Набор реагентов для диагностики in vitro АмплиСенс® Norovirus GI / GII-FL по ТУ 21.20.23-275-01897593-2017 — инструкция и характеристики
Открытые закупки, где изделие проходит ТЗ
Сейчас открытых закупок, где изделие полностью проходит ТЗ, нет; список обновляется каждый день.
Построчная сверка ТЗ с характеристиками этого изделия и все закупки под ваши товары — в кабинете, 7 дней бесплатно.
Попробовать бесплатно
Текст инструкции: технические характеристики
--- стр. 1 ---
«УТВЕРЖДАЮ»
Директор Федерального бюджетного
учреждения науки «Центральный
научно-исследовательский институт
эпид§Ш1рлогии» Федеральной службы
сфере защиты прав
5лей и благополучия человека
.Г Акимкин
20^ г.
3 |||1
1 S а 5эоогп -со 1»
s-jiiS
'Ml
■55Е
ИНСТРУКЦИЯ по ПРИМЕНЕНИЮ
набора реагентов для диагностики in vitro
АмплиСенс® Norovirus Gl / GII-FL
АмплиСенс®
ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии
Роспотребнадзора,
Российская Федерация, 111123,
г. Москва, ул. Новогиреевская, д. ЗА
г. Москва, ул. Новогиреевская, д. ЗА, стр. 6
тел. (495) 974 9642, e-mail; amplisens@pcr.ru
IVD
--- стр. 2 ---
ОГЛАВЛЕНИЕ
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ............................................................................................................3
НАЗНАЧЕНИЕ................................................................................................................................3
ПРИНЦИП МЕТОДА.....................................................................................................................4
ФОРМЫ КОМПЛЕКТАЦИИ .............................. 5
АНАЛИТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ...................................................................................5
ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ..............................................................................8
МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ................................................................................................9
СВЕДЕНИЯ ОБ УТИЛИЗАЦИИ.................................................................................................11
ДОПОЛНИТЕЛЬНЫЕ МАТЕРИАЛЫ И ОБОРУДОВАНИЕ .................................................11
ВЗЯТИЕ. ТРАНСПОРТИРОВАНИЕ И ХРАНЕНИЕ ИССЛЕДУЕМОГО МАТЕРИАЛА...13
ПОДГОТОВКА ИССЛЕДУЕМОГО МАТЕРИАЛА К ЭКСТРАЦИИ РНК .............................15
ИНТЕРФЕРИРУЮЩИЕ ВЕЩЕСТВА И ОГРАНИЧЕНИЯ ПО ИСПОЛЬЗОВАНИЮ ПРОБ
ИССЛЕДУЕМОГО МАТЕРИАЛА..............................................................................................16
ПРОВЕДЕНИЕ ПЦР-ИССЛЕДОВАНИЯ.................................................................................17
ЭКСТРАКЦИЯ РНК ИЗ ИССЛЕДУЕМЫХ ОБРАЗЦОВ........................................................17
ФОРМА 1: «ПЦР-комплект» вариант FRT-50 F....................................................................19
СОСТАВ...................................................................................................................................19
ОБРАТНАЯ ТРАНСКРИПЦИЯ И АМПЛИФИКАЦИЯ С ДЕТЕКЦИЕЙ В РЕЖИМЕ
«РЕАЛЬНОГО ВРЕМЕНИ»..................................................................................................19
A. Подготовка пробирок для ОТ-ПЦР.........................................................................20
Б. Проведение ОТ-ПЦР с детекцией в режиме «реального времени»...............21
B. Анализ и интерпретация результатов....................................................................22
СРОК годности. УСЛОВИЯ ТРАНСПОРТИРОВАНИЯ и ХРАНЕНИЯ ......................26
ПРИЛОЖЕНИЕ 1.........................................................................................................................28
стр, 2 из 29
--- стр. 3 ---
список СОКРАЩЕНИИ
В настоящей инструкции применяются следующие
BKO-FL - экзогенный внутренний контрольный образец
ГЭ - геномные эквиваленты
К+ - положительный контроль ПЦР
К- - отрицательный контроль ПЦР
кДНК - комплементарная ДНК, получаемая в реакции обратной
транскрипции на матрице РНК
ОК - отрицательный контроль экстракции
ОКО - отрицательный контрольный образец
ОТ-ПЦР - полимеразная цепная реакция с обратной транскрипцией
ПЦР - полимеразная цепная реакция
РНК - рибонуклеиновая кислота
РУ - регистрационное удостоверение
ФБУН ЦНИИ
Эпидемиологии
Роспотребнадзора
- Федеральное бюджетное учреждение науки «Центральный
научно-исследовательский институт эпидемиологии»
Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав
потребителей и благополучия человека
FL - ПЦР с гибридизационно-флуоресцентной детекцией
FRT - флуоресцентная детекция в режиме «реального времени»
Norovirus GI - норовирус 1 геногруппы
Norovirus GII - норовирус 2 геногруппы
НАЗНАЧЕНИЕ
Набор реагентов для диагностики in vitro
АмплиСенс® A/orov/rus Gl / GII-FL предназначен для
качественного определения и дифференциации РНК
норовирусов 1 и 2 геногруппы (Norovirus GI и GII) в
биологическом материале (фекалии) и объектах окружающей
I среды (концентраты образцов воды) методом ПЦР с
гибридизационно-флуоресцентной детекцией продуктов
амплификации. Материалом для проведения ОТ-ПЦР служат
пробы РНК, экстрагированные из исследуемого материала.
Показания и противопоказания к применению набора
реагентов
Набор реагентов используется в клинической лабораторной
диагностике для исследования биологического материала,
полученного от лиц с подозрением на норовирусную инфекцию
вне зависимости от формы и наличия манифестации
заболевания.
Противопоказания отсутствуют, за исключением случаев,
когда забор материала не может быть осуществлен по
медицинским показаниям.
стр. 3 из 29
--- стр. 4 ---
Потенциальные пользователи медицинского изделия
К работе с набором реагентов допускаются только
медицинские работники, обученные методам молекулярной
диагностики и правилам работы в клинико-диагностической
лаборатории в установленном порядке (СанПиН 3.3686-21
«Санитарно-эпидемиологические требования по профилактике
инфекционных болезней»),
ПРИНЦИП МЕТОДА
Принцип тестирования основывается на экстракции РНК из
образцов исследуемого материала совместно с экзогенным
внутренним контрольным образцом (BKO-FL) и одновременном
проведении реакции обратной транскрипции РНК и
амплификации участков кДНК выявляемых вирусов и кДНК BKO-
FL с гибридизационно-флуоресцентной детекцией. BKO-FL
позволяет контролировать все этапы ПЦР-исследования для
каждого образца и оценивать влияние ингибиторов на
результаты ПЦР-исследования.
Обратная транскрипция РНК проводится с помощью фермента
ТМ-Ревертазы. Амплификация участков кДНК проводится при
помощи специфичных к этим участкам праймеров и фермента
Taq-полимеразы. В составе реакционной смеси присутствуют
флуоресцентно-меченые олигонуклеотиды комплементарные
участком амплифицируемой кДНК-мишени, что позволяет
регистрировать накопление специфического продукта
амплификации путем измерения интенсивности
флуоресцентного сигнала с помощью амплификатора с системой
детекции флуоресцентного сигнала в режиме «реального
времени».
На этапе ОТ-ПЦР одновременно в одной пробирке проводятся
3 реакции - амплификация кДНК Norovirus GI, кДНК Norovirus GII,
а также амплификация последовательности кДНК BKO-FL.
Результаты амплификации кДНК Norovirus GI и кДНК Norovirus
GII, а также кДНК BKO-FL регистрируются по трем различным
каналам флуоресцентной детекции:
стр, 4 И З 29
--- стр. 5 ---
Таблица 1
Канал для
cbnVODOtbopa РАМ JOE ROX
кДНК-мишень кДНК BKO-FL кДНК Norovirus GII кДНК Norovirus GI
Область
амплификации
искусственная
нуклеотидная
последовательность
gene for capsid
protein gene for capsid protein
ФОРМЫ КОМПЛЕКТАЦИИ
Форма 1: «ПЦР-комплект» вариант FRT-50 F
Форма 1 предназначена для проведения реакции обратной
транскрипции РНК и амплификации фрагмента кДНК
норовирусов 1 и 2 геногруппы {Norovirus GI и GII) с
гибридизационно-флуоресцентной детекцией в режиме
«реального времени». Для проведения полного ПЦР-
исследования необходимо использовать комплекты реагентов
для экстракции РНК.
Форма 1 рассчитана на проведение 55 реакций
амплификации, включая контроли.
АНАЛИТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
Для данного набора реагентов применимы следующие
характеристики:
Аналитическая чувствительность (предел обнаружения)
Выявляемый
вирус
Вид
исследуемого
материала
Комплект для
экстракции РНК
Комплект для
амплификации
Аналитическая
чувствительность
(предел
обнаружения)'*,
ГЭ/мл
Norovirus GI
концентраты
образцов воды «РИБО-преп» «ПЦР-комплект»
вариант FRT-50 F 1x10=
фекалии «РИБО-преп» «ПЦР-комплект»
вариант FRT-50 F 5x103
Norovirus GII
концентраты
образцов воды «РИБО-преп» «ПЦР-комплект»
вариант FRT-50 F 1x103
фекалии «РИБО-преп» «ПЦР-комплект»
вариант FRT-50 F 5x103
Данный предел обнаружения достигается при соблюдении
правил, указанных в разделах «Взятие, транспортирование и
’ Количество геномных эквивалентов микроорганизма (ГЭ) в 1 мл образца исследуемого
материала.
стр. 5 ИЗ 29
--- стр. 6 ---
хранение исследуемого материала» и «Подготовка исследуемого
материала к экстракции РНК».
Аналитическая специфичность
Специфичность набора реагентов проверялась на
следующих панелях штаммов микроорганизмов и образцов
РНК/ДНК:
1. Норовирусы 1 и 2 геногруппы {Norovirus GI - 37 образцов,
Norovirus GI1 - 100 образцов) (клинические изоляты,
специфичность подтверждена прямым секвенированием
нуклеотидных последовательностей);
2. Энтеровирусы человека (представители разных генетических
кластеров - Human echovirus 2, 6, 9, 11, 14, 15, 16, 17, 18, 30;
Human coxsackievirus A4, A5, A6, A9, A16, В4, В5, Human
poliovirus 1, 2, 3 (Sabini, Sabin2, Sabin3)); вирусы гриппа A
(H13N2, H9N2, H8N4, H2N3, H4N6, H11N6, H12N5, H3N8,
H1N1, H6N2, H10N7, H5N1), В, риновирусы, RS вирусы,
аденовирусы человека - 3, 5, 7, 37, 40, 41 типов (клинические
изоляты, видовая принадлежность подтверждена прямым
секвенированием нуклеотидных последовательностей);
3. ДНК человека, штаммы: Acinetobacter baumanii АТСС®
19606™, Bacteroides fragilis АТСС® 25285™, Bordetella
bronchiseptica АТСС® 10580™, Bordetella bronchiseptica АТСС®
4617™, Bordetella pertussis ATCC® 9340™, Candida albicans
ATCC® 14053™, Candida guilliermondii AJCC® 6260™, Candida
krusei ATCC® 14243™, Clostridium difficile ATCC® 9689™,
Clostridium septicum ATCC® 12464^^, Corynebacterium jeikeium
ATCC® 43734™, Corynebacterium xerosis ATCC® 373™,
Eggerthella lenta (Eubacterium lentum) ATCC® 43055'^'^,
Enterobacter aerogenes ATCC® 13048™, Enterobacter cloacae
ATCC® 13047™, Enterococcus faecalis ATCC® 29212™,
Enterococcus faecalis (vancomycin resistant) ATCC® 51299^'^,
Enterococcus faecium ATCC® 35667’''^, Erysipelothrix
rhusiopathiae ATCC® 19414™, Escherichia coli ATCC® 25922™,
Escherichia coli ATCC® 35218™, Gardnerella vaginalis ATCC®
14018™, Haemophilus infuenzae ATCC® 33930™, Haemophilus
influenzae ATCC® 9006^'^, Haemophilus influenzae ATCC®
10211™, Haemophilus parainfluenzae ATCC® 7901™, Klebsiella
oxytoca ATCC® 49131™, Klebsiella pneumoniae ATCC®
27736™, Listeria gray! (murrayi) ATCC® 25401 ™, Listeria innocua
crp. 6 ИЗ 29
--- стр. 7 ---
АТСС® 33090™, Listeria monocytogenes ATCC® 7644™,
Moraxella (Branhamelia) catarrhalis ATCC® 25238'^'^, Moraxelia
(Branhamella) catarrhalis ATCC® 8176'^'^, Neisseria meningitidis
ATCC® 13102™, Neisseria meningitidis ATCC® 13090™,
Neisseria lactamica ATCC® ЗЗОТО^*^, Neisseria gonorrhoeae
ATCC® 19424™, Neisseria gonorrhoeae ATCC® 49926™,
Proteus mirabilis ATCC® 12453'^^, Proteus vulgaris ATCC®
6380™, Propionibacterium acnes ATCC® 11827™, Pseudomonas
aeruginosa ATCC® 15442™, Rhodococcus equi ATCC® 6939™,
Salmonella enterica subsp. enterica serovar Typhimurium ATCC®
14028™, Serratia marcescens ATCC® 14756™, Staphylococcus
aureus (MRSA) ATCC® 43300'^'^, Staphylococcus aureus ATCC®
29213™, Staphylococcus aureus ATCC® 25923™,
Staphylococcus aureus ATCC® 33862™, Staphylococcus aureus
(MRSA) ATCC® 33591'^'^, Staphylococcus aureus subsp. aureus
ATCC® 12600™, Staphylococcus epidermidis ATCC® 12228™,
Staphylococcus haemolyticus ATCC® 29970'^'^, Staphylococcus
saprophyticus ATCC® 49907™, Stenotrophomonas maltophilia
ATCC® 13637™, Streptococcus agalactiae ATCC® 12386™,
Streptococcus agalactiae ATCC® 13813™, Streptococcus
equisimilis ATCC® 12388'^'^, Streptococcus equi subsp. equi
ATCC® 9528™, Streptococcus bovis (Group D) ATCC® 9809™,
Streptococcus mutans ATCC® 35668'^'^, Streptococcus
pneumoniae ATCC® 49619™, Streptococcus pneumoniae ATCC®
6303™, Streptococcus pneumoniae ATCC® 27336™,
Streptococcus pneumoniae ATCC® 6305'^'^, Streptococcus
pyogenes ATCC® 19615™, Streptococcus salivarius ATCC®
13419™, Streptococcus uberis ATCC® 700407™, Vibrio
parahaemolyticus ATCC® 17802™, Vibrio vulnificus ATCC®
27562™, Moraxella catarrhalis ATCC® 252Л0™, Corynebacterium
minutissimum ATCC® 23348™.
При проведении тестирования панелей №2 и №3, а также
образцов ДНК человека, неспецифических реакций выявлено не
было.
Информация об интерферирующих веществах указана в
разделе «Интерферирующие вещества и ограничения по
использованию проб исследуемого материала».
стр. 7 из 29
--- стр. 8 ---
Повторяемость и воспроизводимость исследования
Повторяемость и воспроизводимость исследования были
определены путем тестирования положительных и
отрицательных модельных образцов. Положительные образцы
представляли собой стандартные образцы предприятия,
содержащие РНК Norovirus GI, РНК Norovirus GII в
концентрации 1x10^ ГЭ/мл, в качестве отрицательного образца
был использован реагент ОКО.
Условия повторяемости включали в себя тестирование в
одной и той же лаборатории, одним и тем же оператором, с
использованием одного и того же оборудования в пределах
короткого промежутка времени. Условия воспроизводимости -
тестирование в двух независимых лабораториях, разными
операторами, в разные дни, на различных приборах и разных
серий набора реагентов. Результаты представлены в табл. 3.
Вид Повторяемость Воспроизводимость
исследуемого Количество Совпадение Количество Совпадение
материала образцов результатов, % образцов результатов, %
Norovirus GI 10 100 40 100
Norovirus GII 10 100 40 100
Отрицательные 10 100 40 100
ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
Для определения диагностических характеристик набора
реагентов были использованы:
- 609 образцов фекалий от группы пациентов с диареей,
вызванной норовирусной инфекцией 1 и 2 геногрупп. Группа
пациентов была отобрана с помощью иммуноферментного
метода (набор реагентов для определения норовируса
RIDASCREEN Norovirus 3rd Generation производства «Р-
Биофарм АГ», Германия, РУ № ФСЗ 2009/05901);
- 211 образцов фекалий от группы пациентов с диареей,
вызванной кишечными инфекциями другой этиологии, у
которых диагноз норовирусной инфекции был не
подтвержден иммуноферментным методом (набор
реагентов для определения норовируса RIDASCREEN
Norovirus 3rd Generation производства «Р-Биофарм АГ»,
Германия, РУ № ФСЗ 2009/05901);
стр. 8 из 29
--- стр. 9 ---
- 200 модельных образцов воды, контаминированных
стандартным образцом предприятия, содержащим РНК
Norovirus GI. Концентрация РНК Norovirus GI в модельных
образцах составляла 1x10^ копий/мл;
- 200 модельных образцов воды, контаминированных
стандартным образцом предприятия, содержащим РНК
Norovirus GII. Концентрация РНК Norovirus GII в модельных
образцах составляла 1x10^ копий/мл.
В качестве метода сравнения для определения Norovirus GI
использовался метод прямого секвенирования продуктов
амплификации по Сэнгеру. В качестве набора сравнения для
детекции Norovirus GII использовался набор реагентов
«АмплиСенс® Rotavirus / Norovirus / Astrovirus-FL» (РУ
№ ФСР 2008/02268).
Таблица 4
Диагностические характеристики набора реагентов
для диагностики in vitro АмплиСенс® Norovirus GI / GII-FL
Выявляемый
патоген
Вид
исследуемого
материала
Диагностическая
чувствительность
(с доверительной
вероятностью 95 %),
в интервале %
Диагностическая
специфичность
(с доверительной
вероятностью 95 %),
в интервале %
Norovirus GI фекалии 98,6-100 98,6-100
образцы воды 98,5-100 98,5-100
Norovirus GII фекалии 99,3-100 98,6-100
образцы воды 98,5-100 98,5-100
МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ
Работа должна проводиться в лаборатории, выполняющей
молекулярно-биологические (ПЦР) исследования биологического
материала на наличие возбудителей инфекционных болезней, с
соблюдением санитарно-эпидемиологических правил СанПиН
3.3686-21 «Санитарно-эпидемиологические требования по
профилактике инфекционных болезней», СанПиН 2.1.3684-21
«Санитарно-эпидемиологические требования к содержанию
территорий городских и сельских поселений, к водным
объектам, питьевой воде и питьевому водоснабжению,
атмосферному воздуху, почвам, жилым помещениям,
эксплуатации производственных, общественных помещений,
организации и проведению санитарно-противоэпидемических
(профилактических) мероприятий» и методических указаний МУ
стр. 9 из 29
--- стр. 10 ---
1.3.2569-09 «Организация работы лабораторий, использующих
методы амплификации нуклеиновых кислот при работе с
материалом, содержащим микроорганизмы I-IV групп
патогенности».
Набор реагентов предназначен для одноразового
применения для проведения ПЦР-исследования указанного
количества проб (см. раздел «Формы комплектации»).
Набор реагентов готов к применению согласно данной
инструкции. Применять набор реагентов строго по назначению.
При работе необходимо всегда выполнять следующие
требования:
- Температура в помещении лаборатории от 20 до 28 °С,
относительная влажность от 15 до 75%.
- Допускать к работе с набором реагентов только персонал,
обученный методам молекулярной диагностики и правилам
работы в клинико-диагностической лаборатории в
установленном порядке.
- Не использовать набор реагентов, если нарушена внутренняя
упаковка или внешний вид реагента не соответствует
описанию.
- Не использовать набор реагентов, если не соблюдались
условия транспортирования и хранения согласно инструкции.
- Не использовать набор реагентов по истечении срока
годности.
- Использовать одноразовые неопудренные перчатки,
лабораторные халаты, защищать глаза во время работы с
образцами и реагентами. Тщательно вымыть руки по
окончании работы. Все операции проводятся только в
перчатках для исключения контакта с организмом человека.
- Избегать вдыхания паров, контакта с кожей, глазами и
слизистой оболочкой. Вреден при проглатывании. При
контакте немедленно промыть пораженное место водой, при
необходимости обратиться за медицинской помощью.
При использовании по назначению и соблюдении
вышеперечисленных мер предосторожности набор реагентов
безопасен.
При соблюдении условий транспортировки, эксплуатации и
хранения набора риски взрыва и возгорания отсутствуют.
Сведения о безопасности набора реагентов доступны по
стр. 10 И З 29
--- стр. 16 ---
Допускается хранение предобработанных образцов
суспензии фекалий до проведения ПЦР-исследования:
- при температуре от минус 24 до минус 16 °С - в течение
1 недели;
- при температуре не выше минус 68 °С - длительно.
Допускается лишь однократное замораживание-оттаивание
материала.
Допускается транспортирование предобработанных образцов
суспензии фекалий при температуре от 2 до 8 °С в течение
1 суток.
ИНТЕРФЕРИРУЮЩИЕ ВЕЩЕСТВА И ОГРАНИЧЕНИЯ ПО
ИСПОЛЬЗОВАНИЮ ПРОБ ИССЛЕДУЕМОГО МАТЕРИАЛА
Для контроля эффективности экстракции РНК и реакции
амплификации в наборе реагентов предусмотрено
использование внутреннего контрольного образца (BKO-FL),
который добавляется в каждый биологический образец на этапе
экстракции нуклеиновых кислот. По окончании реакции
амплификации наличие сигнала, свидетельствующего о
накоплении фрагментов кДНК BKO-FL, говорит о достаточной
эффективности экстракции нуклеиновых кислот и отсутствии
ингибиторов ПЦР.
Потенциально интерферирующие вещества
Для оценки потенциальной интерференции были выбраны
эндогенные и экзогенные вещества, которые могут
присутствовать в биологическом материале (фекалии),
используемом для исследования.
Были протестированы модельные образцы фекалий без
добавления и с добавлением потенциально интерферирующих
веществ. Концентрация каждого потенциально
интерферирующего вещества указана в табл. 5. Модельные
образцы фекалий содержали разведения стандартных
образцов предприятия в концентрациях, соответствующих
пределу обнаружения.
стр. 16 ИЗ 29
--- стр. 17 ---
Таблица 5
Вид
потенциального
интерферента
Потенциальный
интерферент
Протестированная
концентрация в
образце
Наличие
интерференции
Эндогенные
вещества
Цельная кровь 40% Не обнаружено
Фекальные жиры 40% Не обнаружено
Муцин (слизь) 3% (вес препарата к
объему материала) Не обнаружено
Экзогенные
вещества
«Энтерофурил»,
суспензия для приема
внутрь
4,25 мг/мл Не обнаружено
«Энтеросгель», паста
для приема внутрь
(сладкая)
174,75 мг/мл Не обнаружено
Декстрин (Россия) 68,6 мг/мл Не обнаружено
м
ПРОВЕДЕНИЕ ПЦР-ИССЛЕДОВАНИЯ
ПЦР-исследование состоит из следующих этапов:
- экстракция РНК из исследуемых образцов,
- обратная транскрипция РНК и амплификация кДНК с
гибридизационно-флуоресцентой детекцией в режиме
«реального времени»,
- анализ и интерпретация результатов.
ЭКСТРАКЦИЯ РНК ИЗ ИССЛЕДУЕМЫХ ОБРАЗЦОВ
ВНИМАНИЕ! При работе с РНК необходимо использовать только
одноразовые пластиковые расходные материалы, имеющие
специальную маркировку RNase-free, DNase-free.
Для экстракции РНК используется комплект реагентов «РИБО-
преп». Порядок работы с комплектом реагентов «РИБО-преп»
смотрите в инструкции к соответствующему комплекту для
экстракции.
Объемы реагентов и образцов при экстракции с помощью
комплекта реагентов «РИБО-преп»:
Экстракция РНК из каждого исследуемого образца проводится
в присутствии внутреннего контрольного образца - BKO-FL.
Объем BKO-FL - 10 мкл в каждую пробирку.
Объем исследуемого образца - 100 мкл.
В пробирку отрицательного контроля экстракции (ОК) внести
100 мкл ОКО.
стр. 17 ИЗ 29
--- стр. 18 ---
Объем элюции - 50-100 мкл, в зависимости от количества
разных наборов реагентов, которыми планируется исследовать
полученную РНК.
ВНИМАНИЕ! Реакцию ОТ-ПЦР рекомендуется проводить сразу
после получения проб РНК. Допускается хранение проб РНК
при температуре от 2 до 8 °С не более 30 мин, при температуре
от минус 24 до минус 16 °С не более недели и при температуре
не выше минус 68 °С до года. Допускается только однократное
замораживание-оттаивание проб РНК.
стр. 18 И З 29
--- стр. 19 ---
ФОРМА 1: «ПЦР-комплект» вариант FRT-50 F
СОСТАВ
«ПЦР-комплект» вариант FRT-50 F - комплект реагентов для
обратной транскрипции РНК и амплификации фрагмента кДНК
норовирусов 1 и 2 геногруппы {Norovirus GI и GII) с
гибридизационно-флуоресцентной детекцией в режиме
ФОРМА 1 _______________________________________________________________________
Реагент Описание Объем,
мл Количество
ПЦР-смесь-FL
Norovirus GI / GII
Прозрачная жидкость от
бесцветного до светло-лилового
цвета
0.6 1 пробирка
ПЦР-буфер-С Прозрачная бесцветная жидкость 0.3 1 пробирка
Полимераза (TaqF) Прозрачная бесцветная жидкость 0,03 1 пробирка
ТМ-Ревертаза (MMIv) Прозрачная бесцветная жидкость 0,015 1 пробирка
RT-G-mix-2 Прозрачная бесцветная жидкость 0,015 1 пробирка
К+ Norovirus GI /
GII Прозрачная бесцветная жидкость 0.2 1 пробирка
К- Прозрачная бесцветная жидкость 0.2 1 пробирка
BKO-FL Прозрачная бесцветная жидкость 0,5 1 пробирка
ОКО Прозрачная бесцветная жидкость 1.2 1 пробирка
А
Реагенты комплекта упакованы раздельно в соответствии с
температурой хранения (см. раздел «Хранение»). Комплект
реагентов состоит из 2-х частей; 1) температура хранения от
2 до 8 °С; 2) температура хранения от минус 24 до минус 16 °С.
ОБРАТНАЯ ТРАНСКРИПЦИЯ И АМПЛИФИКАЦИЯ С
ДЕТЕКЦИЕЙ В РЕЖИМЕ «РЕАЛЬНОГО ВРЕМЕНИ»
ВНИМАНИЕ! При работе с РНК необходимо использовать только
одноразовые стерильные пластиковые расходные материалы,
имеющие специальную маркировку RNase-free, DNase-free.
Выбор пробирок для проведения ОТ-ПЦР зависит от
используемого амплификатора с системой детекции в
режиме «реального времени».
Для внесения в пробирки реагентов, проб РНК и
контрольных образцов используются одноразовые
наконечники с фильтрами.
стр. 19 И З 29
--- стр. 20 ---
А. Подготовка пробирок для ОТ-ПЦР
Общий объем реакционной смеси - 25 мкл, включая объем
пробы РНК - 10 мкл.
1. Рассчитать количество каждого реагента, требующееся для
приготовления реакционной смеси. На одну реакцию
требуется 10 мкл ПЦР-смеси-FL Norovirus G I/ GII, 5 мкл
ПЦР-буфера-С, 0,5 мкл полимеразы (TaqF), 0,25 мкл ТМ-
Ревертазы (MMIv), 0,25 мкл RT-G-mix-2. Смесь готовить на
общее число исследуемых и контрольных образцов
(количество контрольных образцов см. в пункте 7) плюс запас
на одну реакцию.
Сделать расчет на необходимое число реакций,
включающее тестирование исследуемых и контрольных
образцов, можно согласно расчетной таблице,
приведенной в Приложении 1.
ВНИМАНИЕ! Компоненты реакционной смеси следует
смешивать непосредственно перед проведением ПЦР-
исследования.
2. Разморозить пробирку с ПЦРюмесью-РЕ Norovirus GI / GII.
Перемешать содержимое всех реагентов ПЦР-комплекта,
осадить капли на вортексе.
3. В отдельной пробирке подготовить реакционную смесь.
Смешать необходимое количество ПЦР-смеси-FL Norovirus
GI / GII, ПЦР-буфера-С, полимеразы (TaqF), ТМ-
Ревертазы (MMIv), RT-G-mix-2, осадить капли на вортексе.
4. Отобрать необходимое количество пробирок или стрипов
для ОТ-ПЦР РНК исследуемых и контрольных проб.
5. Внести в каждую пробирку по 15 мкл приготовленной
реакционной смеси. Неиспользованные остатки
реакционной смеси выбросить.
6. В подготовленные пробирки внести по 10 мкл проб РНК,
полученных в результате экстракции из исследуемых
образцов.
ВНИМАНИЕ! Содержимое пробирок необходимо тщательно
перемешать пипетированием, не допуская появления
пузырьков воздуха.
7. Поставить контрольные реакции.
а) положительный контроль ОТ-ПЦР (К+) - в пробирку с
реакционной смесью внести 10 мкл К+ Norovirus GI / GII;
ФОРМА 1
стр. 20 И З 29
--- стр. 26 ---
СРОК годности. УСЛОВИЯ ТРАНСПОРТИРОВАНИЯ и
ХРАНЕНИЯ
Срок годности. 12 мес. Набор реагентов с истекшим сроком
годности применению не подлежит. Срок годности вскрытых
реагентов соответствует сроку годности, указанному на
этикетках для невскрытых реагентов, если в инструкции не
указано иное.
Транспортирование. Набор реагентов транспортировать при
температуре от 2 до 8 °С не более 5 сут. в термоконтейнерах,
содержащих хладоэлементы, всеми видами крытых
транслортных средств. Допускается транспортирование при
температуре от 2 до 25 “С не более 3 сут.
Хранение.
Форма 1. «ПЦР-комплект» вариант FRT-50 F хранить в
холодильной камере при температуре от 2 до 8 °С. ПЦР-смесь-
FL Norovirus GI / GII, ПЦР-буфер-С, RT-G-mix-2, полимеразу
(TaqF), ТМ-Ревертазу (MMIv) хранить в морозильной камере
при температуре от минус 24 до минус 16 °С. ПЦР-смесь-FL
Norovirus GI / GII хранить в защищенном от света месте.
Холодильные и морозильные камеры должны обеспечивать
регламентированный температурный режим.
стр. 26 из 29
--- стр. 27 ---
г а р а н т и й н ы е о б я з а т е л ь с т в а и з г о т о в и т е л я
Изготовитель гарантирует соответствие основных
параметров и характеристик набора реагентов требованиям,
указанным в технической и эксплуатационной документации, в
течение указанного срока годности при соблюдении всех
условий транспортирования, хранения и применения.
Медицинское изделие техническому обслуживанию и
ремонту не подлежит.
Рекламации на качество набора реагентов направлять по
адресу 111123, г. Москва, ул. Новогиреевская, дом ЗА, e-mail:
obtk@pcr.ru®.
При выявлении побочных действий, не указанных в
инструкции по применению набора реагентов, нежелательных
реакций при его использовании, фактов и обстоятельств,
создающих угрозу жизни и здоровью граждан и медицинских
работников при применении набора реагентов, рекомендуется
направить сообщение по адресу, указанному выше, и в
уполномоченную государственную регулирующую организацию
(в РФ - Федеральная служба по надзору в сфере
здравоохранения) в соответствии с действующим
законодательством.
® Отзывы и предложения о продукции «АмплиСенс» вы можете оставить, заполнив анкету
потребителя на сайте: www.amDlisens.ru .
стр. 27 из 29
--- стр. 28 ---
ПРИЛОЖЕНИЕ 1
Схема приготовления реакционных смесей
при использовании ПЦР-комплекта вариант FRT-50 F
Объем реагентов на указанное количество реакций
Объем реагента на одну
РМЖЦИЮ, мкл 10,00 5,00 0,25 0,50 0,25
Количество
исследуемых
образцов
Количество
реакций^
ПЦР-
смесь-FL
ПЦР-
буфер-С
RT-G-mix-
2
Полимераза
(TaqF)
ТМ-
Ревертаза
(MMIv)
2 6 60 30 1,5 3.0 1.5
4 8 80 40 2.0 4.0 2,0
6 10 100 50 2,5 5,0 2.5
8 12 120 60 3,0 6.0 3,0
10 14 140 70 3,5 7,0 3.5
12 16 160 80 4,0 8,0 4,0
14 18 180 90 4,5 9,0 4,5
16 20 200 100 5.0 10,0 5,0
18 22 220 110 5,5 11,0 5.5
20 24 240 120 6.0 12,0 6.0
22 26 260 130 6,5 13.0 6.5
24 28 280 140 7,0 14.0 7,0
26 30 300 150 7,5 15.0 7,5
28 32 320 160 8,0 16,0 8,0
^ Количество реакций = количество исследуемых образцов + контроли этапа экстракции (ОК) и ОТ-
ПЦР (К+. К-) + запас на один образец.
стр. 28 из 29