Набор реагентов для выявления РНК коронавируса SARS-CoV-2 методом петлевой изотермальной амплификации "МагниТест" по ТУ 21.20.23-096-26329720-2020 — инструкция и характеристики
Открытые закупки, где изделие проходит ТЗ
Сейчас открытых закупок, где изделие полностью проходит ТЗ, нет; список обновляется каждый день.
Построчная сверка ТЗ с характеристиками этого изделия и все закупки под ваши товары — в кабинете, 7 дней бесплатно.
Попробовать бесплатно
Текст инструкции: технические характеристики
--- стр. 1 --- АО «ГЕНЕРИУМ» 601125, Владимирская обл., Петушинский район, пос. Вольгинский, ул. Заводская, стр. 273 УТВЕРЖДАЮ Генерг АО Талянский 2 0 2 / г. ИНСТРУКЦИЯ по применению медицинского изделия для диагностики in vitro «Набор реагентов для выявления РНК коронавируса SARS-CoV-2 методом петлевой изотермальной амплификации «МагниТест»» по ТУ 21,20.23-096-26329720-2020 --- стр. 2 --- НАЗНАЧЕНИЕ «Набор реагентов для выявления РНК коронавируса SARS-CoV-2 методом петлевой изо- термальной амплификации «МагниТест»» по ТУ 21.20.23-096-26329720-2020 (далее по тексту - набор реагентов), предназначен для качественного выявления РНК коронавируса SARS-CoV-2 в образцах, полученных из назальных и/или назофарингеальных мазков (далее по тексту - анализи руемые образцы), методом петлевой изотермальной амплификации у лиц с клинической симпто матикой респираторного заболевания с подозрением на инфекцию COVID-19 (или у лиц, не име ющих признаков простудных заболеваний и не являющихся контактными с больными СОУГО-19). Функциональное назначение: вспомогательное средство в диагностике in vitro (выявление РНК коронавируса SARS-CoV-2). Область применения - клиническая лабораторная диагностика. Сокращенное наименование медицинского изделия для диагностики in vitro «МагниТест» ПРЕДНАЗНАЧЕННЫЙ ПОЛЬЗОВАТЕЛЬ НАБОРА РЕАГЕНТОВ Только для профессионального использования. Сотрудники клинико-диагностических лабораторий медицинских учреждений, специально обученные методам ПЦР в реальном времени. ХАРАКТЕРИСТИКА НАБОРА РЕАГЕНТОВ 1 Состав набора реагентов Набор реагентов предназначен для ручной постановки автоматической станции для выделения нуклеиновых кислот (далее станции). Таблица 1 - Комплектность набора реагентов анализа или с помощью по тексту - автоматической Наименование Количество Компоненты «К+» - положительный контроль - прозрачная бесцветная жид кость. Консервант: 0,1 % проклин 300 1 пробирка (100 мкл) «К-» - отрицательный контроль - прозрачная бесцветная жид кость. Консервант: 0,1 % проклин 300 1 пробирка (100 мкл) «РС» - реакционная смесь - прозрачная бесцветная жидкость, при хранении может приобретать цвет от желтого до коричневого, что не влияет на качество. Консерванты: 0,1 % проклин 300 2 пробирки (по 1,5 мл) «Фермент» - Bst-полимераза - прозрачная бесцветная жидкость. Консервант: 0,1 % проклин 300 1 пробирка (220 мкл) «ЛБ» - лизирующий буфер - прозрачная бесцветная или светло- желтого цвета жидкость с магнитными частицами. Допускается расслоение на надосадочную жидкость и осадок магнитных ча- шщ. Допускается выпадение кристаллов и хлопьев белого цвета. Консервант: 0,1 % проклин 300 1 флакон (28 мл) «РП» - раствор для преципитации - прозрачная бесцветная жид кость 1 флакон (31 мл) «ПР-Ь> - промывочный раствор-1 - прозрачная бесцветная жид кость. Консервант: 0,1 % проклин 300 1 флакон (55 мл) или 2 флакона (по 30 мл) «ПР-2» - промывочный раствор-2 - прозрачная бесцветная жид- 1 флакон (22 мл) --- стр. 3 --- кость «ЭР» - элюирующий раствор - прозрачная бесцветная жидкость. Консервант: 0,1 % проклин 300 1 флакон (7 мл) Планшет 96-луночный для проведения ПЦР 1 шт. Пленка для ПЦР планщета 96-луночного 1 щт. Эксплуатационная документация Инструкция по применению набора реагентов 1 шт. Примечание Паспорт на серию входит в комплект поставки набора реагентов. Число экземпляров паспорта каждой серии, определено в договоре на поставку продукции. 2 Число анализируемых образцов биологического материала Набор реагентов предназначен для выполнения 96 определений, включая контрольные образ цы. 3 Принцип метода Для определения наличия или отсутствия инфекционных агентов в биологических жидкостях человека проводят амплификацию генетического материала возбудителя инфекции. Помимо ши роко распространенного метода амплификации нуклеиновых кислот полимеразной цепной реак цией на сегодняшний день применяется петлевая изотермальная амплификация. В основе данной методики лежит реакция синтеза нуклеиновых кислот с вытеснением цепи, катализируемая Bst- полимеразой из термофильной бактерии Bacillus stearothermophilus. Отличительными особенностями петлевой изотермальной амплификации является проведение реакции при постоянной температуре 60 - 65 ®С, быстрое накопление продуктов реакции (15 - 60 мин), возможность совмещения реакции с обратной транскрипцией (оба процесса осуществляется одним ферментом, Bst-полимеразой), низкой чувствительностью к примесям, возможность использования в качестве исходной матрицы кровь или другие биологические жидкости. Выявление наличия или отсутствия РНК коронавируса SARS-CoV-2 в биологических жидкостях человека включает в себя две стадии: экстракцию РНК коронавируса SARS-CoV-2 из анализируемых образцов с последующей сорбцией на магнитные частицы, отмывкой и элюцией и петлевую изотермальную амплификацию, с использованием специфических олигонуклеотидных последовательностей и модифицированной Bst-полимеразы из термофильной бактерии Bacillus , stearothermophilus. Для контроля анализа в наборе реагентов предусмотрены контрольные образцы: «К+» и «К-». ХАРАКТЕРИСТИКА НАБОРА РЕАГЕНТОВ Контрольные образцы «К+» и «К-» используются для контроля проведения реакции петлевой изотермальной амплификации при выявлении РНК коронавируса SARS-CoV-2 в анализируемых образцах. «К-» (Отрицательный контроль), представляет собой раствор, НЕ содержащий плазмиду со вставкой фрагмента РНК коронавируса SARS-CoV-2. «К+» (Положительный контроль), представляет собой раствор, содержащий плазмиду со вставкой фрагмента РНК коронавируса SARS-CoV-2 в концентрации не менее 10 000 копий РНК коронавируса SARS-CoV-2 на 1 мл образца. Метрологическая прослеживаемость «К+» была обеспечена флуориметрическим методом раствора для приготовления «К+» и дальнейщим его последовательным разведением до нужной концентрации РНК SARS-CoV-2. «РС» (Реакционная смесь), представляет собой смесь специфических олигонуклеотидных последовательностей в необходимом для проведения реакции буферном растворе. «Фермент» (Bst-полимераза), представляет собой раствор фермента Bst-полимеразы в необходимом для проведения реакции буферном растворе. --- стр. 4 --- «ЛБ», представляет собой буферный раствор с магнитными частицами для лизирования вируса. «РП» представляет собой раствор для осаждения нуклеиновых кислот на магнитные частицы. «ПР-1» представляет собой буферный раствор для промывки магнитных частиц от остатков «ЛБ» и «РП». «ПР-2» представляет собой раствор для промывки магнитных частиц от остатков «ПР-1». «ЭР» представляет собой буферный раствор для смывания нуклеиновых кислот с поверхности магнитных частиц. АНАЛИТИЧЕСКИЕ И ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ НАБОРА РЕАГЕНТОВ 1 Чувствительность Чувствительность набора реагентов определяли с использованием рабочей панели образцов «РП MT-PHK(+/-)SARS-CoV-2», содержащих стабилизированный фрагмент РНК коронавируса SARS-CoV-2, (далее по тексту - рабочая панель образцов), аттестованной отделом биологического и технологического контроля (далее по тексту - ОБТК), ООО «Медико-биологический Союз». Чувствительность набора реагентов с образцами рабочей панели без ложноотрицательных результатов должна быть не менее 100 %. 2 Предел обнаружения Предел обнаружения (LoD) набора реагентов определяли с использованием рабочей панели образцов, аттестованной ОБТК ООО «Медико-биологический Союз» и Стандарт «SARS-CoV-2 Standard» производства Exact Diagnostics LLC (Bio-Rad). Предел обнаружения для всех типов анализируемых образцов набора реагентов составляет 1000 копий РНК коронавируса SARS-CoV-2 на 1 мл образца при выделении РНК коронавируса SARS-CoV-2 с использованием компонентов набора реагентов «МагниТест» и с использованием «ПРОБА-НК/ПРОБА-НК-ПЛЮС», производства ООО «НПО ДНК-Технологая» (см. раздел «Подготовка анализируемых образцов»). 3 Диагностическая чувствительность Диагностическую чувствительность выявления РНК коронавируса SARS-CoV-2 определяли в ходе клинико-лабораторных испытаний на 99 положительных образцах, показана 100 % чувствительность (97,02%, интервал (95,1-100,0) %, с доверительной вероятностью 95%). 4 Специфичность Специфичность набора реагентов определяли с использованием рабочей панели образцов, аттестованной ОБТК ООО «Медико-биологический Союз». Специфичность набора реагентов с образцами рабочей панели без ложноположительных результатов должна быть не менее 100 %. 5 Диагностическая специфичность Диагностическую специфичность выявления РНК коронавируса SARS-CoV-2 определяли в ходе клинике-лабораторных испытаний на 149 отрицательных образцах, показана 100 % специфичность (98,01%, интервал (96,3-100,0) %, с доверительной вероятностью 95%). 6 Аналитическая специфичность Аналитическая специфичность набора реагентов проверялась in silico со следующими Коронавирус 229Е Риновирус Коронавирус ОС43 Параэховирус Коронавирус НКШ Candida albicans Коронавирус NL63 Corynebacterium diphtheriae SARS-коронавирус Legionella pneumophila MERS- коронавирус Bacillus anthracis (Anthrax) Аденовирус Moraxella catarrhalis Метапневмовирус человека Neisseria elongata and Neisseria meningitidis Парагрипп первого типа Pseudomonas aeruginosa Парагрипп второго типа Staphylococcus epidermidis Парагрипп третьего типа Streptococcus salivarius --- стр. 5 --- •et Парагрипп четвертого типа Leptospira sp. Грипп типа А Chlamydophila pneumoniae Грипп типа В Chlamydophila psittaci Грипп типа С Coxiella burnetii (Q-Fever) Энтеровирус Staphylococcus aureus Респираторный синцитиальный вирус типа А Haemophilus influenzae Респираторный синцитиальный вирус типа В Legionella pneumophila Bordetella pertussis Mycobacterium tuberculosis Mycoplasma pneumoniae Streptococcus pneumoniae Pneumocystis jirovecii (PJP) Streptococcus pyogenes Для анализа использовали он-лайн доступные ресурсы: BLAST (https://blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi ), а также MUSCLE ( https://www.ebi.ac.uk/Tools/msa/muscle/ ). Среди протестированных организмов, только для SARS-коронавируса показана гомология с фрагментом последовательности участка SARS-CoV-2, которая составляет 82%. С такой степенью гомологии невысока вероятность получения какого-либо значимого сигнала в представленной диагностической системе. Гомология праймеров составила 100% для всех последовательностей SARS-CoV-2, представленных в GenBank по состоянию на 07 сентября 2020 года. Для всех других проанализированных микроорганизмов гомология не обнаружена. Аналитическая специфичность набора реагентов проверялась ш vitro на базе ООО «МБС- Технология» на: Streptococcus pneumoniae, Haemophilus influenzae, вирус парагриппа, вирус гриппа А, Аденовирус, Вирус гриппа В, Метапневмовирус, Респираторно-синцитиальный вирус (РСВ), Риновирус, Legionella pneumophila. Максимальные концентрации исследованных организмов, при которых они не влияют на Инфекция Концентрация Streptococcus pneumoniae ATCC 49619 1х10*КОЕ/мл Haemophilus influenza № 3689 IxlO'KOE/Mn Вирус парагриппа тип 1 1х10^БОЕ/мл Вирус гриппа А H1N1 1х10"БОЕ/мл Вирус гриппа В Victoria 1x10' БОЕ/мл Аденовирус Ad26 1x10' копий/мл Метапневмовирус НМ-1 1x10'БОЕ/мл Респираторно- синцитиальный вирус А2 1x10' БОЕ/мл Риновирус JH2060 1x10' БОЕ/мл Legionella pneumophila ATCC 33152 1x10" КОЕ/мл Проведенные анализы in silico и in vitro указывают на то, что неспецифическая амплификация, которая могла бы привести к перекрестной реакции или повлиять на амплификацию целевого участка SARS-CoV-2, крайне маловероятна. 7 Воспроизводимость Внутрисерийная воспроизводимость анализа была протестирована в ходе клинико лабораторных испытаний с использованием девяти положительных образцов, полученных из назальных и/или назофарингеальных мазков в 5 повторах на наборах реагентов одной серии. Ко эффициент вариации не превысил 10 %. Межсерийная воспроизводимость анализа была протестирована в ходе клинико-лабораторных испытаний с использованием девяти положительных образцов, полученных из назальных и/или назофарингеальных мазков на 2 сериях набора реагентов. Коэффициент вариации не превысил 10 % . 8 Интерферирующие вещества Наличие эндогенных интерферирующих веществ: муцина (до 5 % w ) или цельной крови (до 5 % w ) в назальных и/или назофарингеальных мазках не влияют на результат анализа. Наличие экзогенных интерферирующих веществ: хлоргексидина (0,5 % w ) или хлорида натрия --- стр. 9 --- штатив для пробирок; глубокодонные планшеты для выделения нуклеиновых кислот (при необходимости); «Комплект реагентов для выделения нуклеиновых кислот (ПРОБА-НК/ПРОБА-НК-ПЛЮС) по ТУ 9398-035-46482062-2009 в двух формах комплектации: комплект ПРОБА-НК и комплект ПРОБА-НК-ПЛЮС», производства ООО «НПО ДНК-Технология», Per. удостоверение № ФСР 2010/08867 (при необходимостиУ АНАЛИЗИРУЕМЫЕ ОБРАЗЦЫ ^ Идентификацию и прослеживаемость проб пациента (назальные, назофарингеальные мазки слизистой верхних дыхательных путей) проводить в соответствии с системой менеджмента качества лаборатории. Взятие, упаковку, хранение и транспортирование анализируемых образцов осуществлять согласно МР 3.1.0169-20 «Организация лабораторной диагностики C0VID-19», МУ 1.3. 2569-09 «Организация работы лабораторий, использующих методы амплификации нуклеиновых кислот при работе с материалом, содержащим микроорганизмы I-IV групп патогенности», «Временным методическим рекомендациям по лабораторной диагностике нового коронавируса 2019 (2019- nCoV) методом полимеразной цепной реакции (ПЦР)» и рекомендациям ВОЗ (WHO. Laboratory 0 testing for coronavirus disease (COVID-19) in suspected human cases Interim guidance 19 March 2020). Перед постановкой анализа анализируемые образцы, хранившиеся в морозильной камере, необходимо разморозить. Все образцы перед внесением в «ЛБ» необходимо аккуратно перемешать. Не допускается повторное замораживание/оттаивание образцов. ПРИЧИНЫ СНИЖЕНИЯ ПРАВИЛЬНОСТИ и ВОСПРОИЗВОДИМОСТИ РЕЗУЛЬТАТОВ ИЗМЕРЕНИЙ Использование компонентов набора реагентов с истекшим сроком годности. Использование компонентов из наборов реагентов разных серий или смешивание их в процес се приготовления растворов. Использование компонентов из наборов реагентов других производителей. Несоблюдение условий и сроков хранения невскрытых компонентов набора реагентов. Несоблюдение условий и сроков хранения вскрытых компонентов набора реагентов. Неправильное дозирование растворов, которое приводит как к росту, так и к снижению реги стрируемой флуоресценции. Изменение концентрации раствора за счет испарения жидкости из открытого флакона с ком- •^понентом. Недостаточное перемешивание компонентов набора реагентов. Использование для работы с компонентами, анализируемыми и контрольными образцами грязных наконечников. Неправильная утилизация ПЦР-плашек и/или пробирок после проведения реакции может при водить к контаминации лаборатории и, как следствие, получению ложноположительных результа тов в дальнейших постановках. Недостаточно быстрое и/или недостаточное охлаждение образцов после выделения и перед внесением в ПЦР-смесь может приводить к неспецифической амплификации и, как следствие, по лучению ложноположительных результатов. Замораживание набора реагентов, особенно компонента «Фермент». Использование для дезинфекции посуды, оборудования, материалов и рабочих поверхностей неразрешенных и/или оказывающих влияния на результат изотермальной петлевой амплификации дезсредств. Рекомендуется использовать, например, хлорамин, другие хлорсодержащие средства или перекись водорода. Рекомендуется использовать перчатки медицинские одноразовые нестерильные неопудренные и нарукавники одноразовые. --- стр. 10 --- проведение анализа в неблагоприятных условиях окружающей среды, например, при темпе ратуре воздуха, в лаборатории выше 25 °С и относительной влажности воздуха более 70 %. ПОДГОТОВКА ОБОРУДОВАНИЯ Для проведения анализа с помощью набора реагентов с использованием амплификатора, необходимо его подготовить заранее в соответствии с руководством по эксплуатации. ВНИМАНИЕ! Если в амплификаторе предусмотрен дополнительный нагрев крышки, то ее необходимо нагреть заранее. Для проведения выделения необходимо заранее включить нагрев термостата твердотельного до65°С. ПОДГОТОВКА АНАЛИЗИРУЕМЫХ ОБРАЗЦОВ ВНИМАНИЕ! При работе с набором реагентов и анализируемыми образцами необходимо использовать одноразовые стерильные пластиковые расходные материалы, имеющие специальную маркировку RNase-free, DNase-free. Для манипуляций с набором реагентов и анализируемыми образцами использовать одноразовые наконечники для дозаторов с аэрозольным барьером. Из анализируемых образцов необходимо выделить РНК. Выделение РНК можно провести ^ двумя методами: Метод 1 - Выделение РНК с использованием компонентов набора реагентов и Метод 2 - Выделение РНК с использованием «ПРОБА-НК/ПРОБА-НК-ПЛЮС», производства ООО «НПО ДНК-Технология». Метод 1 включает в себя варианты выделения РНК вручную и выделение РНК на автоматической станции. Выделение РНК коронавируса SARS-CoV*2 При ручном выделении Метод 1. Выделение РНК с использованием компонентов набора реагентов 1.1 Извлечь из коробки набора реагентов «ЛБ», «РП», «ПР-1», «ПР-2» и «ЭР», проверить целостность упаковки и срок годности каждого компонента набора реагентов. При обнаружении повреждения или при истечении срока годности компоненты набора реагентов следует обработать в соответствии с разделом «Утилизация набора реагентов» настоящей инструкции по примене нию. Оставшиеся компоненты набора реагентов («К+», «К-», «РС», «Фермент») убрать в холо дильник. Перед применением все вышеперечисленные компоненты («ЛБ», «РП», «ПР-1», «ПР-2» и «ЭР») инкубировать при комнатной температуре (от 17 до 27 °С) в течение 15 минут, затем ак куратно перемешать содержимое флаконов (кроме «ЛБ»). При наличии в «ЛБ» кристаллического ^ осадка или хлопьев необходимо инкубировать «ЛБ» при 65 °С до полного растворения осадка. 1.2 Промаркировать количество пробирок типа эппендорф вместимостью 1,5-2,0 мл по ко личеству анализируемых образцов. 1.3 Перемешать «ЛБ» вручную, вращая флакон между ладонями в течение 20 с или на вор- тексе, до равномерного распределения магнитных частиц в объёме раствора. Внести пипеточным дозатором по 250 мкл «ЛБ» в каждую пробирку. ВНИМАНИЕ! Необходимо периодически встряхивать «ЛБ» для перемешивания магнитных частиц во время разнесения его по пробиркам. 1.4 Перед выделением анализируемые образцы, хранившиеся в морозильной камере, необходимо разморозить. Все образцы перед внесением в «ЛБ» необходимо аккуратно перемешать. 1.5 Подготовленные анализируемые образцы встряхнуть на вортексе, осадить капли с крышки пробирки (для этого возможно использование центрифугирования в течение 1-3 секунд), затем, отобрать по 50 мкл, добавить в пробирки с «ЛБ» и аккуратно перемешать содержимое пробирки пипетированием 3-5 раз. Внимание! Необходимо использовать каждый раз новый одноразовый наконечник с аэро зольным барьером^ для каждого анализируемого образца во избежание контаминации. 10 --- стр. 11 --- 1.6 Инкубировать пробирки в твердотельном термостате при температуре 65 ®С в течение 10 минут. Внимание! Для пп. 1.7 — 1.13 рекомендуется открывать крышку только той пробирки, с ко торой идет работа, и сразу закрывать её после проведения манипуляции. НЕ открывать сра зу несколько пробирок, для исключения контаминации! 1.7 После инкубации в каждую пробирку добавить по 300 мкл «РП» одноразовым наконеч ником и аккуратно перемешать содержимое пробирки пипетированием 3-5 раз. 1.8 Инкубировать пробирки в течение 10 минут при комнатной температуре. Во время ин кубации крышки пробирок должны быть закрыты! НЕ СТАВИТЬ пробирки в магнитный штатив во время инкубации! 1.9 Поместить пробирки в магнитный штатив, выдержать 1-2 минуты для формирования осадка магнитных частиц, затем, не извлекая пробирки из магнитного штатива, убрать надосадоч- ную жидкость из пробирок с помощью вакуумного отсасывателя или пипеточного дозатора, не задевая осадок магнитных частиц. ВНИМАНИЕ! Использовать отдельный одноразовый наконечник с аэрозольным барьером для каждого анализируемого образца. Важно! В пп. 1.9-1.13, добавленный раствор должен полностью покрывать магнитные ' частицы жидкостью. 1.10 Внести 500 мкл «ПР-1» в пробирку. НЕ ПЕРЕМЕШИВАТЬ! Убрать раствор «ПР-1» пипеточным дозатором или вакуумным отсасывателем из пробирки, не задевая осадок магнитных частиц, и держа пробирку в магнитном штативе. Закрыть пробирку. 1.11 Внести 200 мкл «ПР-2» в пробирку. НЕ ПЕРЕМЕШИВАТЬ! Убрать раствор «ПР-2» пипеточным дозатором или вакуумным отсасывателем из пробирки, не задевая осадок магнитных частиц, и держа пробирки в магнитном штативе. 1.12 Пробирки с открытыми крышками поставить в твердотельный термостат и подсушить осадок магнитных частиц при температуре 65 ®С в течение 5 минут. 1.13 Во все пробирки добавить на дно по 50 мкл «ЭР». НЕ ПЕРЕМЕШИВАТЬ! Прове рить, что «ЭР» полностью покрывает осадок магнитных частиц. Закрыть пробирки. 1.14 Инкубировать пробирки в твердотельном термостате при температуре 65 °С в течение 10 минут. 1.15 После инкубации аккуратно перемешать образцы на вортексе в течение 2-3 секунд и от- центрифугировать пробирки в течение 2-3 секунд, для осаждения капель с крышки. Поставить в магнитный штатив для формирования осадка магнитных частиц! I Образцы выделенной РНК готовы для постановки петлевой изотермальной амплификации. ВНИМАНИЕ! Отбирать образец выделенной РНК для постановки ПЦР необходимо акку^ рдтно, стараясь избегать попадания магнитных частии в наконечник дозатора пипеточно- ВНИМАНИЕ! Образцы выделенной РНК хранить при температуре 2-8 °С не более 30 минут. Заморозка образцов выделенной РНК или более длительное хранение при температуре 2-8 ‘’С может приводить к получению ложноотрицательных результатов. При постановке анализа на автоматической станции необходимо 1.1 Перед постановкой анализа анализируемые образцы, хранившиеся в морозильной каме ре, необходимо разморозить. Все образцы перед внесением в «ЛБ» необходимо аккуратно пере мешать. 1.2 Извлечь из коробки набора реагентов «ЛБ», «РП», «ПР-1», «ПР-2» и «ЭР», проверить целостность упаковки и срок годности каждого компонента набора реагентов. При обнаружении повреждения или при истечении срока годности компоненты набора реагентов следует обработать в соответствии с разделом «Утилизация набора реагентов» настоящей инструкции по примене нию. Оставшиеся компоненты набора реагентов («К+», «К-», «РС», «Фермент») убрать в холо дильник. Перед применением все вышеперечисленные компоненты («ЛБ», «РП», «ПР-1», «ПР-2» и «ЭР») инкубировать при комнатной температуре (от 17 до 27 ®С) в течение 15 минут, затем ак- II --- стр. 13 --- I 7 Выдерживание в магнитном штативе перенос планшета на магнитный штатив и выдержива ние в течение 1 минуты 8 Удаление надосадочной жидко сти удаление надосадочной жидкости из лунок, не задевая осадок магнитных частиц. Внимание! Планшет должен быть в магнитном шта тиве 9 Внесение > внести в лунки - по 500 мкл «ПР-1», при внесении пе ремешать пипетированием 2 раза 10 ■ Удаление надосадочной жидко сти удаление раствора «ПР-1» из лунок, не задевая осадок магнитных частиц. Внимание! Планшет должен быть в магнитном шта тиве. 11 Внесение внести в лунки - по 200 мкл «ПР-2», при внесении пе ремешать пипетированием 2 раза 12 Удаление надосадочной жидко сти удаление раствора «ПР-2» из лунок, не задевая осадок магнитных частиц. Внимание! Планшет должен быть в магнитном шта тиве 13 Высушивание термостатирование в течение 5 мин при температуре 65 14 Внесение «ЭР» внести в лунки - по 50 мкл «ЭР», при внесении пере мешать пипетированием 2 раза 15 Инкубация и перемешивание термостатирование в течение 10 мин при температуре 65 °С, в ходе инкубации перемешивать с частотой вра щения 1200 об/мин в течение 30 с каждые 3 минуты. Перенести планшет на магнитный штатив 16 Перенос выделенной РНК в ПЦР планшет перенести по 10 мкл из глубокодонного планшета в ПЦР планшет. Внимание! Пробирки должны быть в магнитном штативе. Образцы выделенной РНК готовы для постановки петлевой изотермальной амплификации. ВНИМАНИЕ! Образцы выделенной РНК хранить при температуре 2-8 °С не более 30 минут. , Заморозка образцов выделенной РНК или более длительное хранение при температуре 2-8 °С может приводить к получению ложноотрицательных результатов. Метод 2. Выделение РНК с использованием «ПРОБА-НК/ПРОБА-НК-ПЛЮС», производства ООО «НПО ДНК-Технология» Процедуру выделения провести в соответствии с инструкцией по применению на медицинское изделие. ПОДГОТОВКА КОМПОНЕНТОВ НАБОРА РЕАГЕНТОВ ДЛЯ ПРОВЕДЕНИЯ ПЕТЛЕВОЙ ИЗОТЕРМАЛЬНОЙ АМПЛИФИКАЦИИ Вскрыть упаковку с оставшимися компонентами набора реагентов («К+», «К-», «РС», «Фермент»). Пробирки с компонентами набора реагентов проверить на целостность и срок годности. При обнаружении повреждения или при истечении срока годности компоненты набора реагентов следует обработать в соответствии с разделом «Утилизация набора реагентов» настоящей инструкции по применению. Компоненты набора реагентов готовы к использованию. Перед применением оставшиеся компоненты набора реагентов - «К+» и «К-» (кроме «РС» и «Фермент») инкубировать при комнатной температуре до достижения комнатной температуры, 13 --- стр. 14 --- % аккуратно перемешать и осадить капли с крышки пробирки, возможно для этого использование центрифугирования в течение 1-3 секунд. Хранение: неиспользованные и вскрытые компоненты хранить при температуре (2-8) °С в течение срока годности набора реагентов. Неиспользованный «РС» хранить в защищенном от света месте, поместив в пакет из комбинированного материала или в непрозрачный черный пакет с замком zip-lock, сразу после приготовления реакционной смеси. ВНИМ АНИЕ! Запрещается хранение компонентов «РС» и «Фермент» при комнатной температуре, а такж е хранение «РС» на свету. ПРОВЕДЕНИЕ ПЕТЛЕВОЙ ИЗОТЕРМАЛЬНОЙ АМПЛИФИКАЦИИ Петлевую изотермальную амплификацию можно провести ручным способом постановки ана лиза или с помощью автоматической станции. При ручной постановке анализа »i ВНИМАНИЕ! При работе с набором реагентов и образцами выделенной РНК необходимо ис пользовать одноразовые стерильные пластиковые расходные материалы, имеющие специаль ную маркировку RNase-free, DNase-free. Для манипуляций с реагентами, образцами выделенной РНК и контрольными образцами использовать одноразовые наконечники для дозаторов с аэрозольным барьером ____________________________________________________________________ ВНИМАНИЕ! Компоненты реакционной смеси («РС» и «Фермент») смешивать непосред- ственно перед проведением анализа ________________________________________________________ Подготовка планшета 96- луночного Достать планщет 96-луночный из пакета с zip-lock. Рассчитать количество лу нок в соответствии с количеством образцов выделенной РНК и контрольных образцов, исходя из того, что каждый образец выделенной РНК будет анализи роваться в одном повторе. Расчет количества лунок производится по формуле: Количество лунок (N) = п + 2, где п - количество образцов выделенной РНК, 2 - «К+» и «К-» При необходимости промаркировать лунки планшета, согласно идентификаци онному номеру анализируемого образца. Планшет поместить на ледяную баню или хладагент (Внимание! не замо раживать). Дополнительно рекомендуется использовать крио-штативы для того, чтобы реакционная смесь в планшете не нагревалась выше 2-8 ®С. Для возможности одновременной работы двух лаборантов и с целью соблюде ния временного интервала 10-15 минут до конца внесения образцов, рекомен дуется разделить планшет на 2 части по 48 лунок (количество лунок (N) для каждого! лаборанта считать по формуле выше). Важно! При каждой постановке анализа необходимо использовать кон- трольные образцы «К+» и «К-». ___________________________________________ ВНИМАНИЕ! В зависимости от используемого оборудования для проведения анализа надписи на планшете следует располагать таким образом, чтобы они не мешали детектированию флуоресцентного сигнала. См. руководство по эксплуатации амплификатора ________________ Приготов ление реак ционной смеси В пробирке вместимостью 1,5 - 2,0 мл для приготовления реакционной смеси смешать холодные! компоненты «РС» и «Фермент», из расчета на необходи мое число лунок, согласно приведенной ниже таблице. Перемешать приготов ленный раствор на вортексе и осадить капли с крышки пробирки кратким цен трифугированием (1-3 с). Приготовленную реакционную смесь не хранить, использовать сразу же после приготовления! ____________________ Название компонента Объем реагента на один образец (без учета контрольных образ- ш 1 ___________________________ Объем реагента для анализа п образцов выделенной РНК с учетом постановки кон- 14 --- стр. 15 --- тральных образцов «РС» 28 мкл (N+l)*28 мкл «Фермент» 2 мкл (N + 1) * 2 мкл Пример: Количество образцов выделенной РНК - 5 гит. N = 5 -^2 = 7. Следовательно, необходимо смешать: (7 + 1) *28 мкл = 224 мкл «РС» и (7 + I) * 2= 1бмкл «Фермент» ____________________________________ Внесение реакцион ной смеси В каждую промаркированную лунку 96-луночного планшета (холодного!) вне сти по 30 мкл холодной! реакционной смеси (или возможно использование микропробирок типа эппендорф вместимостью 0,2 мл с крышкой) Внесение образцов в лунки 96- луночного планшета или в про бирки для амплифика- тора «Rotor Gene» В каждую промаркированную лунку 96-луночного планшета (или в пробирку для амплификатора «Rotor Gene») внести по 10 мкл подготовленных образцов выделенной РНК, затем в предпоследнюю и последнюю - по 10 мкл контроль ных образцов «К+» и «К-», соответственно. Важно! Для каждого образца выделенной РНК и контрольных образцов использовать новый наконечник и с помощью него перемешать пипети- рованием содержимое лунки 3-5 раз. Не допускать образование пузырей! Отрезать фрагмент подходящего размера от входящей в набор реагентов плен ки для ПЦР планщета 96-луночного и плотно! наклеить его на промаркиро ванные лунки, использую для этого аппликатор. Пленка приклеивается к краям лунок при надавливании. Перед постановкой в амплификатор рекомендуется осадить капли со стенок лунок. Важно! Необходимо герметично заклеить планшет, чтобы не происходило испарение во время амплификации, во избежание получения ложно положительных результатов, а также избежание контаминации лаборато ри и _______________________________________________________________________ ВНИМАНИЕ! Планшет с реакционной смесью и образцами выделенной РНК незамедлительно поместить в заранее подготовленный амплиФикатор и запустить программу! При невозможности использования крио-штативов допускается внесение готовой реакцион ной смеси в пробгшку с уже внесенным образцом для того, чтобы реакционная смесь не нагре валась выше 2-8 более 20 минут. При этом в каждую пробирку реакционная смесь прибав ляется отдельным наконечником с фильтром и с помощью него перемешивается пипетирова- нием содержимое лунки 3-5 раз. Не допускать образование пузырей! Важно! Если в амплификаторе предусмотрен дополнительный нагрев крышки, то ее необходимо нагреть заранее. _____________________________________________________________ Регистрация результатов анализа Выполнить в соответствии с разделом «Процедурой измерения и оценки ре зультата» При постановке анализа на автоматической станции необходимо ВНИМАНИЕ! При работе с набором реагентов и образцами выделенной РНК необходимо ис пользовать одноразовые стерильные пластиковые расходные материалы, имеющие специаль ную маркировку RNase-free, DNase-free. Для манипуляций с реагентами, образцами выделенной РНК и контрольными образцами использовать одноразовые наконечники для дозаторов с аэрозольным барьером ____________________________________________________________________ ВНИМАНИЕ! Компоненты реакционной смеси («РС» и «Фермент») смешивать непосред- ственно перед проведением анализа ________________________________________________________ Внесении приготовленной смеси «РС» и «Фермент» возможно в ручном режиме. Для этого использовать протокол как при ручной постановке анализа. В случае внесения смеси самой автоматической станцией: ___________________________________ Подготовка Достать планшет 96-луночный из пакета с zip-lock. Рассчитать количество 15 --- стр. 16 --- планшета луночного 96- лунок в соответствии с количеством о б р а з ц о в в ы д е л е н н о й Р Н К и кон трольных образцов, исходя из того, что каждый о б р а з е ц в ы д е л е н н о й Р Н К будет анализироваться в одном повторе. Расчет количества лунок производится по формуле: Количество лунок ( N ) = п + 2, где п - количество о б р а з ц о в в ы д е л е н н о й Р Н К , 2 - «К+» и «К-» Планшет поместить на ледяную баню или хладагент (Внимание! не замораживать). Дополнительно рекомендуется использовать крио-штативы для того, чтобы реакционная смесь в планшете не нагревалась выше 2-8 Приготовление реакционной смеси В пробирке вместимостью 1,5 - 2,0 мл для приготовления реакционной смеси смешать холодные! компоненты «РС» и «Фермент», из расчета на необходимое число лунок, согласно приведенной ниже таблице. Переме шать приготовленный раствор на вортексе и осадить капли с крышки про- Н а з в а н и е к о м п о н е н т а О б ъ е м р е а г е н т а н а о д и н о б р а з е ц ( б е з у ч е т а к о н т р о л ь н ы х о б р а з - ц о в ) О б ъ е м р е а г е н т а д л я а н а л и з а п о б р а з ц о в в ы д е л е н н о й Р Н К с у ч е т о м п о с т а н о в к и к о н т р о л ь н ы х о б р а з ц о в «РС» 28 мкл (N+ 1)*28мкл «Фермент» 2 мкл (N + 1) * 2 мкл ш п р и м е р : К о л и ч е с т в о о б р а з ц о в в ы д е л е н н о й Р Н К - 5 ш т . N = 5 + 2 = 7 . С л е д о в а т е л ь н о , н е о б х о д и м о с м е ш а т ь : ( 7 + 1 ) * 2 8 м к л = 2 2 4 м к л « Р С » и ( 7 + 1 ) * 2 = 1 6 м к л « Ф е р м е н т » ____________________________________ Внесение «К+» и «К-» в лунки 96- луночного планшета в предпоследнюю -10 мкл «К+»; в последнюю -10 мкл «К-». Внесение реак ционной смеси внести в лунки холодного! ПЦР планшета с выделенной РНК - по 30 мкл холодной! реакционной смеси, при внесении перемешать пипетированием 3 раза_______________________________________________________________ Запаивание планшета Вынуть подготовленный ПЦР планшет из автоматической дозирующей станции. Плотно! наклеить пленку для ПЦР планшета 96-луночного, использую для это го аппликатор. Пленка приклеивается к краям лунок при надавливании. Перед постановкой в амплификатор рекомендуется осадить капли со сте нок лунок. Важно! Необходимо герметично заклеить планшет, чтобы не происхо дило испарение во время амплификации, во избежание получения ложноположительных результатов, а также избежание контаминации л абор атор и и .__________________________________________________ В Н И М А Н И Е ! П л а н ш е т с р е а к ц и о н н о й с м е с ь ю и о б р а з ц а м и в ы д е л е н н о й Р Н К н е з а м е д л и т е л ь н о п о м е с т и т ь в з а р а н е е п о д г о т о в л е н н ы й а м п л и Л и к а т о р и з а п у с т и т ь п р о г р а м м у ! Важно! Если в амплификаторе предусмотрен дополнительный нагрев крышки, то ее необходимо нагреть заранее. ________________________________________________________ Регистрация ре зультатов анали за Выполнить в соответствии с разделом «Процедурой измерения и оценки результата» 16 --- стр. 18 --- Краткая схема интерпретации результатов анализа Значение Ct в канале SYBR (FAM) Вывод для «СЕХ96»; ДТпрайм»; «ДТлайт»; «Rotor Gene»: менее 50 циклов анализиоуемый обоазеи - положительный, то есть содержит РНК коронавируса SARS-CoV-2 для «СЕХ96», «ДТпрайм»; «ДТлайт»; «Rotor Gene»: * не определяется или более 50 циклов " анализируемый образец - отрицательный, то есть не содержит РНК коронавируса SARS-CoV-2 ОГРАНИЧЕНИЯ ТЕСТА Для определения наличия или отсутствия РНК коронавируса SARS-CoV-2, рекомендуется использовать назальные и/или назофарингеальные мазки в транспортной среде, так как РНК коронавируса SARS-CoV-2 может не выявляться в других клинических образцах. Отрицательные результаты не исключают возможность инфицирования коронавирусом SARS- CoV-2 и не должны использоваться в качестве единственной основы для принятия решения о лечении пациентов. Отрицательные результаты должны сочетаться с клиническими наблюдениями, историей Ф болезни и эпидемиологической информацией. Тест не определяет наличие коронавируса SARS-CoV-2, если концентрация коронавируса ниже предела обнаружения теста - 1000 копий РНК коронавируса SARS-CoV-2 на 1 мл образца. УТИЛИЗАЦИЯ НАБОРА РЕАГЕНТОВ В процессе использования и утилизации набора реагентов с истекшим сроком годности токсичные отходы не образуются. Отходы, образующиеся в процессе использования и утилизации набора реагентов с истекшим сроком годности, относить к классу Б. I Набор реагентов с истекшим сроком годности утилизировать как отходы класса Б. Обращение (сбор, временное хранение, обеззараживание и/или обезвреживание и транспортирование) отходов, образующихся в процессе использования и утилизации набора реагентов с истекшим сроком годности, проводить согласно СанПиН 2.1.7.2790-10 «Санитарно- эпидемиологические требования к обращению с медицинскими отходами». Для обеззараживания и/или обезвреживания отходов в соответствии с МУ 287-113 «Методические указания по дезинфекции, предстерилизационной очистке и стерилизации изделий ф медицинского назначения» использовать зарегистрированные в РФ дезинфицирующие средства и ^ оборудование в соответствии с инструкциями по их применению. Отходы утилизировать через организации, имеющие лицензию на этот вид деятельности. СРОК годности. УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ и ТРАНСПОРТИРОВАНИЯ Срок годности набора реагентов - 6 месяцев. Сроки годности вскрытых компонентов набора реагентов - в течение срока годности набора реагентов. Набор реагентов с истекщим сроком годности применению не подлежит. Набор реагентов хранить в соответствии с СП 3.3.2.3332-16 «Условия транспортирования и хранения иммунобиологических лекарственных препаратов» при температуре от 2 до 8 С в защищенном от света месте. Не замораживать. Беречь от источников воспламенения! Транспортирование набора реагентов производить в соответствии с СП 3.3.2.3332-16 при температуре от 2 до 8 С. Набор реагентов не замораживать. Условия применения набора реагентов: - температура окружающей среды (15 - 25) °С; - относительная влажность воздуха (не более 70) %; 18 --- стр. 19 --- - атмосферное давление (84,0 - 106,7) кПа / (630 - 800) мм. рт. ст. ГАРАНТИИ ПРОИЗВОДИТЕЛЯ Производитель гарантирует соответствие выпускаемого набора реагентов требованиям нормативной и технической документации. Безопасность и качество набора реагентов гарантируются в течение всего срока годности. Производитель отвечает за недостатки набора реагентов, за исключением дефектов, возникших вследствие нарушения правил применения, условий транспортирования и хранения, либо действия третьих лиц, либо непреЬдолимой силы. Производитель обязуется за свой счет заменить набор реагентов, технические и функциональные характеристики (потребительские свойства) которого не соответствуют нормативной и технической документации, если указанные недостатки явились следствием скрытого дефекта материалов или некачественного изготовления набора реагентов производителем. По вопросам, касающимся качества набора реагентов, обращаться в АО «ГЕНЕРИУМ» по адресу: 601125, Владимирская обл., Петушинский район, пос. Вольгинский, ул. Заводская, стр. 273. Тел./ф. +7 (49243)72-5-20, 72-5-14. Символы, применяемые для маркировки компонентов набора реагентов Символ Наименование символа Символ Наименование символа г о с т Р ИСО 15223-1-2014 | iv d | Для диагностики in vitro | l o t | Код партии \ ^ 6 Содержимого достаточно для 96 тестов Использовать до Не использовать повторно 1Ь8“С Температурный диапазон Беречь от влаги А Осторожно! Обратитесь к инструкции по применению Не использовать при по вреждённой упаковке •О'-'-- Не допускать воздействия солнечного света Г()СТ 31340-2013 Место нанесения: «ЛБ» Ф «Восклицательный знак» Сигнальное слово: «Опасно» Н302: Вредно при проглатывании Н332: Вредно при вдыхании Место нанесения: «ЛБ» Н314: При попадании на кожу и в глаза вызывает химические ожоги Н402: Вредно для водных организмов Н413: Может вызвать долгосрочные отрицательные последствия для водных организмов «Жидкость, выли вающаяся из двух пробирок, поража ющая металл и ру ку» Место нанесения: «РП», «ПР-1», «ПР-2» «Пламя» Сигнальное слово: «Опасно» Н225: Легковоспламеняющаяся жидкость. Пары об разуют с воздухом взрывоопасные смеси Н319: При попадании в глаза вызывает выраженное раздражение Н336: Может вызывать сонливость и головокружениеФ «Восклицательный знак» Дата создания 12,03.2021 г. J 19 --- стр. 20 --- Краткая схема анализа при ручной постановке анализа набора реагентов «МагннТест» ВНИМАНИЕ! Компоненты реакционной смеси («РС» и «Фермент») смешивать непосредственно перед прове- дением анализа для предотвращения получения ложных результатов ___________________________________________ _________________________________________1 ПОДГОТОВКА К АНАЛИЗУ _________________________________________ 1 Инкубировать «ЛБ», «РП», «ПР-1», «ПР-2» и «ЭР» при комнатной температуре 15 минут. При наличии в «ЛБ» кри сталлического осадка/хлопьев инкубировать при 65 ®С до полного растворения осадка. 2 Ввести гфограмму в амплификатор. Для «CFX96», «ДТпрайм», «ДТлайт», «Rotor Gene»: 50 циклов по 30 секунд с измерением флуоресценции на канале SYBR (РАМ) каждые 30 секунд при 65 ®С. Если в амплифйкаторе предусмотрено, то не забыть прогреть крышку______________________________________ ________2 ПОДГОТОВКА ПЛАНШЕТА ДЛЯ ПЕТЛЕВОЙ ИЗОТЕРМАЛЬНОЙ АМПЛИФИКАЦИИ __________ Рассчитать необходимое количество лунок (N): N = в + 2, где п - количество образцов выделенной РНК (см. п. 3); 2 - «К+» и «К-» Планшет поместить на ледяную баню или хладагент (Внимание! не замораживать). _____________________________ ___________________________3 ВЫДЕЛЕНИЕ РНК ИЗ АНАЛИЗИРУЕМЫХ ОБРАЗЦОВ ___________________________ 1 Если аналшируемые образцы заморожены, предварительно разморозить их. 2 Анализируемые образцы интенсивно перемешать. 3 В чистый новый эппендорф добавить 250 мкл «ЛБ», периодически встряхивая «ЛБ», и 50 мкл анализируемого об разца, аккуратно перемешать пипетированием 3-5 раз. ^ 4 Инкубировать 10 минут при 65 ”С. 5 Добавить 300 мкл «РП», аккуратно перемешать пипетированием 3-5 раз. 6 Инкубировать 10 минут при комнатной температуре. НЕ СТАВИТЬ в магнитный штатив! 7 Поместить пробирки в магнитный штатив, выдержать 1-2 минуты, убрать надосадочную жидкость из пробирок, не задевая осадок магнитных частиц. Важно! При добавлении растворов из пп. 8-11, магнитные частицы всегда должны быть полностью покрыты жидкостью. 8 Внести по 500 мкл «ПР-1» в каждую пробирку. НЕ ПЕРЕМЕШИВАТЬ! Убрать «ПР-1», не задевая осадок магнит ных частиц, и держа пробирки в магнитном штативе. Закрыть пробирку. 9 Внести по 200 мкл «ПР-2» в каждую пробирку. НЕ ПЕРЕМЕШИВАТЬ! Убрать «ПР-2», не задевая осадок магнит ных частиц, и держа пробирки в магнитном штативе. 10 Пробирки с открытыми крышками инкубировать в твердотельном термостате при температуре 65 в течение 5 минут. 11 Добавить на дно пробирок по 50 мкл «ЭР». НЕ ПЕРЕМЕШИВАТЬ! Проверить, что «ЭР» полностью покрывает магнитные частицы. Закрыть пробирки. 12 Инкубировать пробирки в твердотельном термостате при температуре 65 °С в течение 10 минут. 13 Аккуратно перемешать образцы на вортексе в течение 2-3 секунд и отцентрифугировать пробирки в течение 2-3 секунд. 14 Образцы, выделенной РНК поставить на магнитный штатив. 15 Хранить при 2 - 8 не более 30 минут.____________________________________________________________ I ___________4 ПРИГОТОВЛЕНИЕ И ВНЕСЕНИЕ РЕАКЦИОННОЙ СМЕСИ В ПЛАНШЕТ ДЛЯ ПЦР __________ 1 Инкубировать «К+» и «К-» при комнатной температуре до достижения комнатной температуры, аккуратно переме шать и осадить капли с крышки пробирки. 2 Внести в чистый новый эппендорф холодные! компоненты «РС» и «Фермент» в следующих объемах: Объем «РС» = (N + 1) * 28 мкл; объем «Фермент» = (N + 1) * 2 мкл, где N - количество лунок (из пункта 2) В пропорции 28:2 Приготовленную реакционную смесь не хранить, использовать сразу же после приготовления! 3 Внести в каждую лунку холодного! планшета по 30 мкл холодной! приготовленной реакционной смеси_________ ________________5 ВНЕСЕНИЕ ОБРАЗЦОВ ВЫДЕЛЕННОЙ РНК И КОНТРОЛЕЙ («К+» И «К-») ______________ 1 В лунки планшета внести по 10 мкл образцов выделенной РНК (см. п. 3). Для каждого образца выделенной РНК использовать новый наконечник и с помощью него пипстировать со держимое лунки. 2 Аккуратно открыть пробирки с «К+» и «К-» (для исключения контаминации) и внести в предпоследнюю и послед нюю лунки планшета - по 10 мкл контрольных образцов, используя новый наконечник и с помощью него пипети- ровать содержимое лунки 3 Заклеить планшет пленкой______________________________________________________ _________________________________________7 Постановка в амплификатор________________________________________ Планшет незамедлительно поставить в амплификатор с уже введенной программой и начать проведение анализа! __________________________________________8 Интерпретация результатов ________________________________________ 20