Набор реагентов для выявления РНК коронавирусов, вызывающих тяжелую респираторную инфекцию: MERS-Cov (Middle East respiratory syndrome coronavirus) и SARS-Cov (Severe acute respiratory syndrome coronavirus), в биологическом материале методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) с гибридизационно-флуоресцентной детекцией "АмплиСенс® Cov-Bat-FL" по ТУ 9398-224-01897593-2013 — инструкция и характеристики
Открытые закупки, где изделие проходит ТЗ
Сейчас открытых закупок, где изделие полностью проходит ТЗ, нет; список обновляется каждый день.
Построчная сверка ТЗ с характеристиками этого изделия и все закупки под ваши товары — в кабинете, 7 дней бесплатно.
Попробовать бесплатно
Текст инструкции: технические характеристики
--- стр. 1 ---
« У Т В Е Р Ж Д А Ю »
Д и р е к т о р Ф е д е р а л ь н о г о б ю д ж е т н о г о
у ч р е ж д е н и я н ау к и « Ц е н т р а л ь н ы й
н а у ч н о - и с с л е д о в а т е л ь с к и й и н с т и т у т
э п и д е м и о л о г и и » Ф е д е р а л ь н о й
с л у ж б ы по н а д з о р у в с ф е р е з а щ и т ы
'Т т Й ^ е б и т е л е й б л а г о п о л у ч и я
В.Г. А к и м к и н
20^гг.
ИНСТРУКЦИЯ по ПРИМЕНЕНИЮ
набора реагентов для выявления РНК коронавирусов,
вызывающих тяжелую респираторную инфекцию: MERS-Co\/
(Middle East respiratory syndrome coronavirus) и SARS-Cov
(Severe acute respiratory syndrome coronavirus), в биологическом
материале методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) с
гибридизационно-флуоресцентной детекцией
«АмплиСенс® Cov-Bat-FL»
АмплиСенс'
ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии
Роспотребнадзора,
Российская Федерация, 111123,
г. Москва, ул. Новогиреевская, д ЗА
г. Москва, ул. Новогиреевская, д. ЗА. стр. 6
тел. (495) 974 9642, e-mail: amplisens@pcr.ru
IVD
--- стр. 2 ---
ОГЛАВЛЕНИЕ
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ............................................................................................................3
НАЗНАЧЕНИЕ................................................................................................................................3
ПРИНЦИП МЕТОДА.....................................................................................................................4
ФОРМЫ КОМПЛЕКТАЦИИ.........................................................................................................5
АНАЛИТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ..................................................................................6
ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ ............................................................................9
МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ..............................................................................................11
СВЕДЕНИЯ ОБ УТИЛИЗАЦИИ.................................................................................................14
ДОПОЛНИТЕЛЬНЫЕ МАТЕРИАЛЫ И ОБОРУДОВАНИЕ .................................................15
ВЗЯТИЕ, ТРАНСПОРТИРОВАНИЕ И ХРАНЕНИЕ ИССЛЕДУЕМОГО МАТЕРИАЛА.. 21
ПОДГОТОВКА ИССЛЕДУЕМОГО МАТЕРИАЛА К ЭКСТРАКЦИИ РНК ...........................25
ИНТЕРФЕРИРУЮЩИЕ ВЕЩЕСТВА И ОГРАНИЧЕНИЯ ПО ИСПОЛЬЗОВАНИЮ ПРОБ
ИССЛЕДУЕМОГО МАТЕРИАЛА..............................................................................................28
СОСТАВ........................................................................................................................................31
ПРОВЕДЕНИЕ ПЦР-ИССЛЕДОВАНИЯ.................................................................................35
ЭКСТРАКЦИЯ РНК ИЗ ИССЛЕДУЕМЫХ ОБРАЗЦОВ .......................................................35
ОБРАТНАЯ ТРАНСКРИПЦИЯ .................................................... 36
АМПЛИФИКАЦИЯ С ДЕТЕКЦИЕЙ В РЕЖИМЕ «РЕАЛЬНОГО ВРЕМЕНИ» ..................37
A. Подготовка проб для амплификации.........................................................................37
Б. Проведение амплификации с детекцией в режиме «реального времени»......39
B. Анализ и интерпретация результатов........................................................................40
СРОК ГОДНОСТИ. УСЛОВИЯ ТРАНСПОРТИРОВАНИЯ И ХРАНЕНИЯ ......................45
ГАРАНТИЙНЫЕ ОБЯЗАТЕЛЬСТВА ИЗГОТОВИТЕЛЯ ......................................................46
СИМВОЛЫ, ИСПОЛЬЗУЕМЫЕ В ПЕЧАТНОЙ ПРОДУКЦИИ .......................... 47
ПРИЛОЖЕНИЕ 1........................................................................................................................48
ПРИЛОЖЕНИЕ 2........................................................................................................................51
ПРИЛОЖЕНИЕ 3........................................................................................................................52
стр, 2 из 52
--- стр. 3 ---
список СОКРАЩЕНИЙ
В настоящей инструкции применяются следующие
ВКО STI-87-гес - экзогенный внутренний контрольный образец
ВОЗ - всемирная организация здравоохранения
гэ - геномный эквивалент (геном)
ДНК - дезоксирибонуклеиновая кислота
жкт - желудочно-кишечный тракт
к+ - положительный контроль ПЦР
к- - отрицательный контроль ПЦР
кДНК - комплементарная ДНК, получаемая в реакции обратной
транскрипции на матрице РНК
МУ - методические указания
ок - отрицательный контроль экстракции
око - отрицательный контрольный образец
ОРЗ - острые респираторные заболевания
от - обратная транскрипция
ПК - положительный контроль экстракции
пко - положительный контрольный образец
ПЦР - полимеразная цепная реакция
РНК - рибонуклеиновая кислота
РУ - регистрационное удостоверение
СанПиН - санитарные правила и нормы
удг - урацил-ДНК-гликозилаза
ФБУН ЦНИИ
Эпидемиологии
Роспотребнадзора
- Федеральное бюджетное учреждение науки «Центральный
научно-исследовательский институт эпидемиологии»
Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав
потребителей и благополучия человека
а - cycle threshold (пороговый цикл)
FL - ПЦР с гибридизационно-флуоресцентной детекцией
FRT - флуоресцентная детекция в режиме «реального времени»
MERS-Co\/ - Middle East respiratory syndronne coronavirus (коронавирус,
вызывающий ближневосточный респираторный синдром)
SARS-Cov - Severe acute respiratory syndrome coronavirus (коронавирус,
вызывающий тяжелый острый респираторный синдром)
SARS-Co\/-2 - Severe acute respiratory syndrome coronavirus-2 (коронавирус-2,
вызывающий тяжелый острый респираторный синдром)
НАЗНАЧЕНИЕ
Набор реагентов «АмплиСенс® Cov-Bat-FL» предназначен
для качественного определения и дифференциации РНК
коронавирусов, вызывающих тяжелую респираторную
инфекцию: MERS-Coi/ (Middle East respiratory syndrome
coronavirus) и ЗАР5-Со\/-родственных вирусов (Severe acute
respiratory syndrome coronavirus, Severe acute respiratory
syndrome coronavirus-2), в биологическом материале (мазки со
слизистой оболочки носо- и ротоглотки, мокрота / аспират из
стр. 3 из 52
--- стр. 5 ---
амплификации участков кДНК выявляемых микроорганизмов и
кДНК ВКО STI-87-rec с гибридизационно-флуоресцентной
детекцией. ВКО STI-87-rec позволяет контролировать все
этапы ПЦР-исследования для каждого образца и оценивать
влияние ингибиторов на результаты ПЦР-исследования.
Обратная транскрипция РНК проводится с помощью
фермента ревертазы (MMIv). Затем проводится амплификация
участка кДНК при помощи специфичных к этому участку
праймеров и фермента Taq-полимеразы. В составе
реакционной смеси присутствуют флуоресцентно-меченые
олигонуклеотиды, комплементарные участкам
амллифицируемых кДНК-мишеней, что позволяет
регистрировать накопление специфического продукта
амплификации путем измерения интенсивности
флуоресцентного сигнала с помощью амплификатора с
системой детекции в режиме «реального времени».
Набор реагентов содержит систему защиты от контаминации
ампликонами за счет применения фермента урацил-ДНК-
гликозилазы (УДГ) и дезоксиуридинтрифосфата.
На этапе амплификации одновременно в одной пробирке
проводится амплификация трех кДНК-мишеней. Результаты
амплификации регистрируются по каналам флуоресцентной
детекции, указанным в табл. 1:
Таблица 1
Канал для
флуорофора FAM JOE ROX
кДНК-мишень кДНК ВКО STI-87-rec
кДНК SARS-Co\/-
родственных вирусов
{SARS-Cov, SARS-Cou-2)
кДHKMERS-
C ov
Область
амплификации
искусственная
нуклеотидная
последовательность
ORFlab область upE
ФОРМЫ КОМПЛЕКТАЦИИ
Форма 1: «ПЦР-комплект» вариант FRT
Форма 2: «ПЦР-комплект» вариант FRT-50 F
Форма 6: «РИБО-преп» вариант 100, «РЕВЕРТА-L» вариант 100,
«ПЦР-комплект» вариант FRT-100 F
Форма 7: «ПЦР-комплект» вариант FRT-200 F
Примечание - Формы 3, 4, 5 удалены.
стр. 5 из 52
--- стр. 6 ---
Формы 1, 2, 7 предназначены для проведения амплификации
кДНК с гибридизационно-флуоресцентной детекцией в режиме
«реального времени» и позволяют выявлять кДНК в
качественном формате. Для проведения полного ПЦР-
исследования необходимо использовать комплекты реагентов
для экстракции РНК и обратной транскрипции.
Форма 6 предназначена для проведения полного ПЦР-
исследования, включающего экстракцию РНК из
биологического материала и объектов окружающей среды,
реакцию обратной транскрипции и амплификацию кДНК с
гибридизационно-флуоресцентной детекцией в режиме
«реального времени», и позволяет выявлять кДНК в
качественном формате.
Формы 1, 2 рассчитаны на проведение 55 реакций
амплификации, включая контроли. Форма 7 рассчитана на
проведение 220 реакций амплификации, включая контроли.
Форма 6 рассчитана на проведение 100 тестов, включая
контроли.
АНАЛИТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
Характеристики были определены при использовании
комплектов для экстракции РНК/ДНК «РИБО-преп»
(РУ № ФСР 2008/03147) и «МАГНО-сорб» (РУ № ФСР 2010/07265).
Аналитическая чувствительность (предел обнаружения)
Таблица 2
Вид исследуемого материала Микроорганизм
Аналитическая
чувствительное
ть (предел
обнаружения),
ГЭ/мл
Мазки со СЛИЗИСТОЙ оболочки носо- и ротоглотки,
бронхоальвеолярный лаваж / промывные воды
бронхов, плазма крови, концентраты образцов
воды, смывы с объектов окружающей среды
MERS-Coy
1x103SARS-Coy
SARS-Coy-2
Мокрота / аспират из зева или трахеи
MERS-Соу 1x103SARS-Соу
SARS-Coy-2 5x103
Фекалии / фекальный или ректальный мазок
(соскоб)
MERS-Соу 1x103SARS-Соу
SARS-Coy-2 1x10“
Аутопсийный материал
MERS-С оу
5x103SARS-Соу
SARS-Coy-2
СТр. 6 ИЗ 52
--- стр. 7 ---
Данный предел обнаружения достигается при соблюдении
правил, указанных в разделах «Взятие, транспортирование и
хранение исследуемого материала» и «Подготовка
исследуемого материала к экстракции РНК».
Аналитическая специфичность
Набор реагентов обнаруживает участки РНК коронавирусов,
вызывающих тяжелую респираторную инфекцию; MERS-Co\/ и
5АК5-Со\/-родственных вирусов (ЗАК5-Со(/, SARS-Co\/-2):
- РНК коронавируса MERS-Co\/ (образец панели
«CORONAVIRUS RNA SPECIFICITY PANEL» (Erasmus
Medical Center - EMC, Роттердам, Нидерланды)) в
концентрации 1x10^ ГЭ/мл;
- РНК коронавируса SARS-Co\/, штамм HKU39849 (образец
панели «CORONAVIRUS RNA SPECIFICITY PANEL»
(Erasmus Medical Center - EMC, Роттердам, Нидерланды)) в
концентрации 1x10^ ГЭ/мл;
- РНК коронавируса SARS-Co\/-2 (образец панели The EDX
SARS-Co\/-2, Flu, RSV Run Controls (Bio-Rad Laboratories,
Inc., США)) в концентрации 1x10^ ГЭ/мл.
Аналитическую специфичность набора реагентов оценивали
при исследовании РНК/ДНК следующих микроорганизмов, а
также геномной ДНК человека:
- штаммы из коллекции АТСС (American Туре Culture
Collection, США): Streptococcus pneumoniae (АТСС® 49619™),
Staphylococcus aureus subsp. aureus, Strain Seattle 1945
(ATCC® 25923™), Pseudomonas aeruginosa (ATCC® 9027™),
Moraxella catarrhalis (ATCC® 8193™), Neisseria mucosa
(ATCC® 19693™), Enterococcus faecalis (ATCC® 19433™),
Mycoplasma pneumoniae, Strain PI 1428 (ATCC® 29085™),
Chlamydophila pneumoniae, Strain CM-1 (ATCC® VR-1360™),
Legionella pneumophila subsp. pneumophila. Strain Philadelphia
1 (ATCC® 33152™), Staphylococcus epidermidis, FDA Strain
PCI 1200 (ATCC® 12228™), Bacillus cereus. Strain FDA 5
(ATCC® 10702™), Streptococcus salivarius (ATCC® 13419 tm),
Human Respiratory Syncytial Virus, Strain 9320 (ATCC® VR-
955™), Human Respiratory Syncytial Virus, Strain A-2 (ATCC®
VR-1540™), Human Parainfluenza Virus 1, Strain C35 (ATCC®
VR-94™), Human Parainfluenza Virus 2, Strain Greer (ATCC®
VR-92™), Human Parainfluenza Virus 3, Strain C243 (ATCC®
CTp. 7 из 52
--- стр. 8 ---
VR-93™), Human Rhinovirus 17, Strain 33342 (ATCC® VR-
1663™), Human Adenovirus 1, Strain Adenoid 71 (ATCC® VR-
1™), Human Coronavirus, Strain OC43 (ATCC® VR-1558™),
Human Coronavirus, Strain 229E (ATCC® VR-740™), Human
Coxsackievirus B1, Strain Conn-5 (ATCC® VR-28™), Human
Echovirus 4, Strain Pesascek (ATCC® VR-1734™), Human
Herpesvirus 1, Strain HF (ATCC® VR-260™), в концентрации
не более 1x10® ГЭ/мл и не менее 1x10® ГЭ/мл;
- штаммы из коллекции ГКПМ (Государственная коллекция
патогенных микроорганизмов): Haemophiius infiuenzae 423,
Streptococcus pyogenes Dick-I, Corynebacterium
pseudodiphtheriticum №25, Proteus mirabilis 3177, Kiebsieila
pneumoniae A'lQ, Escherichia co//M 17, Salmoneiia typhimurium
79, Yersinia enterocolitica 134, Bordeteiia pertussis 703 L 6,
Mycobacterium Bovis Ravenei №700204 в концентрации не
более 1x10® ГЭ/мл и не менее 1x10® ГЭ/мл;
- штаммы из коллекции ФГБУ «НИИ гриппа имени А.А.
Смородинцева»: А/Санкт-Петербург/НИИГ-252/19 {influenza
virus А (H3N2)), А/Калининград/75/19 {influenza virus А
(HI N1)pdm09), B/Washington/02/19 {Influenza virus В линия
Виктория), В/Якутск/НИИГ-06/2019 {Influenza virus В линия
Ямагата) в концентрации не более 1x10® ГЭ/мл и не менее
1x10^ ГЭ/мл;
- образец панели «CORONAVIRUS RNA SPECIFICITY PANEL»
(Erasmus Medical Center - EMC, Роттердам, Нидерланды):
Human coronavirus, Strain NL63 в концентрации не более
1x10® ГЭ/мл и не менее 1x10® ГЭ/мл;
- ДНК человека в концентрации 0,2 мг/мл.
При тестировании образцов РНК/ДНК вышеперечисленных
микроорганизмов и ДНК человека неспецифических реакций
выявлено не было.
Информация об интерферирующих веществах указана в
разделе «Интерферирующие вещества и ограничения по
использованию проб исследуемого материала».
Повторяемость и воспроизводимость исследования
Повторяемость и воспроизводимость исследования были
определены путем тестирования положительных и
отрицательных модельных образцов. Положительные образцы
представляли собой стандартные образцы предприятия.
стр. 8 из 52
--- стр. 9 ---
содержащие РНК SARS-Co\/, SARS-Co\/-2 и MERS-Co\/ в
концентрации 1x10^ ГЭ/мл, в качестве отрицательного образца
был ислользован реагент ОКО.
Условия повторяемости включали в себя тестирование в
одной и той же лаборатории, одним и тем же олератором, с
ислользованием одного и того же оборудования в лределах
короткого промежутка времени. Условия воспроизводимости -
тестирование в двух независимых лабораториях, разными
олераторами, в разные дни, на различных приборах и разных
серий набора реагентов. Результаты лредставлены в табл. 3.
Таблица 3
Тип образцов
Повторяемость Воспроизводимость
Количество
образцов
Совпадение
результатов, %
Количество
образцов
Совпадение
результатов, %
MERS-Cov 10 100 30 100
SARS-Coi/ 10 100 30 100
SARS-Cov'-2 10 100 30 100
Отрицательные 10 100 30 100
ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
Для определения диагностических характеристик набора
реагентов были использованы:
1) в качестве образцов, содержащих коронавирус SARS-Coi/-2,
образцы биологического материала от лациентов с
подтвержденным клиническим диагнозом COVID-19, что
было доказано лри тестировании набором реагентов
АмплиСенс® COVID-19-FL (РУ № РЗН 2021/14026);
2) в качестве образцов, содержащих коронавирусы MERS-Co(/
и SARS-Cov, модельные образцы биологического
материала, содержащие рекомбинантные стандартные
образцы предприятия;
3) в качестве образцов объектов окружающей среды,
содержащих РНК SARS-Co\/-2, образцы объектов
окружающей среды, наличие РНК SARS-Coi/-2 в которых
было доказано при тестировании набором реагентов
АмплиСенс® COVID-19-FL (РУ № РЗН 2021/14026);
4) в качестве образцов объектов окружающей среды,
содержащих коронавирусы MERS-Cov и SARS-Cov,
модельные образцы объектов окружающей среды,
содержащие рекомбинантные стандартные образцы
предприятия;
СТр. 9 ИЗ 52
--- стр. 10 ---
5) в качестве образцов, не содержащих коронавирусы MERS-
Cov и SARS-Coi/-poACTBeHHbix вирусов (SARS-Co\/, SARS-
Cov-2), образцы биологического материала:
- мазки со слизистой оболочки носо- и ротоглотки от
больных ОРВИ (грипп А и В, парагрипп, аденовирусная
инфекция, респираторно-синцитиальная инфекция,
метапневмовирусная инфекция, риновирусная инфекция
и коронавирусная инфекция человека, вызванная hCov
NL63, hCov ОС43, hCov 22QE, hCov HK\J\),
- мокрота / аспират из зева или трахеи от больных
внебольничной пневмонией (грипп А и В, Streptococcus
pneumoniae, Haemophilus influenzae, Streptococcus
pyogenes. Staphylococcus aureus),
- бронхоальвеолярный лаваж / промывные воды бронхов
от больных пневмонией, вызванной гриппом А и В, а
также больных легионеллезной инфекцией,
- плазма крови от больных аденовирусной инфекцией,
- фекалии / фекальный или ректальный мазок (соскоб) от
больных ротавирусной инфекцией,
- аутопсийный материал от больных, умерших от гриппа А,
- образцы объектов окружающей среды (концентраты
образцов воды, смывы с объектов окружающей среды),
содержащие ДНК микроорганизмов рода Сальмонелла
{Salmonella spp.) и РНК ротавирусов группы А {Rotavirus
А).
Отсутствие РНК SARS-Co\/-2 в биологических образцах и
образцах объектов окружающей среды было доказано при
тестировании набором реагентов АмплиСенс® COVID-19-FL (РУ
№ РЗН 2021/14026). Этиология заболевания для каждого
пациента была установлена при тестировании с наборами
реагентов «АмплиСенс® Influenza virus А/B-FL» (РУ № ФСР
2009/05010), «АмплиСенс® Influenza virus А/HI-swine-FL» (РУ №
ФСР 2009/05143) и «АмплиСенс® ОРВИ-скрин-FL» (РУ № ФСР
2011/11258), АмплиСенс® Пневмо-квант-FL (РУ № РЗН
2022/16467), «АмплиСенс® ОКИ скрин-FL» (РУ № ФСР
2008/02265), «АмплиСенс® Legionella pneumophila-FLy> (РУ №
ФСР 2010/07097), АмплиСенс® Streptococcus pyogenes-
скрин/монитор-FL (РУ № РЗН 2019/8445), «АмплиСенс® MRSA-
скрин-титр-FL» (РУ № ФСР 2012/13998). ДНК микроорганизмов
стр. 10 ИЗ 52
--- стр. 11 ---
рода Сальмонелла {Salmonella spp.) и РНК ротавирусов группы
А {Rotavirus А) в образцах объектов окружающей среды были
обнаружены набором реагентов «АмплиСенс® ОКИ скрин-FL»
(РУ № ФСР 2008/02265).
Образцы объектов окружающей среды получены из референс-
центра по мониторингу за возбудителями острых кишечных
инфекций Роспотребнадзора.
Результаты представлены в табл. 4 и 5.
Таблица 4
Описание образцов Вид исследуемого материала Количество
образцов
Биологический
материал,
содержащий РНК
SARS-Co\/-2
Мазки со слизистой оболочки носо- и ротоглотки 250
Мокрота / аспират из зева или трахеи 150
Бронхоальвеолярный лаваж / промывные воды
бронхов 70
Плазма крови 50
Фекалии / фекальный или ректальный мазок
(соскоб) . 150
Аутопсийный материал 150
Биологический
материал,
содержащий РНК
SARS-Coi/и РНК
MERS-Cou
Мазки со слизистой оболочки носо- и ротоглотки 50
Мокрота / аспират из зева или трахеи 50
Бронхоальвеолярный лаваж / промывные воды
бронхов 50
Плазма крови 50
Фекалии / фекальный или ректальный мазок
(соскоб)
50
Аутопсийный материал 50
Биологический
материал,не
содержащий РНК
SARS-COI/-2, SARS-
Cov, MERS-Coi/
Мазки со слизистой оболочки носо- и ротоглотки 250
Мокрота / аспират из зева или трахеи 150
Бронхоальвеолярный лаваж / промывные воды
бронхов 70
Плазма крови 50
Фекалии / фекальный или ректальный мазок
(соскоб)
150
Аутопсийный материал 150
Объекты окружающей
среды, содержащие
PHKSARS-Co\/-2
Концентраты образцов воды
50
Смывы с объектов окружающей среды
Объекты окружающей
среды, содержащие
PHKSARS-Coi/и РНК
MERS-Cou
Концентраты образцов воды
50
Смывы с объектов окружающей среды
Объекты окружающей
среды, не
содержащие РНК
SA R S -C ov-2, SARS-
Cov, MERS-Cov
Концентраты образцов воды
55
Смывы с объектов окружающей среды
СТр. 11 ИЗ 52
--- стр. 12 ---
Таблица 5
Диагностические характеристики набора реагентов
«АмплиСенс® Cov-Bat-FL»
Микроорганизм Вид исследуемого
материала
Диагностическая
чувствительность^
(с доверительной
вероятностью 95 %),
в интервале, %
Диагностическая
специфичность^
(с доверительной
вероятностью 95 %),
в интервале,%
SARS-COI/-2
Мазки со слизистой
оболочки носо- и
ротоглотки
100 (99-100)% 100 (99-100)%
Мокрота / аспират из
зева или трахеи 100 (98-100)% 100 (98-100)%
Бронхоальвеолярный
лаваж / промывные
воды бронхов
100 (95-100)% 100 (95-100)%
Плазма крови 100 (93-100)% 100 (93-100)%
Фекалии / фекальный
или ректальный
мазок (соскоб)
100 (98-100) % 100 (98-100)%
Аутопсийный
материал 100 (98-100)% 100 (98-100)%
Концентраты
образцов воды,
смывы с объектов
окружающей среды
100 (93-100) % 100 (94-100)%
SARS-Coi/,
MERS-Cou
Мазки со слизистой
оболочки носо- и
ротоглотки
100 (93-100)% 100 (99-100)%
Мокрота / аспират из
зева или трахеи 100 (93-100)% 100 (98-100)%
Бронхоальвеолярный
лаваж / промывные
воды бронхов
100 (93-100)% 100 (95-100) %
Плазма крови 100 (93-100)% 100 (93-100)%
Фекалии / фекальный
или ректальный
мазок (соскоб)
100 (93-100)% 100 (98-100)%
Аутопсийный
материал 100 (93-100) % 100 (98-100)%
Концентраты
образцов воды,
смывы с объектов
окружающей среды
100 (93-100)% 100 (94-100)%
^ Относительная чувствительность в сравнении с использованным референтным методом.
^ Относительная специфичность в сравнении с использованным референтным методом.
стр. 12 из 52
--- стр. 13 ---
МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ
Работа должна проводиться в лаборатории, выполняющей
молекулярно-биологические (ПЦР) исследования
биологического материала на наличие возбудителей
инфекционных болезней, с соблюдением СанПиН 3.3686-21
«Санитарно-эпидемиологические требования по профилактике
инфекционных болезней», СанПиН 2.1.3684-21 «Санитарно-
эпидемиологические требования к содержанию территорий
городских и сельских поселений, к водным объектам, питьевой
воде и питьевому водоснабжению, атмосферному воздуху,
почвам, жилым помещениям, эксплуатации производственных,
общественных помещений, организации и проведению
санитарно-противоэпидемических (профилактических)
мероприятий» и МУ 1.3.2569-09 «Организация работы
лабораторий, использующих методы амплификации
нуклеиновых кислот при работе с материалом, содержащим
микроорганизмы I-IV групп патогенности».
Набор реагентов предназначен для одноразового
применения для проведения ПЦР-исследования указанного
количества проб (см. раздел «Формы комплектации»).
Набор реагентов готов к применению согласно данной
инструкции. Применять набор реагентов строго по назначению.
При работе необходимо всегда выполнять следующие
требования:
- Температура в помещении лаборатории от 20 до 28 °С,
относительная влажность от 15 до 75 %.
- Допускать к работе с набором реагентов только персонал,
обученный методам молекулярной диагностики и правилам
работы в клинико-диагностической лаборатории в
установленном порядке.
- Не использовать набор реагентов, если нарушена
внутренняя упаковка или внешний вид реагента не
соответствует описанию.
- Не использовать набор реагентов, если не соблюдались
условия транспортирования и хранения согласно
инструкции.
- Не использовать набор реагентов по истечении срока
годности.
- Использовать одноразовые неопудренные перчатки,
стр. 13 ИЗ 52
--- стр. 22 ---
пробирку с транспортной средой и зондом с мазком из
носоглотки. Конец зонда отламывают, придерживая крышкой
пробирки, с расчетом, чтобы он позволил плотно закрыть
пробирку. Пробирку герметично закрывают, встряхивают, чтобы
увлажнить оба зонда, и маркируют.
Допускается хранение мазков со слизистой носо- и
ротоглотки до проведения предобработки:
- при температуре от 2 до 8 °С - не более 3 суток;
- при температуре от минус 24 до минус 16 °С - в течение
года.
Допускается однократное замораживание-оттаивание
материала.
Мокрота / аспират из зева или трахеи. Образцы собирают и
помещают в одноразовые герметичные емкости из
полипропилена. Мокроту собирают после предварительного
полоскания полости рта водой. Аспират из зева или трахеи
получают традиционным способом. Если нет возможности
получить мокроту или аспират из зева или трахеи, собирают
слюну, образующуюся утром после глубокого откашливания
сразу после пробуждения.
Допускается хранение мокроты / аспирата из зева или трахеи
до проведения предобработки:
- при температуре от 2 до 8 °С - не более 1 суток;
- при температуре от минус 24 до минус 16 °С - в течение
года.
Допускается однократное замораживание-оттаивание
материала.
Бронхоальвеолярный лаваж / промывные воды бронхов.
Образцы собирают в одноразовые плотно завинчивающиеся
емкости из полипропилена объемом не менее 5 мл.
Допускается хранение бронхоальвеолярного лаважа /
промывных вод бронхов до проведения предобработки:
- при температуре от 2 до 8 °С - не более 1 суток;
- при температуре от минус 24 до минус 16 °С - в течение
года.
Допускается однократное замораживание-оттаивание
материала.
стр. 22 ИЗ 52
--- стр. 23 ---
Плазма крови. Для получения плазмы взятие крови производят
натощак из локтевой вены одноразовой иглой диаметром
0,8-1,1 мм в пробирку (специальную вакуумную систему) с
ЭДТА. Закрытую пробирку аккуратно переворачивают
несколько раз (для перемешивания с антикоагулянтом) и
хранят при температуре от 2 до 8 °С. Не позднее 6 ч с момента
взятия крови пробирку с цельной кровью центрифугируют при
0,8-1,6 тыс g в течение 20 мин при комнатной температуре.
Полученную плазму отбирают (не захватывая лейкоцитарное
кольцо) в количестве не менее 1 мл отдельными
наконечниками с фильтром в стерильные пробирки объемом
1,5 мл. Для экстракции РНК используют 100 мкл образца
плазмы.
Допускается хранение плазмы крови до проведения ПЦР-
исследования:
- при температуре от 2 до 8 °С - не более 3 суток;
- при температуре от минус 24 до минус 16 °С - в течение 1
месяца;
- при температуре не выше минус 68 °С - в течение года.
Допускается однократное замораживание-оттаивание
материала.
Фекалии / фекальный или ректальный мазок (соскоб)
Фекалии. Образцы забирают в стерильный горшок или
подкладное судно. Затем в количестве 1 г (примерно)
переносят в одноразовую герметичную емкость из
полипропилена.
Допускается хранение фекалий до проведения
предобработки:
- при температуре от 2 до 8 °С - в течение 1 суток;
- при температуре от минус 24 до минус 16 °С - в течение
года.
Допускается однократное замораживание-оттаивание
материала.
Фекальный мазок (соскобУ Образцы собирают из подгузника
или с поверхности одноразового пакета, положенного в горшок
или судно. Сухой стерильный зонд погружают в пробу фекалий,
выдерживают до пропитывания, после чего конец зонда
отламывают в пробирку с 0,5 мл транспортной среды
стр, 23 из 52
--- стр. 24 ---
(физиологического раствора или фосфатного буфера),
придерживая его крышкой пробирки, и герметично закрывают
пробирку.
Ректальный мазок (соскоб). Для взятия ректального мазка
сухой стерильный зонд вводят в прямую кишку на глубину 2 см,
производят вращательное движение и извлекают. Зонд
отламывают в пробирку с 0,5 мл транспортной среды
(физиологического раствора или фосфатного буфера),
придерживая его крышкой пробирки, и герметично закрывают
пробирку.
Допускается хранение фекальных / ректальных мазков
(соскобов) до проведения предобработки:
- при температуре от 2 до 8 °С - не более 1 суток;
- при температуре от минус 24 до минус 16 °С - в течение
года.
Допускается однократное замораживание-оттаивание
материала.
Аутопсийный материал. Образцы помещают в стерильные
одноразовые контейнеры и исследуют в течение 1 ч либо
замораживают сразу после взятия.
Допускается хранение аутопсийного материала до
проведения предобработки:
- при температуре от минус 24 до минус 16 °С - в течение
7 суток;
- при температуре не выше минус 68 °С - в течение года.
Допускается однократное замораживание-оттаивание
материала.
Допускается транспортирование вышеперечисленного
материала при температуре от 2 до 8 °С в течение 1 суток.
Объекты окружающей среды
Материалом для исследования служат:
- концентраты образцов воды,
- смывы с объектов окружающей среды.
Концентраты образцов воды. Образцы берут в соответствии с
МУК 4.2.1884-04 «Санитарно-микробиологический и санитарно
паразитологический анализ воды поверхностных водных
объектов» и МУК 4.2.1018-01 «Санитарно-микробиологический
анализ питьевой воды» или актуальными версиями данных
СТр. 24 ИЗ 52
--- стр. 34 ---
СОСТАВ
Эксплуатационная документация в составе: инструкция по
применению, паспорт качества набора реагентов, вкладыш к
набору реагентов, краткое руководство к набору реагентов - на
бумажном носителе и на сайте Изготовителя
(www.amplisens.ru).
стр. 34 из 52
--- стр. 35 ---
ПРОВЕДЕНИЕ ПЦР-ИССЛЕДОВАНИЯ
ПРОВЕДЕНИЕ ПЦР-ИССЛЕДОВАНИЯ
ПЦР-исследование состоит из следующих этапов:
- экстракция РНК из исследуемых образцов,
- обратная транскрипция,
- амплификации кДНК с гибридизационно-флуоресцентной
детекцией в режиме «реального времени»,
- анализ и интерпретация результатов.
ЭКСТРАКЦИЯ РНК ИЗ ИССЛЕДУЕМЫХ ОБРАЗЦОВ
ВНИМАНИЕ! Для работы с РНК необходимо использовать
только одноразовые стерильные пластиковые расходные
материалы, имеющие специальную маркировку RNase-free,
DNase-free.
Для экстракции РНК используют комплекты реагентов:
- «РИБО-преп» (при работе с формой комплектации 6 в
соответствии с Приложением 1; при работе с формами
комплектации 1, 2 и 7 в соответствии с инструкцией к
комплекту реагентов для экстракции);
- «МАГНО-сорб» применяется совместно с автоматическими
станциями «открытого типа»® (при работе с формами
комплектации 1, 2 и 7 в соответствии с инструкцией к
комплекту реагентов для экстракции и с использованием
соответствующего протокола экстракции).
Экстракцию РНК из каждого исследуемого образца и
контролей необходимо проводить в присутствии внутреннего
контрольного образца - ВКО STI-87-гес. В каждую группу
экстрагируемых образцов необходимо включать по одному
повтору отрицательного (ОК) и положительного (ПК) контролей.
Контроли проходят все этапы ПЦР-исследования, начиная с
этапа экстракции. ОК позволяет контролировать возможную
контаминацию исследуемых образцов; ПК позволяет оценивать
корректность прохождения исследования.
Объемы реагентов и образцов при экстракции с помощью
комплекта реагентов «РИБО-преп»:
Объем ВКО STI-87-rec - 10 мкл в каждую пробирку.
Объем исследуемого образца - 100 мкл подготовленных
образцов объектов окружающей среды и биологического
материала за исключением фекалий / фекального или
Станции, совместимые с наборами реагентов различных изготовителей.
стр. 35 из 52
--- стр. 36 ---
ПРОВЕДЕНИЕ ПЦР-ИССЛЕДОВАНИЯ
ректального мазка (соскоба). При работе с фекалиями /
фекальным или ректальным мазком (соскобом) для экстракции
РНК используется подготовленная суспензия, состоящая из
50 мкл ОКО и 50 мкл фекалий / фекального или ректального
мазка (соскоба).
В пробирку отрицательного контроля экстракции (ОК) внести
100 мкл ОКО.
В пробирку положительного контроля экстракции (ПК) и
обратной транскрипции РНК внести 90 мкл ОКО и 10 мкл ПКО
MERS-Cov/SARS-Cov.
Объем элюции - 90 мкл.
Объемы реагентов и образцов при экстракции с помощью
автоматических станций с использованием комплекта
реагентов «МАГНО-сорб»:
Объем ВКО STI-87-rec- 10 мкл на один образец.
Объем исследуемого образца - 100 мкл подготовленных
образцов объектов окружающей среды и биологического
материала за исключением фекалий / фекального или
ректального мазка (соскоба). При работе с фекалиями /
фекальным или ректального мазком (соскобом) для экстракции
РНК используется подготовленная суспензия, состоящая из
50 мкл ОКО и 50 мкл фекалий / фекального или ректального
мазка (соскоба).
В качестве отрицательного контроля экстракции (ОК)
используется 100 мкл ОКО.
В качестве положительного контроля экстракции (ПК) и
обратной транскрипции РНК используется 90 мкл ОКО и
10 мкл ПКО MERS-Cov/SARS-Cov.
Объем элюции - 100 мкл.
ВНИМАНИЕ! Реакцию ОТ рекомендуется проводить сразу
после получения проб РНК. Допускается хранение проб РНК
при температуре от 2 до 8 °С не более 30 мин, при
температуре от минус 24 до минус 16 °С не более недели и при
температуре не выше минус 68 °С до года. Допускается только
однократное замораживание-оттаивание проб РНК.
ОБРАТНАЯ ТРАНСКРИПЦИЯ
ВНИМАНИЕ! Для работы с РНК необходимо использовать
только одноразовые пластиковые расходные материалы.
стр. 36 из 52
--- стр. 37 ---
ПРОВЕДЕНИЕ ПЦР-ИССЛЕДОВАНИЯ
имеющие специальную маркировку RNase-free, DNase-free.
Для проведения реакции обратной транскрипции используют
комплект реагентов «РЕВЕРТА-L» (при работе с формой
комплектации 6 в соответствии с Приложением 1, при работе с
формами комплектации 1, 2 и 7 в соответствии с инструкцией к
комплекту для получения кДНК на матрице РНК).
АМПЛИФИКАЦИЯ С ДЕТЕКЦИЕЙ В РЕЖИМЕ «РЕАЛЬНОГО
ВРЕМЕНИ»
Выбор пробирок для амплификации зависит от
используемого амплификатора с системой детекции в
режиме «реального времени».
Для внесения в пробирки реагентов, проб кДНК и
контрольных образцов используются одноразовые
наконечники с фильтрами.
А. Подготовка проб для амплификации
А1. Подготовка лроб при использовании «ПЦР-комплект»
вариант FRT
Общий объем реакционной смеси - 30 мкл, включая объем
пробы кДНК -10 мкл.
1. Отобрать необходимое количество пробирок с ПЦР-
смесью-FL MERS-Cov I SARS-Cov для амплификации кДНК
исследуемых и контрольных образцов. Убедиться, что воск
полностью покрывает раствор на дне пробирок. Если это не
так, не использовать данные пробирки.
2. На поверхность воска внести по 10 мкл ПЦР-буфера-А, при
этом он не должен проваливаться под воск и смешиваться с
ПЦР-смесью-FL MERS-Cov/ SARS-Cov.
3. В подготовленные пробирки внести по 10 мкл лроб кДНК,
полученных в результате экстракции и обратной
транскрипции из исследуемых образцов.
4. Поставить контрольные реакции:
а) отрицательный контроль экстракции (ОК) - в пробирку
с реакционной смесью внести 10 мкл пробы,
экстрагированной из ОКО.
б) положительный контроль экстракции (ПК) - в
пробирку с реакционной смесью внести 10 мкл пробы,
экстрагированной из образца ПКО MERS-Cov/SARS-
Cov.
стр. 37 из 52
--- стр. 38 ---
ПРОВЕДЕНИЕ ПЦР-ИССЛЕДОВАНИЯ
ВНИМАНИЕ! При получении новой серии набора реагентов
необходима постановка положительного и отрицательного
контролей ПЦР (К+, К-). Постановка К+ рекомендуется для
проверки работы амплификаторов и в других случаях
внутрилабораторного контроля. Для этого в пробирку с
реакционной смесью внести 10 мкл К+ MERS-Cov / SARS-
Cov/STI. При подозрении на возможную контаминацию также
необходима постановка отрицательного контроля ПЦР (К-).
Для этого в пробирку с реакционной смесью внести 10 мкл К-.
А2. Подготовка проб при использовании «ПЦР-комплект»
варианты FRT-50 F, FRT-100 F, FRT-200 F
Общий объем реакционной смеси - 25 мкл, включая объем
пробы кДНК - 10 мкл.
1. Рассчитать количество каждого реагента, требующееся для
приготовления реакционной смеси. На одну реакцию
требуется 10 мкл ПЦР-смеси-FL MERS-Cov/SARS-Cov,
5 мкл ПЦР-буфера-В и 0,5 мкл полимеразы (TaqF). Смесь
готовить на общее число исследуемых и контрольных
образцов плюс запас на несколько реакций (см. Приложение 3).
ВНИМАНИЕ! Компоненты реакционной смеси следует
смешивать непосредственно перед проведением ПЦР-
исследования.
2. Разморозить пробирку с ПЦР-смесью-FL MERS-
Cov I SARS-Cov. Перемешать содержимое пробирок с ПЦР-
смесью-FL MERS-Cov/SARS-Cov, ПЦР-буфером-В и
полимеразой (TaqF), осадить капли на вортексе.
3. В отдельной пробирке подготовить реакционную смесь.
Смешать необходимое количество ПЦР-смеси-FL MERS-
Cov I SARS-Cov, ПЦР-буфера-В и полимеразы (TaqF),
осадить капли на вортексе.
4. Отобрать необходимое количество пробирок или стрипов
для амплификации кДНК исследуемых и контрольных проб.
5. Внести в каждую пробирку по 15 мкл подготовленной смеси.
Неиспользованные остатки реакционной смеси выбросить.
6. В подготовленные пробирки внести по 10 мкл проб кДНК,
полученных в результате экстракции и обратной
транскрилции.
7. Поставить контрольные реакции:
а) отрицательный контроль экстракции (ОК) - в пробирку
стр. 38 ИЗ 52
--- стр. 43 ---
ПРОВЕДЕНИЕ ПЦР-ИССЛЕДОВАНИЯ
б) значение порогового цикла (Cf) по каналу для
флуорофора FAM (см. табл. 10) отсутствует или
превышает граничное значение. Интерпретация
образцов проводится согласно таблице 9.
2. Для положительного контроля ПЦР (К+):
а) значение порогового цикла (Ct) по каналу для
флуорофоров JOE и/или ROX (см. табл. 10) отсутствует
или превышает граничное значение. Невозможна
интерпретация результатов для образцов, в которых не
обнаружен аналит, определяемый по соответствующему
каналу (см. табл. 8). Необходимо повторить
амплификацию таких образцов;
б) значение порогового цикла (Cf) по каналу для
флуорофора FAM (см. табл. 10) отсутствует или
превышает граничное значение. Интерпретация
образцов проводится согласно таблице 9.
ВНИМАНИЕ!
- при получении правильного результата для ПК (см. табл. 10)
интерпретацию результатов проводят в соответствии с
таблицей 9, вне зависимости от результатов для К+;
- при получении правильного результата для К+ и ошибке ПК
интерпретация результатов возможна только для образцов,
в которых обнаружен аналит, определяемый по
соответствующему каналу (см. табл. 8). Необходимо
повторить ПЦР-исследование образцов, в которых не
обнаружен аналит, определяемый по соответствующему
каналу (см. табл. 8), начиная с этапа экстракции РНК.
3. Для отрицательного контроля экстракции (ОК):
а) по каналу для флуорофора JOE и/или ROX определено
значение порогового цикла (Cf). Вероятна контаминация
лаборатории продуктами амплификации или кросс
контаминация от пробы к пробе реагентов / исследуемых
образцов на каком-либо этапе ПЦР-исследования.
Невозможна интерпретация результатов для образцов, в
которых обнаружен аналит, определяемый по
соответствующему каналу (см. табл. 8). Необходимо
предпринять меры по выявлению и ликвидации источника
контаминации и повторить ПЦР-исследование таких
образцов, начиная с этапа экстракции РНК;
стр. 43 из 52
--- стр. 44 ---
ПРОВЕДЕНИЕ ПЦР-ИССЛЕДОВАНИЯ
б) ПО каналу для флуорофора FAM значение порогового
цикла (Ct) отсутствует или определено больше
граничного. Интерпретация образцов проводится
согласно таблице 9.
4. Для отрицательного контроля ПЦР (К-):
а) определено значение порогового цикла (Ct) по каналу
для флуорофора JOE и/или ROX. Вероятна
контаминация лаборатории продуктами амплификации
или кросс-контаминация от пробы к пробе реагентов /
исследуемых образцов на каком-либо этапе ПЦР-
исследования. Невозможна интерпретация результатов
для образцов, в которых обнаружен аналит,
определяемый по соответствующему каналу (см.
табл. 8). Необходимо предпринять меры по выявлению и
ликвидации источника контаминации и повторить
амплификацию таких образцов;
б) определено значение порогового цикла (Ct) по каналу
для флуорофора FAM. Вероятна контаминация
лаборатории продуктами амплификации или кросс
контаминация от пробы к пробе реагентов / исследуемых
образцов на каком-либо этапе ПЦР-исследования.
Невозможна интерпретация результатов для образцов, в
которых не обнаружен аналит, определяемый по каналам
для флуорофоров JOE и/или ROX (см. табл. 8).
Необходимо предпринять меры по выявлению и
ликвидации источника контаминации и повторить
амплификацию таких образцов.
5. Для исследуемого образца определено значение порогового
цикла, при этом на графике флуоресценции отсутствует
участок характерного экспоненциального подъема (график
представляет собой приблизительно прямую линию).
Необходимо проверить правильность выбранного уровня
пороговой линии или параметров расчета базовой линии.
Если результат получен при правильном уровне пороговой
линии (базовой линии), требуется повторно провести
амплификацию для этого образца.
стр. 44 из 52
--- стр. 45 ---
СРОК годности. УСЛОВИЯ ТРАНСПОРТИРОВАНИЯ и
ХРАНЕНИЯ
Срок годности. 12 мес. Набор реагентов с истекшим сроком
годности применению не подлежит. Срок годности вскрытых
реагентов соответствует сроку годности, указанному на
этикетках для невскрытых реагентов, если в инструкции не
указано иное.
Транспортирование. Набор реагентов транспортировать при
температуре от 2 до 8 °С не более 5 сут в термоконтейнерах,
содержащих хладоэлементы, всеми видами крытых
транспортных средств.
Хранение.
Форма 1. «ПЦР-комплект» вариант FRT хранить в холодильной
камере при температуре от 2 до 8 °С. ПЦР-смесь-FL MERS-
Cov! SARS-Co\/хранить в защищенном от света месте.
Форма 2, 7. «ПЦР-комплект» вариант FRT-50 F, FRT-200 F
хранить в холодильной камере при температуре от 2 до 8 °С,
кроме ПЦР-буфера-В, ПЦР-смеси-FL MERS-Co\//SARS-Co\/ и
полимеразы (TaqF). ПЦР-смесь-FL MERS-Co\//SARS-Cov,
ПЦР-буфер-В и полимеразу (TaqF) хранить в морозильной
камере при температуре от минус 24 до минус 16 °С. ПЦР-
смесь-FL MERS-Co\//SARS-Co\/ хранить в защищенном от
света месте.
Форма 6. «РИБО-преп» вариант 100 хранить в холодильной
камере при температуре от 2 до 8 °С. «РЕВЕРТА-L» вариант
100 хранить в морозильной камере при температуре от минус
24 до минус 16 °С. «ПЦР-комплект» вариант FRT-100 F хранить
в холодильной камере при температуре от 2 до 8 °С, кроме
ПЦР-буфера-В, ПЦР-смеси-FL MERS-Co\//SARS-Co\/ и
полимеразы (TaqF). ПЦР-смесь-FL MERS-Co\//SARS-Co\/,
ПЦР-буфер-В и полимеразу (TaqF) хранить в морозильной
камере при температуре от минус 24 до минус 16 °С. ПЦР-
смесь-FL MERS-Co\//SARS-Co\/ хранить в защищенном от
света месте.
Холодильные и морозильные камеры должны обеспечивать
регламентированный температурный режим.
стр. 45 из 52
--- стр. 46 ---
ГАРАНТИЙНЫЕ ОБЯЗАТЕЛЬСТВА ИЗГОТОВИТЕЛЯ
Изготовитель гарантирует соответствие основных
параметров и характеристик набора реагентов требованиям,
указанным в технической и эксплуатационной документации, в
течение указанного срока годности при соблюдении всех
условий транспортирования, хранения и применения.
Медицинское изделие техническому обслуживанию и
ремонту не подлежит.
Рекламации на качество набора реагентов направлять по
адресу 111123, г. Москва, ул. Новогиреевская, дом ЗА, e-mail:
obtk@pcr.ru. Отзывы и предложения о продукции АмплиСенс®
вы можете оставить, заполнив анкету потребителя на сайте:
www.amplisens.ru.
При выявлении побочных действий, не указанных в
инструкции по применению набора реагентов, нежелательных
реакций при его использовании, фактов и обстоятельств,
создающих угрозу жизни и здоровью граждан и медицинских
работников при применении набора реагентов, рекомендуется
направить сообщение по адресу, указанному выше, и в
уполномоченную государственную регулирующую организацию
(в РФ - Федеральная служба по надзору в сфере
здравоохранения) в соответствии с действующим
законодательством.
Директор
ГБУЗ МО МОНИКИ
им. М.Ф. Владимирского
К.Э. Соболев
стр. 46 ИЗ 52
--- стр. 47 ---
символы, ИСПОЛЬЗУЕМЫЕ В ПЕЧАТНОЙ ПРОДУКЦИИ
Осторожно!REF Номер по каталогу
А
LOT Код партии
V
IVD Медицинское изделие для
диагностики in vitro
VER Дата изменения □ S
о-'а.
1
Предел температуры
Mil
Изготовитель
Содержимого достаточно для
проведения п тестов
Использовать до
Обратитесь к инструкции по
применению
Не допускать воздействия
солнечного света
Дата изготовления
стр. 47 из 52
--- стр. 50 ---
ПРИЛОЖЕНИЕ 1. «РИБО-преп» вариант 100
РНК-пробы готовы к постановке ОТ, которую рекомендуется
проводить сразу же после получения очищенной РНК.
Очищенные РНК-пробы не рекомендуется хранить
дольше 30 мин при температуре от 2 до 8 °С. Допускается
хранение препарата при температуре от минус 24 до
минус 16 °С в течение недели, при температуре не выше
минус 68 °С в течение года. Допускается однократное
замораживание-оттаивание проб РНК.
стр. 50 ИЗ 52
--- стр. 51 ---
ПРИЛОЖЕНИЕ 2. «РЕВЕРТА-L» вариант 100
ПРИЛОЖЕНИЕ 2
Обратная транскрипция РНК с использованием комплекта
реагентов «РЕВЕРТА-L»
Общий объем реакции - 20 мкл, объем РНК-пробы - 10 мкл.
ВНИМАНИЕ! При работе с РНК необходимо использовать
только одноразовые пластиковые расходные материалы,
имеющие специальную маркировку «RNase-free», «DNase-
free».
Порядок работы:
1. Отобрать необходимое количество пробирок объемом
0,2 (0,5) мл.
2. Приготовить реакционную смесь на 12 реакций. Для этого в
пробирку с RT-mix внести 5 мкл RT-G-mix-1, тщательно
перемешать на вортексе, осадить капли с крышки пробирки
кратковременным центрифугированием.
3. К полученному раствору добавить 6 мкл ревертазы (MMIv),
пипетировать 5 раз, перемешать на вортексе. Осадить
капли с крышки пробирки кратковременным
центрифугированием.
4. Внести в пробирки по 10 мкл готовой реакционной смеси.
5. Используя наконечники с фильтром, добавить по 10 мкл
РНК-пробы в пробирки с реакционной смесью. Осторожно
перемешать пипетированием.
6. Поставить пробирки в амплификатор (термостат) с
температурой 37 °С на 30 мин.
7. Полученную в реакции обратной транскрипции кДНК для
последующей постановки ПЦР развести в 2 раза ДНК-
буфером (к 20 мкл кДНК отдельным наконечником с
фильтром добавить 20 мкл ДНК-буфера, аккуратно
перемешать пипетированием 10 раз).
Готовый препарат кДНК можно хранить при температуре
не выше минус 16 °С в течение 1 нед или при температуре
не выше минус 68 °С в течение года.
стр. 51 ИЗ 52
--- стр. 52 ---
ПРИЛОЖЕНИЕ 3. Схема приготовления реакционных смесей
ПРИЛОЖЕНИЕ 3
Расчетная таблица приготовления реакционных смесей
для проведения амплификации для «ПЦР-комплекта»
Объем реагентов на указанное количество реакций
Объем реагента на
одну реакцию, мкл 10,0 5,0 0,5
Число реакций® ПЦР-смесь-FL ПЦР-буфер-В Полимераза
(TaqF)
6 60 30 3,0
8 80 40 4,0
10 100 50 5,0
12 120 60 6.0
14 140 70 7,0
16 160 80 8,0
18 180 90 9,0
20 200 100 10,0
22 220 110 11,0
24 240 120 12,0
26 260 130 13,0
28 280 140 14,0
30 300 150 15,0
32 320 160 16,0
Расчетная таблица приготовления реакционных смесей
для проведения амплификации для «ПЦР-комплектов»
Объем реагентов на указанное количество реакций
Объем реагента на
одну реакцию, мкл 10,0 5,0 0,5
Число реакций® ПЦР-смесь-FL ПЦР-буфер-В Полимераза
(TaqF)
110 1100 550 55
220 2200 1100 110
^ Число исследуемых образцов (N) + 2 контроля этапа экстракции РНК + 2 контроля этапа
ПЦР + запас на 1 образец (N+2+2+1).
стр. 52 из 52
--- стр. 54 ---
УТВЕРЖДАЮ
Директор Федерального бюджетного
учреждения науки «Центральный
научно-исследовательский институт
эпидемиологии» Федеральной
службы по надзору ^сфере защиты
прав потребителей/^благополучия
В.Г. Акимкин
2 0 г ^ г.
ИНСТРУКЦИЯ по ПРИМЕНЕНИЮ
стандартного образца предприятия № 136 «Положительный
контрольный образец, содержащий РНК МЕР8-Со\/»
(СОП № 136 Пко MERS-CoV-rec)
l t d
ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии
Роспотребнадзора,
Российская Федерация, 111123,
г. Москва, ул. Новогиреевская, д. ЗА
г. Москва, ул. Новогиреевская, д. ЗА, стр. 6
тел. (495) 974 9642, e-mail;
amplisens@pcr.ru
--- стр. 55 ---
I
I
1 ОБЩИЕ УКАЗАНИЯ
1.1 Инструкция устанавливает порядок и условия применения стандартного
образца предприятия № 136 «Положительный контрольный образец, содержащий
РНК МЕКЗ-СоУ» (СОП № 136 ПКО МЕРЗ-СоУ-гес). далее по тексту СОП.
предназначенного для проведения испытаний методом полимеразной цепной
реакции (ПЦР) с гибридизационно-флуоресцентной детекцией набора реагентов
«АмплиСенс® Соу-Ва1-Р1», комплекта «РЕВЕРТА-Е».
1.2. Проверку упаковки, маркировки и целостности СОП проводят путем внешнего
осмотра.
2 МЕРЫ БЕЗОПАСНОСТИ. УДАЛЕНИЕ ОТХОДОВ
При работе с СОП и при постановке ПЦР следует соблюдать положения МУ
1.3.2569-09 «Организация работы лабораторий, использующих методы
амплификации нуклеиновых кислот при работе с материалом, содержащим
микроорганизмы МУ групп патогенности». При работе всегда следует выполнять
следующие требования:
- Использовать одноразовые перчатки, лабораторные халаты, защищать глаза
во время работы с образцами и реагентами. Тщательно вымыть руки по
окончании работы.
- Использовать и менять при каждой операции одноразовые наконечники для
автоматических дозаторов с фильтром. Одноразовую пластиковую посуду
(пробирки, наконечники) необходимо сбрасывать в специальный контейнер,
содержащий дезинфицирующее средство, которое может быть использовано
для обеззараживания медицинских отходов.
- Неиспользованные реагенты, реагенты с истекшим сроком годности, а также
использованные реагенты, упаковку следует удалять в соответствии с
требованиями СанПиН 2.1.3684-21 «Санитарно-эпидемиологические требования
к содержанию территорий городских и сельских поселений, к водным объектам,
питьевой воде и питьевому водоснабжению, атмосферному воздуху, почвам,
жилым помещениям, эксплуатации производственных, общественных
помещений, организации и проведению санитарно-противоэпидемических
(профилактических) мероприятий».
3 МАТЕРИАЛЫ, ОБОРУДОВАНИЕ, РЕАГЕНТЫ И УСЛОВИЯ ОКРУЖАЮЩЕЙ
СРЕДЫ, НЕОБХОДИМЫЕ ДЛЯ ПРОВЕДЕНИЯ ПЦР-АНАЛИЗА
3.1 Материалы и оборудование, необходимые для проведения ПЦР-анализа,
согласно ТУ и/или инструкции к испытываемому набору реагентов.
3.2 Реагенты из испытуемого набора реагентов.
З.ЗТемпература в помещении лаборатории от 20 до 28 °С, относительная влажность
от 15 до 75%.
4 ПОДГОТОВКА К ПРИМЕНЕНИЮ
Перед началом работы достать из холодильника пробирку с СОП и дать
нагреться до комнатной температуры. СОП должен представлять собой
прозрачную жидкость, не содержащую каких-либо включений или примесей.
Оценить визуально.
--- стр. 56 ---
5 ПОРЯДОК ПРИМЕНЕНИЯ
4
I
5.1 Содержимое пробирки с СОП перемешать и осадить капли на вортексе.
Открыть пробирку и, используя наконечник с аэрозольным барьером, отобрать
необходимый объем (см. следующий пункт), пробирку закрыть.
5.2Приготовить разведения, указанные в ТУ / методике испытаний набора
реагентов с использованием ДНК-буфер с ро1у(А), приложенного к СОП.
Разведения готовить по следующей схеме:
1) исходный препарат, имеющий концентрацию МхЮ"^, разводится М-кратно до
ближайшего разведения 10^ с коэффициентом 1 (1x10"').
Разведение провести согласно расчету, с использованием следующих формул:
Мх10"'/1х10"'=М(1)
С/М=А (2)
С-А=В (3), где
МхЮ"' - исходная концентрация СОП.
1x10"' - ближайшее к исходной концентрации разведение с коэффициентом 1
ГЭ/мл.
N - во сколько раз необходимо развести исходный препарат, для того чтобы
получить ближайшее к исходной концентрации разведение с коэффициентом 1
(при необходимости полученное число округлить до целого),
А - объем исходного СОП. который необходимо взять для приготовления С
мкл раствора, содержащего СОП в концентрации 1x10"', ближайшего к
исходной концентрации разведения с коэффициентом 1 (мкл),
В - объем ДНК-буфер с ро1у(А), который необходимо взять для приготовления
С мкл раствора, содержащего СОП в концентрации 1x10"', ближайшего к
исходной концентрации разведения с коэффициентом 1 (мкл):
С - объем раствора, содержащий СОП в концентрации 1x10'".
Полученный препарат СОП с концентрацией 1x10'" ГЭ/мл развести
последовательно десятикратно до получения первого разведения СОП с
концентрацией, указанной в ТУ / методике испытаний набора реагентов;
Из полученного первого разведения СОП с коэффициентом 1, приготовить
последующие разведения, указанные в ТУ / методике испытаний, путем
последовательных двукратных, пятикратных и/или десятикратных разведений.
2)
3)
Например, СОП имеет концентрацию 5x10^ ГЭ/мл, необходимо подготовить
разведения с концентрацией 2x10^, 2x10^ ГЭ/мл:
- промаркировать пробирки вместимостью 1,5 мл «2x10^» и «2x1
- рассчитать объем ДНК-буфер с ро1у(А), который необходимо внести в пробирку,
для получения концентрации препарата, равной 2x10^ ГЭ/мл:
5x105 ГЭ/мл / 2x10-^ ГЭ/мл = 25 (1);
250/25 = 10 (мкл) (2):
250 мкл -10 мкл = 240 (мкл) (3);
- в пробирку, маркированную «2x10**», внести автоматическим дозатором,
используя отдельный наконечник с аэрозольным барьером, 240 мкл ДНК-буфер с
ро1у(А) и 10 мкл исходного СОП. тщательно перемешать и осадить капли с крышки
пробирки на вортексе.
- рассчитать объем ДНК-буфер с ро1у(А), который необходимо внести в пробирку,
для получения концентрации препарата, равной 2x10^ ГЭ/мл:
2x10'^ ГЭ/мл /2x103 ГЭ/мл = 10 (1);
100/10 = 10 (мкл) (2):
--- стр. 59 ---
УТВЕРЖДАЮ
Директор Федерального бюджетного
учреждения науки «Центральный
научно-исследовательский институт
эпидемиологии» федеральной
у по надзору в сс|»ре защиты
5бителей 1# ^агосюлучия
В.Г. Акимкин
2 0 ^ .
ИНСТРУКЦИЯ по ПРИМЕНЕНИЮ
стандартного образца предприятия № 172 «Положительный
контрольный образец, содержащий РНК 8АР5-Со\^»
ЮОП № 172 ПКО SARS-CoV-rec)
м 1
ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии
Роспотребнадзора,
Российская Федерация, 111123,
г. Москва, ул. Новогиреевская, д. ЗА
г. Москва, ул. Новогиреевская, д. ЗА, стр, 6
тел, (495) 974 9642, e-mail:
amplisens@pcr.ru
--- стр. 60 ---
1 ОБЩИЕ УКАЗАНИЯ
1.1 Инструкция устанавливает порядок и условия применения стандартного
образца предприятия № 172 «Положительный контрольный образец, содержащий
РНК ЗАРЗ-СоУ» (СОП № 172 ПКО ЗАРЗ-СоУ-гес), далее по тексту СОП.
предназначенного для проведения испытаний методом полимеразной цепной
реакции (ПЦР) с гибридизационно-флуоресцентной детекцией набора реагентов
«АмплиСенс® Соу-Ва!-Р1», комплекта «РЕВЕРТА-1».
1.2. Проверку упаковки, маркировки и целостности СОП проводят путем внешнего
осмотра.
2 МЕРЫ БЕЗОПАСНОСТИ. УДАЛЕНИЕ ОТХОДОВ
При работе с СОП и при постановке ПЦР следует соблюдать положения МУ
1.3.2569-09 «Организация работы лабораторий, использующих методы
амплификации нуклеиновых кислот при работе с материалом, содержащим
микроорганизмы 1-1У групп патогенности». При работе всегда следует выполнять
следующие требования:
- Использовать одноразовые перчатки, лабораторные халаты, защищать глаза
во время работы с образцами и реагентами. Тщательно вымыть руки по
окончании работы.
- Использовать и менять при каждой операции одноразовые наконечники для
автоматических дозаторов с фильтром. Одноразовую пластиковую посуду
(пробирки, наконечники) необходимо сбрасывать в специальный контейнер,
содержащий дезинфицирующее средство, которое может быть использовано
для обеззараживания медицинских отходов.
- Неиспользованные реагенты, реагенты с истекшим сроком годности, а также
использованные реагенты, упаковку следует удалять в соответствии с
требованиями СанПиН 2.1.3684-21 «Санитарно-эпидемиологические требования
к содержанию территорий городских и сельских поселений, к водным объектам,
питьевой воде и питьевому водоснабжению, атмосферному воздуху, почвам,
жилым помещениям, эксплуатации производственных, общественных
помещений, организации и проведению санитарно-противоэпидемических
(профилактических) мероприятий».
3 МАТЕРИАЛЫ, ОБОРУДОВАНИЕ, РЕАГЕНТЫ И УСЛОВИЯ ОКРУЖАЮЩЕЙ
СРЕДЫ, НЕОБХОДИМЫЕ ДЛЯ ПРОВЕДЕНИЯ ПЦР-АНАЛИЗА
3.1 Материалы и оборудование, необходимые для проведения ПЦР-анализа,
согласно ТУ и/или инструкции к испытуемому набору реагентов.
3.2Реагенты из испытуемого набора реагентов.
3.3Температура в помещении лаборатории от 20 до 28 ”С, относительная влажность
от 15 до 75%.
4 ПОДГОТОВКА К ПРИМЕНЕНИЮ
Перед началом работы достать из холодильника пробирку с СОП и дать
нагреться до комнатной температуры. СОП должен представлять собой
прозрачную жидкость, не содержащую каких-либо включений или примесей.
Оценить визуально.
--- стр. 61 ---
5 ПОРЯДОК ПРИМЕНЕНИЯ
5.1 Содержимое пробирки с СОП перемешать и осадить капли на вортексе.
Открыть пробирку и, используя наконечник с аэрозольным барьером, отобрать
необходимый объем (см. следующий пункт), пробирку закрыть.
5.2 Приготовить разведения, указанные в ТУ / методике испытаний набора
реагентов с использованием ДНК-буфер с ро1у(А), приложенного к СОП.
Разведения готовить по следующей схеме:
1) исходный препарат, имеющий концентрацию МхЮ^, разводится М-кратно до
ближайшего разведения Ю'^с коэффициентом 1 (1x10"^).
Разведение проводят согласно расчету, с использованием следующих
формул:
Мх10^/1х10^=М(1)
С/М=А (2)
С-А=В (3), где
МхЮ^ - исходная концентрация СОП.
1x10"’ - ближайшее к исходной концентрации разведение с коэффициентом 1
ГЭ/мл.
N - во сколько раз необходимо развести исходный препарат, для того чтобы
получить ближайшее к исходной концентрации разведение с коэффициентом 1
(при необходимости полученное число округлить до целого),
А - объем исходного СОП, который необходимо взять для приготовления С
мкл раствора, содержащего СОП в концентрации 1x10"’, ближайшего к
исходной концентрации разведения с коэффициентом 1 (мкл),
В - объем ДНК-буфер с ро1у(А), который необходимо взять для приготовления
С мкл раствора, содержащего СОП в концентрации 1x10"’, ближайшего к
исходной концентрации разведения с коэффициентом 1 (мкл);
С - объем раствора, содержащий СОП в концентрации 1x10"’.
Полученный препарат СОП с концентрацией 1x10"’ ГЭ/мл развести
последовательно десятикратно до получения первого разведения СОП с
концентрацией, указанной в ТУ / методике испытаний набора реагентов;
Из полученного первого разведения СОП с коэффициентом 1, приготовить
последующие разведения, указанные в ТУ / методике испытаний, путем
последовательных двукратных, пятикратных и/или десятикратных разведений.
2)
3)
Например, СОП имеет концентрацию 5x10^ ГЭ/мл, необходимо подготовить
разведения с концентрацией 2x10^, 2x10^ ГЭ/мл:
- промаркировать пробирки вместимостью 1,5 мл «2x10^» и «2x10^®;
- рассчитать объем ДНК-буфер с ро1у(А), который необходимо внести в пробирку,
для получения концентрации препарата, равной 2x10'* ГЭ/мл:
5x105 ГЭ/мл /2x10** ГЭ/мл = 25 (1);
250/25 = 10 (мкл) (2):
250 мкл -10 мкл = 240 (мкл) (3);
- в пробирку, маркированную «2x10^», внести автоматическим дозатором,
используя отдельный наконечник с аэрозольным барьером, 240 мкл ДНК-буфер с
ро1у(А) и 10 мкл исходного СОП. тщательно перемешать и осадить капли с крышки
пробирки на вортексе.
- рассчитать объем ДНК-буфер с ро1у(А), который необходимо внести в пробирку,
для получения концентрации препарата, равной 2x10^ ГЭ/мл:
2x10'* ГЭ/мл /2x103 ГЭ/мл = 10 (1);
--- стр. 64 ---
УТВЕРЖДАЮ
Директор Федерального бюджетного
учреждения науки «Центральный
научно-исследовательский институт
эпидемиологии» Федеральной
службы по надзору в ¿тере защиты
прзалютребителей_Jl^ytaтrшoлyчия
В.Г. Акимкин
2 0 ^ г .
ИНСТРУКЦИЯ по ПРИМЕНЕНИЮ
стандартного образца предприятия № 286 «Положительный
контрольный образец, содержащий РНК 8АР8 -С о у-2»
(СОП № 286 ПКО РНК 8АР8-Соу-2-гес)
ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии
Роспотребнадзора,
Российская Федерация, 111123,
г, Москва, ул. Новогиреевская, д. ЗА
г. Москва, ул. Новогиреевская, д, ЗА, стр, 6
тел. (495) 974 9642, e-mail:
amplisens@pcr.ru
--- стр. 65 ---
I
1 ОБЩИЕ УКАЗАНИЯ
1.1 Инструкция устанавливает порядок и условия применения стандартного
образца предприятия № 286 «Положительный контрольный образец, содержащий
РНК SARS-Cov-2» (СОП № 286 ПКО РНК 8АР8-Соу-2-гес), далее по тексту СОП,
предназначенного для проведения испытаний методом полимеразной цепной
реакции (ПЦР) с гибридизационно-флуоресцентной детекцией наборов реагентов
АмплиСенс® СО\/Ю-19-Р1, «АмплиСенс® Соу-Ва1-Р1», комплекта «РЕВЕРТА-1».
1.2. Проверку упаковки, маркировки и целостности СОП проводят путем внешнего
осмотра.
2 МЕРЫ БЕЗОПАСНОСТИ. УДАЛЕНИЕ ОТХОДОВ
При работе с СОП и при постановке ПЦР следует соблюдать положения МУ
1.3.2569-09 «Организация работы лабораторий, использующих методы
амплификации нуклеиновых кислот при работе с материалом, содержащим
микроорганизмы 1-1\/ грулп патогенности». При работе всегда следует выполнять
следующие требования:
- Использовать одноразовые перчатки, лабораторные халаты, защищать глаза
во время работы с образцами и реагентами. Тщательно вымыть руки по
окончании работы.
- Использовать и менять при каждой операции одноразовые наконечники для
автоматических дозаторов с фильтром. Одноразовую пластиковую посуду
(пробирки, наконечники) необходимо сбрасывать в специальный контейнер,
содержащий дезинфицирующее средство, которое может быть использовано
для обеззараживания медицинских отходов.
- Неиспользованные реагенты, реагенты с истекшим сроком годности, а также
использованные реагенты, упаковку следует удалять в соответствии с
требованиями СанПиН 2.1.3684-21 «Санитарно-эпидемиологические требования
к содержанию территорий городских и сельских поселений, к водным объектам,
питьевой воде и питьевому водоснабжению, атмосферному воздуху, почвам,
жилым помещениям, эксплуатации производственных, общественных
помещений, организации и проведению санитарно-противоэпидемических
(профилактических) мероприятий».
3 МАТЕРИАЛЫ. ОБОРУДОВАНИЕ, РЕАГЕНТЫ И УСЛОВИЯ ОКРУЖАЮЩЕЙ
СРЕДЫ, НЕОБХОДИМЫЕ ДЛЯ ПРОВЕДЕНИЯ ПЦР-АНАЛИЗА
3.1 Материалы и оборудование, необходимые для проведения ПЦР-анализа,
согласно ТУ и/или инструкции к испытываемому набору реагентов.
3.2 Реагенты из испытуемого набора реагентов.
З.ЗТемпература в помещении лаборатории от 20 до 28 °С, относительная влажность
от 15 до 75%.
4 ПОДГОТОВКА К ПРИМЕНЕНИЮ
Перед началом работы достать из холодильника пробирку с СОП и дать
нагреться до комнатной температуры. СОП должен представлять собой
прозрачную жидкость, не содержащую каких-либо включений или примесей.
Оценить визуально.
--- стр. 66 ---
5 ПОРЯДОК ПРИМЕНЕНИЯ
5.1 Содержимое пробирки с СОП перемешать и осадить капли на вортексе.
Открыть пробирку и, используя наконечник с аэрозольным барьером, отобрать
необходимый объем (см. следующий пункт), пробирку закрыть.
5.2Приготовить разведения, указанные в ТУ / методике испытаний набора
реагентов с использованием ДНК-буфер с ро1у(А), приложенного к СОП.
Разведения готовить по следующей схеме:
1) Исходный препарат, имеющий концентрацию МхЮ'^, разводится М-кратно
до ближайшего разведения 10^ с коэффициентом 1 (1x10"^).
Разведение проводят согласно расчету, с использованием следующих
формул:
. Мх10"^/1х10^=М(1)
С/М=А (2)
С-А=В (3), где
МхЮ'^ - исходная концентрация СОП № 286 ПКО РНК ЗАР5-Соу-2-гес,
1x10"^ - ближайшее к исходной концентрации разведение с коэффициентом 1
ГЭ/мл.
N - во сколько раз необходимо развести исходный препарат, для того чтобы
получить ближайшее к исходной концентрации разведение с коэффициентом 1
(при необходимости полученное число округлить до целого),
А - объем исходного СОП. который необходимо взять для приготовления С
мкп раствора, содержащего СОП в концентрации 1x10^, ближайшего к
исходной концентрации разведения с коэффициентом 1 (мкл),
В - объем ДНК-буфер с ро1у(А), который необходимо взять для приготовления
С мкл раствора, содержащего СОП в концентрации 1x10"^, ближайшего к
исходной концентрации разведения с коэффициентом 1 (мкл);
С - объем раствора, содержащий СОП в концентрации 1x10"^.
2) Полученный препарат СОП с концентрацией 1x10^ ГЭ/мл развести
последовательно десятикратно до получения первого разведения СОП с
концентрацией, указанной в ТУ / методике испытаний набора реагентов;
3) Из полученного первого разведения СОП с коэффициентом 1, приготовить
последующие разведения, указанные в ТУ / методике испытаний, путем
последовательных двукратных, пятикратных и/или десятикратных
разведений.
Например, СОП № 286 ПКО РНК SARS-Cov-2-rec, имеет концентрацию 5,0x10®
ГЭ/мл необходимо подготовить разведения с концентрацией 5x10®, 5x10®, 5x10^
ГЭ/мл:
- промаркировать пробирки вместимостью 1,5 мл «5x10®», «5x10^», «5x10®» и
«5x10^»;
- рассчитать объем ДНК-буфер с ро1у(А), который необходимо внести в пробирку,
для получения концентрации препарата, равной 5,0x10® ГЭ/мл:
5,0x10® ГЭ/мл / 5,0x10® ГЭ/мл = 10 (1)
100/10 = 10 мкл (2)
100 мкл -1 о мкл = 90 мкл (3);
- в пробирку, маркированную «5x10®», внести автоматическим дозатором,
используя отдельный наконечник с аэрозольным барьером, 90 мкл ДНК-буфер с
ро1у(А) и 10 мкл исходного СОП. При внесении СОП в буфер пипетировать