--- стр. 1 ---
" ) ■ ,АЮ»
p директор
КС ДИАГНОСТИКУМ"
О-В. Толстова
2016 г.
ИНСТРУКЦИЯ
по применению
Набора реагентов для определения общей активности
креатинкиназы в сыворотке крови
(КРЕАТИНКИНАЗА-ОЛЬВЕКС)
(Взамен инструкции, утвержденной 07.07.2005г.)
Назначение
«Набор реагентов для определения общей активности креатинкиназы в сыворотке крови
(КРЕАТИНКИНАЗА-ОЛЬВЕКС)» предназначен для количественного определения
каталитической активности креатинкиназы в сыворотке крови человека энзиматическим методом
в клинической лабораторной диагностике.
Диагностическая роль. ^
Повышение общей активности креатинкиназы в сыворотке крови наблюдается при
следующих процессах:
травма, хирургическое вмешательство, инфаркт миокарда и нарушение кровоснабжения любой
мышцы, миопатии любого происхождения, мышечные дистрофии всех типов, синдром Рейс,
отравление с комой, злокачественная гиперпирексия, длительная гипотермия, гипотиреоз,
инфекционные болезни, аритмия, дефибрилляция, застойная сердечная недостаточность,
тахикардия, эмболия легочной артерии, столбняк, генерализованные судороги, обширный
инфаркт мозга, беременность, гипоксический шок, опухоли предстательной железы, мочевого
пузыря и ЖКТ, отёк легких, белая горячка, острый психоз, травма головы, инфаркт ЖКТ.
Уровни ниже нормальных, вероятно, не имеют значения, но отражают либо малую
мышечную массу, либо сидячий образ жизни, либо обе эти причины. (Энциклопедия
клинических лабораторных тестов. Под редакцией Н. Тица).
Характеристика изделия
Состав набора.
В состав набора реагентов входят следующие компоненты:
- реагент 1 (буферный раствор), pH 6,7, содержащий имидазол, 100 ммоль/л; ацетат
магния, 10 ммоль/л; глюкозу, 20 ммоль/л; ЭДТА динатриевую соль, 2,0 ммоль/л; азид натрия
5,0 г/л; аденозинмонофосфат, 5,0 ммоль/л; N-ацетилцистеин, 20 ммоль/л; уксусную кислоту 0,1
моль/л до pH 6,7, готов к применению - 1 флакон (60 мл) или 1 флакон (100 мл);
- реагент 2 (лиофилизат), содержащий бычий сывороточный альбумин (БСА), 20 г/л;
аденозиндифосфат, 20 ммоль/л; диаденозинпентафосфат, 0,1 ммоль/л; НАДО, 20 ммоль/л;
креатинфосфат, 300 ммоль/л; глюкозо-6-фосфатдегидрогеназу, 20 000 Е/л; гексокиназу, 30 000
Е/л - 3 флакона или 5 флаконов.
Количество определений.
Количество определений зависит от характеристик используемого биохимического
анализатора и минимального рабочего объёма кюветы. Согласно стандартной процедуре анализа
набор рассчитан на проведение 24 или 40 определений при расходе 2,5 мл рабочего реагента на
один анализ.
38022
28.06.2016
--- стр. 2 ---
Принцип метода.
Метод основан на оптическом тесте Варбурга с использованием сопряженных
ферментативных реакций, приводящих к образованию в инкубационной среде НАДФН 2.
Скорость образования НАДФНг прямо пропорциональна активности креатинкиназы и
регистрируется фотометрически при длине волны 340 нм.
Фосфокреатин + АДФ < -----^Креатинкиназа-----> креатин + АТФ
АТФ + глюкоза <-----^Гексокиназа-----> АДФ + глюкозо-6-фосфат
глюкозо-6-фосфат + НАДФ <-----люкозо-6-фосфатдегидрогеназа ------->
6-фосфоглюконат + НАДФНг
Аналитические характеристики изделия
Набор обеспечивает линейную область определения общей активности креатинкиназы в
диапазоне от 15 до 1000 Е/л, отклонение от линейности - не более 5%.
Чувствительность определения - не более 10 Е/л.
Коэффициент вариации результатов определений - не более 5%.
Нормальные величины активности креатинкиназы в сыворотке крови при температуре
измерения +37°С: у мужчин - до 190 Е/л, у женщин - до 165 Е/л.
Качество набора может проверяться при помощи отечественных или зарубежных
контрольных сывороток с аттестованным по данному методу показателем.
Меры предосторожности при работе с изделием
Потенциальный риск применения набора - класс 2а (приказ М3 РФ от 06.06.2012 № 4н).
Все компоненты реагентов набора в используемых концентрациях являются
нетоксичными. В состав реагентов набора входят азид натрия и уксусная кислота. Следует
избегать попадания реагентов на кожу и слизистые; при попадании немедленно пробыть
поражённое место больщим количеством проточной воды. При случайном проглатывании
реагента следует немедленно выпить 0,5 л тёплой воды и вызвать рвоту.
Так как образцы крови человека следует рассматривать как потенциально
инфицированный материал, способный длительное время сохранять и передавать ВИЧ, вирусы
гепатита или любой другой возбудитель инфекции, необходимо при работе надевать
одноразовые резиновые или пластиковые перчатки.
При работе с набором необходимо соблюдать "Правила устройства, техники
безопасности, производственной санитарии, противоэпидемического режима и личной гигиены
при работе в лабораториях (отделениях, отделах) санитарно-эпидемиологических учреждений
системы Министерства здравоохранения СССР" (Москва, 1981 г.).
Для дезинфекции посуды и материалов, контактировавших с исследуемыми и
контрольными образцами, рекомендуем использовать дезинфицирующие средства, не
оказывающие негативного воздейетвия на качество набора, не содержащие активный кислород и
хлор, например, комбинированные средства на основе ЧАС, спиртов, третичных аминов.
Использование дезинфицирующих средств, содержащих активный кислород и хлор (Н 2О2,
деохлор, хлорамин), приводит к серьёзному искажению результатов.
Твёрдые и жидкие отходы, образующиеся в результате использования набора реагентов
относятся к классу Б согласно классификации медицинских отходов СанПиН 2.1.7.2790-10
«Санитарно-эпидемиологические требования к обращению с медицинскими отходами».
Утилизацию или уничтожение, дезинфекцию использованных реагентов следует
проводить в соответствии с СанПиН 2.1.7.2790-10 «Санитарно-эпидемиологические требования к
обращению с медицинскими отходами» и МУ 287-113 «Методические указания по дезинфекции,
предстерилизационной очистке и стерилизации изделий медицинского назначения».
Оборудование и материалы, необходимые при работе с изделием:
- Спектрофотометр, длина волны 340 нм, термостатируемая кювета (+37°С) с длиной
оптического пути 1,0 см; полуавтоматический или автоматический биохимический анализатор;
- секундомер;
- термостат, поддерживающий температуру +37±0,3°С;
- пипетки, позволяющие отбирать объёмы жидкости 0,1 мл и 2,5 мл;
38022
28.06.2016
--- стр. 3 ---
- раствор хлорида натрия 0,9% (физиологический раствор);
- одноразовые перчатки резиновые или пластиковые.
Для проведения анализа рекомендуется использовать полуавтоматические одноканальные
пипетки со сменными наконечниками, аттестованные на точность по значению средней дозы и
сходимости результатов дозирования.
Анализируемые образцы
Сыворотка крови без следов гемолиза.
При работе с исследуемыми образцами необходимо соблюдать меры предосторожности,
принятые при работе с потенциально инфицированным материалом. Основные правила работы
изложены в «Инструкции по мерам профилактики распространения инфекционных заболеваний
при работе в клинико-диагностических лабораториях лечебно-профилактических учреждений»,
утв. Минздравом СССР 17 января 1991г.
Подготовка компонентов для исследования (анализа)
Перед проведением анализа растворить содержимое 1 флакона реагента 2 в 20 мл
реагента 1.
Рабочий реагент готов к применению не ранее, чем через 20 минут после растворения при
комнатной температуре -ь(18-25)‘’С.
Рабочий реагент .можно хранить при температуре-ь(2-8)°С не более 21 суток.
Для контроля правильности и воспроизводимости результата лабораторного анализа
рекомендуется использовать контрольные сыворотки с аттестованным по данному методу
показателем.
Тщательно закрывать флаконы с реагентами непосредственно после каждого
использовния реагентов. ^
Проведение анализа
Перед исследованием нагреть рабочий реагент до температуры -)-37°С; поддерживать
температуру -1-37“С в течение всего времени проведения исследований.
В термостатируемую кювету фотометра (температура -Ь37°С) внести 2,5 мл рабочего
реагента и 0,1 мл сыворотки крови, тщательно перемещать, включить секундомер. Через 2
минуты измерить исходную оптическую плотность пробы против воздуха при длине волны 340
нм. Измерение оптической плотности повторить три раза с интервалом в 1 минуту.
Расчёты
Определить среднее арифметическое значение изменения оптической плотности опытной
пробы за 1 минуту по данным трех измерений (Д Е /мин).
Расчёт активности креатинкиназы (А, Е/л) провести по формуле:
А = А Е/минх4127,
где: А Е /мин - среднее арифметическое значение изменения оптической плотности
пробы за 1 минуту, ед. опт. плотн.;
4127 - фактор пересчета для выражения активности креатинкиназы в Е/л.
Условия хранения, транспортирования и эксплуатации изделия
Условия хранения.
Хранение наборов в упаковке предприятия-изготовителя должно производиться при
температуре -1-(2-8)°С в холодильных камерах или в холодильниках, обеспечивающих
регламентированный температурный режим, в течение всего срока годности. Допускается
хранение набора при температуре до -f25°C не более 2 недель.
Срок годности набора - 12 месяцев.
Условия транспортирования.
Транспортирование наборов должно производиться всеми видами крытого транспорта в
соответствии с требованиями и правилами, принятыми на данном виде транспорта.
Транспортирование изделий должно осуществляться в термоконтейнерах одноразового
38022
28.06.2016