Набор реагентов для амплификации STR маркеров, расположенных на хромосомах 13, 18, 21, X и Y, методом полимеразной цепной реакции для фрагментного анализа с целью пренатальной и постнатальной диагностики хромосомных аномалий плода (QF-PCR Анеу) по ТУ 21.20.23-113-46482062-2021 — инструкция и характеристики
Открытые закупки, где изделие проходит ТЗ
Сейчас открытых закупок, где изделие полностью проходит ТЗ, нет; список обновляется каждый день.
Построчная сверка ТЗ с характеристиками этого изделия и все закупки под ваши товары — в кабинете, 7 дней бесплатно.
Попробовать бесплатно
Текст инструкции: технические характеристики
--- стр. 1 ---
МАКЕТ ПАСПОРТА!!!
Л7ДНКТЕХН0Л0П1Я ООО «ДНК-Технология ТС»
Паспорт качества № ХХХХХХ
Набор реагентов для амплификации STR маркеров, расположенных нг
хромосомах 13,18,21, X и Y, методом полимеразной цепной реакции
для фрагментного анализа с целью пренатальной и постнатальной
диагностики хромосомных аномалий плода
(QF-PCR Анеу)
Фасовка:
Серия:
Дата изготовления:
Годен до:
Комплектация №1
N
ХХХХХ-2М
хххх-хх-хххххх-хх-хх'
Результат контроля
1. Проверка комплектности, упаковки и маркировки - соответствует
требованиям ТУ 21.20.23-113-46482062-2021.
К о м п он е нт Количество Х я р а к те р н с ти к я
и норме
У с л о в и я
хранения после
в ск р ьггня
у п а к о в к и
Р е зульта т
Смесь для
амплн<Ьнкаиии OFI3 I пробирка Прозрачная бесцветная
жидкость от2°С до8“С Соответствует
Смесь для
ампли(Ьнкв1ШИ OFI8 I пробирка Прозрачная бесцветная
жидкость от 2 °С до 8 “С Соответствует
Смесь для
амплнФихаиии OF21 1 пробирка Прозрачная бесцветная
жндкость от2°С до8“С Соответствует
Смесь для
амплификации OFXY 1 пробирка Прозрачная бесцветная
жндкость отЗ^Сдов-С Соответствует
Полимераза T exH oT aq
МАХ 1 пробирка Прозрачная бссцвешая
вязкая жидкость
от минус 18“С
до М ИНУС 22°С Соответствует
3. Проверка функциональных показателей
Наименование
показателя Характеристика и норма Результат
Предел обнаружения:
Для лабораторных контрольных образцов -
Зафиксировано наличие продуктов амплификации в
соответствующих дорожках геля в диапазоне длин
100-470 л.н. пои пооведении гель-элекпхкЬооеза
Соответствует
Специфичность
Для лабораторных контрольных образцов -
Зафиксировано наличие продуктов амплификации в
соответствующих дорожках геля в диапазоне длин
100-470 п.н. при проведении гель-элекзрофореза
Для отрицательного контрольного образца -
Зафиксировано отсутствие продуктов амплификации в
соответствующих дорожках i ejsa в диапазоне длин
100-470 п.н. пои пооведении гель-электоойюоеаа
Соответствует
ч
Условиятранепортиромния: '
TpaHCiiopinposaHHe набора реагентов осуществляют в термоконтейнерам с хладоэлемептаан всеми
видами крытого транспорта при температуре, соответствующей усло« 0В|| йвмЬонентов
набора, входящих в состав набора. I ^ i
Допускается транспортирование в термоконтейнерах с хладоэлемеитами всеми в|;вш)н крытого
транспорта при температуре от 2°С до 25°С внутри контейнера не бооее 5,оугок. л
\ : ■ ■ ♦ ;
До вскрытия упаковки набор реагентов следует хранить в морозильной камере 1ЦП< температуре
от минус 18 °С до минус 22 °С в течение всею срока годности.
З а к лю ч е ни е О Т К : соответствует требованиям ТУ 21.20.23-113-46482062-202I
Дата выдачи паспорта: ХХХХ-ХХ-ХХ
•Срок годности в соответствии с требованиями Т
--- стр. 2 ---
1ЕХИ0Л0П1Я ООО «ДНК-Технология ТС»
* МАКЕТ ПАСПОРТА!!!
Паспорт качества № ХХХХХХ
^ Набор реагентов для амплификации STR маркеров, расположенных на
хромосомах 13,18, 21, X и Y, методом полимеразной цепной реакции
для фрагментного анализа с целью пренатальной и постнатальной
диагностики хромосомных аномалий плода
{QF-PCR Анеу)
Фасовка:
Серия:
Дата изготовления:
Годен до:
Комплектация №2
N
ХХХХХ-2М
хххх-хх-хххххх-хх-хх’
Результат контроля
1. Проверка комплектности, упаковки и маркировки - соответствует
требованиям ТУ 21.20.23-113-46482062-2021.
Компоиевт Количество X*pticT«piicniKa
и н о р м а
У с л о в н а
а р а и е н и н после
в с к р ы т н в
у п а к о в к и
Ретультат
Смесь для
амплибикяиии OFI3 1 пробирка Прозрачная бесивстнал
жидкость от 2 “С до 8 °С Соответствует
Смесь для
амплиДикаиии OFI8 1 пробирка Прозрачная бесивешая
жиикость от 2 °С до 8 °С Соответствует
Смесь для
а м ш1И|Ънка 11н н OF21 1 пробирка Прозрачная бесиаетная
жидкость от 2 °С до 8 “С Соответствует
Смесь для
амплификации
OFXY
I пробирка Прозрачная бесивсгнах
жидкость от2*Сдо8°С Соответствует
Полимерам
ТехиоТаа МАХ I пробирка Прозрачная бесцветная
вязкая жидкость
от минус 18°С
до МИНУС 22°С Соответствует
Положительный
контоольный обоаэеп 1 пробирка Прозрачная бесцветная
жидкость от2“Сдо8°С Соответствует
3, Проверка функциональных показателей
Наименование
иоквзвтеля Характеристика и норна Результат
Предел обкаруже1П1я:
Для лабораторных ковтрольных образцов -
Зафиксировано наличие продуктов амплификации в
соответствующих дорожках геля в диапазоне длин
100-470 п.н. пои пооведении гель-алекгооДооем
Соответствует
Специфичность
Для лабораторных хотпрольиых обрашов -
Зафиксировано наличие продуктов амплификации в
соответствующих дорожках геля в диаиаюне длин
100-470 п.н. при проведении гель-элекгрофореза
Для отрицательного контрольного образца ~
Зафиксировано отсутствие продуктов амнлификашш в
соответствующих дорожках геля в диапазоне длин
100-470 п.н. тон пооведении гель-злекгоо<Ьооем
Соответствует
Условвя травсоортиромиио:
Транспортирование набора реатггоа осуществляют в термоконтейнерах с хладоэленеятакн асемн
видами крытою транспорта при температуре, соответствующей услоцрвм'lfSi%§iuiftMaoHeHit>B
набооа. входящих в состав иабооа. . . I 3набора, входящих в состав набора. <
Допускается транспортирование в гсриоконтсйнерах с хладоэлеицпами всеми вмйаш ' крытого
транспорта при температуре от 2“С до 25°С внутри контейнера не бовее 5 Суток. V y . '
* V
До вскрытия упаковки набор peareinOB следует хранить в моротилыюЯ камере Bph температуре
от минус 18 *С до минус 22 °С в течение всего срока годности.
ЗаключевнеОТК: соответствует требованиям ТУ 21.20
Дата выдачи паспорта: ХХХХ-ХХ-ХХ
*Срок годности в соответствии с требован!
--- стр. 3 ---
Прошито, пронумеровано и
скреплено печатью ^
( __) листа(ов)
--- стр. 6 ---
^ ^ ДНК-ТЕХНОЛОГИЯ
f
Инструкция по применению Лист 3
QF-PCR Анеу Листов 25
1 ПРЕДНАЗНАЧЕННОЕ ПРИМЕНЕНИЕ
1.1 Полное наименование: Набор реагентов для амплификации STR маркеров,
расположенных на хромосомах 13, 18, 21, X и Y, методом полимеразной цепной
реакции для фрагментного анализа с целью пренатальной и постнатальной
диагностики хромосомных аномалий плода (QF-PCR Анеу), далее по тексту - набор
реагентов.
1.2 Назначение; набор реагентов предназначен для пренатальной диагностики в
биологическом материале человека (эпителиальные клетки амниотической жидкости,
биоптаты ворсин хориона) и постнатальной диагностики в биологическом материале
человека (цельная кровь, секционный материал) хромосомных аномалий - трисомий
по аутосомам 13, 18, 21 и анеуплоидий по половым хромосомам X и Y методом
полимеразной цепной реакции с последующим проведением фрагментного анализа
продуктов амплификации с использованием генетических анализаторов.
1.3 Функциональное назначение: диагностика in vitro.
1.4 Показания к проведению анализа; определение хромосомных нарушений,
связанных с наиболее частыми синдромами (Дауна, Патау, Эдвардса, Кляйнфельтера,
трисомии по Х-хромосоме) для пренатальной и постнатальной диагностики.
Противопоказаний к применению нет.
1.5 Демографические и популяционные аспекты: применение медицинского изделия
не зависит от популяционных и демографических аспектов.
1.6 Область применения: набор реагентов может быть использован в клинико-
диагностических лабораториях медицинских учреждений.
1.7 Потенциальные пользователи: квалифицированный персонал, обученный методам
молекулярной диагностики и правилам работы в клинико-диагностической
лаборатории.
1.8 Применять набор реагентов строго по назначению согласно данной инструкции по
применению.
--- стр. 7 ---
^ ДНКТЕХНОЛОГИЯ Инструкция по применению Лист 4
QF-PCR Анеу Листов 25
2 ХАРАКТЕРИСТИКА НАБОРА РЕАГЕНТОВ
2.1 Состав набора реагентов
Набор реагентов выпускается в фасовке для ручного дозирования (маркируется
фасовка N), в следующих вариантах комплектации:
[ОЕ S1-H515-N0/2, Комплектация № 1
Наименование компонентов Внешний вид Количество
пробирок
Номинальный
объём
компонента
Смесь для амплификации QF13 Прозрачная бесцветная
жидкость 1 пробирка 500 мкл
Смесь для амплификации QF18 Прозрачная бесцветная
жидкость I пробирка 500 мкл
Смесь для амплификации QF21 Прозрачная бесцветная
жидкость 1 пробирка 500 мкл
Смесь для амплификации QFXY Прозрачная бесцветная
жидкость 1 пробирка 500 мкл
Полимераза TexHoTaq МАХ Прозрачная бесцветная вязкая
жидкость 1 пробирка 50 мкл
S1-H516-N0/2, Комплектация № 2
Наименование компонентов Внешний вид Количество
пробирок
Номинальный
объём
компонента
Смесь для амплификации QF13 Прозрачная бесцветная
жидкость 1 пробирка 500 мкл
Смесь для амплификации QF18 Прозрачная бесцветная
жидкость 1 пробирка 500 мкл
Смесь для амплификации QF21 Прозрачная бесцветная
жидкость 1 пробирка 500 мкл
Смесь для амплификации QFXY Прозрачная бесцветная
жидкость 1 пробирка 500 мкл
Полимераза TexHoTaq МАХ Прозрачная бесцветная вязкая
жидкость 1 пробирка 50 мкл
Положительный контрольный
образец
Прозрачная бесцветная
жидкость 1 пробирка 75 мкл
Все компоненты набора реагентов готовы к применению и не требуют
дополнительной подготовки к работе.
2.2 Количество анализируемых образцов
Набор реагентов предназначен для однократного применения и рассчитан на
50 определений (включая отрицательные и положительные контрольные образцы).
2.3 Принцип метода
Метод: полимеразная цепная реакция (ПЦР); фрагментный анализ; качественный
анализ.
--- стр. 8 ---
^ ^ ДНКТЕХНОЛОГИЯ Инструкция по применению Лист 5
QF-PCR Анеу Листов 25
Принцип метода метод основан на амплификации, детекции и анализе коротких
тандемных повторов ДНК, специфичных для каждой хромосомы (STR-маркеров). На каждой
хромосоме анализируется по 5 STR-маркеров. Для ПЦР-амплификации используются
флуоресцентно-меченные специфические праймеры для отдельных маркеров, по количеству
и соотношению высоты пиков, выдаваемых оборудованием для фрагментного анализа,
производится оценка числа копий хромосомы.
Использование мультиплексирования праймеров позволяет сократить количество
пробирок, поскольку появляется возможность амплификации до 5 участков ДНК в одной
пробирке.
Исследование с применением набора реагентов QF-PCR Анеу состоит из следующих
этапов: выделение ДНК, получение продуктов амплификации, проведение фрагментного
анализа продуктов амплификации.
В таблице 1 приведены выявляемые маркеры и каналы детекции продуктов
амплификации при проведении фрагментного анализа.
Таблица 1 -Выявляемые маркеры, каналы детекции продуктов амплификации
Смесь для амплификации Выявляемый маркер, канал детекции
Fam' Нех^
D13S317 D13S631
QF13
D13S628 D13S742
D13S305
D18S391 D18S978
QF18
D18S51 D18S499
G10321
D21S435 D21S437
QF21
D21S446 D21S11
D21S411
AMXY Х7132
QFXY
Х8378 XHPRTB
Х7423
Примечание * соответствует каналу детекции Blue генетического анализатора Applied Biosystems 3500;
соответствует каналу детекции Green генетического анализатора Applied Biosystems 3500
2.4 Время проведения анализа (включая пробоподготовку, без учета проведения
фрагментного анализа): от 2,5 часов.
--- стр. 9 ---
^ ДНК ТЕХНОЛОГИЯ Инструкция по применению Лист 6
QF-PCR Анеу Листов 25
3 АНАЛИТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ НАБОРА РЕАГЕНТОВ
3.1 Предел обнаружения
Предел обнаружения - 20 нг ДНК человека на амплификационную пробирку, что
соответствует концентрации ДНК 20 нг/мкл. При использовании меньшего количества ДНК
производитель не гарантирует корректную работу набора реагентов.
3.2 Специфичность
Праймеры для ПЦР подобраны с учетом проведения амплификации 5-ти STR-локусов
каждой хромосомы в одной пробирке. Длина продуктов амплификации находится в диапазоне
от 110 до 450 пар нуклеотидов.
Оценка аналитической специфичности (перекрестной реактивности) in silico
показала, что выбранные для выявления STR-локусов олигонуклеотиды (праймеры
и флуоресцентно-меченые зонды) гомологичны соответствующим участкам ДНК человека,
при этом значимая для ПЦР гомология с последовательностями ДНК других STR-локусов
не обнаружена.
При оценке видовой специфичности проведенной in silico биоинформатическими
методами и in vitro показано отсутствие неспецифических положительных результатов при
наличии в образце нуклеиновых кислот Chlamydia pneumoniae^ Candida albicans^ Gardnerella
vaginalis. Mycoplasma hominis. Neisseria gonorrhoeae. Staphylococcus aureus, Epstein Barr
virus (EBV), Cytomegalovirus (CMV), Hepacivims C (HCV), Hepacivirus В (HBV) в
концентрации до 10^ копий/мл образца.
После проведения фрагментного анализа оценивается количество пиков,
соответствующих продуктам амплификации, для каждого маркера и соотношение пиков по
высоте, в случае детекции двух аллелей по конкретному маркеру. Анализ количества и
соотношений высот пиков позволяет определить наличие или отсутствие трисомий по
аутосомам 13, 18,21 и анеуплоидий по половым хромосомам X и Y.
--- стр. 10 ---
^^^ДНКТЕХНОЛОГИЯ Инструкция по применению Лист?
QF-PCR Анеу Листов 25
3.3 Интерферирующие вещества
Максимальные концентрации интерферирующих веществ, при которых не
наблюдалось ингибирование ПЦР, представлены в таблице ниже.
Вид биоматериала Интерферирующее
вещество
Исследованная концентрация
в образце
Эндогенные вещества
Кровь, биоптаты, секционный материал Билирубин 684 мкмоль/л
Кровь, биоптаты, секционный материал Холестерин 13 ммоль/л
Кровь, биоптаты, секционный материал Триглицериды 37 ммоль/л
Экзогенные вещества
Кровь ЭДТА до 2,0 мг/мл‘
Кровь, эпителиальные клетки амниотической
жидкости, биоптаты, секционный материал Изопропиловый спирт 10%
Кровь, эпителиальные клетки амниотической
жидкости, биоптаты, секционный материал Метилацетат 10%
‘Согласно ГОСТ Р 53079.4-2008 (Технологии лабораторные клинические. Обеспечение качества клинических
лабораторных исследований. Часть 4. Правила ведения преаналитического этапа) калия ЭДТА используют в
концентрации от 1,2 до 2,0 мг/мл.
3.4 Диагностические характеристики
Диагностические характеристики набора реагентов «QF-PCR Анеу» рассчитаны как
доля правильно определенных анеуплоидий по каждой хромосоме (трисомий по 13, 18, 21
хромосомам и анеуплоидий по половым хромосомам) среди всех исследованных образцов.
Диагностическая
чувствительность (%)
Диагностическая
специфичность (%)
Трисомия по 13 хромосоме 100% (85,18-100) 100% (96,27-100)
Трисомия по 18 хромосоме 100% (86,77-100) 100% (96,15-100)
Трисомия по 21 хромосоме 100% (90,51-100) 100% (95,65-100)
Анеуплоидии по половым
хромосомам X и Y 100% (85,75-100) 100% (96,23-100)
II
В ходе клинических испытаний было исследовано 120 образцов биоматериала, среди
которых было исследовано образцов: с триплоидией - 18 пгг.; с трисомией по 13 хромосоме -
5 шт., с трисомией по 18 хромосоме - 8 шт., с трисомией по 21 хромосоме - 19 шт.,
с анеуплоидиями по половым хромосомам — 6 шт.
3.5 Внутрисерийная и межсерийная воспроизводимость
Внутрисерийная воспроизводимость составляет 100% (95% доверительный интервал
88.43- 100%).
Межсерийная воспроизводимость составляет 100% (95% доверительный интервал
88.43- 100%).
--- стр. 11 ---
^ ^ ДНКТЕХНОЛОГИЯ Инструкция по применению Лист 8
QF-PCR Анеу Листов 25
МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ
( I
и
организация работы ПЦР-лаборатории, оборудование и материалы должны
соответствовать требованиям ГОСТ Р 52905-2007, методических указаний МУ 1.3.2569-09
«Организация работы лабораторий, использующих методы амплификации нуклеиновых
кислот, при работе с материалом, содержащим микроорганизмы I-IV групп патогенности»,
с соблюдением санитарно-эпидемиологических правил и норм СанПиН 3.3686-21
«Санитарно-эпидемиологические требования по профилактике инфекционных болезней».
Исследуемые образцы рассматриваются как потенциально-опасные. При работе с
набором реагентов следует надевать одноразовые перчатки без талька.
К работе с набором реагентов допускается персонал, обученный методам
молекулярной диагностики и правилам работы в клинико-диагностической лаборатории.
Следует использовать только одноразовые наконечники и пробирки. Не допускается
использование одних и тех же наконечников при обработке различных образцов
биологического материала.
Для предотвращения контаминации этапы выделения ДНК, ПЦР, детекции продуктов
амплификации (фрагментный анализ) следует проводить в раздельных помещениях или
тщательно изолированных зонах, снабженных комплектами полуавтоматических дозаторов,
халатами и прочими принадлежностями.
Запрещается перемещение лабораторного оборудования, в том числе дозаторов,
щтативов, лабораторной посуды, халатов, головных уборов и пр., а также растворов реагентов
из одного помещения в другое.
Дозаторы должны быть соответствующим образом поверены (в аккредитованных
лабораториях) и промаркированы.
Поверхности рабочих столов, а также помещения, в которых проводится ПЦР, следует
обязательно, до и после проведения работ, облучать с помощью бактерицидных установок
в течение 30 минут.
Использованные одноразовые расходные материалы (пробирки, наконечники и др.)
должны сбрасываться в контейнер для медицинских отходов, содержащий дезинфицирующий
раствор (при необходимости).
ВНИМАНИЕ! Утилизировать отходы с продуктами ПЦР необходимо только в закрытом виде.
Не допускается открывать пробирки после амплификации за исключением этапов проведения
фрагментного анализа, которые проводят в зоне 4 (МУ 1.3.2569-09).
Все поверхности в лаборатории (рабочие столы, щтативы, оборудование и др.)
ежедневно подвергают влажной уборке с применением дезинфицирующих/моющих средств,
регламентированных СанПиН 3.3686-21 «Санитарно-эпидемиологические требования по
профилактике инфекционных болезней».
--- стр. 15 ---
^ ^ ДНК-ТЕХНОЛОГИЯ Инструкция по применению Лист 12
QF-PCR Анеу Листов 25
< 1
6 АНАЛИЗИРУЕМЫЕ ОБРАЗЦЫ
6.1 Материалы для исследования
Для исследования используют эпителиальные клетки амниотической жидкости,
цельную кровь, биоптаты (включая секционный материал).
Минимальное количество биоматериала, необходимое для исследования:
• Эпителиальные клетки амниотической жидкости - 100 мкл осадка после
центрифугирования не менее 1,0-2,0 мл амниотической жидкости;
• Кровь - 100 мкл;
• Биоптаты (в т.ч. секционный материал) - 0,05 - 0,15 г.
Ограничение метода - внутривенные инъекции гепарина, инфузии препаратов для
парентерального питания менее чем за 6 часов до исследования; переливание крови и её
компонентов менее чем за 24 часа до исследования.
Взятие, предобработку и хранение материала проводят в соответствии с
инструкциями к комплектам/наборам реагентов для вьщеления ДНК из соответствующего
биологического материала.
6.2 Взятие материала на исследование
ВНИМАНИЕ! Перед выделением ДНК требуется предварительная обработка образцов
биологического материала (п. 6.5).
6.2.1 Амниотическая жидкость
Взятие амниотической жидкости производят в ходе процедуры амниоцентеза,
согласно утвержденному алгоритму проведения. Отбор аликвоты материала проводят в сухой
стерильный контейнер, снабженный герметично завинчивающейся крыщкой, в количестве не
менее 1,0-2,0 мл.
После сбора контейнер плотно закрывают и маркируют.
6.2.2 Биоптаты, секционный материал
Взятие материала осуществляют в одноразовые, плотно завинчивающиеся
стерильные пробирки объёмом 1,5 мл с транспортной средой, предназначенной
производителем для транспортирования и хранения образцов биологического материала для
ПЦР-исследований.
После взятия материала пробирку плотно закрывают крыщкой и маркируют.
6.2.3 Кровь
Взятие цельной периферической крови проводится в вакуумные пластиковые
пробирки типа Vacuette объёмом 9,0 мл с добавленной в качестве антикоагулянта солью
этилендиаминтетраацетата (ЭДТА) в конечной концентрации 2,0 мг/мл.
Для перемешивания крови с антикоагулянтом после взятия материала необходимо
--- стр. 16 ---
^ ДНКТЕХНОЛОГИЯ Инструкция по применению Лист 13
QF-PCR Анеу Листов 25
перевернуть пробирку 2 -3 раза.
ВНИМАНИЕ! Не допускается использование гепарина в качестве антикоагулянта.
6.3 Транспортирование и хранение исследуемых образцов
6.3.1 Амниотическая жидкость
Образцы амниотической жидкости допускается транспортировать и хранить:
- при температуре от 2 °С до 8 °С - не более одних суток;
- при температуре от минус 18 °С до минус 20 °С - не более одной недели;
- при температуре минус 70 °С - длительно.
ВНИМАНИЕ! Допускается лишь однократное замораживание-оттаивание материала.
6.3.2 Биоптаты, секционный материал
Биоптаты допускается транспортировать и хранить:
- при температуре от 2 °С до 8 °С - не более одних суток;
- при температуре от минус 18 °С до минус 20 ®С - не более одной недели;
- при температуре минус 70 °С - длительно.
ВНИМАНИЕ! Допускается лишь однократное замораживание-оттаивание материала.
6.3.3 Кровь
Транспортировать и хранить образцы в вакуумных пластиковых пробирках типа
Vacuette до начала исследования следует при температуре от 2 ®С до 8 не более одних
суток. В случае невозможности доставки материала в лабораторию в течение суток
допускается однократное замораживание материала. Допускается хранение замороженного
материала при температуре минус 20 °С в течение одного месяца.
6.4 Подготовка биологического материала человека для исследования.
ВНИМАНИЕ! Относительное ускорение центрифуги (RCF или g) зависит от частоты
вращения и радиуса центрифугирования. Для определения соответствия центрифуги
заданным параметрам центрифугирования обратитесь к руководству по эксплуатации.
6.4.1 Амниотическая жидкость, кровь
Подготовка образцов крови для исследования проводится согласно инструкции к
используемому комплекту/набору реагентов для выделения ДНК (7.1).
6.4.2 Биоптаты, секционный материал
6.4.2.1 Центрифугируйте пробирку при 16000 х g в течение 10 мин.
6.4.2.2 Удалите надосадочную жидкость, оставив в пробирке объем
(осадок + жидкая фракция), рекомендованный производителем набора (комплекта) реагентов
для выделения ДНК из соответствующего биоматериала.
--- стр. 17 ---
^ ДНК-ТЕХНОЛОГИЯ Инструкция по применению Лист 14
QF-PCR Анеу Листов 25
7 ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА
7.1 Выделение ДНК из биологического материала
Для выделения ДНК рекомендуется использовать набор/комплект реагентов для
выделения ДНК (рекомендуется использовать для цельной крови Набор реагентов для
выделения ДНК ПРОБА-МЧ МАКС, ООО «ДНК-Технология ТС», Россия,
РУ № РЗН 2021/14391; для эпителиальных клеток амниотической жидкости, биоптатов,
секционного материала Комплект реагентов для выделения ДНК по ТУ 9398-037-46482062-
2009 в следующих формах комплектации: ПРОБА-ГС, ПРОБА-ГС-ПЛЮС, ПРОБА-ГС-
ГЕНЕТИКА (форма комплектации ПРОБА-ГС), ООО «НПО ДНК-Технология»,
РУ№ФСР 2010/08696.)).
Выделение ДНК из исследуемого материала проводят в соответствии с инструкцией
к используемому комплекту/набору реагентов.
ВНИМАНИЕ! Одновременно с выделением ДНК из биологического материала необходимо
использовать отрицательный контрольный образец и провести его через все этапы
пробоподготовки. В качестве отрицательного контрольного образца рекомендуется
использовать физиологический раствор или отрицательный контрольный образец, входящий
в состав набора/комплекта реагентов для выделения ДНК, в объёме, указанном в инструкции
к набору/комплекту реагентов.
Примечание - Допускается хранение ДНК при температуре от 2 °С до 8 °С не более 1 месяца или
от минус 18 °С до минус 22 °С не более 6 месяцев.
(I
7.2 Подготовка и проведение ПЦР
ВНИМАНИЕ! При проведении всех последующих действий следует избегать воздействия
прямых солнечных лучей на пробирки со смесью для амплификации!
7.2.1 Встряхните пробирки со смесями для амплификации и положительным контрольным
образцом в течение 3-5 с на микроцентрифуге-вортексе и центрифугируйте в течение
1-3 с на микроцентрифуге-вортексе.
7.2.2 Промаркируйте необходимое количество одноразовых пустых пробирок объёмом
0,2 мл для каждого исследуемого образца, положительного контрольного образца и
отрицательного контрольного образца.
Например: необходимо проанализировать три образца. Нужно промаркировать
12 пробирок для исследуемых образцов, 4 пробирки для «К-» и 4 пробирки для «К+».
Общее количество пробирок - 20 (таблица 2).
--- стр. 18 ---
^ ДНКТЕХНОЛОГМЯ Инструкция по применению Лист 15
QF-PCR Анеу Листов 25
Таблица 2 - Пример маркировки пробирок для проведения ПЦР
Хо образца Х9 амплификационной
пробирки
Наименование вносимой смеси для
амплификации
Образец 1
1-13 OF13
1-18 OF18
1-21 OF21
1-XY OFXY
Образец 2
2-13 OF13
2-18 OF18
2-21 OF21
2-XY OFXY
Образец 3
3-13 OF13
3-18 OF18
3-21 OF21
3-XY OFXY
К-
К-13 OF13
к- 18 OF18
К-21 QF21
К- XY OFXY
К+
К+ 13 OFI3
К+ 18 OF18
К+21 OF21
K+XY OFXY
i
Примечание - Далее в тексте инструкции используется следующее обозначение для
промаркированных пробирок:
Xs образца Хо амплификационной
пробирки для образца А
Наименование вносимой смеси для
амплификации
Образец А
А-13 QF13
А-18 QF18
А-21 QF21
A-XY QFXY
( I
где А - номер исследуемого образца
7.2.3 Встряхните пробирку с полимеразой TexHoTaq МАХ» в течение 3-5 с на
микроцентрифуге-вортексе и центрифугируйте в течение 1-3 с на микроцентрифуге-
вортексе.
Примечание - Полимеразу TexHoTaq МАХ необходимо вынимать из морозильной камеры
непосредственно перед использованием.
7.2.4 Приготовьте смеси полимеразы TexHoTaq МАХ со смесями для амплификации. Для
этого промаркируйте четыре одноразовые пробирки объёмом 0,5 мл «QF13», «QF18»,
«QF21»H«QFXY».
7.2.5 Смешайте в пробирке «QF13»:
1 о X (N+1) мкл смеси для амплификации QF13,
- 0,2 X (N+1) мкл полимеразы TexHoTaq МАХ,
--- стр. 19 ---
^ ^ ДНК-ТЕХНОЛОГМЯ
7.2.6
12.1
12 .%
7.2.9
Инструкция по применению Лист 16
QF-PCR Анеу Листов 25
где N - количество исследуемых образцов с учётом «К-» и «К+».
Смешайте в пробирке «QF18»:
- 10 X (N+1) мкл смеси для амплификации QF18,
- 0,2 X (N+1) мкл полимеразы ТехноТац МАХ,
где N - количество исследуемых образцов с учётом «К-» и «К+».
Смешайте в пробирке «QF21»:
- 10 X (N+1) мкл смеси для амплификации QF21,
- 0,2 X (N+1) мкл полимеразы ТехноТац МАХ,
где N - количество исследуемых образцов с учётом «К-» и «К+».
Смешайте в пробирке «QFXY»:
10 X (N+1) мкл смеси для амплификации QFXY,
- 0,2 X (N+1) мкл полимеразы ТехноТац МАХ,
где N - количество исследуемых образцов с учётом «К-» и «К+».
Закройте крышки пробирок, встряхните пробирки в течение 3-5 с на
микроцентрифуге-вортексе и центрифугируйте в течение 1-3 с на микроцентрифуге-
вортексе.
7.2.1 о Внесите в каждую пробирку «А-13», промаркированную для внесения смеси QF13, по
10 мкл смеси для амплификации QF13 с полимеразой TexHoTaq МАХ.
7.2.11 Внесите в каждую пробирку «А-18», промаркированную для внесения смеси QF18, по
10 мкл смеси для амплификации QF18 с полимеразой TexHoTaq МАХ.
7.2.12 Внесите в каждую пробирку «А-21», промаркированную для внесения смеси QF21 по
10 мкл смеси для амплификации QF21 с полимеразой TexHoTaq МАХ.
7.2.13 Внесите в каждую пробирку «А-XY», промаркированную для внесения смеси QFXY
по 10 мкл смеси для амплификации QFXY с полимеразой TexHoTaq МАХ.
ВНИМАНИЕ! Для предотвращения контаминации следует перед внесением ДНК открывать
крышки только тех пробирок, в которые будет вноситься данный образец, и закрывать их
перед внесением следующего. Закрывайте пробирки плотно. Препараты ДНК и «контрольные
образцы следует вносить наконечниками с фильтром.
7.2.14 Внесите по 1,0 мкл препарата ДНК в соответствующие пробирки для исследуемых
образцов. В пробирки «К-» и «К+» ДНК не вносится.
7.2.15 Внесите по 1,0 мкл отрицательного контрольного образца, прошедшего этап
выделения ДНК, в пробирки, маркированные «К-».
7.2.16 Внесите по 1,0 мкл положительного контрольного образца в пробирки,
маркированные «К+».
--- стр. 23 ---
^«^ДНК-ТЕХНОЛОГМЯ Инструкция по применению Лист 20
QF-PCR Анеу Листов 25
9 ТРАНСПОРТИРОВАНИЕ, ХРАНЕНИЕ и ЭКСПЛУАТАЦИЯ
9.1 Транспортирование
9.1.1 Транспортирование набора реагентов осуществляют в термоконтейнерах с
хладоэлементами всеми видами крытого транспорта при температуре,
соответствующей условиям хранения компонентов, входящих в состав набора
реагентов.
9.1.2 Допускается транспортирование в термоконтейнерах с хладоэлементами всеми
видами крытого транспорта при температуре от 2®С до 25 °С внутри контейнера не
более 5 суток.
9.1.3 Наборы реагентов, транспортированные с нарущением температурного режима,
применению не подлежат.
9.2 Хранение
( 9.2.1 Набор реагентов следует хранить в морозильной камере при температуре от минус
18 °С до минус 22 °С в течение всего срока годности.
9.2.2 Наборы реагентов, хранившиеся с нарущением регламентированного режима,
применению не подлежат.
9.3 Указания по эксплуатации
9.3.1 Набор реагентов должен применяться согласно действующей версии утвержденной
инструкции по применению.
9.3.2 Для получения достоверных результатов необходимо строгое соблюдение
инструкции по применению набора реагентов.
9.3.3 После вскрытия упаковки компоненты набора реагентов следует хранить при
следующих условиях:
0 - компоненты набора реагентов, за исключением полимеразы TexHoTaq МАХ,
следует хранить в холодильнике или холодильной камере при температуре от 2 °С
до 8 °С в течение всего срока годности набора реагентов;
смеси для амплификации QF13, QF18, QF21, QFXY следует хранить в
холодильнике или холодильной камере при температуре от 2 °С до 8 °С в защищенном
от света месте в течение всего срока годности набора реагентов;
полимеразу TexHoTaq МАХ следует хранить в морозильной камере при
температуре от минус 18 ®С до минус 22 °С в течение всего срока годности набора
реагентов.
9.3.4 Наборы реагентов с истекшим сроком годности применению не подлежат.
--- стр. 24 ---
^>^ДНКТЕХНОЛОГИЯ Инструкция по применению Лист 21
QF-PCR Анеу Листов 25
1 о УКАЗАНИЯ ПО УТИЛИЗАЦИИ
ЮЛ При использовании набора реагентов в клинико-диагностической лаборатории
образуются отходы класса В, которые утилизируются в соответствии с требованиями
СанПиН 2Л .3684-21 и МУ 1.3.2569-09.
10.2 Наборы реагентов, пришедшие в непригодность, в том числе в связи с
истечением срока годности, повреждением упаковки подлежат утилизации в соответствии с
требованиями СанПиН 2.1.3684-21.
11 ГАРАНТИИ ИЗГОТОВИТЕЛЯ
11.1 Предприятие-изготовитель гарантирует соответствие набора реагентов
требованиям технических условий при соблюдении условий транспортирования, хранения и
эксплуатации, установленных техническими условиями.
11.2 Срок годности набора реагентов и контрольных образцов к набору - 12 месяцев
при соблюдении всех условий транспортирования, хранения и эксплуатации.
12 РЕМОНТ И ТЕХНИЧЕСКОЕ ОБСЛУЖИВАНИЕ
Набор реагентов предназначен для однократного использования и не подлежит
техническому обслуживанию и текущему ремонту.
13 СИМВОЛЫ, ИСПОЛЬЗУЕМЫЕ ПРИ МАРКИРОВКЕ НАБОРА РЕАГЕНТОВ
| ivd | Медицинское изделие для
диагностики in vitro □S Обратитесь к инструкции
по применению
Температурный диапазон и Каталожный номер
V Количество тестов d Адрес изготовителя
Г оден до Нестерильно
ш Номер серии Не допускается воздействие
солнечного светаd Дата изготовления
--- стр. 25 ---
^ ^ ДНК-ТЕХНОЛОГМЯ Инструкция по применению Лист 22
QF-PCR Анеу Листов 25
14 ПЕРЕЧЕНЬ ПРИМЕНЯЕМЫХ НАЦИОНАЛЬНЫХ СТАНДАРТОВ
ГОСТ 2.105-2019 Единая система конструкторской документации (ЕСКД). Общие требования
к текстовым документам.
ГОСТ ISO 14971 -2011 Изделия медицинские. Применение менеджмента риска к медицинским
изделиям.
ГОСТ Р 15.013-2016 Система разработки и постановки продукции на производство (СРПП).
Медицинские изделия.
ГОСТ 15.309-98 Система разработки и постановки продукции на производство. Испытания и
приёмка выпускаемой продукции. Основные положения.
ГОСТ Р 51088-2013 Медицинские изделия для диагностики ин витро. Реагенты, наборы
реагентов, тест-системы, контрольные материалы, питательные среды. Требования к изделиям
и поддерживающей документации.
ГОСТ Р 51352-2013 Медицинские изделия для диагностики ин витро. Методы испытаний.
ГОСТ Р ИСО 18113-1-2015 Медицинские изделия для диагностики in vitro. Информация,
предоставляемая изготовителем (маркировка). Часть 1. Термины, определения и общие
требования.
ГОСТ Р ИСО 18113-2-2015 Медицинские изделия для диагностики in vitro. Информация,
предоставляемая изготовителем (маркировка). Часть 2. Реагенты для диагностики in vitro для
профессионального применения.
ГОСТ Р ИСО 23640-2015 Изделия медицинские для диагностики in vitro. Оценка
стабильности реагентов для диагностики in vitro.
ГОСТ Р ИСО 15223-1-2020. Изделия медицинские. Символы, применяемые при
маркировании медицинских изделий, на этикетках и в сопроводительной документации.
Часть 1. Основные требования.
ГОСТ Р 52905-2007 (ИСО 15190:2003) Лаборатории медицинские. Требования безопасности.
Примечание:
Указанные выше стандарты являлись действующими на момент утверждения инструкции по
применению. В дальнейшем, при пользовании документа, целесообразно проверить действие
ссылочных нормативных документов на текущий момент. Если ссылочный документ заменён или
изменён, то при применении настоящего документа следует пользоваться заменённым (изменённым)
документом.
--- стр. 26 ---
^ ДНК-ТЕХНОЛОГМЯ Инструкция по применению Лист 23
QF-PCR Анеу Листов 25
15 АДРЕС для ОБРАЩЕНИЯ
Производство наборов реагентов имеет сертифицированную систему менеджмента
качества и соответствует требованиям стандарта систем менеджмента качества ISO 9001 в
области разработки, производства и продажи IVD реагентов и приборов для молекулярно
генетической диагностики и другого лабораторного применения и EN ISO 13485 в области
разработки, производства и продажи IVD реагентов и приборов для медицинской
молекулярно-генетической диагностики.
Производитель: Общество с ограниченной ответственностью «ДНК-Технология ТС»;
ООО «ДНК-Технология ТС», Россия.
Адрес производителя: 117246, Россия, г. Москва, проезд Научный, д. 20, стр. 4.
Место производства: ООО <ЩНК-Технология ТС»: 117246, Россия, г. Москва, проезд Научный,
д. 20, стр.4.
По вопросам, касающимся качества набора реагентов QF-PCR Анеу, следует обращаться в
службу клиентской поддержки.
Служба клиентской поддержки:
8-800-200-75-15 (для России, звонок бесплатный),
+7 (495) 640-16-93 (для стран СНГ и зарубежья, звонок платный).
E-mail: hotline@dna-technology.ru, www.dna-technology.ru
Заместитель генерального директора по науке
ООО «НПФ ДНК-Технология»,
к.б.н.
СОГЛАСОВАНО
Директор ФГБУ «НМИЦ АГП
им. В.И. Кулакова» Минздрава России
академик РАН, профессор
Д.Д. Абрамов
« 2022 г.
Г.Т. Сухих
2022 г.