Набор реагентов для in vitro диагностики наличия мутаций гена EGFR методом полимеразной цепной реакции в режиме реального времени в образцах плазмы крови человека, 48 реакций — инструкция и характеристики
Открытые закупки, где изделие проходит ТЗ
Сейчас открытых закупок, где изделие полностью проходит ТЗ, нет; список обновляется каждый день.
Построчная сверка ТЗ с характеристиками этого изделия и все закупки под ваши товары — в кабинете, 7 дней бесплатно.
Попробовать бесплатно
Текст инструкции: технические характеристики
--- стр. 3 ---
сс™ Для диагностики in-vitro
-25*Сt
15>с Хранить при
температуре от -25 °С
до-15 “С
REF CTEGFR-48
“Набор реагентов для in vitro диагностики наличия мутаций гена EGFR методом
полимеразной цепной реакции в режиме реального времени в образцах плазмы крови
человека, 48 реакций”
Набор валидирован для приборов:
Амплификатор нуклеиновых кислот Applied Biosystems QuantStudio 5 с
гибридизационно-флуоресиентной детекцией проду(сгов ПЦР в режиме
реального времени
РЗН 2019/8446 от 06.06.2019
(бессрочно)
Прибор для проведения полимеразной цепной реакции в режиме реального
времени Rotor-Gene 0
ФСЗ 2010/07595 от 10.08.2010
(бессрочно)
Термоциклер для амплификации нуклеиновых кислот 1000 с Модулем
реакционным оптическим CFX96
ФСЗ 2008/03399 от 21.06.2016
(бессрочно)
Инструкция по применению — версия 2.1
--- стр. 4 ---
Содержание
Наименование медицинского изделия 5
Производитель и его уполномоченный представитель 5
Назначение медицинского изделия 5
3.1. Описание целевого аналита 5
3.2. Функциональное назначение медицинского изделия 8
3.3. Специфическая патология, состояние или фактор риска, для обнаружения, определения
или дифференцирования которого предназначено изделие 8
3.4. Тип анализируемого образца 8
Описание функциональных элементов и составных частей 8
4.1. Комплект поставки 8
4.2. Состав реагентов 9
4.3. Описание характеристик 10
4.3.1. Внешний вид 10
4.3.3 Диагностические характеристики изделия 12
Сведения о предназначении изделия для клинической лабораторной диагностики 12
Перечень и описание материалов медицинского изделия, вступающих в непосредственный или
опосредованный контакт с организмом пациента 12
Предназначение изделия с указанием пользователя 12
Принцип действия медицинского изделия 12
8.1. Проведение анализа 13
8.1.1. Выделение ДНК 13
8.1.2. Подготовка реагентов (для всех приборов) 14
8.1.3. Настройки прибора 17
8.2. Анализ данных 21
8.2.1. Этапы анализа, специфические для прибора 21
8.2.2. Интерпретация результатов 22
8.3. Ограничения анализа 24
Перечень материалов и специальных материалов, которые требуются для проведения
тестирования, но не содержатся в комплекте поставки изделия 25
9.1. Реагенты 25
9.2. Оборудование 25
9.3. Вспомогательные материалы 25
--- стр. 5 ---
Сведения для идентификации медицинских изделий с целью получения безопасной комбинации
и информация об известных ограничениях по совместному использованию медицинских изделий
25
Условия хранения и обслуживания медицинского изделия 26
Информация о порядке действий в случае нарушения упаковки, о стерильном состоянии и
методе стерилизации 26
Информация для пользователей 26
13.1. Сведения и меры предосторожности, предпринимаемые в отношении потенциально
инфекционного материала, содержащегося в изделии 26
13.2. Сведения о мерах предосторожности и меры, предпринимаемые в случае сбоя или
отклонений в функционировании изделия, определяемых по внешним признакам 27
13.3. Сведения о безопасности от воздействия химических и загрязняющих веществ, в том
числе предельно допустимые концентрации веществ или входящих в него компонентов 27
13.4. Сведения о пожарной безопасности 27
13.5. Сведения о взрывобезопасности 27
13.6. Сведения о радиационной безопасности 27
13.7. Сведения о безопасности при обслуживании изделия, в том числе требования
безопасности при ошибочных действиях обслуживающего персонала и самопроизвольном
27нарушении функционирования
13.8. Сведения о защитных средствах и мероприятиях обеспечения безопасности
13.9. Требования к помещениям
13.10. Меры предосторожности при использовании изделия по назначению
13.11. Меры предосторожности в случае предсказуемого риска
13.12. Меры по защите окружающей среды
13.13. Информация о токсикологическом воздействии
13.14. Информация об обстоятельствах, при которых пользователь
проконсультироваться с медицинским специалистом
Кратность применения и техническое обслуживание
27
28
28
29
29
29
должен
30
30
Информация о надлежащей обработке изделия для его повторного использования, включая
очистку, дезинфекцию, упаковку и при необходимости метод повторной стерилизации 30
Специальные требования в отношении помещений, специальной подготовки или особой
квалификации пользователя и третьих лиц 30
Информация об условиях, необходимых для сбора, обработки и подготовки образцов, данные по
стабильности анализируемых образцов, в том числе условия и длительность хранения, условия
транспортировки, ограничения по циклам заморозки (размораживания) 31
Информация о подготовке к использованию изделия 31
--- стр. 11 ---
в каждой пробирке содержится особая смесь праймеров для амплификации конкретных мутаций. Содержимое этих
пробирок не следует смешивать.
* Смесь положительных контролей содержит смесь синтетических последовательностей ДНК, которые
соответствуют каждой мутации, определяемой этим набором и внутренним контролем.
** Полная инструкция по применению изделия размешена на сайте httns: hiovitnim.rii dircciions oncodiat’nostics.hnnl
4,2. Состав реагентов
Наименован
не Состав № CAS Концентрация Общий объем
Реакционная ДНК-полимераза ■ 5 Ед/мкл 1 X
определения
мутации
цоДНК (2Х)
(Синяя
крышка)
дНТФ (дезоксирибонуклеозидтрифосфаты):
- дАТФ (дезоксиаденозинатрифосфат)
- дГТФ (дезоксигуанозинатрифосфат)
• дЦТФ (дезоксицитидинтрифосфат)
-дТТФ (дезокситимидинтрифосфат)
1927-31-7
2564-35-4
951-77-9
365-08-2
400 ммоль
дНТФ
800 мкл
ПЦР-буфер (коммерчески доступный буфер)
- глицерол
- магния хлорид
56-81-5
7786-30-3
0,1-1 % Глицерол
3 ммоль магния хлорид
Реакционная ДНК-полимераза - 5 Ед/мкл 4х
1300 мкл
определения
мутации
цоДНК (2Х)
(Фиолетовая
крышка)
дНТФ (дезоксирибонуклеозидтрифосфаты):
- дАТФ (дезоксиаденозинатрифосфат)
- дГТФ (дезоксигуанозинатрифосфат)
- дЦТФ (дезоксицитидинтрифосфат)
• дТТФ (дезокситимидинтрифосфат)
1927-31-7
2564-35-4
951-77-9
365-08-2
400 ммоль
дНТФ
ПЦР-буфер (коммерчески доступный буфер)
- глицерол
• магния хлорид
56-81-5
7786-30-3
0,1-1 % глицерол
3 ммоль магния хлорид
Смесь
праймеров/про
б 1
(Коричневая
крышка с
номером 1)
- Пробы (флуоресцентно-меченные гидролизные
олигонуклеотидные пробы)
Праймер (известная последовательность
нуклеотидов, комплементарная мутантному
варианту испытуемого гена)
- Вода*
■ШТЕ(1ХТЕбуфер pH 8) 7732-18-5
1185-53-1
60-00-4
68% вода
32% ЮТА
280 нг/мкл
олигонуклеотиды
1 X
158 мкл
Смесь
праймеров/
проб 2
(Коричневая
крышка с
номером 2)
- Пробы (флуоресцентно-меченные гидролизные
олигонуклеотидные пробы)
- Праймер (известная последовательность
нуклеотидов, тюмплементарная мутантному
варианту испытуемого гена)
- Вода*
-ЮТЕ (IX ТЕ буфер pH 8)
7732-18-5
1185-53-1
60-00-4
39% вода
61% ЮТА
304 нг/мкл
олигонуклеотиды
1 X
158 мкл
Смесь
праймеров/про
63
(Коричневая
крышка с
номером 3)
- Пробы (флуоресцентно-меченные гидролизные
олигонуклеотидные пробы)
Праймер (известная последовательность
нуклеотидов, ютмплементарная мутантному
варианту испытуемого гена)
- Вода*
■ ЮТЕ (IX ТЕ буфер pH 8)
7732-18-5
1185-53-1
60-00-4
80% вода
20% ЮТА
296 нг/мкл
олигонуклеотиды
1 X
158 мкл
--- стр. 12 ---
Смесь
праймеров/про
64
(Коричневая
крышка с
номером 4)
- Пробы (флуоресцентно-меченные гидролизные
олигонуклеотидные пробы)
- Праймер (известная последовательность
нуклеотидов, и)мплементарная мутантному
варианту испытуемого гена)
- Вода*
-ГОТЕ(1ХТЕбуфер pH 8)
7732-18-5
1185-53-1
60-00-4
83% вода
17% ЮТА
296 нг/мкл
олигонуклеотиды
1 X
158 мкл
Смесь
праймеров/про
65
(Коричневая
крышка с
номером 5)
• Пробы (флуоресцентно-меченные гидролизные
олигонуклеотидные пробы)
Праймер (известная последовательность
нуклеотидов, комплементарная мутантному
варианту испытуемого гена)
- Вода*
-ГОТЕ(1ХТЕбуфер pH 8)
7732-18-5
1185-53-1
60-00-4
58% вода
42% ЮТА
319 нг/мкл
олигонуклеотиды
1 X
158 мкл
Смесь
праймеров/про
66
(Коричневая
крышка с
номером 6)
- Пробы (флуоресцентно-меченные гидролизные
олигонуклеотидные пробы)
Праймер (известная последовательность
нуклеотидов, гамплементарная мутантному
варианту испытуемого гена)
- Вода*
-ШТЕ (IX ТЕ буфер pH В)
7732-18-5
1185-53-1
60-00-4
77% вода
23%IDTA
247 нг/мкл
олигонуклеотиды
1 X
158 мкл
Смесь
праймеров/про
67
(Коричневая
крышка с
номером 7)
- Пробы (флуоресцентно-меченные гидролизные
олигонуклеотидные пробы)
Праймер (известная последовательность
нуклеотидов, комплементарная мутантному
варианту испытуемого гена)
- Вода*
-ШТЕ(1ХТЕбуфер pH 8)
7732-18-5
1185-53-1
60-00-4
80% вода
20% ЮТА
296 нг/мкл
олигонуклеотиды
1 X
158 мкл
Смесь
положительны
X контролей
(ПК)
(Красная
крышка)
Смесь синтетических специфических
последовательностей олигонуклеотидов
■ Вода* 7732-18-5
0,50 фг/мкл
олигонуклеотиды
99 % вода
Прошел финальную
проверку
1 X
615 мкл
4.3. Описание характеристик
4.3.1. Внешний вид
Параметр Наименование
Реакционная
смесь 1 для
определения
мутации
цоДНК (2Х)
Для реакции 1
Реакционная
смесь 2 для
определения
мутации цоДНК
(2Х) Для
реакций 2-7
Смесь
праймеров /
проб
Смесь
положительного
контроля (ПК)^
Количество (шт) 1 4 Т 1
Объем реагента (мкл) Не менее 800 Не менее 1300 Не менее 158 Не мене 615
10
--- стр. 13 ---
Цвет крышки пробирки Синий Фиолетовый Коричневый Красный
* в каждой пробирке содержится особая смесь праймеров для амплификации конкретных мутаций. Содержимое
этих пробирок не следует смешивать.
§ Смесь положительного контроля содержит смесь синтетических последовательностей ДНК, которые
соответствуют каждой мутации, определяемой этим набором и внутренним контролем.
4.3.2 Рабочие характеристики изделия
Рабочие характеристики изделия
Характер
истика
Р
еакция
Мутация Репорте
P
Значени
е
Предел
обнаружения
1 Exl9del CY5 10 копий
Т790М FAM 25 копий
L858R ROX 25 копий
2 C797S FAM 25 копий
3 L861Q FAM 25 копий
4 S768I FAM 50 копий
5 G719X FAM 50 копий
6 Ex20InsGGT/CAC FAM 75 копий
7 Ex20Ins9 (с.2300
2308dup) FAM 75 копий
Характер
истика
Р
еакция
Мутация Значение
Аналитич
еская
специфичность
1 Exl9del NTC не должен быть обнаружен или Ct
> 38,5 для всех каналов (VIC, FAM,
ROX, CY5).
Образцы с мутациями должны иметь
VIC Ct равный 23,5-27,0
(для прибора Rotor-Gene Q) или 28 -
31.5 (для остальных приборов)
Т790М
L858R
2 C797S
3 L861Q
4 S768I
5 G719X
6 Ex20InsGGT/CAC
7 Ex20Ins9 (c.2300
2308dup)
Характер
истика
Р
еакция
Мутация Значение
11
--- стр. 14 ---
Прецизио
нность
1 Exl9del
Т790М
L858R
2 C797S
3 L861Q
4 S768I
5 G719X
6 Ex20InsGGT/CAC
7 Ex20Ins9 (с.2300
2308dup)
NTC не должен быть обнаружен или Ct
> 38,5 для каналов VIC, FAM, ROX,
CY5.
гДНК WT не должен быть обнаружен
или >38.5Ct для каналов
FAM/ROX/CY5
Все образцы должны иметь корректное
определение сигнала в >95% случаев и
CV (%) менее или равный 5 % в FAM,
CY5, ROX, и значения Ct для VIC
4.3.3 Диагностические характеристики изделия
Диагностический характеристики изделия
Ха pa icrepHCTH ка Значение
Диагностическая
чувствительность
100 % (15/15 СТо.05% 79,61-100)
З.Сведения о предназначении изделия для клинической лабораторной диагностики
Область применения - клиническая лабораторная диагностика (in vitro).
б.Перечень и описание материалов медицинского изделия, вступающих в
непосредственный или опосредованный контакт с организмом пациента
Набор не содержит материалов, вступающих в непосредственный или опосредованный контакт с
организмом пациента (телом человека).
7. Предназначение изделия с указанием пользователя
Набор для определения мутации гена EGFR в цоДНК предназначен для профессионального
применения в клинической лабораторной диагностике (in vitro) квалифицированным персоналом
со средним и высшим медицинским образованием, дополнительно прошедшим специальное
обучение для работы изделием.
8. Принцип действия медицинского изделия
Набор для определения мутации гена EGFR в цоДНК является высокочувствительным набором
для определения соматических мутаций в экзонах 18, 19, 20 и 21 гена EGFR с использованием 7
реакционных смесей. В основе метода выявления мутаций лежит амплификация
мутант-специфичных последовательностей в образцах, которые содержат смесь мутантной ДНК
12
--- стр. 15 ---
и ДНК дикого типа, с использованием меченных флуорофорами проб. В таблице ниже показан
краткий обзор мутаций, определяемых в каждой реакции.
Реакци
я
Мутация Репортер
1
Exl9del CY5
Т790М FAM
L858R ROX
2 C797S FAM
3 L861Q FAM
4 S768I FAM
5 G719X FAM
6 Ex20InsGGT/CAC FAM
7 Ex20Ins9 (c.2300 2308dup) FAM
Все Внутренний контроль VIC
Дополнительная информация о выявленных мутациях:
Т790М с и без соседнего ОНП, (rsl050171 (с. G2361A, р. Q787Q), MAF; 0.43 [4])
G719X — определяет G719A, G719S. G719D и G719C, но не различает их
Вставки в экзоне 20 — определяет insCAC и insGGT, но не различает их
C797S — определяет с.2389Т>А и c.2390G>C, но не различает их
Этот набор содержит смеси праймеров для определения вышеупомянутых мутаций гена EGFR, а
также ген внутреннего контроля. Внутренние контрольные праймеры усиливают
бета-2-микроглобулин (В2М) и используются для определения состояния реагентов и содержания
достаточного количества ДНК в реакции.
8.1. Проведение анализа
8.1.1. Выделение ДНК
Внеклеточная ДНК может быть выделена с использованием Набора для выделения
нуклеиновых кислот из биологических образцов в варианте исполнения: “Набор QIAamp DSP
DNA Blood Mini Kil” (P3H 2021/15704).
13
--- стр. 18 ---
2. Аккуратно перемешать на вортексе и центрифугировать в течение 5 секунд при комнатной
температуре.
3. Распределить по 25 мкл мастер-микса в каждую лунку плашки. Скорректировать обьем
мастер-микса, если объем образна не составляет 5 мкл (пример макета плашки см. на
рисунке 1).
12
ExlSdel
Т79вН ^
L858R ^
C797S
L861Q
S678I
6719Х ^
Мастер
S миксы
(1-7)
С
DiS
Ех28 ^
InsGGT/CAtly
Ех28
InsGGT/CAfc^V. G
2 3 4 5 6 7 8 9 10 It
) \ 1 \
/ ){
)/ Ч ( 1 \ / ч
/ ■
\ ; ' \
)цIN \ , 1 \ гл Ч ..
; ■1ЛN fО 1 \р » .. 1ео ) 1< л)■:
CDiH
= Г = Г = Г = г Я- я я я я0)
)
Ф Ф ф ф ф ф / ф ф Фm m ]. (П m m rt ‘ / п mи tn m< 0 1 0 to (О} ■ ю to / \to to to toа CL CL Ok а а а а CL CL< о О ю ю
\ о о VO so
\ /8о О о 1 :о о п 9 ■ ‘ о/ / ■ • ' ! \
Ч )| \ ,
j ‘ ! ‘
Ч / ' / }{ \ / i \
)
< ч , Ч 1— )■■■_
\ 1 i ‘
' \ __ '■ 1
/' •_) t_
\ 1
Рисунок 1. Разметка плашки для семи реакций для каждого образца. Одна 96-луночная плашка
может вмещать до 10 исследуемых образцов, одну смесь положительных контролей и один
контроль без матрицы (КБМ, NTC). Ротор на 72 лунки (не показан) может вмещать до 7
исследуемых образцов, одну смесь положительных контролей и один КБМ. Рекомендуемый
макет плашки показан на рисунке выше.
4. Добавить 25 мкл мастер-микса для положительного контроля и КБМ в контрольные
лунки.
5. Добавить по 1—12 мкл образца вкДНК (в зависимости от концентрации) в каждую
соответствующую лунку и перемешать пипетированием несколько раз.
6. Добавить по 5 мкл положительного контроля и воды (КБМ) в соответствующие лунки и
перемешать пипетированием несколько раз.
7. Закрыть плашку оптической герметичной пленкой (для плашек) или крышками (для
пробирок).
16
--- стр. 19 ---
8. Необходимо быстро центрифугировать плашку для сбора капель на дне лунок и убедиться
в отсутствии пузырьков на дне лунок.
8.1.3. Настройки прибора
Термоциклер для амплификации нуклеиновых кислот 1000 с Модулем реакционным
оптическим CFX96
1. В «Мастере запуска» (Startup Wizard) выбрать «Создать новый эксперимент» (Create New
Experiment) и убедиться, что в раскрывающемся списке выбрано CFX96. Нажать ОК.
2. Во вкладке «Протокол» (Protocol) окна «Установка эксперимента» (Experiment Setup)
выбрать «Создать новый» (Create New) и ввести следующие параметры цикла:
Этап Температура Время
1 95 °С 10 мин
2 95 “С 15 сек.
3 58 “С 30 сек.
+ чтение плашки
4 Повторить с шага 2 еше 39 раз
ЗАВЕРШЕНИЕ
3. После завершения нажать «ОК», чтобы сохранить шаблон протокола. Обратить внимание
на расположение сохраненного файла шаблона, чтобы использовать его для последующих
анализов. Нажать «Дальше» (Next), чтобы перейти к окну «Настройка» (Setup).
4. Изменить объем образца на 30 мкл.
5. Установить флуорофоры для всех каналов.
6. Нажать «Дальше» (Next), затем нажать «Запустить анализ» (Start Run), чтобы начать
анализ.
Амплификатор нуклеиновых кислот Applied Biosystems QuantStudio 5 с
гибридизационно-флуоресцентной детекцией продуктов ПЦР в режиме реального времени
1. В программном обеспечении для проектирования и анализа QuantStudio необходимо
выбрать создание нового эксперимента.
17
--- стр. 20 ---
2. Во вкладке «Свойства» (Properties):
a. Выбрать «96-луночный блок 0,2 мл» (96-Well 0.2 mL block) для «Блока»
b. Выбрать «Сравнительный Ct (ДДС!)» (Comparative Ct (ДДСО) для «Типа эксперимента»
c. Выбрать «Реагенты TaqMan®» (TaqMan® Reagents) для «Реагентов» (Chemistry)
d. Выбрать «Быстрый» (Fast) для «Режима анализа»
3. Во вкладке «Метод» (Method):
a. Изменить объем на 30 мкл.
b. Изменить скорость охлаждения на 2,38°С/сек., а всех другие скорости изменений на
3°С/сек., как показано ниже.
c. Ввести следующие параметры цикла:
Этап Температура Время
Этап инкубации
Скорость линейного изменения 3 °С/сек.
1 95 “С 10 мин
Этап ПЦР
Скорость линейного изменения 3 °С/сек.
1 95 °С 15 сек.
Скорость линейного изменения 2,38 °С/сек.
2 58 °С 30 сек.
+ чтение плашки
Повторить этап ПЦР 40х
ЗАВЕРШЕНИЕ
4. Во вкладке «Плашка» (Plate):
a. Установить Пассивный стандарт на «Отсутствует» (None).
b. Нажать вкладку «Расширенная настройка» (Advanced Setup) и добавить следующие
цели в поле «Цели» (Targets).
Название цели Краситель Гаситель флуоресценции
18
--- стр. 21 ---
Реакция 1 Exl9Del CY5 NPQ-MGB
Реакция 1 Т790М РАМ NPQ-MGB
Реакция 1 L858R ROX NFQ-MGB
Реакция 1 1C VIC NPQ-MGB
Реакция 2 C797S РАМ NFQ-MGB
Реакция 2 1C VIC NFQ-MGB
Реакция 3 L861Q РАМ NFQ-MGB
Реакция 3 1C VIC NFQ-MGB
Реакция 4 S768I РАМ NFQ-MGB
Реакция 4 1C VIC NFQ-MGB
Реакция 5 G719X РАМ NFQ-MGB
Реакция 5 1C VIC NFQ-MGB
Реакция 6 Ex20InsGGT/CAC РАМ NFQ-MGB
Реакция 6 1C VIC NFQ-MGB
Реакция 7 Ex20Ins9 РАМ NFQ-MGB
Реакция 7 1C V1C NFQ-MGB
5. В поле «Образцы» (Samples) присвоить идентификаторы образцов необходимым лункам.
6. Нажать «Сохранить» (Save), чтобы сохранить выполняемый файл.
7. Открыть файл запуска на приборе QuantStudio™ 5.
8. Убедиться в том, что объем реакционной смеси установлен на 30 мкл, а «Сбор данных»
(Data Collection) включен на этапе при температуре 58 °С.
9. Зафузить плашку на прибор и нажать «ЗАПУСТИТЬ АНАЛИЗ» (START RUN).
Прибор для проведения полимеразной цепной реакции в режиме реального времени
Rotor-Gene Q
1. Выбрать «Файл» (File) > «Новый» (New), в диалоговом окне нажать вкладку
«Расширенные» (Advanced), выбрать «Два этапа» (Two Step) и нажать «Новый» (New).
2. Выбрать 72-луночный ротор, отметить поле «Запирающее кольцо присоединено» (Locking
Ring Attached) и нажать «Далее» (Next), затем пропустить «Мастер» (Wizard).
3. Перейти к «Вид» (View) > «Настройки анализа» (Run Settings), ввести 30 мкл для объема
реакционной смеси и нажать «ОК».
4. Перейти к «Вид» > «Редактор профиля».
19
--- стр. 22 ---
5. Нажать на «Инкубация» (Hold) и ввести 95 °С для «температура инкубации» (Hold
Temperature) и 10 минут для «Время инкубации» (Hold Time).
6. Нажать на кнопку «Циклирование» (Cycling), ввести «Этот цикл повторяется» (This cycle
repeats) 40 раз, затем ввести следующие параметры «Установленный этап» (Timed Step),
нажимая на каждый этап на панели справа:
Этап Температура (®С) Время Сбор ланных
Инкубация 95 °С 10 мин Нет
Установленный этап 95 °С 15 сек. Нет
Установленный этап 58 °С 30 сек. Запрос данных для Цикла А по
«Зеленому» (Green),
«Желтому» (Yellow),
«Красному» (Red),
«Оранжевому» (Orange)
7. Нажать ОК.
Дополнительно: сохранить эти параметры запуска для последующего использования, выбрав
кнопку «Сохранить как» (Save As) в верхней части диалогового окна.
8. Перейдите к «Увеличение» (Gain), ввести следующие параметры:
Примечание: предлагаемые параметры увеличения, возможно, потребуется скорректировать с
учетом изменчивости показателей по приборам.
Детектор Увеличение
Зеленый 6,67
Желтый 10
Оранжевый 5
Красный 5
Crimson 7
HRM 7
9. Загрузить стрипы пробирок в ротор.
10. Перейти к «Анализ» (Run) > «Запустить анализ» (Start Rim), затем нажать кнопку
«Запустить» (Start), чтобы начать анализ.
20
--- стр. 23 ---
Примечание: диалоговое окно «Редактировать образцы» (Edit Samples) открывается сразу после
запуска анализа. Введите информацию об образце во время работы прибора или после
завершения анализа.
8.2. Анализ данных
Важно: для пороговых значений может потребоваться корректировка с учетом
чувствительности флуоресцентной детекции каждого термоциклера. В качестве исходной
точки необходимо использовать перечисленные ниже параметры.
8.2.1. Этапы анализа, специфические для прибора
Термоциклер для амплификации нуклеиновых кислот 1000 с Модулем реакционным
оптическим CFX96
Проанализировать данные программным обеспечением прибора для ПЦР в режиме реального
времени, используя следующие критерии:
"Ct (Cq) Determination Mode" (Режим определения Ct): "Single Threshold" (Одиночное
пороговое значение).
"Baseline Setting" (Настройки исходных данных): "Baseline Subtracted Curve Fit" (Подбор
кривой с вычетом исходных условий).
Baseline and Threshold (Исходные данные и пороговое значение): заданные пользователем
в соответствии с таблицей ниже:
Целевое значение Реакция Исходные данные Пороговое значение
HEX (VIC)
1,2 3-22 700
3, 4. 6, 7 3-22 450
5 3-22 400
FAM
1 3-22 400
2-7 3-22 300
ROX 1 3-22 400
CY5 1 3-22 300
Амплификатор нуклеиновых кислот Applied Biosystems QuantStudio 5 с
гибридизационно-флуоресцентной детекцией продуктов ПЦР в режиме реального времени
Проанализировать данные программным обеспечением прибора для ПЦР в режиме реального
времени, используя следующие критерии:
Исходные данные и пороговое значение: заданные пользователем в соответствии с
таблицей ниже:
21
--- стр. 24 ---
Целевое значение Реакция Исходные данные Пороговое значение
HEX (VIC)
1.2 3-22 55 000
3, 4, 6, 7 3-22 27 500
5 3-22 20 000
FAM
1 3-22 65 000
2-7 3-22 40 000
ROX ! 3-22 35 000
CY5 1 3-22 30 000
Прибор для проведения полимеразной цепной реакции в режиме реального времени
Rotor-Gene Q
Проанализировать данные программным обеспечением прибора для ПЦР в режиме реального
времени, используя следующие критерии:
"Dynamic Tube" (Динамическая пробирка): Вкл.
"Slope Correct" (Поправка наклона): Вкл.
Удаление выбросов (Outlier Removal): 5 %
Установить следующие пороговые значения:
VTC -желтый FAM — Зеленый CY5 — Красный ROX — Оранжевый
0,1 0,15 0,05 0,05
8.2.2. Интерпретация результатов
Термоциклер для амплификации нуклеиновых кислот 1000 с Модулем реакционным
оптическим CFX96
1. Выбрать лунки с положительным контролем и проверить каждый канал на наличие
сигнала. ПК должен иметь аналогичные значения Ct для канала VIC для каждой реакции.
2. Выбрать лунки с отрицательным контролем и убедиться в отсутствии сигнала или в том,
что значение Ct больще 38,5 для каждого канала.
3. Выбрать лунки с реакциями для каждого исследуемого образца и проверить сигнал для
каждого канала. Для интерпретации результатов необходимо использовать таблицу Ct
ниже.
22
--- стр. 26 ---
Прибор для проведения полимеразной цепной реакции в режиме реального времени
Rotor-Gene Q
1. Выбрать лунки с положительным контролем и проверить каждый канал на наличие
сигнала. ПК должен иметь аналогичные значения Ct для канала VIC для каждой реакции.
2. Выбрать лунки с отрицательным контролем и убедиться в отсутствии сигнала или в том,
что значение Ct больше 38,5 для каждого канала.
3. Выбрать лунки с реакциями для каждого исследуемого образца и проверить сигнал для
каждого канала. Для интерпретации результатов необходимо использовать таблицу Ct
ниже.
Целевое Ct: VIC (желтый) Ct: Результат
Cl = любое 0<Ct<23,5 Избыточная начальная Есонцентрация. Повторный
анализ с меньшим количеством ДНК,
38,5 <Ct; Ct = 0 23,5<Ct<27 Отрицательный образец, Повторный анализ не
требуется.
Ct<38,5 23,5 < Ct < 27
Положительный для целевого канала: Exl9Del
(Cy5-Red), L858R (ROX-Orange), все прочие
(FAM-Green).
Ct = любое Ct > 27; Ct = 0 Недостаточная начальная концентрация.
Повторный анализ с большим количеством ДЖ.
8.3. Ограничения анализа
Успешное определение целевых мутаций зависит от качества образца и количества
имеющейся в наличии амплифицируемой ДНК. Образцы, с избыточной или недостаточной
начальной концентрацией должны быть пройти анализ повторно.
Эффективность этого анализа не была установлена в присутствии редких полиморфизмов.
Набор для определения мутации гена EGFR в цоДНК предназначен для использования
только внеклеточной ДНК. Неизвестно, подходят ли другие типы образцов для исследований с
помощью этого набора.
Цельную кровь необходимо немедленно обработать для выделения внеклеточной ДНК.
Хранение крови до выделения приведет к образованию тромбов, которые значительно снизят
получение внеклеточной ДНК.
Перенос реагента из выделения может снизить эффективность амплификации.
24
--- стр. 27 ---
Этот анализ предназначен для использования лабораторным персоналом, обученным
методам молекулярной биологии.
Соблюдение этого протокола необходимо для достижения оптимальных результатов.
Отклонения от протокола могут привести к снижению производительности.
Комбинация реагентов из различных партий наборов не оценивалась. Характеристики
эффективности для данной модификации не были установлены.
9. Перечень материалов и специальных материалов, которые требуются для проведения
тестирования, но не содержатся в комплекте поставки изделия
9.1. Реагенты
Набор для определения мутации гена EGFR в цоДНК не содержит реагентов для ферментации
белка (протеиназа К) или выделения внеклеточной ДНК. Внеклеточная ДНК может быть
выделена с использованием Набора для выделения нуклеиновых кислот из биологических
образцов в варианте исполнения: “Набор QIAamp DSP DNA Blood Mini Kit” (P3H 2021/15704).
Подробную информацию в отношении выделения вкДНК см. в разделе 8.1.1.
Для анализа требуется использование воды без нуклеазной активности (для ПЦР).
9.2. Оборудование
Прибор для проведения ПЦР в режиме реального времени, Центрифуга для ПЦР-плашек,
Микроцентрифуга для микроцентрифужных пробирок 0,2 мл и 2,0 мл.
Амплификатор нуклеиновых кислот Applied Biosystems QuantStudio
5 с гибридизационно-флуоресцентной детекцией продуктов ПЦР в режиме
реального времени
РЗН 2019/8446 от
06.06.2019 (бессрочно)
Прибор для проведения полимеразной цепной реакции в режиме
реального времени Rotor-Gene Q
ФСЗ 2010/07595 от
10.08.2010 (бессрочно)
Термоциклер для амплификации нуклеиновых кислот 1000 с
Модулем реакционным оптическим CFX96
ФСЗ 2008/03399 от
21.06.2016 (бессрочно)
9.3. Вспомогательные материалы
Одноразовые неопудренные перчатки, Вортекс, Стерильные наконечники пипеток с фильтром.
Пипетки переменной емкости, Оптическая герметизирующая пленка для ПЦР плашек,
96-луночные ПЦР плашки, 20 % хлоросодержащий отбеливатель (или эквивалент), 70 % этанол,
Микроцентрифужные пробирки 0,2 мл (дополнительно) и 2,0 мл.
10. Сведения для идентификации медицинских изделий с целью получения безопасной
комбинации и информация об известных ограничениях по совместному использованию
медицинских изделий
Неприменимо.
25
--- стр. 28 ---
11. Условия хранения и обслуживания медицинского изделия
Срок годности изделия: 12 месяцев.
Гарантийный срок хранения равен сроку годности.
Реакционная смесь 1 для определения мутации цоДНК (2Х) для реакции 1;
Реакционная смесь 2 для определения мутации СТ (2Х) для реакций 2-7: хранить в
морозильной камере при температуре от -25 °С до -15 °С. Разморозить один флакон реакционной
смеси за один раз и хранить при температуре от 2 °С до 8 °С в течение 30 дней. Не следует
замораживать-размораживать реагент более 3 раз, посколы^ повторное
замораживание-размораживание отрицательно влияет на эффективность фермента. Если
предполагается использование одного флакона этого реагента в течение более 30 дней, после
первого размораживания рекомендуется использовать небольшой объем аликвоты.
Смесь праймеров / проб: хранить в морозильной камере при температуре от -25 °С до
-15 °С. После размораживания смесь праймеров/проб сохраняет стабильность в течение 30 дней
при хранении при температуре от 2 °С до 8 °С. Если предполагается использование смеси
праймеров/проб в течение более 30 дней, для длительного хранения при температуре -25 °С до
-15 °С после первого размораживания рекомендуется использовать небольшой объем аликвоты.
Смесь положительного контроля (ПК): хранить при температуре от 2 °С до 8 °С после
размораживания.
При транспортировке, осуществлении погрузки и выгрузки изделия должны быть приняты меры,
предохраняющие тару от механических повреждений, воздействия атмосферных осадков,
горючих материалов и кислот.
При соблюдении условий хранения, эксплуатации и транспортировки, изделие остается
стабильным до истечения срока годности, указанного на внешней этикетке.
12. Информация о порядке действий в случае нарушения упаковки, о стерильном состоянии
и методе стерилизации
Неприменимо. Изделие поставляется нестерильным и не требует стерилизации.
13. Информация для пользователей
При соблюдении требований инструкции возникновение нежелательных событий маловероятно.
Для соблюдения требований безопасности необходим инструктаж персонала и выполнение
соответствующих обязательных инструкций по технике безопасности и технологических
процессов.
13.1. Сведения и меры предосторожности, предпринимаемые в отношении
потенциально инфекционного материала, содержащегося в изделии
Неприменимо. Изделие не содержит потенциально инфицированный материал.
26
--- стр. 29 ---
13.2. Сведения о мерах предосторожности и меры, предпринимаемые в случае сбоя или
отклонений в функционировании изделия, определяемых по внешним признакам
Не используйте изделие с истекшим сроком годности, при нарушении целостности упаковки. В
случае отклонения внешнего вида изделия от нормального проверьте функционирование изделия
на заведомо пригодном образце биоматериала.
13.3. Сведения о безопасности от воздействия химических и загрязняющих веществ, в том
числе предельно допустимые концентрации веществ или входящих в него
компонентов
Неприменимо. Набор для определения мутации гена EGFR в цоДНК не содержит загрязняющих
веществ.
13.4. Сведения о пожарной безопасности
Неприменимо. Набор для определения мутации гена EGFR в цоДНК не является
пожароопасным.
13.5. Сведения о взрывобезопасности
Неприменимо. Набор для определения мутации гена EGFR в цоДНК не является взрывоопасным.
13.6. Сведения о радиационной безопасности
Неприменимо. Набор для определения мутации гена EGFR в цоДНК не содержит источников
излучения.
13.7. Сведения о безопасности при обслуживании изделия, в том числе требования
безопасности при ошибочных действиях обслуживающего персонала и
самопроизвольном нарущении функционирования
При использовании изделия квалифицированным персоналом согласно инструкции по
эксплуатации и с соблюдением мер предосторожности, ошибочные действия персонала и
нарушения функционирования исключены.
13.8. Сведения о защитных средствах и мероприятиях обеспечения безопасности
При использовании Набор для определения мутации гена EGFR в цоДНК по назначению и
соблюдении мер предосторожности (использовании специальной лабораторной одежды: халат и
одноразовые перчатки, фартук) контакт с организмом человека исключен.
27
--- стр. 30 ---
Все использованные одноразовые материалы подвергать обработке дезинфицирующими
средствами с последующей утилизацией в соответствии с разделом 24 “Утилизация”.
При работе с жидкими реагентами использовать лицевой щиток или очки для защиты глаз.
13.9. Требования к помещениям
Работы должны проводиться в проветриваемых помещениях или в помещениях, оборудованных
приточно-вытяжной вентиляцией. Кратность обмена воздуха - не менее 8.
На рабочих местах должны быть обеспечены допустимые параметрьЕ микроклимата согласно
нормативным актам.
В помещениях должно быть обеспечено наличие кипяченой воды и аптечки с медикаментами для
оказания первой медицинской помощи.
Требования к помещениям регулируются действующими локальным законодательством и
нормативными актами.
13.10. Меры предосторожности при использовании изделия по назначению
При контакте с биоматериалом необходимо соблюдать меры предосторожности. Во время работы
следует пользоваться перчатками и специальной лабораторной одеждой, так как образцы
биоматериала следует рассматривать как потенциально инфицированные, способные длительное
время сохранять и передавать ВИЧ, вирус гепатита В или любого другого возбудителя инфекции.
Меры предосторожности: при работе с изделием необходимо использовать СИЗ и средства
защиты глаз. При попадании в глаза промыть водой и немедленно обратиться к врачу. При
проглатывании обратиться к врачу.
ПЦР амплификация отличается высокой чувствительностью к перекрестной контаминации.
Очень важно проводить этапы, предшествующие амплификации (т. е. выделение ДНК,
приготовление ПЦР реакции) в отдельных местах, в идеале в отдельных помещениях с
изолированными системами вентиляции. Особенно важно, чтобы подготовка ПЦР реакции
осуществлялась в помещении с положительным давлением воздуха (или в ламинарном шкафу).
Во избежание контаминации между образцами/реагентами при работе с ДНК и реагентами для
ПЦР необходимо соблюдать дополнительные меры предосторожности:
Протирать рабочую зону, пипеточные дозаторы и оборудование, предназначенное для
использования вблизи рабочей зоны, дезинфицирующим средством для очистки
поверхностей (20%-отбеливатель или аналог), с тем чтобы устранить ДНК и ДНКазы, с
последующим использованием 70 % этилового спирта.
- Перед применением каждую пробирку следует перемешать на вортексе.
Центрифугировать все пробирки перед открытием.
- После перемешивания/смешивания на вортексе каждую микроцентрифужную пробирку
открывать осторожно, при этом следует избегать касания внутренней части крышки.
28
--- стр. 31 ---
Во избежание перекрестной контаминации для всех этапов пипетирования следует
использовать аэрозоль-устойчивые (с фильтром) наконечники.
Между всеми переносами жидкостей необходимо менять наконечники пипеток.
При работе с ДНК/реагентами всегда следует надевать перчатки и менять перчатки между
этапами пре-амплификации и пост-амплификации.
Перемещение пробирок, штативов, пипеток и другого используемого оборудования
должно быть от пре-амплификации до пост-амплификации, а не наоборот.
13.11. Меры предосторожности в случае предсказуемого риска
Если в ходе предварительного анализа рисков выявляются риски, требующие мероприятий по
снижению уровня риска до приемлемого, то к ним применяются процедуры этапа по управлению
рисками.
Меры по уменьшению вреда и вероятности риска для изделия направлены на то, чтобы
остаточный риск снизился до приемлемого.
В результате возможные риски для изделия являются допустимыми: преимуществ для пациента и
медицинского работника больше, чем возможных опасностей.
13.12. Меры по защите окружающей среды
Не допускайте попадания изделия в канализацию.
После использования изделия образцы следует рассматривать как потенциально
инфицированные, способные длительное время сохранять и передавать ВИЧ, вирус гепатита В
или любого другого возбудителя инфекции. Образцы должны утилизироваться в соответствии с
действующими локальным законодательством и нормативными актами в отношении
биологически опасных отходов.
Жидкие отходы (загрязненная вода, образующаяся после промывки оборудования) должны быть
собраны в специально предназначенные емкости и своевременно вывезены в места захоронения.
13.13. Информация о токсикологическом воздействии
Информация о токсикологическом воздействии представлена в таблице 3.
Таблица 3. Информация о токсикологическом воздействии.
Наименование медицинского изделия
(модификаций при наличии)
Состав
Набор реагентов для in vitro диагностики
наличия мутаций гена EGFR методом
полимеразной цепной реакции в режиме
реального времени в образцах плазмы крови
человека, 48 реакций
Отсутствует
29
--- стр. 32 ---
13.14. Информация об обстоятельствах, при которых пользователь должен
проконсультироваться с медицинским специалистом
При случайном попадании изделия в желудочно-кишечный тракт немедленно обратитесь к
врачу.
При попадании на кожу или слизистую оболочку глаз немедленно обратитесь к врачу.
14. Кратность применения и техническое обслуживание
Набор для определения мутации гена EGFR в цоДНК для многократного применения.
Изделие не требует технического обслуживания.
15. Информация о надлежащей обработке изделия для его повторного использования,
включая очистку, дезинфекцию, упаковку и при необходимости метод повторной
стерилизации
Неприменимо. Набор для определения мутации гена EGFR в цоДНК не требует обработки при
повторном использовании.
16. Специальные требования в отношении помещений, специальной подготовки или особой
квалификации пользователя и третьих лиц
Набор для определения мутации гена EGFR в цоДНК предназначен для профессионального
применения в клинической лабораторной диагностике (in vitro) квалифицированным персоналом
со средним и высшим медицинским образованием, дополнительно прошедшим специальное
обучение для работы изделием.
Работы должны проводиться в проветриваемых помещениях или в помещениях, оборудованных
приточно-вытяжной вентиляцией. Кратность обмена воздуха - не менее 8.
На рабочих местах должны быть обеспечены допустимые параметры микроклимата:
— температура воздуха: 17-23 °С (в холодный период года);
— 18-27 °С (в теплый период года);
— влажность воздуха 15-75 %.
В помещениях должно быть обеспечено наличие кипяченой воды и аптечки с медикаментами для
оказания первой медицинской помощи.
Для соблюдения требований безопасности необходим инструктаж персонала и выполнение
соответствующих обязательных инструкций по технике безопасности и технологических
процессов. Регулируется действующими локальным законодательством и нормативными актами.
30
--- стр. 33 ---
17. Информация об условиях, необходимых для сбора, обработки и подготовки образцов,
данные по стабильности анализируемых образцов, в том числе условия и длительность
хранения, условия транспортировки, ограничения по циклам заморозки
(размораживания)
Реакционная смесь 1 для определения мутации цоДНК (2Х): хранить в морозильной камере
при температуре от -25 °С до -15 °С. Разморозить один флакон реакционной смеси за один раз и
хранить при температуре от 2 °С до 8 °С в течение 30 дней. Не следует
замораживать-размораживать реагент более 3 раз, поскольку повторное
замораживание-размораживание отрицательно влияет на эффективность фермента. Если
предполагается использование одного флакона этого реагента в течение более 30 дней, после
первого размораживания рекомендуется использовать небольшой объем аликвоты.
Смесь праймеров / проб: хранить в морозильной камере при температуре от -25 °С до -15 °С.
После размораживания смесь праймеров/проб сохраняет стабильность в течение 30 дней при
хранении при температуре от 2 °С до 8 °С. Если предполагается использование смеси
праймеров/проб в течение более 30 дней, для длительного хранения при температуре -25 °С до
-15 °С после первого размораживания рекомендуется использовать небольшой объем аликвоты.
Смесь положительного контроля: хранить при температуре от 2 °С до 8 °С после
размораживания.
Настоящее изделие и его компоненты сохраняют свою эффективность до истечения срока
годности, указанного на этикетках каждой пробирки, при условии надлежащего соблюдения
вышеописанных условий хранения и обращения.
18. Информация о подготовке к использованию изделия
Неприменимо. Набор для определения мутации гена EGFR в цоДНК готово к использованию.
19.Информация, необходимая для проверки правильности установки изделия и его
готовности к безопасной работе по назначению
Неприменимо. Изделие не требует установки.
19.1. Методы снижения рисков при работе с изделием
Проблема: Решение:
Сигнал внутреннего контроля (VIC) для образца имеет
значение Q выше, чем верхнее пороговое значение Ct,
указанное в разделе 8.2 настоящей инструкции.
Если внутренний контрольный сигнал возникает после
порогового значения или не возникает, реакция была
недостаточно насыщена (недостаточно ДНК),
необходимо провести повторный анализ с большим
количеством ДНК.
Если анализ образца, в котором, точно имеются
ингибиторы ПЦР (например, образцы меланомы имеют
меланин, который является ингибитором ПЦР),
необходимо провести повторный анализ образца с
меньшим количеством ДНК или разбавить образец
водой в соотношении 1:5 и повторно провести анализ.
Если увеличение/уменьшение объема ДНК не решает
проблему:
31
--- стр. 34 ---
1. Выделить ДНК заново (при возможности).
2. Переосадить этанолом и вновь
ресуспендировать в меньшем объеме растворителя.
3. Использовать коммерчески доступный
юэнцентратор ДНК.
Целевой и внутренний контрольные сигналы являются
отрицательными для положительного контроля (ПК).
Реагенты могут деградировать. Для получения
дополнительной информации необходимо связаться со
своим поставщиком.
Во избежание последующих сбоев в работе реагента
необходимо выполнять инструкции по хранению и
обращению, которые содержатся в разделе 11
настоящей инструкции.
Аномальный пик на графике усиления образца с
помощью прибора Life Technologies.
Аномальная линия пика может быть результатом
пузырьков в лунке, содержащей образец.
Центрифугировать плашку перед выполнение анализа
образца.
Аномальный пик может быть ощибкой детекции
флуоресценции прибором. Провести повторный анализ
другой плашки, чтобы убедиться в отсутствии
воспроизводимости. Если пик воспроизводится,
необходимо связаться с производителем прибора.
Fluorescence
Cycle
Флуоресценция (465-510)
Цикл
Сигнал в контроле КЕМ. Указывает контаминацию геномной ДНК. Оценить
лабораторную процедуру. Предложения по сведению к
минимуму загрязнения рабочей поверхности см. в
разделе 13.10 настоящей инструкции.
При наличии целевого сигнала и (или) сигнала
внутреннего контроля, результаты могут давать
ложно-положительный результат и требуется
повторный анализ.
Целевой сигнал пересекает пороговое значение для
образцов КЕМ при проведении анализа на приборе
Life Technologies.
Обеспечить установку ручных пороговых значений,
предложенных в настоящей инструкции.
Убедиться в том, что сигнал не является истинной
амплификацией путем проверки сигнала на
многокомпонентном графике (приборы Life
Technologies). Если сигнал горизонтальный, то это не
истинная амплификация.
Если сигнал на многокомпонентном графике является
линейным и сигнал пересекает пороговое значение,
необходимо отрегулировать базовый конечный цикл.
Установить начальный цикл на 3 и остановить; самый
ранний цикл VIC Ct (если сигнал по-прежнему
пересекает пороговое значение, увеличивать число
циклов с шагом 3 до тех пор, пока сигнал не перестанет
пересекать пороговое значение).
32
--- стр. 35 ---
Amplification Plot График амплифико 11ии
Cycle Цикл
Образец диюго типа имеет значение Ct целевого
сигнала, которое попадает в параметры для статуса
положительной мутации.
Если сигнал внутреннего контроля находится в
пределах диапазона, тогда образец дикого типа имеет
контаминацию положительным образцом, геномной
ДНК или положительным контролем. Провести анализ
повторно с новым образцом диюго типа.
Также возможно, что образец диюго типа не является
истинным диким типом.
20. Рекомендации в отношении процедур контроля качества
Компоненты настоящего Набора для определения мутации гена EGFR в цоДНК производятся в
соответствии со стандартом GMP (Надлежащая производственная практика). Для обеспечения
наивысшего качества продукции GMP требует обширной валидации и документирования
производственных процедур.
Каждая серия испытывалась на приборе Bio-Rad CFX96 или QuantStudioTM 5. Сертификат
анализа для каждой серии предоставляется по запросу.
21. Информация о прослеживаемости значений, заданных для калибраторов или
контрольных материалов, которая обеспечивается посредством доступных
референтных методик измерения и эталонов
Неприменимо.
22. Биологический референтный интервал
Неприменимо.
23. Информация об интерферирующих веществах или ограничениях, связанных с
пробой, которые могут повлиять на результат исследования
Неприменимо.
24. Утилизация
Уничтожать неиспользованные при исследованиях изделия и другие реактивы следует как
эпидемиологически опасные отходы в соответствии с принятыми локальными правилами по
обращению и утилизации медицинских отходов.
Дезинфекцию оборудования и помещений также проводить в соответствии с локальными
требованиями.
Общий порядок действий:
1) Изделия, пришедшие в негодность, в том числе в связи с истечением срока годности,
подлежат утилизации.
33
--- стр. 36 ---
2) Изделия, пришедшие в негодность, с истекшим сроком годности, являющиеся подделками
или незаконными копиями изделий, а также изделия, обнаруженные и конфискованные
таможенными органами, подлежат уничтожению или утилизации.
3) Уничтожение изделий осуществляется организациями, имеющими соответствующую
лицензию. Уничтожать изделия необходимо на специально оборудованных площадках или
полигонах, а также в помещениях в соответствии с локальными требованиями и с соблюдением
требований по охране окружающей среды.
4) Изготовитель, поставщики, продавцы, импортеры могут уничтожать изделия, потерявщие
потребительские свойства или с истекшим сроком годности, при использовании методов,
согласованных с территориальными органами, ответственными за
санитарно-эпидемиологическое благополучие населения.
5) Изделия во внешней упаковке с предупредительными знаками об опасности следует
уничтожать с соблюдением соответствующих мер безопасности и дезактивации.
6) Жидкие компоненты (реагенты, реактивы) уничтожаются раздавливанием внутренней
упаковки и разведением водой в соотношении 1:100, сливом раствора в канализацию и вывозом
остатка упаковок как производственного или бытового мусора.
Твердые компоненты подлежат дроблению, разведению водой в соотношении 1:100, сливом
раствора в промышленную канализацию и вывозом остатков упаковок как производственного
или бытового мусора. Компоненты изделий, нерастворимые в воде, уничтожают путем сжигания.
7) Изделия, содержащие потенциально опасные материалы, перед уничтожением должны
быть обеззаражены в соответствии с действующим локальным законодательством.
8) Технические приспособления, принадлежности, входящие в комплектацию изделия,
подлежат механическому разрушению с вывозом остатков как производственного или бытового
мусора или сжиганию.
9) Персонал, осуществляющий уничтожение изделий, должен соблюдать правила
безопасности проведения того или иного способа уничтожения.
25. Информация о необходимости направления сообщения производителю или его
уполномоченному представителю о нежелательных событиях, которые имеют признаки
неблагоприятного события (инцидента)
По всем вопросам, касающимся эксплуатации, качества изделия и др., на территории Российской
Федерации следует обращаться:
ООО «БиоВитрум»
199106, Российская Федерация, Санкт-Петербург, Большой проспект В.О., дом 68, лит. А.
Телефон: +7 (812) 305 0606
Email:
cert@biovitrum.ru .
34
--- стр. 43 ---
Содержание
1. Реагенты
1.1. Комплект поставки
1.2. Внешний вид
1.3 Условия хранения и обслуживания медицинского изделия
1.4 Предостережения и меры предосторожности
2. Необходимое оборудование и материалы
2.1 Реагенты
2.2. Оборудование
Вспомогательные материалы:
3. Принцип действия медицинского изделия
4. Проведение анализа
4.1. Выделение ДНК
4.2. Подготовка реагентов (для всех приборов)
4.3. Настройки прибора
5. Анализ данных
5.1. Этапы анализа, специфические для прибора
5.2. Интерпретация результатов
5.3. Ограничения анализа
6. Приложения
6.1 Устранение неисправностей
6.2 Мутации, определяемые этим набором
3
3
3
3
4
6
6
6
6
7
8
8
8
10
14
14
15
16
17
17
19
--- стр. 44 ---
1. Реагенты
1.1. Комплект поставки
В состав изделия входит:
Наименование Количество пробирок Объем реагента,
(мкл)
Реакционная смесь 1 для определения мутации
цоДНК (2Х)
Для реакции 1
1 800
Реакционная смесь 2 для определения мутации
цоДНК (2Х)
Для реакций 2-7
4 1300
Смесь праймеров / проб 1* 158
Смесь положительных контролей (ПК)* 1 615
Краткая инструкция (при необходимости) - 1 шт.**
В каждой пробирке содержится особая смесь праймеров для амплификации конкретных мутаций. Содержимое этих
пробирок не следует смешивать.
^ Смесь положительных контролей содержит смесь синтетических последовательностей ДНК, которые
соответствуют каждой мутации, определяемой этим набором и внутренним контролем.
** Полная инструкция по применению изделия размещена на сайте hitos: biovitrum.ru Jirectioas oiK 44liLii2tu>stic>.himl
1.2. Внешний вид
Параметр Наименование
Реакционная
смесь 1 для
определения
мутации
цоДНК (2Х)
Для реакции 1
Реакционная
смесь 2 для
определения
мутации
цоДНК (2Х)
Для реакций 2-7
Смесь
праймеров/
проб
Смесь
положительного
контроля (ПК)*
Количество (шт) 1 4 Т 1
Объем реагента (мкл) 800 1300 158 615
Цвет крышки пробирки Синий Фиолетовый Коричневый Красный
* В каждой пробирке содержится особая смесь праймеров для амплификации конкретных мутаций. Содержимое
этих пробирок не следует смешивать.
§ Смесь положительного контроля содержит смесь синтетических последовательностей ДНК, которые
соответствуют каждой мутации, определяемой этим набором и внутренним контролем.
1.3 Условия хранения и обслуживания медицинского изделия
Срок годности изделия; 12 месяцев.
Гарантийный срок хранения равен сроку годности.
--- стр. 45 ---
Реакционная смесь 1 для определения мутации цоДНК (2Х) для реакции 1;
Реакционная смесь 2 для определения мутации цоДНК (2Х) для реакций 2-7: хранить в
морозильной камере при температуре от-25 °С до -15 °С. Разморозить один флакон реакционной
смеси за один раз и хранить при температуре от 2 °С до 8 °С в течение 30 дней. Не следует
замораживать-размораживать реагент более 3 раз, поскольку повторное
замораживание-размораживание отрицательно влияет на эффективность фермента. Если
предполагается использование одного флакона этого реагента в течение более 30 дней, после
первого размораживания рекомендуется использовать небольшой объем аликвоты.
Смесь праймеров / проб: хранить в морозильной камере при температуре от -25 °С до
-15 °С. После размораживания смесь праймеров/проб сохраняет стабильность в течение 30 дней
при хранении при температуре от 2 °С до 8 °С. Если предполагается использование смеси
праймеров/проб в течение более 30 дней, для длительного хранения при температуре -25 °С до
-15 °С после первого размораживания рекомендуется использовать небольшой объем аликвоты.
Смесь положительных контролей (ПК): хранить при температуре от 2 °С до 8 °С после
размораживания.
При транспортировке, осуществлении погрузки и выгрузки изделия должны быть приняты меры,
предохраняющие тару от механических повреждений, воздействия атмосферных осадков,
горючих материалов и кислот.
При соблюдении условий хранения, эксплуатации и транспортировки, изделие остается
стабильным до истечения срока годности, указанного на внешней этикетке.
1.4 Предостережения и меры предосторожности
При контакте с биоматериалом необходимо соблюдать меры предосторожности. Во время работы
следует пользоваться перчатками и специальной лабораторной одеждой, так как образцы
биоматериала следует рассматривать как потенциально инфицированные, способные длительное
время сохранять и передавать ВИЧ, вирус гепатита В или любого другого возбудителя инфекции.
Меры предосторожности: при работе с изделием необходимо использовать СИЗ и средства
защиты глаз. При попадании в глаза промыть водой и немедленно обратиться к врачу. При
проглатывании обратиться к врачу.
ПЦР амплификация отличается высокой чувствительностью к перекрестной контаминации.
Очень важно проводить этапы, предшествующие амплификации (т. е. выделение ДНК.
приготовление ПЦР реакции) в отдельных местах, в идеале в отдельных помещениях с
изолированными системами вентиляции. Особенно важно, чтобы подготовка ПЦР реакции
осуществлялась в помещении с положительным давлением воздуха (или в ламинарном шкафу).
Во избежание контаминации между образцами/реагентами при работе с ДНК и реагентами для
ПЦР необходимо соблюдать дополнительные меры предосторожности:
- Протирать рабочую зону, пипеточные дозаторы и оборудование, предназначенное для
использования вблизи рабочей зоны, дезинфицирующим средством для очистки
поверхностей (20%-отбеливатель или аналог), с тем чтобы устранить ДНК и ДНКазы, с
последующим использованием 70 % этилового спирта.
- Перед применением каждую пробирку следует перемешать на вортексе.
--- стр. 51 ---
Exl9del
Т79вН
L858R w
C797S
L861Q @
S678I (J)
G719X fT
c
Мастер
S миксы
(1-7)
Ех2в ^
InsGGT/CAtly
Ex20 ^
InsGGT/CACil/.
2 3 4 5 6 7 8 9 10 11
\ \ \ . \ . \ ;• / / • ■ >1 S ;
\
)
/ \/
\ \ / ') ( \ / /
|Н \!/
/fS
\
i m \ ■
J ) л ч Л / h. 1 5С О) ('ot У .я
» 1
=г а- =г s а а а а аV 0) ф ф > ,ф ф ф ф Ф Ф
')
\ : (П (П m / \ m : m i m ) 1 mm flj / (0 ! го / ' т (0 гв to (0 <0а о. а а о. о. а а о. а«оо ) >
\S )
юо \ . / '
\оо оо оо оо \оо i iS \ ; * / \
оо \ 1
S
'I , \ : ,
) ! \ i \ у
/ ' ' /' ' '
\ \
/ \Siiimtui ) VL_J/ W-J L -. J i \
H
Рисунок 1. Разметка плашки для семи реакций для каждого образца. Одна 96-луночная плашка
может вмешать до 10 исследуемых образцов, одну смесь положительных контролей и один
контроль без матрицы (КБМ, NTC). Ротор на 72 лунки (не показан) может вмещать до 7
исследуемых образцов, одну смесь положительных контролей и один КБМ. Рекомендуемый
макет плашки показан на рисунке выше.
4. Добавить 25 мкл мастер-микса для положительного контроля и КБМ в контрольные
лунки.
5. Добавить по 1— 12 мкл образца вкДНК (в зависимости от концентрации) в каждую
соответствующую лунку и перемешать пипетированием несколько раз.
6. Добавить по 5 мкл положительного контроля и воды (КБМ) в соответствующие лунки и
перемешать пипетированием несколько раз.
7. Закрыть плашку оптической герметичной пленкой (для плашек) или крышками (для
пробирок).
8. Необходимо быстро центрифугировать плашку для сбора капель на дне лунок и убедиться
в отсутствии пузырьков на дне лунок.
4.3. Настройки прибора
Термоциклер для амплификации нуклеиновых кислот 1000 с Модулем реакционным
оптическим CFX96
1. В «Мастере запуска» (Startup Wizard) выбрать «Создать новый эксперимент» (Create New
Experiment) и убедиться, что в раскрываюшемся списке выбрано CFX96. Нажать ОК.
10
--- стр. 52 ---
2. Во вкладке «Протокол» (Protocol) окна «Установка эксперимента» (Experiment Setup)
выбрать «Создать новый» (Create New) и ввести следующие параметры цикла:
Этап Температура Время
I 95 °С 10 мин
2 95 °С 15 сек.
3 58 °С 30 сек.
+ чтение плашки
4 Повторить с шага 2 еше 39 раз
ЗАВЕРШЕНИЕ
3. После завершения нажать «ОК», чтобы сохранить шаблон протокола. Обратить внимание
на расположение сохраненного файла шаблона, чтобы использовать его для последующих
анализов. Нажать «Дальше» (Next), чтобы перейти к окну «Настройка» (Setup).
4. Изменить объем образца на 30 мкл.
5. Установить флуорофоры для всех каналов.
6. Нажать «Дальше» (Next), затем нажать «Запустить анализ» (Start Run), чтобы начать
анализ.
Амплификатор нуклеиновых кислот Applied Biosystems QuantStudio 5 с
гибридизационно-флуоресцентной детекцией продуктов ПЦР в режиме реального времени
1. В программном обеспечении для проектирования и анализа QuantStudio необходимо
выбрать создание нового эксперимента.
2. Во вкладке «Свойства» (Properties):
a. Выбрать «96-луночный блок 0,2 мл» (96-Well 0.2 mL block) для «Блока»
b. Выбрать «Сравнительный Ct (AACt)» (Comparative Ct (AACt)) для «Типа эксперимента»
c. Выбрать «Реагенты TaqMan®» (TaqMan® Reagents) для «Реагентов» (Chemistry)
d. Выбрать «Быстрый» (Fast) для «Режима анализа»
3. Во вкладке «Метод» (Method):
a. Изменить объем на 30 мкл.
b. Изменить скорость охлаждения на 2,38°С/сек., а всех другие скорости изменений на
3°С/сек.. как показано ниже.
c. Ввести следующие параметры цикла:
Этап Температура Время
11
--- стр. 53 ---
Этап инкубации
Скорость линейного изменения 3 °С/сек.
1 95 °С 10 мин
Этап ПЦР
Скорость линейного изменения 3 °С/сек.
1 95 X 15 сек.
Скорость линейного изменения 2,38 °С/сек.
2 58 X 30 сек.
+ чтение плашки
Повторить этап ПЦР 40х
ЗАВЕРШЕНИЕ
4. Во вкладке «Плашка» (Plate):
a. Установить Пассивный стандарт на «Отсутствует» (None).
b. Нажать вкладку «Расширенная настройка» (Advanced Setup) и добавить следующие
цели в поле «Цели» (Targets).
Название цели Краситель Гаситель флуоресценции
Реакция 1 Exl9Del CY5 NFQ-MGB
Реакция 1 Т790М РАМ NPQ-MGB
Реакция 1 L858R ROX NPQ-MGB
Реакция 1 1C VIC NPQ-MGB
Реакция 2 C797S FAM NPQ-MGB
Реакция 2 1C VIC NPQ-MGB
Реакция 3 L861Q FAM NPQ-MGB
Реакция 3 1C VIC NPQ-MGB
Реакция 4 S768I РАМ NPQ-MGB
Реакция 4 1C VIC NPQ-MGB
Реакция 5 G7I9X РАМ NPQ-MGB
Реакция 5 1C VIC NFQ-MGB
Реакция 6 Ex20InsGGT/CAC РАМ NFQ-MGB
Реакция 6 1C VIC NFQ-MGB
12
--- стр. 54 ---
Реакция 7 Ex20Ins9 РАМ NFQ-MGB
Реакция 7 1C VIC NFQ-MGB
5.
6.
7.
8.
9.
В поле «Образцы» (Samples) присвоить идентификаторы образцов необходимым лункам.
Нажать «Сохранить» (Save), чтобы сохранить выполняемый файл.
Открыть файл запуска на приборе QuantStudio™ 5.
Убедиться в том, что объем реакционной смеси установлен на 30 мкл, а «Сбор данных»
(Data Collection) включен на этапе при температуре 58 °С.
Загрузить плашку на прибор и нажать «ЗАПУСТИТЬ АНАЛИЗ» (START RUN).
Прибор для проведения полимеразной цепной реакции в режиме реального времени
Rotor-Gene Q
1. Выбрать «Файл» (File) > «Новый» (New), в диалоговом окне нажать вкладку
«Расширенные» (Advanced), выбрать «Два этапа» (Two Step) и нажать «Новый» (New).
2. Выбрать 72-луночный ротор, отметить поле «Запирающее кольцо присоединено» (Locking
Ring Attached) и нажать «Далее» (Next), затем пропустить «Мастер» (Wizard).
3. Перейти к «Вид» (View) > «Настройки анализа» (Run Settings), ввести 30 мкл для объема
реакционной смеси и нажать «ОК».
4. Перейти к «Вид» > «Редактор профиля».
5. Нажать на «Инкубация» (Hold) и ввести 95 °С для «температура инкубации» (Hold
Temperature) и 10 минут для «Время инкубации» (Hold Time).
6. Нажать на кнопку «Циклирование» (Cycling), ввести «Этот цикл повторяется» (This cycle
repeats) 40 раз, затем ввести следующие параметры «Установленный этап» (Timed Step),
нажимая на каждый этап на панели справа:
Этап Температура (®С) Время Сбор данных
Инкубация 95 °С 10 мин Нет
Установленный этап 95 °С 15 сек. Нет
Установленный этап 58 °С 30 сек. Запрос данных для Цикла А по
«Зеленому» (Green), «Желтому»
(Yellow), «Красному» (Red),
«Оранжевому» (Orange)
7. Нажать ОК.
Дополнительно', сохранить эти параметры запуска для последующего использования, выбрав
кнопку «Сохранить как» (Save As) в верхней части диалогового окна.
8. Перейдите к «Увеличение» (Gain), ввести следующие параметры:
Примечание: предлагаемые параметры увеличения, возможно, потребуется скорректировать с
учетом изменчивости показателей по приборам.
Детектор Увеличение
13
--- стр. 55 ---
Зеленый 6,67
Желтый 10
Оранжевый 5
Красный 5
Crimson 7
HRM 7
9. Загрузить стрипы пробирок в ротор.
10. Перейти к «Анализ» (Run) > «Запустить анализ» (Start Run), затем нажать кнопку
«Запустить» (Start), чтобы начать анализ.
Примечание: диалоговое окно «Редактировать образцы» (Edit Samples) открывается сразу после
запуска анализа. Введите информацию об образце во время работы прибора или после
завершения анализа.
14
--- стр. 56 ---
5. Анализ данных
Важно: для пороговых значений может потребоваться корректировка с учетом
чувствительности флуоресцентной детекции каждого термоциклера. В качестве исходной
точки необходимо испо.чьзоватъ перечисленные ниже параметры.
5.1. Этапы анализа, специфические для прибора
Термоциклер для амплификации нуклеиновых кислот 1000 с Модулем реакционным
оптическим CFX96о
Проанализировать данные программным обеспечением прибора для ПЦР в режиме реального
времени, используя следующие критерии:
"Ct (Cq) Determination Mode" (Режим определения Ct): "Single Threshold" (Одиночное
пороговое значение).
"Baseline Setting" (Настройки исходных данных): "Baseline Subtracted Curve Fit" (Подбор
кривой с вычетом исходных условий).
Baseline and Threshold (Исходные данные и пороговое значение): заданные пользователем
в соответствии с таблицей ниже:
Целевое значение Реакция Исходные данные Пороговое значение
HEX (VIC)
1.2 3-22 700
3,4, 6,7 3-22 450
5 3-22 400
FAM
1 3-22 400
2-7 3-22 300
ROX 1 3-22 400
CY5 1 3-22 300
Амплификатор нуклеиновых кислот Applied Biosystems QuantStudio 5 с
гибридизационно-флуоресцентной детекцией продуктов ПЦР в режиме реального времени
Проанализировать данные программным обеспечением прибора для ПЦР в режиме реального
времени, используя следующие критерии:
Исходные данные и пороговое значение: заданные пользователем в соответствии с
таблицей ниже:
Целевое значение Реакция Исходные данные Пороговое значение
HEX (VIC)
1,2 3-22 55 000
3, 4, 6, 7 3-22 27 500
5 3-22 20 000
FAM I 3-22 65 000
15
--- стр. 57 ---
2-7 3-22 40 000
ROX 1 3-22 35 000
CY5 1 3-22 30 000
Прибор для проведения полимеразной цепной реакции в режиме реального времени
Rotor-Gene Q
Проанализировать данные программным обеспечением прибора для ПЦР в режиме реального
времени, используя следующие критерии:
"Dynamic Tube" (Динамическая пробирка): Вкл.
"Slope Correct" (Поправка наклона): Вкл.
Удаление выбросов (Outlier Removal): 5 %
Установить следующие пороговые значения:
VIC -желтый РАМ — Зеленый CY5 — Красный ROX — Оранжевый
0,1 0,15 0,05 0,05
5.2. Интерпретация результатов
Термоциклер для амплификации нуклеиновых кислот 1000 с Модулем реакционным
оптическим CFX96
1. Выбрать лунки с положительным контролем и проверить каждый канал на наличие
сигнала. ПК должен иметь аналогичные значения Ct для канала VIC для каждой реакции.
2. Выбрать лунки с отрицательным контролем и убедиться в отсутствии сигнала или в том,
что значение Ct больше 38,5 для каждого канала.
3. Выбрать лунки с реакциями для каждого исследуемого образца и проверить сигнал для
каждого канала. Для интерпретации результатов необходимо использовать таблицу Ct
ниже.
Целевое Ct: VIC (HEX) Ct: Результат
Ct = любое 0 < Ct < 28 Избыточная начальная концентрация. Повторный
анализ с меньшим количеством ДНК.
38,5 <Ct; Cl = H/n 28<Ct<31,5 Отрицательный образец. Повторный анализ не
требуется.
Ct<38,5 28<Ct<31,5 Положительный для целевого канала: Exl9Del
(Су5), L858R (ROX), все остальные (РАМ).
Ct = любое Ct >3l,5;Ct = H/n Недостаточная начальная концентрация.
Повторный анализ с большим количеством ДНК.
Амплификатор нуклеиновых кислот Applied Biosystems QuantStudio 5 с
гибридизационно-флуоресцентной детекцией продуктов ПЦР в режиме реального времени
16
--- стр. 58 ---
1. Выбрать лунки с положительным контролем и проверить каждый детектор на наличие
сигнала. ПК должен иметь аналогичные значения Ct для канала VIC для каждой реакции.
2. Выбрать лунки с отрицательным контролем и убедиться в отсутствии сигнала или в том,
что значение Ct больше 38,5 для каждого детектора.
3. Выбрать лунки с реакциями для каждого исследуемого образца и проверить сигнал для
каждого детектора. Для интерпретации результатов необходимо использовать таблицу Ct
ниже.
Целевое Ct: VIC (HEX) Ct: Результат
Ct = любое 0 < Ct < 28 Избыточная начальная концентрация. Повторный
анализ с меньшим количеством ДНК.
38,5 <Ct;
Ct = неопределено
28<Ct<31,5 Отрицательный образец. Повторный анализ не
требуется.
Ct<38,5 28<Ct<3l,5 Положительный для целевого канала: Exl9Del
(Су5), L858R (ROX), все остальные (FAM).
Ct = любое Ct>3l,5; Ct =
неопределено
Недостаточная начальная концентрация.
Повторный анализ с большим количеством ДНК.
Прибор для проведения полимеразной цепной реакции в режиме реального времени
Rotor-Gene Q
1. Выбрать лунки с положительным контролем и проверить каждый канал на наличие
сигнала. ПК должен иметь аналогичные значения Ct для канала VIC для каждой реакции.
2. Выбрать лунки с отрицательным контролем и убедиться в отсутствии сигнала или в том,
что значение Ct больше 38,5 для каждого канала.
3. Выбрать лунки с реакциями для каждого исследуемого образца и проверить сигнал для
каждого канала. Для интерпретации результатов необходимо использовать таблицу Ct
ниже.
Целевое Ct: VIC (желтый) Ct: Результат
Ct = любое 0<Ct<23,5 Избыточная начальная концентрация. Повторный
анализ с меньшим количеством ДНК.
38,5 < Ct; Ct = 0 23,5<Ct<27 Отрицательный образец. Повторный анализ не
требуется.
Ct<38,5 23,5 < Ct < 27
Положительный для целевого канала: Ех 19Del
(Cy5-Red), L858R (ROX-Orange), все прочие
(FAM-Green).
17
--- стр. 59 ---
Ct - любое а > 27; Ct = 0 Недостаточная начальная юнцентраиия.
Повторный анализ с большим количеством ДНК.
5.3. Ограничения анализа
Успешное определение целевых мутаций зависит от качества образца и количества
имеющейся в наличии амплифицируемой ДНК. Образцы, с избыточной или недостаточной
начальной концентрацией должны быть пройти анализ повторно.
Эффективность этого анализа не была установлена в присутствии редких полиморфизмов.
Набор для определения мутации гена EGFR в цоДНК предназначен для использования
только внеклеточной ДНК. Неизвестно, подходят ли другие типы образцов для исследований с
помощью этого набора.
Цельную кровь необходимо немедленно обработать для выделения внеклеточной ДНК.
Хранение крови до выделения приведет к образованию тромбов, которые значительно снизят
получение внеклеточной ДНК.
Перенос реагента из выделения может снизить эффективность амплификации.
Этот анализ предназначен для использования лабораторным персоналом, обученным
методам молекулярной биологии.
Соблюдение этого протокола необходимо для достижения оптимальных результатов.
Отклонения от протокола могут привести к снижению производительности.
Комбинация реагентов из различных партий наборов не оценивалась. Характеристики
эффективности для данной модификации не были установлены.
18
--- стр. 60 ---
6. приложения
6.1 Устранение неисправностей
Проблема: Решение:
Сигнал внутреннего контроля (VIC) для образна имеет
значение Ct выше, чем верхнее пороговое значение Ct,
указанное в разделе 8.2 настоящей инструкции.
Если внутренний контрольный сигнал возникает после
порогового значения или не возникает, реакция была
недостаточно насыщена (недостаточно ДНК),
необходимо провести повторный анализ с большим
количеством ДНК.
Если анализ образца, в котором, точно имеются
ингибиторы ПЦР (например, образцы меланомы имеют
меланин, который является ингибитором ПЦР),
необходимо провести повторный анализ образца с
меньшим количеством ДНК или разбавить образец
водой в соотношении 1:5 и повторно провести анализ.
Если увеличение/уменьшение объема ДНК не решает
проблему:
1. Выделить ДНК заново (при возможности).
2. Переосадить этанолом и вновь ресуспендировать в
меньшем объеме растворителя.
3. Использовать коммерчески доступный
концентратор ДНК.
Целевой и внутренний контрольные сигналы являются
отрицательными для положительного контроля (ПК).
Реагенты могут деградировать. Для получения
дополнительной информации необходимо связаться со
своим поставщиком.
Во избежание последующих сбоев в работе реагента
необходимо выполнять инструкции по хранению и
обращению, которые содержатся в разделе 11 настоящей
инструкции.
Аномальный пик на графике усиления образца
помощью прибора Life Technologies.
Аномальная линия пика может быть результатом
пузырьков в лунке, содержащей образец.
Центрифугировать плашку перед выполнение анализа
образца.
Аномальный пик может быть ошибкой детекции
флуоресценции прибором. Провести повторный анализ
другой плашки, чтобы убедиться в отсутствии
воспроизводимости. Если пик воспроизводится,
необходимо связаться с производителем прибора.
-,2.-
Fluorescence
Cycle
0 .iy o p e c ije m iU H ( 4 6 5 -5 1 0 )
Цикл
Сигнал в контроле КБМ. Указывает контаминацию геномной ДНК. Оценить
лабораторную процедуру. Предложения по сведению к
минимуму загрязнения рабочей поверхности см. в
разделе 1.4 настоящей инструкции.
При наличии целевого сигнала и (или) сигнала
внутреннего (юнтроля, результаты могут давать
19
--- стр. 61 ---
ложно-положительный результат и требуется повторный
анализ.
Целевой сигнал пересекает пороговое значение для
образцов КБМ при проведении анализа на приборе Life
Technologies.
Обеспечить установку ручных пороговых значений,
предложенных в настоящей инструкции.
Убедиться в том, что сигнал не является истинной
амплификацией путем проверки сигнала на
многокомпонентном графике (приборы Life
Technologies). Если сигнал горизонтальный, то это не
истинная амплификация.
Если сигнал на многокомпонентном графике является
линейным и сигнал пересекает пороговое значение,
необходимо отрегулировать базовый конечный цикл.
Установить начальный цикл на 3 и остановить: самый
ранний цикл VIC Ct (если сигнал по-прежнему
пересекает пороговое значение, увеличивать число
циклов с шагом 3 до тех пор, пока сигнал не перестанет
пересекать пороговое значение).
Amplification Plot
Cycle
График амплификации
Цикл
Образец дикого типа имеет значение Ct целевого
сигнала, которое попадает в параметры для статуса
положительной мутации.
Если сигнал внутреннего ютнтроля находится в пределах
диапазона, тогда образец дикого типа имеет
шнтаминацию положительным образцом, геномной
ДНК или положительным контролем. Провести анализ
повторно с новым образцом дикого типа.
Также возможно, что образец дикого типа не является
истинным диким типом.
20
--- стр. 62 ---
6.2 Мутации, определяемые этим набором
Примечание: эти обозначения последний раз обновлялись в сентябре 2020 года на основе COSMIC v92.
Нуклеотидная замена Аминокислотная замена Cosmic ID Нуклеотид no HGVS Белок no HGVS
Exon 18
С.21550А P.G719S 6252 LRG_304tl:c.2155G>A LRG_304pl:p.(Gly719Ser)
c.2155G>T P.G719C 6253 LRG_304tl:c.2155G>T LRG_304pI :p.(Gly719Cys)
С.21560А P-G7I9D 18425 LRG_304tl:c.2156G>A LRG_304p 1 :p.(Gly719Asp)
c.2156G>C P.G7I9A 6239 LRG_304tl:c.2156G>C LRG_304p 1 :p.(Gly719Ala)
Exon 19
c.2233_2247de!15 p.K745_E749delKELRE 26038 LRG_304t 1 :c.2233_2247del 15 LRG_304pl :p.(Lys745_Glu749del)
c.2234_2248dell5 p.K745_A750delinsT 1190791 LRG_304tl :c.2234J248dd 15 LRG_304p 1 :p.(Lys745_Ala750ddinsThr)
c.2235_2246deli2 p.E746_E749delELRE 28517 LRG_304t 1 :c.223 5_2246del 12 LRG_304pl :p.(Glu746_Glu749del)
c.2235_2248delinsAATTC p.E746_A750delinsIP 13550 LRG_304tl:c.2235_2248delinsAATTC LRG_304pl:p.(Glu746_Ala750ddinsllePro)
c.2235_2249dell5 p.E746_A750delELREA 6223 LRGJ04tl:c.2235_2249ddl5 LRG_304pl :p.(Glu746_Ala750dd)
C.2235 2251 delinsAATTC p.E746_T751delinsIP 13552 LRG_304tl :c.2235_2251 ddinsAATTC LRG_304p 1 :p,(Glu746_Thr751 delinsllePro)
c.2235_2252delinsAAT p.E746_T751delinsI 13551 LRG_304tl;c.2235_2252ddinsAAT LRG_304p 1 :p.(Glu746_Thr751 delinslle)
c.2235_2255delinsAAT p.E746_S752ddinsI 12385 LRG_304tl :c.2235_2255delinsAAT LRG_304pl:p.(Giu746_Ser752delinslIe)
c.2236_2248delinsAGAC p.E746_A750delinsRP 12413 LRG_304tl:c.2236_2248delinsAGAC LRG_304pl :p.(Glu746_Ala750delinsArgPro)
c.2236_2248delinsCAAC p.E746_A750delinsQP 13557 LRG_304tl x.2236_2248delinsCAAC LRG_304pl:p.(Glu746_Ala750delinsGInPro)
21
--- стр. 66 ---
[Перевод с английского языка на русский язык]
[Перевод надписей и нотариального заверения на документе «Инструкция по применению
медицинского изделия „Наборреагентов для in vitro диагностики наличия мутаций гена
EGFR методом полимеразной цепной реакции в режиме реального времени в образцах
плазмы крови человека, 48 реакций “», представленном на русском языке.]
13 декабря 2021 г.
[подпись!
--- стр. 67 ---
НОТАРИАЛЬНОЕ УДОСТОВЕРЕНИЕ ШТАТА КАЛИФОРНИЯ
_______________________________________________ ___________§ 1189 ГРАЖДАНСКОГО КОДЕКСА
Нотариус или иное должностное лицо, заполняющее данное удостоверение, подтверждает только личность
лица, подписавшего документ, к которому прилагается настоящее удостоверение, и не удостоверяет
верность, точность или действительность упомянутого документа. _____
Штат Калифорния
Округ Лос-Анджелес
13 декабря 2021 г. ко мне,
Лота
)
Митре Н. Кати, нотариусу.
лично явился
Указать иш и до.зжнасть должностного лица
Мэтью Минкойски^
И.ия (имена) подписавшего(-их) лица (лиц)
который подтвердил мне на основании достаточных доказательств, что он является лицом, чья
подпись проставлена на указанном документе, а также что он подписал указанный документ в
качестве правомочного лица, и что его подпись на указанном документе означает, что указанный
документ подписан физическим или юридическим лицом, от имени которого действовало указанное
лицо.
[Печать:
Митра Н. Катц
Округ Лос-Анджелес, Калифорния
Нотариус
Лицензия № 2226229
Моя лицензия действительна до
23 декабря 2021 г.
NSP1]
Поставить нотариальную печать
Я удостоверяю под СТРАХОМ НАКАЗАНИЯ ЗА
ЛЖЕСВИДЕТЕЛЬСТВО в соответствии с
законодательством штата Калифорния, что изложенное
выше является точным и верным.
В СВИДЕТЕЛЬСТВО ЧЕГО я ставлю собственноручную
подпись и официальную печать.
Подпись /подпись/
Подпись нотариуса
СВЕДЕНИЯ, УКАЗЫВАЕМЫЕ ПО ВЫБОРУ_■------------------------------------------^ л л _________________________
Указание данной информации может предотвратить изменение документа или попытки
повторного приложения данного бланка к другому документу в мошеннических целях.
Характеристика прилагаемого документа
Название или тип документа:____________
медииинского изделия___________________
Дата документа:.
Инструкиия____по____применению
кол-во страниц:.
Дополнительное(-ые) подписавшее(-ие) лицо(-а):
Должностное(-ые) положение(-я), указанное(-ые) подписавшим(-и) лицом(-ами)
\Лкла ТТ/ЛППТ.1/^0 г т .г т .^ . т х
корпорации —
Имя подписавшего лица:
□ Должностное лицо
должность(-и):^__________
□ Партнер — □ с ограниченной
ответственностью □ полный
□ Физическое лицо
□ Доверенное лицо
□ Доверительный собственник
□ Законный представитель или арбитражный
управляющий
□ Прочее:
корпорации —
Имя подписавшего лица:
□ Должностное лицо
должность(-и):__________
□ Партнер — □ с ограниченной
ответственностью □ полный
□ Физическое лицо
□ Доверенное лицо
□ Доверительный собственник
□ Законный представитель или арбитражный
управляющий
□ Прочее:
Подписавшее лицо представляет интересы:__ Подписавшее лицо представляет интересы:
• Национальная ассоциация нотариусов, 2015 г. • www.NationaINotary.org ■ 1-800-US НОТАРИУС (1-800-876-6827). ДокументМ 5907
--- стр. 68 ---
Текст данного документа перевёл переводчик Рахимкулов Эльдар Серкалиевич. Знание иностранного
языка подтверждаю. Выполненный перевод является правильным, точным и полным.
Российская Федерация
Город Москва
Семнадцатого февраля две тысячи двадцать второго года
Я, Тонкий Дмитрий Валерьевич, нотариус города Москвы, свидетельствую подлинность подписи
переводчика Рахимкулова Эльдара Серкалиевича.
Подпись сделана в моем присутствии.__
Личность подписавшего докум^Й^^^тш1
- Д •
Зарегистрировано в реес
Уплачено за совершение Т 7
'00 руб.
Всего прошнуровано, пронумЩ.
и скреплено печатью 67_ лис
Нотариус
Д.В. Тонкий