Набор реагентов для выявления ДНК возбудителя туляремии методом полимеразной цепной реакции с учетом результатов в режиме реального времени (ГенТул - индикация - РГФ) по ТУ 9398-049-01898109-2014 — инструкция и характеристики
Открытые закупки, где изделие проходит ТЗ
Сейчас открытых закупок, где изделие полностью проходит ТЗ, нет; список обновляется каждый день.
Построчная сверка ТЗ с характеристиками этого изделия и все закупки под ваши товары — в кабинете, 7 дней бесплатно.
Попробовать бесплатно
Текст инструкции: технические характеристики
--- стр. 1 --- ^^^'ек^ор^ФКУЗ РосНИПЧИ «Микроб» ^Фоспо-^^да^зора; j • - К у т ы р е в В . В . V - ■ 2 ( h ^ . ^ ' ч * * ' ' с > , . • ' С ' у / у x ' * ” ИНСТРУЩ|ЙЯ " ' по ПРИМЕНЕНИЮ НАБОРА РЕАГЕш;ОВДЛЙ ВЫЯВЛЕНИЯ ДНК ВОЗБУДИТЕЛЯ ТУЛЯРЕМИИ МЕТОДОМ ПОЛИМЕРАЗНОЙ ЦЕПНОЙ РЕАКЦИИ С УЧЕТОМ РЕЗУЛЬТАТОВ В РЕЖИМЕ РЕАЛЬНОГО ВРЕМЕНИ (ГЕНТУЛ - ИНДИКАЦИЯ - РГФ) 1. НАЗНАЧЕНИЕ Набор реагентов для выявления ДНК возбудителя туляремии методом полимеразной цепной реакции с учетом результатов в режиме реального времени (ГенТул - индикация - РГФ), далее - набор реагентов «ГенТул - индикация - РГФ», предназначен для выявления ДНК возбудителя туляремии в клиническом, биологическом материале и объектах окружающей среды методом полимеразной цепной реакции с гибридизационно- флуоресцентным учетом результатов в режиме реального времени. 2. ОБЛАСТЬ ПРИМЕНЕНИЯ Область применения набора - клиническая лабораторная диагностика, эпидемиологический мониторинг. Набор реагентов может быть использован в учреждениях, имеющих Лицензию на деятельность в области использования возбудителей инфекционных заболеваний человека и животных I-IV групп патогенности, стационарных и мобильных лабораториях, имеющих санитарно-эпидемиологическое заключение на проведение работ с микроорганизмами I-IV групп патогенности. 3. ТРЕБОВАНИЯ К ПЕРСОНАЛУ, УЧАСТВУЮЩЕМУ В ВЫПОЛНЕНИИ ИССЛЕДОВАНИЙ Исследования могут выполнять специалисты не моложе 18 лет с высщим и средним медицинским, биологическим или иным образованием, окончившие соответствующие курсы специальной подготовки с освоением методов безопасной работы с патогенными биологическими агентами (ПБА) I-II групп патогенности. 4. ПРИНЦИП МЕТОДА Выявление ДНК возбудителя туляремии методом полимеразной цепной реакции с учетом результатов в режиме реального времени основано на амплификации фрагмента iglBC генов Francisella tularensis с образованием флуоресценции по каналу КОХ. проведение анализа включает два основных этапа: выделение ДНК из проб клинического материала, амплификация участка ДНК возбудителя туляремии на приборе типа Rotor Gene и регистрация с помощью программного обеспечения кривых флуоресценции. Амплификация фрагмента ДНК происходит в буферном растворе за счет праймеров, комплементарных последовательности iglBC генов туляремийного микроба, олигонуклеотидного зонда типа TaqMan с флуоресцентными метками ROX-BHQ2, смеси нуклеотидов (дНТФ), фермента Taq ДНК-полимеразы. Все компоненты, за исключением фермента, содержаться в ПЦР-смеси-1 и ПЦР-смеси-РГФ. Образование флуоресцентного сигнала происходит за счет освобождения флуоресцентных меток при расщеплении зонда ферментом Taq ДНК-полимераза (5’-экзонуклеазная активность). С каждым циклом ПЦР --- стр. 2 --- число свободных флуоресцентных меток экспоненциально возрастает, что приводит к повышению уровня флуоресценции в пробирке. 5. ХАРАКТЕРИСТИКА НАБОРА ivoMuuncni Реактив Описание Объем (мл) Количество ПЦР-смесь-1 Смесь праймеров, дНТФ и натрия азида, сухая, в виде сиреневатого осадка; после растворения - прозрачная бесцветная жидкость 0,06 5 пробирок ПЦР-смесь- РГФ прозрачная фиолетовая жидкость, содержащая Трис-НС1; калия хлорид; магния хлошд; Tween-20, глицерин 0,6 1 пробирка Растворитель прозрачная бесцветная жидкость, представляющая собой Н 2О, свободную от нуклеаз 0,6 1 пробирка TaqAHK- полимераза прозрачная бесцветная жидкость, представляющая собой фермент с активностью 5 ед/мкл 0,012 1 пробирка ТЕ-буфер прозрачная бесцветная жидкость, содержащая трис-НС1; Naa-ЭДТА 5,0 2 пробирки ПКО ДНК F. tularensis препарат ДНК F. tularensis, сухой, в виде следа от высушенной капли на дне пробирки; после растворения — прозрачная бесцветная жидкость 0,1 3 пробирки Набор реагентов «ГенТул - индикация - РГФ» рассчитан на 60 определений с учетом контрольных образцов. 6. ОБОРУДОВАНИЕ И МАТЕРИАЛЫ*: Наименование Основные характеристики или обозначения документации, производитель Амплификатор типа RotorGene Амплификатор «RotorGene 3000», «RotorGene 6000», «RotorGene Q», «Qiagen», Германия Ламинарный бокс биологической безопасности класс ПВ Ламинарный бокс биологической безопасности класс II БАВп-«Ламинар-С-1,2», «Ламинарные системы», Россия ПЦР-бокс Бокс абактериальной воздушной среды для работы с ДНК-пробами (ПЦР-бокс) при проведении ПЦР-диагностики БАВ-ПЦР- ’’Ламинар-С" «Ламинарные системы», Россия Микроцентрифуга-встряхиватель Микроцентрифуга-встряхиватель «1Э1А-2», «Биоком», Россия Термостат твердотельный Термостат твердотельный от 25 до 100 G, Теомо 24-15. «Биоком», Россия. Микроцентрифуга настольная Микроцентрифуга на 13400 об/мин "Mini Spin" "Eppendorf, Германия Отсасыватель медицинский Отсасыватель медицинский "ОМ-Г’ ОАО "Утес", Россия Термостат твердотельный с функцией 1 охлаждения термостат твердотельный с функцией охлаждения от 4 до 120 °С, «Биоком», Россия 2 --- стр. 3 --- 1озатор 0.5-10 мкл Biohit, Финляндия Дозатор 10-100 мкл Biohit, Финляндия 1озатор 20 - 200 мкл Biohit, Финляндия Дозатор 100 — 1000 мкл Biohit, Финляндия Лтатив-подставка для дозаторов Штатив-подставка универсальная на Россия для дозаторов. дозаторов «Хеликон», Штатив «рабочее место» для иикропробирок на 0,2 мл_______ [Штатив «рабочее место» микропробирок на 1,5 мл для Холодильник от 2 до 8 ®С с морозильной камерой не выше минус 18°С__________ Штатив «рабочее место» для микропробирок на 0.2 мл. 10^20 мест, «Хеликон», Россия Штатив «рабочее место» для микропробирок на 1,5 мл, 5x10 мест с увеличенным расстоянием между лунками, «Хеликон», Р о с с и я __________________________ «Атлант», Россия Наконечники универсальные для дозаторов переменного объемом с аэрозольным барьером до 10 мкл_ ФСЗ 2009/05025 «Axygen», США Наконечники универсальные для дозаторов переменного объемом с аэрозольным барьером до 100 мкл ФСЗ 2009/05025 «Axygen», США 1аконечники универсальные для шзаторов переменного объемом с 1Эрозольным барьером до 200 мкл Даконечники универсальные для шзаторов переменного объемом с 1эрозольным барьером до 1000 мкл Ликроцентрифужные пробирки объемом 1,5 мл ФСЗ 2009/05025 «Axygen», США ФСЗ 2009/05025 «Axygen», США ФСЗ 2012/11892 «Axygen», США Пробирки для ПЦР объемом 0,2 мл с плоской крышкой_______________ ФСЗ 2012/11892 «Axygen», США Одежда одноразовая медицинская из нетканого и полимерного материалов Перчатки медицинские диагностические одноразовые. Часть 1. Спецификация на перчатки из каучукового латекса или раствора РЗН 2013/668 ГОСТ Р 52239-2004 примечание: допускается применение оборудования другого типа, по своим характеристикам не уступающего рекомендуемому. 7. УСЛОВИЯ ТРАНСПОРТИРОВАНИЯ, ХРАНЕНИЯ И ЭКСПЛУАТАЦИИ ”наб^*реагентов «ГенТул - индикация - РГФ» должен транспортироваться всеми видами крытых транспортных средств в соответствии с требованиями ГОСТ 15150 и правилами, установленными для каждого вида транспорта. Условия транспортирования - при температуре от плюс 2 до плюс 8 “С не более 2 суток, при температуре от минус 16 до минус 20 °С - в течение срока годности. Условия хранения - ПЦР-смесь-1, ПЦР-смесь-РГФ, Растворитель, ТЕ-буфер, ПКО ДНК F. tularensis при температуре от плюс 2 до плюс 8 “С, Taq ДНК-полимераза - при температуре от минус 16 до минус 20 “С. Срок годности - 9 месяцев. ^ Условия эксплуатации набора реагентов «ГенТул - индикация - РГФ» при температуре от 18 до 25 °С. 2 --- стр. 4 --- суспензии культур S. МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ - РГФ>> с истекшим срокомИспользование набора реагентов «ГенТул - индикация ГОДНОСТИ недопустимо. ГП 1 1118 - 13 «БезопасностьРаботу проводят в соответствии с требованиями ^1.33118 Га?оть! ™работе с материалом, содержащим микроорганизмы I-IV групп патогенности). 9. анализируемые ОБРАЗЦЫ Материалом для исследования служат; - пробы чистых культур микроорганизмов: бактериальные - ”z 'Г н Г .г х :г ? “ р “ ^ ^ »»е р —.—" - пробьГбТо’ лога™^^^ органы грызунов, и наземных хищников; эктопаразиты (блохи, клещи, комары); остатки пищи хищных птиц, их погадки, экскременты грызунов и хищников, - пробы объектов окружающей среды; почва, вода , герметично Материал для исследования забирают в стерильные емкости с гермети завинчивающимися крышками в соответствии с требованиями СП 13.3118 . „ р о . — . , . ™ 5 H E ~ = V p = - x = ^ транспортировка при температуре от минус 16 до минус 20 С в течен ут е о с у д е Д ь д а ^ ж и „ Г нрТ Г о шТ оль ' S " X cth’ длительного хранения и (или) i ';;» г :.к Г Г р о ” микроба или подозрительных изолятов готовят суспензии в 2 мл 0,9 ^ Р^™°Р^ Ч истого по о-фаслевому стандартному образцу мутности 10 единиц ФГБУ «НЦЭСМШ ЮГП 42 28 85 П (ЮМЕ)) что соответствует 5x10^ м.к./мл для F. tularensis. Затем РУСРР..И» . О.Р% Р*™ рр «” Р"« хлористого до конечной концентрации 1x10 м.к./мл. 9.2. Подготовка проб клинического материала: '•"■'■’'С ь у людей берут из локтевой вены в количестве 4,5 мл с помощью однор^овой иглы (диметр 0,8-1,1 мм) и специальной цитратом натрия, или -рильным ш п р и ц е ™ Г к Г н о ^ п е Т е = Г п о к а 1 ^ ^ ^ ^ ^ ^ ^ ^ ^ ^ е м е ™ . ^ аитикоа^лянтом. Затем выполняют этапы обеззараживания материала и выделения ДН . ^ --- стр. 8 --- речение 5-10 с для осаждения капель со стенок пробирки. После растворения ПКО ДНК tularensis хранят при температуре минус 20 '’С. ).3.2. Подготовка реакционной смеси т р f^vrhen ич Из холодильной камеры извлекают ПЦР-смесь-1, ПЦР-смесь-РГФ, ТЕ-буфер, из орозилшой к1ры извлекает Taq ДНК-полимеразу и ПКО ДНК Пробирку ^ ПКО ДНК F. tularensis полностью оттаивают, перемешивают на икроцентрифуге/встряхивателе и центрифугируют при 3000-5000 об/мин в течение 5-10 лпя псажления капель со стенок пробирки. Определяют количество реакций в эксперименте из расчете; количество сследуемых проб, ОКБ, положительный контроль (К-ь) и отрицательный контроль ( -). Отбирают необходимое количество пробирок «ПЦР-смесь-1>> из расчета, что одна робирка р^считана на 12 реакций. В пробирки добавляют 60 мкл Растворителя L pL вaю т при комнатной температуре в течение 20-30 с, тщательно икроцентрифуге/встряхивателе в течение 5-7 с и центрифугируют при 3000^000 об/мин течение 5-10 с для осаждения капель со стенок пробирки. Разведенную ПЦР-смесь-1 ранят при температуре плюс 4 не более 2 месяцев. В отдельной м^ропробирке объемом 0,6 мл или 1,5 мл готовят реакционную смесь Реагент Объем, мкл ПЦР-смесь-1 5 ПЦР-смесь-РГФ 10 Taq ДНК- полимераза 0,2 смесь тщательно перемешивают наПодготовленную икроцентрифуге/встряхивателе. икропртбирок объемом 0,2 мл. Затем в пробирки вносят по 15 мкл подготовленной гакционной смееи (п. Ю.З.2.). „ Затем в пробирки вносят по 10 мкл ДНК из исследуемых проб « ^ В . В икронробирку с отрицательным контролем амплификации микропробирку с положительным контролем амплификации (К-ь) - 10 мкл ПКО ДН ilarensis. 0. 3.4. Проведение термоциклирования * г- Подготовленные микропробирки помещают в термоциклер типа RotorOene. , с приором «Rotor-Gene» 6000- программу «Rotor-Gene 6000» версии 1.7 (build 67) или ;ше Г и описании программы термины для каждой версии программы представлены дедуюп^м образом: для прибора «Rotor-Gene» 3000 / для шограммы «Rotor-Gene» 6000 / для русскоязычной версии программы «Rotor-Gene» 6000. [ Нажимают кнопку «Келу»/«Новый» в основном меню программы. i; “ ищемся окне выбирают меню «Абуапсеб»/«Детальньш мастер». Нажимают ! М^ра^Тип'рото™ ^ Roton>/«36-nyH04Hbril ротор». Ставят отметку в окне рядом с надписью «No Domed 0.2 ml Tubes»/«Locking ring attached»/«Konbno закреплено». 1. Нажимают кнопку «Кех1»/«Далее». „ 5 Выбирают объем реакционной смеси; Reaction volume/Объем реакции - 25 ^ ппибопа «Rotor-Gene 6000» должно быть активно (отмечено галочкой) окно «15 р1 5?"о11ш е>Л<15 pL объем масла/воска». (Если галочка не стоит в окне по умолчанию, ставят ее с помощью мышки). 6. Нажимают кнопку «Кех 1»/«Далее». --- стр. 9 --- в верхней части окна нажимают кнопку «Edit ргоШоЛсРедакгор профиля». Задают следующие параметры эксперимента. 8.1 .НоЫ/Удерж. температуры 95 °С - 5 мин 8.2.СусИпЕ/Циклирование 95 С - 30 с оО L- - Зи с 72 °С - 30 с Cycle repeats/Цикл повторить - 10 times/раз. 8 3 СусИпе2/Циклирование2 95 °С - 20 с ■ ■ 56 °С - 20 с - Детекция 72°С-20 с Cycle repeats/Цикл повторить - 35 times/раз. Флюоресценцию измеряют при 56 °С (во втором блоке циклирования) по каналу ROX/Orange. 8.4. Нажимают кнопку «ОК»/«Да». кнопку «Calibrate»/«Gain » о aL « и .,ш сигнста, нажимают кнопку «С1ояе»/«Закрыть». Н^имают кнопку «Next»/«flanee». 0. Запускают амплификацию кнопкой «Start гип»/«Старт». 1 Дают название эксперимента и сохраняют его на диске (в этом фаи у^у ' автоматически сохранены результаты данного эксперимента). В процессе работы амплификатора или по окончании его , Г = — . леню Samples/Образцы как ипкпохупШеизвестныи. 11. РЕГИСТРАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ ^ ИОХ/Огапее- «диап^иоп»/«Количественный», выбирают в меню «Cycling . Orange», нажимают кнопку «81ю\у»/«Показать». значение NTCthreshold/Hopor Фона-nO(NTC 5 А выставить 5 В меню «СТ Са1си1а1юп»/«Вычисление СТ» (в правой части ок ; 6, « . . / . к . » ™ . » » . Р=.У.ь»™-) значения (Ct). --- стр. 10 --- ■ P ~ a x f 7 ч и ь ™ н а основании наличия (или отсутствия) пересечения кривой ;” р с :;гГ с9 ^ = I. Если значени ( ) ’ более 32 результат считают положительным, следовании получено значен ( ) » требуется повторить весь анализ,ри повторном получении значение (Ct) более 32, треоуетсм ни п ачиная с этапа подготовки проб. ппиступают только в случае прохождения■ учету результатов исследуемых проб приступают тол у оложительн^ (К+), отрицательного (К-) контролен амплификации и ОКБ. Контроли Значения порогового цикла (Ct) по каналу ROX (Orange) К+ <32 К- Отсутствие флуоресценции ОКБ Отсутствие флуоресценции Пробы 1сследуемые пробы Значения порогового цикла (Ct) по каналу ROX (Orange) <32 Отсутствие флуоресценции Положительный/ В пробе выявлена ДНК F. tularensis Отрицательный/ В пробе ДНК F. tularensis не обнаружена__________ S АНАЛИТИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА д а " ^ хЮ^м.к./мл. « т к „ « .о р — ругих родов суспензиях концентрацией 1x10 м.к./мл. 3.3. Диагностическая чувствительность доверительной Диагностическая чувствительность - не менее ^ ^ ^ . ^ опо/ Ппи исследовании 208 положительных проб (124 прооыероятностью 90/о. При исследовании клинического, биологического с о д е Р ~ К Karens, в коннентраннн я10^м.к./мл, положительный результат получен в 208 случаях. 13.4. Диагностическая специфичность ловеоительной вероятностью юложительный ответ получен в 20 уч ’ ^ конпентрации 1x10'^ м.к./мл,образцов, содержащих гетерологичные микроорганизмы в концентрации отрицательный результат в ПЦР получен во всех 60 случаях. 10 --- стр. 11 --- БЕЗОПАСНАЯ УТИЛИЗАЦИЯ „ябооа или наборов реагентов с Уничтожение неиспользованных комп СанПиН 2 1 7.2790-10. ■екшим сроком годности проводить в соответстви ГАРАНТИИ И ИНФОРМАЦИЯ О П Р О И З № ^ ^ я в л е Г д Г в Х д = Х м ™ м — Г и П а н с н ^ о ^ ^ ^ ^ ^ ^ ^ ^ “ эксплуатации в течение указанного срока 5НОСТИ. оттяцоохоанения «Российский научно- Федеральное казенное «Микроб» Федеральной службы по надзору следовательский противочумный ^ человека (ФКУЗ РосНИПЧИ с.:сW ™ .« (.« - .> я - 1М . директора по экспериментальной и роизводственной работе ФКУЗ осНИПЧИ «Микроб» ^еральный директор )0 «ВЫМПЕЛ-МЕДЦЕНТР» А.К. Никифоров Ю.Н. Егоров И