Набор реагентов для выявления и дифференциации штаммов возбудителя бруцеллеза методом полимеразной цепной реакции с учетом результатов в режиме реального времени (Бру-Диф-РГФ) по ТУ 21.20.23-055-01898109-2018 — инструкция и характеристики
Открытые закупки, где изделие проходит ТЗ
Сейчас открытых закупок, где изделие полностью проходит ТЗ, нет; список обновляется каждый день.
Построчная сверка ТЗ с характеристиками этого изделия и все закупки под ваши товары — в кабинете, 7 дней бесплатно.
Попробовать бесплатно
Текст инструкции: технические характеристики
--- стр. 1 ---
УТВЕРЖДЕНА
Приказом Росздравнадзора
«утвержда :
Директор
Роспотре!
«Микроб»
т
ИНСТРУКЦИЯ
по ПРИМЕНЕНИЮ НАБОРА РЕАГЕНТОВ ДЛЯ ВЫЯВЛЕНИЯ И
ДИФФЕРЕНЦИАЦИИ ШТАММОВ ВОЗБУДИТЕЛЯ БРУЦЕЛЛЕЗА МЕТОДОМ
ПОЛИМЕРАЗНОЙ ЦЕПНОЙ РЕАКЦИИ С УЧЕТОМ РЕЗУЛЬТАТОВ В РЕЖИМЕ
РЕАЛЬНОГО ВРЕМЕНИ
(БРУ-ДИФ-РГФ)
1. НАЗНАЧЕНИЕ
Набор реагентов для выявления и дифференциации штаммов возбудителя
бруцеллеза методом полимеразной цепной реакции с учетом результатов в режиме
реального времени «Бру-Диф-РГФ» по ТУ 21.20.23-055-01898109-2018», далее по тексту -
набор реагентов «Бру-Диф-РГФ» предназначен для выявления ДНК возбудителя
бруцеллеза в клиническом материале (кровь, сыворотка крови, синовиальная жидкость,
пунктаты из лимфатических узлов), биологическом материале (кровь, селезенка, печень,
легкое, сердце, лимфатические узлы, плацента и плодовые оболочки от абортировавших
плодов, околоплодная жидкость, содержимое бурс, гигром, лимфатические узлы, печень,
селезенка, матка, семенники от животных с подозрением на бруцеллез), объектах
окружаюшей среды (вода, почва, пищевые продукты; непастеризованное молоко,
сметана, сыр, творог) с одновременным определением его принадлежности к видам В.
abortus, В. melitensis, В. suis, В. canis, В. ovis, В. neotomae методом полимеразной цепной
реакции с гибридизационно-флуоресцентным учетом результатов в режиме реального
времени.
Бруцеллез - это зоонозное инфекционно-аллергическое заболевание,
характеризующееся интоксикацией, поражением опорно-двигательного аппарата, нервной
и половой системы.
Основным источником являются больные сельскохозяйственные животные.
Заболевания людей преимущественно вызывают бруцеллы коз и овец {Brucella melitensis),
бруцеллы крупного рогатого скота (Brucella abortus), свиней (Brucella suis), реже -
прочие виды.
Заражение происходит алиментарным путем (при употреблении молочных
продуктов), через микроповреждения кожи (во время помощи при отелах, ягнении и т.д.),
аэрогенным путем (при вдыхании пыли, содержащей бруцеллы, в местах выпаса, в
загонах для содержания овец, в лабораторный условиях).
Размножение и накопление микробов происходит преимущественно в
лимфатических^дла?^ из которых бруцеллы периодически поступают в кровь.
Возбудител %Й^тог^но. распространяется по всему организму, приводит к
аллергич
типа) и
ЗАМ. ДИРЕКТОРА
ПО ЭКСПЕРИМЕНТА
И ПРОИЗВОДСТВЕННОЙ'
X . К . Н И К И Ф О Р О В
^ (характерна гиперчувствительность замедленного
^АБ01
‘ / *
1 различных органах и системах.
Инструкция по применению «БРУ-ДИФ-РГФ» Страница 1 из 44
--- стр. 2 ---
Набор реагентов используется в клинической лабо 1)аторной диагностике для
исследования материала, полученного от лиц обоего пола любого возраста с подозрением
на бруцеллез вне зависимости от формы и наличия манифестации заболевания, а также в
ходе эпидемиологического мониторинга для исследования биологического материала от
животных с подозрением на бруцеллез, абортированных плодов, объектов окружающей
среды и пищевых продуктов.
2. ХАРАКТЕРИСТИКА НАБОРА
Для проведения исследований могут быть использованы амплификаторы для ПЦР с
учетом результатов в режиме реального времени типа Rotor-Gene и CFX.
Компоненты набора являются одноразовыми. В состав набора входят 7 реагентов:
Реактив Описание Объем
(мл)
Количество
ПЦР-смесь-1 прозрачная бесцветная жидкость,
содержащая праймеры, зонды, дНТФ и
натрия азид
0,25 1 пробирка
ПЦР-смесь-2 прозрачная бесцветная жидкость,
содержащая праймеры, зонды, дНТФ и
натрия азид
0,25 1 пробирка
ПЦР-смесь-
РГФ
прозрачная бесцветная жидкость,
содержащая Трис-НС1; калия хлорид;
магния хлорид; Tween-20, глицерин; натрия
азид
0,5 2 пробирки
Taq ДНК-
полимераза
прозрачная бесцветная жидкость,
содержащая фермент с активностью 5
ед/мкл
0,040 1 пробирка
ТЕ-буфер прозрачная бесцветная жидкость,
содержащая трис-НС1; Паг-ЭДТА
1,0 3 пробирки
Растворитель прозрачная бесцветная жидкость,
представляющая собой Н2О, свободную от
нуклеаз
1,0 1 пробирка
ПКО ДНК
Brucella
Образец ДНК В. suis сухой, в виде следа от
высушенной капли на дне пробирки; после
растворения - прозрачная бесцветная
жидкость
0,1 4 пробирки
Набор реагентов «Бру-Диф-РГФ» рассчитан на 50 определений, включая
положительные и отрицательные контроли.
В основу метода положен анализ наличия или отсутствия фрагментов генома у
разных видов Brucella spp. методом ПЦР с учетом результатов в режиме реального
времени.
Для идентификации и определения видовой принадлежности бруцелл исследования
проводят с ПЦР-смесью-1 (содержит праймеры и зонды, специфичные к генам bcspSl,
BRA0420, BRA0907) и ПЦР-смесью-2 (содержит праймеры и зонды, специфичные к генам
BMEI1426, BMEII0711, BMEI0994). Реакцию амплификации осуществляют одновременно
с каждой ПЦР-смесью.
Инструкция по применению «БРУ-ДИФ-РГФ» Страница 2 из 44
--- стр. 3 ---
Подтверждение наличия в пробе ДНК Brucella spp. осуществляют на основании
наличия амплификации с ПЦР-смесью-1 фрагмента гена bcspSl (канал РАМ).
Подтверждение наличия в пробе ДНК вида В. abortus осуществляют на основании
отсутствия амплификации с ПЦР-смесью-1 фрагмента гена BRA0420 (канал ROX),
наличия амплификации с остальными ДНК-мишенями.
Подтверждение наличия в пробе ДНК вида В. melitensis осуществляют на
основании отсутствия амплификации с ПЦР-смесью-1 фрагмента гена BRA0907 (канал
JOE), наличия амплификации с остальными ДНК-мищенями.
Подтверждение наличия в пробе ДНК вида В. suis осуществляют на основании
наличия амплификации с ПЦР-смесью-1, ПЦР-смесью-2 со всеми ДНК-мишенями.
Подтверждение наличия в пробе ДНК вида В. canis осуществляют на основании
отсутствия амплификации с ПЦР-смесью-2 фрагмента гена BMEI1426 (канал РАМ) и
наличия амплификации с остальными ДНК-мишенями.
Подтверждение наличия в пробе ДНК вида В. ovis осуществляют на основании
отсутствия амплификации с ПЦР-смесью-2 фрагмента гена BMEI0994 (канал ROX),
наличия амплификации с остальными ДНК-мищенями.
Подтверждение наличия в пробе ДНК вида В. neotomae осуществляют на
основании отсутствия амплификации с ПЦР-смесью-2 фрагмента гена BMEII0711 (канал
JOE) и наличия амплификации с остальными ДНК-мишенями.
Проведение анализа включает два этапа: 1. выделение ДНК из проб клинического и
биологического материала, объектов окружающей среды, пищевых продуктов
2. амплификация с «ПЦР-смесью-1» и «ПЦР-смесью-2» на приборах типа Rotor Gene и
СРХ. Тип используемых зондов - TaqMan. Образование флуоресцентного сигнала
происходит за счет освобождения флуоресцентных меток при расщеплении зонда
ферментом Taq ДНК-полимераза (5’-экзонуклеазная активность). С каждым циклом ПЦР
число свободных флуоресцентных меток экспоненциально возрастает, что приводит к
повышению уровня флуоресценции в пробирке. Учет результатов флуоресценции
проводят по каждому каналу отдельно.
3. АНАЛИТИЧЕСКИЕ И ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
ЗЛ. Аналитическая чувствительность.
Набор должен выявлять ДНК Brucella spp. в суспензиях концентрацией не менее
1x10^ м.к./мл и определять принадлежность патогена к основным шести видам бруцелл;
В. abortus, В. melitensis, В. suis, В. canis, В. ovis, В. neotomae.
3.2. Аналитическая специфичность
Набор не должен давать положительных результатов с ДНК микроорганизмов
других родов в суспензиях концентрацией IxlO"* м.к./мл.
3.3. Диагностическая чувствительность - не менее 99,5% с доверительной
вероятностью 90%; при анализе 432 положительных проб (120 проб бактериальных
суспензий микроорганизмов, 96 проб клинического материала, 120 проб биологического
материала и 96 проб объектов окружающей среды), содержащих Brucella spp. в
концентрации 1x10^ м.к./мл, получен положительный результат с верной
дифференциацией по принадлежности к видам В. abortus, В. melitensis, В. suis, В. canis, В.
ovis, В. neotomae - 99.5 % - в 430 случаях.
3.4. Диагностическая специфичность - не менее 98.0% с доверительной
вероятностью 90%; при исследовании 144 отрицательных проб (40 проб бактериальных
суспензий микроорганизмов, 32 проб клинического материала, 40 проб биологического
материала и 32 проб объектов окружающей среды), содержащих гетерологичные
микроорганизмы Bacillus anthracis, Escherichia coli, Francisella tularensis, Klebsiella
Инструкция no применению «БРУ-ДИФ-РГФ» Страница 3 из 44
--- стр. 4 ---
1Ф
pneumonia, Proteus vulgaris. Pseudomonas aeruginosa. Salmonella ser. typhimurium. Shigella
flexneri. Staphylococcus aureus. Yersinia pseudo tuberculosis в концентрации 1x10^ м.к./мл,
получен отрицательный результат в 144 случаях.
/
4. МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ ПРИ РАБОТЕ С ИЗДЕЛИЕМ
4Л. Информация об инфекционных или микробных рисках.
Набор реагентов может быть использован в учреждениях, имеющих Лицензию на
деятельность в области использования возбудителей инфекционных заболеваний человека
и животных I-IV групп патогенности, стационарных и мобильных лабораториях,
имеющих санитарно-эпидемиологическое заключение на проведение работ с
микроорганизмами I-IV групп патогенности.
Исследования могут выполнять специалисты не моложе 18 лет с вьющим и средним
медицинским, биологическим или иным образованием, окончившие соответствующие
курсы специальной подготовки с освоением методов безопасной работы с патогенными
биологическими агентами (ПБА) I-II групп патогенности.
Следует рассматривать исследуемые образцы как инфекционно-опасные, поэтому
этапы подготовки образцов и проведение ПЦР-анализа проводят в соответствии с
требованиями СП 1.3.3118 - 13 «Безопасность работы с микроорганизмами 1-11 групп
патогенности» и МУ 1.3.2569 - 09 «Организация работы лабораторий, использующих
методы амплификации нуклеиновых кислот при работе с материалом, содержащим
микроорганизмы 1-1V групп патогенности».
4.2. Информация об экологических рисках.
Уничтожение неиспользованных компонентов набора или наборов реагентов с
истекщим сроком годности проводить в соответствии с СанПиН 2.1.7.2790-10.
4.3. Информация о физических рисках, в том числе возможность взрыва или
возгорания.
Набор реагентов следует применять по назначению в комбинации с приборами,
прощедшими надлежащее техническое обслуживание. Необходимо строгое соблюдение
инструкций по эксплуатации электрооборудования, безопасности при работе с
электроприборами.
4.4. Информация о рисках применения, приводящих к ошибочному результату
исследования:
Использование набора реагентов «Бру-Диф-РГФ» с истекшим сроком годности;
Нарушение условий транспортирования, хранения набора реагентов;
Нарушения упаковки и внешнего вида компонентов набора реагентов;
Нарушение условий транспортирования, хранения и подготовки проб;
Нарушение условий окружающей среды при эксплуатации набора реагентов;
Нарушение процесса проведения анализа, регистрации и учета результатов.
Применение по назначению МИ в комбинации со средствами измерения, не
прошедшими поверку и/или калибровку.
ОБОРУДОВАНИЕ И МАТЕРИАЛЫ, необходимые при работе с изделием*:
Наименование Основные характеристики или обозначения
документации, производитель
Амплификатор типа RotorGene Амплификатор «RotorGene 3000», «RotorGene
6000», «RotorGene Q», «Qiagen», Германия
Амплификатор типа CFX Амплификатор CFX 96 «БиоРад», США
Ламинарный бокс биологической
безопасности класс ПВ
Ламинарный бокс биологической
безопасности класс 11 БАВп-«Ламинар-С-1,2»,
«Ламинарные системы», Россия
ПЦР-бокс Бокс абактериальной воздушной среды для
работы с ДНК-пробами (ПЦР-бокс) при
Инструкция по применению «БРУ-ДИФ-РГФ» Страница 4 из 44
--- стр. 5 ---
.1.
проведении ПЦР-диагностики БАВ-ПЦР-
"Ламинар-С" «Ламинарные системы», Россия
Микроцентрифуга-встряхиватель Микроцентрифуга-встряхиватель «ТЭТ А-2»,
«Биоком», Россия
Термостат твердотельный Термостат твердотельный от 25 до 100 °С,
Термо 24-15, «Биоком», Россия.
Микроцентрифуга настольная Микроцентрифуга на 13400 об/мин "Mini Spin"
"Eppendorf', Германия
Отсасыватель медицинский Отсасыватель медицинский "ОМ-1" ОАО
"Утес", Россия
Термостат твердотельный с функцией
охлаждения
термостат твердотельный с функцией
охлаждения от 4 до 120 °С, «Биоком», Россия
Дозатор 0,5-10 мкл Biohit, Финляндия
Дозатор 10-100 мкл Biohit, Финляндия
Дозатор 20 - 200 мкл Biohit, Финляндия
Дозатор 100- 1000 мкл Biohit, Финляндия
Штатив-подставка для дозаторов Штатив-подставка для дозаторов
универсальная на 5 дозаторов, «Хеликон»,
Россия
Штатив «рабочее место» для
микропробирок на 0,2 мл
Штатив «рабочее место» для микропробирок
на 0,2 мл, 10x20 мест, «Хеликон», Россия
Штатив «рабочее место» для
микропробирок на 1,5 мл
Штатив «рабочее место» для микропробирок
на 1,5 мл, 5x10 мест с увеличенным
расстоянием между лунками, «Хеликон»,
Россия
Холодильник от 2 до 8 °С с морозильной
камерой не выше минус 18°С
«Атлант», Россия
Наконечники универсальные для
дозаторов переменного объемом с
аэрозольным барьером до 10 мкл
ФСЗ 2012/11892 «Axygen», США
Наконечники универсальные для
дозаторов переменного объемом с
аэрозольным барьером до 100 мкл
ФСЗ 2012/11892 «Axygen», США
Наконечники универсальные для
дозаторов переменного объемом с
аэрозольным барьером до 200 мкл
ФСЗ 2012/11892 «Axygen», США
Наконечники универсальные для
дозаторов переменного объемом с
аэрозолъным барьером до 1000 мкл
ФСЗ 2012/11892 «Axygen», США
Микроцентрифужные пробирки объемом
1,5 мл
ФСЗ 2012/11892 «Axygen», США
Пробирки для ПЦР объемом 0,2 мл с
плоской крышкой
ФСЗ 2012/11892 «Axygen», США
Одежда одноразовая медицинская из
нетканого и полимерного материалов
РЗН 2013/668
Перчатки медицинские диагностические
одноразовые. Часть 1. Спецификация на
перчатки из каучукового латекса или
раствора
ГОСТ Р 52239-2004
* Примечание: допускается применение оборудования другого типа, по своим
характеристикам не уступающего рекомендуемому.
Инструкция по применению «БРУ-ДИФ-РГФ» Страница 5 из 44
--- стр. 6 ---
6. АНАЛИЗИРУЕМЫЕ ПРОБЫ
Материалом для исследования служат (МУК 4.2.3010-12 «Порядок организации и
проведения лабораторной диагностики бруцеллеза для лабораторий территориального,
регионального и федерального уровней», МУК 3.1.7.3402-16 «Эпидемиологический
надзор и лабораторная диагностика бруцеллеза»):
- пробы культур микроорганизмов: бактериальные суспензии культур бруцелл или
подозрительных изолятов;
- пробы клинического материала: кровь, сыворотка крови, синовиальная жидкость,
пунктаты из лимфатических узлов;
- пробы биологического материала: кровь, селезенка, печень, легкое, сердце,
лимфатические узлы, плацента и плодовые оболочки от абортировавших плодов,
околоплодная жидкость, содержимое бурс, гигром, лимфатические узлы, печень,
селезенка, матка, семенники от животных с подозрением на бруцелез;
- пробы объектов окружающей среды: вода, почва, пробы пищевых продуктов:
непастеризованное молоко, сметана, сыр, творог.
Материал для исследования забирают в стерильные емкости с герметично
завинчивающимися крышками в соответствии с требованиями СП 1.3.3118-13
«Безопасность работы с микроорганизмами I-II групп патогенности», МУ 4.2.2039-05
«Техника сбора и транспортирования биоматериалов в микробиологические
лаборатории», МУ 1.3.2569-09 «Организация работы лабораторий, использующих методы
амплификации нуклеиновых кислот при работе с материалом, содержащим
микроорганизмы I-IV групп патогенности».
Транспортирование материала в лабораторию для исследований проводят при
температуре от плюс 2 до плюс 8 °С в течение 1 суток в соответствии с СП 1.2.036.-95
«Порядок учета, хранения, передачи и транспортирования микроорганизмов I-IV групп
патогенности». После проведения предварительной обработки проб допускается их
транспортировка при температуре от минус 16 до минус 20 °С в течение 7 суток, либо в
сосуде Дьюара с жидким азотом - длительно.
С целью предотвращения повреждения ДНК-мищеней возможно использование
транспортной среды следующего состава: сахароза - 0,218 моль; КН 2РО4 - 0,0038 моль,
К2НРО4 - 0,0072 моль; 1 % БСА. При необходимости длительного хранения и (или)
транспортировки, при отсутствии низкотемпературных холодильников, используют
специальную транспортную среду ESP: 1 % саркозил; 0,05 моль ЭДТА; 1 мг/мл проназа Е.
Исследуемый материал может храниться в среде ESP при температуре от плюс 20 до плюс
30 °С в темном месте до 10 дней.
Интерферирующие вещества и ограничения по использованию проб
исследуемого материала:
Использование для проведения ПЦР-исследования биологического материала,
содержащего избыточное количеетво примесей в виде елизи, крови и гноя может
приводить к ингибированию реакции амплификации.
7. ПРОВЕДЕНИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ (АНАЛИЗА)
Проведение анализа включает следующие этапы: подготовка проб исследуемого
материала, обеззараживание материала, вьщеление ДНК; амплификация, регистрация и
учет результатов.
7Л. Подготовка исследуемых образцов
7ЛЛ. Подготовка проб культур микроорганизмов
Из культур бруцелл или подозрительных изолятов готовят суспензии в 2 мл 0,9 %
раствора натрия хлористого по отраслевому стандартному образцу мутности 10 единиц
ФЕБУ «НЦЭСМП» (ОСО 42-28-59-86П), что соответствует 1,6x10^ м.к./мл для Brucella
spp. Затем проводят 10-кратные разведения подготовленных суспензий в 0,9% растворе
натрия хлористого до конечной концентрации 1x10^ м.к./мл. Для исследования в
отдельную микропробирку объемом 1,5 мл отбирают суспезии клеток чистой кулътуры в
Инструкция по применению «БРУ-ДИФ-РГФ» Страница 6 из 44
--- стр. 10 ---
П устой Ш дблон
^ Т рехш аговы й цикл и плавление
^ Двухш аговы й цикл
H R M '"
1ругие файлы
(В ехническое обслуживание прибора
^ A m plisens Influenza virus A B -FL
^ A m plisens Influenza virus A _H 5N 1 -F L
^ A m plisens N.m eningitidts-H .influenzae-S.pneu..
jO Am pliSens Salm onella
Ц овы й
О тм енить I
JC np.
П оказать этот экран при запуске програм м ы
М астер Н ового Т еста
Добро пож аловать в детальны й мастер тестов!
; Т и п ротора - —
I «Назад I Далее» |
2. В открывшемся окне
выбирают меню
«Advanced »/«Детальны
й мастер» Нажимают
кнопку
4е\у»/«Новый».
3. Выбирают тип
ротора «36-Well
Rotor»/ «3 6-луночный
ротор». Ставят
отметку в окне рядом
с надписью «No
Domed 0.2 ml
Tubes»/«Locking ring
attached»/«Koльцo
закреплено».
4.
кнопку
«Next»/«Дaлee»
Нажимают
Э тот экран отображ ает см еш анны е оп ци и для этого теста Заполните поля, наж м ите С лед., когда вы готовы перейти на след. стр.
О ператор: ||
Зам ечания:
О бъём реакции (u L );
К ом поновка
Д анная область предназначена для отображ ения справки элем ентов м астера. Д ля справки по этой теме проведите м ы ш ь над этой тем ой. В ы м ож е
1ЩИИСЯ
С Л И С О К для отображ ения справки о возм ож ны х установках.
5. Выбирают
объем реакционной
смеси: Reaction
volume/Объем реакции
Г * 15ц 1 сдобав. воска
~Л
В ькод I «Цазад | Далее» |
6.
кнопку
«Next»/«Дaлee».
Нажимают
Инструкция по применению «БРУ-ДИФ-РГФ» Страница 10 из 44
--- стр. 11 ---
П роф и ль
редактор проф иля... |
Н аж м ите эту к н оп к у, ч тобы перейти на след. стр. м астера. Е сли этозаблокировано, вы долж ны вьполнить некот. действия н а
атойеп
передпродолж ением .
У стан о»< ч а канала:
1 И м яИ сточн и кД етектооУ ровень сигнала 1Ц оеы й.. 11 G reen470nm51 О п т10 П равка... 1Y elow530nm555nm10O rangeR ed585nm625nmblU nm660nm1010 вровень Сит |
Dm on680nm710hp7 1^алить 1B lu e385nm460n iT i7 О тм енить 1
Д П Т . уровня С И Г Н ...1
В ы ход I «Цаэад | Далее» |
а ^ U #
Новый Огкр. Сохранить как Справка
Т ест прш олж ится около 102 м ин. Г раф ик внизу преаставляет тест, которы й долж ен бы ть вы полнен:
7. В верхней
части окна нажимают
кнопку «Edit
ргой1е»/«Редактор
профиля».
Н аж м ите на цикл ниж е, чтобы изм енить его:
Ц иклирование Ц иклирование 2
Тем пература: Э 5 | гр т .
Время: 5 I м ин. О I сек.
В ст. после..■ I
В ставить ДО -, j
У далить I
8. Задают
следующие
параметры
эксперимента:
8.1. Hold/Удерж,
температуры
95 °С - 5 мин
ак
Инструкция по применению «БРУ-ДИФ-РГФ» Страница 11 из 44
--- стр. 12 ---
, «3 U dN ew O pen Save A s H elp
T he nn take appro>inete|y 106 m inuM ^ j to conplete. the gra^ below repres^s the ru n to be perform ed;
Ш Ж 1
C lick on a cycle below to m odily it:
H old
C ycfaig2
t after... I
Insert before... |
R em ove |
T his (q»de repeats 10 | tim e($|.
C lick on one Ы the steps below to m odify it. or press < •- or • to add and rem ove steps for this cyde.
T im ed Step
72 deg.
30 seconds
N ot A cquiring
П L ong R ange P T ouchdovm
95 deg, for X secs Ю
57 deg, for 30 secs/
72<iiB,forXsecs
, S3 u dNew O pen Save A s H elpT he ru n wi take approxiiM ite^ '124 m inutefs) to com plete. T he graph below represents the ru n to be perform ed:
i i i i i i i i i i i i
C lick on a cycle below to m odify к;
H oldC i" Insert after...
T N s cycle i^ats 35 |tim e(s).
C lick on one of the steps below to m odify it. or press + or • to add and rem ove steps for this cycle.
T im ed Step
__72 d^.
X seconds
N ot A cquiring
f L ong R ange I” T ouchdow n
95 deg. for X secs -JjJ
57 deg, for X secs/
72 dag I.
_Q K__I
8.2 .Cycling/Цикли
рование
95 °C- 30 c
57 °C - 30 c
72 °C - 30 c
Cycle repeats/Цикл
повторить - 10
times/раз.
8.3.Cycling2/Циклиpo
вание2
95 °C- 30 с
57°C - 30 c
72 °C - 30 c
Cycle repeats/Цикл
повторить
times/раз.
Нажимают
«ОК»
35
кнопку
Инструкция по применению «БРУ-ДИФ-РГФ» Страница 12 из 44
--- стр. 15 ---
для красителя
ROX/Orange
указывают в графе Min
Reading/Мингш.
Сигнет значение 5, а в
графе Мах
Reading/Максим.
Сигнет значение 10.
Нажимают кнопку
«ОК»
для краеителя
JOEA^ellow
указывают в графе Min
Reading/MuHUM.
Сигнет значение 5, а в
графе Мах
Reading/Максим.
Сигнш. значение 10
Нажимают кнопку
«ОК»
Инструкция по применению «БРУ-ДИФ-РГФ» Страница 15 из 44
--- стр. 16 ---
- О птимизация; -
П ри авто-оптим изации уровня сигнала будет считы ваться ф луоресцентны й сигнал вы бранной пробирки при различны х уровнях усиления сигнала, пока не найдется уровень, при котором сигнал попадает в нуж ны й диапазон.У ровень сигнала зависит от используем ы х реагентов.
У становить тем пературу |60 -f-j градусов.
О птим . всех
Г ” В ы полнить оптим изацию при 1 -м ш аге детекции
Г” В ы полнить оптим изацию при В О градусах перед началом теста
Г У становки канала :*
Д обавить... I
И м яП озиция П робиркиМ иним С игналМ аксим . С игналМ и н . ч с
G reen1 5F I 10F I -10O range1 5F I 10F I -10
Y ellow1 5F I 10F I -10
П равка...
У далить
У далить gee
С тарт j В ручную ... I Закры ть- £ п р г -
В графе Tube positiort/Позиция Пробирки указан номер пробирки,
по которой будет автоматически выбран параметр «gam «/«усиление
сигнала», по умолчанию это 1-я пробирка в роторе. Поэтому в 1-ой
позиции в роторе должна ставиться пробирка с реакционной
смесью РС-1.
Профиль
m
редактор профиля...
Установка канала:
Нажмите эту кнопку, чтобы перейти на след,
стр. мастера. Если это
заблокировано, вы должны выполнить некот. действия на этой странице передпродолжением.
o'yfip
Имя ИсточникДетектор 1 Уровень сигнала 1
Green 470nm SIOtYIT 10
Yelow 530nm 555nm 10
Orange585nm 61 Опт 10
Red 625nm 660nm 10
C rim son680nm 710hp 7
Blue 365nm 460nm 7
Иовый...
Правка... I
уровень Сиг»^
валить
О тмвжть
Вы ход I «Назад | Далее>> j
Помечают
галочкой бокс в строке
«Perform Calibration
Before Р‘
Acquisition»/« Perform
Optimisation Before P‘
Acquisition»/« Выполни
ть оптимизацию при
1-м шаге детекции».
Закрыть окно Auto
Gain Calibration
Setup/Авто-
оптимизация уровня
сигнала, нажимают
кнопку
«Close »/ «Закрыть ».
Нажимают
кнопку
«N ext «/«Далее «.
Инструкция по применению «БРУ-ДИФ-РГФ» Страница 16 из 44
--- стр. 17 ---
Схеме;
i i i i
Устаноем1 Значение 1
Green Урове»« сигь^ала 10Orange Уровень сигнала 10У еК оуч Уровень сигнала10Оптимизация аетоуровня сигналаДо первого детвктир. данныхРотор 36-луночный роторКомпоновка образцов 1,2.3....Объём резкими (в микролитрах)25
Проверив правильность установок, нажмите Старт для начала выполнения Теста Нажмите Сохр.Ш аблон. чтобы сохранить шаблон с грограммой и
установками этого теста
Старт I
С охр. шаблон
Выход « Нззад
КРг— Ли 6000 S«n« Soft»» • T ea 2 0 1 6 Ч 1 7 -0 4 (1 )•«йл A iiM H » C T tff/rrcM y fw m iiii си гм ам Пй*с ы и т|| О то
^ И ^ л. s__
дС прим
о С о 1 ф 1 1 и т> « м
^ » Б и б л и о тек и
У П О р Ч ^ Ч И Т к V Н м м гм
С м о л ш
ш
А И абреи п м S iyO m c Л З агр у ек я Л Hwiwe емт ■ Ребеиийтл
■
1 31 б и б л и о тек и ■ В ц*о
1 Зл»*»**"»*Щ ||Ь обр«ж еп м М ум и и
Л К о м п и ю гер ^ Л о««/н т1Й д 1К ((С
% С ем
Библиотека ‘Документы'
Дтю аннема Т и л Р ю м ар
е т алеиситм . уд м лгтаорм ои и п у сп о аи м и п о и ск а
И ам ф аЯ м : Т ест 2 0 1 6 -0 7 -0 4 Ш
Т йпф айм :|Т ю С <>^
‘ С крап а п ап к и
10. Запускают
амплификацию
кнопкой «Start
шп»/«Старт». При
необходимости
введенные значения
термоциклирования
могут быть
сохранены в качестве
шаблона, используя
кнопку « Save
template/ «Сохр.
шаблон».
11. Дают название
эксперимента и
сохраняют его на
диске (в этом файле
будут автоматически
сохранены
результаты данного
эксперимента).
В процессе работы амплификатора или по окончании его работы программируют
положение пробирок в карусели. Для этого используют кнопку «Edit samples»/«Правка
образцов» (в нижней правой части основного окна). Все пробы и контроли обозначают
меню Samples/Образцы как Unknown/Неизвестный.
Программирование амплификатора типа CFX
1. Включают прибор и дожидаются окончания автоматической калибровки прибора.
2. Запускают программу «СЕХ Manager».
3. Выбирают новый эксперимент «Create а New Run»/
4. Задают программу амплификации (активно окно «Protocol»), используя либо уже
готовый шаблон - кнопка «Select Existing», либо создают новый - кнопка «Creative New».
Инструкция по применению «БРУ-ДИФ-РГФ» Страница 17 из 44
--- стр. 39 ---
Приложение 2.
Инструкция по автоматическому учёту результатов применения МИ для
диагностики in vitro «Набор реагентов для выявления и дифференциации штаммов
возбудителя бруцеллеза методом полимеразной цепной реакции с учётом
результатов в режиме реального времени «Бру-Диф-РГФ» на базе электронной
таблицы EXCEL.
Компакт-диск является приложением к инструкции по применению набора
реагентов «Бру-Диф-РГФ». На нём, помимо инструкции по автоматическому учёту
результатов применения набора реагентов «Бру-Диф-РГФ», имеются два файла-протокола
EXCEL:
- «Протокол Бру-Диф-РГФ Rotor-Gene.xlsm» - для учёта результатов, полученных на
приборе Rotor-Gene;
- «Протокол Бру-Диф-РГФ CFX96.xlsm» - для учёта результатов, полученных на
приборе CFX96
Выберите необходимый Вам файл-протокол и откройте его.
Перед Вами появится электронная таблица EXCEL. Заполните соответствующие
графы в таблице: введите имена проб (не обязательно) и значения Ct по всем шести
каналам. Для ускорения процесса заполнения можно использовать комбинации клавиш
Ctrl + С (копировать) и Ctrl + V (вставить).
ы ■о •
Гла»4М
А
Вамм Размела странт<ы
Cafibri * U * А‘ а’
Буфер о6*м»м 7S { Шрифт Выравнивание ^
^ П редупреждевивеанлеамбеммасиости Запуск м акросов отклю чен. П арам етры .
П ротокол БРУ-Д И Ф -Р ГФ R otor-G ene - M icroso ft Excel
Ф орм улы Д анны е Рсценмрованис В ид A B B Y Y Finereader 11-
■ - ' 1й ' 1^.' jS
в*'""" J ж X а iK 0 а - ^ О М :Й i ф орм атирование - как таблицу • ячеек
В стаы гтк *
У далить 'Ф орм апф оватъ С тили ..m - кактаблгцу' ячеек- ’
С тили Я чейки
кг ЛЕ -
3 ’С ортировка Н айти и ■ ч ь ' и ф ильтр - вы делить -
Р^ктироваиие
В7
D
Ff fHt HflYTT t**'P***'” oTHjm>Whi. csepxy ф появится соответствующее предупреждение. Включите это содержимое.
дгт» ими пробы (ме овтаяптмо) и тнэчения Ct по всем каналам. Можно использовать комбинации: Ctrl ■ » С (а-V)
Для получения результата нажмите на эту кнопку
4
5 Ш
6
С м есь Р С -1 С м есЫ >С -2 Результаты проведения П Ц Р на приборе R otor-G ene
Имя пробы G reen (FAM)
bcfpJl
Y ellow (JO E )
BRA0907
O range (R O X )
BRA0420
G reen (FAM)
ВМЕП476
Y e!!. .r(JO E ) 8M ‘ /flC kai^e (R O X )
ШЕЮ994
т
8 2
9 3
10 4
11 512 •
13 714 •
1 5 ^
16 "tt
Р U
18 U
19 1320 34
21 15
22 11
23 J7
24 11
25 И
26 2 В
27 21
28 21
29 2330 24
31 21
32 21
33^
3 * J t
_чс м ...
5ГаП
Инструкция по применению «БРУ-ДИФ-РГФ» Страница 39 из 44
--- стр. 40 ---
/
Перед анализом полученных данных необходимо разрешить выполнение программы
учёта результатов. Для этого в Microsoft Office 2007 нажмите на кнопку «Параметры». В
появившемся окне выберите «Включить это содержимое».
* wily
Протокь: ВиУ-Д/'Ф-РГФ 4 0tor-Genf> Microsoft Excel
* ^ i „1 — __
'лавная 1 Вставка Разметка страни!.^ Фо(наулы ^нны е Рмдензирование Вид ABBYY FineReader 11 -
i - а
* , -■ 1Calibri - И • А* а’ » ^ . Й"' Общий *
IS
Встааить
J 1
'д Г > Г ч 1 ' А » № S я iw i i e : т * Щ ’ % т toS Условное ' Форматировать
форматирование'' как таблицу *
Буфер о&мена j i Шрифт Вырэвниаание
Предупреждение системы безопасности Заг^ск макросов опелю*
Н15 Jb 15,57
Число Стили
Н^ А В C D Е F G... .. . . . . -- - - - - - - - - - - - - - -.
1_ Если запуск «мкросов отключён, сверху ф появится соответствую щ ее предупреж дение. Вклхачнте это содерж ш яое.
2 Введите имя пробы (не ^ з а т е л ь н о ) и эначения а " ° J ^ n jj^ a M e T p b l беЗО П аС Н О С Т И M k rO S O f t O f ^
4 С м еа
Оповещение системы безопасности - макрос
7
5 ins Имя пробы G reen (FAM) Yellow
б b csp S l ВЯД( Макрос
7 1 Проба 1 25,91 24, Макросы были отключены. Макросы могут содержать вирусы и другие опасные
8 2 Проба 2 25,25 22, кожюненты. Не включайте содержимое, если не уверены в надежности
кточника файла.
Biiwiaiiiic* Не удалось ооределпть мадемоюсть асточмиса этого
содержамого. Рекомсждуется ocraairrb это содержимое отключенным
за мсключеинем случаев, когда содержимое обеспечивает
критическую фуюсционалыюсть ■ вы довернете его источнику.
Пополнительные сведения
9 3 Проба 3 26,46 27
10 4 Проба4 24,86 21,
11 5 Проба 5 24,
12 б Проба 6 24,13 20
13 7 Проба 7 24,8 Путь к файлу: учёта результатов^Тротокол БРУ-ДИФ-РГФ RotorЧаепе.хЬш
о №ановить заииггу от неизвестного соаержипого (реконендуется)
14 S Проба 8
15 9 к+ 17,24 14,
16 10 к- 0 1^<лк>«т> это содерю 1иое|
17 11
18 12
19 13
20 14
21 15
22 U
23 17
------------------------1-----------------------1-----------------------1-----------------------1-----------------------1-------------------------
В Microsoft Office 2013 достаточно нажать на кнопку «Включить содержимое»
т в с* =
ФАЙЛ ГЛАВНАЯ ВСТАВКАРАЗМ ЕТКА СТРАНИЦЫ
^ 1
1?й •Вставить
Calibri '' 1 ^А- а'
Ж JC У . - Ш
Буфер обмена H i Ш рифт ri
Протокол БРУ-ДИФ-РГФ Rotor-Gene - Excel
ВИД
^ Перенести текст |^щий
^ Объединить и погиестить в центре ’ ^ % ооо ^
Выравниванив^^^^^^^^^^в^^. ^ Число
'Щ
Условное
форматирование '*
' L ПРЕДУПРЕЖ ДЕНИЕ СИСТЕМ Ы БЕЗОПАСНОСТИ Запуск макросов отключен.
Н16 " - Л
А В С О Н
1 Если запуси макросов отключён, сверху ф появится соответствующее предупреж дение. Включите это содерживлое.
2 Введите имя пробы (не обязательно) и значения Ct по всев* каналам. Мояо«оисполыоеатысо«*бннацнн:СЕг1т-С(т-У)
3 IПротокол "Б1»У-ДИФ-РГФ'' Rotor-Gene ________________________________________
4 ' ” ” СмесьРС-1 _____________ Смесь РС-2 Результать
Инструкция по применению «БРУ-ДИФ-РГФ» Страница 40 из 44
--- стр. 41 ---
После ввода данных нажмите на красную кнопку в правом верхнем углу таблицы с
соответствующей надписью: «Для получения результата нажмите на эту кнопку!».
Для получения результата нансмите на эту кнопку!
Таблица автоматически вьщаст полученный результат, а также дату и время
проведения анализа. Ячейки со значением Ct выше порогового, будут вьщелены цветом.
Г лю нмв став к а Р азм етк а стр ан ж и а
А С м И к т . U . А ' *•Ч 8В сти и тъ ^
Б уф ер обмои XШ р и ф т . .
П ротасол Б Р У -Д И Ф -Р ГФ R otor-G ene - M icro so ft Excel
Ф ор м ул ы Д м ны е Р ецею иролм ие B iu A B 8 Y Y R n eR e«d er U
- - _ Э О би,» • JS igti
tfl X
■ fc n - X
ш
d * " В стан п ь ’
Уаммть ’
4 % М О * J L л У сл овн ое Ф ор м л тм р ом ть С ти л и _^ орм лтм ром м и е * «к та6м м |у • и н м и • Ф ор м л т ’
Г '
1- йг л
С ор тм р оок * Н ей ти и и ф м л и тр * ■ ы л ел и ти '
Р едм ети р ом н и е
В
2 П »тд|пг»м 1ш
3
4
5
6
саерж у ^ пои И нтел соот*етстш ую1цм предупреждение. В клю чите »то содермониое.
пробы |необимтелы »о)ми«аченииапо>сежканалаж.М ожномсполкаопаты ои1бниж рн1;аг1-»С (-»У )П ротоиол '*Б Р У -Д М »-Р Г »‘‘ R otor-G e«> e
И м и пробыО гееп (F A M )
Ьар31
Y eitow (JO E )
B R A 0907
O range (R O X )
B R A 0420
G rM n(FA M )
ВШП4Х
Y e{tow (JO E ) O range (R O X )
В М Е 1 Ю /1 1 В М Е Ю 9 9 4
Рехульташ проведения П Ц Р на приборе R otor-G ene
28 ию ня 201В г.
__ 14Л З
П роба 1 В ы явлена Д Н К B rucella spp. a количестве недостаточном для видовой
идентиф икации____________________________П роба 2 В ы явлена Д Н К B rucella canis
П роба 3 В ы явлена Д Н К B rucella spp. в количестве недостаточном для видовой
идентиф икации _______________П роба 4 В ы явлена Д Н К B rucella neotom ae
П роба 5 Результат невалидны й. Т ребуется подтверж дение принадлеж ности к
роду B rucella______________________________П робаб В ы явлена Д Н К B rucella suis
П роба? В ы явлена Д Н К B rucella spp., ш там м генетически изм ененны й.
Т ребую тся дополнительны е исследования__________П роба 8 В пробе Д О К B rucella spp. не обнаруж енаК + П олож ительны й контрольны й образец8 пробе Д Н К B rucella spp. не обнаруж ена17 |Ц
Полезный совет. Проверку системы безопасности макросов можно отключить.
После этого не придётся для каждого анализа повторно включать содержимое. Для этого
войдите в меню списка возможных действий с документом и выберите кнопку
«Параметры Excel».
Инструкция по применению «БРУ-ДИФ-РГФ» Страница 41 из 44
--- стр. 42 ---
у
/
Это же меню в Microsoft Office 2013 находится во вкладке «Файл» и выглядит
следующим образом:
Протокол БР
Сведения
Создать
Открыть
Сохранить
Сохранить как
Печать
Общий доступ
Экспорт
Закрыть
Сведения
Протокол БРУ-ДИФ-РГФ Rotor-Gene
F : » БРУЦ ЕЛЛА » Инструкция к программе учёта результатов
&Защита
книги *
Предупреждение системы безопасности
Активное содержимое может содержать вирусы и другие опасные
компоненты. Следукнцее содержимое было отключено:
■ Макросы
Содержимое следует включать только при наличии доверия к
содержимому файла.
Параметры центра управления безопасностью
Дополнительные сведения об активном содержимом
Защита книги
Контролируйте Т И П Ы изменений, которые пользователи могут
вносить в эту книгу.
Параметры
Поиск
Проверка книги
Перед публикацией этого файла не забудьте что он содержит
■ Свойства документа, путь к принтеру, имя автора и абсолютный
Инструкция по применению «БРУ-ДИФ-РГФ» Страница 42 из 44
--- стр. 43 ---
в появившемся окне выберите вкладку «Центр управления безопасностью» и
нажмите на кнопку «Параметры центра управления безопасностью»
Инструкция по применению «БРУ-ДИФ-РГФ» Страница 43 из 44
--- стр. 44 ---
в появившемся окне выберите вкладку «Параметры макросов» и включите все
макросы.
Цинтр у щ н и н и и безопасностью
Надежные издатели
Надежные расположения
Надстройки
Параметры A ctiveX
Параметры макросов
Панель сообщ№ ий
Внешнее содержимое
Параметры конфиА ^циальности
П араметры макросов
Для макросов в документах не из надежного расположения:
О Опслкнйпъ все макросы ^ уведомления
О Отключить все макросы с уведомлением
О Отключить все макросы |дэоме макросов с цифровой подписью
® :включить все макросы (не рекомендуется, возможен запуск опасной программы]|
П араметры макросов для радработ^тка
Q Доверять доступ к объектной модели проектов V B A
О К Oruota
Инструкция по применению «БРУ-ДИФ-РГФ» Страница 44 из 44
--- стр. 45 ---