Набор реагентов АмплиСенс® SARS-CoV-2-IT по ТУ 21.20.23-412-01897593-2020 — инструкция и характеристики
Открытые закупки, где изделие проходит ТЗ
Сейчас открытых закупок, где изделие полностью проходит ТЗ, нет; список обновляется каждый день.
Построчная сверка ТЗ с характеристиками этого изделия и все закупки под ваши товары — в кабинете, 7 дней бесплатно.
Попробовать бесплатно
Текст инструкции: технические характеристики
--- стр. 1 ---
«УТВЕРЖДАЮ»
Директор Федерального бюджетного
учреждения науки «Центральный
научно-исследовательский институт
эпидемиологии» Федеральной
службы по надзору в сфере защиты
прав потребителей /у благополучия
человека
________________В.Г Акимкин
« / / » 2 0 ^ 2 г.
ИНСТРУКЦИЯ по ПРИМЕНЕНИЮ
набора реагентов
АмплиСенс® SARS-CoV-2-IT
АмплиСенс®
ш 1
ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии
Роспотребнадзора.
Российская Федерация, 111123,
г. Москва, ул. Новогиреевская, д. ЗА
г. Москва, ул. Новогиреевская, д. ЗА, стр. 6
тел. (495) 974 9642, e-mail:
amplisens@pcr.ru IVD
--- стр. 2 ---
ОГЛАВЛЕНИЕ
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ........................................................................................................................3
НАЗНАЧЕНИЕ..............................................................................................................................................3
ПРИНЦИП МЕТОДА.................................................................................................................................4
ФОРМЫ КОМПЛЕКТАЦИИ....................................................................................................................5
АНАЛИТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ............................................................................................5
ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ......................................................................................8
МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ.......................................................................................................... 8
СВЕДЕНИЯ ОБ УТИЛИЗАЦИИ...........................................................................................................11
ДОПОЛНИТЕЛЬНЫЕ МАТЕРИАЛЫ И ОБОРУДОВАНИЕ.......................................................11
ВЗЯТИЕ. ТРАНСПОРТИРОВАНИЕ И ХРАНЕНИЕ ИССЛЕДУЕМОГО МАТЕРИАЛА.. 15
ПОДГОТОВКА ИССЛЕДУЕМОГО МАТЕРИАЛА К ЭКСТРАКЦИИ РНК ..............................16
ИНТЕРФЕРИРУЮЩИЕ ВЕЩЕСТВА И ОГРАНИЧЕНИЯ ПО ИСПОЛЬЗОВАНИЮ ПРОБ
ИССЛЕДУЕМОГО МАТЕРИАЛА........................................................................................................16
СОСТАВ.......................................................................................................................................................19
ПРОВЕДЕНИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ....................................................................................................21
ЭКСТРАКЦИЯ РНК ИЗ ИССЛЕДУЕМЫХ ОБРАЗЦОВ .............................................................21
ОБРАТНАЯ ТРАНСКРИПЦИЯ И ИЗОТЕРМИЧЕСКАЯ АМПЛИФИКАЦИЯ С
ДЕТЕКЦИЕЙ В РЕЖИМЕ «РЕАЛЬНОГО ВРЕМЕНИ»...............................................................23
A. Подготовка проб для ОТ-ИТ....................................................................................................23
Б. Проведение ОТ-ИТ с детекцией в режиме «реального времени» ..........................24
B. Анализ и интерпретация результатов......................................................................................26
СРОК го д н о с ти . УСЛОВИЯ ТРАНСПОРТИРОВАНИЯ и ХРАНЕНИЯ .........................28
ГАРАНТИЙНЫЕ ОБЯЗАТЕЛЬСТВА ИЗГОТОВИТЕЛЯ ............................................................29
СИМВОЛЫ, ИСПОЛЬЗУЕМЫЕ В ПЕЧАТНОЙ ПРОДУКЦИИ ................................................30
ПРИЛОЖЕНИЕ 1 ..................................................................................................................................... 31
ПРИЛОЖЕНИЕ 2 .....................................................................................................................................33
стр. 2 из 35
--- стр. 3 ---
список СОКРАЩЕНИИ
В настоящей инструкции применяются следующие
гэ - геномный эквивалент (геном)
ДНК - дезоксирибонуклеиновая кислота
кДНК - комплементарная ДНК, получаемая в реакции обратной
транскрипции на матрице РНК
К- - отрицательный контроль ОТ-ИТ
ИТ - изотермическая амплификация
МР - методические рекомендации
МУ - методические указания
о к - отрицательный контроль экстракции
ОРВИ - острые респираторные вирусные инфекции
о т - обратная транскрипция
ОТ-ИТ - изотермическая амплификация с обратной транскрипцией
ПК - положительный контроль экстракции
ПЦР - полимеразная цепная реакция
РНК - рибонуклеиновая кислота
РУ - регистрационное удостоверение
СанПиН - санитарные правила и нормы
ФБУН ЦНИИ
Эпидемиологии
Роспотребнадзора
- Федеральное бюджетное учреждение науки «Центральный
научно-исследовательский институт эпидемиологии»
Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав
потребителей и благополучия человека
С+ - положительный контрольный образец
С - - отрицательный контрольный образец
COVID-19 - Coronavirus disease 2019
IT - isothermal amplification
SARS-CoV-2 - Severe acute respiratory syndrome c o ro n a v iru s -2
SC2
4
НАЗНАЧЕНИЕ
Набор реагентов АмплиСенс® SARS-CoV-2-IT предназначен
для качественного определения РНК SARS-CoV-2 в
биологическом материале (мазки со слизистой оболочки носо- и
ротоглотки) методом обратной транскрипции и изотермической
амплификации (ОТ-ИТ) с флуоресцентной детекцией продуктов
амплификации.
Материалом для ОТ-ИТ служат пробы РНК, экстрагированные
из исследуемого биоматериала. Набор реагентов используется
для комплексной лабораторной диагностики COVID-19.
Показания и противопоказания к применению набора
реагентов
Набор реагентов используется в клинической лабораторной
диагностике для исследования биологического материала,
стр. 3 из 35
--- стр. 4 ---
полученного от прибывших из регионов, где регистрируются
случаи заболевания СО\/Ю-19, лиц, контактировавших с
больными СО\/Ю-19, вне зависимости от формы и наличия
манифестации заболевания, больных острой респираторной
инфекцией при подозрении на СО\/Ю-19.
Противопоказания отсутствуют, за исключением случаев,
когда взятие материала не может быть осуществлено по
медицинским показаниям.
Отрицательный результат исследования не исключает
возможность инфицирования коронавирусом 5АР5-Со\/-2, и
может быть получен при содержании вируса в образце ниже
заявленной аналитической чувствительности.
Потенциальные пользователи медицинского изделия
К работе с набором реагентов допускаются только
медицинские работники, обученные методам молекулярной
диагностики и правилам работы в клинико-диагностической
лаборатории в установленном порядке.
ПРИНЦИП МЕТОДА
Принцип тестирования основывается на экстракции РНК из
образцов исследуемого материала, одновременной обратной
транскрипции РНК и изотермической амплификации участков
кДНК выявляемого микроорганизма с флуоресцентной
детекцией ампликонов.
Обратная транскрипция РНК проводится с помощью
фермента обратной транскриптазы. Изотермическая
амплификация одного (формы 1, 2, 3) или двух (форма 4)
участков кДНК проводится при помощи специфичных к этому
участку/участкам праймеров и фермента Вэ^полимеразы.
В составе реакционной смеси присутствует флуорофор,
связывающийся с двухцепочечными продуктами амплификации,
что позволяет регистрировать накопление специфического
продукта путем измерения интенсивности флуоресцентного
сигнала с помощью термостата с системой детекции в режиме
«реального времени».
Амплифицируемая кДНК-мишень и канал детекции
флуоресценции указаны в табл. 1.
I
стр. 4 И З 35
--- стр. 5 ---
Таблица 1
Канал для флуорофора РАМ
кДНК-мишень кДНК 5АН5-СоУ-2
Область амплификации (Форма 1, 2, 3) ген O R F 1 a b
Область амплификации (Форма 4) ген O R F 1 a b , ген Е
ФОРМЫ КОМПЛЕКТАЦИИ
Форма 1: «1Т-комплект» вариант 200
Форма 2: «РИБО-преп» вариант 100 (2 шт.), «1Т-комплект»
вариант 200
Форма 3: «МАГНО-сорб» вариант 100М (2 шт.), «1Т-комплект»
вариант 200
Форма 4: «1Т-комплект» вариант 200 (ЗС2)
Формы 1, 4 предназначены для проведения обратной
транскрипции РНК и изотермической амплификации кДНК с
флуоресцентной детекцией в режиме «реального времени». Для
проведения полного исследования необходимо использовать
комплекты реагентов для экстракции РНК.
Формы 2, 3 предназначены для проведения полного
исследования, включающего экстракцию РНК из биологического
материала, обратную транскрипцию РНК и амплификацию кДНК
с флуоресцентной детекцией в режиме «реального времени».
Формы 1, 4 рассчитаны на проведение 200 реакций ОТ-ИТ,
включая контроли. Формы 2, 3 рассчитаны на проведение
200 тестов, включая контроли.
Объем контролей во всех формах комплектации рассчитан на
10 независимых постановок.
АНАЛИТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
Для данного набора реагентов применимы следующие
характеристики:
стр. 5 из 35
--- стр. 6 ---
Предел обнаружения
Таблица 2
Вид исследуемого
материала
Комплект для
экстракции РНК
Комплект для
амплификации
Предел
обнаружения,
ГЭ (копий) / мл
Мазки со
слизистой
оболочки HOCO-и
ротоглотки
«РИБО-преп» «1Т-комплект»
вариант 200
1x103
«МАГНО-сорб»
вариант 100М 5x103
«РИБО-преп» «1Т-комплекг»
вариант 200 (SC2)
5x103
«МАГНО-сорб»
вариант 100-100М 1x10^
;
соответствуетПримечание - Одна копия мишени кДНК
одному геномному эквиваленту (геному) вируса.
Данный предел обнаружения достигается при соблюдении
правил, указанных в разделах «Взятие, транспортирование и
хранение исследуемого материала» и «Подготовка
исследуемого материала к экстракции РНК».
Аналитическая специфичность
Набор реагентов обнаруживает участки РНК коронавируса
SARS-CoV-2 (клинические образцы, содержащие РНК SARS-
CoV-2 в концентрации не ниже предела обнаружения,
специфичность подтверждена методом прямого
секвенирования нуклеотидных последовательностей).
Аналитическая специфичность набора реагентов доказана
при исследовании ДНК/РНК следующих
микроорганизмов/штаммов, а также геномной ДНК человека:
- штаммы из коллекции АТСС® (American Туре Culture
Collection, США) в концентрации не более 1x10^ ГЭ/мл и не
менее 1x10® ГЭ/мл: Acinetobacter ЬаитаппИ АТСС® 19606™,
Bacteroides fragilis АТСС® 25285^'^, Bordetella bronchiseptica
АТСС® 10580™, Bordetella pertussis АТСС® 9340™, Candida
albicans АТСС® 14053™, Candida guilliermondii ATCC® 6260™,
Candida krusei ATCC® 14243^“, Clostridium difficile ATCC®
9689^“, Clostridium septicum ATCC® 12464^“, Coryne bade hum
jeikeium ATCC® 43734^“, Corynebacterium minutissimum ATCC®
23348™, Corynebacterium xerosis ATCC® 373™, Eggertheiia
lenta ATCC® 43055™, Enterobacter aerogenes ATCC® 13048™,
Enterobacter cloacae ATCC® 13047™, Enterococcus faecalis
ATCC® 51299^“, Enterococcus faecium ATCC® 35667™,
Erysipelothrix rhusiopathiae ATCC® 19414™, Escherichia coli
стр. 6 И З 35
L
--- стр. 7 ---
i
АТСС® 25922™, Gardnerella vaginalis ATCC® 14018™,
Haemophilus influenzae ATCC® 9006™, Klebsiella oxytoca
ATCC® 49131™, Klebsiella pneumoniae ATCC® 27736™, Listeria
gray! ATCC® 25401™, Listeria innocua ATCC® 33090™, Listeria
monocytogenes ATCC® 7644™, Moraxella catarrhalis ATCC®
25238™, Neisseria gonorrhoeae ATCC® 19424™, Neisseria
lactamica ATCC® 23970™, Neisseria meningitidis (serogroup B)
ATCC® 13090™, Peptoniphilus anaerobios ATCC® 27337™,
Proteus mirabais ATCC® 12453^'", Proteus vulgaris ATCC®
6380™, Propionibacterium acnés ATCC® 11827™, Pseudomonas
aeruginosa ATCC® 15442™, Rhodococcus equi ATCC® 6939™,
Salmonella entérica ATCC® 14028™, Serratia marcescens
ATCC® 14756™, Staphylococcus aureus ATCC® 6538 P™,
Staphylococcus epidermidis ATCC® 12228™, Staphylococcus
haemolyticus ATCC® 29970^“, Staphylococcus saprophyticus
ATCC® 49907™, Stenotrophomonas maltophllla ATCC® 13637™,
Streptococcus agalactiae ATCC® 13813™, Streptococcus
equisimilis ATCC® 12388™, Streptococcus equi ATCC® 9528™,
Streptococcus bovis (group D) ATCC® 9809™, Streptococcus
mutans ATCC® 35668™, Streptococcus pneumoniae ATCC®
49619™, Streptococcus pyogenes ATCC® 19615™,
Streptococcus salivarius ATCC® 13419™, Streptococcus uberis
ATCC® 700407™, Vibrio parahaemolyticus ATCC® 17802™,
Vibrio vulnificus ATCC® 27562™;
клинические образцы (специфичность подтверждена
методом прямого секвенирования нуклеотидных
последовательностей) в концентрации не более 1x10® ГЭ/мл
и не менее 1x10® ГЭ/мл: Shigella sonnei, Yersinia enterocolitica,
Human adenovirus 1, Human rhinovirus, Human respiratory
syncytial virus, Human bocavirus, Human parainfluenza virus 3,
Human parainfluenza virus 4, Cytomegalovirus {CMV), Epstein-
Barr virus {EBV)\
штаммы из коллекции ФГБУ «НИИ гриппа имени А.А.
Смородинцева» в концентрации не более 1x10® ГЭ/мл и не
менее 1x10® ГЭ/мл: А/Санкт-Петербург /R1I-39/2020 {Influenza
virus А (H1N1)pdnn09), А/Калининград/84/2019 (Influenza virus
А (H3N2)), A/Hong Kong/1073/1999 (Influenza virus A (H9N2)),
В/Красноярск/09/2020 (Influenza virus В линия Виктория),
В/Санкт-Петербург/Р11-346/2019 (Influenza virus В линия
стр. 7 ИЗ 35
--- стр. 8 ---
Ямагата);
- ДНК человека в концентрации 10 мкг/мл.
При тестировании образцов ДНК/РНК вышеперечисленных
микроорганизмов и ДНК человека неспецифических реакций
выявлено не было.
Информация об интерферирующих веществах указана в
разделе «Интерферирующие вещества и ограничения по
использованию проб исследуемого материала».
Повторяемость и воспроизводимость исследования
Повторяемость и воспроизводимость исследования были
определены путем тестирования положительных и
отрицательных модельных образцов. Положительные образцы
содержали стандартный образец предприятия с концентрацией
РНК вируса 8АР8-Со\/-2 порядка Ю'^ГЭ/мл, в качестве
отрицательного образца был использован реагент С-.
Условия повторяемости включали в себя тестирование в
одной и той же лаборатории, одним и тем же оператором, с
использованием одного и того же оборудования в пределах
короткого промежутка времени. Условия воспроизводимости -
тестирование в двух независимых лабораториях, разными
операторами, в разные дни, на различных приборах и разных
серий набора реагентов. Результаты представлены в табл. 3.
Таблица 3
Тип образцов
Повторяемость Воспроизводимость
Количество
образцов
Совпадение
результатов, %
Количество
образцов
Совпадение
результатов, %
Положительные 10 100 40 100
Отрицательные 10 100 40 100
ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
Для определения диагностических характеристик набора
реагентов были использованы следующие образцы (см. табл. 4):
Таблица 4
Вид исследуемого материала Количество образцов
Мазки со слизистой оболочки носо- и ротоглотки 320
В качестве референтного метода использовались наборы
реагентов «АмплиСенс® Соу-Ва^Р1» (РУ № РЗН 2014/1987) и
АмплиСенс® СОУЮ-19-Р1 (РУ № РЗН 2021/145026).
Результаты представлены в табл. 5 и 6.
стр. 8 из 35
--- стр. 9 ---
Таблица 5
Результаты тестирования набора
АмплиСенс® SARS-CoV-2-IT
Е\ сравнении с референтным методом
Вид
исследуемого
материала
Результаты применения
АмплиСенс® SARS-CoV-2-IT
Результаты применения
ре^рентного метода
положительных отрицательных
Мазки со
слизистой
оболочки
HOCO-и
ротоглотки
Всего
исследован
положительных 159 0
О
320
образцов отрицательных 1 160
Таблица 6
Диагностические характеристики набора реагентов
АмплиСенс® SARS-CoV-2-IT
Вид исследуемого
материала
Диагностическая
чувствительность''
(с доверительной
веро5ггностыо 95 % )
Диагностическая
специфичность^
(с доверительной
вероятностью 95 %)
Мазки со слизистой оболочки
HOCO- и ротоглотки 99,38 (96,57-99,98) % 100 (97,72-100)%
МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ
Работа должна лроводиться в лаборатории, вылолняющей
молекулярно-биологические исследования биологического
материала на наличие возбудителей инфекционных болезней, с
соблюдением СанПиН 3.3686-21 «Санитарно-
эпидемиологические требования по профилактике
инфекционных болезней», СанПиН 2.1.3684-21 «Санитарно-
эпидемиологические требования к содержанию территорий
городских и сельских поселений, к водным объектам, питьевой
воде и питьевому водоснабжению, атмосферному воздуху,
почвам, жилым помещениям, эксплуатации производственных,
общественных помещений, организации и проведению
санитарно-противоэпидемических (профилактических)
мероприятий» и МУ 1.3.2569-09 «Организация работы
лабораторий, использующих методы амплификации
^ Относительная чувствительность в сравнении с использованным референтным методом.
2 Относительная специфичность в сравнении с использованным референтным методом.
стр. 9 из 35
--- стр. 10 ---
нуклеиновых кислот при работе с материалом, содержащим
микроорганизмы 1-1\/ групп патогенности».
Набор реагентов предназначен для одноразового применения
для проведения молекулярного исследования указанного
количества проб (см. раздел «Формы комплектации»).
Набор реагентов готов к применению согласно данной
инструкции. Применять набор реагентов строго по назначению.
При работе необходимо всегда выполнять следующие
требования;
- Температура в помещении лаборатории от 20 до 28 °С,
относительная влажность от 15 до 75%.
- Допускать к работе с набором реагентов только персонал,
обученный методам молекулярной диагностики и правилам
работы в клинико-диагностической лаборатории в
установленном порядке.
- Не использовать набор реагентов, если нарушена
внутренняя упаковка или внешний вид реагента не
соответствует описанию.
- Не использовать набор реагентов, если не соблюдались
условия транспортирования и хранения согласно инструкции.
- Не использовать набор реагентов по истечении срока
годности.
- Использовать одноразовые неопудренные перчатки,
лабораторные халаты, защищать глаза во время работы с
образцами и реагентами. Тщательно вымыть руки по
окончании работы. Все операции проводятся только в
перчатках для исключения контакта с организмом человека.
- Избегать вдыхания паров, контакта с кожей, глазами и
слизистой оболочкой. Вреден лри проглатывании. При
контакте немедленно промыть пораженное место водой, при
необходимости обратиться за медицинской помощью.
При использовании по назначению и соблюдении
вышеперечисленных мер предосторожности формы 1 и 4
набора реагентов безопасны.
При использовании по назначению форм 2 и 3 набора
реагентов и соблюдении вышеперечисленных мер
предосторожности контакт с организмом человека исключен.
При аварийных ситуациях возможно следующее:
- раздражение слизистой оболочки глаз у чувствительных лиц.
стр. 10 И З 35
--- стр. 20 ---
СОСТАВ
Комплект реагентов входит в состав формы 2 в количестве
2 штук.
«МАГНО-сорб» вариант 100М - комплект реагентов для
Реагент Описание Объем, мл Количество
Лизирующий раствор
МАГНО-сорб
Прозрачная жидкость от
бесцветного до жёлтого
или розового цвета®
107 1 флакон
Раствор для отмывки 6 Прозрачная бесцветная
жидкость 87 1 флакон
Раствор для отмывки 7 Прозрачная бесцветная
жидкость 35 1 флакон
Буфер для элюции Прозрачная бесцветная
жидкость 14 1 флакон
Магнетизированная
силика
Суспензия магнитных
частиц 1.0 2 пробирки
Компонент А Прозрачная бесцветная
жидкость 1.0 1 пробирка
1
Комплект реагентов входит в состав формы 3 в количестве
2 штук.
Эксплуатационная документация в составе; инструкция по
применению, паспорт качества набора реагентов, вкладыш к
набору реагентов, краткое руководство к набору реагентов - на
бумажном носителе и на сайте Изготовителя (www.amplisens.ru).
® При хранении лизирующего раствора МАГНО-сорб при температуре ниже 20 возможно
образование осадка в виде кристаллов.
стр, 20 из 35
--- стр. 21 ---
ПРОВЕДЕНИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
ПРОВЕДЕНИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
Исследование состоит из следующих этапов:
- экстракция РНК из исследуемых образцов,
- обратная транскрипция РНК и изотермическая амплификация
кДНК с флуоресцентной детекцией в режиме «реального
времени»,
- анализ и интерпретация результатов.
ЭКСТРАКЦИЯ РНК ИЗ ИССЛЕДУЕМЫХ ОБРАЗЦОВ
ВНИМАНИЕ! При работе с РНК необходимо использовать
только одноразовые пластиковые расходные материалы,
имеющие специальную маркировку RNase-free, DNase-free.
При работе с формами 2 и 3 для экстракции РНК используют
комплекты реагентов, входящие в состав набора реагентов:
- при работе с Формой 2 см. Приложение 1 «РИБО-преп»
вариант 100.
- при работе с Формой 3 см. Приложение 2 «МАГНО-сорб»
вариант 100М.
При работе с формами 1 и 4 для экстракции РНК используют
комплекты реагентов «РИБО-преп» (РУ № ФСР 2008/03147) или
«МАГНО-сорб» вариант 100-100М (РУ № ФСР 2010/07265).
Порядок работы с комплектами реагентов «РИБО-преп»,
«МАГНО-сорб» смотрите в инструкции к соответствующему
комплекту для экстракции. Комплект реагентов «МАГНО-сорб»
может применяться совместно с автоматическими станциями
для экстракции нуклеиновых кислот «открытого типа»^.
Каждая индивидуальная постановка должна сопровождаться
постановкой двух контролей: отрицательного контроля
экстракции (ОК) и положительного контроля экстракции (ПК).
ВНИМАНИЕ! ОТ-ИТ рекомендуется проводить сразу после
получения проб РНК. Допускается хранение проб РНК при
температуре от 2 до 8 °С не более 30 мин, при температуре от
минус 24 до минус 16 °С - не более недели и при температуре
не выше минус 68 °С - до года. Допускается однократное
замораживание-оттаивание проб РНК.
Станции, совместимые с наборами реагентов различных изготовителей.
стр. 21 из 35
--- стр. 22 ---
ПРОВЕДЕНИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
Объемы реагентов и образцов при экстракции с помощью
комплектов реагентов «РИБО-преп» и «МАГНО-сорб» вариант
100-100М ПРИ работе с Формами 1 и 4:
Объем исследуемого образца - 100 мкл.
В пробирку отрицательного контроля экстракции (ОК) внести
100 мкл С-.
В пробирку положительного контроля экстракции (ПК) внести
90 мкл С- и 10 мкл С+ 1Т-8АР8-Со>/-2.
Объем элюции «РИБО-преп» - 50 мкл (допускается
увеличение объема элюции до 100 мкл).
Объем элюции «МАГНО-сорб» - 100 мкл.
стр. 22 из 35
--- стр. 23 ---
ПРОВЕДЕНИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
ОБРАТНАЯ ТРАНСКРИПЦИЯ И ИЗОТЕРМИЧЕСКАЯ
АМПЛИФИКАЦИЯ С ДЕТЕКЦИЕЙ В РЕЖИМЕ «РЕАЛЬНОГО
ВРЕМЕНИ»
ВНИМАНИЕ! При работе с РНК необходимо использовать
только одноразовые стерильные пластиковые расходные
материалы, имеющие специальную маркировку RNase-free,
DNase-free.
Выбор пробирок для проведения ОТ-ИТ зависит от
используемого амплификатора.
Для внесения в пробирки реагентов, проб РНК и
контрольных образцов используются одноразовые
наконечники с фильтрами.
А. Подготовка проб для ОТ-ИТ
Общий объем реакционной смеси - 20 мкл, включая объем
пробы РНК -10 мкл.
1. Рассчитать количество каждого реагента, требующееся для
приготовления реакционной смеси. На одну реакцию
требуется 5 мкл IT-mix SARS-CoV-2 (или IT-mix-SC2 при
работе с формой 4) и 5 мкл IT-mix-E. Смесь готовить на
общее число исследуемых и контрольных образцов
(количество контрольных образцов см. в п. 7) плюс запас на
2 реакции.
ВНИМАНИЕ! Компоненты реакционной смеси следует смешивать
непосредственно перед проведением исследования.
2. Разморозить и перемешать содержимое пробирки с !T-mix
SARS-CoV-2 (или IT-mix-SC2 при работе с формой 4),
осадить капли на вортексе. Содержимое пробирки IT-mix-E
перемешать пипетированием, осадить капли на вортексе.
ВНИМАНИЕ! Допускается хранение реагентов при температуре
от 2 до 8 °С в течение 2 недель. По истечении указанного срока
реагенты не использовать.
3. В отдельной пробирке подготовить реакционную смесь.
Смешать необходимое количество IT-mix SARS-CoV-2 (или
IT-mix-SC2 при работе с формой 4) и IT-mix-E. Тщательно
перемешать, осадить капли на вортексе.
ВНИМАНИЕ! При работе с IT-mix SARS-CoV-2 / IT-mix-SC2
возможно выпадение осадка после размораживания, который
полностью растворяется при нагревании до комнатной
температуры. Перед приготовлением реакционной смеси
стр. 23 из 35
--- стр. 24 ---
ПРОВЕДЕНИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
необходимо убедиться в отсутствии осадка в пробирке с 1Т-т1х
SARS-CoV-2 / 1Т-т1х-8С2.
4. Отобрать необходимое количество пробирок или стрипов для
ОТ-ИТ исследуемых и контрольных проб.
5. Внести в каждую пробирку по 10 мкл приготовленной
реакционной смеси. Неиспользованные остатки реакционной
смеси выбросить.
6. В пробирки с реакционной смесью внести по 10 мкл проб
РНК, полученных в результате экстракции из исследуемых
образцов.
ВНИМАНИЕ! При добавлении проб РНК, экстрагированных с
помощью комплектов реагентов для проведения экстракции
методом магнитной сепарации, необходимо избегать попадания
сорбента в реакционную смесь.
7. Поставить контрольные реакции;
а) положительный контроль экстракции (ПК) - в пробирку
с реакционной смесью внести 10 мкл пробы,
экстрагированной из С+.
б) отрицательный контроль экстракции (ОК) - в пробирку
с реакционной смесью внести 10 мкл пробы,
экстрагированной из С-.
ВНИМАНИЕ! При подозрении на возможную контаминацию в
лаборатории необходима постановка отрицательного контроля
ОТ-ИТ (К-). Для этого в пробирку с реакционной смесью внести
10 мкл С- (без этапа экстракции).
8. Перемешать содержимое пробирок, не допуская появления
пены, осадить капли на вортексе.
ВНИМАНИЕ! Провести ОТ-ИТ сразу после соединения
реакционной смеси с РНК-пробами и контролями.
Б. Проведение ОТ-ИТ с детекцией в режиме «реального
времени»
1. Установить пробирки в ячейки реакционного модуля прибора.
ВНИМАНИЕ! В случае неполной загрузки приборов
планшетного типа рекомендуется дополнительно установить
пустые пробирки по углам реакционного модуля
амплификатора.
стр. 24 из 35
--- стр. 26 ---
ПРОВЕДЕНИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
В. Анализ и интерпретация результатов
ВНИМАНИЕ! Установление диагноза и назначение лечения
должны производиться врачом соответствующей
специализации.
Анализируют кривые накопления флуоресцентного сигнала,
свидетельствующего о накоплении продукта амплификации
(см. табл. 10);
Таблица 10
Канал для флуорофора РАМ
Продукт амплификации кДНК 5АК8-СоУ-2
Результаты интерпретируются на основании наличия (или
отсутствия) пересечения кривой флуоресценции, имеющей
экспоненциальный подъем, с установленной на
соответствующем уровне пороговой линией, что определяет
наличие (или отсутствие) для данной пробы РНК значения
порогового цикла {Ct).
Анализируют значения пороговых циклов (С^) образцов
относительно граничных значений, указанных во вкладыше к
набору реагентов, в соответствии с табл. 11:
Таблица 11
Интерпретация результатов анализа исследуемых
Значение порогового цикла (С^ по каналу
для флуорофора РАМ Результат
отсутствует или определено больше граничного РНК SARS-CoV-2
НЕ обнаружена
опоелелено меньше граничного РНК ЗАК8-Со\/-2 обнаружена
Контроль качества исследования
Результат исследования считается достоверным, если
получены правильные результаты для контролей этапов
экстракции и ОТ-ИТ в соответствии с табл. 12 и вкладышем,
прилагаемым к набору реагентов.
Таблица 12
Результаты для контролей различных этапов
исследования
Контроль Контролируемый этап
исследования
Значение порогового цикла
по каналу для флуорофора РАМ
ПК Экстракция РНК Определено меньше граничного
ок Экстракция РНК отсутствует или больше граничного
к- ОТ-ИТ отсутствует или больше граничного
С Т р . 26 И З 35
--- стр. 27 ---
ПРОВЕДЕНИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
ВНИМАНИЕ! Настройки приборов и граничные значения
указаны во вкладыше, прилагаемом к набору реагентов.
Возможные ошибки:
1. Для положительного контроля экстракции (ПК) значение
порогового цикла (С?) отсутствует или превышает граничное.
Необходимо повторить исследование, начиная с этапа
экстракции РНК, для всех образцов.
2. Для отрицательного контроля экстракции (ОК) определено
значение порогового цикла {Ct) меньше граничного. Вероятна
контаминация лаборатории продуктами амплификации или
контаминация реагентов или исследуемых образцов на
каком-либо этапе исследования. Необходимо предпринять
меры по выявлению и ликвидации источника контаминации и
повторить исследование для всех образцов, в которых
обнаружена РНК анализируемого микроорганизма, начиная с
этапа экстракции РНК.
3. Для отрицательного контроля ОТ-ИТ (К-) определено
значение порогового цикла (СД меньше граничного. Вероятна
контаминация лаборатории продуктами амплификации или
контаминация реагентов, исследуемых образцов на каком-
либо этапе исследования. Необходимо предпринять меры по
выявлению и ликвидации источника контаминации и повторить
амплификацию и детекцию для всех образцов, в которых
обнаружена РНК анализируемого микроорганизма.
4. Для исследуемого образца определено значение порогового
цикла, при этом на графике флуоресценции отсутствует
участок характерного экспоненциального подъема (график
представляет собой приблизительно прямую линию).
Необходимо проверить правильность выбранного уровня
пороговой линии или параметров расчета базовой линии.
Если результат получен при правильном уровне пороговой
линии (базовой линии), требуется повторно провести
амплификацию и детекцию для этого образца.
стр. 27 из 35
--- стр. 28 ---
СРОК годности. УСЛОВИЯ ТРАНСПОРТИРОВАНИЯ и
ХРАНЕНИЯ
Срок годности. 12 мес. Набор реагентов с истекшим сроком
годности применению не подлежит. Срок годности вскрытых
реагентов соответствует сроку годности, указанному на
этикетках для невскрытых реагентов, если в инструкции не
указано иное.
Транспортирование. Набор реагентов транспортировать при
температуре от 2 до 8 °С не более 5 сут в термоконтейнерах,
содержащих хладоэлементы, всеми видами крытых
транспортных средств.
Хранение.
Форма 1. «1Т-комплект» вариант 200 хранить в морозильной
камере при температуре от минус 24 до минус 16 °С. 1Т-т1х-Е
хранить в защищенном от света месте.
Форма 2. «РИБО-преп» вариант 100 хранить в холодильной
камере при температуре от 2 до 8 °С. «1Т-комплект» вариант 200
хранить в морозильной камере при температуре от минус 24 до
минус 16 °С. 1Т-т1х-Е хранить в защищенном от света месте.
Форма 3. «МАГНО-сорб» вариант 100М хранить при
температуре от 2 до 25 °С. «1Т-комплект» вариант 200 хранить в
морозильной камере при температуре от минус 24 до минус
16 °С. 1Т-т1х-Е хранить в защищенном от света месте.
Форма 4. «1Т-комплект» вариант 200 (5С2) хранить в
морозильной камере при температуре от минус 24 до минус
16 °С. 1Т-т1х-Е хранить в защищенном от света месте.
Холодильные и морозильные камеры должны обеспечивать
регламентированный температурный режим.
стр. 28 из 35
--- стр. 29 ---
г а р а н т и й н ы е о б я з а т е л ь с т в а и з г о т о в и т е л я
Изготовитель гарантирует соответствие основных
параметров и характеристик набора реагентов требованиям,
указанным в технической и эксплуатационной документации, в
течение указанного срока годности при соблюдении всех
условий транспортирования, хранения и применения.
Медицинское изделие техническому обслуживанию и ремонту
не подлежит.
Рекламации на качество набора реагентов направлять по
адресу 111123, г. Москва, ул. Новогиреевская, дом ЗА, e-mail:
obtk@pcr.ru. Отзывы и предложения о продукции АмплиСенс® вы
можете оставить, заполнив анкету потребителя на сайте:
www.amplisens.ru.
При выявлении побочных действий, не указанных в
инструкции по применению набора реагентов, нежелательных
реакций при его использовании, фактов и обстоятельств,
создающих угрозу жизни и здоровью граждан и медицинских
работников при применении набора реагентов, рекомендуется
направить сообщение по адресу, указанному выше, и в
уполномоченную государственную регулирующую организацию
(в РФ - Федеральная служба по надзору в сфере
здравоохранения) в соответствии с действующим
законодательством.
Директор
ГБУЗ МО МОНИКИ
им. М.Ф. Владимирского
К.Э. Соболев
стр. 29 из 35
--- стр. 30 ---
символы, ИСПОЛЬЗУЕМЫЕ В ПЕЧАТНОЙ ПРОДУКЦИИ
REF
IVD
I
■J
Номер по каталогу
А
Осторожно!
Код партии
V
Содержимого достаточно для
проведения п тестов
Медицинское изделие для
диагностики in vitro Использовать до
Дата изменения □s
Обратитесь к инструкции по
применению
Предел температуры Не допускать воздействия
солнечного света
Изготовитель Дата изготовления
СТО. 30 из 35