Набор реагентов для выявления и дифференциации штаммов возбудителя чумы основного и неосновных подвидов (отдельно алтайского) методом полимеразной цепной реакции с гибридизационно-флуоресцентным учетом результатов в режиме реального времени (ГенПест-подвид/алтай-РГФ) по ТУ 21.20.23-054-01898109-2017 — инструкция и характеристики
Открытые закупки, где изделие проходит ТЗ
Сейчас открытых закупок, где изделие полностью проходит ТЗ, нет; список обновляется каждый день.
Построчная сверка ТЗ с характеристиками этого изделия и все закупки под ваши товары — в кабинете, 7 дней бесплатно.
Попробовать бесплатно
Текст инструкции: технические характеристики
--- стр. 1 ---
РосНИПЧИ «Микроб»
Кутырев В.В.
20/Л
ИНСТРУКЦИЯ п о < п р и Ме 1 Ш ш ю *
НАБОР РЕАГЕНТОВ ДЛЯ ВЫЯВЛЕНИЯ № ДЙ Ф €^ЕНЦИАЦИ И ШТАММОВ
ВОЗБУДИТЕЛЯ ЧУМЫ ОСНОВНОГО И НЕОСНОВНЫХ ПОДВИДОВ
(ОТДЕЛЬНО АЛТАЙСКОГО) МЕТОДОМ ПОЛИМЕРАЗНОЙ ЦЕПНОЙ РЕАКЦИИ
С ГИБРИДИЗАЦИОННО-ФЛУОРЕСЦЕНТНЫМ УЧЕТОМ РЕЗУЛЬТАТОВ В
РЕЖИМЕ РЕАЛЬНОГО ВРЕМЕНИ (ГЕНПЕСТ-ПОДВИД/АЛТАЙ-РГФ)
1. НАЗНАЧЕНИЕ
«Набор реагентов для выявления и дифференциации штаммов возбудителя чумы
основного и неосновных подвидов (отдельно алтайского) методом полимеразной цепной
реакции с гибридизационно-флуоресцентным учетом результатов в режиме реального
времени (ГенПест-подвид/алтай-РГФ)», далее - набор реагентов «ГенПест-подвид/алтай-
РГФ», предназначен для качественного выявления ДНК возбудителя чумы в пробах
клинического материала (кровь, мокрота, мазок из зева, моча, пунктаты бубона,
отделяемое язв, фекалии, ликвор); биологического материала (органы, экскременты
грызунов и хищников, эктопаразиты, остатки пищи из гнезд хищных птиц, их погадки),
объектов окружающей среды (почва), культур микроорганизмов с одновременным
определением его принадлежности к основному и неосновным подвидам,
дифференциацией отдельно неосновного алтайского подвида методом полимеразной
цепной реакции с гибридизационно-флуоресцентным учетом результатов в режиме
реального времени.
Чума - острое инфекционное хорошо изученное заболевание, относящееся к
природно-очаговым зоонозным трансмиссивным заболеваниям, носителем которого
является дикие грызуны, а переносчиками - эктопаразиты. Заражение человека в
природных очагах происходит при укусе инфицированными блохами, контакте с
больными и погибшими от чумы грызунами, при забое и разделке больных чумой
промысловых и домашних животных. Чума может передаваться и от человека к человеку
как антропонозное заболевание, а также при контакте с трупами или вещами умершего
больного чумой человека.
Набор реагентов используется в клинической лабораторной диагностике для
исследования материала, полученного от лиц обоего цола любого возраста с подозрением
на чуму вне зависимости от формы и наличия манифестации заболевания (контактных и
проживающих на территории природных очагов чумы), а также в ходе
эпидемиологического мониторинга природных очагов чумы для исследования
биологического материала от животных-носителей и переносчиков чумы, объектов
окружающей среды.
2. ХАРАКТЕРИСТИКА ИЗДЕЛИЯ
Реактив Описание Объем
(мл)
Количество
ПЦР-смесь-
вид
Смесь праймеров, зонда, дНТФ и натрия
азида - прозрачная розоватая жидкость
0,25 1 пробирка
ПЦР-смесь-
подвид
Смесь праймеров, зондов, дНТФ и натрия
азида - прозрачная розоватая жидкость
0,25 1 пробирка
^Введена впервые
--- стр. 2 ---
rj
ПЦР-смесь-
РГФ
прозрачная бесцветная жидкость,
содержащая Трис-НС1; калия хлорид; магния
хлорид; Tween-20, глицерин, азид натрия
0,5 2 пробирки
Растворитель прозрачная бесцветная жидкость,
представляющая собой Н 2О, свободную от
нуклеаз
1,0 1 пробирка
Taq ДНК-
полимераза
прозрачная бесцветная жидкость,
представляющая собой фермент с
активностью 5 ед/мкл
0,04 1 пробирка
ТЕ-буфер прозрачная бесцветная жидкость,
содержащая трис-НС1; Ыаг-ЭДТА
1,0 2 пробирки
ПКО ДНК
Y. pestis
препарат ДНК Y. pestis, сухой, в виде следа
от высушенной капли на дне пробирки; после
растворения - прозрачная бесцветная
жидкость
0,1 3 пробирки
Набор реагентов «ГенПест-подвид/алтай-РГФ» рассчитан на 50 определений с
учетом контрольных образцов.
В основу метода положен анализ наличия или отсутствия фрагментов генома
чумного микроба методом ПЦР с учетом результатов в режиме реального времени.
Выявление ДНК чумного микроба проводят на основании амплификации
видоспецифичного хромосомного yihN гена с использованием ПЦР-смеси-вид. Учет
результатов реакции с данной смесью проводят по каналу РАМ (Green).
Для определения принадлежности возбудителя чумы к основному, неосновным
подвидам и дифференциации отдельно неосновного алтайского подвида проводят
амплификацию ilvN и АК38_1327 генов с использованием ПЦР-смеси-подвид. Учет
результатов реакции с данной смесью проводят по каналу РАМ (Green) - ilvN ген, JOE
(Yellow) - АК38_1327 локус.
При проведении реакции с ПЦР-смесью-подвид у штаммов чумного микроба
основного подвида будет отсутствовать специфичная амплификация по каналу РАМ
(Green) (из-за наличия у Y. pestis pestis делеции в гене ilvN), а у штаммов возбудителя
чумы неосновного алтайского подвида - по каналу JOE (Yellow) (из-за наличия у Ypestis
altaica делеции в локусе АК38_1327).
В результате проведения анализа регистрация флуоресценции с обеими ПЦР-
смесями у штаммов чумного микроба будет следующая: основной подвид - РАМвид +
FAM
JOE
подвид - JOE, Л: - FAM,
подвид
^подвид неосновной алтайский подвид - х^гж^тхвид
неосновных (кроме алтайского) подвидов - РАМвид
+
ч-
РАМпоДВИД
РАМ подвид -I-
подвидJOE.._
Проведение анализа включает два этапа: 1. вьщеление ДНК из проб клинического и
биологического материала, объектов окружающей среды 2. амплификация с «ПЦР-
смесью-вид» и «ПЦР-смесью-подвид» на приборах типа Rotor Gene. Тип используемых
зондов - TaqMan. Образование флуоресцентного сигнала происходит за счет
освобождения флуоресцентных меток при расщеплении зонда ферментом Taq ДНК-
полимераза (5’-экзонуклеазная активность). С каждым циклом ПЦР число свободных
флуоресцентных меток экспоненциально возрастает, что приводит к повышению уровня
флуоресценции в пробирке. Учет результатов флуоресценции проводят по каждому
каналу отдельно.
3.
3.1.
менее
АНАЛИТИЧЕСКИЕ И ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
Аналитическая чувствительность.
Набор должен выявлять ДНК чумного микроба в суспензиях концентрацией не
1x10^ м.к./мл и определять принадлежность патогена к основному и неосновным
--- стр. 3 ---
/ г
подвидам с дифференциацией отдельно штаммов Г. pestis неосновного алтайского
подвида.
3.2. Аналитическая специфичность
Набор не должен давать положительных результатов с ДНК микроорганизмов
других родов в суспензиях концентрацией 1 м.к./мл.
3.3. Диагностическая чувствительность - не менее 98,5 % с доверительной
вероятностью 90%; при анализе 242 положительных проб (32 проб бактериальных
суспензий микроорганизмов, 112 проб клинического ма-^ериала, 84 проб биологического
материала и 14 проб объектов окружающей среды), содержащих 7, pestis в концентрации
IX10 М.К./МЛ, получен положительный результат с верной дифференциацией по
принадлежности к основному, алтайскому подвиду и остальным неосновным подвидам -
В 242 случаях;
3.4. Диагностическая специфичность - не менее 99 % е доверительной
вероятностью 90%; при анализе 242 положительных проб (32 проб бактериальных
суспензии микроорганизмов, 112 проб клинического материала, 84 проб биологического
материала и 14 проб объектов окружающей среды), содержащих К pestis в концентрации
1x10 М.К./МЛ, получен положительный результат е верной дифференциацией по
^ основному, алтайскому подвиду и остальным неосновным подвидам -
в 242 случаях, при исследовании 70 отрицательных проб (48 проб бактериальных
суспензии микроорганизмов, 10 проб клинического материала, 10 проб биологического
материала и 2 проб объектов окружающей среды), содержащих гетерологичные
микроорганизмы Legionella pneumophila, Francicella tularensis, Enterobacter kobei,
Enterococcus faecalis, Enterobacter cloacae, Enterobacter aerogenes, Escherichi. coll,
Klebsiella pneumoniae, Listeria monocytogenes, Proteus mirabilis, Proteus vulgaris
Pseudomonas aeruginosa, Salmonella enteritidis. Shigella flexneri. Staphylococcus aureus
Staphylococcus epidermidis, Citrobacter yange, Streptococcus pyogenes. Salmonella
galhnarum, Staphylococcus saprophiticus. Yersinia pseudotuberculosis, Yersinia enterocolitica
в концентрации 1x10 м.к./мл, получен отрицательный результат в 70 случаях.
4. МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ ПРИ РАБОТЕ С ИЗДЕЛИЕМ
4.1. Информация об инфекционных или микробных рисках.
Набор реагентов может быть использован в учреждениях, имеющих Лицензию на
деятельность в области использования возбудителей инфекционных заболеваний человека
и животных I-IV групп патогенности, стационарньк и мобильных лабораториях,
имеющих еанитарно-эпидемиологическое заключение на проведение работ с
микроорганизмами I-IV групп патогенности.
Исследования могут выполнять специалисты не моложе 18 лет с вьющим и средним
медицинским, биологическим или иным образованием, окончившие соответствующие
курсы специальной подготовки с освоением методов безопаеной работы е патогенными
биологическими агентами (ПБА) I-II групп патогенности.
Следует рассматривать исследуемые образцы как инфекционно-опасные, поэтому
этапы подготовки образцов и проведение ПЦР-анализа проводят в соответствии с
требованиями СП 1.3.3118 - 13 «Безопасность работы с микроорганизмами I-II групп
патогенности» и МУ 1.3.2569 - 09 «Организация работы лабораторий, использующих
методы амплификации нуклеиновых кислот при работе с материалом, содержащим
микроорганизмы I-IV групп патогенности».
4.2. Информация об экологических рисках.
Уничтожение неиспользованных компонентов набора или наборов реагентов с
истекшим сроком годности проводить в соответствии с СанПиН 2.1.7.2790-10.
4.3. Информация о физических рисках, в том числе возможность взрыва или
возгорания.
--- стр. 4 ---
4.4.
Набор реагентов следует ппименят^, гг.. .
прошедшими надлежащее техническое обс™ ^ ^ комбинации приборами,
инструкций по эксмуатСи эяект^оо^™ ^^ Необходимо строгое соблюдение
электроприборами. ктрооборудования, безопасности при работе с
S i = = E f = ^ ^ ^
Нарушение условий оТруж!” Гды ппиТ““ подготовки проб;
Нарушение процесса проведения ан^иза L “^бора реагентов;
Применение по назначениГми ' f “ Упета результатов,
прошедшими поверку и/иликал^ровку. “ средствами измерения, не
5. ОБОРУДОВАНИЕ И МАТЕРИА. ЛЫ, необходимые при работе с изделием*:
Основные xapaKTepii^TiS^Fii^^
Амплификатор типа RotorGene -1---------— Документации, произволителк
^ п л и ф и к а т о ? ^ ^ с ;Н Л ^ ^
6000», «RotorGene Q», «Qiagen», Германия
Ламинарный бокс биологической
оезопасности класс ПВ Ламинарный бокс биологической^
безопасности класс II БАВп-«Ламинар-С -1 2»
1ЩР-бокс — —i:liciJviiiHcipHbie системы», Pnrr'j.fcf
OKL аоактериальной воздушной среды для
работы с ДНК-пробами (ПЦР-бокс) при
проведении ПЦР-диагностики БАВ-ПЦР-
Микрицентрифуга-встряхиватель -------^ «^ 1аминарные системы». Россия
Микроцентрифуга-встряхиватель «ТЭТА- 2»
«Биоком». Россия ’
1 ермостат твердотельный
1 ермостат твердотельный от 25 до 100 °С
Термо 24-15, «Биоком>у Россия 'lvlkл.puцeнтpифyгa настольная
Микроцентрифу?^ 1^^Т зЖ ^ё?ш ^^^
Оюасыватель медицинский
Отсасыватель медицинский "ОМ- 1" ОАО
"Утес", Россия
t' li^cpдoleльныи с функцией
охлаждения термостат твердотельный с функцией
Дозатор 0,5 - 10 мкл —^^сния от ч до 12U С. «Биоком». Россия
Дозатор 10- 100 мкл
Дозатор 20 -2 0 0 мкл llioim, Финляндия
Дозатор 100- 1000 MVT. ЬдопЦ, Финляндия
штатив-подставка для дозаторов
Штатив-подставка для дозаторов
^ дозаторов, «Хеликон»,
miaiHb «раиичее место» для
микропробирок на 0,2 мл Штатив «рабочее место» для микропробирок
на 0,2 мл, 10x20 мест, «Хеликон». РоссияШ1а1иь «раоочее место» для ]
_микропробирок на 1.5 мл Штатив «рабочее место» для микропробирок
- 5 "'16 мест с увеличенньт
--- стр. 5 ---
/ Г
1 расстоянием между лунками, «Хеликон»,
Россия
1 Холоди^1ьник от 2 до 8 с морозильной
камерой не выше минус 18°Г «Атлант», Россия
иаконсчники универсальные для
дозаторов переменного объемом с
аэрозольным барьером до 10 мкл
ФСЗ 2012/11892 «Axygen», США
наконечники универсальные для
дозаторов переменного объемом с
аэрозольным барьером до 100 мкд
ФСЗ 2012/11892 «Axygen», США
наконечники универсальные для
дозаторов переменного объемом с
аэрозольным барьером до 200 мкп
ФСЗ 2012/11892 «Axygen», США
наконечники универсальные для
дозаторов переменного объемом с
аэрозольным барьером до 1000 мкп
ФСЗ 2012/11892 «Axygen», США
микроцсн 1рифужные пробирки объемом
1, J мл ФСЗ 2012/11892 «Axygen», США
ИриОирки ДЛЯ Ицр объемом 0,2 мл с
плоской крышкой ФСЗ 2012/11892 «Axygen», США
^делчда одииразовая медицинская из
нетканого и полимерного материалов ган 2013/668 ---------------------------
нерча 1ки медицинские диагностические
одноразовые. Часть 1. Спецификация на
перчатки из каучукового латекса или
раствора
I ост Р 52239-2004 -----------------------
примечание, допускается применение оборудования другого типа по своим -------------------^
характеристикам не уступающего рекомендуемому.
6. АНАЛИЗИРУЕМЫЕ ПРОБЫ
■ иÙљь“ Г ^ “ РУ— ™ „ „ „
^ " "■ ” ■■'
пробы биологического материала: органы грызунов, зайцеобразных насекомоядных и
нмемных хищников, эктопаразиты (блохи, клещи), остатки пищи’из гнезд хищных
ПТИЦ, их погадки, экскременты грызунов и хищников;
пробы объектов окружающей среды: почва
7 ' " г „ “ сп'
Безопасность работы с микроорганизмами I-II групп патогенности» МУ 4 2 2039 05
лаборТрии?мУ 1 3 2 5 б 1 Х Т ”'’“ “ ^^ биоматериалов в микробиологические
микроорганизмы I-IV групп патогенности». ^ ериалом, содержащим
Транспортирование материала в лабораторию для исследований пповолят ппи
^пературе от плюс 2 до плюс 8 “С в течение 1 суток в соответствии с СП 1 2 036 -95
«Порядок учета, хранения, передачи и транспортирования микроорганизмов I-IV групп
патогенности». После проведения предварительной обработки проб допускается^х
транспортировка при температуре от минус 16 до минус 20 °С в течение 7 с wok либо в
сосуде Дьюара с жидким азотом - длительно. ^
--- стр. 6 ---
транспортной средаГследующего соТтава^Г'"* возможно использование
КаНРО. - 0,0072 моль; Т Г Г сА Ши неовхГ'' ‘ ' «>««38 моль,
транспортировки, при отсутствии низкотемпепя™™ даительного хранения и (или)
специальную транспортную среду ESP- 1 % caoKown^^n^^ холодильников, используют
Исследуемый матери^^л может xpL htL в c n ^ F S ? ’ ‘ "Р“««аЕ.
30 С в темном месте до 10 дней*^ ^ температуре от плюс 20 до плюс
™ e p Z " r , r -« Р .» .,
приводить к ингибированию реакции амплификации.
ИССЛЕДОВАНИЯ (АНАЛИЗА)
материала, об^Тар^^^Татерт^ГТьда^^^^^^^^ исследуемогоучет результатов. ДНК, амплификация, регистрация и
7.1. Подготовка исследуемых образцов
№ к ™ Т Г ''‘* "‘’"® микроорганизмов
2 -.o ,,./.p '" T p .rz " X ™ z 'r'“ — ■
единиц ФГБУ «НЦЭСМП» (ОСО 42 2Я "2та“2™ Ю
r-pestis. Затем проводят 10-кпатные ^ ™ =°°™^тствует 1x10^ м.к./мл для
“ " Р ““
Кровь у людей берут из локтевой вены в количестне 4 s лдгт
который предварительно вносят 0,5 мл стерильного 4 <>/ ’ пГ шприцем, в
переносят в стерильные стеклянные пробиоки или с * * раствора натрия цитрата и
пробкой. Аккуратно перемешивают покачиванием“ ‘’зате"''^‘'™''“ “^ пробирки с
обеззараживания материала и выделения ДНК выполняют этапы
Мокрота
Мокроту отбирают в количестве не менее 1 П мг, = д.
стерильные флаконы с широким гоолом и ® одноразовые градуированные
менее 50 мл. В емкость с мо” й ^ л я ю Г Х Г “°'"™ “"
«Муколизина» к 1 части мокроты! R “ ® “ °™ошении 5:1 (5 частей
емкость нериодически вс 'яхиЙот процессе разжижения мокроты (20 - 30 мин.)
наконечник с фильтром отбвдают 1 мп пяя* автоматической пипеткой, используя
завинчивающейся крьппкой или в микропен помещают в пробирку с
центрифугируют при 5000-7000 g в течен Т ^Г 7“ “
жидкости, осадок клеток перемешают с 0 2 м ™ Д^яют 0,8 мл надосадочной
выделение ДН1СРНК из о, 1мл разжиженной жидкости. Допускается
Мазки из зева ^ ‘Стадии центрифугирования.
вращательньши дмж^^мТпове^^^^^ ™ пластиковой основе
ротоглотки. После взятия материала тампон Гпяб Дужек и задней стенки
помещают в стерильную одноразовую пробипкч ватным тампоном)
(например, № 2) и аккуратно обламк!^ ^ ^ специальной транспортной средой
0,5 см от рабочей Гс™ оетазляТХч^Г^^^^^^ - бо1е
среде, которую используют для выделения ДНК материалом в транспортной
Моча
--- стр. 11 ---
3. Выбирают тип ротора «36-Well Rotor»/«36-лyнoчный ротор». Ставят отметку в окне
рядом с надписью «No Domed 0.2 ml Tubes»/«Locking ring attached»/«Konbuo закреплено».
4. Нажимают кнопку «Кех 1»/«Далее».
Добро пожаловать в детальный мастер тестов!
гТипротора-
Выхш << Назад Далее»
5. Выбирают объем реакционной смеси: Reaction уо 1\1те/Объем реакции - 25 мкл. Для
прибора «Rotor-Gene» 6000 должно бьпъ активно (отмечено галочкой) окно «15 pi oil layer
volume»/«15 pL объем масла/воска».
6. Нажимают кнопку «НехГ»/«Далее».
Мастер Нового Теста
Этот экран отображает смешанные опции для этого теста Запо/» 1ИГв
поля, нажмите След., когда вы готовы перейти на след. стр.
Оператор;
Замечания:
Объём
реакции [uL);
{7 [1 ^1 с добав. воска)
Компоною<.а [l,2 ,3... ~z\
Выход << Назад Далее»
Данная область
предназначена для
отображения
справки
элементов
мастера. Для
справки по этой
теме проведите
мышь над этой
темой. Вы можете
также нажать на
раскрывающийся
список для
отображения
справки о
возможных
установках.
--- стр. 12 ---
7. В верхней части окна нажимают кнопку «Edit ргоГ 11е»/«Редактор профиля».
Темпераггура: 95 | град.
5 |мик О |свк.
Q K
8. Задают следующие параметры эксперимента:
8.1. Hold/Удерж, температуры 95 °С - 5 мин
8.2. Cycling/IJ[HKnHpoBaHHe 95 °С - 30 с
60 °С-30с
72 °С - 30 с
Cycle repeats/Цикл повторить - 10 times/раз.
95 °С- 15 с
56°С - 30 с - Детекция
72 °С- 15 с
Cycle repeats/Цикл повторить - 35 times/раз.
Флуоресценцию измеряют при 56 ®С (во втором блоке циклирования) по каналу
FAM/Green, JOE/Yellow.
8.3. Cyclmg2/U,HiaiHpoBaHHe2
--- стр. 13 ---
Нажмите на цикл ниже, чтобы изменить его;
Цикл повторить 35 |раз
Нажмите на шаг внизу для его изменения
56 град.
30 сек.
Детек на Cycling А
на Green, Yellow
Г Удлим. Шаг.
Г~ Снижать темп ру шага
или нажмите* шаг или • шаг, чтобы добавить или удалить шаги этого цикла.
94 град, на 15 сек. з о
72 град, на 15 сек.
на 30 сек.
Q K
9.
8.4. Нажимают кнопку «ОК»/«Да».
В нижнеи части окна
Optimisation... »/«Опт.уровня сигн.». нажимают кнопку «Calibrate»/«Gain
Профиль
£едактор профиля... i
Установка канала:
Имя 1 Источник 1 Двтектоо уровень сигнала I
Green 470nm 510nm 10
Yellow 530nm 555nm 10
Orange SBSnrn 610nm 10
Red b2bnm 660nm 10
Crimson bdUnm 710hp 7
Blue Jbbnm 4S0nm 7
Q i T T . у р о в н я с и г и . . . 1
Выход « Назад Далее»
Новый,.,
Правка...
Ноалить
П т м е н и г ь
Нажмите эту
кнопку, чтобы
перейти на след,
стр. мастера. Если
это
заблокировано, вы
должны выполнить
некот. действия на
этой странице
перед
продолжением.
--- стр. 14 ---
в открывшемся окне нажимают кнопку «Calibrate Acquiring»/«Optimise Acquiring»/
«Опт.детек-мых».
При авто-оптимизации ароеня сигнала буает считываться Флуорвсиекгный сигнал
выбранной пробирки при различных уровнях усиления сигнала, пока не найдется
уровень, при котором сигнал попадает в нужный диапазон Уровень сигнала
зависит от используемых реагентов.
Установить температуру |Б0 градусов.
Оптим. всех Опт. Детек-мых
Г " Выполнить оптимизацию при 1 -м шаге детекции
Г” Выполнить оптимизацию при 60 градусах перед началом теста
г Установки канала:'
▼ I Добавить...
Имя I Позиция Пробирки I М и ж н ^и гн а г^^а кс и ^ Превка...
Удалить Все
Старт Вручную... Закрыть £пр.
- для красителя FAM/Green указьшают в графе Min Reading/Munim. Сигнал значение 14,
а в графе Мах Reading/Максим. Сигнал значение 20,
■ для красителя JOE/Yellow указьшают в графе Min Reading/Миним. Сигнал значение 5, а
в графе Мах Reading/Максим. Сигнал значение 10, ______________________
Авто*огтай«Ш 9(я ^ровм» сигнала! i
- Огтгимиэация: *
При авто-оптимизации уровня сигнала будет считываться Флуоресцентмьй сигнал
вьгбранной пробирки при различных уровнях усиления сигнала, пока не найдется
уровень, при котором сигнал попадает в нужный диапазонУровень сигнала
зависит от испо/ъэуемых реагентов.
Установить темперетуру |бсГ”^ градусов.
—■ Устано«еи Авто-оптимизации уровня оижада
Г
■У о
3%
•Установки канала
Канал: Gteen Позиция Пробирки: |1
Нужный диапазон стартового см-наяа: [й “ ^ F U o |2 0 ~
Диапазон уровней сигнала: [То ^ до [То
ОК ] Отменить I Справка |
< С
J
U
lJ
в графе Tube position/Позиция Пробирки указан номер пробирки, по которой будет
14
--- стр. 15 ---
/ автоматически выбран параметр «^аш»/«усиление сигнала», по умолчанию это 1-я пробирка
в роторе. Поэтому в 1-ой позиции в роторе должна ставиться пробирка с реакционной
смесью РС-подвид.
Помечают галочкой бокс в строке «Perform Calibration Before Р' Acquisition»/«Perform
Optimisation Before P‘ Acquisition»/«Выполнить оптимизацию при 1-м шаге детекции».
Закрыть окно Ашо Gain Calibration Setup/Авто-оптимизация уровня сигнала, нажимают
кнопку «С1озе»/«Закрыть».
• Оптимизация :•
При авто-огтг^^изации уровня сигнала будет считываться Флуоресцентный сигнал
выбранной пробирки при различных уровнях усиления сигнала, пока не найдется
уровень, при котором сигнал попадает в нужный диапазонУровень сигнала
зависит от используемых реагентов.
Т ! градусов.Установить температуру |60
Оптим. всех I Опт. Детек-мых |
Р" В ыполнить оптимизацию при 1 -м шаге детекции
Г ” Выполнить оптимизацию при 60 градусах перед началом теста
гУстановки канала
▼ I Д о б а в и т ь .., {
Имя I Позиция Пробирки I Минин Скгнал I Максим, Сигнал | Мин, урс
Gieen 1
Yellow 1
14FI
5FI
20FI
10R
-10
■10
£тарт Вручную... Закрьгь Спр.
Нажимают кнопку «Ыех 1»/«Далее».
Правка...
валить
Удалить See
Профиль
I
Еедактор профиля „. |
Установка канала:
Нажмите эту
кнопку, чтобы
перейти на след,
стр. мастера. Если
это
заблокировано, вы
должны выполнить
некот. действия на
этой странице
перед
прсаолжением.
Имя Источник 1 Детектов Уровень сигнала 1
Green 470nm 51 Опт 10
Yelow 530nm 555tvn 10
□range BSSnm Б1 Otvn 10
Red Ь Лпт GGOtvn 10
Dimson btlUnm 710hp 7
Blue 3G5rm 460rm 7
; ypoB H g
Выхеа « Saeai Далее»
Новый..
Правка...
Уровень С ы н I
i^aлить
Птменить
10. Запускают амплификацию кнопкой «Start гип»/«Старт». При необходимости
15
--- стр. 16 ---
введенные значения термоциклирования могут быть сохранены в качестве шаблона,
используя кнопку « Save template/ «Сохр. шаблон».
Скеиа:
№пШт ■ II
L icT aH O B K aЗначение
Green Уровень сигнала 10
Orange Уровень сигнала Ю
Yellow Уровень сигнала 10
Огпигнизация автоуроеня сигнала До первого детектир. данных
Ротор 36-луночный ротор
Компоновка образцов 1.2.3....
□ бьём реакции (в микролиграх) 25
Проверив г^авияьность установок, нажмите Старт для начала выполнения
Теста. Намолите Сохр.Шаблом, чтобы сохранить шаблси с программой и
устанотками этого теста. ____________
Сохр. шаблон
Выход I « Назад |
11. Дают название эксперимента и сохраняют его на диске (в этом файле будут
автоматически сохранены результаты данного эксперимента).
В процеесе работы амплификатора или по окончании его работы программируют
положение пробирок в карусели. Для этого используют кнопку «Edit затр1ез»/«Правка
образцов» (в нижней правой части основного окна). Все пробы и контроли обозначают
меню Samples/Образцы как Unknown/Неизвестный.
7.4.4 Регистрация результатов
Учет данньк по каналам для ПЦР-смеси-вид и ПЦР-смеси-подвид проводят
единообразно. Для регистрации результатов амплификации на приборах типа Rotor
Gene используют следующие показатели.