Набор реагентов АмплиСенс® Enterovirus / Parechovirus-FL — инструкция и характеристики
Открытые закупки, где изделие проходит ТЗ
Сейчас открытых закупок, где изделие полностью проходит ТЗ, нет; список обновляется каждый день.
Построчная сверка ТЗ с характеристиками этого изделия и все закупки под ваши товары — в кабинете, 7 дней бесплатно.
Попробовать бесплатно
Текст инструкции: технические характеристики
--- стр. 4 ---
«УТВЕРЖДАЮ»
Директор Федерального бюджетного
учреждения науки «Центральный
научно-исследовательский институт
эпидемиологии» Федеральной
службы по надзору в сфере защиты
прав потребителей/й/благополучия
человека
В .Г Акимкин
20^/ Г .
ш и5 М 5
ц Щ
isSiSS £ Щ! m 0 fn
>£ C D £! 5 m£
£
ИНСТРУКЦИЯ no ПРИМЕНЕНИЮ
набора реагентов
Ампл иСенс® Enterovirus / Parechovirus-FL
АмплиСенс®
Mil
ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии
Роспотребнадзора,
Российская Федерация, 111123,
Г. Москва, ул. Новогиреевская, д. ЗА
Г. Москва, ул. Новогиреевская, д. ЗА, стр. 6
тел. (495) 974 9642, e-mail; ampiisens@pcr.ru
--- стр. 5 ---
ОГЛАВЛЕНИЕ
СПИСОК СОКРАЩ ЕНИЙ............................................................................................................ 3
НАЗНАЧЕНИЕ................................................................................................................................ 3
ПРИНЦИП МЕТОДА.....................................................................................................................4
ФОРМЫ КОМ ПЛЕКТАЦИИ.........................................................................................................5
АНАЛИТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ....г...-.......................................................................... 5
ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ .............................................................................9
МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ.............................................................................................. 12
СВЕДЕНИЯ ОБ УТИЛИЗАЦИИ................................................................................................ 13
ДОПОЛНИТЕЛЬНЫЕ МАТЕРИАЛЫ И ОБОРУДОВАНИЕ................................................. 13
ВЗЯТИЕ, ТРАНСПОРТИРОВАНИЕ И ХРАНЕНИЕ ИССЛЕДУЕМОГО МАТЕРИАЛА.. 16
ПОДГОТОВКА ИССЛЕДУЕМОГО МАТЕРИАЛА К ЭКСТРАКЦИИ РНК...........................21
ИНТЕРФЕРИРУЮЩИЕ ВЕЩЕСТВА И ОГРАНИЧЕНИЯ ПО ИСПОЛЬЗОВАНИЮ ПРОБ
ИССЛЕДУЕМОГО МАТЕРИАЛА......................................................................................... t.. 23
ПРОВЕДЕНИЕ ПЦР-ИССЛЕДОВАНИЯ.................................................................................24
ЭКСТРАКЦИЯ РНК ИЗ ИССЛЕДУЕМЫХ О БРАЗЦОВ .......................................................24
ОБРАТНАЯ ТРАНСКРИПЦИЯ................................................................................................. 25
ФОРМА 1 («ПЦР-комплект» вариант FRT-50-0.2)............................................................... 26
СОСТАВ.................................................................................................................................. 26
АМПЛИФИКАЦИЯ С ДЕТЕКЦИЕЙ В РЕЖИМЕ «РЕАЛЬНОГО ВРЕМЕНИ» ...........26
A. Подготовка проб для амплиф икации.....................................................................26
Б. Проведение амплификации с детекцией в режиме «реального времени».. 27
B. Анализ и интерпретация результатов..............................г...................................28
СРОК ГОДНОСТИ. УСЛОВИЯ ТРАНСПОРТИРОВАНИЯ И ХРАНЕНИЯ ......................31
ГАРАНТИЙНЫЕ ОБЯЗАТЕЛЬСТВА ИЗГОТОВИТЕЛЯ ......................................................31
СИМВОЛЫ. ИСПОЛЬЗУЕМЫЕ В ПЕЧАТНОЙ ПРОДУКЦИИ ...........................................33
стр. 2 из 33
--- стр. 6 ---
список СОКРАЩЕНИИ
В настоящей инструкции применяются следующие
BKO-FL - экзогенный внутренний контрольный образец
гэ - геномные эквиваленты
ДНК - дезоксирибонуклеиновая кислота
кДНК - комплементарная ДНК, получаемая в реакции обратной
транскрипции на матрице РНК
к+ - положительный контроль ПЦР
к- - отрицательный контроль ПЦР
о к - отрицательный контроль экстракции
о ко - отрицательный контрольный образец
от - обратная транскрипция
по - программное обеспечение
ПЦР - полимеразная цепная реакция
РНК > рибонуклеиновая кислота
РУ - регистрационное удостоверение
смж - спинномозговая жидкость
ФБУН ЦНИИ
Эпидемиологии
Роспотребнадзора
- Федеральное бюджетное учреждение науки «Центральный
научно-исследовательский институт эпидемиологии»
Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав
потребителей и благополучия человека
FL - ПЦР с гибридизационно-флуоресцентной детекцией
FRT - флуоресцентная детекция в режиме «реального времени»
EV - Enterovirus (энтеровирус)
PEV - Parechovirus (парэховирус)
PBS - фосфатно-солевой буфер
НАЗНАЧЕНИЕ
Набор реагентов АмплиСенс® Enterovirus / Parechovirus-FL
предназначен для качественного определения РНК
энтеровирусов человека {Human enterovirus) видов/кластеров А,
В, С, D, без дифференцировки между ними, и РНК
парэховирусов человека {Human parechovirus) видов/кластеров
А, В, без дифференцировки между ними, в биологическом
материале (фекалии, спинномозговая жидкость, мазки из
респираторного тракта, мокрота, тканевой (биопсийный,
аутопсийный) материал от человека) и объектах окружающей
среды (концентраты ' образцов воды) методом ПЦР с
гибридизационно-флуоресцентной детекцией продуктов
амплификации. Материалом для проведения ПЦР служат пробы
кДНК, полученные в результате реакции обратной транскрипции
РНК, экстрагированной из исследуемого материала.
стр. 3 из 33
--- стр. 7 ---
I
Показания и противопоказания к применению набора
реагентов
Набор реагентов используется в клинической лабораторной
диагностике для исследования биологического материала,
полученного от лиц с подозрением на энтеровирусную и/или
парэховирусную инфекцию вне зависимости от формы и
наличия манифестации заболевания, а также для исследования
объектов окружающей среды и аутопсийного материала с целью
установления посмертного диагноза.
Противопоказания отсутствуют, за исключением случаев,
когда забор материала не может быть осуществлен по
медицинским показаниям.
Потенциальные пользователи медицинского изделия
К работе с набором реагентов допускаются только
медицинские работники, обученные методам молекулярной
диагностики и правилам работы в клинико-диагностической
лаборатории в установленном порядке (СанПиН 3.3686-21
«Санитарно-эпидемиологические требования по профилактике
инфекционных болезней»).
ПРИНЦИП МЕТОДА
Принцип тестирования основывается на экстракции РНК из
образцов исследуемого материала совместно с экзогенным
внутренним контрольным образцом (BKO-FL), проведении
реакции обратной транскрипции РНК и амплификации участков
кДНК выявляемых вирусов и кДНК BKO-FL с гибридизационно-
флуоресцентной детекцией. BKO-FL позволяет контролировать
все этапы ПЦР-исследования для каждого образца и оценивать
влияние ингибиторов на результаты ПЦР-исследования.
Обратная транскрипция РНК проводится с помощью фермента
ревертазы (MMIv). Амплификация участков кДНК проводится при
помощи специфичных к этим участкам праймеров и фермента
Taq-полимеразы. В составе реакционной смеси присутствуют
флуоресцентно-меченые олигонуклеотиды, комплементарные
участкам амплифицируемой кДНК-мишени, что позволяет
регистрировать накопление специфического продукта
амплификации путем измерения интенсивности флуоресцентного
сигнала с помощью амплификатора с системой детекции
флуоресцентного сигнала в режиме «реального времени».
стр. 4 из 33
--- стр. 8 ---
Набор реагентов содержит систему защиты от контаминации
ампликонами за счет применения фермента урацил-ДНК-
гликозилазы (УДГ) и дезоксиуридинтрифосфата.
На этапе ПЦР одновременно в одной пробирке проводится
амплификация трех кДНК-мишеней. Результаты амплификации
регистрируются по следующим каналам флуоресцентной
детекции (см. табл. 1):
Таблица 1
Канал для
ф луороф ора FAM JOE ROX
кДНК-мишень кДНК BKO-FL кДНК Enterovirus кДНК Parechovirus
Область
амплификации
искусственно
синтезированная
последовательность
5’UTR 5'UTR
О
ФОРМЫ КОМПЛЕКТАЦИИ
Форма 1: «ПЦР-комплект» вариант FRT-50-0,2
Форма 1 предназначена для проведения амплификации кДНК
энтеровирусов человека {Enterovirus) и . парэховирусов
{Parechovirus) с гибридизационно-флуоресцентной детекцией в
режиме «реального времени» и позволяет выявлять РНК в
качественном формате. Для проведения полного ПЦР-
исследования необходимо использовать комплекты реагентов
для экстракции РНК и проведения реакции обратной
транскрипции РНК.
Форма 1 рассчитана на проведение 55 реакций амплификации,
включая контроли.
АНАЛИТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
Для данного набора реагентов применимы следующие
характеристики:
стр. 5 из 33
--- стр. 9 ---
Аналитическая чувствительность (предел обнаружения)
Таблица 2
Вид
исследуем ого
материала
Ком плект
для
экстракции
РНК
Ком плект для
обратной
транскрипции
Ком плект для
ам плиф икации
А налитическая
чувствител ьн ость
(предел
обнаружения)'*,
ГЭ/мл
Мокрота
«РИБО-преп» «РЕВЕРТА-L»
«ПЦР-
комплект»
вариант
FRT-50-0.2
3x10“
Фекалии 1x10^
Тканевой
материал 1x10“
Концентраты
образцов воды 5x103♦
Спинномозговая
жидкость (СМЖ) 5x10=
Мазки из
респираторного
тракта
5x10^
Данный предел обнаружения достигается при соблюдении
правил, указанных в разделах «Взятие, транспортирование и
хранение исследуемого материала» vi «Подготовка
исследуемого материала к экстракции РНК».
Аналитическая специфичность
Набор реагентов обнаруживает участки кДНК заявленных
микроорганизмов. Аналитическая специфичность набора
реагентов доказана при исследовании следующих панелей проб
нуклеиновых кислот:
1 . РНК энтеровирусов человека (представителей разных
генетических кластеров: кластер А - Human coxsackievirus А4,
А5, А6, А9, А16; кластер В - Human echovirus 2, 6, 9, 11, 14,
16, 17, 18, 30, Human coxsackievirus В4, В5 (клинические
образцы, видовая принадлежность подтверждена методом
прямого секвенирования нуклеотидных
последовательностей); кластер С - Human poliovirus 1, 2, 3
(вакцинные штаммы); кластер D - Enterovirus D68 (АТСС® VR-
1825PQ™)); Parechovirus А и В (клинические образцы,
специфичность подтверждена методом прямого
секвенирования нуклеотидных последовательностей) в
концентрации не менее 1x10“ * ГЭ/мл. При тестировании
образцов РНК вышеперечисленных штаммов/клинических
^ Количество геномны х эквивалентов микроорганизма (ГЭ) в 1 мл образца исследуемого
материала.
стр. 6 из 33
--- стр. 11 ---
lactamica ATCC® 23970™, Neisseria meningitidis ATCC®
13102™ (Serogroup C), Neisseria meningitidis ATCC® 13090™
(Serogroup B), Proteus mirabilis ATCC® 12453™, Proteus
vulgaris ATCC® 6380™, Propionibacterium acnes
ATCC® 11827™, Pseudomonas aeruginosa ATCC® 15442™,
Rhodococcus equi ATCC® 6939™, Salmonella enterica subsp.
enterica serovar Typhimurium ATCC® 14028™, Serratia
marcescens ATCC® 14756™, Streptococcus pneumoniae
ATCC® 6303™, Staphylococcus aureus (MRSA) ATCC®
43300™, Staphylococcus aureus ATCC® 29213™,
Staphylococcus aureus ATCC® 25923™, Staphylococcus aureus
ATCC® 33862™, Staphylococcus aureus (MRSA) ATCC®
33591 ™, Staphylococcus aureus subsp. aureus ATCC® 12600™,
Staphylococcus epidermidis ATCC® 12228'^'^, Staphylococcus
haemolyticus ATCC® 29970™, Staphylococcus saprophyticus
ATCC® 49907™, Stenotrophomonas maltophilia ATCC®
13637™, Streptococcus agalactiae ATCC® 12386™,
Streptococcus agalactiae ATCC® 13813™, Streptococcus
equisimilis ATCC® 12388™, Streptococcus equi subsp. equi
ATCC® 9528™, Streptococcus bovis (Group D) ATCC® 9809™,
Streptococcus mutans ATCC® 35668™, Streptococcus
pneumoniae ATCC® 27336™, Streptococcus pneumoniae
ATCC® 6305™, Streptococcus pyogenes ATCC® 19615™,
Streptococcus salivarius ATCC® 13419™, Streptococcus и beds
ATCC® 700407™, Vibrio parahaemolyticus ATCC® 17802™.
При тестировании панелей №2 и №3, а также образцов ДНК
человека (0,2 мг/мл) (Sigma-Aldrich, США), неспецифических
реакций выявлено не было.
Информация об интерферируюидих веществах указана в
разделе «Интерферирующие вещества и ограничения по
использованию проб исследуемого материала».
Повторяемость и воспроизводимость исследования
Повторяемость и воспроизводимость были определены путем
тестирования положительных и отрицательных модельных
образцов. Положительные образцы представляли собой
стандартные образцы предприятия, содержащие
РНК Enterovirus, РНК Parechovirus концентрации 5x10^ ГЭ/мл, в
качестве отрицательного образца был использован реагент
ОКО.
стр. 8 из 33
--- стр. 12 ---
Условия повторяемости включали в себя тестирование в
одной и той же лаборатории, одним и тем же оператором, с
использованием одного и того же оборудования в пределах
короткого промежутка времени. Условия воспроизводимости -
тестирование в двух независимых лабораториях, разными
операторами, в разные дни, на различных приборах и разных
серий набора реагентов. Результаты представлены в табл. 3.
Таблица 3
Повторяемость Воспроизводимость
Тип образцов Количество
образцов
Совпадение
результатов, %
Количество
образцов
Совпадение
результатов, %
Положительные 10 100 40 100
Отрицательные 10 100 40 100
ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
Таблица 4
Результаты тестирования набора реагентов
АмплиСенс® Enterovirus / Parechovirus-FL
Выявляе
мый
патоген
Вид
исследуемого
материала
Результаты применения
АмплиСенс®
Enterovirus/Parechovirus-
FL
Результаты применения
референтногоиметода^
положитель
ных
отрицатель
ных
Enterovirus
Фекалии
Всего
исследован
281 образец
положительных 103 5
отрицательных 0 173
Концентраты
образцов воды
Всего
исследовано
137 образцов
положительных 36 0
отрицательных 0 101
Спинномозговая
жидкость
Всего
исследован
341 образец
положительных 182 4
отрицательных 0 155
Мазки из
респираторного
тракта
Всего
исследовано
202 образца
положительных 38 0
отрицательных 1 163
Образцы
мокроты
Всего
исследовано
положительных 65 0
отрицательных 0 82
Г ,
^ В качестве референтного метода для детекции Enterovirus использовался набор реагентов
«АмплиСенс Human enterovirus-FL» (РУ № РЗН 2021/13712).
Референтной методики для определения Parechovirus, зарегистрированной на территории
РФ . не существует. Все положительные находки были подтверходены методом прямого
секвенирования продуктов амплификации.
стр. 9 из 33
--- стр. 13 ---
J t
Выявляв'
мый
патоген
Вид Результаты применения
АмплиСенс®
Результаты применения
референтного ме^да’исследуемого
материала Enterovirus/Parechovirus-
FL
положитель
ных
отрицатель
ных
147
образцов
Тканевой
Всего
исследованоположительных 39 0
материал 136
образцов отрицательных 0 97
Фекалии
Всего
исследован
281 образец
положительных 59 0
отрицательных 0 222
Концентраты Всего положительных 31 0
образцов воды исследовано
137 образцовотрицательных 0 106
Спинномозговая Всего
исследован
341 образец
положительных 45 0
Parechovirus
жидкость отрицательных 0 296
Мазки из
респираторного
тракта
Всего
исследовано
202 образца
положительных 40 0
отрицательных _0 162
Образцы Всего положительных 62 0
мокроты исследовано
147 образцовотрицательных 0 85
Тканевой Всего
исследовано
136 образцов
положительных 39 0
материал отрицательных 0 97
Для оценки диагностических характеристик были
использованы:
- 281 образец фекалий от пациентов с серозными менингитами
и клинически здоровых лиц (амбулаторно вакцинируемые
дети) в период 2013-2021 гг.
- 341 образец спинномозговой жидкости от пациентов с
серозными менингитами и пациентов с гнойными
бактериальными менингитами в период 2007-2011 гг.
- 202 образца мазков из респираторного тракта от пациентов с
серозными менингитами и от пациентов с ОРВИ различной
этиологии 2014-2021 гг.
- 85 образцов мокроты от пациентов с серозными менингитами
и от пациентов с ОРВИ различной этиологии, а также 62
модельных образца, контаминированных разведениями
стандартных образцов предприятия ООП № 47 ПКО
Enterovirus-rec и ООП № 243 ПКО Parechovirus-rec в
стр. 10 ИЗ 33
--- стр. 14 ---
концентрации 3^1 O '* ГЭ/мл.
113 образцов аутопсийного материала, полученных от
пациентов с летальным исходом в период 2014-2020 гг., а
также 23 модельных образца, контаминированных
разведениями стандартных образцов предприятия СОП № 47
ПКО Enterovirus-rec и СОП № 243 ПКО Parechovirus-xec в
концентрации 1x10“ * ГЭ/мл.
137 концентратов образцов воды (106 образцов, полученных
из субъектов РФ в рамках деятельности Российского
Референс-центра по мониторингу возбудителей кишечных
инфекций 2015-2020 гг., и 31 модельный образец,
контаминированный разведениями стандартных образцов
предприятия СОП № 47 ПКО Enterovirus-xec и
СОП № 243 ПКО Parechovirus-xec в концентрации
5x103 ГЭ/мл).
Таблица 5
Диагностические характеристики набора реагентов
АмплиСенс® Enterovirus / Parechovirus-fL
В ы являем ы й
патоген
Вид
исследуем ого
материала
Д иагностическая
чувствител ьность^
(с доверител ьной
вероятностью 95 %)
Д иагностическая
специф ичность^
(с доверител ьной
вероятностью 95 %)
Фекалии 100 (97,1-100)% 97,2 (94,8-100)%
Концентраты
образцов воды 100 (92,02-100)% 100 (97,1-100)%
Enterovirus
Спинномозговая
жидкость (СМЖ) 100 (98,4-100) % 97,5(95,0-100)%
Мазки из
респираторного
тракта
97,4 (92,3-100)% 100 (98.2-100)%
Мокрота 100 (95.5-100)% 100 (96,4-100)%
Тканевой материал 100 (92,6-100)% 100 (97-100)%
Фекалии 100 (95,0-100)% 100 (98,7-100) %
! Концентраты
образцов воды 100 (90,8-100)% 100 (97.2-100)%
Parechovirus
Спинномозговая
жидкость (СМЖ) 100 (93,6-100)% 100 (99,0-100)%
Мазки из
респираторного
тракта
100 (92,8-100)% 100 (98,2-100)%
Мокрота 100 (95,3-100)% 100 (96,5-100)%
Тканевой материал 100 (92,6-100)% 100 (97.0-100)%
i
® О тносительная чувствительность в сравнении с использованным реф ерентным методом.
^О тносительная специф ичность в сравнении с использованным реф ерентным методом.
стр. 1 1 из 33
--- стр. 15 ---
МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ
Работа должна проводиться в лаборатории, выполняющей
молекулярно-биологические (ПЦР) исследования
биологического материала на наличие возбудителей
инфекционных болезней, с соблюдением СанПиН 3.3686-21
«Санитарно-эпидемиологические требования по профилактике
инфекционных болезней», СанПиН 2.1.3684-21 «Санитарно-
эпидемиологические требования к содержанию территорий
городских и сельских поселений, к водным объектам, питьевой
воде и питьевому водоснабжению, атмосферному воздуху,
почвам, жилым помещениям, эксплуатации производственных,
общественных помещений, организации и проведению
санитарно-противоэпидемических (профилактических)
мероприятий» и МУ 1.3.2569-09 «Организация работы
лабораторий, использующих методы амплификации
нуклеиновых кислот при работе с материалом, содержащим
микроорганизмы I-IV групп патогенности».
Набор реагентов предназначен для одноразового применения
для проведения ПЦР-исследования указанного количества проб
(см. раздел «Формы комплектации»).
Набор реагентов готов к применению согласно данной
инструкции. Применять набор реагентов строго по назначению.
При работе необходимо всегда выполнять следующие
требования:
- Температура в помещении лаборатории от 20 до 28 °С,
относительная влажность от 15 до 75%.
- Допускать к работе с набором реагентов только персонал,
обученный методам молекулярной диагностики и правилам
работы в клинико-диагностической лаборатории в
установленном порядке.
- Не использовать набор реагентов, если нарушена
внутренняя упаковка или внешний вид реагента не
соответствует описанию.
- Не использовать набор реагентов, если не соблюдались
условия транспортирования и хранения согласно инструкции.
- Не использовать набор реагентов по истечении срока
годности.
- Использовать одноразовые неопудренные перчатки,
лабораторные халаты, защищать глаза во время работы с
стр. 12 из 33
--- стр. 27 ---
Вид
исследуемого
материала
Вид
потенциальног
о
интерферента
Потенциальный
интерферент
П ротести ро ва н н а
я концентрация в
образце
Наличие
интерференци
и
Муцин (слизь) до 3% Не обнаружено
Экзогенные
вещества
«Энтерофурил»,
суспензия для
приема внутрь
до 4,25 мг/мл Не обнаружено
«Энтеросгель»,
паста для приема
внутрь
до 174,75 мг/мл Не обнаружено
Декстрин (Россия) до 68,6 мг/мл Не обнаружено
Спинномозговая
жидкость (СМЖ)
Эндогенные
вещества Цельная кровь до 4 % Не обнаружено
Экзогенные
вещества
«Цефтриаксон»,
порошок для
приготовления
раствора для
внутривенного и
внутримышечного
введения
до 8 мг/мл Не обнаружено
Йод, раствор для
наружного
применения
спиртовой 5%
до 0,03% Не обнаружено
Мазки из
респираторного
тракта
Эндогенные
вещества
Цельная кровь до 4% Не обнаружено
Муцин (слизь) до 5% Не обнаружено
Экзогенные
вещества
Мирамистин до 5% Не обнаружено
Люголя раствор с
глицерином до 1% Не обнаружено
Мокрота
Эндогенные
вещества
Цельная кровь до 4% Не обнаружено
Муцин (слизь) до 5% Не обнаружено
Экзогенные
вещества Флюдитек, сироп до 10 мг/мл Не обнаружено
Тканевой
материал
Эндогенные
вещества Цельная кровь до 40% Не обнаружено
Экзогенные
вещества
Формалин 10%-
ный нейтральный до 10% Не обнаружено
Дексаметазон,
раствор для
инъекций
До 0,32 мг/мл Не обнаружено
ПРОВЕДЕНИЕ ПЦР-ИССЛЕДОВАНИЯ
ПЦР-исследование состоит из следующих этапов:
- экстракция РНК из исследуемых образцов,
- обратная транскрипция РНК,
- амплификация кДНК с гибридизационно-флуоресцентной
детекцией в режиме «реального времени»,
- анализ и интерпретация результатов.
ЭКСТРАКЦИЯ РНК ИЗ ИССЛЕДУЕМЫХ ОБРАЗЦОВ
ВНИМАНИЕ! При работе с РНК необходимо использовать
стр. 24 ИЗ 33
--- стр. 28 ---
f j
только одноразовые пластиковые расходные материалы,
имеющие специальную маркировку RNase-free, DNase-free.
Для экстракции РНК используется комплект реагентов
«РИБО-преп». Порядок работы с комплектом реагентов «РИБО-
преп» смотрите в инструкции к комплекту для экстракции.
Объемы реагентов и образцов при экстракции с помощью
комплекта реагентов «РИБО-преп»:
Экстракция РНК из каждого исследуемого образца проводится
в присутствии внутреннего контрольного образца - BKO-FL.
Объем BKO-FL - 10 мкл в каждую пробирку.
Объем исследуемого образца - 100 мкл.
В пробирку отрицательного контроля экстракции (ОК) внести
100 мкл ОКО.
Объем элюции - 50 мкл.
ВНИМАНИЕ! Реакцию ОТ рекомендуется проводить сразу после
получения проб РНК. Допускается хранение проб РНК при
температуре от 2 до 8 °С не более 30 мин, при температуре от
минус 24 до минус 16 °С - не более недели и при температуре
не выше минус 68 °С - до года. Допускается однократное
замораживание-оттаивание проб РНК.
ОБРАТНАЯ ТРАНСКРИПЦИЯ
ВНИМАНИЕ! При работе с РНК необходимо использовать только
одноразовые пластиковые расходные материалы, имеющие
специальную маркировку RNase-free, DNase-free.
Для обратной транскрипции используется комплект реагентов
«РЕВЕРТА-L». Порядок работы с комплектом реагентов
«РЕВЕРТА-L» смотрите в инструкции к комплекту реагентов.
стр. 25 ИЗ 33
--- стр. 29 ---
ФОРМА 1 («ПЦР-комплект» вариант FRT-50-0,2)
СОСТАВ
«ПЦР-комплект» вариант FRT-50-0,2 - комплект реагентов для
амплификации участков кДНК Enterovirus и кДНК Parechovirus с
гибридизационно-флуоресцентной детекцией в режиме
ФОРМА 1 ______________________________________________________________________
J
i l t
Реагент Описание О бъем, мл Количество
ПЦР-смесь-FL E n te ro viru s /
Parechovirus
Прозрачная жидкость от
бесцветного до светло-
лилового цвета
0,01
55 пробирок
объемом
0,2 мл
ПЦР-буфер-К Прозрачная жидкость
красного цвета 1.1 1 пробирка
К+ E nte roviru s /
Parechovirus
Прозрачная
бесцветная жидкость 0,2 1 пробирка
К - Прозрачная бесцветная
жидкость 0.2 1 пробирка
BKO-FL Прозрачная бесцветная
жидкость 0,5 1 пробирка
ОКО Прозрачная
бесцветная жидкость .1.2 1 пробирка
Эксплуатационная документация в составе: инструкция ло
применению, паспорт качества набора реагентов, вкладыш к
набору реагентов, краткое руководство к набору реагентов - на
бумажном носителе или на сайте Изготовителя
(www.amplisens.ru ).
АМПЛИФИКАЦИЯ С ДЕТЕКЦИЕЙ В РЕЖИМЕ «РЕАЛЬНОГО
ВРЕМЕНИ»
Для внесения в пробирки реагентов, проб кДНК и
контрольных образцов используются одноразовые
наконечники с фильтрами.
А. Подготовка проб для амплификации
Общий объем реакционной смеси - 30 мкл, включая объем
пробы кДНК - 10 мкл.
1. Отобрать необходимое количество лробирок с ПЦР-смесью-
FL E nterovirus / Parechovirus для амплификации кДНК
исследуемых и контрольных образцов (количество
контрольных образцов см. в лункте 4). Убедиться, что воск
полностью покрывает раствор на дне пробирок. Если это не
так, не ислользовать данные пробирки.
2. На поверхность воска внести по 10 мкл ПЦР-буфера-К, при
этом он не должен проваливаться под воск и смешиваться с
стр. 26 из 33
--- стр. 32 ---
ФОРМА 1
Таблица 9
Значение порогового цикла по каналу для флуорофора (Cf) РезультатFAM JOE ROX
опоелелено
меньше граничного
отсутствует или
определено больше
граничного
отсутствует или
определено больше
граничного
РНК Enterovirus
/ Parechovirus
НЕ обнаружена
больше или меньше
граничного
опоеделено
меньше граничного
больше или меньше
граничного
РНК Enterovirus
обнаружена
больше или меньше
граничного
больше или меньше
граничного
опоеделено
меньше граничного
РНК
Parechovirus
обнаружена
отсутствует или
определено больше
граничного
отсутствует или
определено больше
граничного
отсутствует или
определено больше
граничного
Невалидный*
* В случае получения невалидного результата необходимо
провести повторное ПЦР-исследование соответствующего
исследуемого образца, начиная с этапа экстракции РНК.
ВНИМАНИЕ! Граничные значения Ct указаны во вкладыше,
прилагаемом к набору реагентов или расположенном на сайте
Изготовителя ( www.amplisens.ru ).
Результат ПЦР-исследования считается достоверным,
если получены правильные результаты для контролей
этапов экстракции и ПЦР в соответствии с табл. 10 и
вкладышем.
Таблица 10
Результаты для контролей различных этапов ПЦР-
исследования
Конт Контролируемы
й этап ПЦР-
Значение порогового ци 1сла по каналу для
флуорофора (Ct)
роль исследования FAM JOE ROX
ОК Экстракция РНК
опоеделено
меньше
граничного
отсутствует или
определено
больше
граничного
отсутствует или
определено
больше
граничного
отсутствует или отсутствует или отсутствует или
К - ПЦР определено
больше
определено
больше
определено
больше
граничного граничного граничного
опоеделено опоеделено опоеделено
К+ ПЦР меньше меньше меньше
граничного граничного граничного
стр. 29 ИЗ 33
--- стр. 33 ---
ФОРМА 1
Возможные ошибки:
1. Для положительного контроля ПЦР (К+) значение порогового
цикла (Cf) по любому из указанных каналов для
флуорофоров (см. табл. ,10) отсутствует или превышает
граничное значение. Необходимо повторить амплификацию
и детекцию для всех образцов, в которых не обнаружена
специфическая РНК.
2. Для отрицательного контроля экстракции (ОК) по каналам
для флуорофоров JOE и/или КОХ определено значение
порогового цикла (Cf) меньше граничного. Вероятна
контаминация лаборатории продуктами амплификации или
контаминация реагентов, исследуемых образцов на каком-
либо этапе ПЦР-исследования. Необходимо предпринять
меры по выявлению и ликвидации источника контаминации и
повторить ПЦР-исследование для всех образцов, в которых
обнаружена специфическая РНК, начиная с этапа экстракции
РНК.
3. Для отрицательного контроля ПЦР (К-) по любому из
указанных каналов для флуорофоров (см. табл. 10)
определено значение порогового цикла (Cf) меньше
граничного. Вероятна контаминация лаборатории
продуктами амплификации или контаминация реагентов,
исследуемых образцов на каком-либо этапе ПЦР-
исследования. Необходимо предпринять меры по выявлению
и ликвидации источника контаминации и повторить
амплификацию и детекцию для всех образцов, в которых
обнаружена специфическая РНК.
4. Для исследуемого образца определено значение порогового
цикла (Cf), при этом на графике флуоресценции отсутствует
участок характерного экспоненциального лодъема (график
представляет собой приблизительно прямую линию).
Необходимо проверить правильность выбранного уровня
пороговой линии или параметров расчета базовой линии.
Если результат получен при правильном уровне пороговой
линии (базовой линии), требуется повторно провести
амплификацию и детекцию для этого образца.
стр. 30 из 33
--- стр. 34 ---
t c
СРОК ГОДНОСТИ. УСЛОВИЯ ТРАНСПОРТИРОВАНИЯ и
ХРАНЕНИЯ
Срок годности. 12 мес. Набор реагентов с истекшим сроком
годности применению не подлежит. Срок годности вскрытых
реагентов соответствует сроку годности, указанному на
этикетках для невскрытых реагентов, если в инструкции не
указано иное.
Транспортирование. Набор реагентов транспортировать при
температуре от 2 до 8 °С не более 5 сут в термоконтейнерах,
содержащих хладоэлементы, всеми видами крытых
транспортных средств.
Хранение.
Форма 1. «ПЦР-комплект» вариант FRT-50-0,2 хранить в
холодильной камере при температуре от 2 до 8 °С, кроме ПЦР-
буфера-К. ПЦР-буфер-К хранить в морозильной камере при
температуре от минус 24 до минус 16 °С. ПЦР-смесь-FL
Enterovirus/ Parechovirus хранить в защищенном от света месте.
Допускается хранение «ПЦР-комплекта» вариант FRT-50-0,2 без
разукомплектации при температуре от 2 до 8 °С в течение
3 месяцев от даты изготовления до вскрытия. После вскрытия
«ПЦР-комплект» вариант FRT-50-0,2 разукомплектовать в
соответствии с температурами хранения каждого компонента.
Холодильные и морозильные камеры должны обеспечивать
регламентированный температурный режим.
ГАРАНТИЙНЫЕ ОБЯЗАТЕЛЬСТВА ИЗГОТОВИТЕЛЯ
Изготовитель гарантирует соответствие основных
параметров и характеристик набора реагентов требованиям,
указанным в технической и эксплуатационной документации, в
течение указанного срока годности при соблюдении всех
условий транспортирования, хранения и применения.
Медицинское изделие техническому обслуживанию и ремонту
не подлежит.
Рекламации на качество набора реагентов направлять по
адресу 111123, г. Москва, ул. Н1овогиреевская, дом ЗА, e-mail;
obtk@pcr.ru®.
При выявлении побочных действий, не указанных в
® Отзывы и предложения о продукции «АмплиСенс» вы можете оставить, заполнив анкету
потребителя на сайте: www.amDlisens.ru .
стр. 31 из 33
--- стр. 35 ---
инструкции по применению набора реагентов, нежелательных
реакций при его использовании, фактов и обстоятельств,
создающих угрозу жизни и здоровью граждан и медицинских
работников при применении набора реагентов, рекомендуется
направить сообщение по адресу, указанному выше, и в
уполномоченную государственную регулирующую организацию
(в РФ - Федеральная служба по надзору в сфере
здравоохранения) в соответствии с действующим
законодательством.
Директор
ГБУЗ МО МОНИКИ
им. М.Ф. Владимирского
К.Э. Соболев
стр. 32 из 33