC Protocol). В появившемся окне указать параметры нового QC Protocol: |И50 ' |ь»€С« 1 1« а.1.0 I ' t t l i n , ! Q C S t t t i n g t t U l h c d . t o o l S c u t h t i n P f i t A n ^ p M u c t c T h r e s h o l d V e m m o n S e t tin g s 4s e S m o o t h in g j L i g h t ^ le . '. 'i n d e . v P t s i i d S I P e l . n c m i e i D e g r e e S lo o e T h r e s h o l d P e « t S ta rt S lo p e T h r e s h o l d P e a t E n d • Pn;le-;elName GC'f OlSCiipticn: S i:e S U n d a rd [s*S 0 i«il)4ii5t«m 9s QC Setting: 6'Oicl Peal -cti.ale Etcad Peak Mag il iluc i l.S Нажать кнопку Save. Подготовка и загрузка продуктов амплификации Для загрузки образцов в прибор необходимо приготовить смесь формамида и размерного стандарта S550 в следующем соотношении: Компонент _______________Объем на один образец Ili-DjiM формамид Размерный стандарт S550 10.0 мкл 1.0 мкл При расчете объемов компонентов смеси следует учесть, что формамидом должны быть заполнены все лунки, в которых будет происходить инжекция, в том числе и ;гунки, не содержащие образцы. После перемешивания добавить но 10 мкл приготовленной смеси в каждую лунку планшета. Добавить в каждую лунку со смесью формамида и размср 110го стандарта S550 но 1 мкл полученного 111 (Р продукта. При необходимости удалить пузыри со дна лунок планшета коротким центрифугированием. Накрыть планшет резиновым ковриком, загрузить в прибор и произвести запуск электрофореза. 2 Запуск прибора Проведение капиллярного электрофореза на Анализаторе Генетическом Applied Biosystems 3500, с принадлежностями (Рсгистрациоппос удостоверение № ФСЗ 2010/07007) проводитея в соответетвии е инструкцией пользователя, предоетавляемой производителем. Для получения корректных результатов необходимо создать соответствующую спектральную калибровку, вглнолнив следующие шаги: Шаг А - Создание планшета Перед началом анализа необходимо создать Plate (планшет), описывающий расположение образцов на планшете и содержащий инструкции для прибора. Для этого необходимо перейти 2.01.23. С ' ф . 16 из 24 --- стр. 17 --- ^ меню Create New Plate программы Data Collection Software. Помнится диалоговое окно, в KO'i'opoM необходимо указать параметры нового планшета: Name Например IVDIZ \дата\ Plate 1 урс Fragment Нажать кнопку ОК. Появится новая таблица со схемой исследуемого планшета. Шаг В - Заполнение таблицы Для всех анализируемых лунок планшета необходимо указать: Sample name имя объекта Sample type тин образца Assay IVDIZ I'ilcnamc convention структура имени файла Results group параметры сохранения файлов Шаг С - Запуск прибора и информация о статусе прибора После создания схемы расположения образцов на нлашпетс, нажмите на кнопку Link Plate Гог Run. В открывшемся окне указать положение планшета в приборе и запустить электрофорез нажатием кнопки Start Run. 11. АНАЛИЗ И ИНТЕРПРЕТАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ 11.1. Дегекция резулыатов Детекция флуорссцсн'пюго сигнала продуктов амплификации осуществляется прибором автоматически. Па основании этих данных управляющая программа строит кривые накопления флуоресцентного сигнала но каждому из каналов детекции. Анализ полученных данных проводиться в соответствии с Руководством для экспериментов но фрагментному анализу GencMapper (на бумажном носителе или компакт-диске) для Анализатора генетического Applied Biosystems 3500, с принадлежностями (Регистрационное удосговсренис №ФСЗ 2010/07007). 11.2. Иитсрирегация резулыатов Анализируют кривые накопления флуоресцентного сигнала но каналам детекции Blue, Green, Yellow и Red. Регистрируется сигнал амплификации исследуемых маркеров в диапазоне длин фрагментов, представленных в табл. 3. При этом результаты электрофоретического исследования анализируемых образцов ДНК Moiyr считаться достоверными только при условии обнаружения сигналов всех 26 фрагментов размерного стандарта S550 но каналу детекции Orange. В случае отсутствия на элск'фофореграммс но каналу детекции Orange хотя бы одного из фрагментов размерного стандарта S550, результаты исследования не могут считаться достоверными. В этом случае требуется провести повторное исследования образца. Лл1 оритм ингсрпрстации рсзулыаюв анализа исследуемых маркеров Маркеры SRY, АМГЛ., 4S1I, ZFXY, TAFL - являются маркерами определения генетического пола: Генотип SRY(SRY), AMELQCY), 4SII(XY), ZFXYQCY), TAFL(X,3 - соотиошепие 1:2) - соответствует мужскому генетическому полу. Генотип SRY(~) AMEL(X)y 4S1I(X), ZFXY(X)y TAFL(Xy3 ~ соотношение 1:1) - соответствует женскому генетическому полу. Маркер 3 AFL - являс гея маркером позволяющим определить относительное количество (дозу) X хромосом но сравнению с хромосомой 3, количество которой в геноме человека является константой и всегда равно двум. VKR 102.01.23. стр. 17 из 24 --- стр. 18 --- w lарксры AMHL, 4SM, ZFXY - является маркерами позволяющим определить отпоситслыюс количество (дозу) X хромосом по сравнению с хромосомой У. В Норме это соотпошспис составляет 1:1 для мужского генотипа и 1:0 для женского генотипа. • Маркер SRY - является маркером мужского пола, расположенным на Y хромосоме и принимающим участие в развитии организма индивида но мужскому тину. Маркеры ДНК за исключением маркеров определения генетического пола (SRY, AMliL, 4SH, ZFXY, TAFL) представленные в гомозиготном состоянии - являются неинформативными и нс влияют на результат исследования. Нормальный результат генотинирования может быть установлен в случае, если нс менее двух маркеров данной конкретной хромосомы демонстрируют нормальное распределение интенсивности амплификации аллелей, при этом остальные маркеры нс информативны. Аномальный результат генотинирования может быть установлен в случае, если нс менее двух маркеров данной конкретной хромосомы демонстрируют аномальное распределение интенсивности амплификации или числа аллелей, при этом остальные маркеры нс информативны. На основании результата амплификации информативных (гетерозиготных у данного индивида) маркеров может быть установлено следующее состояние исследуемого набора хромосом человека: Выявлен вариант нормы: 1) Все информативные маркеры, расноложенные на хромосомах 13,18,21 являются диаллсльными и демонстрируют соотношение интенсивности сигнала 1:1 2) Все маркеры определения генетического пола соответствуют женскому или мужскому варианту с соотношением сигнала маркеров X и У хромосомы 1:1 в мужских образцах. 3) Маркер TAFL демонстрирует соотношение сигнала амплификации вариантов X и 3 равное: 1:2 у мужчин (что свидетельствует о присутствии в исследуемом генотипе одной X хромосомы), и 1:1 у женщин (что свидетельствует о присутствии в исследуемом генотипе двух X хромосом) Выявлена грисомии но хромосоме 21 (Синдром Дауна): 1) Все информативные маркеры, расположенные на 21 хромосоме, демонстрируют триаллельные варианты генотипов или аномальное распределение аллельных вариантов в соотношении 1:2, 2:1. 2) Все информативные маркеры, расноложенные на хромосомах 13,18 являются диаллсльными и демонстрируют соотношение интенсивности сигнала 1:1. 3) Все маркеры определения генетического пола соответствуют женскому или мужскому варианту с соотношением сигнала маркеров X и У хромосомы 1:1 в мужских образцах. 4) Маркер TAFL демонстрирует соотношение сигнала амплификации вариантов X и 3 равное: 1:2 у мужчин (что свидетельствует о присутствии в исследуемом генотипе одной X хромосомы), и 1:1 у женщин (что свидетельствует о нрисутс гвии в исследуемом генотипе двух X хромосом) Выявлена | рисомия по хромосоме 13 (синдром Па ray) 1) Все информативные маркеры, расноложенные на* 13 хромосоме, демонстрируют триаллельные варианты генотипов или аномальное распределение аллельных вариантов в соотношении 1:2, 2:1. 2) Все информативные маркеры, расноложенные на хромосомах 18,21 являются диаллсльными и демонстрируют соотношение интенсивности сигнала 1:1. 3) Все маркеры определения генетического пола соответствуют женскому или мужскому варианту с соотношением сигнала маркеров X и У хромосомы 1:1 в мужских образцах. 4) Маркер I'AFL демонстрирует соотношение сигнала амплификации вариантов X и 3 равное: 1:2 у мужчин (что свидетельствует о присутствии в исследуемом генотипе одной X хромосомы), и 1:1 у женщин (что свидетельствует о прису тствии в исследуемом генотипе двух X хромосом) VKR 102.01.23. стр. 8 из 24 --- стр. 20 --- ТЛ И . 2 фрагмента Сигнал отсутствует ZFXY 2 фрагмента Сигнал отсутствует D18S978 2 фрагмента Сигнал отсутствует SRY 1 фрагмент Сигнал отсутствует D13S800 . 2 фрагмента Сигнал отсутствует D18S390 2 фрагмента Сигнал отсутствует D13S628 2 фрагмента Сигнал отсутствует DXS8378 1 фрагмент Сигнал отсутствует D21S1409 1 фрагмент Сигнал отсутствует D13S252 2 фрагмеЕ1та Сигнал отсутствует D21S1442 1 фрагмент Сигнал отсутствует D18S819 2 фрагмента Сигнал отсутствует Результаты анализа пс подлежат учету в следующих случаях: 2. 3. Если результаты анализа хотя бы одного из исследуемых маркеров в образцах Положительный контроль и Отрицательный контроль не еоответсгвуют ожидаемым, приведенным в Таблице 6. Возможная причина: ошибки при постановке ПЦР реакции и элекфофореза. Необходимо провести повторную постановку реакции ПЦР и этап электрофореза. Если хотя бы для одного из исследуемых маркеров в образцах Положительный контроль отсутствует сигнал амплификации. Возможная причина: ошибки при постановке ПЦР реакции и электрофореза. Необходимо провести повторную постановку реакции ПЦР и этан электрофореза. Если хотя бы для одного из исследуемых маркеров (кроме маркера SRY, отсутствующего в женских образцах) в пробе с исследуемым образцом отсутствует сигнал амплификации. Возможная причина: ошибки при постановке ПЦР реакции и электрофореза. Необходимо провести повторную постановку реакции ПЦР и этан электрофореза. VER 102.01.23, стр. 20 из 24 --- стр. 21 --- И2. СРОК ГОДНОСТИ. УСЛОВИЯ ТРАНСПОРТИРОВЛИИЯ и ХРАНЕНИЯ 12.1. Условия хранения Набор реагентов IVD-TliS'I' AnPol должен храниться в защищенном от света месте при темнсразурс от -25°С до -20°С в течение всего срока годности. После начала использования Набор реагентов должен быть разукомплектован. «Комплект для амплификации» и «Комплект контрольных образцов» должны храниться в зоне «нрс-ПЦР», а «Комплект для электрофореза» должен храниться в зоне «ност-НЦР». Все компоненты набора допускается хранить при TCMiicpaiypc от -25°С до -20°С в течение всего срока годности. Срок годности Наборов - 18 месяцев со дня приемки О ГК предприятия-изготовителя. Набор реагентов с истекшим сроком годности применению нс подлежит. Срок годности и условия хранения вскрытых реагентов соответствуют сроку годности и условиям хранения, указанным на этикетках для невскрытых реагентов. 12.2. 'Гра1 1сиор 1иронаиис Набор реагентов 1УО-ТГ>8Г AnPol транспортируют всеми видами транспорта (в закрытых железнодорожных вагонах, в герметичных отсеках самолетов и автомобильным транспортом) но правилам перевозок грузов соответствующих транспортных ведомств. Условия транспортирования набора должны соответствовать условиям хранения! Набор реагентов транспортировать в течение 7 суток при температуре от -25 до -20 °С. Обсснсченис темнеразурного режима при транспортировке наборов обсснсчивастся использованием хла; 10элсмснт 0в (-20°С) или с использованием сухого льда. 13. БЕЗОПАСНАЯ УТИЛИЗАЦИЯ Уничтожение отходов, использованных и неиспользованных компонентов набора, наборов реагентов с истекшим сроком годности проводить в соответствии СанНиН 2.1.3684-21 «Санитарно-эпидемиологические требования к содержанию территорий городских и сельских поселений, к водным объектам, питьевой воде и питьевому водоснабжению населения, атмосферному воздуху, почвам, жилым помещениям, эксплуатации производственных, общественных помещений, организации и проведению санитарно-нротивоэнидсмичсских (профилактических) мероприятий». Жидкие компоненты (реагенты, реактивы) уничтожают ра:}всдснием водой 1:100, сливом раствора в канализацию и вывозом остатка упаковок как нроизводсгвснный или бытовой мусор. 14. ГАРАНТИЙНЫЕ ОБЯЗАТЕЛЬСТВА ПРОИЗВОДИТЕЛЯ Производитель гарантирусг соответствие основных параметров и характсрисгик набора реагентов, требованиям, указанным в 'гехнической и эксплуатационной докуменгации, в течение указанного срока годности при соблюдении всех условий трансноргирования, хранения и применения. Рекламации на качество набора реагентов направлять по адресу 115201, город Москва, ш. Каширское, д. 22кЗстр2, этаж 6, ном. 20, тсл./факс 8(903)799-38-72, 8(495)799-38-72, email: ivdiz@ivdiz.com При выявлении побочных действий, нс указанных в инструкции но применению набора реагентов, нежелательных реакций при его использовании, фактов и обстоятельств, создающих угрозу жизни и здоровью граждан и медицинских работников при применении и эксплуатации набора реагентов, рекомендуется направить сообщение но адресу, указанному выше, и в уполномоченную государственную регулирующую организацию (в РФ - Федеральная служба но надзору в сфере здравоохранения) в соответствии с действующим законодательством. VER 102.01.23. стр. 21 из 24 --- стр. 22 --- Us. ИНФОРМАЦИЯ О ПРОИЗВОДИТЕЛЕ По вопросам, касающимся качества набора IVD-TEST AnPol, слс;^уст обращаться в ООО «ЛЙВИДИЗ» по адресу: Российская Федерация, 115201, город Москва, пт. Каширское, д. 22кЗстр2, этаж 6, пом. 20, тел./факс 8(903)799-38-72, 8(495)799-38-72, email: ivdiz@ivdiz.com VKKI02.01.23. . 22 из 24 --- стр. 23 --- ПЕРЕЧЕНЬ НОРМАТИВНЫХ ДОКУМЕНТОВ Названия документов Приказ М3 РФ №4н от 06.06.2012Об утверждении номенклатурной классификации медицинских изделий ГОСТ 2.114-2016 Единая система конструкторской документации. Технические условия. ГОСТ Р 51088-2013 Медицинские изделия для диагностики ин витро. Реагенты, наборы реагентов, тест-системы, контрольные материалы, питательные среды. Требования к изделиям и поддерживающей документации ГОСТ 31508-2012 Изделия медицинские. Классификация в зависимости от потенциального риска примене1[ия. Общие требования ГОСТ Р 51352-2013 Медицинские изделия для диагностики ин витро. Методы испытаний. ГОСТ Р ИСО 15223-1-2020Изделия медицинские. Символы, применяемые при маркировании на медицинских изделиях, этикетках и в сопроводительной документации. Часть 1. Основные требования ГОСТ Р 52905-2007 (ИСО 15190:2003) Лаборатории медицинские. Требования безопасности. ГОСТ 3885-73 Реактивы и особо чистые вещества. Правила приемки, отбор проб, фасовка и маркировка. ГОСТ Р ИСО 23640-2015 Изделия медицинские для диагностики in vitro. Оценка стабильности реагентов для диагностики in\ ilro. ГОСТ Р 58 577- 2019 «Правила установления допустимых выбросов загрязняющих веществ промышленными предприятиями» 1'ОСТ 17.2.3.01-1986 Охрана природы. Атмосфера. Правила контроля качества воздуха населенных пунктов П 12.1.6.3492-17 Предельно допустимые концентрации (ПДК) загрязняющих веществ в атмосферном воздухе городских и сельских поселений. СаиПи! 13.3686-21 Санитарно-эпидемиологические требования по профилактике инфекционных болезней Саи11иП2.1.3684-21 СанПиП 2.1.3684-21 «Санитарно-эпидемиологические требования к содержанию территорий городских и сельских поселений, к водным об1>ектам, питьевой воде и питьевому водоснабжению населения, атмосферному воздуху, почвам, жилым помещениям, эксплуатации производственных, общественных помещений, организации и проведению санитарно-противоэпидемических (профилактических) мероприятий» МУ 1.3.2569-09 Организация работы лабораторий. использующих методы амплификации нуклеиновых кислот при работе с материалом, содержащим микроорг анизмы 1-1V групп патогенности VER 102.01.23. стр. 23 из 24 --- стр. 24 --- символы, ИСПОЛЬЗУЕМЫЕ В ПЕЧАТНОЙ ПРОДУКЦИИ REF LOT Номер по каталогу Код партии А V Осторожно! Обратитесь к инструкции по применению Содержимого достаточно для проведения п- количества тестов IVD Медицинское изделие для диагностики in vitro Использовать до VER I I Дата изменения Температурный диапазон Верхнее ограничение температуры □ s jW T Обратитесь к инструкции по применению Не допускать воздействия солнечного света Дата изготовления iJ Изготовитель П.К. Варнавичус VERI02.01.23. стр. 24 из 24