Набор реагентов для выявления ДНК условно-патогенных бактерий классов Bacilli, Betaproteobacteria и Gammaproteobacteria, вызывающих нозокомиальные и внебольничные инфекции, методом ПЦР в режиме реального времени (БакСкрин УПМ) по ТУ 21.20.23-084-46482062-2018 — инструкция и характеристики
Открытые закупки, где изделие проходит ТЗ
Сейчас открытых закупок, где изделие полностью проходит ТЗ, нет; список обновляется каждый день.
Построчная сверка ТЗ с характеристиками этого изделия и все закупки под ваши товары — в кабинете, 7 дней бесплатно.
Попробовать бесплатно
Текст инструкции: технические характеристики
--- стр. 6 --- ^>^ДНК-ТЕХНОЛОГИЯ Инструкция по применению Лист 6 БакСкрин УПМ Листов 34 1 ПРЕДНАЗНАЧЕННОЕ ПРИМЕНЕНИЕ 6.1 Полное наименование: Набор реагентов для выявления ДНК условно- патогенных бактерий классов Bacilli, Betaproteobacteria и Gammaproteobacteria, вызывающих нозокомиальные и внебольничные инфекции, методом ПЦР в режиме реального времени (БакСкрин УПМ), далее по тексту - набор реагентов. 6.2 Назначение: набор реагентов предназначен для выявления ДНК условно- патогенных бактерий классов Bacilli^ Betaproteobacteria и Gammaproteobacteria, вызывающих нозокомиальные и внебольничные инфекции, в препаратах ДНК, полученных из биологического материала человека и бактериальных культур из этого биоматериала (мокрота, моча, мазки/соскобы из дыхательных путей, желудочно-кищечного и урогенитального тракта, фекалии, аспираты, экссудаты) методом полимеразной цепной реакции в режиме реального времени. Набор реагентов выявляет ДНК следующих бактерий: Класс Bacilli: Enterococcus spp., Streptococcus spp., Streptococcus agalactiae, Streptococcus pyogenes. Streptococcus pneumoniae. Staphylococcus spp.. Staphylococcus aureus’ . Класс Betaproteobacteria: Achromobacter ruhlandii, Achromobacter xylosoxidans, Burkholderia spp.; Класс Gammaproteobacteria: Acinetobacter spp., Citrobacter freundii, Citrobacter koseri, Enterobacteriales, Enterobacter cloacae, Escherichia coli, Haemophilus spp., Haemophilus influenzae, Klebsiella oxytoca, Klebsiella pneumoniae, Morganella morganii, Proteus spp., Pseudomonas aeruginosa, Serratia marcescens, Stenotrophomonas maltophilia. 6.3 Функциональное назначение: диагностика in vitro. 6.4 Показания к проведению анализа: симптомы инфекционного процесса. Противопоказаний к применению нет. 6.5 Демографические и популяционные аспекты: применение набора реагентов не зависит от популяционных и демографических аспектов. 6.6 Область применения: набор реагентов может быть использован в клинико- диагностических лабораториях медицинских учреждений. 6.7 Потенциальные пользователи: квалифицированный персонал, обученный методам молекулярной диагностики и правилам работы в клинико-диагностической лаборатории. 6.8 Применять набор реагентов строго по назначению согласно данной инструкции по применению. --- стр. 7 --- ^ ^ ЛНК-ТЕХНОЛОГМЯ Инструкция по применению Лист 7 БакСкрин УПМ Листов 34 2 ХАРАКТЕРИСТИКА НАБОРА РЕАГЕНТОВ 6.1 Состав набора реагентов 1^ R1-P028-S3/6, фасовка S Наименование компонентов Внешний вид Количество пробирок Номинальный объём компонента Смеси для амплификации, запечатанные парафином. Стрип №1 Прозрачная бесцветная или голубая жидкость под белым воскообразным слоем 12 стрипов по 8 пробирок по 20 мкл Смеси для амплификации, запечатанные парафином. Стрип №2 Прозрачная бесцветная или голубая жидкость под белым воскообразным слоем 12 стрипов по 8 пробирок по 20 мкл Раствор Taq-полимеразы Прозрачная бесцветная жидкость4 пробирки по 500 мкл Минеральное масло Прозрачная бесцветная вязкая маслянистая жидкость 4 пробирки по 1,0 мл Положительный контрольный образец Прозрачная бесцветная жидкость1 пробирка 320 мкл Крышки для стрипов 24 шт. Все компоненты набора реагентов готовы к применению и не требуют дополнительной подготовки к работе. 6.2 Количество анализируемых образцов Набор реагентов предназначен для одноразового применения и рассчитан на проведение 12 определений, что соответствует исследованию не более 8 неизвестных образцов, отрицательного контрольного образца и положительного контрольного образца. 6.3 Принцип метода Метод: Полимеразная цепная реакция с детекцией результатов в режиме реального времени; качественный мультиплексный анализ. Принцип метода основан на использовании процесса амплификации ДНК, заключающегося в повторяющихся циклах температурной денатурации ДНК, отжига праймеров с комплементарными последовательностями и последующей достройке полинуклеотидных цепей с этих праймеров Taq-полимеразой. Для повышения чувствительности и специфичности реакции предусмотрено применение «горячего» старта, который обеспечивается методикой приготовления реакционной смеси, состоящей из двух слоёв, разделённых прослойкой из парафина. Смешение слоёв и превращение их в реакционную смесь происходит только после плавления --- стр. 8 --- ^ Д И К ТЕХН О Л О ГИ Я Инструкция по применению Лист 8 БакСкрин УПМ Листов 34 парафина, что исключает неспецифический отжиг праймеров на ДНК-мишени при начальном прогреве пробирки. Помимо этого, после окончания реакции и остывания пробирок, парафин обеспечивает запечатывание реакционной смеси и дополнительную защиту от контаминации ампликонами. Набор реагентов включает смеси для амплификации, специфичные для выявления ДНК условно-патогенных бактерий и для определения вспомогательных аналитов: ДНК всех бактерий (Общая бактериальная масса), ДНК человека (КВМ - контроль взятия материала), а также содержит внутренний контроль (ВК), являющийся индикатором качества реакции в каждой отдельной пробирке (кроме пробирки №16, см. таблицу 1). В реакционную смесь для амплификации введены ДНК-зонды, каждый из которых содержит флуоресцентную метку и гаситель флуоресценции. При образовании специфичного продукта ДНК-зонд разрушается, действие гасителя на флуоресцентную метку прекращается, что ведет к возрастанию уровня флуоресценции, который фиксируется детектирующим амплификатором. Количество разрушенных зондов (а, следовательно, и уровень флуоресценции) увеличивается пропорционально количеству образовавшихся специфических ампликонов. Уровень флуоресценции измеряется на каждом цикле амплификации в режиме реального времени. В состав смеси для амплификации включен внутренний контроль (ВК), который предназначен для оценки качества прохождения полимеразной цепной реакции. В состав ДНК-зондов, использующихся для детекции продуктов амплификации участков бактериальной ДНК, включены флуоресцентные метки Fam и Су5, ОБМ - Fam, КВМ - Су5. В состав ДНК-зондов, использующихся для детекции продукта амплификации внутреннего контроля, входит флуоресцентный краситель Hex. В смесь для амплификации пробирок № 1 и № 10 добавлен олигонуклеотид с флуоресцентной меткой Rox - «Маркер». Он используется прибором для определения положения стрипа в термоблоке детектирующего амплификатора. После окончания программы амплификации прибор проводит сравнение заданного оператором расположения Стрипов с реальным положением маркера Rox, и, если находит несовпадение (при неправильном расположении стрипов), то предупреждает об этом оператора. Использование нескольких флуоресцентных красителей позволяет сократить количество пробирок, поскольку появляется возможность одновременно регистрировать результаты разных реакций амплификации, проходящих в одной пробирке. В таблице 1 приведены каналы детекции продуктов амплификации. --- стр. 9 --- ^’ ^ ДНК-ТЕХНОЛОГИЯ Инструкция по применению Лист 9 БакСкрин УПМ Листов 34 Таблица 1 - Выявляемые показатели, амплификации цветовая маркировка и каналы детекции продуктов тип Стрипа № Пробирки Fam Hex Rox Су5 Цветовая маркировка смеси 1 ОБМ BK Маркер - Голубая 2 Streptococcus pvoeenes BK ■ - - 3 Citrobacter freundii BK - Citrobacter koseri 4 Burkholderia SDD. BK . - ВS ё- 5 Streptococcus pneumoniae BK - Streptococcus spp. Бесцветнаяу 6 Staphylococcus aureus BK - Staphylococcus spp. 7 Klebsiella pneumoniae/ Klebsiella oxytoca BK - Klebsiella pneumoniae 8 Acinetobacter sd d . BK - . 9 Enterobacter cloacae BK - Serratia marcescens 10 Stenotrophomonas maltophilia BK Маркер Haemophilus spp. Голубая 11 Haemophilus influenzae BK - - 12 Morganella morganii BK - Enterobacteriales 13 Enterococcus spr. BK KBM 1у 14 Escherichia coli BK - Pseudomonas aeruginosa Бесцветная 15 Streptococcus agalactiae BK - Proteus spp. 16 Achromobacter Achromobacter ruhlandii xvlosoxidans Исследование состоит из следующих этапов: вьщеление ДНК (пробоподготовка) и ПЦР-амплификация с использованием набора реагентов БакСкрин УПМ. 6.4 Время проведения анализа (без учета пробоподготовки): от 1,5 часов. --- стр. 10 --- ^ Д Н К ТЕХН О Л О ГИ Я Инструкция по применению Лист 10 БакСкрин УПМ Листов 34 3 АНАЛИТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ НАБОРА РЕАГЕНТОВ 6.1 Специфичность анализа В образцах материала, содержащего ДНК выявляемых бактерий, во время проведения амплификации детектирующий амплификатор фиксирует положительные результаты амплификации специфических продуктов в соответствующих пробирках по заявленным каналам детекции. В образцах материала, не содержащего ДНК выявляемых бактерий, при проведении амплификации детектирующий амплификатор фиксирует отрицательные результаты амплификации специфических продуктов в соответствующих пробирках по заявленным каналам детекции. При исследовании аналитической специфичности выявлены специфические результаты амплификации при наличии в образце ДНК выявляемых аналитов: Achromobacter xylosoxidanSy Burkholderia spp.; Acinetobacter spp., Citrobacter freundii, Citrobacter koseri, Enterobacter cloacae, Entrobacteriales, Escherichia coli, Haemophilus influenzae, Haemophilus spp., Klebsiella oxytoca, Klebsiella pneumoniae, Morganella morganii, Proteus spp., Pseudomonas aeruginosa, Serratia marcescens. Staphylococcus aureus, Achromobacter ruhlandii. Staphylococcus spp., Stenotrophomonas maltophilia. Streptococcus agalactiae. Streptococcus pneumoniae. Streptococcus pyogenes. Streptococcus spp., Enterococcus spp. Показано отсутствие перекрестных неспецифических реакций каждой из систем, входящей в состав набора реагентов по отнощению к возбудителям, определяемым другими системами. Показано отсутствие неспецифических положительных результатов амплификации при наличии в образце нуклеиновых кислот следующих микроорганизмов: Campylobacter spp., Candida spp., Chlamydophila pneumoniae, Moraxella catarrhalis, Mycoplasma pneumoniae, Salmonella spp. в концентрации не менее 2x10^ копий на амплификационную пробирку), а также ДНК человека в концентрации более 750 нг на амплификационную пробирку. 6.2 Интерферирующие вещества Наличие ингибиторов ПЦР в образце биологического материала может быть причиной сомнительных (неопределённых) результатов. Признаком полного ингибирования ПЦР является одновременное отсутствие амплификации внутреннего контроля и специфического продукта (см. 2.3, 9.3). К ингибиторам ПЦР, которые могут присутствовать в образце ДНК, отнесены следующие эндогенные и экзогенные интерферирующие вещества: гемоглобин, билирубин, холестерин, слизь (муцин) и лекарственные препараты (пиносол, хлоргексидина биглюконат. 1 0 --- стр. 11 --- ^ ^ ЛНК-ТЕХНОЛОГИЯ Инструкция по применению Лист 11 БакСкрин УПМ Листов 34 индометацин суппозитории, ринофлуимуцил, октенисепт), находящиеся в образце, а также изопропиловый спирт и метилацетат, остающиеся в образце ДНК в результате неполного удаления промывочных растворов в ходе пробоподготовки. Максимальные концентрации интерферирующих веществ, при которых не наблюдалось ингибирование ПЦР, представлены в таблице ниже. Вид бноматериала Интерферирующее вещество Концентрация ИВ Эндогенные вещества Фекалии, моча, мазки\соскобы из желудочно-кишечного тоакта Билирубин 684 мкмоль/л Фекалии, моча, мазки\соскобы из желудочно-кишечного тракта Холестерин 13 ммоль/л Мокрота, моча, мазки\соскобы из дыхательных путей, желудочно- кишечного и урогенитального тракта, фекалии, аспираты, экссудаты Г емоглобин 0,35 мг/мл Мокрота, мазки\соскобы из дыхательных путей, мазки\соскобы из урогенитального тракта, аспираты Слизь (муцин) 20% Экзогенные вещества Мокрота, мазки\соскобы из дыхательных путей Пиносол 2,0% Мокрота, мазки\соскобы из дыхательных путей, мазки\соскобы из урогенитального тракта, эксудаты Хлоргексидина биглюконат 5,0% Фекалии, мазки\соскобы из желудочно-кишечного тракта Индометацин суппозитории 5,0% Мокрота, мазки\соскобы из дыхательных путей, аспираты Ринофлуимуцил 5,0% Мокрота, мазки\соскобы из дыхательных путей, мазки\соскобы из урогенитального тракта, аспираты, эксудаты Октенисепт 2,0% Мокрота, моча, мазки\соскобы из дыхательных путей, желудочно- кишечного и урогенитального тракта, фекалии, аспираты, экссудаты, бактериальные культуры Изопропиловый спирт 10% Мокрота, моча, мазки\соскобы из дыхательных путей, желудочно- кишечного и урогенитального тракта, фекалии, аспираты, экссудаты, бактериальные культуры Метилацетат 10% 6.3 Предел обнаружения Предел обнаружения для ДНК бактерий составляет 10 копий ДНК на амплификационную пробирку (2,0x10^ копий/мл препарата ДНК). Предел обнаружения 11 --- стр. 12 --- ЛИК-ТЕХНОЛОГИЯ Инструкция по применению Лист 12 БакСкрин УПМ Листов 34 установлен путем анализа серийных разведений лабораторных контрольных образцов (ЛКО). Предел обнаружения ДНК в образце биоматериала зависит от его вида и метода предобработки. Предел обнаружения 10 копий ДНК на шиплификационную пробирку соответствует следующим значениям концентрации в образце при использовании комплекта ПРОБА-НК- ПЛЮС для выделения нуклеиновых кислот производства ООО «НПО ДНК-Технология», ООО «ДНК-Технология ТС». Материал Предел обнаружения Классы Bacilli Betaproteobacteria Gammaproteobacteria 10 копий/на амплификационную пробирку (2.0x10^ копий/мл препарата 1ШК) мокрота (предобработка с КазРОд) 6x10^ копий на образец 6x102 копий на образец 6x102 копий на образец мо1фота (предобработка с муколизином) 4x10^ копий на образец 4x10^ копий на образец 4x10^ копий на образец моча 6x102 копий на образец 6x102 копий на образец 6x102 копий на образец мазки/соскобы из дыхательных путей 6x102 копий на образец 6х1()2 копий на образец 6x102 копий на образец мазки/соскобы из желудочно- кишечного тракта 6x102 копий на образец 6x102 копий на образец 6x102 копий на образец мазки/соскобы из урогенитального тракта 6x102 копий на образец 6x102 копий на образец 6x102 копий на образец фекалии 8x102 копий на образец 8x102 копий на образец 8x102 копий на образец аспираты 6x102 копий на образец 6x102 копий на образец 6x102 копий на образец экссудаты 6x102 копий на образец 6x102 копий на образец 6X102 КОПИЙ на образец бактериальные культуры 6x102 копий на образец 6x102 копий на образец 6x102 копий на образец 6.4 Диагностические характеристики Диагностические характеристики набора реагентов «БакСкрин УМП» рассчитаны в зависимости от наличия в образце ДНК микроорганизма, относящегося к одному из трех классов бактерий согласно назначению медицинского изделия). Биоматеряал Количество образцов ВасШ Betaoroteobacteria Gammaproteobacteria Диа1 ностнческая чувствительность Диагностическая спеннбкчность Диагностическая чувствительное 1 ь Диа1 носзическая сцециДичность Диагностическая чувствительность Диагностическая спеииДичность Аспират 11 100% П5.81 -1001 100% (88,78-100) 100% (15.81 - 100) 100% (88.78-100) 100% (71,51-100) 100% (84.56-100) МДП 20 100% (76.84- 100) 100% (92.29-100) 100% (15.81-100) 100% (93.84-100) 100% (59.04-100) 100% (93.28 -100) мжкт 11 100% (15.81-100) 100% (88.78-100) 100% (15.81-100) 100% (88.78- 100) 100% (71.51 -100) 100% (84.56-100) Мокрота 12 100% (2.50- 100) 100% (90.00-100) 100% (47.82-100) 100% (88.78- 100) 100% (59.04-100) 100% (88,06-100) 12 --- стр. 13 --- ^ ^ Д Н КТЕХН ОЛ ОГН Я Инструкция по применению Лист 13 БакСкрин УПМ Листов 34 Моча 65 100% (85.18-1001 100% (97.88 -1001 100% (15.81-1001 100% (98.11 -1001 100% (92.60-1001 100% (97,52-1001 СУГТ 9 100% (54.07 - 100) 100% (83.89- 1001 100% (15.81 - 1001 100% (86.28-1001 100% (54.07-1001 100% (83.89-1001 Фекалии 8 100% (15.81 - 1001 100% (84.56-1001 100% (15,81 - 1001 100% (84.56-1001 100% (63,06-1001 100% (79,41 -100) Экссудат 8 100% (29.24 -1001 100% (83.89-1001 100% (2.50-1001 100% (85.18-1001 100% (47.82-1001 100% (82,35-100) Итого 144 100% (93Л8-1001 100% (99.03-1001 100% (81.47-1001 100% (99.11 -1001 100% (96.48- 1001 100% (98,88-100) Бакт^)иальн ые культуоы 46 100% (78.20-1001 100% (97.05-1001 100% (2.50-1001 100% (97.34-1001 100% (88.43-1001 100% (96,64-100) примечания МДП - мазхи/соскобы из дыхательных путей МЖКТ - мазки/соскобы из желудочно-кишечного тоакта СУГТ - мазки/соскобы из урогенитального тракта в ходе проведенных клинических испытаний было установлено наличие в образцах биоматериала следующих видов бактерий (идентификация проведена до выявляемых набором реагентов таксонов): Класс Bacilli'. Enterococcus avium, Enterococcus faecalis. Enterococcus faecium. Staphylococcus aureus. Staphylococcus epidermidis, Staphylococcus haemolyticus. Streptococcus agalactiae. Streptococcus pneumoniae. Streptococcus pyogenes; Класс Betaproteobacteria: Achromobacter ruhlandii, Achromobacter xylosoxidans, Burkholderia cepacia, Burkholderia multivorans; Класс Gammaproteobacteria: Acinetobacter baumannii, Citrobacter freundii, Citrobacter koseri, Enterobacter asburiae, Enterobacter cloacae, Escherichia coli, Haemophilus influenzae, Haemophilus parahaemolyticus, Haemophilus parainfluenzae, Klebsiella oxytoca, Klebsiella pneumoniae, Klebsiella variicola, Morganella morganii, Proteus mirabilis. Pseudomonas aeruginosa, Serratia marcescens, Stenotrophomonas maltophilia. 6.5 Внутрисерийная и межсерийная воспроизводимость Оценка внутрисерийной и межсерийной воспроизводимости набора реагентов проведена путём сравнения результатов, полученных при исследовании одних и тех же 16 образцов биоматериала по 25 показателям (выявляемым ДНК условно-патогенных бактерий классов Bacilli, Betaproteobacteria и Gammaproteobacteria). Внутрисерийная воспроизводимость составляет 100% (95% доверительный интервал 99,08-100%). Межсерийная воспроизводимость составляет 100% (95% доверительный интервал 99,08-100%). 1.‘Ч --- стр. 20 --- ^ ^ ДНК-ТЕХНОЛОГИЯ Инструкция по применению Лист 20 БакСкрин УПМ Листов 34 6.2.7 Бактериальные культуры Взятие материала с жидких и плотных сред осуществляется при помощи одноразовой микробиологической петли или шпателя. Поместите в одноразовую пластиковую пробирку объёмом 1,5-2,0 мл, в которую предварительно внесено 500 мкл стерильного физиологического раствора, одиночную колонию клеток или 100 мкл жидкой среды. После взятия материала пробирку плотно закрывают крышкой и маркируют. 6.3 Транспортирование и хранение исследуемых образцов 6.3.1 Мокрота Образцы мокроты допускается транспортировать и хранить: - при комнатной температуре от 18 °С до 25 °С~ не более 6 часов; - при температуре от 2 °С до 8 °С - не более 3 суток. 6.3.2 Нативные и предварительно обработанные образцы мочи: Нативные и предварительно обработанные образцы мочи допускается транспортировать и хранить: - при температуре от 2 °С до 8 °С - не более одних суток; - при температуре от минус 18 °С до минус 20 ®С - не более одной недели; - при температуре минус 70 °С - длительно. ВНИМАНИЕ! Допускается лишь однократное замораживание-оттаивание материала. 6.3.3 Мазки\соскобы из дыхательных путей, желудочно-кишечного и урогенитального тракта, экссудаты Сроки хранения мазков\соскобов из дыхательных путей, желудочно-кишечного и урогенитального тракта, экссудатов определяются инструкцией к рекомендуемому набору/комплекту реагентов для выделения ДНК. 6.3.4 Образцы нативных фекалий Образцы нативных фекалий допускается транспортировать и хранить: - при комнатной температуре от 18 ®С до 25 °С - не более 6 часов; - при температуре от 2 ®С до 8 °С - не более 3 суток. 6.3.5 Аспират, бактериальные культуры: Аспират, бактериальные культуры допускается транспортировать и хранить: - при температуре от 2 °С до 8 ®С - не более одних суток; - при температуре от минус 18 °С до минус 20 °С - не более одной недели; - при температуре минус 70 ®С — длительно. ВНИМАНИЕ! Допускается лишь однократное замораживание-оттаивание материала. 20 --- стр. 21 --- ^ Д Н К - Т Е Х Н О Л О Г И Я Инструкция по применению Лист 21 БакСкрин УПМ Листов 34 6.4 Подготовка биологического материала для исследования. ВНИМАНИЕ! Относительное ускорение центрифуги (RCF или g) зависит от частоты вращения и радиуса ротора (Приложение А). Для определения соответствия центрифуги заданным параметрам центрифугирования обратитесь к руководству по эксплуатации. 6.4.1 Мокрота 6.4.1.1 Способ № 1 6.4.1.1.1 Перенесите в одноразовую пластиковую пробирку примерно 500 мкл биологического материала. 6.4.1.1.2 Добавьте к пробе мокроты равный объём 10% трехзамещённого фосфорнокислого натрия х12Н20, плотно закройте крышкой и интенсивно встряхните. 6.4.1.1.3 Инкубируйте смесь при температуре 37 °С в течение 18-24 часов, затем нейтрализуйте 1 М НС1 до pH 6,8-7,4. 6.4.1.1.4 Центрифугируйте при 900 х g в течение 20 мин при комнатной температуре (от 18 °С до 25 °С). 6.4.1.1.5 Удалите надосадочную жидкость в ёмкость с 5 % раствором хлорамина для обеззараживания. 6.4.1.1.6 Добавьте к осадку 500 мкл дистиллированной воды, перемешайте пипетированием и перенесите в одноразовую пластиковую пробирку объёмом 1,5 мл. 6.4.1.1.7 Центрифугируйте пробирку при 16000 х g в течение 10 мин при комнатной температуре (от 18 до 25 °С). 6.4.1.1.8 Удалите надосадочную жидкостъ, оставив в пробирке 100 мкл (осадок + жидкая фракция). 6.4.1.2 Способ №2 6.4.1.2.1 Добавьте в контейнер с образцом муколизин в соотношении 5:1 (5 частей муколизина к одной части мокроты), ориентируясь по градуировке контейнера. 6.4.1.2.2 Закройте крышку контейнера, встряхните содержимое и инкубируйте 20- 30 мин при комнатной температуре (от 18 °С до 25 ®С), каждые 2-3 мин встряхивая контейнер. 6.4.1.2.3 Проведите выделение ДНК согласно инструкции к комплекту реагентов «Комплект реагентов для выделения нуклеиновых кислот (ПРОБА-НК/ПРОБА-НК-ПЛЮС) по ТУ 9398-035-46482062-2009» в форме комплектации: комплект ПРОБА-НК-ПЛЮС (ООО «НПО ДНК-Технология», Россия, РУ № фСР 2010/08867). 21 --- стр. 22 --- ^ Д Н К - Т Е Х Н О Л О Г И Я Инструкция по применению Лист 22 БакСкрин УПМ Листов 34 6.4.2 Моча 6.4.2.1 Перенесите в одноразовую пластиковую пробирку объёмом 1,5 мл 1,0 мл мочи. 6.4.2.2 Центрифугируйте пробирку при 16000 х g в течение 10 мин при комнатной температуре (от 18 °С до 25 °С). 6.4.2.3 Наиболее полно удалите надосадочную жидкость. 6.4.2.4 Добавьте к осадку 1,0 мл стерильного физиологического раствора, перемешайте на микроцентрифуге-вортексе в течение 5-10 с. 6.4.2.5 Центрифугируйте пробирку при 16000 х g в течение 10 мин при комнатной температуре (от 18 °С до 25 °С). 6.4.2.6 Удалите надосадочную жидкость, оставив в пробирке 100 мкл (осадок + жидкая фракция). 6.4.3 Мазки\соскобы из дыхательных путей, желудочно-кишечного и урогенитального тракта, аспираты, экссудаты, бактериальные культуры с жидких и плотных сред 6.4.3.1 Центрифугируйте пробирку при 16000 х g в течение 10 мин при комнатной температуре (от 18 ®С до 25 ®С). 6.4.3.2 Удалите надосадочную жидкость, оставив в пробирке 100 мкл (осадок + жидкая фракция). 6.4.4 Фекалии 6.4.4.1 Перенесите в одноразовую пластиковую пробирку объёмом 1,5 мл с 1,0 мл стерильного физиологического раствора примерно 250 мг (мкл) фекалий, закройте крышку пробирки. 6.4.4.2 Встряхните пробирку на микроцентрифуге-вортексе в течение 5-10 с. 6.4.4.3 Центрифугируйте пробирку при 900 х g в течение 2-3 мин при комнатной температуре (от 18 ®С до 25 °С). 6.4.4.4 Перенесите 800-1000 мкл надосадочной жидкости в новую одноразовую пробирку объёмом 1,5 мл, центрифугируйте при 16000 х g в течение 10 мин при комнатной температуре (от 18 ®С до 25 ®С). 6.4.4.5 Удалите надосадочную жидкость, оставив в пробирке 100 мкл (осадок + жидкая фракция). 22 --- стр. 23 --- ^ ДНК-ТЕХНОЛОГИЯ Инструкция по применению Лист 23 БакСкрин УПМ Листов 34 Дальнейшая обработка указанных выше видов биологического материала осуществляется согласно инструкции к комплекту реагентов «Комплект реагентов для выделения нуклеиновых кислот (ПРОБА-НК/ПРОБА-НК-ПЛЮС) по ТУ 9398-035-46482062-2009» в форме комплектации: комплект ПРОБА-НК-ПЛЮС (ООО «НПО ДНК-Технология», Россия, РУ №ФСР 2010/08867). 23 --- стр. 24 --- ^ |^ Д Н К ТЕХН О Л О ГИ Я Инструкция по применению Лист 24 БакСкрин УПМ Листов 34 7 ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА 7.1 Выделение ДНК из биологического материала Выделение ДНК из исследуемого материала проводят в соответствии с инструкцией к используемому набору/комплекту реагентов. Для выделения ДНК рекомендуется использовать «Комплект реагентов для выделения нуклеиновых кислот (ПРОБА-НК/ПРОБА-НК-ПЛЮС) по ТУ 9398-035-46482062- 2009» в форме комплектации: комплект ПРОБА-НК-ПЛЮС (ООО «НПО ДНК-Технология», Россия, РУ № ФСР 2010/08867). ВНИМАНИЕ! Одновременно с выделением ДНК из биологического материала необходимо подготовить отрицательный контрольный образец и провести его через все этапы пробоподготовки. В качестве отрицательного контрольного образца рекомендуется использовать физиологический раствор стерильный. 7.2 Подготовка и проведение ПЦР ВНИМАНИЕ! При проведении всех последующих действий следует избегать воздействия прямых солнечных лучей на пробирки со смесью для амплификации! ВНИМАНИЕ! Следует строго соблюдать комплектность стрипов и крышек к ним. Не использовать крышки к стрипам из других наборов реагентов! 7.2.1 Промаркируйте два стрипа со смесями для амплификации, запечатанными парафином (один Стрип №1 и один Стрип №2, всего 16 пробирок): для каждого исследуемого образца, для положительного контрольного образца (К+) и для отрицательного контрольного образца (К-). Пример: Необходимо проанализировать два образца. Для этого необходимо промаркировать восемь стрипов: четыре для исследуемых образцов, два для «К+» и два для «К-» (таблица 2). Таблица 2 -Пример маркировки стрипов для проведения ПЦР Образец Порядковый № стрипа Тип стрипа Образец А 1 Стрип №1 2 Стрип №2 Образец Б 3 Стрип №1 4 Стрип №2 К- 5 Стрип №1 6 Стрип №2 К+ 7 Стрип №1 8 Стрип №2 ТА. --- стр. 25 --- ^ ^ ДНК-ТЕХНОЛОГИЯ Инструкция по применению Лист 25 БакСкрин УПМ Листов 34 7.2.2 Встряхните пробирку с раствором Taq-полимеразы в течение 3-5 с на микроцентрифуге-вортексе и центрифугируйте в течение 1-3 с на микроцентрифуге- вортексе. 7.2.3 Внесите в каждую пробирку промаркированных стрипов, не повреждая слой парафина, по 10 мкл раствора Taq-полимеразы. • 7.2.4 Внесите в каждую пробирку промаркированных стрипов по одной капле (около 20 мкл) минерального масла. Закройте крышки стрипов. 7.2.5 Встряхните пробирки с препаратом ДНК, положительным контрольным образцом (К+) и отрицательным контрольным образцом (К-) в течение 3-5 с на микроцентрифуге-вортексе и центрифугируйте в течение 1-3 с на микроцентрифуге- вортексе. ВНИМАНИЕ! Для предотвращения контаминации следует перед внесением ДНК открывать крышку только того стрипа, в который будет вноситься данный образец, и закрывать её перед внесением следующего. Препараты ДНК следует вносить наконечниками с фильтром. Закрывайте стрипы плотно. 7.2.6 Внесите в каждую пробирку соответствующих промаркированных стрипов, не повреждая слой парафина, по 5,0 мкл выделенного из образца препарата ДНК. В стрипы, промаркированные «К+» и «К-», ДНК не вносится. 7.2.7 Внесите в каждую пробирку стрипов промаркированных «К+», не повреждая слой парафина, по 5,0 мкл положительного контрольного образца. 7.2.8 Внесите в каждую пробирку стрипов промаркированных «К-», не повреждая слой парафина, по 5,0 мкл отрицательного контрольного образца, прошедшего этап выделения ДНК. 7.2.9 Центрифугируйте стрипы в течение 1-3 с на микроцентрифуге-вортексе. 7.2.10 Установите все стрипы в блок детектирующего амплификатора. 7.2.11 Запустите программное обеспечение детектирующего амплификатора в режиме «Работа с прибором». Укажите количество и идентификаторы образцов, отметьте расположение стрипованных пробирок на матрице термоблока в соответствии с их установкой (см. 7.2.10) и проведите ПЦР по программе амплификации, приведённой в таблице 3. 25 --- стр. 26 --- ^ ДНК-ТЕХНОЛОГИЯ Инструкция по применению Лист 26 БакСкрин УПМ Листов 34 Таблица 3- Программа амплификации для детектирующих амплификаторов «ДТпрайм», «ДТлайт» и ДТ-96 № блока Температура °С Мин. с Число циклов Режим оптических измерений Тип блока 1 80 0 30 1 Цикл94 1 30 2 94 0 30 5 Цикл 64 0 15 V 3 94 0 10 45 Цикл64 0 15 V 4 94 0 5 1 Цикл 5 10 Хранение Хранение Примечания: 1. Параметры, которые вводят при создании нового теста (программа амплификации, используемые каналы детекции, объём реакционной смеси и т.п.) можно сохранить в виде готового файла. 2. При последующих постановках добавьте в протокол соответствующий тест, укажите количество и идентификаторы образцов, в том числе положительного и отрицательного контрольных образцов, отметьте расположение пробирок на матрице термоблока в соответствии с их установкой и проведите ПЦР. _26_ --- стр. 27 --- ^>^Д Н К ТЕХН О Л О ГИ Я Инструкция по применению Лист 27 БакСкрин УПМ Листов 34 8 РЕГИСТРАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ АМПЛИФИКАЦИИ 8Л Регистрация сигнала флуоресценции проводится прибором автоматически во время амплификации. 8.2 Учёт и регистрация результатов реакции осуществляется автоматически с помощью программного обеспечения, поставляемого с детектирующим амплификатором. 8.3 После окончания программы амплификации на экране появится соответствующее информационное сообщение и будет предложено перейти к анализу результатов. На графике будет отображена зависимость флуоресценции от номера цикла по всем используемым каналам, для каждой пробирки в термоблоке После прохождения амплификации программное обеспечение сравнивает заданное оператором расположение пробирок с реальным положением маркера (флуоресцентной метки Rox), и, если находит несовпадение, то предупреждает оператора об этом. В этом случае необходимо проверить расположение стрипов в термоблоке (первая пробирка Стрип №1 и вторая пробирка Стрип №2 отмечены голубым буфером) и скорректировать идентификаторы пробирок в протоколе. 9 ИНТЕРПРЕТАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ АМПЛИФИКАЦИИ 9.1 В образцах материала, содержащих ДНК выявляемых бактерий, во время проведения амплификации детектирующий амплификатор фиксирует положительные результаты амплификации специфических продуктов в соответствующих пробирках по соответствующим каналам детекции (см. таблицу 1). После завершения ПЦР программа отображает в таблице в графе «Результат» «+». 9.2 В образцах материала, не содержащих ДНК выявляемых бактерий, при проведении амплификации детектирующий амплификатор фиксирует отрицательные результаты амплификации специфических продуктов в соответствующих пробирках по заявленным каналам детекции и положительный результат амплификации внутреннего контроля (пробирка №16 - без ВК). После завершения ПЦР программа отображает в таблице в графе «Результат» «-». 9.3 Для отрицательного и положительного контрольных образцов должны быть получены результаты, приведённые в таблице 4. При получении для положительного контрольного образца результатов, отличающихся от указанных в таблице 4, результаты всей постановочной серии бракуют. При получении для отрицательного контрольного образца результатов, отличающихся от указанных в таблице 4, результаты всей постановочной серии бракуют. В этом случае необходимо проведение специальных мероприятий для выявления и устранения возможной контаминации. 2 1_ --- стр. 30 --- ^ ^ ЛНК-ТЕХНОЛОГНЯ Инструкция по применению Лист 30 БакСкрин УПМ Листов 34 1 о ТРАНСПОРТИРОВАНИЕ, ХРАНЕНИЕ И ЭКСПЛУАТАЦИЯ ЮЛ Транспортирование ЮЛ Л Транспортирование набора реагентов осуществляют в термоконтейнерах с хладоэлементами всеми видами крытого транспорта при температуре от 2 ®С до 25 ®С не более 5 суток. ЮЛ .2 Наборы реагентов, транспортированные с нарушением температурного режима, применению не подлежат. 10.2 Хранение 10.2.1 Набор реагентов следует хранить в холодильнике или холодильной камере при температуре от 2 ®С до 8 ®С в течение всего срока годности набора реагентов. 10.2.2 Смеси для амплификации, запечатанные парафином, следует хранить в холодильнике или холодильной камере при температуре от 2 °С до 8 ®С в защищённом от света месте в течение всего срока годности набора реагентов. 10.2.3 Наборы реагентов, хранившиеся с нарушением регламентированного режима, применению не подлежат. 10.3 Указания по эксплуатации 10.3.1 Набор реагентов должен применяться согласно действующей версии утвержденной инструкции по применению. 10.3.2 Для получения достоверных результатов необходимо строгое соблюдение инструкции по применению набора реагентов. 10.3.3 После вскрытия упаковки компоненты набора реагентов следует хранить при следующих условиях: - компоненты набора реагентов следует хранить в холодильнике или холодильной камере при температуре от 2 °С до 8 ®С в течение всего срока годности набора реагентов; - смеси для амплификации, запечатанные парафином, следует хранить в холодильнике или холодильной камере при температуре от 2 до 8 °С в защищённом от света месте в течение всего срока годности набора реагентов. 10.3.4 Наборы реагентов с истекшим сроком годности применению не подлежат. 11 УКАЗАНИЯ ПО УТИЛИЗАЦИИ 11.1 При использовании набора реагентов в клинико-диагностической лаборатории образуются отходы класса В, которые утилизируются в соответствии с требованиями СанПиН 2.1.3684-21 и МУ 1.3.2569-09. Ж --- стр. 31 --- ^ Д Н К ТЕХН О Л О ГИ Я Инструкция по применению Лист 31 БакСкрин УПМ Листов 34 11.2 Наборы реагентов, пришедшие в непригодность, в том числе в связи с истечением срока годности, подлежат утилизации в соответствии с требованиями СанПиН 2.1.3684-21. 12 ГАРАНТИИ ИЗГОТОВИТЕЛЯ 12.1 Предприятие-изготовитель гарантирует соответствие набора реагентов требованиям технических условий при соблюдении условий транспортирования, хранения и эксплуатации, установленных техническими условиями. 12.2 Срок годности набора реагентов - 12 месяцев при соблюдении всех условий транспортирования, хранения и эксплуатации. 13 РЕМОНТ И ТЕХНИЧЕСКОЕ ОБСЛУЖИВАНИЕ 13.1 Набор реагентов предназначен для одноразового использования и не подлежит техническому обслуживанию и текущему ремонту. 14 СИМВОЛЫ, ИСПОЛЬЗУЕМЫЕ ПРИ МАРКИРОВКЕ НАБОРА РЕАГЕНТОВ |lVD Медицинское изделие для диагностики in vitro □Й Обратитесь к инструкции по применению Температурный диапазон Каталожный номер V Количество тестов м1 Адрес изготовителя 2 Годен до Не стерильно Ilot! Серия набора (S) Одноразовое использование Дата изготовления ш Не допускается воздействие солнечного света 31 --- стр. 32 --- ^ Д Н К ТЕХН О Л О ГИ Я Инструкция по применению Лист 32 БакСкрин УПМ Листов 34 15 ПЕРЕЧЕНЬ ПРИМЕНЯЕМЫХ НАЦИОНАЛЬНЫХ СТАНДАРТОВ ГОСТ Р 2.105-2019 Единая система конструкторской документации (ЕСКД). Общие требования к текстовым документам. ГОСТ ISO 14971-2011 Изделия медицинские. Применение менеджмента риска к медицинским изделиям. ГОСТ 15.309-98 Система разработки и постановки продукции на производство (СРПП). Испытания и приемка выпускаемой продукции. Основные положения. ГОСТ Р 51088-2013 Медицинские изделия для диагностики ин витро. Реагенты, наборы реагентов, тест-системы, контрольные материалы, питательные среды. Требования к изделиям и поддерживающей документации. ГОСТ Р 51352-2013 Медицинские изделия для диагностики ин витро. Методы испытаний. ГОСТ Р ИСО 18113-1-2015 Медицинские изделия для диагностики in vitro. Информация, предоставляемая изготовителем (маркировка). Часть 1. Термины, определения и общие требования. ГОСТ Р ИСО 18113-2-2015 Медицинские изделия для диагностики in vitro. Информация, предоставляемая изготовителем (маркировка). Часть 2. Реагенты для диагностики in vitro для профессионального применения. ГОСТ Р ИСО 23640-2015 Изделия медицинские для диагностики in vitro. Оценка стабильности для диагностики in vitro. ГОСТ Р ИСО 15223-1-2020 Изделия медицинские. Символы, применяемые при маркировании медицинских изделий, на этикетках и в сопроводительной документации. Ч. 1. Основные требования. ГОСТ Р 52905-2007 (ИСО 15190:2003) Лаборатории медицинские. Требования безопасности. Примечание - Указанные выше стандарты были действующими на момент утверждения инструкции по применению. В дальнейшем, при пользовании документом, целесообразно проверить действие ссылочных нормативных документов на текуший момент. Если ссылочный документ заменён или изменён, то при применении настояшего документа следует пользоваться заменённым (изменённым) документом. 32 --- стр. 33 --- ^ ДНК-ТЕХНОЛОГИЯ Инструкция по применению Лист 33 БакСкрин УПМ Листов 34 16 АДРЕС для ОБРАЩЕНИЯ Производство наборов реагентов имеет сертифицированную систему менеджмента качества и соответствует требованиям стандарта систем менеджмента качества ISO 9001 в области разработки, производства и продажи IVD реагентов и приборов для молекулярно генетической диагностики и другого лаборатортого применения и EN ISO 13485 в области разработки, производства и продажи IVD реагентов и приборов для медицинской молекулярно-генетической диагностики. Производитель: Общество с ограниченной ответственностью <ДНК-Технология ТС»; ООО <ДНК-Технология ТС», Россия. Адрес производителя: Россия, 117246, г. Москва, Научный проезд, д. 20, стр. 4. Место производства: ООО <ДНК-Технология ТС»: Россия, 117246, г. Москва, Научный проезд, д. 20, стр.4. По вопросам, касающимся качества набора реагентов БакСкрин УПМ, следует обращаться по адресу: ООО «ДНК-Технология», 117587, г. Москва, вн. тер. г. муниципальный округ Чертаново Северное, Варшавское шоссе, дом 125Ж, корпус 5, этаж 1, пом.12, тел./факс +7 (495) 640-17-71, www.dna-technologv.ru. Служба клиентской поддержки: 8 (800) 200-75-15 (звонок по России бесплатный), +7(495) 640-16-93 (для стран СНГ и зарубежья, звонок платный), E-mail: hotline@dna-technology.ru Старший научный сотрудник ООО «НПФ ДНК-Технология» к.б.н. СОГЛАСОВАНО Главный врач ГКБ №67 им. Л.А. Ворохобова ДЗМ, доктор медицинских наук, пр Артемова Л.В 2022 г. 3.3 --- стр. 34 --- ЛИК-ТЕХНОЛОГИЯ Инструкция по применению Лист 34 БакСкрин УПМ Листов 34 приложение А (справочное) Номограмма и формула перевода относительного ускорения центрифуги (RCF) в скорость вращения (RPM) в зависимости от диаметра ротора $ 34 --- стр. 35 --- Прошито, пронумеровано и )еплено пвнатью 3 ^