Набор реагентов для количественного иммуноферментного выявления иммуноглобулинов класса G к рецептор-связывающему домену поверхностного гликопротеина S (Spike) коронавируса SARS-CoV-2 (анти-RBD) "SARS-CoV-2ИФА-анти-RBD-количественный" по ТУ 21.20.23-574-98539446-2021 — инструкция и характеристики
Открытые закупки, где изделие проходит ТЗ
Сейчас открытых закупок, где изделие полностью проходит ТЗ, нет; список обновляется каждый день.
Построчная сверка ТЗ с характеристиками этого изделия и все закупки под ваши товары — в кабинете, 7 дней бесплатно.
Попробовать бесплатно
Текст инструкции: технические характеристики
--- стр. 2 ---
SARS-CoV-2ИФA-aнти-RBD-кoличecтвeнный В-1.2021-10
1. НАЗНАЧЕНИЕ
1.1. Набор реагентов ддя количественного иммуноферментного выявления
иммуноглобулинов класса G к рецептор-связывающему домену поверхностного гликопротеина S
(Spike) коронавируса SARS-CoV-2 (анти-RBD) «8АК8-СоУ-2ИФА-анти-КВО-количественный», по
ТУ 21.20.23-574-98539446-2021 предназначен для количественного иммуноферментного выявления
иммуноглобулинов класса G к рецептор-связывающему домену поверхностного гликопротеина S
(Spike) коронавируса SARS-CoV-2 (далее SARS-CoV-2) в сыворотке и плазме крови (цитрат натрия
3,2%, литиевая соль гепарина, натриевая соль гепарина, калиевая соль ЭДТА (КгЭДТА, КзЭДТА))
человека.
Функциональное назначение набора «SARS-CoV-2ИФA-aнти-RBD-кoличecтвeнный» -
вспомогательное средство в диагностике. Применяется для оценки иммунного ответа,
сформ1^ованного к рецептор-связывающему домену (RBD) S-белка SARS-CoV-2 на текущую или
перенесенную инфекцию, вызванную коронавирусом SARS-CoV-2, в том числе для оценки
рековалесцентов - потенциальных доноров антиковидной плазмы и определения уровня
поствакцинального иммунитета.*
Коронавирусы {Coronaviridae) - семейство РНК-содержащих вирусов, способных
инфицировать как животных (их естественных хозяев), так и человека.
У людей коронавирусы могут вызвать целый ряд заболеваний - от легких форм острой
респираторной инфекции (ОРВИ) до тяжелого острого респираторного синдрома (ТОРС).
SARS-CoV-2 - вирус с одноцепочечной РНК позитивной полярности, относящийся к роду
Betacoronavirus. Официальное название инфекции, вызванной SARS-CoV-2, - COVID-19
(Coronavirus disease 2019).
Длительность инкубационного периода COVID-19 может колебаться от 2 до 14 суток, однако
в среднем составляет 5-7 суток.
К основным методам диагностики заражения SARS-CoV-2 относятся методы амплификации
нуклеиновых кислот. Выявление антител к SARS-CoV-2 имеет вспомогательное значение для
диагностики текущей инфекции и основное для оценки иммунного ответа на текущую или
перенесенную инфекцию. Антитела класса А (IgA) начинают формироваться и доступны для
детекции примерно со 2 дня от начала заболевания, достигают пика через 2 недели и сохраняются
длительное время. Антитела класса М (IgM) начинают выявляться примерно на 7-е сутки от начала
заражения, достигают пика через неделю и могут сохраняться в течение 2-х месяцев и более.
Примерно с 3-й недели или ранее определяются антитела класса G (IgG) к SARS-CoV-2.
Выявлены четыре значимых для жизненного цикла SARS-CoV-2 структурных белка: S-белок,
М-белок, N-белок, М-белок.
S-белок состоит из двух функциональных субъединиц: S1 (содержащая RBD-домен)
обеспечивает связывание с рецептором клетки-мишени (АСЕ2), S2 способствует слиянию вируса и
клеточной мембраны. Антитела к RBD могут блокировать связывание с рецептором АСЕ2,
препятствуя проникновению и размножению SARS-CoV-2 в организме.
Оценка антиковидной плазмы. С целью лечения тяжелых случаев COVID-19, рекомендуется
пассивная иммунизация, а точнее, применение плазмы от доноров реконвалесцентов (с
подтвержденным диагнозом COVID-19, находящихся в стадии выздоровления). Установлено, что
* Проведены исследования пациентов, привитых вакцинами: Гам-КОВИД-Вак (Комбинированная
векторная вакцина для профилактики коронавирусной инфекции, вызываемой вирусом SARS-CoV-
2), ЛП-006395; Спутник Лайт (Векторная вакцина для профилактики коронавирусной инфекции,
вызываемой вирусом SARS-CoV-2), ЛП-006993; КовиВак (Вакцина коронавирусная
инактивированная цельновирионная концентрированная очищенная), ЛП-006800.
--- стр. 3 ---
дSARS-CoV-2ИФA-aнти-RBD-кoличecтвeнный В-1.2021-10
/ чем выше титр IgG антител к S1 домену вируса SARS-CoV-2 в антиковидной плазме, тем выше
I эффективность от ее трансфузии.
Обследование вакцинированных. Определение IgG к SARS-CoV-2 через 4 недели после
вакцинации позволяет подтвердить наличие поствакцинального (защитного) иммунитета.
Установлено, что большая часть нейтрализующих вирус SARS-CoV-2 антител направлена именно к
рецептор-связывающему домену (RBD) бежа S, по этой причине рекомендуется определять антитела
к RBD при оценке напряженности поствакцинального иммунитета.
1.2. Набор «SARS-CoV-2ИФA-aнти-RBD-кoличecтвeнный» предназначен для
однократного применения.
1.3. Набор «SARS-CoV-2ИФA-aнти-RBD-кoличecтвeнный» предназначен для диагностики
in vitro сотрудниками клинико-диагностических лабораторий.
'^.4. Набор «SARS-CoV-2ИФA-aнти-RBD-кoличecтвeнный» предназначен для
обследования всех групп населения без градации по демографическому или популяционному
признаку.
2. ХАРАКТЕРИСТИКА НАБОРА
2.1. Принцип действия
В наборе «8АК8-СоУ-2ИФА-анти-ИВО-количественный» использован вариант непрямого,
двустадийного твердофазного иммуноферментного анализа. Для реализации этого варианта
рекомбинантный белок SARS-CoV-2 (Spike RBD) иммобилизован на твердой фазе (внутренняя
поверхность лунок). Если в образце присутствуют специфические иммуноглобулины к SARS-CoV-
2, то во время первой инкубации происходит их связывание с антигеном твердой фазы.
Несвязавшиеся компоненты удаляются промывкой. Во время второй инкубации антитела к
иммуноглобулинам G человека, конъюгированные с пероксидазой хрена, связываются с
иммунокомплексом, образовавшимся на первой стадии. Несвязавшиеся компоненты удаляются
промывкой (Рисунок 1).
Планшет с
рекомбинантным
антигеном
SARS-CoV-2
Антитела к
SARS-CoV-2
Конъюгат
антител к IgG
человека с
пероксидазой
Рисунок 1. Схема анализа
Во время инкубации с раствором ТМБ происходит окрашивание раствора в лунках. Степень
окраски прямо пропорциональна концентрации иммуноглобулинов G в исследуемых пробах.
2.2. Состав и комплектации набора
Набор «SARS-CoV-2ИФA-aнти-RBD-кoличecтвeнный» выпускается в четырех
комплектациях:
Комплектация №1: на 96 определений при проведении анализа вручную при использовании
всего комплекта стрипов одновременно.
--- стр. 4 ---
Т8АР8-Со\/-2ИФА-анти-КВ0-количественный В-1.2021-10
/ Комплектация №2: на 96 определений при проведении анализа на автоматическом
i анализаторе «Alisei Q.S.»^, SEAC/Next Level, Италия (далее «Alisd») при использовании всего
комплекта стрипов одновременно.
Комплектация №3: на 192 определения при проведении анализа вручную при использовании
всего комплекта стрипов одновременно.
Комплектация №4: на 192 определения при проведении анализа на автоматическом
анализаторе «Alisei Q.S.»^, SEAC/Next Level, Италия (далее «Alisei») при использовании всего
комплекта стрипов одновременно.
Обратите внимание. кат.№ 200-85 и 200-86 допускается использовать только для ручной
постановки,
кат.№ 200-85А и 200-86А - только для постановки на автоматическом анализаторе «Alisei» (Таблица
, Обратите внимание, при каждой постановке анализа обязательно нужно определять
оптические плотности (ОП) калибровочных проб и концентрацию контрольной пробы в соответствии
со схемой маркировки лунок (п.7.2Л.1.).
Примечание:
В случае дробного применения набор может быть использован только в течение одного
месяца после вскрытия компонентов набора.
Состав набора:
• комплект из двенадцати 8-луночных стрипов в рамке с иммобилизованным на внутренней
поверхности лунок рекомбинантным антигеном SARS-CoV-2, маркирован «Стрипы с
рекомбинантным антигеном SARS-CoV-2» - 1 или 2 упаковки в зависимости от варианта
комплектации (Таблица 1);
• калибровочная проба на основе водно-солевого раствора, не содержащая антитела IgG к
SARS-CoV-2, маркирована «Калибровочная проба№Ь>- 1 или 2 флакона (по 1,8 мл) в зависимости
от варианта комплектации (Таблица 1);
• калибровочная проба на основе водно-солевого раствора, содержащая известное количество
антител IgG к SARS-CoV-2, маркирована «Калибровочная проба №2» - 1 или 2 флакона (по 1,8 мл) в
зависимости от варианта комплектации (Таблица 1), точное значения концентрации IgG к SARS-
CoV-2 (в диапазоне 0-1000 BAU/mL^) указано в паспорте набора реагентов и/или на этикетках
флаконов;
• калибровочная проба на основе водно-солевого раствора, содержащая известное количество
антител IgG к SARS-CoV-2, маркирована «Калибровочная проба №3 » - 1 или 2 флакона (по 1,8 мл) в
зависимости от варианта комплектации (Таблица 1), точное значения концентрации IgG к SARS-
CoV-2 (в диапазоне 0-1000 BAU/mL) указано в паспорте набора реагентов и/или на этикетках
флаконов;
• калибровочная проба на основе водно-солевого раствора, содержащая известное количество
антител IgG к SARS-CoV-2, маркирована «Калибровочная проба №4» - 1 или 2 флакона (по 1,8 мл) в
зависимости от варианта комплектации (Таблица 1), точное значения концентрации IgG к SARS-
CoV-2 (в диапазоне 0-1000 BAU/mL) указано в паспорте набора реагентов и/или на этикетках
флаконов;
^Допускается постановка анализа на других автоматических анализаторах для ИФА открытого типа,
за информацией о необходимой комплектации набора и программе проведения анализа обращайтесь
к производителю набора «8АК8-СоУ-2ИФА-анти-КВО-количественный» в ООО «Компания Алкор
Био», тел/факс: 8(812) 677-8779.
^ Binding antibody units per milliliter. Единиц связывания антител на миллилитр
4
--- стр. 5 ---
^5АРЗ-Со\/-2ИФА-анти-КВО-количественный В-1.2021-10
/ • калибровочная проба на основе водно-солевого раствора, содержащая известное количество
г антител IgG к SARS-CoV-2, маркирована «Калибровочная проба №5 » - 1 или 2 флакона (по 1,8 мл) в
зависимости от варианта комплектации (Таблица I), точное значения концентрации IgG к SARS-
CoV-2 (в диапазоне 0-1000 BAU/mL) указано в паспорте набора реагентов и/или на этикетках
флаконов;
• калибровочная проба на основе водно-солевого раствора, содержащая известное количество
антител IgG к SARS-CoV-2, маркирована «Калибровочная проба №6» - 1 или 2 флакона (по 1,8 мл) в
зависимости от варианта комплектации (Таблица 1), точное значения концентрации IgG к SARS-
CoV-2 (в диапазоне 0-1000 BAU/mL'*) указано в паспорте набора реагентов и/или на этикетках
флаконов;
• контрольная проба на основе водно-солевого раствора, содержащая известное количество
антите^1 IgG к SARS-CoV-2, маркирована «Контрольная проба» - 1 или 2 флакона (по 0,5 мл) в
зависимости от варианта комплектации (Таблица 1);
• аналитический водно-солевой раствор, маркирован «Буфер А» - 1 или 2 флакона (по 25 мл)
в зависимости от варианта комплектации (Таблица 1);
• конъюгат моноклональных антител к IgG человека с пероксидазой хрена, маркирован
«Конъюгат Е» - 1 или 2 флакона (по 14 мл) в зависимости от варианта комплектации (Таблица 1);
• концентрированный водно-солевой раствор для промывки лунок, маркирован «Буфер Н
(20Х)»- 1 или 2 флакона (по 50 мл) в зависимости от варианта комплектации (Таблица 1);
• раствор тетраметилбензидина, содержащий тетраме-тилбензидин, перекись водорода и
стабилизаторы, маркирован «Раствор ТМБ» - 1 или 2 флакона (по 14 мл) в зависимости от варианта
комплектации (Таблица 1);
• стоп-реагент, 3,59% раствор соляной кислоты, маркирован «Стоп-реагент»- 1 или 2 флакона (по
14 или 50 мл) в зависимости от варианта комплектации (Таблица 1);
• планщет для разведения образцов, маркирован «Стрипы чистые» - 1 или 2 шт. в зависимости
от варианта комплектации (Таблица 1);
• одноразовый наконечник - 16 шт. в зависимости от варианта комплектации (Таблица 1);
• одноразовая ванночка - 2 шт. в зависимости от варианта комплектации (Таблица 1);
• пленка для ИФА планшетов - 2 или 4 шт. в зависимости от варианта комплектации
(Таблица 1);
• пакет закрывающийся полиэтиленовый (при упаковке стрипов в пакет из материала
пленочного) - 1 или 2 шт. в зависимости от варианта комплектации (Таблица 1).
Таблица 1
Кат. номер 200-85 200-85А 200-86 200-86А
Название компонента
Цветовая
кодировка
компонента
Комплектаци
я№1
Комплектаци
я №2
Комплектаци
я №3
Комплектаци
я №4
Стрипы с
рекомбинантным
антигеном SARS-
CoV-2
- 1 шт. 1 шт. 2 шт. 2 шт.
Калибровочная проба
№1
Жидкость
желтого цвета
1 фл.
(1,8 мл)
1 фл.
(1,8 мл)
2 фл.
(по 1,8 мл)
2 фл.
(по 1,8 мл)
* Binding antibody units per milliliter, Единиц связывания антител на миллилитр
--- стр. 6 ---
8АК8-Со\/-2ИФА-анти-РВ0-количественный В-1.2021-10
Калибровочная проба
№2
Жидкость
желтого цвета
1 фл.
( 1,8 мл)
1 фл.
(1,8 мл)
2 фл.
(по 1,8 мл)
2 фл.
(по 1,8 мл)
Калибровочная проба
№3
Жидкость
желтого цвета
1 фл.
( 1,8 мл)
1 фл.
(1,8 мл)
2 фл.
(по 1,8 мл)
2 фл.
(по 1,8 мл)
Калибровочная проба
№4
Жидкость
желтого цвета
1 фл.
( 1,8 мл)
1 фл.
(1,8 мл)
2 фл.
(по 1,8 мл)
2 фл.
(по 1,8 мл)
Калибровочная проба
№5
Жидкость
желтого цвета
1 фл.
(1,8 мл)
1 фл.
(1,8 мл)
2 фл.
(по 1,8 мл)
2 фл.
(по 1,8 мл)
Калибровочная проба
/ №6
Жидкость
желтого цвета
1 фл.
(1,8 мл)
1 фл.
(1,8 мл)
2 фл.
(по 1,8 мл)
2 фл.
(по 1,8 мл)
Контрольная проба Жидкость
желтого цвета 1 фл. (0,5 мл) 1 фл. (0,5 мл) 2 фл.
(по 0,5 мл)
2 фл.
(по 0,5 мл)
Аналитический
водно-солевой
раствор
(Буфер А)
Жидкость
зеленого цвета
1 фл.
(25 мл)
1 фл.
(25 мл)
2 фл.
(по 25 мл)
2 фл.
(по 25 мл)
Конъюгат Е Жидкость
розового цвета
1 фл.
(14 мл)
1 фл.
(14 мл)
2 фл.
(по 14 мл)
2 фл.
(по 14 мл)
Концентрированный
водно-солевой
раствор для
промывки лунок
(Буфер Н (20Х))
Бесцветная
жидкость
1 фл.
(50 мл)
1 фл.
(50 мл)
2 фл.
(по 50 мл)
2 фл.
(по 50 мл)
Раствор
ТМБ
Бесцветная или
бледно-
желтого цвета,
или светло-
бурого цвета
жидкость
1 фл.
(14 мл)
1 фл.
(14 мл)
2 фл.
(по 14 мл)
2 фл.
(по 14 мл)
Стоп-реагент Бесцветная
жидкость
1 фл.
(14 мл)
1 фл.
(50 мл)
2 фл.
(по 14 мл)
2 фл.
(по 50 мл)
Одноразовая
ванночка - 2 шт. - 2 шт. -
Одноразовый
наконечник - 16 шт. - 16 шт. •
Пленка для ИФА
планшетов - 2 шт. - 4 шт. -
Стрипы чистые - 1 шт. - 2 шт. -
Пакет
закрывающийся
полиэтиленовый
- 1 шт. 1 шт. 2 шт. 2 шт.
В комплект поставки входят: набор реагентов, инструкция по применению, паспорт.
--- стр. 7 ---
5АК8-Со\/-2ИФА-анти-КВО-количественный В-1.2021-10
3. АНАЛИТИЧЕСКИЕ И ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
3.1. Аналитическая чувствительность - определенная по ГОСТ 51352-2013, составляет
0,5 BAU/mL.
Пределы измерения определены в соответствии с ЕР17-А2 Evaluation of Detection Capability
for Clinical Laboratory Measurement Procedures; Approved Guideline - Second Edition CLSI (Института
клинических и лабораторных стандартов): предел холостой пробы (LoB) составляет 0,585 BAU/mL;
предел обнаружения (LoD) - 1,8 BAU/mL.
Калибраторы, входящие в состав набора, аттестованы по Первому Международному
стандарту «First WHO International Standard for anti-SARS-CoV-2 Immunoglobulin (human)»
производства NIBSC, код 20/136.
3.2. Аналитическая специфичность набора «8АК8-СоУ-2ИФА-анти-КВО-
колич^венный» - способность набора обнаруживать лишь тот аналит, для которого он
предназначен, в присутствии других величин, представленных в пробе.
Повышение концентрации гемоглобина до 10 г/л, конъюгированного и неконъюгированного
билирубина до 40 мг/дл, сывороточного альбумина до 60 г/л или триглицеридов до 35 г/л в некоторых
пробах не оказывает негативного воздействия на результаты анализа с помощью набора «SARS-CoV-
2ИФА-анти-КВО - количественный», но не следует использовать гемолизированные или мутные
образцы.
Эквивалентность образцов сьгооротки и плазмы крови человека, содержащих антикоагулянты
(цитрат натрия 3,2%, литиевая соль гепарина, натриевая соль гепарина, К2ЭДТА, КЗЭДТА),
подтверждена не менее чем на 25 положительных и 25 отрицательных образцах каждого вида
биоматериала в анализе с помощью набора «SARS■CoV-2ИФA-aнти-RBD-кoличecтвeнный».
3.3. Перекрестная реактивность. Наличие перекрестных реакций в образцах, полученных
от пациентов с подтверждённым наличием IgG к гепатиту В, гепатиту С, метапневмовирусу ,
вирусу Эпштейна-Барр, к вирусам гриппа и парагриппа, респираторно-синцитиальному вирусу,
аденовирусу, энтеровирусу, риновирусу, от пациентов с бактериальной пневмонией (IgG к Chlamydia
pneumoniae, IgG к Mycoplasma pneumoniae. Streptococcus pneumoniae) и c туберкулезом (IgG к
Mycobacterium tuberculosis), a также в образцах, полученных от ВИЧ-инфицированных, пациентов с
другими типами короноваруса HCoV не выявлено.
3.4. Диапазон измерения находится в пределах 1,8-1000 BAU/mL.
3.5. Определение линейности измерений проводилось в соответствии с
модифицированным протоколом CLSI ЕР6-А Evaluation of the Linearity of Quantitative Measurement
Prosedures: A Statistical Approach; Approved Guideline. Линейный диапазон измерений набора «SARS-
СоУ-2ИФА-анти-11ВО-количественный» составляет 1,8-1000 BAU/mL.
ВНИМАНИЕ! Поскольку аутоантитела гетерогенны, при разведении отдельных образцов
возможен феномен нелинейного разведения.
3.6. Открытие - процентное отношение определяемого значения концентрации антител
IgG к SARS-CoV-2 к расчетному значению концентрации этого аналита. Открытие с помощью набора
«SARS-CoV-2ИФA-aнти-RBD-кoличecтвeнный» составляет 90-110%.
3.7. Точность - степень близости результата измерения к истинному значению
измеряемой величины: смещение измеренной концентрации относительно Первого Международного
стандарта «First WHO International Standard for anti-SARS-CoV-2 Immunoglobulin (human)» во всем
диапазоне измерений набора «SARS-CoV-2ИФA-aнти-RBD-кoличecтвeнный» составляет ±10%.
--- стр. 8 ---
'5АНЗ-Со\/-2ИФА-анти-КВО-количественный В-1.2021-10
3.8. Коэффициент вариации оптической плотности^ в одном и том же образце при
определении антител IgG к SARS-CoV-2 с помощью набора «SARS-CoV-2MOA-aHTH-RBD-
количественный» не превьплает 8%. Внутрисерийная и межсерийная воспроизводимость не превьппает
8% .
3.9. Диапазон ожидаемых значений
По результатам клинических испытаний получены следующие значения:
группа обследуемых Количество антител
Пациенты с диагнозом «COVID19» с давностью развития
симптомов более 10 и 15 дней.
10 ВAU/mL и более
Реконвалесценты, соответствующие установленным
требованиям для доноров антиковидной плазмы
90 BAU/mL и более (согласно
протоколу клинических
испытаний)
Вакцинированные: забор крови производился не ранее, чем
чере^42 дня после получения первой (однократной) дозы
вакцины (Гам-КОВИД-Вак, КовиВак, Спутник Лайт)
10 BAU/mL и более
Условно-здоровые пациенты, не имевшие в анамнезе
симптомов COVID-подобного заболевания в течение 2
последних месяцев с отрицательным ОТ-ПЦР тестом 8AR8-
CoV-2, пациенты с респираторными и другими инфекциями
менее 10 BAU/mL
3.10. Ограничение теста
Пробы пациентов, которые накануне сдачи крови употребляли алкоголь, соленую, жирную и
острую пищу, для анализа с помощью данного набора использовать не рекомендуется.
Результаты тестирования с помощью набора «SARS-CoV-2HOA-aHTH-RBD-KonH4ecTBeHHbm»
не должны использоваться в качестве единственного основания для диагностики/исключения
инфекции COVID-19 или для информирования о статусе инфекции, необходимо учитывать
клинические симптомы и результаты других тестов.
Ложноположительный результат тестирования с помощью набора «8АВ8-СоУ-2ИФА-анти-
RBD-количественный» может быть связан с прошлой или настоящей инфекцией, вызванной другими
коронавирусами, такими как коронавирус НКШ, NL63, ОС43 или 229Е.
Отрицательный результат тестирования с помощью набора «8AR8-CoV-2HOA-aHTH-RBD-
количественный» не исключает заражение 8AR8-CoV-2, особенно у лиц, бывших в контакте с
вирусом.
На начальной стадии развития инфекции, вызванной коронавирусом 8AR8-CoV-2 (от
момента заражения до проявления первых симптомов COVID-19), возможно получение
ложноотрицательного результата с помощью набора «8AR8-CoV-2MOA-aHTH-RBD-
количественный», так как количество иммуноглобулинов класса G в анализируемых образцах может
быть ниже определяемого набором уровня. По этой причине рекомендуется провести тест повторно
через 14 дней.
Ложноотрицательные результаты могут быть получены при обследовании пациентов со
сниженным иммунитетом. Ложноположительные и ложноотрицательные результаты могут также
появляться при нарушении правил проведения лабораторных исследований на всех этапах.
4. МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ
4.1. Потенциальный риск применения набора — класс 26 (согласно Приказу Министерства
здравоохранения РФ №4н от 06.06.2012 г.).
^При измерении на одном и том же оборудовании, либо оборудовании со схожими техническими
характеристиками
8
--- стр. 9 ---
^SARS-CoV-2M<t>A-aHTM-RBD-KonH4ecTBeHHbifi В-1.2021-10
4.2. Все компоненты набора в используемых концентрациях являются нетоксичными.
4.3. При работе с набором следует соблюдать ГОСТ Р 52905-2007 и СанПиН 3.3686-21
"Санитарно-эпидемиологические требования по профилактике инфекционных болезней».
4.4. Набор предназначен для профессионального применения персоналом, имеющим
квалификацию для выполнения диагностических исследований in vitro после специального
образования и обучения. Исследования могут выполнять специалисты не моложе 18 лет с высшим и
средним медицинским, биологическим или иным образованием (врач КДЛ, биолог, медицинский
технолог).
4.5. Перед началом работы ознакомиться с инструкцией и применять набор строго по
назначению.
4.6. В состав компонентов набора входят соляная кислота в концентрации 3,59%, а также
консе^ант в концентрации 0,01%. При попадании компонентов с ними на кожу: смыть большим
количеством воды с использованием мыла. При попадании в глаза - промыть глаза водой. При
попадании в желудок - прополоскать рот водой. Получить консультацию у врача.
4.7. При работе с набором следует надевать одноразовые резиновые или пластиковые
перчатки, разрешенные к применению на территории РФ, т.к. производные крови, входящие в состав
набора, и исследуемые образцы являются потенциально инфицированным материалом, способным
длительное время сохранять и передавать возбудителей различных вирусных инфекций.
4.8. Химическая посуда и оборудование, которые используются в работе с набором, должны
быть соответствующим образом маркированы и храниться отдельно. Поскольку ИФА чувствителен
к ионам металлов, контакт металлических предметов с компонентами набора недопустим.
4.9. Для обработки посуды и оборудования рекомендуется использовать дезинфицирующие
средства, изготовленные на основе третичных аминов, четвертичных аммониевых соединений (ЧАС)
или спиртов и разрешенные к применению на территории РФ. Использование дезинфицирующих
средств на основе активного кислорода и хлора возможно лишь на предстерилизационном этапе, с
последующей термической стерилизацией.
4.10. Запрещается прием пищи, использование косметических средств и курение в
помещениях, предназначенных для работы с наборами.
4.11. Убирать и дезинфицировать разлитые образцы или реактивы, используя
дезинфицирующие средства в соответствии с МУ 287-113 «Методические указания по дезинфекции,
предстерилизационной очистке и стерилизации изделий медицинского назначения».
4.12. Удалять неиспользованные реактивы в соответствии с требованиями СанПиН 2.1.3684-
21 «Санитарно-эпидемиологические требования к содержанию территорий городских и сельских
поселений, к водным объектам, питьевой воде и питьевому водоснабжению населения,
атмосферному воздуху, почвам, жилым помещениям, эксплуатации производственных,
общественных помещений, организации и проведению санитарно-противоэпидемических
(профилактических) мероприятий».
4.13. Все использованные одноразовые материалы и остатки образцов должны быть
подвергнуты обработке дезинфицирующими средствами с последующей утилизацией в соответствии
с требованиями СанПиН 2.1.3684-21 и МУ 287-113.
4.14. После использования стрипы, калибровочные и контрольные пробы, образцы и все
расходные материалы, которые контактировали с образцами во время обработки, хранения или
анализа (флаконы, перчатки, наконечники и т.д.) должны собираться отдельно и стерилизоваться в
автоклаве с последующей утилизацией в соответствии с требованиями СанПиН 2.1.3684-21. Вместо
автоклавирования наконечники могут быть стерилизованы дезинфицирующим средством, после
утилизированы в соответствии с требованиями СанПиН 2.1.3684-21.
--- стр. 10 ---
Г5АК8-Со\/-2ИФА-анти-РВО-количественный В-1.2021-10
4.15. Во время процедуры ручной промывки планшета содержимое лунок необходимо
выбрасывать в контейнер с дезинфицирующим раствором на основе третичных аминов, ЧАС или
спиртов.
4.16. Не использовать набор по истечении срока годности.
5. ОБОРУДОВАНИЕ И МАТЕРИАЛЫ
• спектрофотометр вертикального сканирования, позволяющий измерять оптическую
плотность раствора в лунках при длинах волн 450 нм и 600-655 нм^;
• термостат, поддерживающий температуру +37 °С^;
• автоматическое промывочное устройство (вошер) для иммунологических планшетов^*^;
пипетки полуавтоматические одноканальные со сменными одноразовыми наконечниками^ с
измен^мым объемом отбора жидкостей: на 5-50 мкл; на 20-200 мкл; на 100-1000 мкл; на 1000-
5000 ^(;кл;
• пипетка полуавтоматическая восьмиканальная со сменными одноразовыми
наконечниками®, позволяющая отбирать объемы жидкости до 300 мкл;
• цилиндр мерный, позволяющий отмерять 100-1000 мл;
• стакан стеклянный подходящего объема;
ванночки для внесения реагентов восьмиканальной пипеткой;
т9.вода дистиллированная или очищенная деионизованная^
бумага фильтровальная;
перчатки резиновые или пластиковые;
дезинфицирующий раствор на основе третичных аминов, ЧАС или спиртов;
контейнер для дезинфекции.
Дополнительно для проведения анализа на анализаторе «Alisei»:
•автоматический иммуноферментный анализатор «Alisei»^;
•многоцелевые полипропиленовые пробирки*® 12x75 вместимостью 5 мл;
•концентрированный водный раствор Триала, 5000-кратный концентрат, маркирован «Триал
(5000Х)»9.
6. АНАЛИЗИРУЕМЫЕ ОБРАЗЦЫ
6.1. Забор крови из вены осуществляют с соблюдением правил асептики. После
формирования сгустка сыворотку отделяют путем центрифугирования. Забор крови для получения
плазмы осуществляют в пробирку, содержащую антикоагулянт (цитрат натрия 3,2%, литиевая соль
^Допускается использование автоматических анализаторов для ИФА открытого типа с аналогичными
характеристиками, за информацией о необходимой комплектации набора и программе проведения
анализа обращайтесь к производителю набора «8АК8-СоУ-2ИФА-анти-КВО-количественный» в
ООО «Компания Алкор Био», тел/факс: (812) 677-8779.
^При использовании автоматического промывочного устройства необходимо тщательно следить за
его состоянием, периодически проверять емкости и соединительные шланги для промывочных
буферов на наличие микробиологического зароста и других загрязнений, проводить техническое
обслуживание в соответствии с рекомендациями производителя оборудования
^Повторное использование наконечников не допускается. При внесении каждого образца необходимо
использовать новый наконечник.
’в соответствии с ГОСТ 6709-72 необходимо периодически контролировать качество воды,
используемой для приготовления растворов.
*® Компоненты, не входящие в состав набора, поставляются по отдельному заказу.
10
--- стр. 11 ---
В-1.2021-10
КзЭДТА)). После
г5АКЗ-Со\/-2ИФА-анти-ПВО-количественный
гепарина, натриевая соль гепарина, калиевая соль ЭДТА (КгЭДТА,
центрифугирования сыворотку или плазму переносят в отдельную пробирку.
6.2. Для проведения анализа не следует использовать гемолизированную или мутную
сыворотку и плазму, а также образцы сыворотки, содержащие азид натрия.
6.3. Образцы сыворотки и плазмы крови разрешается хранить при температуре +2.. .+8 °С не
более 5-ти суток; при необходимости более длительного хранения рекомендуется аликвотировать
образец и хранить в замороженном виде при температуре -20 °С и ниже. Не допускается повторное
замораживание образца.
7. ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА
7.1. Подготовка реагентов
рЛ.\. Стрипы. Перед вскрытием пакет со стрипами необходимо выдержать при комнатной
температуре (+18...+25 °С) (далее КТ) не менее 30 минут. Вскрыть пакет и переставить на
свободную рамку необходимое количество стрипов.
7.1.2. Калибровочные пробы и контрольная проба готовы к использованию.
7.1.3. Буфер А готов к использованию.
7.1.4. Конъюгат Е готов к использованию.
7.1.5. Промывочный раствор. Необходимое количество буфера Н (20Х) развести
дистиллированной или очищенной деионизованной водой в 20 раз.
Например: 50 мл буфера Н (20Х) + 950 мл воды. Тщательно перемешать, избегая
ценообразования.
7.1.6. Раствор тетраметилбензидина (ТМБ) готов к использованию.
7.1.7. Стоп-реагент готов к использованию.
7.1.8. Рабочий раствор Триала. Необходимое количество концентрированного раствора
Триала развести дистиллированной или очищенной деионизованной водой в 5000 раз.
Например: 1 мл Триала + 4999 мл воды.
Тщательно перемешать, избегая пенообразования.
7.1.9. Все реагенты перед проведением анализа должны быть тщательно перемешаны и
доведены до КТ.
7.1.10. Разведение исследуемых образцов
Если по предварительным данным концентрация антител IgG к SARS-CoV-2 в исследуемом
образце выше КПХ26, образец следует развести буфером А в 10 раз.
10-кратное разведение. Для такого разведения в чистую лунку планшета для разведения
образцов внести 90 мкл буфера А и добавить 10 мкл исследуемого образца, тщательно перемешивая
содержимое лунки с помощью пипетирования. Цвет раствора при этом изменится со светло-
зеленого на голубой.
Если для исследуемого образца 10-кратного разведения недостаточно, то такой образец
следует дополнительно развести буфером А еще в 10 раз.
100-кратное разведение. Для такого разведения в две чистые лунки планшета для разведения
образцов (например, в лунки В1, С1) внести 90 мкл буфера А, в лунку В1 добавить 10 мкл
исследуемого образца без разведения, тщательно перемешать (как описано выше). Затем в лунку С1
добавить 10 мкл образца из лунки В1, вновь тщательно перемешать.
Примечания:
Лунки планшета для разведения образцов допустимо использовать лишь однократно,
повторное использование лунок запрещено.
Разведенные образцы хранению не подлежат, для повторного анализа требуется подготовка
11
--- стр. 12 ---
iRS-CoV-2ИФA-aнти-RBD-кoличecт8eнный В-1.2021-10
Нового разведения образца.
7.2. Постановка анализа
7.2.1. Ручная постановка
На странице 32 приведена схема проведения анализа.
7.2.1.1. Составить протокол маркировки лунок.
Лунки промаркировать следующим образом:
А1,А2- №1- для измерения величины ОП КП №1;
В1,В2- №2- для измерения величины ОП КП №2;
С1,С2- №3- для измерения величины ОП КП №3;
D1,D2- №4- для измерения величины ОП КП №4;
Е1,Е2- №5- для измерения величины ОП КП №5;
*^1,F2- №6- для измерения величины ОП КП №6;
/ G1,G2- №7- для измерения величины ОП контрольной пробы.
Примечание: Рекомендовано проведение анализа в дубликатах, это позволяет уменьшить
вероятность ошибок и получить достоверные результаты. Допускается использование набора для
анализа образцов в монопликатах при условии своевременной поверки и обслуживания
измерительного и промывочного оборудования, что позволяет в случае неисправности свести к
минимуму их негативное влияние на результат анализа.
7.2.1.2. Внести в соответствующие лунки по 100 мкл калибровочных проб, в остальные
лунки (в том числе в лунки для контрольной пробы) внести по 90 мкл аналитического буфера и
по 10 мкл контрольной пробы и исследуемых образцов, осторожно перемешивая содержимое лунок
с помощью пипетирования. Цвет раствора в лунках с образцами при этом изменится со светло-
зеленого на голубой. Заклеить планшет пленкой.
Примечание: общее время внесения калибровочных, контрольных проб и исследуемых
образцов не должно превышать 15 минут, иначе время инкубации различных образцов будет
значительно различаться, что приведет к неправильным результатам.
7.2.1.3. Инкубировать стрипы 30 минут при температуре +37 ®С (предварительно
встряхнуть рамку аккуратным простуки-ванием в течение 20-30 сек или на шейкере в течение 5-10
сек при комнатной температуре).
7.2.1.4. По окончании первой инкубации удалить содержимое лунок в контейнер с
дезинфицирующим раствором на основе третичных аминов, ЧАС или спиртов и промыть лунки 4 раза.
При каждой промывке во все лунки добавлять по 300 мкл промывочного раствора, приготовленного
по П.7.1.5., и вьщержать в течение 30 сек с последующим декантированием. После последнего
декантирования тщательно удалить остатки жидкости из лунок постукиванием рамки со стрипами в
перевернутом положении по фильтровальной бумаге.
Допускается промывка лунок при помощи автоматического промывочного устройства. При
автоматической промывке необходимо заполнять лунки полностью и следить за качеством
аспирации.
7.2.1.5. Внести во все лунки по 100 мкл Конъюгата Е. Заклеить планшет пленкой.
7.2.1.6. Инкубировать стрипы 30 минут при температуре +37 ®С.
7.2.1.7. По окончании второй инкубации удалить содержимое лунок декантированием и
промыть лунки согласно п.7.2.1.4.
7.2.1.8. Немедленно внести во все лунки по 100 мкл раствора ТМБ и инкубировать стрипы
в темноте в течение 20 минут без шейкирования при КТ.
7.2.1.9. Добавить во все лунки с той же скоростью и в той же последовательности, как и
раствор ТМБ, по 100 мкл стоп-реагента для остановки ферментной реакции, встряхнуть рамку
12
--- стр. 13 ---
^Р8-Со\/-2ИФА-анти-ЯВО-количественный В-1.2021-10
fKKypaxHbiM постукиванием в течение 20-30 секунд или на шейкере в течение 5-10 секунд при
комнатной температуре.
7.2.1.10. Если невозможно измерить оптическую плотность в лунках планшета
непосредственно после выполнения п.7.2.1.9,, то следует иметь в виду, что окраска в лунках
планшета стабильна не более 20 минут при КТ.
7.2.2. Постановка на анализаторе «Alisei»
Анализатор «Alisei» имеет полностью автоматизированный процесс проведения анализа:
внесение реагентов, инкубирование, промывка, измерение оптической плотности, обработка
результатов. Программа определения концентрации IgG к SARS-CoV-2 с помощью набора «SARS-
СоУ-2ИФА-анти-КВО-количественный» введена в память анализатора.
7.2.2.1. Разведение исследуемых образцов
^сли по предварительным данным или после получения результатов концентрация антител
IgG K'SARS-CoV-2 в исследуемом образце выше КП Х^б, образец следует развести буфером А в 10
раз.
10-кратное разведение: в чистую полипропиленовую пробирку 12x75 вместимостью 5 мл
внести 360 мкл буфера А и 40 мкл исследуемого образца, аккуратно перемешать содержимое. Далее
провести исследование образца по стандартной процедуре. При учете результатов полученную
концентрацию умножить на фактор разведения (10).
Если для исследуемого образца 10-кратного разведения недостаточно, то такой образец
следует развести буфером А в 100 раз.
100-кратное разведение: в чистую полипропиленовую пробирку 12x75 вместимостью 5 мл
внести 990 мкл буфера А и 10 мкл исследуемого образца, аккуратно перемешать содержимое. Далее
провести исследование образца по стандартной процедуре. При учете результатов полученную
концентрацию умножить на фактор разведения (100).
1.1.2.2. В случае дробного применения набора необходимо извлечь калибровочные пробы и
контрольную пробу из автоматического анализатора после их внесения в лунки планшета и, плотно
закрыв крышками, убрать в холодильник. Не допускается повторное использование калибровочных
проб и контрольной пробы, находившихся на борту анализатора в течение всей сессии, вне
зависимости от ее длительности. Остальные жидкие реагенты убрать в холодильник сразу по
окончании сессии. Эти ограничения обусловлены естественным испарением жидкостей, приводящим
к получению некорректных результатов измерения при последующем использовании реагентов.
7.2.2.3. Для каждой новой серии набора реагентов необходимо построение нового
калибровочного графика с концентрациями калибровочных проб, указанными на этикетках флаконов
и/или в паспорте набора реагентов.
7.2.2.4. Не допускается рекалибрация по калибровочной кривой, полученной на наборе другой
серии.
8. РЕГИСТРАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ
8.1. После выполнения ручной постановки измерить на фотометре вертикального
сканирования оптическую плотность в лунках при длине волны 450 нм, рекомендуется
использование референсного фильтра 600-655 нм.
При регистрации результатов необходимо вычитать ОП, полученную на референсном
фильтре, из ОП, полученной при 450 нм, для каждой лунки.
8.2. Критерии достоверности анализа
Результаты анализа считают достоверными при соблюдении следующих условий:
- значение ОП в лунках содержащих КП №1, должно быть не более 0,1 ед.ОП;
- значение ОП в лунках, содержащих КП Х®6, должно быть не менее 1,5 ед.ОП;
13