Тест-система иммуноферментная для выявления антител к чумному микробу (ИФА-Ат-Ф1 Yersinia pestis) по ТУ 9388-041-01898109-2011 — инструкция и характеристики
Открытые закупки, где изделие проходит ТЗ
Сейчас открытых закупок, где изделие полностью проходит ТЗ, нет; список обновляется каждый день.
Построчная сверка ТЗ с характеристиками этого изделия и все закупки под ваши товары — в кабинете, 7 дней бесплатно.
Попробовать бесплатно
Текст инструкции: технические характеристики
--- стр. 1 --- t л •г УТВЕРЖДЕНА Приказом Росздравнадзора 20 г. №от ДАЮ» УЗ РосНИПЧИ «Микроб» ;6ра Кутырев В.В. 20 г. ИНСТРУЩНЯ<^ по ПРИМЕНЕНИЮ ТЕСТ-СИСТЕМЫ ИММУНОФЕРМЕНТНОЙ ДЛЯ ВЬЫВЛЕНИЯ АНТИТЕЛ К ЧУМНОМУ МИКРОБУ (ИФА-Ат-Ф! YE R SIN IA P E S T IS ) х , 1. НАЗНАЧЕНИЕ «Тест-система иммуноферментная для выявления антител к чумному микробу (ИФА-Ат-Ф1 Yersinia p estis)» , далее - тест-система «ИФА-Ат-Ф1 Yersinia p e stis» , предназначена для выявления антител к капсульному антигену фракции 1 (Ф 1) чумного микроба в сыворотке крови людей, вакцинированных чумной вакциной, сыворотках, суспензиях крови и смывах с органов грудной полости потенциальных носителей чумы - представителей отряда Rodentia методом иммуноферментного анализа (ИФА). 2. ХАРАКТЕРИСТИКА НАБОРА 2.1 Принцип действия. В тест-системе «ИФА-Ат-Ф1 Yersinia p e stis» реализуется принцип непрямого варианта ИФА. При проведении анализа содержащиеся в исследуемом образце специфические анти-Ф1 антитела связываются с гомологичным антигеном, предварительно иммобилизованном на поверхности лунок полистиролового планшета для ИФА. Для выявления образовавшегося комплекса «антиген-антитело» применяется меченный пероксидазой стафилококковый белок А, обладающий способностью связываться с иммуноглобулинами класса IgG человека и ряда млекопитающих, включая представителей отряда Rodentia. Регистрацию реакции осуществляют после добавления субстратной смеси, содержащей перекись водорода и 2,2'-azino-bis-(3-ethylbenzthiazoline-6-sulfonic acid), diammonium salt (ABTS). При этом в присутствии пероксидазы происходит образование стабильного катион-радикала ABTS, придающего раствору зелено-голубую окраску с максимумом поглощения при длине волны 405 нм. 2.2 Состав набора. Компонент Описание ч Количество 1 2 3 ФСБ (фосфатно-солевой буфер) порошок белого цвета, состоящий из калия фосфорнокислого однозамещенного КН 2РО 4, калия фосфорнокислого двузамещенного К2НРО 4, натрия хлорида NaCl 1 пробирка --- стр. 2 --- Лактальбумин порошок кремового цвета, представляющий собой молоко сухое обезжиренное 1 пробирка Конъюгат Белок А* аморфная масса коричневатого цвета, представляющая собой белок АJ стафилококковый, конъюгированный с пероксидазой хрена, лиофилизированный 1 пробирка Глицерин вязкая прозрачная жидкости 1 пробирка Tween-20 вязкая слегка желтоватая жидкость 1 пробирка Кислота лимонная порошок белого цвета 1 пробирка Натрия цитрат порошок белого цвета 1 пробирка ABTS (2,2'-azino-bis-(3- ethylbenzthiazoline-6-sulfonic acid), diammonium salt порошок бледно-зеленого цвета 1 пробирка Г идроперит таблетка белого цвета 1 шт. Положительный контрольный образец (ПКО-Ат-Ф!) аморфная масса желтоватого цвета, представляющая собой иммуноглобулины мыши инбредной линии BALB/c, гипериммунизированной капсульным антигеном Ф1 чумного микроба, выделенные из асцитической жидкости, лиофилизированные 1 пробирка Планшеты полистироловые для иммуноферментного анализа однократного применения, обработанные лунки планшета прозрачные, без видимых следов вещества 2 шт. Тест-система «ИФА-Ат-Ф1 Yersinia pestis» рассчитана на проведение: 1) анализа в дубликатах 92 неизвестных образцов и 2 контрольных образцов, всего 192 определений (при исследовании проб, разведенных до диагностического титра, с целью обнаружения антител к Ф1 Yersinia pestis и постановкой положительного (1 лунка) и отрицательного (3 лунки) контролей на каждом планшете); 2) анализа 22 неизвестных образцов (с титрованием по короткому ряду - 8 разведений) и 2 контрольных образцов (для установления фактического значения титра специфических антител в образце). 3. АНАЛИТИЧЕСКИЕ И ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ Специфическая активность. Тест-система должна вьывлять специфические антитела класса IgG к капсульному антигену Ф1 Y. pestis в сыворотке крови вакцинированных чумной вакциной людей в диагностическом титре 1/80 и более. Тест-система не должна давать положительных результатов с сывороткой крови невакцийиро. людей в титре 1/80 и более. Тест-система должна вьывлять специфические антитела кл; антигену Ф1 Y. pestis в биологических антителосодержащих ж: отряда Rodentia в диагностическом титре 1/320 и боледд’ йесщй: ПО ЭКСПЕР И ПРОИЗВОДСТ А- к. НИКИФОРОВ --- стр. 3 --- (со положительных результатов с биологическими жидкостями представителей отряда Rodentia, не содержащими соответствующие антитела, в разведении 1/320 и более. 4. МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ . 4.1 Использование тест-системы «ИФА-Ат-Ф1 Yersinia pestis» с истекшим сроком годности недопустимо. Уничтожение тест-систем, не прошедших контроль, а также серий с истекшим сроком годности проводят в соответствии с СанПиН 2.1.7.2790-10. 4.2 Работу проводят в соответствии с СП 1.3.1285-03 «Безопасность работы с микроорганизмами I-II групп патогенности (опасности)», Москва, 2003 г. 5. ОБОРУДОВАНИЕ И МАТЕРИАЛЫ* ' - Наименование Обозначения документации, производитель 1 ' 2 Электронные или механические дозаторы переменного объема одноканальные (2-20, 20-200 мкл) и многоканальный (30-300 мкл). «Biohit», Финляндия Штатив-подставка для дозаторов «Хеликон», Россия Наконечники универсальные для дозаторов переменного объемом с аэрозольным барьером до 20 мкл «Axygen», США Наконечники универсальные для дозаторов переменного объемом с аэрозольным барьером до 200 мкл «Axygen», США Штатив «рабочее место» для микропробирок на 0,2 мл «Хеликон», Россия Термостат Термостат суховоздушный INCUCELL 111, «ВМТ», Чехия. Диапазон термостатирования от 22 °С до 70 °С Холодильник от 2 до 8 °С с морозильной камерой не выше минус 18 °С «Атлант», Россия Емкость (для сброса отработанных расходных материалов) «Гем», Россия Посуда мерная стеклянная ГОСТ 1770-74 Фотометр Автоматический микропланшетный фотометр «Multiskan ЕХ», Китай, со свето(|ильтром 405 нм Промыватель планшет Промыватель планшет авт^^йч|^йш5ч. «Проплан», Россия ■ Бумага фильтровальная Бумага фильтроваль|^|Жош^4вваЙ\%%'|;' ГОСТ 12026-76, РоссЩ ! 1 111| Вода очищенная ФС 42-2^19-97 ' ' ПО ЭКСПБРИМЕНТАГ''^ И ПРОИЗВОДСТВЕННОЙ А. к. НИКИФОРОВ Р А Б О Т ? --- стр. 4 --- * Допускается применение оборудования и материалов другого типа, по своим характеристикам не уступающих рекомендуемым. 6. АНАЛИЗИРУЕМЫЕ ОБРАЗЦЫ . Образцами для исследования служат сыворотки крови вакцинированных чумной вакциной людей, сыворотки, суспензии крови, смывы с органов грудной полости грызунов, взятые непосредственно перед исследованием или хранившиеся не более 6 ч в холодильнике при температуре (5+3) °С либо не более 14 суток в замороженном состоянии при температуре минус (18+2) °С, а также образцы антителосодержащего материала от животных высушенные на фильтровальной бумаге, пропитанной натрия мертиолатом. ' - Отлов живых зверьков, отбор проб биологического материала и их транспортировка в лабораторию для исследования проводят в соответствии с СП 1.3.1285- 03 «Безопасность работы с микроорганизмами I-II групп патогенности», СП 1.2.036-95 «Порядок учета, хранения, передачи и транспортирования микроорганизмов I-IV групп патогенности», МУ 4.2.2039-05 «Техника сбора и транспортирования биоматериалов в микробиологические лаборатории». Транспортировка проб биологического материала в лабораторию для исследований проводится при температуре от плюс 2 до плюс 8 °С в течение 6 часов. После проведения предварительной обработки проб допускается их транспортировка при температуре от минус 16 до минус 20 °С в течение 14 суток. 6.1 Получение сыворотки крови. Для получения сыворотки кровь вьщерживают в термостате при температуре плюс 37 °С в течение 30 минут. Затем центрифугируют при 1000 об/мин (g ~ 200) в течение 10 мин или помещают в холодильник при температуре плюс (5±3) °С на 1-2 часа. Образовавщуюся сыворотку аккуратно отсасывают пипеткой, не допуская попадания эритроцитов. 6.2 Получение суспензии крови животных. Суспензии крови получают из краевой вены уха или хвостовой вены в количестве 18 мкл с помощью полуавтоматического дозатора со сменными наконечниками. Материал переносят в стеклянные или пластиковые пробирки с 2 мкл 3,8%-НОГО раствора цитрата натрия (соотношение 1/9). Аккуратно перемешивают покачиванием до полного смешивания с антикоагулянтом. 6.3 Приготовление смыва с органов грудной полости. Кожу отделяют от грудины животного, надрезают окологрудинные кости, удаляют грудину и легкие. Затем рассекают сердце и крупные сосуды. В грудную полость мерно вливают забуференный физиологический раствор в соотношении 1/2 к полнившемуся объему жидкости после рассечения органов грудной полости и перемешивают. Получивш^п^са^жидкость переносят в пробирку и готовят разведение 1/10. 6.4 Обеззараживание материала. Материал от людей обеззарг Сыворотки и суспензии крови, смывы с органов грудн| ЗАМ. ДИРЕК ПО ЭКСПЕРИМ И ПРОИЗВОДСТВ А- к Н и к и ф о р о в --- стр. 5 --- обеззараживают добавлением натрия мертиолата до конечной концентрации 1/10000 с последующим прогреванием их при температуре (56+1) °С в течение (30+1) мин. 6.5 Приготовление высушенных образцов крови. Для нанесения проб суспензии крови используют фильтровальную бумагу, разрезанную на квадраты 2x2 см, пропитанную натрия мертиолатом в концентрации 1/1000 и высушенную. В центр квадрата наносят 0,2 мл исследуемой крови и высушивают на воздухе. Обеззараживание наступает после экспозиции в течение 60 мин при температуре (20+2) °С, после чего образцы могут быть использованы для анализа. Перед исследованием кусочек бумаги помещают в пробирку и заливают 2 мл 0,9%-ного раствора натрия хлористого, что соответствует разведению образца 1/10. После экспозиции в течение (35+5) мин при температуре (20+2) °С надосадочная жидкость готова для исследования. » . При работе с мелкими грызунами для нанесения проб суспензии крови можно использовать пропитанную натрия мертиолатом и высушенную фильтровальную бумагу, разрезанную на квадраты 1x1 см. В центр квадрата наносят 10 мкл пробы крови. После экспозиции в течение 60 мин при температуре (20+2) °С кусочек бумаги помешают в пробирку и заливают 100 мкл 0,9% раствора натрия хлорида, что также соответствует разведению образца 1/10. После экспозиции в течение (35+5) мин при температуре (20+2) °С надосадочная жидкость готова для исследования. Высушенные образцы крови могут храниться при температуре (20+2) °С в течение 30 суток. В течение этого срока они пригодны для исследования с применением тест- системы «ИФА-Ат-Ф! Yersinia pestis». 7. ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА 7.1 Приготовление рабочих растворов. Тест-систему извлекают из холодильной камеры. ФСБ - сухую навеску растворяют в 500 мл воды очищенной (например, дистиллированной). Раствор хранят в холодильнике при температуре (5+3) °С в течение 7 суток. Лактальбумин - сухую навеску смешивают с 0,5 мл приготовленного ФСБ и тщательно перемешивают стеклянной палочкой до получения однородной массы, которую переносят в мерный сосуд и доводят объем раствора до 30 мл фосфатно-солевым буфером. Перемешивают в течение 1-2 минут. Раствор хранят в холодильнике при температуре (5+3) °С в течение 2 суток. При необходимости более длительного хранения (до 2 нед) раствор лактальбумина помещают в морозильную камеру при температуре (18+2) °С. Размораживают перед проведением анализа. Конъюгат Белок А* - сухое вещество расхЬоряют добавлением^„51^Ш^воды очищенной, аккуратно перемешивают и переносят весь полученный содержащую глицерин. Тщательно аккуратно перемещивают полученный объем обратно в пробирку с этикеткой «Конъюгат Бело получают концентрированный раствор конъюгата, который хранят температуре минус (18+2) °С. ЗАМ. ДИРЕКТОРА ПО ЭКСПЕРИМЕНТАЛЫ И ПРОИЗВОДСТВЕННОЙ А. К-НИ КИФ О РО В