Тест-система иммуноферментная для определения продукции холерного токсина штаммами Vibrio cholerae (ИФАХолХТ-М) по ТУ 9398-052-01898109-2015 — инструкция и характеристики
Открытые закупки, где изделие проходит ТЗ
Сейчас открытых закупок, где изделие полностью проходит ТЗ, нет; список обновляется каждый день.
Построчная сверка ТЗ с характеристиками этого изделия и все закупки под ваши товары — в кабинете, 7 дней бесплатно.
Попробовать бесплатно
Текст инструкции: технические характеристики
--- стр. 1 --- ИПЧИ «Микроб» тырев В.В. 20^. ИНСТРУ1 по ПРИМЕНЕНИЮ ТЕСТ-СИСТЕ1'Й*^ м1У1У^^Й:РМЕНТНОЙ для ОПРЕДЕЛЕНИЯ ПРОДУКЦИИ Х^Ш ЭДвгО ТОКСИНА ШТАММАМИ га/г/О СЯОС£'/гЛ^ (ИФАХолХТ-М) по ТУ 9398-052-01898109-2015 1. НАЗНАЧЕНИЕ «Тест-система иммуноферментная для определения продукции холерного токсина штаммами Vibrio cholerae (ИФАХолХТ-М) по ТУ 9398-052-01898109-2015», далее - тест- система «ИФАХолХТ-М» предназначена для выявления холерного токсина в пробах кли нического материала, определения продукции холерного токсина (ХТ) культурами холер ных вибрионов, выделенных из клинического материала и объектов окружающей среды, и дифференциации токсигенных штаммов V . cholerae от нетоксигенных методом иммуно- ферментного анализа с применением моноклональных антител. Область применения тест-системы - клиническая лабораторная диагностика, эпи демиологический мониторинг. Тест-система может быть использована в учревдениях, имеющих Лицензию на деятельность в области использования возбудителей инфекцион ных заболеваний человека и животных 1-IV групп патогенности, стационарных и мобиль ных лабораториях, имеющих санитарно-эпидемиологическое заключение на проведение работ с микроорганизмами 1-1V групп патогенности. 2. ХАРАКТЕРИСТИКА ИЗДЕЛИЯ Компоненты тест-системы являются одноразовыми. В состав тест-системы входят 12 реагентов: Компонент Описание Объем/масса Количество № 1 Навеска среды АК1 - порошок кремового цве та, после растворения - жидкость светло- желтого цвета 12,12г 2 пробирки №2 Фосфатно-солевой буфер (ФСБ) - таблетка белого цвета, после растворения - жидкость прозрачного цвета 1,01 г 5 пакетов №3 Молоко сухое обезжиренное (лактальбумин) - порошок кремового цвета, после растворения - жидкость белого цвета 0,0113 г 4 пробирки № 4 Конъюгат пероксидазный иммуноглобулино вый моноклональный (конъюгат МКАХТ) - аморфная масса белого цвета, представляю щая собой высушенные моноклональные им муноглобулины ХТ, конъюгированные с пе- роксидазой хрена, после растворения - жид кость желтого цвета 0,02 мл 1 пробирка №5 Глицерин - вязкая прозрачная жидкость 0,025 мл 1 пробирка №6 Т\¥ееп-20 - вязкая слегка желтоватая жидкость 0,002 мл 4 пробирки № 7 Кислота лимонная - порошок белого цвета, после растворения - прозрачная жидкость 0,0225 г 4 пробирки --- стр. 2 --- №8 Натрия цитрат - порошок белого цвета, после растворения - прозрачная жидкость 0,025 г 4 пробирки №9 ABTS (2,2'-azino-bis-(3-ethylbenzthiazo-line-6- sulfonic acid), diammonium salt - порошок бледно-зеленого цвета, после растворения - жидкость бледно-зеленого цвета 0,001625 г 4 пробирки № 10 Гидроперит - порошок белого цвета, после растворения - прозрачная жидкость 0,067 г 4 пробирки № 11 Положительный контрольный образец (ПКО- ХТ) - аморфная масса белого цвета, представ ляющая собой высушенный холерный токсин в концентрации 200 нг, после растворения - жидкость прозрачного цвета 0,1 мл 4 пробирки № 12 Планшет 12 стрипов по 8 лунок полистироло вый, для иммуноферментного анализа, одно кратного применения, обработанный. Лунки планшета прозрачные, без видимых следов вещества 96 лунок 1 шт. Тест-система «ИФАХолХТ-М» рассчитана на проведение анализа в дубликатах 47 неизвестных образцов и 2 контрольных образцов, всего 96 определений с постановкой по ложительного (1 лунка) и отрицательного (1 лунка) контролей. В основу метода положена схема сэндвич-варианта иммуноферментного анализа (ИФА). При постановке ИФА XT, содержащийся в исследуемом материале, специфически взаимодействует с моноклональными мышиными иммуноглобулинами, сорбированными в лунках планшета. Образовавшийся комплекс «антиген-антитело» выявляют с помощью конъюгата (моноклональные иммуноглобулины к XT, меченные пероксидазой хрена). Ви зуализация реакции происходит после добавления субстрат-индикаторного раствора, со держащего перекись водорода и ABTS - 2,2'-azino-bis-(3-ethylbenzthiazoline-6-sulfonic acid), diammonium salt (ABTS). При этом в присутствии пероксидазы происходит образо вание стабильного катион-радикала ABTS, придающего раствору зелено-голубую окраску с максимумом поглощения при длине волны 405 нм. При исследовании культур холерных вибрионов обязательно проводится предвари тельное их культивирование в среде AKI для индукции XT в бульон. Пробы биологиче ского материала могут быть исследованы нативными, поскольку содержат XT, продуци руемый холерными вибрионами в условиях in vivo, либо после предварительного подра щивания в бульоне AKI, способствующего увеличению количества XT в пробе, что играет важную роль при анализе материала от вибрионосителей, у которых концентрация возбу дителя может быть не выше 1,0 -10^ м.к./мл. 3. АНАЛИТИЧЕСКИЕ И ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ ИЗДЕЛИЯ Аналитическая чувствительность Тест-система должна выявлять холерный токсин, продуцируемый токсигенными штаммами V . ско1егае, в концентрации не менее 0,1 нг/мл, и дифференцировать токсиген- ные и нетоксигенные штаммы холерных вибрионов по наличию продукции холерного токсина. Аналитическая специфичность Тест-система не должна давать положительных результатов с нетоксигенными штаммами V . скокгае, лишенными продукции ХТ, а также с микроорганизмами других видов. --- стр. 3 --- Диагностическая чувствительность - не менее 99.1 % с доверительной вероятно- етью 90% . При иееледовании 270 положительных проб, содержащих холерный токсин, продуцируемый токсигенными штаммами V . cholerae (78 проб бактериальных суспензий микроорганизмов, с продукцией ХТ, и 192 пробы клинического материала, содержащих V . cholerae (ctxA+) в концентрации 1 х 10^ м.к./мл, 1x10^ м.к./мл, с продукцией ХТ, в на тивном виде и после подращивания) положительный ответ получен в 270 случаях. При дифференциации 120 проб чистых культур токсигенных и нетоксигенных штаммов V . cholerae все 120 идентифицированы верно, а именно 78 пробы - как содер жащие токсигенный штамм V . cholerae и 42 пробы - как не содержащие токсигенный штамм V . cholerae. Диагностическая специфичность - не менее 99.5 % с доверительной вероятностью 90%. При исследовании 270 положительных проб, содержащих холерный токсин, поло жительный ответ получен в 270 случаях. При исследовании 158 отрицательных проб, не содержащих холерный токсин (42 проб бактериальных суспензий V . cholerae (ctxA-) и ге терологичных микроорганизмов и 116 проб клинического материала, контаминированных V . cholerae (ctxA-) в концентрации 1 хЮ^ м.к./мл; 1 хЮ^ м.к./мл, в нативном виде и после подращивания), отрицательный ответ получен в 158 случаях. 4. МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ ПРИ РАБОТЕ С ИЗДЕЛИЕМ Исследования могут выполнять специалисты не моложе 18 лет с высшим и средним медицинским, биологическим или иным образованием, окончившие соответствующие курсы специальной подготовки с освоением методов безопасной работы с патогенными биологическими агентами (ПБА) 1-11 групп патогенности Этапы подготовки исследуемых образцов и постановки ИФА проводят согласно СП 1.3.3118-13 «Безопасность работы с микроорганизмами 1-11 групп патогенности (опасно сти)». Работа, связанная с подготовкой исследуемых образцов, проводится в боксе микро биологической безопасности II класса в противочумном костюме IV типа и резиновыми перчатками. Постановка ИФА выполняется в боксе микробиологической безопасности II класса в противочумном костюме I типа. По окончании ИФА центрифужные пробирки, наконеч ники, стрипы заполняют дезраствором и, после прохождения времени экспозиции в тече ние 24 ч, подвергаются автоклавированию, рабочие поверхности обрабатываются 1% - хлорамином, микробиологический бокс облучают ультрафиолетом (время обработки по мещения раеечитывается, исходя из объема помещения, мощности и количества ультра фиолетовых ламп). Использование тест-системы «ИФАХолХТ-М» с иетекшим ероком годности недопу стимо. Уничтожение неиспользованных компонентов теет-системы или тест-системы с истекшим ероком годноети, отноеящихея к медицинским отходам класса Г, проводить в соответствии с СанПиН 2.1.7.2790-10. 5. ОБОРУДОВАНИЕ И МАТЕРИАЛЫ, НЕОБХОДИМЫЕ ПРИ РАБОТЕ С ИЗДЕ ЛИЕМ Наименование Характеристики Фотометр Фотометр автоматический микропланшет- ный Набор полуавтоматических дозаторов пе ременного объема Набор полуавтоматических дозаторов пе ременного объема (0,5-10 мкл, 10-100 мкл, 100-1000 мкл) --- стр. 4 --- Термостат Термостат суховоздушный. Диапазон тер- мостатирования от 22 °С до 70 °С. Холодильник Холодильник от плюс 2 до плюс 8 °С с мо розильной камерой не выше минус 18°С Ламинарный бокс биологической безопас ности класс 1 1 Бокс микробиологической безопасности 1 1 класса В Паровой стерилизатор Паровой стерилизатор для стерилизации жидкостей - растворов, питательных и раз вариваемых сред, суспензий и эмульсий Наконечники универсальные для дозаторов переменного объема Наконечники универсальные для дозаторов переменного объемом с аэрозольным барь ером до 10 мкл; до 100 мкл; до 1000 мкл Центрифужные пробирки Стерильные полипропиленовые пробирки объемом 15 или 50 мл Петля бактериологическая Петля бактериологическая многократного или однократного применения Пипетки стеклянные ГОСТ 29227-91 Посуда мерная стеклянная ГОСТ 1770-74 Пробирки стеклянные ГОСТ 25336-82 Перчатки медицинские диагностические одноразовые. Часть 1. Спецификация на перчатки из каучукового латекса или рас твора ГОСТ Р 52239-2004 Маска медицинская защитная для лица Маска медицинская защитная для лица из нетканных материалов Комбинезон защитный с капюшоном Комбинезон защитный с капюшоном из нетканных материалов Вода очищенная ФС 2.2.0020.15 6. АНАЛИЗИРУЕМЫЕ ПРОБЫ Материалом для исследования служат чистые культуры холерного вибриона, выде ленные из клинического материала и объектов окружающей среды, и клинический мате риал (фекалии). Материал для исследования забирают в стерильные емкости с герметично завинчи вающимися крышками в соответствии с требованиями СП 1.3.3118 - 13 «Безопасность работы с микроорганизмами 1-11 групп патогенности», МУ 4.2.2039-05 «Техника сбора и транспортирования биоматериалов в микробиологические лаборатории», МУ 1.3.2569-09 «Организация работы лабораторий, использующих методы амплификации нуклеиновых кислот при работе с материалом, содержащим микроорганизмы 1-1У групп патогенности». Транспортирование материала в лабораторию для исследований проводят при тем пературе от плюс 2 до плюс 8 °С в течение 1 суток в соответствии с СП 1.2.036 - 95 «По рядок учета, хранения, передачи и транспортирования микроорганизмов 1-1У групп пато генности». После проведения предварительной обработки проб допускается их транспор тировка при температуре от минус 16 до минус 20 °С в течение 7 суток или в сосуде Дью ара с жидким азотом - длительно. 7. ПОДГОТОВКА КОМПОНЕНТОВ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ (АНАЛИЗА) Тщательное соблюдение описанных ниже требований позволит избежать искаже ния результатов ИФА. --- стр. 5 --- Перед проведением анализа требуется предварительная подготовка культуры хо лерных вибрионов, которая заключается в её культивировании только на среде AKI! Для приготовления растворов и проведения ИФА следует использовать чистую мерную посуду и автоматические пипетки с погрешностью измерения не более 5%. Высушенные компоненты должны быть восстановлены, как минимум, за 15 минут до их использования. После отбора необходимого количества стрипов оставшиеся сразу упаковать в па кет, поместить в холодильник от 2 до 8 °С. Раствор конъюгата в рабочем разведении готовить непосредственно перед исполь зованием. Не допускать высыхания лунок стрипов между отдельными операциями. 7.1. Приготовление ереды для культивирования V.cholerae Компонент № 1 из одной пробирки растворяют в 500 мл дистиллированной воды и переносят в 50 стеклянных пробирок по 10 мл (используются для первичного подращива ния). Компонент № 1 из второй пробирки растворяют в 500 мл дистиллированной воды и разливают по 50 или 100 мл во флаконы. Пробирки и флаконы с бульоном AKI стерили зуют при 120 °С в течение 30 мин. Подготовленные пробирки и флаконы с бульоном АК1 хранят в полиэтиленовых пакетах в холодильнике при температуре от 6 до 8 °С в течение всего срока годности тест-системы (6 месяцев). Перед началом исследования извлекают необходимое количество стеклянных про бирок с 10 мл бульона АК1, соответствующее числу исследуемых штаммов холерных виб рионов или проб биологического материала. Готовят такое же количество стеклянных пробирок или одноразовых центрифужных пробирок типа Falcon объемом 15 мл или 50 мл для вторичного подращивания. Для этого в стеклянные пробирки стерильно из флако нов с бульоном AKI переносят по 3 мл бульона, в центрифужные пробирки типа Falcon объемом 15 мл - 5 мл бульона, в центрифужные пробирки типа Falcon объемом 50 мл - 10 мл бульона. 7.2. Приготовление рабочих растворов для проведения иммуноферментного анали за. Компоненты тест-системы извлекают из холодильной камеры. Перед началом исследования готовят разведения компонента, который хранят в течение всего срока годности тест-системы (6 месяцев) при соответствующих темпера турных условиях. Для разведения компонентов готовят ФСБ. Для этого Компонент № 2 из пакета растворяют в 100 мл воды очищенной. Раствор хранят в холодильнике при температуре (5±3) °С в течение 3 суток. Приготовление концентрированного раствора конъюгата. Для этого в пробир ку с Компонентом № 4 добавляют 20 мкл воды очищенной и полностью растворяют сухое вещество. Затем аккуратно перемешивают и переносят весь полученный объем в пробирку с Компонентом № 5. тщательно перемешивают и переносят весь полученный объем об ратно в пробирку с этикеткой «Компонент № 4». Полученный концентрированный рас твор конъюгата хранят при температуре минус (18±2) °С в течение 6 месяцев. Непосредственно перед проведением исследования готовят разведения компо нентов № 3, 6-11, которые используются при подготовке рабочих растворов субстратной смеси, коньюгата и положительного контрольного образца. Одна пробирка с каждым ком понентом рассчитана на проведение исследований с 3 стрипами. Для разведения компонентов готовят ФСБ. Для этого Компонент № 2 из одного па кета растворяют в 100 мл воды очищенной. Раствор хранят в холодильнике при темпера туре (5±3) °С в течение 3 суток. --- стр. 6 --- Раствор компонента № 3. В пробирку с компонентом № 3 вносят 2,7 мл приготовленного ФСБ и тщательно перемешивают до получения однородной массы в течение 1-2 минут. Раствор хранят в холодильнике при температуре (5±3) “С в течение 3 суток. Раствор компонента № 6. В пробирку с Компонентом № 6 добавляют 0,375 мл ФСБ и тщательно перемещи- вают, не допуская образования пузырей. Раствор хранят в холодильнике при температуре плюс (5±3) °С в течение 3 суток. Раствор компонента № 7. В пробирку с компонентом № 7 вносят 2 мл воды очищенной. Раствор хранят при температуре плюс (5±3) °С в течение 3 суток. Раствор компонента № 8. В пробирку с компонентом № 8 вносят 1,7 мл воды очищенной. Раствор хранят в холодильнике при температуре (5±3) °С в течение 3 суток. Раствор компонента № 9. В пробирку с компонентом № 9 вносят 0,15 мл воды очищенной. Раствор хранят в холодильнике при температуре (5±3) °С в течение 3 суток. Раствор компонента № 10. В пробирку с компонентом № 10 вносят 0,2 мл воды очищенной и тщательно пере мешивают до полного растворения, получая 33% раствор перекиси водорода. Хранят в холодильнике при температуре (5±3) °С в течение 3 суток. Раствор компонент № 11. В пробирку с компонентом № 11 вносят 0,1 мл воды очищенной и полностью рас творяют сухое вещество. Раствор хранят в холодильнике при температуре (5±3) °С в тече ние 1 суток. При необходимости для более длительного хранения (до 6 месяцев) разве денный компонент № 11 может быть помещен в морозильную камеру при температуре (18±2) °С. Подготовка рабочих растворов конъюгата и субстратной смеси на 3 стрипа Подготовку осуществляют ех tempore. Полученные растворы не хранят. Рабочий раствор конъюгата. В пробирку с раствором Компонента № 3 добавляют 0,3 мл раствора Tween-20 и тщательно перемешивают. Непосредственно перед внесением в лунки в подготовленный раствор добавляют 0,02 мл концентрированного раствора конъюгата и еще раз тщательно перемешивают. Рабочий раствор субстратной смеси Субстратную смесь готовят сразу перед внесением в лунки. Для этого в пробирку с раствором компонента № 7 вносят в полном объеме содержимое пробирки с раствором компонента № 8. добавляют 0,1 мл раствора компонента № 9 и 0,004 мл раствора компо нента № 10. При необходимости исследования большего количества стрипов подготовку реа гентов проводят аналогично, используя другие пробирки с компонентами № 3, 6-11. 8. ПРОВЕДЕНИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ (АНАЛИЗА) 8.1. Подготовка исследуемых образцов 8.2. Подготовка агаровой культуры холерных вибрионов, выделенных из проб кли нического материала и объектов окружающей среды Три колонии (диаметр 2-3 мм) или 1/2 петли (номер 2) агаровой культуры холерных вибрионов засевают в стеклянную пробирку с 10 мл AKI для первичного подращивания и инкубируют в течение 2,5 часов при температуре (37±1)°С. Затем из этой пробирки пере носят необходимое количество подращённой культуры в зависимости от типа пробирки, в которой будет проходит вторичное подращивание (таблица). --- стр. 7 --- Тип пробирки Объем бульона AKI Объем вносимой кулътуры после первичного подращивания Стеклянная пробирка П1-16-150 (ГОСТ 25336-82) 3 0,6 мл центрифужная 15 мл 5 1,0 мл центрифужная 50 мл 10 2,0 мл Пробирки для вторичного подращивания помещают в термостат так, чтобы они находились практически в горизонтальном положении, но без касания крышки пробир ки культуральной жидкостью, и инкубируют при температуре (37±1)°С течение 16 ча сов. 8.3. Подготовка нативного клинического материала При исследовании клинического материала 1 г фекалий тщательно суспедируют в 25 мл 0,9 % раствора натрия хлористого и отстаивают в течение 10-15 мин для оседания крупных частиц. Материал может быть исследован сразу, для чего из надосадочной жид кости отбирают 0,1 мл и вносят в лунки планшета «ИФАХолХТ-М», либо после предва рительного подращивания в бульоне АК1 - 0,1 мл надосадочной жидкости засевают в стеклянную пробирку с 10 мл среды АК1 для первичного подращивания, после чего под готовку исследуемого образца выполняют, как описано выше (п.8.2.). *' 8.4. Постановка анализа. Планшет извлекают из запаянного полиэтиленового пакета. Подготавливают необ ходимое количество стрипов к работе. Оставшиеся - упаковывают в пакет и хранят при температуре (5±3) °С. В лунки планшета дозатором полуавтоматическим последовательно в дублях вносят по 0,1 мл исследуемого материала, подготовленного в соответствии с п.10.2. В качестве положительного контроля вносят 100 мкл раствора компонента № 11 в одну лунку, а в качестве отрицательного - 0,1 мл ФСБ в одну лунку. 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 А Р4 Р8 Pos В Р4 Р8 Neg С РЗ Р7 Pll D РЗ Р7 Pll Е Р2 Р6 PIO F Р2 Р6 PIO G Р1 Р5 P9 Н Р1 Р5 P9 Представленный выше протокол представляет собой пример размещения на план шете образцов: для увеличения достоверности в лунки H1-G1 вносятся дублированные образцы культуры V.cholerae после подращивания в бульоне AKI или биологический ма териал (нативный или после подращивания в бульоне AKI), таким образом, что на трех Стрипах можно разместить 11 исследуемых образцов (Р1, Р2, РЗ, Р4 и т.д.), лунки АЗ - Pos и ВЗ - Neg, положительный и отрицательный контроли, соответственно. Положительный и отрицательный контроли выполняют роли внутренних контролей для правильности те стирования, поэтому их следует использовать при каждой постановке анализа. Планшет инкубируют при температуре (37±1) °С в течение (40±5) мин. По оконча нии инкубации планшет вынимают из термостата, содержимое из лунок отбирают с по мощью многоканального дозатора и аккуратно сбрасывают в емкость для отработанных жидкостей с дезраствором, избегая образования капель (аэрозоля). 7